JP2022512747A - 抗体依存性細胞傷害（ａｄｃｃ）を増強する方法 - Google Patents

Abstract

ヘルペスウイルスエントリーメディエーター（ＨＶＥＭ）アゴニストを用いて、対象において感染性物質のワクチンに対する中和抗体応答よりも抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）抗体応答を優先的に増強する方法および関連する組成物。

Description

政府支援の記載
本発明は、国立衛生研究所により与えられた認可番号ＡＩ１１７３２１に基づく政府の支援によりなされた。政府は本発明において一定の権利を有する。

世界中で３７億人以上が単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ－１）に感染しており、約４億人がＨＳＶ２型（ＨＳＶ－２）に感染している（Looker et al., 2015; Roberts et al., 2003）。ＨＳＶ－１は歯肉口内炎の主な原因であり、角膜感染症による失明および致命的な散発性脳炎の主要な原因であり、米国および他の先進国では初感染性器ヘルペスのより一般的な原因として浮上している（Roberts et al., 2003）。ＨＳＶ－２は依然として世界的に性器ヘルペスの主要な原因であり、ＨＩＶ流行の主要な補助因子である（Looker et al., 2017）。どちらの血清型も後根神経節（ＤＲＧ）への潜伏を確立しており、これは比較的頻繁な無症状および臨床上の再活性化を伴い、ウイルスの排出および感染を生じる（Corey and Schiffer, 2013）。

これらの疫学的知見は、初感染、潜伏および再発を予防するワクチンの必要性を強調し、これはＨＩＶ流行に対して有益な効果を有し得る。臨床試験が開始されているＨＳＶワクチンは主に、主要なエンベロープ糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）を単独で、または他のウイルスタンパク質と組み合わせて標的とするアジュバントサブユニットワクチンである（Awasthi and Friedman, 2014）。これらのワクチンは、血清陰性の参加者において中和抗体応答を誘発するか、またはＨＳＶ血清陽性個体においてこれらの応答を増強するように設計された（Stanberry et al., 2002; Belshe et al., 2012; Awasthi and Friedman, 2014）。そのようなワクチンの一つは、アルミニウム（ａｌｕｍ）およびモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）でアジュバント化された組換えｇＤワクチン（ｒｇＤ－２／ＡＳ０４、GlaxoSmithKline）である。ワクチンは、実験室で順応させたウイルス株を主に用いて行った前臨床試験ではＨＳＶ－２疾患に対して保護的であった（しかし、潜伏の確立を予防しなかった）が、臨床試験の結果は期待外れであった。血清不一致(serodiscordant)のパートナーにおいて行われた第三相試験では、ｒｇＤ－２／ＡＳ０４は二重（ＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２）血清陰性の女性を保護したが、男性は保護せず、ＨＳＶ－１血清陽性の男性または女性を保護できなかった（Stanberry et al., 2002）。二重血清陰性の女性のみを登録したその後の野外試験では、性器ＨＳＶ－１に対する部分的な保護が観察されたが、ＨＳＶ－２疾患に対する保護は観察されず、ＨＳＶ－１またはＨＳＶ－２の感染に対する保護は認められなかった（Belshe et al., 2012）。

最近の異なる手法として、ｇＤを欠失させた単一サイクルＨＳＶ－２候補ワクチン（ΔｇＤ－２）の生成がある（例えば、米国特許第９，９９９，６６５号参照）。このワクチンは、いずれかの血清型の高用量の臨床分離株による皮膚および膣への曝露から雌性マウスを完全に保護し、皮膚への曝露から雄性マウスを完全に保護し、潜伏の確立を予防した（Petro et al., 2015; 2016; Burn et al., 2017）。ｒｇＤ－２／ＡＳ０４とは異なり、ΔｇＤ－２は弱中和性で高力価の抗体応答を誘導したが、Ｆｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）を強力に活性化してＡＤＣＣおよび抗体依存性貪食（ＡＤＣＰ）を誘発した。受動移入試験により、これらの抗体がナイーブマウスを致死的なＨＳＶ曝露から保護するのに十分であることが確認された（Petro et al., 2015; 2016; Burn et al., 2017）。さらに、ΔｇＤ－２ワクチンを雌性マウスに接種すると、母マウスから子マウスへのＡＤＣＣ抗体の伝達により、子マウスが出生後の曝露から保護されることが示されている。雌性マウス（およびヒト）において主に中和抗体応答を誘発する亜致死性自然感染は、新生児に有意な保護を与えなかった（Kao et al JID、印刷中）。さらに、このワクチンはＨＳＶ血清陽性マウスにおいて免疫原性であり、抗体応答全体およびＡＤＣＣ抗体応答を増強し、ＨＳＶ－２の臨床分離株によるその後の曝露に対して完全な保護を与える（Burn et al、論文準備中）。

自然感染および他のワクチン候補に対する中和応答と比較して、ΔｇＤ－２に対するＡＤＣＣ応答が優位であることは、ｇＤが免疫調節の役割を果たしてい得、ＡＤＣＣから離れた免疫応答を歪め得ることを示唆しており、これを調査した。

対象において感染性物質のワクチンに対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）抗体応答を優先的に増強する方法であって、ワクチンを受けている対象に対象のＡＤＣＣ抗体応答を増強するのに有効な量のヘルペスウイルスエントリーメディエーター（ＨＶＥＭ）アゴニスト、腫瘍壊死因子スーパーファミリー１４（ＴＮＦＳＦ－１４）アゴニストまたはそれらの組合せを投与することを含む、方法。

中和抗体応答を誘発する感染性物質のワクチンの抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を増強する方法であって、感染性物質のワクチンを受けている対象に対象のＡＤＣＣ活性を増強するのに有効な量のヘルペスウイルスエントリーメディエーター（ＨＶＥＭ）アゴニスト、腫瘍壊死因子スーパーファミリー１４（ＴＮＦＳＦ－１４）アゴニストまたはそれらの組合せを投与することを含む、方法。

感染性物質のワクチン、および中和抗体応答よりもＡＤＣＣ抗体応答を増強するのに有効な量のヘルペスウイルスエントリーメディエーター（ＨＶＥＭ）アゴニストを含む組成物。

以下を含む、ワクチン応答を増強するためのキット：
（ｉ）ある量のＨＶＥＭアゴニスト；および
（ｉｉ）ある量の感染性物質のワクチン。

対象において感染性物質のワクチンに対する中和抗体応答よりも抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）抗体応答を優先的に増強するのに有効な量のヘルペスウイルスエントリーメディエーター（ＨＶＥＭ）アゴニスト。

自己免疫疾患を有する対象において自己抗原のＦｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）介在性死滅を減少または遮断する方法であって、対象におけるＦｃγＲ介在性死滅を減少または遮断するのに有効な量のＨＶＥＭアンタゴニスト、可溶性単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質Ｄ、ＨＶＥＭに結合する抗体、またはそれらの組合せを対象に投与することを含む、方法。

自己免疫疾患を有する対象において自己抗原のＦｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）介在性死滅を遮断する方法であって、対象の自己免疫疾患を軽減するのに有効な量のＨＶＥＭアンタゴニスト、可溶性単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質Ｄ、ＨＶＥＭに結合する抗体、またはそれらの組合せを対象に投与することを含む、方法。

ΔｇＤ－２およびｒｇＤ－２は、ＨＳＶの臨床分離株による感染から差次的に保護する。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、５ｘ１０^６、５ｘ１０^５もしくは５ｘ１０^４ｐｆｕのΔｇＤ－２、または５μｇのｒｇＤ－２－ＡＳ０４（ＧＳＫにより提供された）、またはａｌｕｍおよびＭＰＬを伴うｒｇＤ－２（ｒｇＤ－２＋ａｌｕｍ／ＭＰＬ）を接種した。図１Ａはパーセント生存率対時間（日数）のグラフであり、１０ｘ致死量（ＬＤ９０）のＨＳＶ－１株Ｂ^３ｘ１．１（白抜きの記号）を皮膚に曝露させた後のマウスの生存率を示す。ΔｇＤ－２ ５ｘ１０^６、ΔｇＤ－２ ５ｘ１０^５またはΔｇＤ－２ ５ｘ１０^４ｐｆｕは、対照と比較して有意である。生存曲線を、Ｇｅｈａｎ－Ｂｒｅｓｌｏｗ－Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定により分析した；多重検定の補正のためにボンフェローニ補正を用いた。 ΔｇＤ－２およびｒｇＤ－２は、ＨＳＶの臨床分離株による感染から差次的に保護する。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、５ｘ１０^６、５ｘ１０^５もしくは５ｘ１０^４ｐｆｕのΔｇＤ－２、または５μｇのｒｇＤ－２－ＡＳ０４（ＧＳＫにより提供された）、またはａｌｕｍおよびＭＰＬを伴うｒｇＤ－２（ｒｇＤ－２＋ａｌｕｍ／ＭＰＬ）を接種した。図１Ｂはパーセント生存率対時間（日数）のグラフであり、１０ｘ致死量（ＬＤ９０）のＨＳＶ－２株ＳＤ９０（黒塗りの記号）を皮膚に曝露させた後のマウスの生存率を示す。すべての接種は、ＶＤ６０単独と比較して有意な延命効果を与える。生存曲線を、Ｇｅｈａｎ－Ｂｒｅｓｌｏｗ－Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定により分析した；多重検定の補正のためにボンフェローニ補正を用いた。 ΔｇＤ－２およびｒｇＤ－２は、ＨＳＶの臨床分離株による感染から差次的に保護する。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、５ｘ１０^６、５ｘ１０^５もしくは５ｘ１０^４ｐｆｕのΔｇＤ－２、または５μｇのｒｇＤ－２－ＡＳ０４（ＧＳＫにより提供された）、またはａｌｕｍおよびＭＰＬを伴うｒｇＤ－２（ｒｇＤ－２＋ａｌｕｍ／ＭＰＬ）を接種した。図１Ｃは、ＨＳＶ－１またはＨＳＶ－２ ＤＮＡのコピー（１ｇの組織当たり）対曝露した株（ＨＳＶ－１ Ｂ^３１ｘ１またはＨＳＶ－２株ＳＤ９０）のグラフであり、屠殺した時点（対照、ｒｇＤ－２）または曝露後１４日目（ΔｇＤ、ｒｇＤ－２）のマウスの後根神経節（ＤＲＧ）において検出されたＨＳＶ ＤＮＡの量を示す。データを１ｇの組織当たりのコピー数として表示している。二元配置分散分析により、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 ΔｇＤ－２およびｒｇＤ－２は、ＨＳＶの臨床分離株による感染から差次的に保護する。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、５ｘ１０^６、５ｘ１０^５もしくは５ｘ１０^４ｐｆｕのΔｇＤ－２、または５μｇのｒｇＤ－２－ＡＳ０４（ＧＳＫにより提供された）、またはａｌｕｍおよびＭＰＬを伴うｒｇＤ－２（ｒｇＤ－２＋ａｌｕｍ／ＭＰＬ）を接種した。図１Ｄは、ＬＤ９０のＨＳＶ－２臨床株４６７４を皮膚に曝露する１日前に、ΔｇＤ－２、ｒｇＤ－２またはＶＤ６０を接種したマウス由来の７５０μｇの全ＩｇＧをナイーブマウスに受動移入した後のパーセント生存率を示すグラフである。Ｇｅｈａｎ－Ｂｒｅｓｌｏｗ－Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定により、＊＊はＶＤ６０と比較してｐ＝０．００１０であることを示し、ΔｇＤ－２はｒｇＤ－２と比較しても有意（０．００３１）であった；多重検定の補正のためにボンフェローニ補正を用いた。ｎ＝１０／群；２回の独立した実験を行った（ｎ＝５のｒｇＤ－２およびｎ＝５／群の受動移入を除く）。

ΔｇＤ－２およびｒｇＤ－２は、ＨＳＶに対して機能的に異なる抗体応答を誘導する。ＷＴ（Ｃ５７Ｂｌ６）マウスに、５ｘ１０^６、５ｘ１０^５もしくは５ｘ１０^４ｐｆｕのΔｇＤ－２または５μｇのｒｇＤ－２を接種した。ブースト接種の１週間後に血清試料を採取し、ＨＳＶ－２特異的なＩｇＧの力価（１：９００００希釈）をＥＬＩＳＡにより定量した。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；ｎ＝１０／群；２回の独立した実験を行った（ｎ＝５／群のｒｇＤ－２およびＦｃγＲＩＶ－／－を除く）。Ｇｅｈａｎ－Ｂｒｅｓｌｏｗ－Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定によって分析した生存曲線を除いて、分散分析によって統計解析を行った。 ΔｇＤ－２およびｒｇＤ－２は、ＨＳＶに対して機能的に異なる抗体応答を誘導する。ＷＴ（Ｃ５７Ｂｌ６）マウスに、５ｘ１０^６、５ｘ１０^５もしくは５ｘ１０^４ｐｆｕのΔｇＤ－２または５μｇのｒｇＤ－２を接種した。ブースト接種の１週間後に血清試料を採取し、全ｇＤ－２結合ＩｇＧをＥＬＩＳＡにより定量した。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；ｎ＝１０／群；２回の独立した実験を行った（ｎ＝５／群のｒｇＤ－２およびＦｃγＲＩＶ－／－を除く）。Ｇｅｈａｎ－Ｂｒｅｓｌｏｗ－Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定によって分析した生存曲線を除いて、分散分析によって統計解析を行った。 ΔｇＤ－２およびｒｇＤ－２は、ＨＳＶに対して機能的に異なる抗体応答を誘導する。ＷＴ（Ｃ５７Ｂｌ６）マウスに、５ｘ１０^６、５ｘ１０^５もしくは５ｘ１０^４ｐｆｕのΔｇＤ－２または５μｇのｒｇＤ－２を接種した。図２Ｃは、ＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２に対する中和価のグラフである。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；ｎ＝１０／群；２回の独立した実験を行った（ｎ＝５／群のｒｇＤ－２およびＦｃγＲＩＶ－／－を除く）。Ｇｅｈａｎ－Ｂｒｅｓｌｏｗ－Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定によって分析した生存曲線を除いて、分散分析によって統計解析を行った。 ΔｇＤ－２およびｒｇＤ－２は、ＨＳＶに対して機能的に異なる抗体応答を誘導する。ＷＴ（Ｃ５７Ｂｌ６）マウスに、５ｘ１０^６、５ｘ１０^５もしくは５ｘ１０^４ｐｆｕのΔｇＤ－２または５μｇのｒｇＤ－２を接種した。図２Ｄは、ＨＳＶ－１またはＨＳＶ－２を感染させた細胞を標的細胞とし、ＦｃγＲＩＶおよびルシフェラーゼレポーターを発現するエフェクター細胞を伴って、Ｐｒｏｍｅｇａ ＦｃＲレポーターアッセイを用いて測定したＦｃγＲＩＶ活性化の増加（誘導倍率）を示すグラフである。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；ｎ＝１０／群；２回の独立した実験を行った（ｎ＝５／群のｒｇＤ－２およびＦｃγＲＩＶ－／－を除く）。Ｇｅｈａｎ－Ｂｒｅｓｌｏｗ－Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定によって分析した生存曲線を除いて、分散分析によって統計解析を行った。 ΔｇＤ－２およびｒｇＤ－２は、ＨＳＶに対して機能的に異なる抗体応答を誘導する。ＷＴ（Ｃ５７Ｂｌ６）マウスに、５ｘ１０^６、５ｘ１０^５もしくは５ｘ１０^４ｐｆｕのΔｇＤ－２または５μｇのｒｇＤ－２を接種した。図２Ｅは、ＥＬＩＳＡ（１：１０００希釈）によって評価した全ＨＳＶ－２結合ＩｇＧアイソタイプを示す。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；ｎ＝１０／群；２回の独立した実験を行った（ｎ＝５／群のｒｇＤ－２およびＦｃγＲＩＶ－／－を除く）。Ｇｅｈａｎ－Ｂｒｅｓｌｏｗ－Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定によって分析した生存曲線を除いて、分散分析によって統計解析を行った。 ΔｇＤ－２およびｒｇＤ－２は、ＨＳＶに対して機能的に異なる抗体応答を誘導する。ＷＴ（Ｃ５７Ｂｌ６）マウスに、５ｘ１０^６、５ｘ１０^５もしくは５ｘ１０^４ｐｆｕのΔｇＤ－２または５μｇのｒｇＤ－２を接種した。図２Ｆは、ΔｇＤ－２を接種したマウス由来の７５０μｇの全免疫血清をナイーブＷＴまたはＦｃγＲＩＶ－／－（ＦｃγＲＩＶ ＫＯ）マウスに受動移入した後のパーセント生存率を示すグラフである。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；ｎ＝１０／群；２回の独立した実験を行った（ｎ＝５／群のｒｇＤ－２およびＦｃγＲＩＶ－／－を除く）。Ｇｅｈａｎ－Ｂｒｅｓｌｏｗ－Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定によって分析した生存曲線を除いて、分散分析によって統計解析を行った。ΔｇＤ－２ ＷＴは、ＶＤ６０（ｐ＝０．００１０）およびΔｇＤ－２ ＦｃγＲＩＶ ＫＯ（ｐ＝０．００３９）とは有意に異なる。

