JP2022150099A - Composition for treatment of or improvement to male sterility and manufacturing method thereof - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、ラクトバチルス属菌（Lactobacillus）を用いた男性不妊の治療又は改善用組成物及びその製造方法等に関する。 TECHNICAL FIELD The present invention relates to a composition for treating or improving male infertility using Lactobacillus, a method for producing the same, and the like.
男性不妊の原因の１つとしてＥＤ（Erectile Dysfunction；勃起機能の低下が知られている。ＥＤとは男性の性行為において十分な勃起が得られないか、または維持できないために満足な性行為を行えない状態のことを指す。日本での勃起障害患者数は約1,000万人以上いると推計されており、約30％の夫婦においてＥＤの経験があると回答している。このため、男性不妊の治療や勃起機能の改善に有効な成分の探索が行われている（特許文献１）。 ED (Erectile Dysfunction) is known to be one of the causes of male infertility. It is estimated that there are more than 10 million erectile dysfunction patients in Japan, and about 30% of married couples have experienced ED. Ingredients effective for improving erectile function are being searched (Patent Document 1).
本発明は、男性不妊の治療又は改善用組成物を提供することを課題とする。 An object of the present invention is to provide a composition for treating or improving male infertility.
本発明者らは、ラクトバシラス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）SI-99を、オウギを含む培地で培養し、得られた菌体抽出物が精子数を増加させること等を見出し、さらに改良を重ねて本発明を完成させるに至った。 The present inventors cultured Lactobacillus plantarum SI-99 in a medium containing Astragalus japonicum, and found that the obtained bacterial cell extract increased the number of spermatozoa. I have completed my invention.
本発明は、例えば以下の項に記載の主題を包含する。
項１．
ラクトバチルス属菌を、
オウギ、ニラの種、枸杞子、仙茅、海馬、月季花、サンシュユ、補骨脂、甘草、鎖陽、巴戟天、肉桂、雪蓮花、杜仲、菟糸子、管花ニクジュヨウ、及び山芋からなる群より選択される少なくとも１種の基質とともに培養する工程を含む、男性不妊の治療又は改善用組成物の製造方法。
項２．
前記ラクトバチルス属菌が、ラクトバシラス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）、ラクトバチルス・アシドフィルス（Lactobacillus acidophilus）、ラクトバチルス・デルブルエッキイー（Lactobacillus delbrueckii）、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Lactobacillus helveticus）、ラクトバシラス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）、ラクトバチルス・カゼイ(Lactobacillus casei)、ラクトバチルス オータキエンシス（Lactobacillus otakiensis）、ラクトバチルス・キソネンシス（Lactobacillus kisonensis）、ラクトバチルス・スンキイ（Lactobacillus sunkii）、ラクトバチルス・デルブリッキィ 亜種 ブルガリクス（Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus）、ラクトバチルス・ラピ（Lactobacillus rapi）、ラクトバチルス・カルパス(Lactobacillus curvatus)、ラクトバシラス・サケイ（Lactobacillus. sakei）、ラクトバチラス‐ブレビス（Lactobacillus brevis）、ラクトバチルス ファーメンタム（Lactobacillus fermentum）及びラクトバチルス・ロイテリ（Lactobacillus reuteri）からなる群より選択される少なくとも１種である、項１に記載の製造方法。
項３．
前記ラクトバチルス属菌が、ラクトバシラス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）SI-99（特許生物寄託センター受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ－０３４２５）である、項１に記載の製造方法。
項４．
前記基質がオウギである、項１～３のいずれかに記載の製造方法。
項５．
さらに、前記ラクトバチルス菌体の抽出物を得る工程を含む、項１～４のいずれかに記載の製造方法。
項６．
ラクトバチルス属菌を、
オウギ、ニラの種、枸杞子、仙茅、海馬、月季花、サンシュユ、補骨脂、甘草、鎖陽、巴戟天、肉桂、雪蓮花、杜仲、菟糸子、管花ニクジュヨウ、及び山芋からなる群より選択される少なくとも１種の基質とともに培養した培養物を含む、男性不妊の治療又は改善用組成物。
項７．
ラクトバシラス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）SI-99（特許生物寄託センター受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ－０３４２５）である、乳酸菌。
The present invention encompasses subject matter described, for example, in the following sections.
Section 1.
Lactobacillus spp.
Consist of Astragalus, Chinese chive seeds, leek seeds, cinnamon, sage, hippocampus, moon flower, Japanese cornel, bone fat, licorice root, chain yang, bageten, cinnamon, snow lotus, eucommia, quince, tube flower cinnamon, and yam A method for producing a composition for treating or improving male infertility, comprising the step of culturing with at least one substrate selected from the group.
Section 2.
Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus salivarius salivarius, Lactobacillus casei, Lactobacillus otakiensis, Lactobacillus kisonensis, Lactobacillus sunkii, Lactobacillus delbrueckii subspecies Lactobacillus delbrueckii bulgaricus), Lactobacillus rapi, Lactobacillus curvatus, Lactobacillus. sakei, Lactobacillus brevis, Lactobacillus fermentum and Lactobacillus fermentum Item 2. The production method according to Item 1, wherein the strain is at least one selected from the group consisting of Lactobacillus reuteri.
Item 3.
Item 2. The production method according to Item 1, wherein the Lactobacillus genus is Lactobacillus plantarum SI-99 (Patent Organism Depositary Accession Number: NITE P-03425).
Section 4.
Item 4. The production method according to any one of items 1 to 3, wherein the substrate is Pangularia japonica.
Item 5.
Item 5. The production method according to any one of Items 1 to 4, further comprising a step of obtaining an extract of the Lactobacillus cells.
Item 6.
Lactobacillus spp.
Consist of Astragalus, Chinese chive seeds, leek seeds, cinnamon, sage, hippocampus, moon flower, Japanese cornel, bone fat, licorice root, chain yang, bageten, cinnamon, snow lotus, eucommia, quince, tube flower cinnamon, and yam A composition for treating or improving male infertility, comprising a culture cultured with at least one substrate selected from the group.
Item 7.
A lactic acid bacterium, which is Lactobacillus plantarum SI-99 (Patent Organism Depositary Accession Number: NITE P-03425).
男性不妊の治療又は改善用組成物が提供される。また、男性不妊の治療又は改善用組成物の製造方法が提供される。 A composition for treating or improving male infertility is provided. Also provided is a method for producing a composition for treating or improving male infertility.
以下、本発明に包含される各実施形態について、さらに詳細に説明する。
本発明は、ラクトバチルス属菌を後述する基質とともに培養する工程を含む、男性不妊の治療又は改善用組成物の製造方法を包含する。本明細書において、当該男性不妊の治療又は改善用組成物の製造方法を「本発明の製造方法」と表記することがある。
Each embodiment included in the present invention will be described in further detail below.
