JP2022188416A

JP2022188416A - Bifidobacteria growth promoter containing acetic bacteria as active ingredient

Info

Publication number: JP2022188416A
Application number: JP2021096423A
Authority: JP
Inventors: 大地梶山; Daichi Kajiyama; 翔子稲見; Shoko Inami
Original assignee: QP Corp
Current assignee: Kewpie Corp
Priority date: 2021-06-09
Filing date: 2021-06-09
Publication date: 2022-12-21

Abstract

To provide a bifidobacteria growth promoter.SOLUTION: The present invention provides a bifidobacteria growth promoter containing acetic bacteria as an active ingredient.SELECTED DRAWING: None

Description

本発明は、酢酸菌を有効成分として含有するビフィズス菌増殖促進剤に関する。 TECHNICAL FIELD The present invention relates to a bifidobacterium growth promoter containing acetic acid bacteria as an active ingredient.

酢酸菌は、醸造酢の生産に用いられる、乳酸菌、ビフィズス菌、麹菌、酵母に並ぶ発酵微生物である。
その有用性から、近年、生理機能研究が進んでおり、例えば、酢酸菌由来のアルデヒドデヒドロゲナーゼを活用して、アルデヒドを除去できること（特許文献１）や、酢酸菌体に含まれる糖脂質が花粉症等のアレルギー疾患を予防する効果があること（特許文献２）が報告されている。
しかしながら、酢酸菌の生理機能については未だ解明されていないものも多く、本発明のビフィズス菌増殖促進作用については全く知られていない。 Acetobacter is a fermenting microorganism along with lactic acid bacteria, bifidobacteria, koji molds, and yeasts used for the production of brewed vinegar.
Due to its usefulness, physiological function research has progressed in recent years. It has been reported that there is an effect of preventing allergic diseases such as (Patent Document 2).
However, many of the physiological functions of acetic acid bacteria have not yet been elucidated, and the effect of the present invention on promoting the growth of bifidobacteria is completely unknown.

国際公開第２０１１／１４５５１８号WO2011/145518 特開２０１３－１８０９６３号公報JP 2013-180963 A

ところで、ビフィズス菌は、酢酸や酪酸等の短鎖脂肪酸を産生し腸内ｐＨを低下させ、善玉菌として腸内環境を整え、免疫バランスの維持に働くことが知られている。また、ビフィズス菌は加齢に伴い減少することが知られている。
これらのことから、特に昨今の高齢者社会においては、効率的なビフィズス菌増殖促進因子の開発が求められている。 By the way, bifidobacteria are known to produce short-chain fatty acids such as acetic acid and butyric acid, lower the intestinal pH, improve the intestinal environment as beneficial bacteria, and maintain immune balance. Moreover, bifidobacteria are known to decrease with aging.
For these reasons, the development of an efficient bifidobacterium growth-promoting factor is required, especially in today's aging society.

そこで、本発明の目的は、酢酸菌を含有するだけで、ビフィズス菌の増殖を促進させるビフィズス菌増殖促進剤を提供するものである。 Accordingly, an object of the present invention is to provide a bifidobacterium growth-promoting agent that promotes the growth of bifidobacteria simply by containing acetic acid bacteria.

本発明者らが鋭意研究を重ねた結果、偏性嫌気性菌のビフィズス菌の培養時に、嫌気性下では生きられない偏性好気性菌の酢酸菌を配合したところ、意外にもビフィズス菌が増殖促進されることを見出し、本発明を完成するに至った。
つまり、本願発明は、
（１）酢酸菌を有効成分として含有する、
ビフィズス菌増殖促進剤、
である。 As a result of extensive research by the present inventors, when culturing the obligate anaerobic bacterium Bifidobacterium, when acetic acid bacteria, an obligate aerobic bacterium that cannot survive under anaerobic conditions, was added, surprisingly, Bifidobacterium The inventors have found that the growth is promoted, and have completed the present invention.
In other words, the present invention
(1) containing acetic acid bacteria as an active ingredient,
Bifidobacterium growth promoter,
is.

本発明によれば、酢酸菌を含有することで、ビフィズス菌の増殖を促進させるビフィズス菌増殖促進剤を提供できる。 ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, the bifidobacterium proliferation promoter which promotes the proliferation of bifidobacteria can be provided by containing an acetic acid bacterium.

以下、本発明を詳細に説明する。
なお、本発明において、「％」は「質量％」を意味する。 The present invention will be described in detail below.
In addition, in this invention, "%" means "mass %."

