JP2022140106A - Method of using placenta extract - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、プラセンタ抽出物の使用方法に関する。特に、がん細胞の増殖を抑制することを目的としてプラセンタ抽出物を使用する方法に関する。 The present invention relates to methods of using placenta extract. In particular, it relates to methods of using placenta extracts for the purpose of inhibiting cancer cell proliferation.
近年の医療技術の発達および栄養価の高い食事の普及によって、ヒトは長い寿命を得ることに成功している。しかし、ヒトが長い寿命を得たことにより、がん罹患率が増加の傾向にある。それゆえに、医薬品又は日々の食事から摂取可能であって、がん細胞の増殖を抑制する作用を備えた成分（又は素材）が所望されている。 Due to the recent development of medical technology and the spread of highly nutritious meals, humans have succeeded in achieving long life spans. However, as humans have gained longer lifespans, cancer rates have tended to increase. Therefore, there is a demand for a component (or raw material) that can be ingested from pharmaceuticals or daily meals and that has the effect of suppressing the proliferation of cancer cells.
ところで、哺乳類の胎盤（プラセンタ）やその抽出物は、健康と美容の両側面において増進をもたらす新たな素材として、男女問わず幅広い年代層から注目されている（例えば、特許文献１参照）。 By the way, mammalian placenta (placenta) and its extracts are attracting attention from a wide range of age groups regardless of gender as new materials that promote both health and beauty (see, for example, Patent Document 1).
特許文献１には、ブタ由来の胎盤より抽出されたプラセンタエキスの粉末50～70質量％、ビール酵母20～30質量％、鶏卵における薄皮粉末5～10質量％および真菰粉末5～10質量％からなることを特徴とするプラセンタエキス粉末配合食品が開示されている。
In
特許文献１に開示のプラセンタエキス粉末配合食品によれば、プラセンタエキス粉末の固化性を抑制して保存性に優れると共に、プラセンエキス粉末による作用（例えば、更年期障害における体調調整作用や美白作用）を期待できる食品を提供することができる。 According to the placenta extract powder-containing food disclosed in Patent Document 1, the solidification of the placenta extract powder is suppressed and the storage stability is excellent. We can provide the food you expect.
上述のようにプラセンタは、健康と美容の両側面において優れた効果を備えている。また、プラセンタには、他の治療によって生起される副作用を軽減する効果が報告されている。 As described above, placenta has excellent effects in terms of both health and beauty. Placenta has also been reported to be effective in reducing side effects caused by other treatments.
このような報告の一例としては、「放射線障害の回復に胎盤エキスが効果（賀田恒夫氏、朝日新聞1982年9月25日）」が挙げられる。この記事では、20日以内に死ぬ放射線量を浴びたネズミに、胎盤エキスを注射しておくだけで、200日は生存するということを報告している。 An example of such a report is ``The effect of placenta extract on recovery from radiation damage (Mr. Tsuneo Kata, Asahi Shimbun September 25, 1982)''. This article reports that mice exposed to radiation doses that die within 20 days can survive for 200 days just by injecting them with placental extract.
このように、公知となっているプラセンタの効果の一例として、放射線によるがん治療の副作用を軽減する効果が挙げられる。この効果は、プラセンタに含有される複数の物質が相乗的にはたらき、放射線により損傷した遺伝子を修復することで生起されるものと推測されている。 As described above, one example of the well-known effect of placenta is the effect of reducing the side effects of radiation cancer therapy. It is presumed that this effect is caused by the synergistic action of multiple substances contained in the placenta to repair radiation-damaged genes.
しかしながら、既にがん化した細胞に対するプラセンタの直接的な効果は不明のままであった。本発明者らは、鋭意研究により、プラセンタ抽出物はがん細胞の増殖を抑制する効果を備えていることを明らかとした。 However, the direct effects of placenta on already cancerous cells remained unclear. Through intensive research, the present inventors have clarified that the placenta extract has the effect of suppressing the growth of cancer cells.
本発明は、がん細胞の増殖抑制に焦点を当てたプラセンタ抽出物の新たな使用方法を提供する。 The present invention provides a new use of placenta extracts with a focus on inhibiting cancer cell growth.
本発明では、（１）がん細胞の増殖抑制のために、プラセンタ抽出物を使用することとした。 In the present invention, (1) a placenta extract is used to suppress proliferation of cancer cells.