The present invention includes a method for producing a composition for treating or improving male infertility, comprising a step of culturing Lactobacillus with a substrate described below. In this specification, the method for producing the composition for treating or improving male infertility is sometimes referred to as "the production method of the present invention".
本発明に用いられるラクトバチルス属菌としては、例えば、ラクトバシラス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）、ラクトバチルス・アシドフィルス（Lactobacillus acidophilus）、ラクトバチルス・デルブルエッキイー（Lactobacillus delbrueckii）、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Lactobacillus helveticus）、ラクトバシラス・サリバリウス（Lactobacillus salivarius）、ラクトバチルス・カゼイ(Lactobacillus casei)、ラクトバチルス オータキエンシス（Lactobacillus otakiensis）、ラクトバチルス・キソネンシス（Lactobacillus kisonensis）、ラクトバチルス・スンキイ（Lactobacillus sunkii）、ラクトバチルス・デルブリッキィ 亜種 ブルガリクス（Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus）、ラクトバチルス・ラピ（Lactobacillus rapi）、ラクトバチルス・カルパス(Lactobacillus curvatus)、ラクトバシラス・サケイ（Lactobacillus. sakei）、ラクトバチラス‐ブレビス（Lactobacillus brevis）、ラクトバチルス ファーメンタム（Lactobacillus fermentum）、ラクトバチルス・ロイテリ（Lactobacillus reuteri）等が挙げられる。中でも、ラクトバシラス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）、ラクトバチルス・アシドフィルス（Lactobacillus acidophilus）が好ましく、ラクトバシラス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）がより好ましく、ラクトバシラス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）SI-99（特許生物寄託センター受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ－０３４２５）がさらに好ましい。
ラクトバチルス属菌は、１種単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。
Lactobacillus genus bacteria used in the present invention include, for example, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus helveticus ), Lactobacillus salivarius, Lactobacillus casei, Lactobacillus otakiensis, Lactobacillus kisonensis, Lactobacillus sunkii, Lactobacillus delbrueckii Subspecies Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus, Lactobacillus rapi, Lactobacillus curvatus, Lactobacillus sakei, Lactobacillus brevis, Lactobacillus brevis Mentum (Lactobacillus fermentum), Lactobacillus reuteri (Lactobacillus reuteri), etc. are mentioned. Among them, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus are preferred, Lactobacillus plantarum is more preferred, and Lactobacillus plantarum SI-99 (Patent Organism Depositary Accession Number: NITE P-03425) is more preferred.
Lactobacillus genus bacteria can be used individually by 1 type or in combination of 2 or more types.
本発明に用いられる基質としては、例えば、オウギ（黄耆）、ニラの種（Chinese chive seeds）、枸杞子（Lycium chinense）、仙茅（Curculigo orchioides）、海馬（Sea horse）、月季花（コウシンバラ、Rosa chinensis）、サンシュユ（ミズキ、コーネル、cornel）、補骨脂（ホコツシ、Psoralea corylifolia Linn）、甘草（カンゾウ、Glycyrrhiza）、鎖陽（Cynomorium songaricum）、巴戟天（ハゲキテン、Morinda）、肉桂（ニッケイ、Cinnamomum sieboldii）、雪蓮花（Saussurea medusa）、杜仲（トチュウ、Eucommia ulmoides）、菟糸子（トシシ、Cuscuta chinensis Lam）、管花ニクジュヨウ（Cistanche tubulose）、山芋等が挙げられる。中でも、オウギ（黄耆）が好ましく、オウギ（黄耆）乾燥葉がより好ましい。
基質は、１種単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。
Substrates used in the present invention include, for example, Astragalus (Astragalus membranaceus), Chinese chive seeds, Lycium chinense, Curculigo orchioides, Sea horse, and Chinese chive seeds. Rose (Rosa chinensis), Cornus (cornus, cornel, cornel), Psoralea corylifolia Linn, Licorice (Glycyrrhiza), Cynomorium songaricum, Bald vine (Morinda), Cinnamon (Cinnamomum sieboldii), Saussurea medusa, Eucommia ulmoides, Cuscuta chinensis Lam, Cistanche tubulose, and yam. Among them, Astragalus Astragalus is preferred, and dried leaves of Astragalus Astragalus are more preferred.
Substrates can be used singly or in combination of two or more.
ラクトバチルス属菌を基質とともに培養する工程における、基質の配合量は、例えば、培地全量に対して、１～１０重量％程度とすることができる。当該範囲の上限または下限は、例えば、２、３、４、５、６、７、８、又は９重量％程度であってもよい。より具体的には、２～９重量％程度であってもよい。 In the step of culturing the Lactobacillus spp. together with the substrate, the amount of the substrate to be added can be, for example, about 1 to 10% by weight with respect to the total amount of the medium. The upper or lower limit of the range may be, for example, about 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, or 9% by weight. More specifically, it may be about 2 to 9% by weight.
ラクトバチルス属菌を基質とともに培養する工程における、ラクトバチルス属菌の配合量は、ラクトバチルス属菌が生育する限り、特に限定されず適宜設定することができる。例えば、培地全量に対して、ＯＤ６６０が８～１２程度の菌体懸濁液として、０．１～５体積％程度とすることができる。当該範囲の上限または下限は、例えば、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、又は４体積％程度であってもよい。より具体的には、０．２～４体積％程度であってもよい。 The amount of Lactobacillus in the step of culturing the Lactobacillus with the substrate is not particularly limited as long as the Lactobacillus can grow, and can be set as appropriate. For example, it can be about 0.1 to 5% by volume of a cell suspension having an OD660 of about 8 to 12 with respect to the total amount of the medium. The upper or lower limit of the range is, for example, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 2, 3, or 4 It may be on the order of volume %. More specifically, it may be about 0.2 to 4% by volume.
ラクトバチルス属菌を基質とともに培養する方法としては、特に限定されず、慣用の方法および条件を採用することができる。 The method for culturing the lactobacillus with the substrate is not particularly limited, and conventional methods and conditions can be employed.