ＨＶＥＭ－／－マウスへのΔｇＤ－２またはｒｇＤ－２の接種は保護を抑制する。ＷＴまたはＨＶＥＭ－／－マウスに、５ｘ１０^５ｐｆｕのΔｇＤ－２またはａｌｕｍおよびＭＰＬを伴う５μｇのｒｇＤ－２を３週間の間隔でプライムブースト接種した。図３Ａは、１０ｘＬＤ_９０ ＨＳＶ－２ ＳＤ９０による皮膚曝露後のパーセント生存率を示す。生存曲線をＧｅｈａｎ－Ｂｒｅｓｌｏｗ－Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定によって分析し、ΔｇＤ－２ ＷＴはΔｇＤ－２ ＫＯ、ｒｇＤ－２およびＶＤ６０と有意に異なる（Ｐ＜０．０００１）。ブースト接種の７日後に血清を採取し、抗体応答を評価した。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；ｎ＝１０～２０匹／群。データは２回の独立した実験からのものである。 ＨＶＥＭ－／－マウスへのΔｇＤ－２またはｒｇＤ－２の接種は保護を抑制する。ＷＴまたはＨＶＥＭ－／－マウスに、５ｘ１０^５ｐｆｕのΔｇＤ－２またはａｌｕｍおよびＭＰＬを伴う５μｇのｒｇＤ－２を３週間の間隔でプライムブースト接種した。図３Ｂは、全ＨＳＶ－２結合ＥＬＩＳＡ血清力価を示す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；ｎ＝１０～２０匹／群。データは２回の独立した実験からのものである。 ＨＶＥＭ－／－マウスへのΔｇＤ－２またはｒｇＤ－２の接種は保護を抑制する。ＷＴまたはＨＶＥＭ－／－マウスに、５ｘ１０^５ｐｆｕのΔｇＤ－２またはａｌｕｍおよびＭＰＬを伴う５μｇのｒｇＤ－２を３週間の間隔でプライムブースト接種した。図３Ｃは、ＨＳＶ－２中和抗体力価を示す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；ｎ＝１０～２０匹／群。データは２回の独立した実験からのものである。 ＨＶＥＭ－／－マウスへのΔｇＤ－２またはｒｇＤ－２の接種は保護を抑制する。ＷＴまたはＨＶＥＭ－／－マウスに、５ｘ１０^５ｐｆｕのΔｇＤ－２またはａｌｕｍおよびＭＰＬを伴う５μｇのｒｇＤ－２を３週間の間隔でプライムブースト接種した。図３Ｄは、ＦｃγＲＩＶ活性化の誘導倍率を示す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；ｎ＝１０～２０匹／群。データは２回の独立した実験からのものである。 ＨＶＥＭ－／－マウスへのΔｇＤ－２またはｒｇＤ－２の接種は保護を抑制する。ＷＴまたはＨＶＥＭ－／－マウスに、５ｘ１０^５ｐｆｕのΔｇＤ－２またはａｌｕｍおよびＭＰＬを伴う５μｇのｒｇＤ－２を３週間の間隔でプライムブースト接種した。図３Ｅは、ＥＬＩＳＡ（１：１０００希釈）によってそれぞれ評価したＩｇＧアイソタイプを示す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；ｎ＝１０～２０匹／群。データは２回の独立した実験からのものである。

図４Ａ～４Ｂ：ＨＶＥＭは、ＡＤＣＣの開始および媒介に関与している。図４Ａは、ＶＤ６０（対照）またはΔｇＤ－２でプライム／ブースト免疫したＷＴまたはＨＶＥＭ－／－マウス由来の７５０μｇの全免疫血清を受動移入した後のＷＴマウスのパーセント生存率を示す。図４Ｂは、ＶＤ６０（対照）またはΔｇＤ－２で免疫したＷＴマウス由来の７５０μｇの全免疫血清を受動移入した後のＨＶＥＭ－／－マウスのパーセント生存率を示す。

ＢＴＬＡ－／－マウスにおける評価。ＷＴ（Ｃ５７Ｂｌ／６）マウスまたはＢＴＬＡ－／－マウスに、５ｘ１０^５ｐｆｕのΔｇＤ－２、ＶＤ－６０細胞溶解物（対照）、またはａｌｕｍおよびＭＰＬを伴う５μｇのｒｇＤ－２をプライムブースト接種した（３週間間隔）。ブースト接種の１週間後に、後眼窩出血により血清を取得し、マウスに１０ｘＬＤ_９０の株ＳＤ９０を曝露させた。図５Ａは、全ＨＳＶ－２特異的ＩｇＧを示す。 ＢＴＬＡ－／－マウスにおける評価。ＷＴ（Ｃ５７Ｂｌ／６）マウスまたはＢＴＬＡ－／－マウスに、５ｘ１０^５ｐｆｕのΔｇＤ－２、ＶＤ－６０細胞溶解物（対照）、またはａｌｕｍおよびＭＰＬを伴う５μｇのｒｇＤ－２をプライムブースト接種した（３週間間隔）。ブースト接種の１週間後に、後眼窩出血により血清を取得し、マウスに１０ｘＬＤ_９０の株ＳＤ９０を曝露させた。図５Ｂは、全ＨＳＶ－２中和抗体力価を示す。 ＢＴＬＡ－／－マウスにおける評価。ＷＴ（Ｃ５７Ｂｌ／６）マウスまたはＢＴＬＡ－／－マウスに、５ｘ１０^５ｐｆｕのΔｇＤ－２、ＶＤ－６０細胞溶解物（対照）、またはａｌｕｍおよびＭＰＬを伴う５μｇのｒｇＤ－２をプライムブースト接種した（３週間間隔）。ブースト接種の１週間後に、後眼窩出血により血清を取得し、マウスに１０ｘＬＤ_９０の株ＳＤ９０を曝露させた。図５Ｃは、ＦｃγＲＩＶ活性化の誘導倍率を示す。 ＢＴＬＡ－／－マウスにおける評価。ＷＴ（Ｃ５７Ｂｌ／６）マウスまたはＢＴＬＡ－／－マウスに、５ｘ１０^５ｐｆｕのΔｇＤ－２、ＶＤ－６０細胞溶解物（対照）、またはａｌｕｍおよびＭＰＬを伴う５μｇのｒｇＤ－２をプライムブースト接種した（３週間間隔）。ブースト接種の１週間後に、後眼窩出血により血清を取得し、マウスに１０ｘＬＤ_９０の株ＳＤ９０を曝露させた。図５Ｄは、１０ｘＬＤ_９０ ＳＤ９０による皮膚曝露後のパーセント生存率を示す。

ＬＩＧＨＴ－／－マウスにおける評価。ＷＴ（Ｃ５７Ｂｌ／６）マウスまたはＬＩＧＨＴ－／－マウスに、５ｘ１０^５ｐｆｕのΔｇＤ－２または５ ＶＤ－６０細胞溶解物（対照）をプライムブースト接種した（３週間間隔）。ブースト接種の１週間後に、後眼窩出血により血清を取得し、マウスに１０ｘＬＤ_９０のＨＳＶ－２株ＳＤ９０を曝露させた。図６Ａは、全ＨＳＶ－２特異的ＩｇＧを示す。 ＬＩＧＨＴ－／－マウスにおける評価。ＷＴ（Ｃ５７Ｂｌ／６）マウスまたはＬＩＧＨＴ－／－マウスに、５ｘ１０^５ｐｆｕのΔｇＤ－２または５ ＶＤ－６０細胞溶解物（対照）をプライムブースト接種した（３週間間隔）。ブースト接種の１週間後に、後眼窩出血により血清を取得し、マウスに１０ｘＬＤ_９０のＨＳＶ－２株ＳＤ９０を曝露させた。図６Ｂは、全ＨＳＶ－２中和抗体力価を示す。 ＬＩＧＨＴ－／－マウスにおける評価。ＷＴ（Ｃ５７Ｂｌ／６）マウスまたはＬＩＧＨＴ－／－マウスに、５ｘ１０^５ｐｆｕのΔｇＤ－２または５ ＶＤ－６０細胞溶解物（対照）をプライムブースト接種した（３週間間隔）。ブースト接種の１週間後に、後眼窩出血により血清を取得し、マウスに１０ｘＬＤ_９０のＨＳＶ－２株ＳＤ９０を曝露させた。図６Ｃは、ＦｃγＲＩＶ活性化の誘導倍率を示す。 ＬＩＧＨＴ－／－マウスにおける評価。ＷＴ（Ｃ５７Ｂｌ／６）マウスまたはＬＩＧＨＴ－／－マウスに、５ｘ１０^５ｐｆｕのΔｇＤ－２または５ ＶＤ－６０細胞溶解物（対照）をプライムブースト接種した（３週間間隔）。ブースト接種の１週間後に、後眼窩出血により血清を取得し、マウスに１０ｘＬＤ_９０のＨＳＶ－２株ＳＤ９０を曝露させた。図６Ｄは、１０ｘＬＤ_９０ ＳＤ９０による皮膚曝露後のパーセント生存率を示す。

図７Ａ～７Ｂ：ＨＶＥＭ－／－マウス由来の細胞はエフェクター機能が欠損している。全骨髄細胞（図７Ａ）またはＧＭ－ＣＳＦで７日間刺激した骨髄由来細胞（図７Ｂ）をエクスビボでのＡＤＣＣアッセイに用いた。データを「血清なし」の対照と比較した死細胞の変化率として示す。各点は、１つのマウス血清または抗体試料を示す。マン・ホイットニー検定により、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。

ｇＤ（可溶性タンパク質またはウイルスエンベロープ上）および抗ＨＶＥＭ抗体は、ＦｃγＲＩＶ活性化を阻害する。図８Ａでは、ＨＳＶ－２感染細胞を標的とした；ΔｇＤ－２またはＶＤ－６０（対照）で免疫したマウス由来の免疫血清を、組換えｇＤタンパク質、組換えｇＢタンパク質または市販の抗ＨＶＥＭ Ａｂの非存在下または存在下において添加し、次いでエフェクター細胞（PROMEGA、ＮＦＡＴルシフェラーゼレポーターに連結されたｍＦｃγＲＩＶ発現）とともにインキュベートした。可溶性ｇＤまたは抗ＨＶＥＭは、ＦｃＲ活性化を低下させる。対応のあるＴ検定により、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。 ｇＤ（可溶性タンパク質またはウイルスエンベロープ上）および抗ＨＶＥＭ抗体は、ＦｃγＲＩＶ活性化を阻害する。図８Ｂでは、標的細胞をＷＴ ＨＳＶ－２ ＳＤ９０またはΔｇＤ－２（従って、標的は感染細胞上にｇＤを発現していない）で感染させ、エフェクター細胞とともにインキュベートした。標的細胞中にｇＤが存在しない場合、ＦｃＲの活性化が増強される；組換えｇＤタンパク質の添加はＦｃＲの活性化を元に戻す。分散分析により、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。 ｇＤ（可溶性タンパク質またはウイルスエンベロープ上）および抗ＨＶＥＭ抗体は、ＦｃγＲＩＶ活性化を阻害する。図８Ｃでは、Ｒａｊｉ細胞（ＣＤ２０を発現する）およびリツキシマブ（抗ＣＤ２０）を用いて、抗ＨＶＥＭ抗体（１０または２０μｇ）の非存在下または存在下においてアッセイを行った。

ｇＤタンパク質および抗ＨＶＥＭ抗体は、ヒト免疫血清に応答してｈＦｃγＲＩＩＩａの活性化を阻害する。ＨＳＶ血清陽性個体由来の免疫血清を、単独（ヒトＨＳＶ＋血清）または５μｇもしくは１０μｇのｇＤもしくは抗ＨＶＥＭ抗体と組み合わせて、ΔｇＤ－２感染標的細胞およびｈＦｃγＲＩＩＩａを発現するエフェクター細胞と組み合わせた。血清は低レベル（５～６倍）のＦｃＲ活性化Ａｂ（ヒトキット）を有し、組換えｇＤタンパク質を添加した場合、死滅が減少する。

図１０Ａ～１０Ｂ：ＨＶＥＭは、他の病原体に対してＡＤＣＣ Ａｂを生成するのに必要である。野生型またはＨＶＥＭ－／－ノックアウトマウスにＶＳＶ－エボラウイルスコンストラクト（Chandran lab）を免疫し、全ＡｂおよびＡＤＣＣ活性化Ａｂについて免疫血清をアッセイした。図１０Ａはエボラタンパク質に対する全抗体を示すグラフであり、図１０ＢはＦｃγＲＩＶ活性化のグラフである。この場合も同様に、ＨＶＥＭ ＫＯマウスにおいてＦｃＲ活性化Ａｂが減少している。（＊ＶＳＶ－エボラワクチンはK. Chandranから頂戴した。）