また本発明では、（２）正常細胞を増殖させつつ、がん細胞の増殖を抑制する製剤における作用成分として、プラセンタ抽出物を使用することとした。 In addition, in the present invention, (2) placenta extract is used as an active ingredient in a formulation that inhibits cancer cell proliferation while allowing normal cells to proliferate.
また本発明では、（３）前記プラセンタ抽出物は水を主成分とする水系溶媒により抽出された抽出物であって、in vitroで培養された前記がん細胞に0μg/mLを超え400μg/mL以下の濃度の前記抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量を前記製剤１回分の用量中に含有させることにも特徴を有する。 Further, in the present invention, (3) the placenta extract is an extract extracted with an aqueous solvent containing water as a main component, and the in vitro-cultured cancer cells exceed 0 μg/mL and 400 μg/mL. It is also characterized by containing an amount in a single dose of the preparation that can exhibit an effect equivalent to the growth inhibitory effect when exposed to the extract at the following concentration in vivo.
また本発明では、（４）前記プラセンタ抽出物は水を主成分とする水系溶媒により抽出された抽出物であって、in vitroで培養された前記がん細胞に400μg/mLを超える濃度の前記抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量を前記製剤１回分の用量中に含有させることにも特徴を有する。 In addition, in the present invention, (4) the placenta extract is an extract extracted with an aqueous solvent containing water as a main component, and the cancer cells cultured in vitro have a concentration exceeding 400 μg/mL. It is also characterized by containing an amount in one dose of the preparation that can exhibit an effect equivalent to the growth inhibitory effect upon exposure to the extract in vivo.
また本発明では、（５）前記プラセンタ抽出物を大腸がん細胞、ヒト肝がん細胞又はヒト膵臓がん細胞に使用することを特徴を有する。 The present invention is also characterized in that (5) the placenta extract is used for colon cancer cells, human liver cancer cells, or human pancreatic cancer cells.
また本発明では、（６）前記プラセンタ抽出物を子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫、ヒトアストロサイトーマ細胞、ヒト乳がん細胞又は卵巣がん細胞に使用することを特徴を有する。 The present invention is also characterized in that (6) the placenta extract is used for cervical cancer cells, neuroblastoma cells, human astrocytoma cells, human breast cancer cells, or ovarian cancer cells.
本発明によれば、がん細胞の増殖抑制のためのプラセンタ抽出物の使用をすることとしたため、プラセンタ抽出物の新たな使用方法を提供することができる。また、がん細胞の増殖を抑制する手段としてプラセンタ抽出物を採用するという選択肢を提示することができる。 INDUSTRIAL APPLICABILITY According to the present invention, since the placenta extract is used for suppressing the growth of cancer cells, it is possible to provide a new method of using the placenta extract. Also, the option of employing a placenta extract as a means of inhibiting cancer cell proliferation can be presented.
また、正常細胞を増殖させつつ、がん細胞の増殖を抑制する製剤における作用成分としてのプラセンタ抽出物を使用することとしたため、プラセンタ抽出物の新たな使用方法を提供することができる。特に、プラセンタ抽出物が正常細胞とがん細胞とに対して相反する効果を生起する使用法を提供することができる。 In addition, since the placenta extract is used as an active ingredient in a formulation that suppresses the proliferation of cancer cells while allowing normal cells to proliferate, a new method of using the placenta extract can be provided. In particular, a use can be provided in which the placenta extract produces opposing effects on normal and cancer cells.
また、前記プラセンタ抽出物は水を主成分とする水系溶媒により抽出された抽出物であって、in vitroで培養された前記がん細胞に0μg/mLを超え400μg/mL以下の濃度の前記抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量を前記製剤１回分の用量中に含有させることとしたため、プラセンタ抽出物の濃度を調整して使用することにより、正常細胞の増殖を促進させながら、がん細胞の増殖を抑制するプラセンタ抽出物の使用方法を提供することができる。 In addition, the placenta extract is an extract extracted with an aqueous solvent containing water as a main component, and the extract is applied to the in vitro-cultured cancer cells at a concentration of more than 0 μg/mL and 400 μg/mL or less. Since the dose of one dose of the above formulation contains an amount that can express an effect equivalent to the growth inhibitory effect when exposed to a substance in vivo, by adjusting the concentration of the placenta extract and using it, A method of using a placenta extract that inhibits cancer cell proliferation while promoting normal cell proliferation can be provided.