ラクトバチルス属菌を基質とともに培養する工程において用いられる培地に含まれる成分としては、上述した基質の他、微生物の培養に一般的に用いられる成分が挙げられる。より具体的には、Ｄ－グルコース等の単糖類、オリゴ糖類、多糖類等の炭素源；アンモニウム塩、硝酸塩、肉エキス、酵母エキス、マルトエキス、ペプトン等の窒素源；塩化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、リン酸水素カリウム等の無機塩；ビタミン源；微量元素等が挙げられる。
培地のｐＨは、例えば、６．２～７．０程度とすることができる。例えば、６．３～６．８程度であってもよい。
培地は、１２１℃で１５分間オートクレーブ処理後冷却することができ、又１１５℃で２０分間オートクレーブ処理後冷却することもできる。より具体的には１２１℃で１５分間オートクレーブ処理後２５～３０℃程度まで冷却することもできる。
培養温度は、例えば、３０℃～３７℃程度とすることができる。
培養時間は、特に限定されないが、例えば、２４時間（１日）～１６８時間（７日）程度とすることができる。例えば、７２時間（３日）～１６８時間（７日）程度であってもよい。
培養は、必要に応じて攪拌、振盪、通気などを行うことができる。
Components contained in the medium used in the step of culturing Lactobacillus spp. with a substrate include components commonly used for culturing microorganisms, in addition to the substrates described above. More specifically, carbon sources such as monosaccharides such as D-glucose, oligosaccharides and polysaccharides; nitrogen sources such as ammonium salts, nitrates, meat extracts, yeast extracts, malt extracts and peptones; sodium chloride and sodium bicarbonate. , calcium carbonate, potassium hydrogen phosphate and the like; vitamin sources; trace elements;
The pH of the medium can be, for example, about 6.2 to 7.0. For example, it may be about 6.3 to 6.8.
The medium can be autoclaved at 121° C. for 15 minutes and then chilled, or it can be autoclaved at 115° C. for 20 minutes and then chilled. More specifically, it can be cooled to about 25 to 30°C after autoclaving at 121°C for 15 minutes.
The culture temperature can be, for example, about 30°C to 37°C.
The culture time is not particularly limited, but can be, for example, about 24 hours (1 day) to 168 hours (7 days). For example, it may be about 72 hours (3 days) to 168 hours (7 days).
Cultivation can be carried out with agitation, shaking, aeration, etc., as necessary.
ラクトバチルス属菌を基質とともに培養する工程は、例えば前培養と本培養の２段階で、培養を行うことができる。 The step of culturing the Lactobacillus genus bacteria with the substrate can be carried out, for example, in two steps, pre-culture and main culture.
前培養の培地に含まれる成分としては、微生物の培養に一般的に用いられる成分が挙げられる。より具体的には、Ｄ－グルコース等の単糖類、オリゴ糖類、多糖類等の炭素源；アンモニウム塩、硝酸塩、肉エキス、酵母エキス、マルトエキス、ペプトン等の窒素源；塩化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、リン酸水素カリウム等の無機塩；ビタミン源；微量元素等が挙げられる。
前培養の培地のｐＨは、例えば、６．２～７．０程度とすることができる。例えば、６．３～６．８程度であってもよい。
培地は、１２１℃で１５分間オートクレーブ処理後冷却することができ、又１１５℃で２０分間オートクレーブ処理後冷却することもできる。より具体的には１２１℃で１５分間オートクレーブ処理後２５～３０℃程度まで冷却することもできる。
前培養の温度は、例えば、３０℃～３７℃程度とすることができる。
前培養時間は、特に限定されないが、例えば、２４時間（１日）～１６８時間（７日）程度とすることができる。例えば、２４時間（１日）～７２時間（３日）程度であってもよい。
Components contained in the pre-culture medium include components commonly used for culturing microorganisms. More specifically, carbon sources such as monosaccharides such as D-glucose, oligosaccharides and polysaccharides; nitrogen sources such as ammonium salts, nitrates, meat extracts, yeast extracts, malt extracts and peptones; sodium chloride and sodium bicarbonate. , calcium carbonate, potassium hydrogen phosphate and the like; vitamin sources; trace elements;
The pH of the preculture medium can be, for example, about 6.2 to 7.0. For example, it may be about 6.3 to 6.8.
The medium can be autoclaved at 121° C. for 15 minutes and then chilled, or it can be autoclaved at 115° C. for 20 minutes and then chilled. More specifically, it can be cooled to about 25 to 30°C after autoclaving at 121°C for 15 minutes.
The pre-culture temperature can be, for example, about 30°C to 37°C.
The pre-culture time is not particularly limited, but can be, for example, about 24 hours (1 day) to 168 hours (7 days). For example, it may be about 24 hours (1 day) to 72 hours (3 days).
本発明の製造方法は、さらに集菌工程を含んでいてもよい。集菌する方法としては、特に限定されず、慣用の方法および条件を採用することができる。例えば、遠心分離等により集菌することができる。 The production method of the present invention may further include a bacterium collection step. The method for collecting bacteria is not particularly limited, and conventional methods and conditions can be adopted. For example, bacteria can be collected by centrifugation or the like.
本発明の製造方法は、さらに洗浄工程を含んでいてもよい。洗浄方法としては、特に限定されず、慣用の方法および条件を採用することができる。
洗浄には、例えば、滅菌脱塩水、精製水等を用いることができる。
洗浄回数は、特に限定されず、例えば、１～５回程度とすることができる。
The production method of the present invention may further include a washing step. The washing method is not particularly limited, and conventional methods and conditions can be employed.
For washing, for example, sterile demineralized water, purified water, or the like can be used.
The number of washings is not particularly limited, and can be, for example, about 1 to 5 times.
本発明の製造方法は、さらに滅菌工程を含んでいてもよい。滅菌方法としては、特に限定されず、慣用の方法および条件を採用することができる。例えば、１２１℃で１５分間オートクレーブ処理する方法などが挙げられる。 The production method of the present invention may further include a sterilization step. The sterilization method is not particularly limited, and conventional methods and conditions can be adopted. For example, there is a method of autoclaving at 121° C. for 15 minutes.
本発明の製造方法は、さらにラクトバチルス菌体抽出物を得る工程を含んでいてもよい。菌体抽出物を得る方法としては、特に限定されず、慣用の方法および条件を採用することができる。例えば、リゾチーム等を用いる方法、物理的破砕法等が挙げられる。
リゾチームの添加量としては、例えば、菌体懸濁液全量に対して、例えば、０．１％～１．０重量％程度とすることができる。リゾチームの添加後、１０～６０分程度反応させることによって、ラクトバチルス菌体抽出物を得ることができる。
The production method of the present invention may further include a step of obtaining a lactobacillus cell extract. The method for obtaining the cell extract is not particularly limited, and conventional methods and conditions can be employed. Examples thereof include a method using lysozyme and the like, a physical disruption method, and the like.
The amount of lysozyme to be added can be, for example, about 0.1% to 1.0% by weight with respect to the total amount of the cell suspension. A lactobacillus cell extract can be obtained by reacting for about 10 to 60 minutes after the addition of lysozyme.