＜本発明の特徴＞
本発明のビフィズス菌増殖促進剤は、酢酸菌を含有することで、ビフィズス菌の増殖を促進させることに特徴を有する。
また、同一又は対応する特別な技術的特徴を有した発明として、酢酸菌を添加することを特徴とする、ビフィズス菌増殖促進方法とすることができる。 <Characteristics of the present invention>
The bifidobacterium growth promoter of the present invention is characterized by promoting the growth of bifidobacteria by containing acetic acid bacteria.
Moreover, as an invention having the same or corresponding special technical features, a method for promoting the growth of bifidobacteria, characterized by adding acetic acid bacteria, can be provided.

＜ビフィズス菌＞
本発明に用いるビフィズス菌は、代表的なビフィズス菌の種類として、ビフィドバクテリウム・ビフィダム、ビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム、ビフィドバクテリウム・アドレッセンティス、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・インファンティス等を挙げることができる。特に、本発明の効果を発揮し易いことから、ビフィドバクテリウム・ビフィダム又はビフィドバクテリウム・ロンガムを用いるとよい。 <Bifidobacterium>
Bifidobacterium used in the present invention includes representative types of bifidobacteria such as Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium, Bifidobacterium adolescentis, and Bifidobacterium. breve, Bifidobacterium infantis and the like. In particular, it is preferable to use Bifidobacterium bifidum or Bifidobacterium longum because the effects of the present invention are easily exhibited.

＜酢酸菌＞
本発明に用いる酢酸菌は、代表的な酢酸菌の種類として、グルコンアセトバクタ－（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）属、アセトバクタ－（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）属、グルコノバクター（Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ）属等を挙げることができる。
特に、本発明の効果を発揮し易いことから、グルコンアセトバクター属の酢酸菌を用いるとよい。
グルコンアセトバクター属の菌としては例えば、グルコンアセトバクター・コンブチャ（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｋｏｍｂｕｃｈａe）、グルコンアセトバクター・スウィングシ（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｓｗｉｎｇｓｉｉ）、グルコンアセトバクター・キシリヌス（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｘｙｌｉｎｕｓ）、グルコンアセトバクター・ユーロペウス（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｅｕｒｏｐａｅｕｓ）、グルコンアセトバクター・マルタセティ（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｍａｌｔａｃｅｔｉ）、グルコンアセトバクター・ハンゼニイ（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｈａｎｓｅｎｉｉ）、及びグルコンアセトバクター・リックウェフェシエンス（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）等をあげることができる。
さらに、グルコンアセトバクター属の酢酸菌の中でも、グルコンアセトバクター・コンブチャ、グルコンアセトバクター・スウィングシ、グルコンアセトバクター・キシリヌス、グルコンアセトバクター・ユーロペウス、グルコンアセトバクター・ハンゼニイ及びグルコンアセトバクター・マルタセティ等の１種又は２種以上を用いるとよく、特にグルコンアセトバクター・ハンゼニイを用いるとよい。
なお、酢酸菌の生死は問わないが、菌体の扱いやすさの点で、死菌を用いるとよい。 <Acetic acid bacteria>
The acetic acid bacteria used in the present invention include representative types of acetic acid bacteria, such as the genus Gluconacetobacter, the genus Acetobacter, and the genus Gluconobacter.
In particular, it is preferable to use acetic acid bacteria belonging to the genus Gluconacetobacter because the effects of the present invention are easily exhibited.
Examples of bacteria of the genus Gluconacetobacter include, for example, Gluconacetobacter kombuchae, Gluconacetobacter swingsii, Gluconacetobacter xylinus, Gluconacetobacter europeaceus , Gluconacetobacter maltaceti, Gluconacetobacter hansenii, and Gluconacetobacter liquefaciens.
Furthermore, among the acetic acid bacteria of the genus Gluconacetobacter, gluconacetobacter kombucha, gluconacetobacter swingsi, gluconacetobacter xylinus, gluconacetobacter europeus, gluconacetobacter hanzenii, gluconacetobacter maltaceti, etc. It is preferable to use one or more kinds, and it is particularly preferable to use Gluconacetobacter hanzenii.
It does not matter whether the acetic acid bacteria are alive or dead.