また、前記プラセンタ抽出物は水を主成分とする水系溶媒により抽出された抽出物であって、in vitroで培養された前記がん細胞に400μg/mLを超える濃度の前記抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量を前記製剤１回分の用量中に含有させることとしたため、プラセンタ抽出物の濃度を調整して使用することにより、正常細胞の増殖に影響を与えることなく、がん細胞の増殖を抑制するプラセンタ抽出物の使用方法を提供することができる。 Further, the placenta extract is an extract extracted with an aqueous solvent containing water as a main component, and when the cancer cells cultured in vitro are exposed to the extract at a concentration exceeding 400 μg/mL, Since it was decided to contain an amount that can express in vivo an effect equivalent to the growth inhibitory effect on the growth of normal cells, by adjusting the concentration of the placenta extract and using it, it is possible to suppress the growth of normal cells. It is possible to provide a method of using a placenta extract that inhibits cancer cell growth without affecting it.
また、前記プラセンタ抽出物を大腸がん細胞、ヒト肝がん細胞又はヒト膵臓がん細胞に使用することとしたため、大腸がん細胞、ヒト肝がん細胞又はヒト膵臓がん細胞の増殖を濃度に依存して強く抑制するプラセンタ抽出物の使用法を提供することができる。すなわち、プラセンタの使用では、プラセンタ抽出物の濃度に応じて大腸がん細胞、ヒト肝がん細胞又はヒト膵臓がん細胞の増殖への影響を調整することができる。 In addition, since the placenta extract was used for colorectal cancer cells, human liver cancer cells or human pancreatic cancer cells, the proliferation of colorectal cancer cells, human liver cancer cells or human pancreatic cancer cells was It is possible to provide a method of using a placenta extract that strongly inhibits depending on. That is, in the use of placenta, the influence on the proliferation of colon cancer cells, human liver cancer cells or human pancreatic cancer cells can be adjusted according to the concentration of the placenta extract.
また、前記プラセンタ抽出物を子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫、ヒトアストロサイトーマ細胞、ヒト乳がん細胞又は卵巣がん細胞に使用することとしたため、子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫、ヒトアストロサイトーマ細胞、ヒト乳がん細胞又は卵巣がん細胞に対して、所定濃度以上であれば略一定の抑制効果をそれぞれ示すプラセンタ抽出物の使用方法を提供することができる。 In addition, since the placenta extract was used for cervical cancer cells, neuroblastoma, human astrocytoma cells, human breast cancer cells or ovarian cancer cells, cervical cancer cells, neuroblastoma, It is possible to provide a method for using a placenta extract that exhibits substantially constant inhibitory effects on human astrocytoma cells, human breast cancer cells, or ovarian cancer cells at a predetermined concentration or higher.
本発明は、プラセンタ抽出物の使用方法に関し、より詳細には、医薬品や機能性食品によってがん細胞の増殖を抑制するためのプラセンタ抽出物の新たな使用方法を提供するものである。 TECHNICAL FIELD The present invention relates to a method of using placenta extract, and more particularly, to provide a new method of using placenta extract for suppressing cancer cell growth by pharmaceuticals and functional foods.
プラセンタ抽出物は、哺乳類の胎盤（プラセンタ）の抽出物であり、例えば溶媒を用いて抽出した場合は、その抽出液であったり、抽出液の乾燥物がプラセンタ抽出物に含まれる。 A placenta extract is an extract of a mammalian placenta (placenta). For example, when the placenta is extracted using a solvent, the placenta extract contains the extract or the dried product of the extract.
プラセンタ抽出物の抽出対象原料であるプラセンタは、特に限定されるものではなく、ブタ、ウマ、ヒトをはじめ種々の哺乳類のプラセンタを採用することができる。 The placenta, which is the raw material to be extracted for the placenta extract, is not particularly limited, and placenta of various mammals including pigs, horses and humans can be used.
また、本実施形態における使用とは、がん細胞の増殖を抑制することを目的として利用される製剤の原料として使用されることである。ここで製剤とは、例えば、医薬品または機能性食品が挙げられる。 In addition, the use in this embodiment means that it is used as a raw material for preparations that are used for the purpose of suppressing the growth of cancer cells. Here, formulations include, for example, pharmaceuticals and functional foods.