本発明の製造方法は、さらに乾燥（粉末化）工程を含んでいてもよい。乾燥方法としては、特に限定されず、慣用の方法および条件を採用することができる。例えば、ドライスプレー法などが挙げられる。 The production method of the present invention may further include a drying (powdering) step. The drying method is not particularly limited, and conventional methods and conditions can be employed. For example, a dry spray method and the like can be mentioned.
本発明は、ラクトバチルス属菌を基質とともに培養した培養物を含む、男性不妊の治療又は改善用組成物をも包含する。本明細書において、当該男性不妊の治療又は改善用組成物を「本発明の組成物」と表記することがある。 The present invention also includes a composition for treating or improving male infertility comprising a culture of Lactobacillus with a substrate. In this specification, the composition for treating or improving male infertility is sometimes referred to as "the composition of the present invention".
本発明の組成物に含まれる、ラクトバチルス属菌を基質とともに培養した培養物の調製方法等については、上述した記載を援用することができる。 The above-mentioned description can be used for the preparation method of the culture in which the Lactobacillus genus is cultured together with the substrate, which is contained in the composition of the present invention.
本発明の組成物に含まれる、ラクトバチルス属菌を基質とともに培養した培養物としては、例えば、ラクトバチルス菌体の生菌体、死菌体、菌体抽出物、培養上清などが挙げられる。中でも、菌体抽出物であることが好ましい。菌体抽出物は、例えば、菌体の細胞質、細胞壁由来の物質を含むものであることが好ましい。 Examples of cultures obtained by culturing Lactobacillus with a substrate, which are contained in the composition of the present invention, include viable Lactobacillus cells, dead cells, cell extracts, culture supernatants, and the like. . Among them, a bacterial cell extract is preferable. The microbial cell extract preferably contains, for example, substances derived from the cytoplasm and cell wall of the microbial cells.
本発明の組成物中、ラクトバチルス属菌を基質とともに培養した培養物の含有量は、特に限定されず、１００重量％を限度として、適宜設定することができる。 In the composition of the present invention, the content of the culture obtained by culturing Lactobacillus spp. with the substrate is not particularly limited, and can be appropriately set within a limit of 100% by weight.
本発明の組成物は、ラクトバチルス属菌を基質とともに培養した培養物の他、さらに他の成分を含むことができる。当該他の成分としては、薬学的又は食品衛生学上許容される基剤、担体、添加剤（例えば溶剤、分散剤、乳化剤、緩衝剤、安定剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、抗酸化剤、保存剤、コーティング剤、着色料）、及び／又はその他食品として利用され得る成分・材料等が例示される。これらの成分は、１種単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。 The compositions of the present invention may contain other components in addition to the culture of Lactobacillus spp. grown with the substrate. Such other components include pharmaceutically or food hygienically acceptable bases, carriers, additives (for example, solvents, dispersants, emulsifiers, buffers, stabilizers, excipients, binders, disintegrants, lubricants, lubricants, antioxidants, preservatives, coating agents, coloring agents) and/or other ingredients and materials that can be used as foods. These components can be used individually by 1 type or in combination of 2 or more types.
本発明の組成物の形態は、特に限定されず、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、液剤、トローチ剤、ゼリー剤、注射剤、硬膏剤、エキス剤、坐剤、懸濁剤、チンキ剤、軟膏剤、パップ剤、点鼻剤、吸入剤、リニメント剤、ローション剤、エアゾール剤等が例示される。 The form of the composition of the present invention is not particularly limited, and tablets, pills, capsules, powders, fine granules, granules, liquids, troches, jellies, injections, plasters, extracts, and suppositories. , suspensions, tinctures, ointments, poultices, nasal drops, inhalants, liniments, lotions, aerosols and the like.
本発明の組成物は、ラクトバチルス属菌を基質とともに培養した培養物と、必要に応じて他の成分とを組み合わせて常法により調製することができる。 The composition of the present invention can be prepared by a conventional method by combining a culture obtained by culturing a bacterium belonging to the genus Lactobacillus with a substrate and, if necessary, other ingredients.
本発明の組成物は、例えば、食品組成物、医薬組成物等として用いることができる。
本発明の組成物によれば、後述する実施例に示すように、精子数の増加効果が奏される。このため、本発明の組成物は、精子数増加用組成物として好適である。
本発明の組成物によれば、後述する実施例に示すように、前立腺の肥大抑制効果が奏される。このため、本発明の組成物は、前立腺肥大抑制用組成物として好適である。
本発明の組成物によれば、後述する実施例に示すように、精子の直線運動の促進効果が奏される。このため、本発明の組成物は、精子の直線運動促進用組成物として好適である。
本発明の組成物によれば、後述する実施例に示すように、精子の奇形率の減少効果が奏される。このため、本発明の組成物は、精子の奇形率減少用組成物として好適である。
本発明の組成物によれば、後述する実施例に示すように、血漿テストステロン値の増加効果が奏される。このため、本発明の組成物は、テストステロン増加用組成物として好適である。
本発明の組成物によれば、後述する実施例に示すように、性腺（精巣・副性腺）成長促進効果が奏される。このため、本開示の組成物は、性腺（精巣・副性腺）成長促進用組成物として好適である。
本発明の組成物によれば、上述した効果が奏されることから、本発明の組成物は、男性不妊の治療又は改善用組成物として好適である。本発明の組成物によれば、上述した効果が奏されることから、本発明の組成物は、勃起機能の改善用組成物として好適である。
本発明の組成物によれば、男性の精力向上が期待される。本発明の組成物によれば、男性の夜立ち頻度の向上が期待される。本発明の組成物によれば、男性の夜立ちの持続時間向上が期待される。本発明の組成物によれば、男性の朝立ちの持続時間向上が期待される。本発明の組成物によれば、男性の陰茎勃起時の硬度向上が期待される。本発明の組成物によれば、男性の性交時の持続時間延長が期待される。
The composition of the present invention can be used, for example, as food compositions, pharmaceutical compositions and the like.
According to the composition of the present invention, the effect of increasing the number of spermatozoa is exhibited as shown in the examples described later. Therefore, the composition of the present invention is suitable as a composition for increasing sperm count.
The composition of the present invention exerts an effect of inhibiting prostate hypertrophy, as shown in Examples described later. Therefore, the composition of the present invention is suitable as a composition for inhibiting prostatic hyperplasia.
According to the composition of the present invention, the effect of promoting linear motility of spermatozoa is exhibited as shown in the examples described later. Therefore, the composition of the present invention is suitable as a composition for promoting linear motility of sperm.