図１１Ａ～１１Ｂ：受動移入は、ＢＴＬＡではなくＬＩＧＨＴの役割を示唆する。ＷＴ（Ｃ５７Ｂｌ６）、ＢＴＬＡ－／－またはＬＩＧＨＴ－／－マウスに１０ｘＬＤ_９０ ＳＤ９０を曝露させる１日前に、ΔｇＤ－２またはＶＤ６０を免疫したＷＴマウスから単離した７５０μｇの血清を腹腔内投与した。図１１ＡはＷＴマウスおよびＢＴＬＡ－／－マウスの結果を示し、図１１ＢはＷＴマウスおよびＬＩＧＨＴ－／－マウスの結果を示す。

対象において感染性物質のワクチンに対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）抗体応答を優先的に増強する方法であって、ワクチンを受けている対象に対象のＡＤＣＣ抗体応答を増強するのに有効な量のヘルペスウイルスエントリーメディエーター（ＨＶＥＭ）アゴニスト、腫瘍壊死因子スーパーファミリー１４（ＴＮＦＳＦ－１４）アゴニストまたはそれらの組合せを投与することを含む、方法。

対象において感染性物質のワクチンに対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）抗体応答を優先的に増強する方法であって、ワクチンを受けている対象に対象のＡＤＣＣ抗体応答を増強するのに有効な量のヘルペスウイルスエントリーメディエーター（ＨＶＥＭ）アゴニストを投与することを含む、方法。

対象において感染性物質のワクチンに対する中和抗体応答よりも抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）抗体応答を優先的に増強する方法であって、ワクチンを受けている対象に中和抗体応答よりもＡＤＣＣ抗体応答を増強するのに有効な量のＨＶＥＭアゴニスト、腫瘍壊死因子スーパーファミリー１４（ＴＮＦＳＦ－１４）アゴニストまたはそれらの組合せを投与することを含む、方法。

中和抗体応答を誘発する感染性物質のワクチンの抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を増強する方法であって、感染性物質のワクチンを受けている対象に対象のＡＤＣＣ活性を増強するのに有効な量のヘルペスウイルスエントリーメディエーター（ＨＶＥＭ）アゴニスト、腫瘍壊死因子スーパーファミリー１４（ＴＮＦＳＦ－１４）アゴニストまたはそれらの組合せを投与することを含む、方法。

中和抗体応答を誘発する感染性物質のワクチンの抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を増強する方法であって、感染性物質のワクチンを受けている対象に対象のＡＤＣＣ活性を増強するのに有効な量のヘルペスウイルスエントリーメディエーター（ＨＶＥＭ）アゴニストを投与することを含む、方法。

本明細書で使用される場合、対象において抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）抗体応答を「優先的に増強する」または「増強する」とは、ＡＤＣＣ応答を（ＨＶＥＭおよび／またはＴＮＦＳＦ－１４アゴニスト投与前の）対象の安静時のレベルよりも促進または増加または増幅することを意味する。ＡＤＣＣ抗体応答が増強される量または値は、同じ対象において中和抗体応答が（ＨＶＥＭおよび／またはＴＮＦＳＦ－１４アゴニスト投与前の）対象の安静時のレベルよりも増強されていたとしても、同じ対象において中和抗体応答が増強される量または値よりも大きい。例えば、用語「優先的に増強する」は、対象におけるＡＤＣＣ抗体応答の増加を指す。

ある実施態様において、ＡＤＣＣ応答の生成を促進するために、ＨＶＥＭおよび／またはＴＮＦＳＦ－１４アゴニストはワクチンと実質的に同時に対象に投与される。例えば、ＨＶＥＭおよび／またはＴＮＦＳＦ－１４アゴニストは投与前にワクチンと組み合わされ、ワクチンと同時に投与される。あるいは、ＨＶＥＭおよび／またはＴＮＦＳＦ－１４アゴニストは、ワクチンの投与とＨＶＥＭおよび／またはＴＮＦＳＦ－１４アゴニストの投与との間の期間が、ＨＶＥＭアゴニストが対象のＡＤＣＣ活性を増強する能力またはＡＤＣＣ抗体応答を増強する能力に影響を与えないように、対象へのワクチンの投与前または後に対象に投与される。

ある実施態様において、対象のＡＤＣＣ応答を増強するために、アゴニスト（ＨＶＥＭおよび／またはＴＮＦＳＦ－１４アゴニスト）が感染性物質に感染した対象に単独またはＦｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）活性化抗体と組み合わせて投与され得る。ＦｃγＲ活性化抗体は免疫血清中に存在し得、または単離された抗体であり得る。例えば、単離された抗体はモノクローナル抗体（ＨＶＥＭおよび／またはＴＮＦＳＦ－１４アゴニストの存在下でＦｃγＲを介して作用するリツキシマブなど）であり得る。

腫瘍壊死因子スーパーファミリー１４（ＴＮＦＳＦ－１４）タンパク質は、ＬＩＧＨＴ（リンホトキシンと相同であり、誘導発現を示し、Ｔリンパ球上に発現する受容体であるヘルペスウイルスエントリーメディエーターとの結合についてＨＳＶ糖タンパク質Ｄと競合する）としても知られており、ＴＮＦスーパーファミリーの分泌タンパク質であり、ＨＶＥＭのリガンドである。ＴＮＦＳＦ－１４およびＬＩＧＨＴという用語は互換的に使用され得る。

ある実施態様において、ＨＶＥＭアゴニストはＴＮＦＳＦ－１４タンパク質またはその一部を含む。例えば、ＴＮＦＳＦ－１４タンパク質は、全長タンパク質またはＨＶＥＭに結合するＴＮＦＳＦ－１４タンパク質の一部であり得る。

ある実施態様において、対象において感染性物質のワクチンに対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）抗体応答を優先的に増強する方法は、ワクチンを受けている対象にＡＤＣＣ抗体応答を増強するのに有効な量のＴＮＦＳＲ－１４タンパク質またはその一部を投与することを含む。

本方法のある実施態様において、ＨＶＥＭアゴニストは、六価のＴＮＦＳＦ融合タンパク質である。六価のＴＮＦＳＦ融合タンパク質は当分野で公知である。（例えば、Gieffers et al., Proceedings of the AACR Special Conference on Tumor Immunology and Immunotherapy; 2016年10月20-23日; Cancer Immunol Res 2017;5(3 Suppl):Abstract nr. A83を参照、これらは参照によって本明細書に組み込まれる。例えば、apogenix.com/en/immuno-oncology/hera-technology-platformを参照、これは参照によって本明細書に組み込まれる）。

ある実施態様において、ＨＶＥＭアゴニストは、機能的な三価の受容体結合ドメインにフォールドされた３つのＬＩＧＨＴ（ＴＮＦＳＦ－１４）サブ配列を含み、サイレンシングされたＩｇＧ１ Ｆｃドメインを二量体化スキャフォールドとしてそのＣ末端に融合している一本鎖ポリペプチドを含む六価のＴＮＦＳＦ融合タンパク質である。

ある実施態様において、ＨＶＥＭアゴニストは、ＨＶＥＭを結合および活性化するアゴニスト抗体を含む。

ある実施態様において、ＨＶＥＭアゴニストは、ＨＶＥＭを結合および活性化するアゴニストモノクローナル抗体の単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。

ある実施態様において、対象は、追加的な免疫賦活性物質を投与されていない。

ある実施態様において、対象は、追加的な腫瘍壊死因子スーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）スーパーファミリー刺激性物質またはＴＮＦＳＦ抑制性物質を投与されていない。

ある実施態様において、対象は、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト（例えば、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、ＴＬＲ８アゴニスト、ＴＬＲ９アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニスト）、ＣＤ４０アゴニスト、ＣＤ２７アゴニスト、ＭＤＡ５アゴニスト、ヌクレオチド結合オリゴマー化ドメイン含有タンパク質アゴニスト（例えば、ＮＯＤ１、ＮＯＤ２アゴニスト）、またはそれらの組合せを投与されていない。

ある実施態様において、対象は、ＴＬＲアゴニスト、神経細胞アポトーシス抑制タンパク質（ＮＡＩＰ）中に存在するドメイン、ＩＩ型トランス活性化因子（ＣＩＩＴＡ）中に存在するドメイン、ヒドロキシエイコサテトラエン酸（ＨＥＴ－Ｅ）中に存在するドメイン、ＴＰ－１（ＮＡＣＨＴ）－ロイシンリッチリピート中に存在するドメイン、ｎｏｄ様受容体（ＮＬＲ）アゴニスト中に存在するドメイン、レチノイン酸誘導遺伝子Ｉ ＲＩＧ様ヘリカーゼ（ＲＬＨ）アゴニスト、サイトカイン／ケモカイン受容体アゴニスト、プリン受容体アゴニスト、またはそれらの組合せを投与されていない。

ある実施態様において、ワクチンはＤＮＡワクチンまたは遺伝子ワクチンではない。

ある実施態様において、ワクチンは、がんワクチン、抗腫瘍ワクチンまたは腫瘍上の標的に対するワクチンではない。

ある実施態様において、ワクチンは、感染性物質（感染性病原体）に対するワクチンである。

ある実施態様において、感染性物質は、ウイルス、細菌、真菌もしくは寄生生物、またはそれらの組合せである。

ある実施態様において、本方法は、Ｆｃガンマ受容体ＩＶ（ＦｃγＲＩＶ）結合抗体の産生を誘発および／または増加（増強）させる。

感染性物質のワクチン、および中和抗体応答よりもＡＤＣＣ抗体応答を増強するのに有効な量のヘルペスウイルスエントリーメディエーター（ＨＶＥＭ）アゴニストを含む組成物が提供される。

ある実施態様において、ＨＶＥＭアゴニストは、六価のＴＮＦＳＦスーパーファミリー融合タンパク質である。

ある実施態様において、六価のＴＮＦＳＦスーパーファミリー融合タンパク質は、機能的な三価の受容体結合ドメインにフォールドされた３つのＴＮＦＳＦ－１４（ＬＩＧＨＴ）サブ配列を含み、サイレンシングされたＩｇＧ１ Ｆｃドメインを二量体化スキャフォールドとしてそのＣ末端に融合している一本鎖ポリペプチドを含む。

ある実施態様において、ＨＶＥＭアゴニストは、ＨＶＥＭを結合するアゴニスト抗体である。

ある実施態様において、ＨＶＥＭアゴニストは、ＨＶＥＭを結合するアゴニストモノクローナル抗体の単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。

ある実施態様において、感染性物質は、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、コレラ菌、髄膜炎菌、インフルエンザウイルス、コリネバクテリウム・ジフテリアエ、ルブラウイルス、サイトメガロウイルス、破傷風菌、Ａ型肝炎ウイルス、ｂ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、百日咳菌、結核菌、肺炎球菌、チフス菌、ポリオウイルス、ダニ媒介性脳炎ウイルス（ＴＢＥＶ）、ヘモフィルスインフルエンザ菌ｂ型、狂犬病ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、ヒトパピローマウイルス、ロタウイルス、フラビウイルス科、熱帯熱マラリア原虫、デングウイルス、アルファウイルス、ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２、エボラウイルス、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、炭疽菌、ペスト菌、コクシエラ・バーネッティ、天然痘ウイルス、またはこれらの組合せのうち少なくとも１つである。しかし、感染性物質のワクチンの標的となり得る感染性物質はこれらに限定されない。

ある実施態様において、ワクチンは、麻疹、風疹、コレラ、髄膜炎菌性疾患、インフルエンザ、ジフテリア、流行性耳下腺炎、破傷風、Ａ型肝炎、百日咳、結核、Ｂ型肝炎、肺炎球菌性疾患、腸チフス、Ｅ型肝炎、灰白髄炎、ダニ媒介性脳炎、ヘモフィルスインフルエンザ菌ｂ型、狂犬病、水痘および帯状疱疹、ヒトパピローマウイルス、ロタウイルス胃腸炎、黄熱病、日本脳炎、マラリア、デング熱、炭疽病、ペスト、Ｑ熱、天然痘、ＨＳＶ－１、ＶＳＶ、エボラ出血熱、東部馬脳炎、西部馬脳炎、ベネズエラ馬脳炎、またはＨＳＶ－２のうち少なくとも１つのためのものである。しかし、ワクチンまたはワクチンの標的となる疾患はこれらに限定されない。

ある実施態様において、単離された抗体またはその抗原結合フラグメントはキメラであるか、またはヒト化されている。

ある実施態様において、単離された抗体またはその抗原結合フラグメントは、モノクローナル抗体、ｓｃＦｖ、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ）’フラグメント、またはそれらの組合せを含む。ｓｃＦｖは厳密には抗体のフラグメントではなく融合タンパク質であるが、本明細書では特に除外しない限り、抗体のフラグメントにはｓｃＦｖが含まれることを注記しておく。

ある実施態様において、対象はがんを有していない。ある実施態様において、対象は血液がんを有していない。ある実施態様において、対象は固形腫瘍を有していない。ある実施態様において、対象はがんと診断されていない。

ある実施態様において、本組成物は医薬組成物または生物学的組成物であり、医薬担体である担体を含む。本明細書に記載される抗体またはその結合フラグメントおよび薬学的に許容され得る賦形剤を含む医薬組成物もまた、提供される。

以下を含む、ワクチン応答を増強するためのキット：
（ｉ）ある量のＨＶＥＭアゴニスト；および
（ｉｉ）ある量の感染性物質のワクチン。

ある実施態様において、感染性物質は、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、コレラ菌、髄膜炎菌、インフルエンザウイルス、コリネバクテリウム・ジフテリアエ、ルブラウイルス、サイトメガロウイルス、破傷風菌、Ａ型肝炎ウイルス、ｂ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、百日咳菌、結核菌、肺炎球菌、チフス菌、ポリオウイルス、ダニ媒介性脳炎ウイルス（ＴＢＥＶ）、ヘモフィルスインフルエンザ菌ｂ型、狂犬病ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、ヒトパピローマウイルス、ロタウイルス、フラビウイルス科、熱帯熱マラリア原虫、デングウイルス、アルファウイルス、ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２、エボラウイルス、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、炭疽菌、ペスト菌、コクシエラ・バーネッティ、天然痘ウイルス、またはこれらの組合せのうち少なくとも１つである。しかし、感染性物質のワクチンの標的となり得る感染性物質はこれらに限定されない。

ある実施態様において、ワクチンは、麻疹、風疹、コレラ、髄膜炎菌性疾患、インフルエンザ、ジフテリア、流行性耳下腺炎、破傷風、Ａ型肝炎、百日咳、結核、Ｂ型肝炎、肺炎球菌性疾患、腸チフス、Ｅ型肝炎、灰白髄炎、ダニ媒介性脳炎、ヘモフィルスインフルエンザ菌ｂ型、狂犬病、水痘および帯状疱疹、ヒトパピローマウイルス、ロタウイルス胃腸炎、黄熱病、日本脳炎、マラリア、デング熱、炭疽病、ペスト、Ｑ熱、天然痘、ＨＳＶ－１、ＶＳＶ、エボラ出血熱、東部馬脳炎、西部馬脳炎、ベネズエラ馬脳炎、またはＨＳＶ－２のうち少なくとも１つのためのものである。しかし、ワクチンまたはワクチンの標的となる疾患はこれらに限定されない。