医薬品は、病気の診断、治療または予防に使用されることを目的とされているものであり、例えば、病院で医師が処方する医療用医薬品であったり、薬局またはドラッグストア等で市販されているＯＴＣ医薬品が挙げられる。 Pharmaceuticals are intended to be used for the diagnosis, treatment or prevention of diseases. OTC drugs are included.
医薬品として使用するプラセンタ抽出物の形状は、特に限定されないが、例えば経口投与によって作用させる内服剤、からだの外側から作用させる外用剤又は皮下若しくは血管内に直接いれることにより作用させる注射剤を採用することができる。 The form of the placenta extract to be used as a drug is not particularly limited, but for example, an internal preparation that acts by oral administration, an external preparation that acts from the outside of the body, or an injection that acts by directly subcutaneously or into a blood vessel is adopted. be able to.
また機能性食品は、医薬品成分を含まない健康の保持増進に寄与するとされる食品全般を包含する概念であり、例えば、栄養補助食品や健康補助食品、栄養調整食品のほか、所謂サプリメントなどの一般食品であったり、特定保健用食品や栄養機能食品、機能性表示食品の如き保健機能食品も含まれる。 In addition, functional food is a concept that includes all foods that are said to contribute to the maintenance and promotion of health that do not contain pharmaceutical ingredients. Foods, foods with health claims such as foods for specified health uses, foods with nutrient claims, and foods with function claims are also included.
なお、上述した医薬品や機能性食品についての説明は、本発明の理解に供すべくこれらに相当する物品等の一例を列挙したものであり、各語句の解釈はこれら列挙された物品等に限定されるものではない。ただし、本出願人が本願を権利化するにあたり、本発明をこれら物品等に限定することを妨げない。 In addition, the explanation of the above-mentioned medicines and functional foods is a list of examples of articles corresponding to these in order to provide for understanding of the present invention, and the interpretation of each term is limited to these listed articles. not something. However, it does not preclude the applicant from limiting the present invention to these articles and the like in obtaining the right of the present application.
このように、医薬品や機能性食品によってがん細胞の増殖を抑制するためのプラセンタ抽出物を使用することにより、がん細胞の増殖を抑制する手段としてプラセンタ抽出物を採用するという選択肢を提示することができる。 Thus, the use of placenta extracts to inhibit cancer cell proliferation by pharmaceuticals and functional foods presents the option of adopting placenta extracts as a means of inhibiting cancer cell proliferation. be able to.
また本発明は、正常細胞を増殖させつつ、がん細胞の増殖を抑制する製剤における作用成分としてプラセンタ抽出物を使用する方法を提供するものでもある。 The present invention also provides a method of using a placenta extract as an active ingredient in a formulation that inhibits cancer cell proliferation while allowing normal cells to proliferate.
がん細胞は、ＤＮＡの変異によって増殖を続ける能力（異常増殖能）を獲得した細胞を意味する。例えば、後述する実験で採用する大腸がん細胞、子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫、ヒトアストロサイトーマ細胞、ヒト乳がん細胞、ヒト肝がん細胞、ヒト卵巣がん細胞、ヒト膵臓がん細胞等が挙げられる。 A cancer cell means a cell that has acquired the ability to continue growing (abnormal proliferation ability) due to DNA mutation. For example, colon cancer cells, cervical cancer cells, neuroblastoma, human astrocytoma cells, human breast cancer cells, human liver cancer cells, human ovarian cancer cells, and human pancreatic cancer cells used in the experiments described later. cells and the like.
正常細胞は、生体を構成し、またはin vitroで培養された健常な細胞であってがん化していないものをいう。例えば、後述する実験で採用する大腸正常細胞が挙げられる。 A normal cell refers to a healthy cell that constitutes a living body or that has been cultured in vitro and has not become cancerous. For example, colon normal cells used in experiments described later can be used.
作用成分とは、がん細胞の増殖を抑制する作用を呈する成分であり、例えば、製剤が医薬品であれば有効成分であって、機能性食品であれば機能成分である。 An active ingredient is an ingredient that exhibits an action to suppress the proliferation of cancer cells. For example, if the formulation is a drug, it is an active ingredient, and if the formulation is a functional food, it is a functional ingredient.
また作用成分は、プラセンタ抽出物をそのまま利用したものでも良いし、プラセンタ抽出物から精製した成分であってもよい。 In addition, the active ingredient may be the placenta extract as it is, or the ingredient purified from the placenta extract.