＜酢酸菌の調製方法＞
酢酸菌の調製方法は、特に限定されないが、醸造酢製造の常法に基づき発酵により調製すればよい。
常法に基づけば、酢酸菌体が０．００１～０．０１％に増殖して、酢酸を４～２０％と高濃度に生成し、この他に、アミノ酸や多糖類等を生成する。 <Method for preparing acetic acid bacteria>
A method for preparing acetic acid bacteria is not particularly limited, but it may be prepared by fermentation based on a conventional method for producing brewed vinegar.
According to a conventional method, acetic acid bacteria grow to 0.001-0.01%, produce acetic acid at a high concentration of 4-20%, and produce amino acids, polysaccharides, and the like.

＜酢酸菌とビフィズス菌の菌体数割合＞
本発明において、ビフィズス菌増殖促進効果が得られ易いことから、酢酸菌添加時の酢酸菌とビフィズス菌の菌体数割合は、１０^７：１～１０^－２：１とするとよく、さらに１０^６：１～１：１とするとよく、さらに１０^４：１～５００：１とするとよい。
また、本発明において、費用対ビフィズス菌増殖促進効果が得られ易いことから、酢酸菌添加時の酢酸菌数については、１０^４ｃｆｕ／ｍＬ以上１０^１５ｃｆｕ／ｍＬ以下とするよく、さらに１０^５ｃｆｕ／ｍＬ以上１０^１３ｃｆｕ／ｍＬ以下とするとよく、さらに１０^６ｃｆｕ／ｍＬ以上１０^１２ｃｆｕ／ｍＬ以下とするとよい。
また、本発明において、費用対ビフィズス菌増殖促進効果が得られ易いことから、酢酸菌添加時のビフィズス数については、１０^２ｃｆｕ／ｍＬ以上１０^１２ｃｆｕ／ｍＬ以下とするよく、さらに１０^３ｃｆｕ／ｍＬ以上１０^１１ｃｆｕ／ｍＬ以下とするとよく、さらに１０^６ｃｆｕ／ｍＬ以上１０^１０ｃｆｕ／ｍＬ以下とするとよい。 <Percentage of bacterial cells of acetic acid bacteria and bifidobacteria>
In the present invention, since the effect of promoting the growth of bifidobacteria is easily obtained, the ratio of the number of acetic acid bacteria and bifidobacteria when acetic acid bacteria are added is preferably 10 ⁷ : 1 to 10 ^-2 : 1, and further 10 ⁶ :1 to 1:1, more preferably 10 ⁴ :1 to 500:1.
In addition, in the present invention, since the effect of promoting the growth of bifidobacteria against cost is easily obtained, the number of acetic acid bacteria when adding acetic acid bacteria is preferably 10 ⁴ cfu/mL or more and 10 ¹⁵ cfu/mL or less, and further 10 ⁵ It is preferably cfu/mL or more and 10 ¹³ cfu/mL or less, and more preferably 10 ⁶ cfu/mL or more and 10 ¹² cfu/mL or less.
In addition, in the present invention, since the effect of promoting the growth of bifidobacteria against cost is easily obtained, the bifidobacteria number when acetic acid bacteria are added is preferably 10 ² cfu/mL or more and 10 ¹² cfu/mL or less, and further 10 ³ cfu. /mL or more and 10 ¹¹ cfu/mL or less, and more preferably 10 ⁶ cfu/mL or more and 10 ¹⁰ cfu/mL or less.

次に、本発明を実施例、比較例及び試験例に基づき、さらに説明する。なお、本発明はこれに限定するものではない。 Next, the present invention will be further described based on examples, comparative examples and test examples. However, the present invention is not limited to this.