ある実施態様において、ワクチンは、そのゲノム中においてＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄをコードする遺伝子が欠失している単純ヘルペスウイルス－２（ＨＳＶ－２）を含み、ここでゲノム中におけるＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄをコードする遺伝子の欠失は、ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄをコードする遺伝子の部分的な欠失またはＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄをコードする（ｇＤ）遺伝子全体の欠失を含み、組換えＨＳＶ－２は、単純ヘルペスウイルス－１（ＨＳＶ－１）糖タンパク質Ｄを発現する補完細胞(complementing cell)中で組換えＨＳＶ－２を増殖させることによって、ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄにより表現型的に補完されている。

ある実施態様において、そのゲノム中においてＨＳＶ－２ ｇＤをコードする遺伝子が欠失しているＨＳＶ－２は、組換えＨＳＶ－２である。

そのゲノム中においてＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄをコードする遺伝子が欠失しているＨＳＶ－２は、単一サイクルウイルスである。そのゲノム中においてＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄをコードする遺伝子が欠失しているＨＳＶ－２におけるｇＤをコードする遺伝子の部分的な欠失は、ｇＤが発現／産生された場合に、そのタンパク質がＨＶＥＭを結合および活性化できず、ＨＳＶ－２の宿主細胞への侵入を促進できないような欠失である。

ある実施態様において、ＨＶＥＭアゴニストは、六価のＴＮＦＳＦ融合タンパク質である。

ある実施態様において、ＨＶＥＭアゴニストは、機能的な三価の受容体結合ドメインにフォールドされた３つのＴＮＦＳＦ－１４（ＬＩＧＨＴ）サブ配列を含み、サイレンシングされたＩｇＧ１ Ｆｃドメインを二量体化スキャフォールドとしてそのＣ末端に融合している一本鎖ポリペプチドを含む六価のＴＮＦＳＦ融合タンパク質である。

ある実施態様において、ＨＶＥＭアゴニストは、ＨＶＥＭを結合するアゴニスト抗体である。

ある実施態様において、ＨＶＥＭアゴニストは、抗ＨＶＥＭアゴニストモノクローナル抗体の単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。

対象において感染性物質のワクチンに対する中和抗体応答よりも抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）抗体応答を優先的に増強するのに有効な量のヘルペスウイルスエントリーメディエーター（ＨＶＥＭ）アゴニスト。

対象においてワクチンに応答して感染性物質のワクチンに対する中和抗体応答よりも抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）抗体応答を優先的に増強するためのある量のヘルペスウイルスエントリーメディエーター（ＨＶＥＭ）アゴニスト。

対象において抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）抗体応答を優先的に増強する薬剤の製造のためのある量のヘルペスウイルスエントリーメディエーター（ＨＶＥＭ）アゴニストの使用。

対象においてワクチンに応答して抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）抗体応答を優先的に増強する薬剤の製造のためのある量のヘルペスウイルスエントリーメディエーター（ＨＶＥＭ）アゴニストの使用。

ある実施態様において、自己免疫疾患を有する対象において自己抗原のＦｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）介在性死滅（またはＡＤＣＣ）を減少または遮断する方法は、対象におけるＦｃγＲ介在性死滅を減少または遮断するのに有効な量のＨＶＥＭアンタゴニスト、可溶性単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質Ｄ、ＨＶＥＭに結合する抗体、またはそれらの組合せを対象に投与することを含む。

ある実施態様において、自己免疫疾患を有する対象において自己抗原のＦｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）介在性死滅（またはＡＤＣＣ）を減少または遮断する方法は、対象の自己免疫疾患を軽減するのに有効な量のＨＶＥＭアンタゴニスト、可溶性単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質Ｄ、ＨＶＥＭに結合する抗体、またはそれらの組合せを対象に投与することを含む。

ある実施態様において、自己免疫疾患を有する対象において自己抗原のＦｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）介在性死滅（またはＡＤＣＣ）を遮断する方法は、対象の自己免疫疾患を軽減するのに有効な量のＨＶＥＭアンタゴニスト、可溶性単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質Ｄ、ＨＶＥＭに結合する抗体、またはそれらの組合せを対象に投与することを含む。

ある実施態様において、自己抗原のＦｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）介在性死滅は、自己抗原を発現する細胞のＦｃγＲ介在性死滅（ＡＤＣＣ）を指す。

本明細書において、対象におけるＦｃγＲ介在性死滅またはＡＤＣＣの減少は、自己抗原を発現する細胞のＦｃγＲ介在性死滅またはＡＤＣＣの量または値を（アンタゴニスト投与前の）対象の安静時のレベルよりも任意の程度で減少させることを意味し、対象におけるＦｃγＲ介在性死滅またはＡＤＣＣの遮断は、対象において自己抗原を発現する細胞のＦｃγＲ介在性死滅またはＡＤＣＣを実質的に妨げることを意味する。

ある実施態様において、ＨＳＶ糖タンパク質Ｄは、ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄ、ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄ、またはそれらの組合せである。糖タンパク質Ｄは単独で使用され得、担体と連結され得、または融合タンパク質の一部として使用され得る。糖タンパク質Ｄは全長タンパク質またはＨＶＥＭ受容体に結合する糖タンパク質Ｄタンパク質の一部であり得る。例えば、ＨＳＶ糖タンパク質は、可溶性の全長ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄ、ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄまたはそれらの組合せである。ＨＳＶ糖タンパク質ＤまたはＨＶＥＭ受容体に結合する一部は、組換えタンパク質であり得る。

ある実施態様において、ＨＶＥＭに結合する抗体（抗ＨＶＥＭ抗体）は、ＨＶＥＭに結合し、ＨＶＥＭを活性化せず、かつリガンドのＨＶＥＭへの結合を妨げるか、または遮断する抗体である。

ある実施態様において、自己免疫疾患は、例えば、関節リウマチ、多発性硬化症、１型糖尿病、自己免疫性肝炎、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、炎症性腸疾患、ギラン・バレー症候群、乾癬、グレーブス病、橋本甲状腺炎、重症筋無力症、血管炎、またはそれらの組合せを含むが、これらに限定されず、ＡＤＣＣの減少によって利益を受けるあらゆる自己免疫疾患が、可溶性ＨＳＶ糖タンパク質Ｄ、ＨＶＥＭアンタゴニストまたはＨＶＥＭに結合する抗体で処置され得る。

本明細書において、用語「抗体」は、インタクト抗体（すなわち、完全なＦｃおよびＦｖ領域を有する抗体）を指す。「フラグメント」は、抗体全体よりも短いが、抗原結合部分を含み、抗原への特異的な結合についてそのフラグメントのインタクト抗体と競合する抗体の任意の部分または連結された抗体の部分（限定されない例として、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）など）を指す。この場合、抗原はＨＶＥＭ、好ましくはヒトＨＶＥＭである。

このようなフラグメントは、例えばインタクト抗体を切断することによって、または組換えの手段によって調製され得る（一般に、Fundamental Immunology, Ch. 7, Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y. (1989)を参照、これは参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）。抗原結合フラグメントは、組換えＤＮＡ技術によって、またはインタクト抗体の酵素的もしくは化学的切断によって、または分子生物学的技術によって産生され得る。いくつかの実施態様において、フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、相補性決定領域（ＣＤＲ）フラグメント、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、ペプチドリンカーを介して連結された可変ドメイン軽鎖（ＶＬ）および可変ドメイン重鎖（ＶＨ）である。ある実施態様において、ｓｃＦｖは、ヒト可変ドメインＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３またはＦＲ４と同一の配列を有する可変ドメインフレームワーク配列を含む。ある実施態様において、ｓｃＦｖは、５～３０アミノ酸残基の長さのリンカーペプチドを含む。ある実施態様において、ｓｃＦｖは、グリシン、セリンおよびスレオニン残基のうちの１つ以上を含むリンカーペプチドを含む。

ある実施態様において、ｓｃＦｖのリンカーは１０～２５アミノ酸長である。ある実施態様において、ペプチドリンカーは、グリシン、セリンおよび／またはスレオニン残基を含む。例えば、Bird et al., Science, 242: 423-426 (1988)およびHuston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85:5879-5883 (1988)（これらはそれぞれ参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）、またはヒトＨＶＥＭに特異的な抗原結合をポリペプチドに与えるのに十分な抗体の少なくとも一部を含むポリペプチド（二重特異性抗体を含む）を参照。Ｎ末端からＣ末端にかけて、成熟した軽鎖および重鎖可変ドメインはともに、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４領域を含む。アミノ酸の各ドメインへの割り当ては、Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987 and 1991))、Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)、またはChothia et al., Nature 342:878-883 (1989)（これらはそれぞれ参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）の定義に従っている。本明細書において、用語「ポリペプチド」は、天然または人工のタンパク質、タンパク質フラグメント、およびタンパク質配列のポリペプチド類似体を包含する。ポリペプチドは単量体または重合体であり得る。本明細書において、Ｆｄフラグメントは、ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなる抗体フラグメントを意味する；Ｆｖフラグメントは、抗体の単一アームのＶ１およびＶＨドメインからなる；および、ｄＡｂフラグメント（Ward et al., Nature 341:544-546 (1989)、これは参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）は、ＶＨドメインからなる。いくつかの実施態様において、フラグメントは少なくとも５、６、８または１０アミノ酸長である。他の実施態様において、フラグメントは、少なくとも１４、少なくとも２０、少なくとも５０、または少なくとも７０、８０、９０、１００、１５０もしくは２００アミノ酸長である。

本明細書における用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体集団の抗体メンバーを指す（すなわち、集団を構成する個々の抗体は、微量に存在し得る可能性のある変異（例えば天然に存在する変異）を除いて同一である）。したがって、修飾語「モノクローナル」は、別個の抗体の混合物ではないという抗体の特徴を示す。特定の実施態様において、そのようなモノクローナル抗体は通常、ヒトＨＶＥＭに結合するポリペプチド配列を含む抗体を含む。種々の決定基（エピトープ）に対する種々の抗体を通常含むポリクローナル抗体製剤とは対照的に、モノクローナル抗体製剤の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対する抗体である。モノクローナル抗体製剤はその特異性に加えて、通常、他の免疫グロブリンによって汚染されていないという点で有利である。したがって、同定されたモノクローナル抗体は、その配列が同定された場合、非ハイブリドーマ技術（例えば、適切な組換えの手段）によって産生され得る。

本明細書に記載の発明のある実施態様において、抗体は単離されている。本明細書において、用語「単離された抗体」は、その起源または由来の供給源によって以下のうち１つ、２つ、３つまたは４つを有する抗体を指す：（１）天然の状態で付随している天然の関連した成分と関連していない、（２）同じ種由来の他のタンパク質を含んでいない、（３）異なる種由来の細胞によって発現されている、および（４）人の手を介さずに天然に存在しない。

ある実施態様において、抗体はヒト化されている。「ヒト化」型の非ヒト（例えばマウス）抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含むキメラ抗体である。ある実施態様において、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域（ＨＶＲ）（またはＣＤＲ）の残基が、所望の特異性、親和性および／または能力を有する非ヒト種（マウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類など）（ドナー抗体）のＨＶＲ（またはＣＤＲ）の残基で置換されているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。好ましい実施態様において、マウスｍＡｂのフレームワーク（ＦＲ）残基は、対応するヒト免疫グロブリン可変ドメインフレームワーク（ＦＲ）残基に置換されている。これらは、抗体の性能をさらに改良するために、ある実施態様においてさらに改変され得る。さらに、特定の実施態様において、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体には見出されない残基を含み得る。ある実施態様において、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体に見出されない残基を含まない。一般に、ヒト化抗体は実質的にすべての少なくとも１つ（典型的には２つ）の可変ドメインを含み、そのすべて（または、ある実施態様において実質的にすべて）の超可変ループが非ヒト免疫グロブリンの超可変ループに対応しており、すべて（または、ある実施態様において実質的にすべて）のＦＲがヒト免疫グロブリン配列のＦＲである。ヒト化抗体は、任意で（典型的にはヒト免疫グロブリンの）免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部を含む。例えば、Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992); Vaswani and Hamilton, Ann. Allergy, Asthma & Immunol. 1:105-115 (1998); Harris, Biochem. Soc. Transactions 23:1035-1038 (1995); Hurle and Gross, Curr. Op. Biotech. 5:428-433 (1994); ならびに米国特許第６，９８２，３２１号および第７，０８７，４０９号を参照、これらの各参考文献および各特許の内容は参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。ヒト化抗体がレシピエント抗体またはドナー抗体に見出されない残基を含むある実施態様において、抗体のＦｃ領域はＷＯ９９／５８５７２（この内容は参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているように改変されている。

モノクローナル抗体をヒト化する技術は周知であり、例えば米国特許第４，８１６，５６７号；第５，８０７，７１５号；第５，８６６，６９２号；第６，３３１，４１５号；第５，５３０，１０１号；第５，６９３，７６１号；第５，６９３，７６２号；第５，５８５，０８９号；および第６，１８０，３７０号に記載されており、これらの各内容は参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。非ヒト免疫グロブリンに由来する抗原結合部位を含む多くの「ヒト化」抗体分子が記載されており、これにはヒト定常ドメインに融合したげっ歯類または改変されたげっ歯類Ｖ領域およびその関連する相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する抗体が含まれる。例えば、Winter et al. Nature 349: 293-299 (1991)、Lobuglio et al. Proc. Nat. Acad. Sci. USA 86: 4220-4224 (1989)、Shaw et al. J. Immunol. 138: 4534-4538 (1987)、およびBrown et al. Cancer Res. 47: 3577-3583 (1987)を参照、これらの各内容は参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。他の参考文献には、適切なヒト抗体定常ドメインと融合させる前に、ヒト支持フレームワーク領域（ＦＲ）に移植されたげっ歯類超可変領域またはＣＤＲが記載されている。例えば、Riechmann et al. Nature 332: 323-327 (1988)、Verhoeyen et al. Science 239: 1534-1536 (1988)、およびJones et al. Nature 321: 522-525 (1986)を参照、これらの各内容は参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。別の参考文献には、組換えによるベニヤ(veneer)のげっ歯類フレームワーク領域によって支持されたげっ歯類ＣＤＲが記載されている－欧州特許出願公開第０５１９５９６号（その全体が参照によって組み込まれる）。これらの「ヒト化」分子は、ヒトのレシピエントにおけるこれらの部分の治療応用の期間および有効性を制限するげっ歯類抗ヒト抗体分子への望ましくない免疫応答を最小限にするように設計されている。抗体の定常領域は、免疫学的に不活性になる（例えば、補体溶解を誘発しない）ように設計され得る。例えば、ＰＣＴ出願公開第ＷＯ９９／５８５７２号；英国特許出願公開第９８０９９５１．８号を参照。利用され得る抗体をヒト化する他の方法は、Daugherty et al., Nucl. Acids Res. 19: 2471-2476 (1991)、ならびに米国特許第６，１８０，３７７号；第６，０５４，２９７号；第５，９９７，８６７号；第５，８６６，６９２号；第６，２１０，６７１号；および第６，３５０，８６１号；ならびにＰＣＴ出願公開第ＷＯ０１／２７１６０号に開示されている（これらはそれぞれ参照によってその全体が組み込まれる）。