プラセンタ抽出物は、水を主成分とする水系溶媒に対して溶解性を示す成分群よりなることとしても良い。すなわち、プラセンタ抽出物は水系溶媒によって抽出された抽出物とすることができる。 The placenta extract may consist of a group of components that are soluble in an aqueous solvent containing water as a main component. That is, the placenta extract can be an extract extracted with an aqueous solvent.
ここで水系溶媒は水を主成分とした溶媒であり、水そのものの他に、例えば50w/w％以上の割合で水を含有する溶媒が含まれる。水系溶媒を構成する水以外の成分としては、例えば、水に対して溶解性を示す固体（粉末等）の成分であったり、アルコールの如き水と混和性を示す液体としたりすることができる。 Here, the water-based solvent is a solvent containing water as a main component, and includes, in addition to water itself, a solvent containing water at a ratio of, for example, 50 w/w % or more. Components other than water constituting the aqueous solvent may be, for example, solid (powder, etc.) components that are soluble in water, or liquids such as alcohol that are miscible with water.
また、プラセンタ抽出物は、ジメチルスルホキシド、エタノール、メタノール、ヘキサンから選ばれるいずれか１つ若しくはいずれか２つ以上の混合液からなる非水系特定溶媒に対して溶解性を示す成分群よりなることとしてもよい。換言すれば、プラセンタ抽出物は、非水系特定溶媒によって抽出された抽出物とすることができる。 In addition, the placenta extract is composed of a group of components that are soluble in a specific non-aqueous solvent consisting of any one or a mixture of two or more selected from dimethylsulfoxide, ethanol, methanol, and hexane. good too. In other words, the placenta extract can be an extract extracted with a non-aqueous specific solvent.
また溶媒は、水系溶媒と非水系特定溶媒との混合溶媒としても良い。すわなち、50w/w％未満の割合で水を含み、残余を非水系特定溶媒や、調整する混合溶媒に対して溶解性を示す固体（粉末等）の成分であったり、アルコールの如き水との混和性を示す液体とすることができる。 Moreover, the solvent may be a mixed solvent of an aqueous solvent and a non-aqueous specific solvent. That is, it contains water at a rate of less than 50w/w%, and the remainder is a non-aqueous specific solvent, a solid (powder, etc.) component that exhibits solubility in the mixed solvent to be adjusted, or water such as alcohol It can be a liquid that exhibits miscibility with
プラセンタ抽出物から精製した成分は、がん細胞の増殖を抑制する効果を呈する成分とすることができる。また、がん細胞の増殖抑制と同時に正常細胞の増殖を促進する効果とを呈する成分とすることもできる。 A component purified from the placenta extract can be a component that exhibits an effect of suppressing proliferation of cancer cells. In addition, it can be a component that suppresses the growth of cancer cells and at the same time promotes the growth of normal cells.
このように、正常細胞を増殖させつつ、がん細胞の増殖を抑制する製剤における作用成分としてプラセンタ抽出物を使用することにより、正常細胞とがん細胞とに対して相反する効果を生起する使用法を提供することができる。 In this way, the use of placenta extract as an active ingredient in a preparation that suppresses the proliferation of cancer cells while allowing normal cells to proliferate produces contradictory effects on normal cells and cancer cells. can provide the law.
また本願に係るプラセンタ抽出物の使用方法は、発明者らがin vitro実験によって明らかとしたものであり、プラセンタ抽出物の濃度およびプラセンタ抽出物に曝されるがん細胞の種類に応じて異なる効果を呈するものである。 In addition, the method of using the placenta extract according to the present application was clarified by the inventors through in vitro experiments. It presents
具体的には、プラセンタ抽出物の使用方法では、前記プラセンタ抽出物は水を主成分とする水系溶媒により抽出された抽出物であって、in vitroで培養された前記がん細胞に0μg/mLを超え400μg/mL以下の濃度の前記抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量を前記製剤１回分の用量中に含有させることを特徴とすることができる。 Specifically, in the method of using the placenta extract, the placenta extract is an extract extracted with an aqueous solvent containing water as a main component, and the cancer cells cultured in vitro have a concentration of 0 μg/mL. and an amount equivalent to the growth inhibitory effect when exposed to the extract at a concentration of more than 400 μg / mL or less is contained in the dosage of the preparation once. can.