According to the composition of the present invention, the effect of reducing the malformation rate of spermatozoa is exhibited, as shown in the examples described later. Therefore, the composition of the present invention is suitable as a composition for reducing sperm malformation rate.
The composition of the present invention exhibits an effect of increasing the plasma testosterone level, as shown in the examples below. Therefore, the composition of the present invention is suitable as a composition for increasing testosterone.
According to the composition of the present invention, the effect of promoting the growth of gonads (testis and accessory gonads) is exhibited, as shown in the examples described later. Therefore, the composition of the present disclosure is suitable as a gonadal (testis/paragonad) growth promoting composition.
Since the composition of the present invention exhibits the effects described above, the composition of the present invention is suitable as a composition for treating or improving male infertility. Since the composition of the present invention exhibits the effects described above, the composition of the present invention is suitable as a composition for improving erectile function.
The composition of the present invention is expected to improve male libido. The composition of the present invention is expected to improve the frequency of standing up at night in men. The composition of the present invention is expected to improve the duration of nighttime awakening in men. The composition of the present invention is expected to improve the duration of men's rising in the morning. The composition of the present invention is expected to improve the hardness of the penis during erection in men. The composition of the present invention is expected to extend the duration of sexual intercourse in men.
本発明の組成物を投与される対象としては、哺乳動物が好ましい。ヒトのみならず、非ヒト哺乳動物であってもよい。対象となるヒトとしては、例えば、男性不妊症のヒト、又はその疑いがあるヒト；勃起機能が低下しているヒト、又はその疑いがあるヒトなどが挙げられる。
また、非ヒト哺乳動物としては、例えばペット、家畜、実験動物等として飼育される哺乳動物などが例示される。このような非ヒト哺乳動物としては、例えば、イヌ、ネコ、サル、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウサギ、マウス、ラット、ラクダ、リャマ等が挙げられる。
Mammals are preferred subjects to which the composition of the present invention is administered. Not only humans but also non-human mammals may be used. Subject humans include, for example, humans with or suspected of having male infertility; humans with or suspected of having impaired erectile function.
Examples of non-human mammals include mammals raised as pets, domestic animals, experimental animals, and the like. Such non-human mammals include, for example, dogs, cats, monkeys, cows, horses, sheep, goats, pigs, rabbits, mice, rats, camels, llamas, and the like.
本発明の組成物の投与（摂取）量は、特に限定されず、投与する対象の年齢、体重、性別、症状の程度、投与方法等により決定される。 The administration (ingestion) amount of the composition of the present invention is not particularly limited, and is determined according to the age, body weight, sex, severity of symptoms, administration method, and the like of the subject to be administered.
本発明の組成物の投与方法としては、例えば、経口投与、及び非経口（例えば静脈、動脈、筋肉、皮下、腹腔、直腸、経皮、局所など）投与等が挙げられる。中でも、経口投与が好ましい。 Methods of administering the composition of the present invention include, for example, oral administration and parenteral (eg, intravenous, arterial, intramuscular, subcutaneous, peritoneal, rectal, transdermal, topical, etc.) administration. Among them, oral administration is preferred.
なお、本明細書において「含む」とは、「本質的にからなる」と、「からなる」をも包含する（The term "comprising" includes "consisting essentially of” and "consisting of."）。また、本発明は、本明細書に説明した構成要件を任意の組み合わせを全て包含する。 In this specification, the term "comprising" includes "consisting essentially of" and "consisting of." In addition, the present invention encompasses all arbitrary combinations of the constituent elements described herein.
また、上述した本発明の各実施形態について説明した各種特性（性質、構造、機能等）は、本発明に包含される主題を特定するにあたり、どのように組み合わせられてもよい。すなわち、本発明には、本明細書に記載される組み合わせ可能な各特性のあらゆる組み合わせからなる主題が全て包含される。 Also, the various characteristics (property, structure, function, etc.) described for each of the embodiments of the invention described above may be combined in any way to identify subject matter encompassed by the invention. That is, the invention encompasses all subject matter consisting of any and all possible combinations of the features described herein.
本発明の内容を以下の実施例を用いて具体的に説明する。しかし、本発明はこれらに何ら限定されるものではない。下記において、特に言及する場合を除いて、実験は大気圧及び常温条件下で行っている。また特に言及する場合を除いて、「％」は「重量％」を意味する。 The contents of the present invention will be specifically described using the following examples. However, the present invention is by no means limited to these. In the following, experiments are conducted under atmospheric pressure and normal temperature conditions, unless otherwise specified. In addition, "%" means "% by weight" unless otherwise specified.
次の通り、乳酸菌抽出物を製造した。 A lactic acid bacterium extract was prepared as follows.
１．保存菌株の復活
固体寒天培地を用いてLactobacillus plantarum SI-99（特許生物寄託センター受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ－０３４２５）の保存菌株を復活した。培地の各栄養成分および配合比率は次の通りとした。Ｄ－ブドウ糖 20g、ペプトン10g、肉エキス8.6g、 酵母エキス5g リン酸水素カリウム 2g、クエン酸３アンモニウム 2g、酢酸Na 5g、ツイン-80 1mL、 硫酸Mg 0.58g 硫酸Mn 0.25gおよび精製水/脱塩水1000mlからなる培地をpH6.5になるように調整し、寒天15gを加え、１２１℃で１５分間オートクレーブ処理後に寒天平板を作った。低温（－85℃）保存の菌株チューブを常温に15分放置して解凍、白金耳を用いて寒天平板に稙菌し、37℃のインキュベータにて48時間～72時間コロニーが形成できるまで培養した。
1. Restoration of Stock Strain A stock strain of Lactobacillus plantarum SI-99 (Patent Organism Depository Accession Number: NITE P-03425) was restored using a solid agar medium. Each nutrient component and blending ratio of the medium were as follows. D-glucose 20 g, peptone 10 g, meat extract 8.6 g, yeast extract 5 g, potassium hydrogen phosphate 2 g, triammonium citrate 2 g, Na acetate 5 g, Tween-80 1 mL, Mg sulfate 0.58 g Mn sulfate 0.25 g and purified water/dehydrated A medium consisting of 1000 ml of saline was adjusted to pH 6.5, 15 g of agar was added, and after autoclaving at 121° C. for 15 minutes, an agar plate was made. A strain tube stored at a low temperature (-85°C) was left at room temperature for 15 minutes to thaw, inoculated onto an agar plate using a platinum loop, and cultured in an incubator at 37°C for 48 to 72 hours until colonies formed. .