［調製例１］（酢酸菌の調製方法）
エタノール４％、酵母エキス０．２％、及び清水９５．７％に酢酸菌グルコンアセトバクター・ハンゼニイ（ＮＢＲＣ１４８１７）０．１％を添加し、品温３０℃、通気量０．４Ｌ／ｍｉｎの条件で、４８時間培養を行った。
得られた酢酸菌溶液に遠心濃縮処理を施した後、培地を清水洗浄で除去し、１０％酢酸菌溶液を調製した。
次に、得られた１０％酢酸菌溶液を、凍結乾燥機（東京理化器械株式会社製）を用いて、真空度４０Ｐａ、棚温度６５℃で凍結乾燥し、粒径０．５～５μｍの酢酸菌粉末を調製した。最後に、得られた酢酸菌粉末を５０℃で加熱殺菌した。
なお、前述の酢酸菌粉末について、加熱処理前に菌体数を測定したところ、１．０×１０^９ｃｆｕ／ｍＬであった。 [Preparation Example 1] (Method for preparing acetic acid bacteria)
Add 0.1% of acetic acid bacterium gluconacetobacter hanzenii (NBRC14817) to 4% ethanol, 0.2% yeast extract, and 95.7% fresh water, condition of product temperature 30 ° C., aeration rate 0.4 L / min and cultured for 48 hours.
After subjecting the obtained acetic acid bacteria solution to centrifugal concentration treatment, the medium was removed by washing with fresh water to prepare a 10% acetic acid bacteria solution.
Next, the obtained 10% acetic acid bacteria solution is freeze-dried using a freeze dryer (manufactured by Tokyo Rikakikai Co., Ltd.) at a vacuum degree of 40 Pa and a shelf temperature of 65 ° C., and acetic acid having a particle size of 0.5 to 5 μm is dried. A fungal powder was prepared. Finally, the obtained acetic acid bacteria powder was heat sterilized at 50°C.
Regarding the acetic acid bacteria powder described above, the number of bacteria was measured before the heat treatment and found to be 1.0×10 ⁹ cfu/mL.

＜酢酸菌の菌体数測定方法＞
なお、DAPI染色して蛍光顕微鏡により計測するＤＡＰＩ染色法にて酢酸菌体数を測定した。以下、調整例、実施例、比較例及び試験例についても同様の方法で酢酸菌体数を測定した。 <Method for measuring the number of acetic acid bacteria>
In addition, the number of acetic acid bacteria was measured by the DAPI staining method in which the cells were stained with DAPI and counted with a fluorescence microscope. In the following preparation examples, examples, comparative examples and test examples, the number of acetic acid bacteria was measured in the same manner.

［調製例２］（酢酸菌の調製方法）
酢酸菌グルコンアセトバクター・コンブチャ（ＮＲＢＣ１４８１６）に変更した以外は、調製例１と同様の方法により、加熱殺菌した酢酸菌粉末を調製した。なお、前述の酢酸菌粉末について、加熱処理前に菌体数を測定したところ、１．０×１０^９ｃｆｕ／ｍＬであった。 [Preparation Example 2] (Method for preparing acetic acid bacteria)
A heat-sterilized acetic acid bacterium powder was prepared in the same manner as in Preparation Example 1, except that acetic acid bacterium gluconacetobacter kombucha (NRBC14816) was used. Regarding the acetic acid bacteria powder described above, the number of bacteria was measured before the heat treatment and found to be 1.0×10 ⁹ cfu/mL.

［実施例１］
ビフィズス菌は、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＢＲＣ１０００１５）を用いた。まず、１０％スキムミルクおよび０．５％酵母エキス培地（１００ｍＬ）に、調製例１の酢酸菌粉末を０．１％（菌体数：１．０×１０^６ｃｆｕ／ｍＬ）、ビフィズス菌を１％（菌数：７．４×１０^２ｃｆｕ／ｍＬ）になるように加え、嫌気条件で３７℃、２４時間培養した。
得られた培養液を適宜希釈し、ビフィズス菌の菌体数を測定したところ、菌数１．０×１０^７ｃｆｕ／ｍＬであった。 [Example 1]
Bifidobacterium bifidum (NBRC100015) was used as the bifidobacterium. First, in 10% skim milk and 0.5% yeast extract medium (100 mL), 0.1% of the acetic acid bacteria powder of Preparation Example 1 (cell count: 1.0 × 10 ⁶ cfu / mL), 1 of Bifidobacterium % (cell count: 7.4×10 ² cfu/mL) and cultured at 37° C. for 24 hours under anaerobic conditions.
The obtained culture solution was appropriately diluted, and the number of Bifidobacterium bacteria was measured, which was 1.0×10 ⁷ cfu/mL.

［試験例１］
酢酸菌によるビフィズス菌増殖促進効果を調べるため、実施例１の方法に準じて、表１に従って酢酸菌の配合条件を変更した以外は、実施例１の方法と同様にして、ビフィズス菌（ビフィドバクテリウム・ビフィダム）の培養後菌体数を測定した。 [Test Example 1]
In order to investigate the effect of acetic acid bacteria on promoting the growth of bifidobacteria, the same method as in Example 1 was performed except that the blending conditions of acetic acid bacteria were changed according to Table 1. Bacterium bifidum) was counted after culturing.