このようなプラセンタ抽出物の使用方法によれば、プラセンタ抽出物の濃度を調整して使用することにより、正常細胞の増殖を促進させながら、がん細胞の増殖を抑制するプラセンタ抽出物の使用方法を提供することができる。 According to such a method of using the placenta extract, by adjusting the concentration of the placenta extract and using it, the method of using the placenta extract suppresses the proliferation of cancer cells while promoting the proliferation of normal cells. can be provided.
また、プラセンタ抽出物の使用方法では、前記プラセンタ抽出物は水を主成分とする水系溶媒により抽出された抽出物であって、in vitroで培養された前記がん細胞に400μg/mLを超える濃度の前記抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量を前記製剤１回分の用量中に含有させることを特徴とすることができる。 Further, in the method of using the placenta extract, the placenta extract is an extract extracted with an aqueous solvent containing water as a main component, and the cancer cells cultured in vitro have a concentration exceeding 400 μg / mL. can be characterized by containing an amount in one dose of the preparation that can exhibit an effect equivalent to the growth inhibitory effect exerted when the extract of is exposed in vivo.
このようなプラセンタ抽出物の使用方法によれば、プラセンタ抽出物の濃度を調整して使用することにより、正常細胞の増殖に影響を与えることなく、がん細胞の増殖を抑制するプラセンタ抽出物の使用方法を提供することができる。 According to this method of using the placenta extract, by adjusting the concentration of the placenta extract and using it, the placenta extract suppresses the proliferation of cancer cells without affecting the proliferation of normal cells. Can provide usage instructions.
また、プラセンタ抽出物の使用方法では、前記プラセンタ抽出物を大腸がん細胞、ヒト肝がん細胞又はヒト膵臓がん細胞に使用することを特徴とすることができる。 Further, the method of using the placenta extract can be characterized by using the placenta extract for colon cancer cells, human liver cancer cells or human pancreatic cancer cells.
このようなプラセンタ抽出物の使用方法によれば、大腸がん細胞、ヒト肝がん細胞又はヒト膵臓がん細胞の増殖を濃度に依存して強く抑制することができる。 According to such a method of using the placenta extract, the proliferation of colon cancer cells, human liver cancer cells or human pancreatic cancer cells can be strongly suppressed in a concentration-dependent manner.
また、プラセンタ抽出物の使用方法では、前記プラセンタ抽出物を子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫、ヒトアストロサイトーマ細胞、ヒト乳がん細胞又は卵巣がん細胞に使用することを特徴とすることができる。 Also, the method of using the placenta extract is characterized by using the placenta extract for cervical cancer cells, neuroblastoma cells, human astrocytoma cells, human breast cancer cells or ovarian cancer cells. can.
このようなプラセンタ抽出物の使用方法によれば、子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫、ヒトアストロサイトーマ細胞、ヒト乳がん細胞又は卵巣がん細胞の増殖を濃度に関係なく略同じに抑制するプラセンタ抽出物の使用方法を提供することができる。 According to this method of using the placenta extract, the growth of cervical cancer cells, neuroblastoma cells, human astrocytoma cells, human breast cancer cells, or ovarian cancer cells is inhibited in substantially the same manner regardless of concentration. A method of using the placenta extract can be provided.
以下、本実施形態に係る使用方法について、実験結果を参照しながら更に説明する。なお、以下ではウマ由来のプラセンタ（胎盤）より抽出したプラセンタ抽出物（以下、ウマプラセンタ抽出物という。）を用いた例について説明するが、プラセンタの由来はウマに限定されるものではない。 Hereinafter, the usage method according to this embodiment will be further described with reference to experimental results. An example using a placenta extract extracted from a horse-derived placenta (hereinafter referred to as a horse placenta extract) will be described below, but the origin of the placenta is not limited to horses.
〔１．プラセンタ抽出物の調整〕
近年のがん罹患率の増加により、医薬品および機能性食品に含まれる成分（又は素材）としてがん細胞の増殖を抑制する成分が所望されている。プラセンタは、ヒトの健康と美容との両側面において増進をもたらす新たな素材として注目されているが、がん細胞に対する直接的な作用は不明のままであった。
[1. Preparation of placenta extract]
Due to the recent increase in cancer morbidity, a component that suppresses the growth of cancer cells is desired as a component (or raw material) contained in pharmaceuticals and functional foods. Placenta is attracting attention as a new material that can improve both human health and beauty, but its direct effect on cancer cells has remained unclear.