２．前培養
液体培地を用いて前培養を実施した。培地成分および配合割合は次の通りとした。Ｄ－ブドウ糖 20g、ペプトン10g、肉エキス8.6g、 酵母エキス5g リン酸水素カリウム 2g、クエン酸３アンモニウム 2g、酢酸Na 5g、ツイン-80 1mL、 硫酸Mg 0.58g 硫酸Mn 0.25gおよび精製水/脱塩水1000mlからなる培地をpH6.5になるように調整し、試験管に７ｍｌ分注して、１２１℃で１５分間オートクレーブ処理後に、上記１で得られた単一のコロニーを、白金耳を用いて稙菌し、37℃のインキュベータにて24時間～48時間静置培養を実施した。
2. Preculture Preculture was performed using a liquid medium. The medium components and mixing ratios were as follows. D-glucose 20 g, peptone 10 g, meat extract 8.6 g, yeast extract 5 g, potassium hydrogen phosphate 2 g, triammonium citrate 2 g, Na acetate 5 g, Tween-80 1 mL, Mg sulfate 0.58 g Mn sulfate 0.25 g and purified water/dehydrated A medium consisting of 1000 ml of salt water was adjusted to pH 6.5, 7 ml was dispensed into a test tube, autoclaved at 121°C for 15 minutes, and the single colony obtained in 1 above was isolated using a platinum loop. The strain was inoculated with the bacterium and statically cultured in an incubator at 37°C for 24 to 48 hours.
３．基質の準備
選別されたオウギ（黄耆）乾燥葉を粉砕し、60メッシュの篩を用いて篩過した。
3. Substrate preparation Selected Astragalus astragalus dried leaves were crushed and sieved using a 60-mesh sieve.
４．本培養
５L容量のジャーファメンターを用いて実施した。培地成分および配合割合は次の通りとした。Ｄ－ブドウ糖 60g、ペプトン30g、肉エキス25.8g、 酵母エキス15g リン酸水素カリウム 6g、クエン酸３アンモニウム 6g、酢酸Na 15g、ツイン-80 3mL、 硫酸Mg 1.74g 硫酸Mn 0.75g、上記３で準備した基質150gおよび精製水/脱塩水3000mlからなる培地をpH6.5になるように調整し、１２１℃で１５分間オートクレーブ処理後に25℃～30℃までに冷却して、上記２で得られた前培養液を、生育が最も良いものを４本（体積比0.5%～１％）選び、ジャーファメンターに注入し７２時間37℃で培養した。
4. The main culture was carried out using a 5-liter capacity jarfamenter. The medium components and mixing ratios were as follows. D-glucose 60g, peptone 30g, meat extract 25.8g, yeast extract 15g, potassium hydrogen phosphate 6g, triammonium citrate 6g, Na acetate 15g, Twin-80 3mL, Mg sulfate 1.74g, Mn sulfate 0.75g, prepared in 3 above A medium consisting of 150 g of the substrate and 3000 ml of purified water/demineralized water was adjusted to pH 6.5, autoclaved at 121° C. for 15 minutes, cooled to 25° C. to 30° C., and treated with the preform obtained in 2 above. Four cultures with the best growth (volume ratio 0.5% to 1%) were selected, poured into a jar and cultured at 37°C for 72 hours.
５．集菌
本培養終了後、遠心分離により菌体を回収する。遠心機の回転速度は6000ｒｐｍ～8000ｒｐｍで、15min～20min間遠心して、上澄みを捨て、菌体のみを回収した。
5. Bacteria collection After completion of the main culture, the cells are collected by centrifugation. The centrifuge was rotated at a speed of 6000 rpm to 8000 rpm for 15 to 20 minutes, the supernatant was discarded, and only the cells were collected.
６．洗浄
滅菌済の脱塩水（水：湿菌体重量＝10：1）を用いて、3回洗浄した。洗浄時の遠心機の回転速度と遠心時間は集菌時と同様で行った。
6. Washing Washing was performed three times using sterilized demineralized water (water: wet cell weight = 10:1). The speed of rotation of the centrifuge and the centrifugation time during washing were the same as those for harvesting.
７．加熱滅菌
洗浄後の菌泥に１：１の重量比で滅菌脱塩水を加えて懸濁した後に、１２１℃で１５分間オートクレーブ処理した。
7. Heat sterilization After suspending sterile demineralized water at a weight ratio of 1:1 to the sludge after washing, the suspension was autoclaved at 121°C for 15 minutes.
８．破砕
加熱滅菌済みの菌懸濁液に対して重量比が０．１％～１．０％になるようにリゾチーム粉末を加えて、攪拌しながら30分間溶解反応を行い、ドライスプレー缶を用いて乾燥させた。乾燥粉末に対して80メッシュの篩を用いて篩過した。
8. Crushing Lysozyme powder is added to the heat-sterilized bacterial suspension so that the weight ratio is 0.1% to 1.0%, and the mixture is dissolved for 30 minutes while stirring. dried. The dry powder was sieved using an 80 mesh sieve.
９．包装検品
篩かけた粉末を包装検品して、１００％の純粋菌末（乳酸菌抽出物）の製造が完了した。
9. Packaging inspection The sieved powder was packaged and inspected to complete the production of 100% pure bacterial powder (lactic acid bacteria extract).
得られた乳酸菌抽出物を用いて以下の実験を行った。 The following experiment was performed using the obtained lactic acid bacteria extract.
乳酸菌抽出物の雄性ラット性腺（睾丸・副睾丸）、副性腺（精嚢腺・前立腺）及び脳下垂体-性腺軸（HPG軸：視床下部-下垂体-性腺系、Hypothalamic-pituitary-gonadal axis）に及ぼす影響を検討した。
考察指標：睾丸・副睾丸・精嚢腺と前立腺の重量変化及び精子数の変化；テストステロン、ＬＨとＦＳＨのレベル変化を考察した。
Male rat gonad (testicle/epididymis), accessory gonad (seminal vesicle/prostate) and pituitary-gonadal axis (HPG axis: Hypothalamic-pituitary-gonadal axis) of lactic acid bacteria extract We examined the effect on
Consideration index: changes in testis, epididymis, seminal vesicle and prostate weights and sperm count; testosterone, LH and FSH levels changes.
一、実験材料と方法
（一）、材料
乳酸菌抽出物粉末
雄性ＳＤラット60匹
ＬＨ測定キット（和光シバヤギキット）、ＦＳＨ測定キット（ＡＢＮ キット）、テストステロン測定キット（ＣＡＹ キット）、ペニシリン、エーテルおよびその他の手術用器具等々。
1. Experimental materials and methods (1) Materials Lactobacillus extract powder 60 male SD rats LH measurement kit (Wako Shibayagi kit), FSH measurement kit (ABN kit), testosterone measurement kit (CAY kit), penicillin, ether and others surgical instruments, etc.