ある実施態様において、本明細書における抗体またはフラグメントは組換え的に作製され得る（例えば、宿主細胞に導入された組換え発現ベクターを用いて発現させた抗体、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子を導入した動物（例えばマウス）から単離された抗体）。

ある実施態様において、本明細書に記載の抗ＨＶＥＭ抗体はヒトＨＶＥＭに特異的に結合でき（または特異的に結合し）、アゴニスト応答を誘発できる。本明細書において、用語「特異的に結合できる」または「特異的に結合する」は、抗体またはフラグメントが＜１μＭ、好ましくは＜１ｎＭ、最も好ましくは＜１０ｐＭの解離定数で（特定の）抗原に結合する性質を指す。ある実施態様において、ＨＶＥＭに対する抗体（またはフラグメント）のＫｄは１０．０ｎＭよりも優れている。ある実施態様において、ＨＶＥＭに対する抗体（またはフラグメント）のＫｄは１．０ｎＭよりも優れている。ある実施態様において、ＨＶＥＭに対する抗体（またはフラグメント）のＫｄは０．５ｎＭよりも優れている。ある実施態様において、ＨＶＥＭドメインに対する抗体（またはフラグメント）のＫｄは０．１ｎＭまたはそれよりも強い。

本明細書における用語「Ｋ_ｄ」は、抗体－抗原相互作用の解離定数を指すことが意図される。ＨＶＥＭに対する抗体のＫ_ｄまたは結合親和性を決定する一つの方法は、抗体の単機能Ｆａｂフラグメントの結合親和性を測定することである。（親和定数は解離定数の逆数である）。単機能Ｆａｂフラグメントを得るために、抗体（例えばＩｇＧ）はパパインにより切断され得るか、または組換えにより発現され得る。抗ヒトＨＶＥＭ抗体のフラグメントの親和性は、例えば表面プラズモン共鳴（BIAcore3000^（商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）システム、BIAcore Inc., Piscataway N.J.）によって決定され得る。供給者の説明書に従って、ＣＭ５チップはＮ－エチル－Ｎ’－（３－ジメチルアミノプロピル）－カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）およびＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化され得る。抗原は１０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ４．０中に希釈され得、０．００５ｍｇ／ｍＬの濃度で活性化されたチップ上に注入され得る。個々のチップチャネルに可変のフロー時間を用いて２つの範囲の抗原密度が達成され得る：詳細な動態研究のための１００～２００応答単位（ＲＵ）、およびスクリーニングアッセイのための５００～６００ＲＵ。精製されたＦａｂ試料の段階希釈物（０．１～１０ｘの推定Ｋ_ｄ）が１００マイクロリットル／分で１分間注入され、最大２時間の解離時間が許容される。Ｆａｂタンパク質の濃度は、（アミノ酸分析によって決定される）既知の濃度のＦａｂを標準として用いてＥＬＩＳＡおよび／またはＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動によって決定される。動力学的な結合速度（ｋ_ｏｎ）および解離速度（ｋ_ｏｆｆ）は、ＢＩＡ評価プログラムを用いてデータを１：１ラングミュア結合モデルにフィットさせることによって同時に取得される（Karlsson, R. Roos, H. Fagerstam, L. Petersson, B. (1994). Methods Enzymology 6. 99-110、この内容はその全体が本明細書に組み込まれる）。平衡解離定数（Ｋ_ｄ）の値はｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎとして計算される。このプロトコルは、任意の抗原に対する抗体またはフラグメントの結合親和性を決定するために使用するのに適している。当分野で公知の他のプロトコルも使用され得る（例えば、ＥＬＩＳＡ）。

抗体またはポリペプチドに「特異的に結合する」エピトープは、当分野でよく理解されている用語であり、そのような特異的または優先的な結合を決定する方法は当分野で周知である。分子実体は、別の細胞または物質よりも高い頻度で、より迅速に、より高い持続性で、かつ／またはより高い親和性で特定の細胞または物質と反応または結合する場合、「特異的結合」または「優先的結合」を示すと考えられている。抗体は、他の物質に結合するよりも高い親和性、結合活性、容易性および／または持続性で標的に結合する場合、標的に「特異的に結合」または「優先的に結合」する。この定義を読むことにより、例えば、第１の標的に特異的または優先的に結合する抗体（または部分もしくはエピトープ）は、第２の標的に特異的または優先的に結合してもしなくてもよいことが理解される。このように、「特異的結合」または「優先的結合」は、排他的結合を（含み得るが）必ずしも必要としない。

抗体に関して本明細書で使用される用語「競合する」は、第１の抗体とその同種エピトープとの結合の結果が、第２の抗体の非存在下における第１の抗体の結合と比較して第２の抗体の存在下において検出可能に低下するように、第１の抗体またはその抗原結合部分が第２の抗体またはその抗原結合部分の結合と十分に類似した様式でエピトープに結合することを意味する。第２の抗体のそのエピトープへの結合が第１の抗体の存在下において検出可能に低下するという代替もあり得るが、そうである必要はない。すなわち、第２の抗体が第１の抗体のその各エピトープへの結合を阻害することなく、第１の抗体が第２の抗体のそのエピトープへの結合を阻害し得る。しかし、各抗体が他の抗体と同種エピトープまたはリガンドとの結合を（同程度であろうと、より大きなまたは小さな程度であろうと）検出可能に阻害する場合、抗体は各エピトープの結合について互いに「交差競合する」と考えられる。競合する抗体および交差競合する抗体はともに本発明に包含される。そのような競合または交差競合が生じる機構（例えば、立体障害、立体構造変化、または共通のエピトープもしくはその一部への結合）にかかわらず、当業者は、本明細書で提供される教示に基づいてそのような競合および／または交差競合する抗体が包含され、本明細書で開示される方法に有用であり得ることを認識する。

抗体（免疫グロブリン）は、その重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて種々のクラスに割り当てられ得る。抗体またはフラグメントは、例えばそれぞれＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＡもしくはＩｇＭ抗体またはそのフラグメントのいずれかであり得る。ある実施態様において、抗体は免疫グロブリンＧである。ある実施態様において、抗体フラグメントは免疫グロブリンＧのフラグメントである。ある実施態様において、抗体はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４である。ある実施態様において、抗体は、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ２ａ、ヒトＩｇＧ２ｂ、ヒトＩｇＧ３またはヒトＩｇＧ４からの配列を含む。これらの抗体のいずれかのサブタイプの組合せもまた、使用され得る。使用される抗体の種類の選択における考慮の１つは、抗体の望ましい血清半減期である。例えば、ＩｇＧは一般に２３日の血清半減期を有し、ＩｇＡは６日、ＩｇＭは５日、ＩｇＤは３日、ＩｇＥは２日である（Abbas AK, Lichtman AH, Pober JS. Cellular and Molecular Immunology, 4th edition, W.B. Saunders Co., Philadelphia, 2000、これは参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）。

抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」は、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。重鎖の可変ドメインは「ＶＨ」と呼ばれ得る。軽鎖の可変ドメインは「ＶＬ」と呼ばれ得る。これらのドメインは一般に抗体の最も可変な部分であり、抗原結合部位を含む。用語「可変」は、可変ドメインの特定の部分が、抗体間で配列が広範に異なっており、それぞれの特定の抗体の特定の抗原に対する結合および特異性に使用されているという事実を指す。しかし、可変性は、抗体の可変ドメイン全体にわたって均等に分布しているわけではない。軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインの両方において、可変性は超可変領域（ＨＶＲ）（またはＣＤＲ）と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分はフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖および軽鎖の可変ドメインはそれぞれ４つのＦＲ領域を含み、これらは大部分がβシート配置をとり、βシート構造を連結する（βシート構造の一部を形成する場合もある）ループを形成する３つのＣＤＲによって連結されている。各鎖のＣＤＲはＦＲ領域によって近接して保持されており、他の鎖のＣＤＲとともに抗体の抗原結合部位の形成に寄与している（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, Md. (1991)参照）。定常ドメインは抗体の抗原への結合に直接関与しないが、様々なエフェクター機能（抗体依存性細胞傷害における抗体の関与など）を示す。

任意の脊椎動物種由来の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて２つの明確に異なる種類（カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる）のうち１つに割り当てられ得る。

「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書において定義されるＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。

本明細書における用語「超可変領域」または「ＨＶＲ」は、配列が超可変性であり、かつ／または構造的に規定されたループを形成する抗体可変ドメインの領域を指す。一般に、抗体はＶＨに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）およびＶＬに３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）の６つのＨＶＲを含む。天然の抗体において、６つのＨＶＲのうちＨ３およびＬ３が最も大きな多様性を示し、特にＨ３は抗体に精密な特異性を与えるのに特有の役割を果たしていると考えられている。例えば、Xu et al., Immunity 13:37-45 (2000); Johnson and Wu, in Methods in Molecular Biology 248:1-25 (Lo, ed., Human Press, Totowa, N.J., 2003)を参照。実際に、天然に存在する重鎖のみからなるラクダ類抗体は、軽鎖が存在しない場合でも機能的で安定である。例えば、Hamers-Casterman et al., Nature 363:446-448 (1993); Sheriff et al., Nature Struct. Biol. 3:733-736 (1996)を参照。多数のＨＶＲの描写が使用されており、本明細書に包含される。Kabatの相補性決定領域（ＣＤＲ）は配列の可変性に基づいており、最も一般的に使用されている（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)、これは参照によってその全体が本明細書に組み込まれる）。重鎖および軽鎖にはそれぞれＣＤＲ１、２および３が存在する。Chothiaは、代わりに構造ループの位置に言及している（Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）。ＡｂＭ ＨＶＲはKabatのＨＶＲとChothiaの構造ループとの間の妥協点を表し、Oxford MolecularのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用されている。「接触(contact)」ＨＶＲは、利用可能な複合体結晶構造の分析に基づいている。ＨＶＲは、以下の「拡張(extended)ＨＶＲ」を含み得る：ＶＬの２４～３６または２４～３４（Ｌ１）、４６～５６または５０～５６（Ｌ２）および８９～９７または８９～９６（Ｌ３）、ならびにＶＨの２６～３５（Ｈ１）、５０～６５または４９～６５（Ｈ２）および９３～１０２、９４～１０２または９５～１０２（Ｈ３）。可変ドメイン残基は、これらの各定義について上述のKabat et al.に従って番号付けされている。

本明細書における用語「Ｆｃ領域」は免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を規定するために使用され、天然配列のＦｃ領域およびバリアントＦｃ領域を含む。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は様々であり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖のＦｃ領域は通常、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基またはＰｒｏ２３０からそのカルボキシ末端まで広がっているように定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リジンは、例えば抗体の産生または精製において除去され得、または抗体の重鎖をコードする核酸を組換えにより設計することによって除去され得る。したがって、本明細書で使用されるインタクト抗体は、他のＣ末端リジンを有するか、または有しない抗体であり得る。

本明細書に開示された抗体、ｓｃＦｖまたは抗体のフラグメントを含む組成物または医薬組成物は、使用前の保存および輸送中の期間にわたって変性、酸化または凝集の効果によるタンパク質の活性または構造的完全性の低下を妨げるために安定剤を含み得る。組成物または医薬組成物は、塩、界面活性剤、ｐＨおよび等張化剤（糖など）のうち１つ以上の任意の組合せを含み得、これらは凝集の問題を克服するのに寄与し得る。組成物または医薬組成物が注射剤として使用される場合、ｐＨ値はおよそ中性のｐＨ範囲であり、対象への注射において有害な製剤中の気泡を回避するために界面活性剤のレベルを最小限にすることは有利である。ある実施態様において、組成物または医薬組成物は液状であり、高濃度の生理活性抗体を溶液中で安定に支持し、吸入投与または非経口投与に適している。ある実施態様において、組成物または医薬組成物は、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮内および／または皮下注射に適している。ある実施態様において、組成物または医薬組成物は液状であり、気泡形成およびアナフィラキシー様の副作用のリスクが最小化されている。ある実施態様において、組成物または医薬組成物は等張性である。ある実施態様において、組成物または医薬組成物は６．８～７．４のｐＨを有する。

ある実施態様において、本明細書に開示されている抗体のｓｃＦｖまたはフラグメントは凍結乾燥および／またはフリーズドライされており、使用のために再構成される。

薬学的に許容され得る担体の例には、限定されないが、リン酸緩衝生理食塩水溶液、滅菌水（ＵＳＰの注射用水を含む）、エマルジョン（油／水エマルジョンなど）、および各種の湿潤剤が含まれる。エアロゾルまたは非経口投与のための希釈剤には、リン酸緩衝生理食塩水または（０．９％）生理食塩水（例えばＵＳＰの０．９％塩化ナトリウム溶液）が含まれる。このような担体を含む組成物は、当業者に公知の方法によって製剤化される（例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, A. Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1990; およびRemington, The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing, 2000を参照、これらの各内容はその全体が本明細書に組み込まれる）。限定されない例として、担体は、二塩基性リン酸ナトリウム、塩化カリウム、リン酸二水素カリウム、ポリソルベート８０（例えば、２－［２－［３，５－ビス（２－ヒドロキシエトキシ）オキソラン－２－イル］－２－（２－ヒドロキシエトキシ）エトキシ］エチル（Ｅ）－オクタデカ－９－エノエート）、脱水エデト酸二ナトリウム、スクロース、りん酸一ナトリウム一水和物、または二塩基性リン酸ナトリウム二水和物のうち１つ以上を含み得る。

本明細書に記載の抗体、抗体フラグメント、組成物または医薬組成物は凍結乾燥され得、または任意の適切な形態（限定されないが、注射用溶液、吸入用溶液、ゲル形態および錠剤を含む）で提供され得る。

本明細書における用語「Ｆｃドメイン」は免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を規定するために使用され、天然配列のＦｃ領域およびバリアントＦｃ領域を含む。免疫グロブリン重鎖のＦｃドメインの境界は様々であり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖のＦｃドメインは通常、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基またはＰｒｏ２３０からそのカルボキシ末端まで広がっているように定義される。ＦｃドメインのＣ末端リジンは、例えばそれをコードする核酸を組換えにより設計することによって除去され得る。ある実施態様において、抗体はＦｃドメインを含む。ある実施態様において、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインと同一の配列または９９％以上の配列類似性を有する。ある実施態様において、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ２ Ｆｃドメインと同一の配列または９９％以上の配列類似性を有する。ある実施態様において、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ３ Ｆｃドメインと同一の配列または９９％以上の配列類似性を有する。ある実施態様において、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃドメインと同一の配列または９９％以上の配列類似性を有する。ある実施態様において、Ｆｃドメインは変異していない。ある実施態様において、Ｆｃドメインは、中性ｐＨではなく酸性ｐＨにおいてＦｃＲｎに対するＩｇＧの親和性を増加させるために、ＣＨ２－ＣＨ３ドメイン界面において変異している（Dall'Acqua et al, 2006; Yeung et al, 2009）。ある実施態様において、ＦｃドメインはヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインと同一の配列を有する。