＜ビフィズス菌の菌体数測定方法＞
段落番号［００１８］に記載の２４時間培養液から１ｍＬ取り、適宜希釈してＢＬ培地に混釈し、嫌気的条件下で３７℃、７２時間以上培養し、菌体数を測定した。 <Method for measuring the number of bifidobacteria>
1 mL was taken from the 24-hour culture solution described in paragraph [0018], diluted appropriately, mixed in BL medium, cultured under anaerobic conditions at 37° C. for 72 hours or more, and the number of bacterial cells was measured.

［試験例１］
酢酸菌添加の有無による、ビフィズス菌増殖促進効果について調べるため、表１に従い、実施例１の方法に準じて、表１に従って酢酸菌の配合条件を変更し（比較例１、実施例２～３）、ビフィズス菌の培養後菌体数を測定した。
また、下記評価基準に従って、ビフィズス菌の増殖促進効果について評価した。 [Test Example 1]
In order to investigate the effect of promoting the growth of bifidobacteria depending on the presence or absence of the addition of acetic acid bacteria, the mixing conditions of acetic acid bacteria were changed according to Table 1 according to the method of Example 1 (Comparative Example 1, Examples 2 to 3 ), and the number of bacteria after culturing Bifidobacterium was measured.
In addition, the effect of promoting the growth of bifidobacteria was evaluated according to the following evaluation criteria.

［表１］

[Table 1]

なお、表１において、「ビフィズス菌の増殖促進効果」の評価基準は以下の通りである。
◎：比較例１の増殖試験後のビフィズス菌生菌数を１とした時の、実施例の増殖試験後のビフィズス菌増殖促進率が１００以上であり、ビフィズス菌の増殖促進効果に大変優れている。
〇：比較例１の増殖試験後のビフィズス菌生菌数を１とした時の、実施例の増殖試験後のビフィズス菌増殖促進率が１.５以上であり、ビフィズス菌の増殖促進効果に優れている。
×：比較例１の増殖試験後のビフィズス菌生菌数を１とした時の、実施例の増殖試験後のビフィズス菌増殖促進率が１.５未満であり、ビフィズス菌の増殖促進効果がほとんどない、または、ない。 In addition, in Table 1, the evaluation criteria for the "bifidobacterium proliferation promoting effect" are as follows.
◎: When the number of viable bifidobacteria after the growth test in Comparative Example 1 is 1, the bifidobacteria growth promotion rate after the growth test in the example is 100 or more, and the effect of promoting the growth of bifidobacteria is very excellent. there is
○: When the number of viable bifidobacteria after the growth test in Comparative Example 1 is 1, the bifidobacteria growth promotion rate after the growth test in the example is 1.5 or more, and the bifidobacteria growth promotion effect is excellent. ing.
×: When the number of viable bifidobacteria after the growth test in Comparative Example 1 is set to 1, the bifidobacterium growth promotion rate after the growth test of the example is less than 1.5, and the bifidobacterium growth promotion effect is almost No or no.

表１より、酢酸菌を含有すると、ビフィズス菌の増殖が促進されることが理解できる（実施例１、２）。 From Table 1, it can be understood that the inclusion of acetic acid bacteria promotes the growth of bifidobacteria (Examples 1 and 2).

［試験例２］
酢酸菌によるビフィズス菌増殖促進効果を調べるため、実施例１の方法に準じて、表２に従って酢酸菌の配合条件と培養時間を２４時間から１２時間に変更した以外は、実施例１の方法と同様にして、ビフィズス菌（ビフィドバクテリウム・ビフィダム）の培養後菌体数を測定した。
また、前述の評価基準に従って、ビフィズス菌の増殖促進効果について評価した。 [Test Example 2]
In order to investigate the effect of acetic acid bacteria on promoting the growth of bifidobacteria, the method of Example 1 was used, except that the mixing conditions of acetic acid bacteria and the culture time were changed from 24 hours to 12 hours according to Table 2 according to the method of Example 1. Similarly, the number of Bifidobacterium (Bifidobacterium bifidum) after culture was measured.
In addition, the effect of promoting the growth of Bifidobacterium was evaluated according to the aforementioned evaluation criteria.

［表２］

[Table 2]

表より、酢酸菌を含有すると、ビフィズス菌の増殖が促進されることが理解できる（実施例３、４）。

From the table, it can be understood that the inclusion of acetic acid bacteria promotes the growth of bifidobacteria (Examples 3 and 4).

Claims

containing acetic acid bacteria as an active ingredient,
Bifidobacterium growth promoter.