本実験ではプラセンタ抽出物として、ウマプラセンタ粉末を使用した。ウマプラセンタ粉末は、ウマ胎盤の凍結乾燥粉末である。 In this experiment, horse placenta powder was used as the placenta extract. Horse placenta powder is a freeze-dried powder of horse placenta.
まず、100mgのウマプラセンタ粉末を1.5mlチューブに量り取り、1mlの抽出溶媒を添加して、室温にて30分間攪拌を行った。抽出溶媒は、水系溶媒として滅菌超純水、非水系特定溶媒としてジメチルスルホキシド（Dimethyl sulfoxide:以下、DMSOともいう。）をそれぞれ使用した。 First, 100 mg of horse placenta powder was weighed into a 1.5 ml tube, 1 ml of extraction solvent was added, and the mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. As extraction solvents, sterilized ultrapure water was used as an aqueous solvent, and dimethyl sulfoxide (hereinafter also referred to as DMSO) was used as a specific non-aqueous solvent.
攪拌後、チューブを室温に静置し、得られた上清をウマプラセンタ抽出物とした。なお、このウマプラセンタ抽出物は、100mgのプラセンタ粉末に1mLの抽出溶媒を添加して調製したことに由来し、100mg/mlサンプルと称することとした。また、以下の各試験において、100mg/mlサンプルを適宜希釈して調製した希釈サンプルに関し、例えば100倍希釈されたサンプルであれば1mg/mlサンプル、10000倍希釈されたサンプルであれば10μg/mlサンプルのように表現する。 After stirring, the tube was allowed to stand at room temperature, and the resulting supernatant was used as a horse placenta extract. This horse placenta extract was prepared by adding 1 mL of extraction solvent to 100 mg of placenta powder, and was therefore referred to as a 100 mg/ml sample. In addition, in each of the following tests, regarding diluted samples prepared by appropriately diluting a 100 mg/ml sample, for example, a 100-fold diluted sample is a 1 mg/ml sample, and a 10000-fold diluted sample is a 10 μg/ml sample. Express like a sample.
〔２．細胞増殖試験１〕
本試験では、正常細胞又はがん細胞とサンプルとを共培養し、細胞生存率を測定した。
[2. Cell proliferation test 1]
In this test, normal cells or cancer cells and samples were co-cultured and cell viability was measured.
本試験において、正常細胞は大腸正常細胞（CCD841）を採用し、がん細胞は、大腸がん細胞（HCT-116）、子宮頸がん細胞（HeLa）、神経芽腫細胞（SH-SY5Y）、ヒトアストロサイトーマ細胞（1321N1）を採用した。 In this study, colon normal cells (CCD841) were used as normal cells, and colon cancer cells (HCT-116), cervical cancer cells (HeLa), and neuroblastoma cells (SH-SY5Y) were used as cancer cells. , employed human astrocytoma cells (1321N1).
細胞培養の方法としては、子宮頸がん細胞、ヒトアストロサイトーマ細胞および神経芽細胞腫はD-MEM(Dulbecco’s Modified Eagle Medium)を、正常細胞にはE-MEM(Eagle’s Minimal Essential Medium)を、大腸がん細胞にはMccoy’s 5A Modified Mediumを用いて前培養した。また、各細胞の培養には、適切な培地に10％ウシ胎児血清（FBS）と1％ストレプトマイシン－ペニシリン（SP）を添加している。 For cell culture, use D-MEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) for cervical cancer cells, human astrocytoma cells and neuroblastoma cells, E-MEM (Eagle's Minimal Essential Medium) for normal cells, Colorectal cancer cells were precultured using McCoy's 5A Modified Medium. Each cell was cultured in the appropriate medium supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS) and 1% streptomycin-penicillin (SP).
その後、96穴プレートに1.0×105cells/mLの濃度で100μLを播種し、CO2インキュベータ（37℃、5％ CO2）にてオーバーナイト培養した。 After that, 100 μL of the cells were seeded in a 96-well plate at a concentration of 1.0×10 5 cells/mL, and cultured overnight in a CO 2 incubator (37° C., 5% CO 2 ).