アミノ酸配列の挿入には、１残基から１００以上の残基を含むポリペプチドまでの範囲の長さのアミノ末端融合および／またはカルボキシ末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例には、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体またはエピトープタグと融合した抗体が含まれる。抗体分子の他の挿入バリアントには、抗体のＮ末端またはＣ末端への、血液循環中の抗体の半減期を増加させる酵素またはポリペプチドの融合が含まれる。

置換バリアントは抗体分子内の少なくとも１つのアミノ酸残基を除去し、その位置に異なる残基を挿入している。置換変異について最も興味深い部位には超可変領域が含まれるが、フレームワークの変化も想定される。保存的置換が、「保存的置換」という表題で表１に示されている。このような置換が生物活性に変化をもたらす場合、表１において「例示的置換」と記載されているか、またはアミノ酸の分類に関して以下でさらに説明されているより実質的な変化が導入され得、生成物がスクリーニングされ得る。

抗体の生物学的特性の実質的な改変は、（ａ）置換領域におけるポリペプチド骨格の構造（例えばβシートまたはらせん構造）、（ｂ）標的部位における分子の電荷もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖のバルクを維持する効果が著しく異なる置換を選択することによって達成される。天然に存在する残基は、共通の側鎖の特性に基づいてグループに分けられる：
（１）非極性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）極性無電荷：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性（負に帯電）：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性（正に帯電）：Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖の配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ。

非保存的置換は、これらの分類のうち１つのメンバーを別の分類のメンバーに交換することによってなされる。

（例えば実施され得る）置換の種類の１つは、化学反応し得る抗体の１つ以上のシステインを別の残基（限定されないが、アラニンまたはセリンなど）に変化させることである。例えば、非標準(non-canonical)システインの置換があり得る。置換は、可変ドメインのＣＤＲもしくはフレームワーク領域または抗体の定常領域においてなされ得る。いくつかの実施態様において、システインは標準(canonical)である。分子の酸化安定性を改善し、異常な架橋結合を妨げるために、抗体の適切な立体構造の維持に関与していない任意のシステイン残基が（一般にはセリンに）置換され得る。逆に、特に抗体が抗体フラグメント（Ｆｖフラグメントなど）である場合、抗体の安定性を改善するためにシステイン結合が抗体に追加され得る。

ある実施態様において、本明細書に記載の抗体は組換えにより作製される。ある実施態様において、融合タンパク質は真核生物発現系において作製される。

ある実施態様において、真核生物発現系において作製された融合タンパク質は、Ａｓｎ２９７に対応するＦｃ部分の残基においてグリコシル化を含む。

ある実施態様において、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組成物または医薬組成物は、抗体またはその抗原結合フラグメントに関して実質的に純粋である。本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組成物または医薬組成物は、組成物または医薬組成物の試料の少なくとも６０％～７５％が１種類の抗体またはその抗原結合フラグメントを示す場合、抗体またはフラグメントに関して「実質的に純粋」である。本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを含む実質的に純粋な組成物または医薬組成物は、抗体または抗原結合フラグメントの部分において、１種類の抗体または抗原結合フラグメントを６０％、７０％、８０％または９０％含み得、より通常には約９５％であり、好ましくは９９％を超える。純度または均一性は、当分野で周知の多くの手段（ポリアクリルアミドゲル電気泳動またはＨＰＬＣなど）によって試験され得る。

ある実施態様において、ヒトＨＶＥＭは、配列番号１（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＱ８９２３８．１）のタンパク質配列を有する。

例えば選択肢Ａおよび／または選択肢Ｂとともに本明細書において使用される「および／または」は、（ｉ）選択肢Ａ、（ｉｉ）選択肢Ｂ、および（ｉｉｉ）選択肢Ａプラス選択肢Ｂの別々の実施態様を包含する。

本明細書に記載の様々な要素のあらゆる組合せが、本明細書において他の指示がない限り、または文脈上明らかに矛盾しない限り、本発明の範囲内にある。

本明細書において使用される用語は、特定の実施態様を説明することのみを目的としており、限定することを意図していない。本明細書において、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、内容が明らかに他を示していない限り、複数形（「少なくとも１つ」を含む）を含むことが意図される。「少なくとも１つ」は、「ａ」または「ａｎ」を限定するものとして解釈されるべきではない。「または」は「および／または」を意味する。本明細書において、用語「および／または」は、関連して記載されている項目の１つ以上のあらゆる組合せを含む。本明細書において使用される場合、用語「含む」および／または「含んでいる」または「包含する」および／または「包含している」は、記載された特徴、領域、整数、工程、操作、要素および／または成分の存在を特定するが、１以上の他の特徴、領域、整数、工程、操作、要素、成分および／またはそれらの群の存在または追加を排除しないことがさらに理解される。

特に定義されていない限り、本明細書におけるすべての用語（技術用語および科学用語を含む）は、本開示が属する分野の当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を有する。一般に使用される辞書で定義されている用語などの用語は、関連する分野および本開示の文脈における意味と一致する意味を有すると解釈されるべきであり、本明細書で明示的に定義されていない限り、理想的な意味または過度に形式的な意味には解釈されないことがさらに理解される。

本願のあらゆる箇所において様々な出版物が参照されている。これらの参考文献の完全な引用が本明細書の最後に見出され得る。本明細書において参照されたすべての出版物、特許、特許出願公開および書籍の開示は、参照によってその全体が本願に組み込まれ、本発明に関連する分野をより完全に説明する。

本発明は、以下の実験の詳細からよりよく理解され得る。

実験の詳細
ＨＶＥＭシグナル伝達は、これまで抗体応答の機能性とは関連付けられていなかった。ゲノムにおいてＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄをコードする遺伝子全体を欠失させた組換えＨＳＶ－２（本明細書では「ΔｇＤ－２」と呼ばれる）は主にＡＤＣＣ応答を誘発するが、自然感染およびｇＤ発現ワクチンは中和応答を誘発するという予想外の観察を考慮して、ＨＶＥＭシグナル伝達はＡＤＣＣの生成を促進し得、かつ／またはｇＤはこの応答を遮断し得るという仮説を立てた。この仮説を試験するために、野生型マウスおよびＨＶＥＭ、ＢＴＬＡまたはＬＩＧＨＴノックアウトマウスにおいて、ΔｇＤ－２、（ｇＤを発現する）ｄｌ５２９および組換えｇＤタンパク質ワクチンの免疫原性および有効性を比較した。結果として、Ｆｃガンマ受容体ＩＶ（ＦｃγＲＩＶ）ＡＤＣＣを媒介する抗体は、ＨＳＶ－１およびＨＳＶ－２の臨床分離株に対する免疫防御の強い相関を与え、ＨＶＥＭ－ＬＩＧＨＴシグナル伝達がこの防御免疫応答に関与していることが示された。さらに、ＨＶＥＭの非存在下またはｇＤの存在下において、免疫細胞がＡＤＣＣを引き起こす能力は障害される。

ΔｇＤおよびｒｇＤ－２はＨＳＶの臨床分離株による感染から差次的に保護する
候補ワクチンは、免疫原性および有効性が異なっていることが示された。ΔｇＤ－２およびｒｇＤ－２ワクチンによる保護を比較するために、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに５ｘ１０^６、５ｘ１０^５または５ｘ１０^４ｐｆｕのΔｇＤ－２または５μｇのｒｇＤ－２／ＡＳ０４（GlaxoSmithKline）もしくはｒｇＤ－２／Ａｌｕｍ－ＭＰＬを３週間間隔でプライムブースト接種した。ブースト接種の３週間後に、マウスの皮膚に１０ｘ致死量（ＬＤ９０）のＨＳＶ－１（株Ｂ^３ｘ１．１）（図１Ａ）またはＨＳＶ－２（ＳＤ９０）（図１Ｂ）を曝露させた。ΔｇＤ－２は、５ｘ１０^６または５ｘ１０^５のワクチン投与量において１００％のマウスを保護し、５ｘ１０^４ｐｆｕ／マウスでの免疫後に８０％（ＨＳＶ－１）および７０％（ＨＳＶ－２）のマウスを保護した。ｒｇＤ－２タンパク質ワクチンは、これらの高用量の臨床分離株ＨＳＶ－１（４０％）またはＨＳＶ－２（２０％）に対して制限された保護を与えた。後根神経節（ＤＲＧ）中のＨＳＶ ＤＮＡを潜伏のマーカーとして定量し、その結果は生存率のデータと同等であった（図１Ｃ）。ウイルスＤＮＡは２つの最も高用量のΔｇＤ－２を接種したマウス１０匹のうち１匹においてのみ検出され、最も低い用量のワクチンにおいても潜伏に対する保護が観察された（３／１０（ＨＳＶ－１）および４／１０（ＨＳＶ－２）のマウスにおいてＤＮＡが検出された）。ＨＳＶを曝露させる１日前に、免疫したマウスからナイーブマウスに７５０μｇの全ＩｇＧを移入することによって受動移入保護を評価した。ΔｇＤ－２を免疫したマウスからの血清ＩｇＧのみが、ＨＳＶ－２ ４６７４による皮膚曝露からナイーブマウスを完全に受動的に保護でき（図１Ｄ）、ａｌｕｍおよびＭＰＬを伴うｒｇＤ－２は保護を与えなかった。

ΔｇＤ－２（ΔｇＤ）およびｒｇＤ－２はＨＳＶに対して機能的に異なる抗体応答を誘導する
有効性の差異が抗体応答の量および／または機能性に関連しているか否かを決定するために、マウスに５ｘ１０^４ｐｆｕのΔｇＤ－２または５μｇのｒｇＤ－２を免疫し、ブースト接種の１週間後に血清試料を採取し、全ＨＳＶ－２特異的ＩｇＧ力価（１：９００００希釈；図２Ａ）または全ｇＤ－２結合ＩｇＧ（図２Ｂ）をＥＬＩＳＡにより定量した。有効性において血清型の差異はほとんどなく、ワクチンはＨＳＶ－２ウイルスおよびタンパク質に基づいているため、ＨＳＶ－２に対する応答に注目した。ΔｇＤ－２は最も高い全ＨＳＶ－２ ＥＬＩＳＡ抗体価を誘導し、ｒｇＤ－２／ＡＳ０４は最も頑強なｇＤ－２特異的応答を誘導した；ΔｇＤ－２の免疫に応答したｇＤ特異的抗体は検出されなかった。Ａｂ応答の機能性も異なっていた。組換えｇＤ－２／ＡＳ０４は最も高い中和価を誘導したが（図２Ｃ）、ＦｃγＲＩＶの活性化をほとんどまたは全く誘導しなかった（図２Ｄ）。逆に、ΔｇＤ－２は最も強力なＦｃγＲＩＶ応答を誘導したが、中和活性をほとんど誘導しなかった。機能の差異は、ＨＳＶ－２特異的ＩｇＧ１およびＩｇＧ２応答の相対的な割合に反映されていた。マウスにおいて、ＩｇＧ２はＦｃγＲＩＶの活性化に最も強く関連するアイソタイプであり、ＩｇＧ１は中和抗体に最も強く関連するアイソタイプである（Nimmerjahn et al., 2005; Huber et al., 2006）。ΔｇＤ－２は主にＩｇＧ２応答を誘導し、ｒｇＤ－２／ＡＳ０４は主にＩｇＧ１応答を生成し、ｄｌ５２９はＩｇＧ１およびＩｇＧ２をおよそ同等の割合で誘発した（図２Ｅ）。

ＦｃγＲＩＶ活性化抗体と保護との間の関連をさらに評価するために、ＦｃγＲＩＶ－／－において受動移入研究を行った。ΔｇＤ－２免疫マウスから単離した７５０μｇの血清を腹腔内投与し、ナイーブＷＴマウスまたはＦｃγＲＩＶ－／－（ＦｃＲＩＶ ＫＯ）マウスに移入した。ΔｇＤ－２免疫マウスから単離した血清はナイーブＷＴマウスを完全に保護したが、ＦｃγＲＩＶ－／－マウスを保護しなかった。対照（ＶＤ６０）を接種した動物からの血清はナイーブＷＴマウスを保護できなかった（図２Ｆ）。

ＨＶＥＭ－／－マウスへのΔｇＤまたはｄｌ５－２９の接種は保護を抑制／低下させる
中和抗体からＦｃγＲＩＶ活性化抗体への移行が、ＨＶＥＭとその１つ以上のリガンドとの相互作用のｇＤによる遮断の欠如を反映している可能性を調査するため、ＨＶＥＭ－／－マウスにｒｇＤ－２／Ａｌｕｍ－ＭＰＬまたはΔｇＤ－２を接種した後、１０ｘＬＤ_９０の株ＳＤ９０を曝露した。ＷＴマウスと比較してＨＶＥＭ－／－マウスにおいてΔｇＤ－２に応答した保護が著しく低下した（ｐ＜０．０００１）が、ｒｇＤ－２／Ａｌｕｍ－ＭＰＬで観察された低いレベルの保護には影響はなかった（図３Ａ）。全ＨＳＶ結合ＩｇＧ（図３Ｂ）または中和応答（図３Ｃ）において有意な低下はなかったが、ＦｃγＲＩＶ活性化（図３Ｄ）において有意な低下が見られ、ΔｇＤ－２に対するＩｇＧ２応答の割合は低下していた（図３Ｅ）。

ＨＶＥＭはＡＤＣＣエフェクター細胞応答の開始および媒介に関与している
ＨＶＥＭ－／－（またはＬＩＧＨＴ－／－）マウスにおいてΔｇＤ－２により誘発されたＩｇＧ２、ＦｃγＲＩＶ活性化抗体の減少が、ナイーブＷＴマウスに対する受動移入保護の能力の低下をもたらすか否かを試験するために、ΔｇＤ－２またはＶＤ６０（対照）で免疫したＷＴマウスまたはＨＶＥＭ－／－マウスから単離した７５０μｇの血清を、１０ｘＬＤ_９０の株ＳＤ９０を曝露させる１日前にＷＴマウスまたはＨＶＥＭ－／－マウスに腹腔内投与した。これまでの研究と一致するように、ＷＴマウスからのΔｇＤ－２免疫血清はナイーブＷＴマウスを完全に保護し、ＦｃγＲＩＶ活性化Ａｂの低下と一致するように、ＨＶＥＭ－／－マウスからの免疫血清は保護できなかった（図４Ａ）。しかし、予想外に、接種させたＷＴマウスからのΔｇＤ－２免疫血清をＨＶＥＭ－／－マウスに移入した場合、保護は観察されなかった（図４Ｂ）。これはＨＶＥＭシグナル伝達がＡＤＣＣ応答の生成および媒介の両方に必要であることを示唆している。