（二）、方法
１．乳酸菌抽出物の調製
乳酸菌抽出物（乾燥粉末を粉砕し32メッシュの篩を用いて篩過した）粉末を、滅菌水を用いて、12mg/ml と36mg/mlの懸濁液を調製した。
２．実験動物の準備
ＳＤラット６０匹（５週齢、体重110～120ｇ）を購入し、１週間飼育観察後去勢（両側の睾丸と副睾を切り取る）し、更に２週間飼育後、１０匹/群に群分けした。
去勢術：去勢予定のラット30匹を、エーテル麻酔、陰嚢消毒切開、睾丸を副睾丸と共に切除し、陰嚢内に8000IUのペニシリンを散布し、切り口はとめた。対照群の30匹は陰嚢を切開しペニシリン散布後とめるだけの偽手術を施した。
３．乳酸菌抽出物の懸濁液の投与
投与方法：経口、1日1回
投与量：低投与量群200mg/kg（12mg/ml 2.0ml）体重（人体推奨量の10倍）
高投与量群600g/kg（36mg/ml 2.0ml）体重（人体推奨量の30倍）
投与期間：４週間
試算基準：成人1.4g/日服用、人体重を70kgと、Rat体重を120gとした。
４．解剖・採血
採血：エーテルにて麻酔、腹腔を開き、胸大動脈より採血（10ml）、EDTAを用いて凝固、遠心分離（遠心速度3000rpm未満、30分）して血清を採集して、黄体形成ホルモン（LH）、卵胞刺激ホルモン（FSH）とテストステロン測定に用いた。LH、FSHとテストステロン測定はキットのマニュアルに従って行った。
臓器採集：精嚢腺、前立腺及び精巣を切り取り、重量を測った。
ラットの精子カウント方法：未去勢ラットの左側副睾丸を切り取り、20mlの無菌PBS液の容器に投入してはさみで切り崩した。ピンセットで睾丸組織を挟み、精子を十分洗い落とした後に37℃で30分孵化した。血球計算盤 (Burker-Turk)を使用して精子カウントを行った。
(2), Method 1. Preparation of Lactic Acid Bacteria Extract A suspension of 12 mg/ml and 36 mg/ml of lactic acid bacterium extract (dried powder was crushed and sieved using a 32-mesh sieve) powder was prepared using sterile water.
2. Preparation of Experimental Animals 60 SD rats (5 weeks old, body weight 110-120 g) were purchased, raised and observed for 1 week, castrated (both testicles and epididymides removed), further raised for 2 weeks, 10 rats/group. grouped into
Castration: 30 rats to be castrated were anesthetized with ether, sterilized scrotal incision, the testicles were excised together with the epididymis, 8000 IU of penicillin was sprayed into the scrotum, and the incision was closed. A control group of 30 rats underwent a sham operation, in which the scrotum was incised and penicillin sprayed and then stopped.
3. Administration of suspension of lactic acid bacteria extract Administration method: Oral, once a day Dosage: Low dose group 200mg/kg (12mg/ml 2.0ml) body weight (10 times the recommended human dose)
High dose group 600g/kg (36mg/ml 2.0ml) body weight (30 times the recommended human dose)
Administration period: 4 weeks Trial calculation criteria: 1.4 g/day dose for adults, human body weight of 70 kg, and rat body weight of 120 g.
4. Dissection and blood collection Blood collection: Anesthesia with ether, opening the abdominal cavity, collecting blood (10 ml) from the thoracic aorta, coagulating with EDTA, centrifuging (centrifugation speed less than 3000 rpm, 30 minutes) to collect serum, and luteinizing hormone (LH), follicle-stimulating hormone (FSH) and testosterone measurements. LH, FSH and testosterone measurements were performed according to the kit manual.
Organ Harvest: Seminal vesicles, prostate and testes were dissected and weighed.
Rat sperm counting method: The left epididymis of an uncastrated rat was cut off, put into a container of 20 ml sterile PBS solution, and cut open with scissors. The testicle tissue was pinched with tweezers, the sperm was thoroughly washed off, and then incubated at 37°C for 30 minutes. Sperm counts were performed using a hemocytometer (Burker-Turk).
ラット臓器重量比と精子数の結果を表１に示す。 Table 1 shows the results of rat organ weight ratio and sperm count.
（１）未去勢オスラットにおいて、低投与群と高投与群のいずれも精子数が有意に増加した。低投与群は11.5％増加（p＜0.05）、高投与群26.9％増加（p<0.05）した。このことから乳酸菌抽出物は、ラットの精子数を増加することが分かった。
（２）未去勢オスラットにおいて、精巣重量比、精巣上体重量比および精嚢腺重量比が共に、投与群の方が対照群に比べて大きかった。このことから乳酸菌抽出物が精巣および副精巣の成長を促進する効果があることが分かった。
（３）未去勢オスラットにおいて、前立腺重量比が、低投与群と高投与群ともに対照群より低値を示した。このことから、乳酸菌抽出物が前立腺肥大を抑制する効果があることが分かった。
（４）去勢ラットにおいて、精巣、精巣上体が除去されたために、精巣重量、精巣上体重量および精子数のデータはない。
（５）去勢ラットにおいて、精嚢腺が残っていても、精巣、精巣上体がないため、精嚢腺の発育が遅延であり、精嚢腺重量比が低値を示した。
(1) In uncastrated male rats, the sperm count was significantly increased in both the low dose group and the high dose group. The low dose group increased by 11.5% (p<0.05) and the high dose group increased by 26.9% (p<0.05). From this, it was found that the lactic acid bacteria extract increases the sperm count of rats.
(2) In uncastrated male rats, the testis weight ratio, epididymis weight ratio and seminal vesicle weight ratio were all greater in the administration group than in the control group. From this, it was found that the lactic acid bacteria extract has the effect of promoting the growth of testis and epididymis.
(3) In uncastrated male rats, the prostate weight ratio was lower than that of the control group in both the low dose group and the high dose group. From this, it was found that the lactic acid bacteria extract has an effect of suppressing prostatic hyperplasia.
(4) There are no testis weight, epididymis weight and sperm count data in castrated rats because the testes and epididymis were removed.
(5) In castrated rats, even though the seminal vesicles remained, the development of the seminal vesicles was delayed because there was no testis or epididymis, and the weight ratio of the seminal vesicles was low.
ラット血清中のテストステロン（Ｔ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）及び卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）濃度の結果を表２に示す。 Table 2 shows the results of testosterone (T), luteinizing hormone (LH) and follicle stimulating hormone (FSH) concentrations in rat serum.