ＢＴＬＡのリガンドは関与していない
ＦｃγＲＩＶ活性化抗体の生成に対するＢＴＬＡの効果を調査するために、ＷＴ（Ｃ５７Ｂｌ／６）マウスまたはＢＴＬＡ－／－マウスに５ｘ１０^５ｐｆｕのΔｇＤ－２、ＶＤ－６０細胞溶解物（対照）またはａｌｕｍおよびＭＰＬを伴う５μｇのｒｇＤ－２をプライムブースト接種した（３週間間隔）。ブースト接種の１週間後に、後眼窩出血によって血清を取得し、マウスに１０ｘＬＤ_９０の株ＳＤ９０を曝露させた。全ＨＳＶ結合ＩｇＧ（図５Ａ）、中和応答（図５Ｂ）またはＦｃγＲＩＶ活性化（図５Ｃ）に有意な差はなかった。また、ＷＴマウスと比較してＢＴＬＡ－／－マウスにおいてΔｇＤ－２に応答した保護の有意な低下はなく（図５Ｄ）、ＢＴＬＡがＦｃγＲＩＶ活性化抗体の生成において重要な役割を果たしていないことが示唆された。

ＬＩＧＨＴリガンドの役割
ＦｃγＲＩＶ活性化抗体の生成に対するＬＩＧＨＴの効果を調査するために、ＷＴ（Ｃ５７Ｂｌ／６）マウスまたはＬＩＧＨＴ－／－マウスに５ｘ１０^５ｐｆｕのΔｇＤ－２または５ ＶＤ－６０細胞溶解物（対照）をプライムブースト接種した（３週間間隔）。ブースト接種の１週間後に、後眼窩出血により血清を取得し、マウスに１０ｘＬＤ_９０のＨＳＶ－２株ＳＤ９０を曝露させた。全ＨＳＶ結合ＩｇＧ（図６Ａ）または中和応答（図６Ｂ）に有意な差はなかったが、ＬＩＧＨＴ－／－マウスにおいてＦｃγＲＩＶ活性化が有意に低下していた（図６Ｃ）。ＬＩＧＨＴ－／－マウスの部分的な保護がＨＳＶ－２による感染後に観察された（図６Ｄ）。これらの結果はＨＶＥＭとＬＩＧＨＴとの間の相互作用がＦｃγＲＩＶ活性化抗体の生成に関与していることを示唆しているが、他のリガンドも寄与してい得る。

ＨＶＥＭ－／－マウス由来の細胞はエフェクター機能を欠損している
ＡＤＣＣの媒介におけるＨＶＥＭの役割をさらに評価するために、ＷＴまたはＨＶＥＭ－／－の全骨髄または種々の細胞亜集団をエフェクター細胞として用い、ＨＳＶ－２感染ＨａＣＡＴ細胞を標的細胞として用いてエクスビボでのアッセイを行った。感染細胞を同定するために標的細胞にＧＦＰを発現するＨＳＶ－２株を感染させ、エフェクター細胞とともにインキュベートした後に死滅したＨＳＶ－２感染標的細胞の割合の変化によって細胞の死滅を測定した。簡潔に述べると、ＨａＣＡＴ細胞にＨＳＶ－２ ３３３－ＺＡＧ（ＧＦＰ）を４時間感染させた。次いで、感染させた標的細胞を、ΔｇＤを接種したマウスからの免疫血清（１：５希釈）とともにインキュベートし、ＷＴまたはＨＶＥＭ－／－マウスからの全骨髄または骨髄由来ＤＣをエフェクター細胞として用いた。エフェクター細胞による死滅を、死滅したＧＦＰ＋感染標的細胞をフローサイトメトリーにより定量することによって測定した。ＷＴマウスから単離した細胞と比較して、ＨＶＥＭ－／－の骨髄からエフェクター細胞を単離した場合、ＡＤＣＣが有意に低下した（図７Ａ、７Ｂ参照）。

ｇＤおよび抗ＨＶＥＭ抗体はＦｃγＲＩＶ活性化を阻害する
ΔｇＤ－２またはＶＤ－６０（対照）で免疫したマウスからの血清を、単独または組換えｇＤ、組換えＨＳＶ糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）もしくは抗ＨＶＥＭ抗体と組み合わせて、ΔｇＤ－２感染Ｖｅｒｏ標的細胞およびＮＦＡＴルシフェラーゼレポーター（PROMEGA）と連結したｍＦｃＲＩＶを発現するエフェクター細胞に添加した。図８Ａに示されるように、可溶性ｇＤまたは抗ＨＶＥＭ抗体は、ＦｃγＲＩＶ活性化を低下させる。ΔｇＤ－２で免疫したマウスからの血清を、ＷＴ ＨＳＶ－２またはΔｇＤ－２（すなわち、感染細胞上にｇＤが発現しない）のいずれかを感染させた標的細胞と組み合わせた場合、標的におけるｇＤの非存在下ではＦｃγＲＩＶの活性化が増強されるが、組換えｇＤタンパク質の添加はＦｃγＲＩＶの活性化を元に戻す（図８Ｂ）。

免疫血清を使用する代わりに、（ＣＤ２０を発現する）Ｒａｊｉ細胞およびリツキシマブ（抗ＣＤ２０）を用いて、抗ＨＶＥＭ抗体（１０または２０μｇ）の非存在下または存在下においてアッセイを実施した。図８Ｃに示されるように、抗ＨＶＥＭ抗体はＦｃγＲＩＶ活性化を阻害し、これはＨＶＥＭが最適なエフェクター死滅機能に必要であることを示している。

ｇＤおよび抗ＨＶＥＭは、ヒト血清によるＦｃγＲＩＩＩａ活性化を阻害する
５人のＨＳＶ血清陽性個体からのヒト血清を、ＨＳＶ－２（ＳＤ９０）感染標的細胞およびＮＦＡＴルシフェラーゼレポーター（PROMEGA）に連結したヒトＦｃγＲＩＩＩａを発現するエフェクター細胞と単独またはｇＤタンパク質（５μｇまたは１０μｇ）もしくは抗ＨＶＥＭ抗体（１０μｇ）と組み合わせてインキュベートした。図９に示されているように、ヒト血清は低レベル（５～６倍）のＦｃγＲＩＩＩａ活性化抗体（ｍ ＦｃγＲＩＶのヒト相当の受容体活性化を測定するためにヒトキットを用いて検出した）を有し、組換えｇＤタンパク質または抗ＨＶＥＭ抗体を添加した場合、細胞の死滅は減少する。

ＨＶＥＭは、他の病原体に対するＡＤＣＣ Ａｂの生成に必要である
この研究では、野生型マウスまたはＨＶＥＭ－／－ノックアウトマウスに１０^４ｐｆｕのＶＳＶ－エボラウイルスコンストラクト（Chandran lab）またはＰＢＳ（対照）を３週間間隔でプライムブースト免疫し、全抗体およびＡＤＣＣ活性化Ａｂについて免疫血清をアッセイした。エボラタンパク質に対する全血清抗体を測定し、その結果を図１０Ａに示す。血清を、ＶＳＶ－エボラに感染させた標的細胞およびＮＦＡＴルシフェラーゼレポーター（PROMEGA）に連結したｍＦｃγＲＩＶを発現するエフェクター細胞とともにインキュベートした。図１０Ｂに示されるように、ＨＶＥＭ ＫＯマウスにおいてＦｃγＲＩＶ活性化Ａｂは低下していた。

受動移入はＢＴＬＡではなくＬＩＧＨＴの役割を示す
ＶＤ６０で免疫した対照マウスからの血清またはΔｇＤ－２で免疫したマウスからの血清を、曝露の１日前にＷＴ、ＢＴＬＡ－／－またはＬＩＧＨＴ－／－マウスに腹腔内投与した。図１１Ａおよび図１１Ｂに示されるように、ΔｇＤ－２で免疫したマウスからの血清の受動移入はＢＴＬＡ－／－マウスの死亡を防ぐことができたが、ＬＩＧＨＴ－／－マウスではより効果が低かった。

考察
ｇＤを標的とする中和抗体を誘発するように設計された他のＨＳＶワクチンの試みとは対照的に、ΔｇＤ－２は頑強な非ｇＤ、ＦｃγＲＩＶ活性化ＡＤＣＣ応答を誘導する（Petro et al., 2015; 2016; Burn et al., 2017）。この機能的な差異は、ＨＳＶ－１またはＨＳＶ－２の臨床分離株を曝露したマウスにおいてより大きな保護をもたらす。アジュバント化されたｒｇＤ－２サブユニット製剤は最も高いｇＤ特異的および中和抗体応答を誘発することが示されているが、マウスにこれらの臨床分離株を曝露させた場合、これらの製剤は原疾患に対してわずかな保護しか与えず、潜伏を妨げることはできなかった。これらの結果はｒｇＤ－２による受動的防御の欠如およびＦｃγＲＩＶノックアウトマウスにおける受動的防御の低下と関連し、ＡＤＣＣ応答が免疫防御のより優れた相関を与えることを示している。保護の媒介におけるＡＤＣＣの中心的な役割は臨床研究によって支持されている。例えば、皮膚に限局した疾患を有するＨＳＶに感染した新生児は、播種性疾患を呈した乳児と比較してより高いＡＤＣＣ抗体価を母親から獲得した（Kohl et al., 1989; Kohl, 1991）。

ｒｇＤ－２（主にＩｇＧ１、中和）およびΔｇＤ－２（主にＩｇＧ２、ＦｃγＲＩＶ活性化）に対する差次的な応答は、ｇＤが免疫回避戦略としてより保護的なＡＤＣＣ応答の生成を遮断し得ることを示唆している。病原体に対する抗体応答の種類を決定しているものは完全には解明されていないが、ｇＤはいくつかのＨＶＥＭリガンドと競合するため、ＨＶＥＭが「調節」の役割を果たし得るという仮説を立てた。今回の研究結果はこの仮説を支持している。ＷＴマウスと比較して、ＨＶＥＭノックアウトマウスではＦｃγＲ活性化、ＡＤＣＣ、およびΔｇＤ－２に対するＩｇＧ２抗体応答の割合が低下していた。類似の結果がＬＩＧＨＴ－／－マウスにおいて観察されたが、ＢＴＬＡ－／－マウスでは観察されず、これはＨＶＥＭ－ＬＩＧＨＴシグナル伝達がＡＤＣＣ応答の生成を促進していることを示唆している。注目すべきことに、ＨＶＥＭ－／－マウスではΔｇＤ－２に対する全ＨＳＶ結合抗体応答またはｒｇＤ－２タンパク質ワクチンに対する中和応答は低下しておらず、これはＨＶＥＭシグナル伝達がＡＤＣＣ応答の生成に特異的に寄与しており、一般的な抗体応答の誘発には必要でないことを示唆している。他のｇＤ発現ワクチンおよび自然感染は可変量のＡＤＣＣ応答を伴って中和抗体を優先的に生成し、これはウイルスによって産生されたｇＤがＨＶＥＭ－ＬＩＧＨＴシグナル伝達を遮断する能力を反映していると考えられる。自然感染に対する可変のＡＤＣＣ抗体応答は、ＨＶＥＭの発現およびシグナル伝達の個体差を反映してい得る。

注目すべきことに、ＨＶＥＭシグナル伝達は、ＦｃＲ活性化抗体応答の開始だけでなく、ＡＤＣＣの媒介にも必要であった。この結論は受動移入研究によって支持されている。ΔｇＤ－２免疫マウスから採取した血清の腹腔内投与は、その後のウイルス曝露に対してＷＴマウスを完全に保護したが、ＨＶＥＭ－／－マウスは保護しなかった。抗体依存性細胞死滅の媒介におけるＨＶＥＭの役割は、ＨＶＥＭ－／－マウス由来のエフェクター細胞がＷＴマウス由来の細胞と比較してＨＳＶ感染標的細胞を実質的により少なく死滅させたというインビトロでの研究によって確認された。

ｇＤ－２タンパク質がエフェクター機能を妨げる能力は、ｇＤ－２の存在下におけるＦｃγＲＩＶ活性化の用量依存的な遮断によって示された。逆に、標的細胞にＷＴウイルスではなくΔｇＤ－２を感染させ、標的細胞が細胞膜上にｇＤを発現しなかった場合、ＦｃγＲＩＶ活性化は上昇し、これは結果として免疫回避戦略を示している。糖タンパク質ＤはＨＶＥＭシグナル伝達と競合してＡＤＣＣ抗体応答の生成を遮断するが、抗体が存在している場合においても、エフェクター細胞死滅を妨げる。したがって、この結果は、ＡＤＣＣが有害な影響を与える状況（例えば自己免疫疾患）においてＡＤＣＣ応答を最小化および／または遮断するために糖タンパク質ＤをＨＶＥＭアンタゴニストとして使用することを示唆する。

ＨＶＥＭのシグナル伝達を妨げ、ＡＤＣＣ応答の生成および／またはエフェクター細胞が死滅を誘導する能力を遮断することは、中和抗体を回避する病原体に特に関連し得る。例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）のＵＬ１４４タンパク質は、ＢＴＬＡを標的とするＨＶＥＭのオルソログである（Cheung et al., 2005）。ＣＭＶの病因におけるこのタンパク質の機能は不明であるが、免疫回避に関与しているという仮説が立てられている（Poole et al., 2006）。

本研究の結果は、抗体依存性細胞介在性死滅応答の生成および作用におけるＨＶＥＭシグナル伝達についての従前認識されていなかった調節的役割を明らかにし、新たなＨＳＶ免疫回避戦略を同定している。ｇＤはＨＶＥＭ結合についてＬＩＧＨＴと競合することによって、ＦｃγＲＩＶ活性化抗体の生成を妨げ、抗体が産生されている場合においても抗体が標的細胞死滅を媒介する能力を妨げる。ウイルスは細胞間を直接伝播することによってこれらの抗体を回避し得るため、これは自然感染に対する中和抗体応答の優先的な誘導に寄与し得る。

本明細書において開示されている方法のいくつかの実施態様を以下に示す。

実施態様１：対象において感染性物質のワクチンに対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）抗体応答を優先的に増強する方法であって、ワクチンを受けている対象に対象のＡＤＣＣ抗体応答を増強するのに有効な量のヘルペスウイルスエントリーメディエーター（ＨＶＥＭ）アゴニスト、腫瘍壊死因子スーパーファミリー１４（ＴＮＦＳＦ－１４）アゴニストまたはそれらの組合せを投与することを含む、方法。

実施態様２：中和抗体応答を誘発する感染性物質のワクチンの抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を増強する方法であって、感染性物質のワクチンを受けている対象に対象のＡＤＣＣ活性を増強するのに有効な量のヘルペスウイルスエントリーメディエーター（ＨＶＥＭ）アゴニスト、腫瘍壊死因子スーパーファミリー１４（ＴＮＦＳＦ－１４）アゴニストまたはそれらの組合せを投与することを含む、方法。

実施態様３：ＨＶＥＭアゴニストが腫瘍壊死因子スーパーファミリー１４（ＴＮＦＳＦ－１４）タンパク質またはその一部を含む、実施態様１または２に記載の方法。

実施態様４：ＨＶＥＭアゴニストが六価のＴＮＦＳＦ融合タンパク質を含む、実施態様１～３のいずれかに記載の方法。

実施態様５：六価のＴＮＦＳＦ融合タンパク質が、機能的な三価の受容体結合ドメインにフォールドされた３つのＴＮＦＳＦ－１４サブ配列を含み、サイレンシングされたＩｇＧ１ Ｆｃドメインを二量体化スキャフォールドとしてそのＣ末端に融合している一本鎖ポリペプチドを含む、実施態様４記載の方法。

実施態様６：ＨＶＥＭアゴニストがＨＶＥＭに結合するアゴニスト抗体である、実施態様１～５のいずれかに記載の方法。

実施態様７：ＨＶＥＭアゴニストがＨＶＥＭに結合するモノクローナル抗体の単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である、実施態様１～６のいずれかに記載の方法。

実施態様８：対象が追加的な免疫賦活性物質を投与されていない、実施態様１～７のいずれかに記載の方法。

実施態様９：対象がＴＮＦＳＦ刺激性物質、ＴＮＦＳＦ抑制性物質またはそれらの組合せを投与されていない、実施態様１～８のいずれかに記載の方法。

実施態様１０：対象がｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、ＣＤ４０アゴニスト、ＣＤ２７アゴニスト、ＭＤＡ５アゴニスト、ヌクレオチド結合オリゴマー化ドメイン含有タンパク質（ＮＯＤ）、またはそれらの組合せを投与されていない、実施態様１～９のいずれかに記載の方法。

実施態様１１：対象が、神経細胞アポトーシス抑制タンパク質（ＮＡＩＰ）中に存在するドメイン、ＩＩ型トランス活性化因子（ＣＩＩＴＡ）中に存在するドメイン、ヒドロキシエイコサテトラエン酸（ＨＥＴ－Ｅ）中に存在するドメイン、ＴＰ－１（ＮＡＣＨＴ）－ロイシンリッチリピート中に存在するドメイン、ｎｏｄ様受容体（ＮＬＲ）アゴニスト中に存在するドメイン、ＲＩＧ様ヘリカーゼ（ＲＬＨ）アゴニスト、サイトカイン／ケモカイン受容体アゴニスト、プリン受容体アゴニスト、またはそれらの組合せを投与されていない、実施態様１～１０のいずれかに記載の方法。

実施態様１２：ワクチンがＤＮＡワクチンまたは遺伝子ワクチンではない、実施態様１～１１のいずれかに記載の方法。

実施態様１３：ワクチンが、がんワクチン、抗腫瘍ワクチンまたは腫瘍上の標的に対するワクチンを含まない、実施態様１～１２のいずれかに記載の方法。

実施態様１４：ワクチンが感染性物質に対するワクチンである、実施態様１～１３のいずれかに記載の方法。

実施態様１５：ワクチンが、ウイルス、細菌またはそれらの組合せに対するワクチンである、実施態様１～１４のいずれかに記載の方法。

実施態様１６：Ｆｃガンマ受容体ＩＶ結合抗体の産生を誘発する、実施態様１～１５のいずれかに記載の方法。

実施態様１７：対象において感染性物質のワクチンに対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）抗体応答を優先的に増強する方法であって、ワクチンを受けている対象にＡＤＣＣ抗体応答を増強するのに有効な量の腫瘍壊死因子スーパーファミリー１４（ＴＮＦＳＦ）タンパク質を投与することを含む、方法。

実施態様１８：中和抗体応答を誘発する感染性物質のワクチンの抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を増強する方法であって、感染性物質のワクチンを受けている対象に対象のＡＤＣＣ活性を増強するのに有効な量のＴＮＦＳＦ－１４タンパク質を投与することを含む、方法。

実施態様１９：感染性物質のワクチン、および中和抗体応答よりも抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）抗体応答を増強するのに有効な量のヘルペスウイルスエントリーメディエーター（ＨＶＥＭ）アゴニストを含む組成物。

実施態様２０：ＨＶＥＭアゴニストがＴＮＦスーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）タンパク質を含む、実施態様１９記載の組成物。

実施態様２１：ＨＶＥＭアゴニストが六価のＴＮＦＳＦ融合タンパク質である、実施態様１９または２０に記載の組成物。

実施態様２２：六価のＴＮＦＳＦ融合タンパク質が、機能的な三価の受容体結合ドメインにフォールドされた３つのＴＮＦＳＦ－１４サブ配列を含み、サイレンシングされたＩｇＧ１ Ｆｃドメインを二量体化スキャフォールドとしてそのＣ末端に融合している一本鎖ポリペプチドを含む、実施態様１９～２１のいずれかに記載の組成物。

実施態様２３：ＨＶＥＭアゴニストがＨＶＥＭに結合するアゴニスト抗体である、実施態様１９～２２のいずれかに記載の組成物。

実施態様２４：ＨＶＥＭアゴニストがＨＶＥＭに結合するモノクローナル抗体の単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である、実施態様１９～２３のいずれかに記載の組成物。

実施態様２５：以下を含む、ワクチン応答を増強するためのキット：
（ｉ）ある量のＨＶＥＭアゴニスト；および
（ｉｉ）ある量の感染性物質のワクチン。

実施態様２６：ＨＶＥＭアゴニストが六価の腫瘍壊死因子スーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）融合タンパク質である、実施態様２５記載のキット。

実施態様２７：六価のＴＮＦＳＦ融合タンパク質が、機能的な三価の受容体結合ドメインにフォールドされた３つのＴＮＦＳＦ－１４サブ配列を含み、サイレンシングされたＩｇＧ１ Ｆｃドメインを二量体化スキャフォールドとしてそのＣ末端に融合している一本鎖ポリペプチドを含む、実施態様２５または２６に記載のキット。

実施態様２８：ＨＶＥＭアゴニストがＨＶＥＭに結合するアゴニスト抗体である、実施態様２５～２７のいずれかに記載のキット。

実施態様２９：ＨＶＥＭアゴニストがＨＶＥＭに結合するアゴニストモノクローナル抗体の単鎖可変フラグメントである、実施態様２５～２８のいずれかに記載のキット。

実施態様３０：自己免疫疾患を有する対象において自己抗原のＦｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）介在性死滅を減少または遮断する方法であって、対象におけるＦｃγＲ介在性死滅を減少または遮断するのに有効な量のＨＶＥＭアンタゴニスト、可溶性単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質Ｄ、ＨＶＥＭに結合する抗体、またはそれらの組合せを対象に投与することを含む、方法。

実施態様３１：自己免疫疾患を有する対象において自己抗原のＦｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）介在性死滅を遮断する方法であって、対象の自己免疫疾患を軽減するのに有効な量のＨＶＥＭアンタゴニスト、可溶性単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質Ｄ、ＨＶＥＭに結合する抗体、またはそれらの組合せを対象に投与することを含む、方法。

実施態様３２：可溶性ＨＳＶ糖タンパク質Ｄが、ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄ、ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄ、またはそれらの組合せを含む、実施態様３０または３１に記載の方法。

参考文献
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Claims (32)

1. 対象において感染性物質のワクチンに対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）抗体応答を優先的に増強する方法であって、ワクチンを受けている対象に対象のＡＤＣＣ抗体応答を増強するのに有効な量のヘルペスウイルスエントリーメディエーター（ＨＶＥＭ）アゴニスト、腫瘍壊死因子スーパーファミリー１４（ＴＮＦＳＦ－１４）アゴニストまたはそれらの組合せを投与することを含む、方法。
2. 中和抗体応答を誘発する感染性物質のワクチンの抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を増強する方法であって、感染性物質のワクチンを受けている対象に対象のＡＤＣＣ活性を増強するのに有効な量のヘルペスウイルスエントリーメディエーター（ＨＶＥＭ）アゴニスト、腫瘍壊死因子スーパーファミリー１４（ＴＮＦＳＦ－１４）アゴニストまたはそれらの組合せを投与することを含む、方法。
3. ＨＶＥＭアゴニストがＴＮＦＳＦ－１４タンパク質またはその一部を含む、請求項１または２に記載の方法。
4. ＨＶＥＭアゴニストが六価のＴＮＦＳＦ融合タンパク質を含む、請求項１～３のいずれかに記載の方法。
5. 六価のＴＮＦＳＦ融合タンパク質が、機能的な三価の受容体結合ドメインにフォールドされた３つのＴＮＦＳＦ－１４サブ配列を含み、サイレンシングされたＩｇＧ１ Ｆｃドメインを二量体化スキャフォールドとしてそのＣ末端に融合している一本鎖ポリペプチドを含む、請求項４記載の方法。
6. ＨＶＥＭアゴニストがＨＶＥＭに結合するアゴニスト抗体である、請求項１～５のいずれかに記載の方法。
7. ＨＶＥＭアゴニストがＨＶＥＭに結合するモノクローナル抗体の単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である、請求項１～６のいずれかに記載の方法。
8. 対象が追加的な免疫賦活性物質を投与されていない、請求項１～７のいずれかに記載の方法。
9. 対象がＴＮＦＳＦ刺激性物質、ＴＮＦＳＦ抑制性物質またはそれらの組合せを投与されていない、請求項１～８のいずれかに記載の方法。
10. 対象がｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、ＣＤ４０アゴニスト、ＣＤ２７アゴニスト、ＭＤＡ５アゴニスト、ヌクレオチド結合オリゴマー化ドメイン含有タンパク質（ＮＯＤ）、またはそれらの組合せを投与されていない、請求項１～９のいずれかに記載の方法。
11. 対象が、神経細胞アポトーシス抑制タンパク質（ＮＡＩＰ）中に存在するドメイン、ＩＩ型トランス活性化因子（ＣＩＩＴＡ）中に存在するドメイン、ヒドロキシエイコサテトラエン酸（ＨＥＴ－Ｅ）中に存在するドメイン、ＴＰ－１（ＮＡＣＨＴ）－ロイシンリッチリピート中に存在するドメイン、ｎｏｄ様受容体（ＮＬＲ）アゴニスト中に存在するドメイン、ＲＩＧ様ヘリカーゼ（ＲＬＨ）アゴニスト、サイトカイン／ケモカイン受容体アゴニスト、プリン受容体アゴニスト、またはそれらの組合せを投与されていない、請求項１～１０のいずれかに記載の方法。
12. ワクチンがＤＮＡワクチンまたは遺伝子ワクチンではない、請求項１～１１のいずれかに記載の方法。
13. ワクチンが、がんワクチン、抗腫瘍ワクチンまたは腫瘍上の標的に対するワクチンを含まない、請求項１～１２のいずれかに記載の方法。
14. ワクチンが感染性物質に対するワクチンである、請求項１～１３のいずれかに記載の方法。
15. ワクチンが、ウイルス、細菌またはそれらの組合せに対するワクチンである、請求項１～１４のいずれかに記載の方法。
16. Ｆｃガンマ受容体ＩＶ結合抗体の産生を誘発する、請求項１～１５のいずれかに記載の方法。
17. 対象において感染性物質のワクチンに対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）抗体応答を優先的に増強する方法であって、ワクチンを受けている対象にＡＤＣＣ抗体応答を増強するのに有効な量の腫瘍壊死因子スーパーファミリー１４（ＴＮＦＳＦ）タンパク質を投与することを含む、方法。
18. 中和抗体応答を誘発する感染性物質のワクチンの抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を増強する方法であって、感染性物質のワクチンを受けている対象に対象のＡＤＣＣ活性を増強するのに有効な量のＴＮＦＳＦ－１４タンパク質を投与することを含む、方法。
19. 感染性物質のワクチン、および中和抗体応答よりも抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）抗体応答を増強するのに有効な量のヘルペスウイルスエントリーメディエーター（ＨＶＥＭ）アゴニストを含む組成物。
20. ＨＶＥＭアゴニストがＴＮＦスーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）タンパク質を含む、請求項１９記載の組成物。
21. ＨＶＥＭアゴニストが六価のＴＮＦＳＦ融合タンパク質である、請求項１９または２０に記載の組成物。
22. 六価のＴＮＦＳＦ融合タンパク質が、機能的な三価の受容体結合ドメインにフォールドされた３つのＴＮＦＳＦ－１４サブ配列を含み、サイレンシングされたＩｇＧ１ Ｆｃドメインを二量体化スキャフォールドとしてそのＣ末端に融合している一本鎖ポリペプチドを含む、請求項１９～２１のいずれかに記載の組成物。
23. ＨＶＥＭアゴニストがＨＶＥＭに結合するアゴニスト抗体である、請求項１９～２２のいずれかに記載の組成物。
24. ＨＶＥＭアゴニストがＨＶＥＭに結合するモノクローナル抗体の単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である、請求項１９～２３のいずれかに記載の組成物。
25. 以下を含む、ワクチン応答を増強するためのキット：
    （ｉ）ある量のＨＶＥＭアゴニスト；および
    （ｉｉ）ある量の感染性物質のワクチン。
26. ＨＶＥＭアゴニストが六価の腫瘍壊死因子スーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）融合タンパク質である、請求項２５記載のキット。
27. 六価のＴＮＦＳＦ融合タンパク質が、機能的な三価の受容体結合ドメインにフォールドされた３つのＴＮＦＳＦ－１４サブ配列を含み、サイレンシングされたＩｇＧ１ Ｆｃドメインを二量体化スキャフォールドとしてそのＣ末端に融合している一本鎖ポリペプチドを含む、請求項２５または２６に記載のキット。
28. ＨＶＥＭアゴニストがＨＶＥＭに結合するアゴニスト抗体である、請求項２５～２７のいずれかに記載のキット。
29. ＨＶＥＭアゴニストがＨＶＥＭに結合するアゴニストモノクローナル抗体の単鎖可変フラグメントである、請求項２５～２８のいずれかに記載のキット。
30. 自己免疫疾患を有する対象において自己抗原のＦｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）介在性死滅を減少または遮断する方法であって、対象におけるＦｃγＲ介在性死滅を減少または遮断するのに有効な量のＨＶＥＭアンタゴニスト、可溶性単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質Ｄ、ＨＶＥＭに結合する抗体、またはそれらの組合せを対象に投与することを含む、方法。
31. 自己免疫疾患を有する対象において自己抗原のＦｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）介在性死滅を遮断する方法であって、対象の自己免疫疾患を軽減するのに有効な量のＨＶＥＭアンタゴニスト、可溶性単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）糖タンパク質Ｄ、ＨＶＥＭに結合する抗体、またはそれらの組合せを対象に投与することを含む、方法。
32. 可溶性ＨＳＶ糖タンパク質Ｄが、ＨＳＶ－１糖タンパク質Ｄ、ＨＳＶ－２糖タンパク質Ｄ、またはそれらの組合せを含む、請求項３０または３１に記載の方法。

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