（１）テストステロン（Ｔ）の血清濃度は、未去勢ラットの低投与量群（３０％増加）と高投与量群（６４．２３％増加）及び去勢ラットの低投与量群（９．９５％増加）と高投与量群（５０．２７％増加）のいずれも対照群に比べ高値を示し、有意差が認められた（P＜0.05）。雄性動物においては、精巣、精巣上体よりテストステロン（Ｔ）が分泌される以外に、副腎よりも分泌されることが知られている。
（２）ＬＨの血清濃度は、未去勢ラットの低投与量群（１９．９３％増加）と高投与量群（５９．９６％増加）において対照群に比べ高値を示し、有意差が認められた（P＜0.05）。去勢ラットの低投与量群においては対照群の値に近似、去勢ラットの高投与量群（１６．８８％低下）の値が対照群より低下し、有意差が認められた（P＜0.05）。
（３）ＦＳＨの血清濃度は、未去勢ラットの低投与量群（２０．０３％増加）と高投与量群（５０．０６％増加）において対照群に比べ高値を示し、有意差が認められた（P＜0.05）。去勢ラットの低投与量群と高投与量群の値がいずれも対照群の値と近似でした。
(1) Serum concentrations of testosterone (T) in the low dose group (30% increase) and high dose group (64.23% increase) in uncastrated rats and in the low dose group (9.95% increase) in castrated rats Both the high dose group (50.27% increase) and the high dose group (50.27% increase) showed higher values than the control group, and a significant difference was observed (P<0.05). In male animals, it is known that testosterone (T) is secreted not only by the testis and epididymis but also by the adrenal glands.
(2) Serum concentrations of LH were significantly higher in the low-dose group (19.93% increase) and high-dose group (59.96% increase) of uncastrated rats than in the control group. (P<0.05). The low dose group of castrated rats was similar to the control group, and the high dose group of castrated rats (16.88% decrease) was lower than the control group, showing a significant difference (P<0.05). .
(3) The serum concentration of FSH was higher in the low dose group (20.03% increase) and the high dose group (50.06% increase) of uncastrated rats than in the control group, and a significant difference was observed. (P<0.05). Both the low-dose and high-dose castrated rat values were similar to those of the control group.
以上のことから、乳酸菌抽出物は、未去勢オスラットの血清テストステロン（Ｔ）値、黄体形成ホルモン（ＬＨ）および卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）濃度を向上することが分かった。 From the above, it was found that the lactic acid bacteria extract improves serum testosterone (T) levels, luteinizing hormone (LH) and follicle stimulating hormone (FSH) levels in uncastrated male rats.
以下の方法に従ってSMAS装置による精子観察を行った。
方法：ラットの左側精巣上体を切り取り、10mlの無菌PBS液の容器に投入し、はさみで切り崩した。ピンセットで精巣組織を挟み、精子を十分洗い落とし、温水浴槽にて37℃で30分孵化し、精子運動解析装置SMASにて観察・情報保存し情報分析を行った。なお、精子運動解析装置SMASとは、株式会社ディテクトにより開発された、精子の運動観察解析とカウントを自動的に実行し、得られた情報をデジタル化・画像化にした装置である。
Sperm observation was performed using the SMAS apparatus according to the following method.
Method: The rat's left epididymis was cut off, placed in a container of 10 ml of sterile PBS solution, and cut open with scissors. The testicular tissue was pinched with tweezers, the sperm was thoroughly washed off, and the eggs were incubated in a hot tub at 37°C for 30 minutes. The sperm motility analyzer SMAS, developed by Detect Co., Ltd., is a device that automatically observes, analyzes and counts sperm movement, and digitizes and images the obtained information.
ラット精液検査の結果を表３に示す。 Table 3 shows the results of the rat semen analysis.
(１)精子数は、低投与量群において２７．５％増加、高投与量群においては８２．８％増加し、有意差が認められた（P＜0.05）。このことから、乳酸菌抽出物は、ラット精子数を増加することが分かった。
(２)精子直線運動率は、低投与量群において６．２％増加し、高投与量群では１２．４％増加して有意差が認められた（P＜0.05）。このことから、乳酸菌抽出物は、ラット精子の直線運動を促進することが分かった。
(３)精子奇形率は、低投与量群において１２．３％低下した。高投与量群では５４．８％低下して有意差が認められた（P＜0.05）。このことから、乳酸菌抽出物は、精子の奇形率を減少することが分かった。
(1) Sperm count increased by 27.5% in the low dose group and by 82.8% in the high dose group, showing a significant difference (P<0.05). From this, it was found that the lactic acid bacteria extract increases the rat sperm count.
(2) Sperm linear motility increased by 6.2% in the low dose group and by 12.4% in the high dose group, showing a significant difference (P<0.05). From this, it was found that the lactic acid bacteria extract promotes the linear motility of rat spermatozoa.
(3) Sperm malformation rate decreased by 12.3% in the low dose group. A significant difference was observed with a 54.8% decrease in the high dose group (P<0.05). From this, it was found that the lactobacillus extract reduces the malformation rate of sperm.
Claims (7)
オウギ、ニラの種、枸杞子、仙茅、海馬、月季花、サンシュユ、補骨脂、甘草、鎖陽、巴戟天、肉桂、雪蓮花、杜仲、菟糸子、管花ニクジュヨウ、及び山芋からなる群より選択される少なくとも１種の基質とともに培養する工程を含む、男性不妊の治療又は改善用組成物の製造方法。 Lactobacillus spp.
Consist of Astragalus, Chinese chive seeds, leek seeds, cinnamon, sage, hippocampus, moon flower, Japanese cornel, bone fat, licorice root, chain yang, bageten, cinnamon, snow lotus, eucommia, quince, tube flower cinnamon, and yam A method for producing a composition for treating or improving male infertility, comprising the step of culturing with at least one substrate selected from the group.
オウギ、ニラの種、枸杞子、仙茅、海馬、月季花、サンシュユ、補骨脂、甘草、鎖陽、巴戟天、肉桂、雪蓮花、杜仲、菟糸子、管花ニクジュヨウ、及び山芋からなる群より選択される少なくとも１種の基質とともに培養した培養物を含む、男性不妊の治療又は改善用組成物。 Lactobacillus spp.
Consist of Astragalus, Chinese chive seeds, leek seeds, cinnamon, sage, hippocampus, moon flower, Japanese cornel, bone fat, licorice root, chain yang, bageten, cinnamon, snow lotus, eucommia, quince, tube flower cinnamon, and yam A composition for treating or improving male infertility, comprising a culture cultured with at least one substrate selected from the group.
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