オーバーナイト後、培地を除去し、0.5％FBSと1％SPを添加した液体培地100μLを添加した。また、液体培地には0.5μL/wellとなるようにサンプル溶液をそれぞれ添加し、CO2インキュベータ（37℃、5％CO2）にて72時間静置培養を行った。 After overnight, the medium was removed and 100 μL of liquid medium supplemented with 0.5% FBS and 1% SP was added. Each sample solution was added to the liquid medium at 0.5 μL/well, and static culture was performed for 72 hours in a CO 2 incubator (37° C., 5% CO 2 ).
細胞生存率の測定は、MTT法により行った。
MTT法では、72時間の培養が行われたプレートから培地を除去し、各ウェルにMTT染色液（5mg/mL in medium）を100μLずつ添加し、5％CO2、37℃で4時間静置培養を行った。
Measurement of cell viability was performed by the MTT method.
In the MTT method, the medium was removed from the plate after 72 hours of culture, and 100 μL of MTT staining solution (5 mg/mL in medium) was added to each well and allowed to stand at 37°C in 5% CO 2 for 4 hours. cultured.
4時間の静置培養後、MTT染色液を除去し、各ウェルに塩酸－イソプロパノール溶液を100μLずつ加え、遮光し、4時間室温で放置した。 After static culture for 4 hours, the MTT staining solution was removed, 100 μL of hydrochloric acid-isopropanol solution was added to each well, shielded from light, and allowed to stand at room temperature for 4 hours.
その後、マイクロプレートリーダーで570nmにおける吸光度を測定し、細胞生存率の指標とした。 Then, absorbance at 570 nm was measured with a microplate reader and used as an index of cell viability.
図１は正常細胞のコントロールに対する細胞生存率を示したグラフであり、図１（ａ）は水系溶媒にて抽出したプラセンタ抽出物（以下、プラセンタ水系抽出物ともいう。）による細胞生存率を示し、図１（ｂ）は非水系特定溶媒にて抽出したプラセンタ抽出物（以下、プラセンタ非水系抽出物）による細胞生存率を示している。 FIG. 1 is a graph showing the cell viability of normal cells relative to the control, and FIG. 1(a) shows the cell viability of a placenta extract extracted with an aqueous solvent (hereinafter also referred to as placenta aqueous extract). FIG. 1(b) shows the cell viability of a placenta extract extracted with a specific non-aqueous solvent (hereinafter referred to as placenta non-aqueous extract).
図１（ａ）に示すように、プラセンタ水系抽出物に関し、10μg/mLサンプル、100μg/mLサンプル、400μg/mLサンプルについて確認を行ったところ、10μg/mLサンプルにおいては約20％、100μg/mLサンプルにおいては約15％の細胞増殖促進効果が認められた。これらに対し、400μg/mLサンプルにおいてはコントロールと比して有意な細胞増殖促進効果が認められなかった。 As shown in Fig. 1(a), regarding the placenta aqueous extract, confirmation was performed on 10 µg/mL samples, 100 µg/mL samples, and 400 µg/mL samples. Approximately 15% cell growth promotion effect was observed in the sample. In contrast, the 400 μg/mL sample showed no significant cell growth-promoting effect compared to the control.
このことより、プラセンタ水系抽出物には、比較的低濃度（10μg/mL、100μg/mL）では正常細胞の増殖を促進させ、比較的高濃度（400μg/mL）では正常細胞の増殖に影響を与えないことが明らかとなった。 Based on this, the placenta aqueous extract promotes the proliferation of normal cells at relatively low concentrations (10 μg/mL, 100 μg/mL), and has no effect on normal cell proliferation at relatively high concentrations (400 μg/mL). It turned out not to give.
換言すれば、プラセンタ水系抽出物は、0μg/Lを超え400μg/mL以下の濃度を正常細胞に曝した際には増殖を促進させる効果をおよぼし、400μg/mL以上の濃度を正常細胞に曝した際には増殖に影響を与えないことが考えられた。 In other words, the aqueous placenta extract exerted a growth-promoting effect when exposed to normal cells at a concentration of more than 0 μg/L and 400 μg/mL or less, and when exposed to a concentration of 400 μg/mL or more. It was thought that it did not affect the growth in practice.
またこれに対し、プラセンタ非水系抽出物に関し各希釈サンプルについて確認を行ったところ、図１（ｂ）に示すように、検討された全ての濃度において約20％の細胞増殖促進効果が認められた。 On the other hand, when confirming each diluted sample of placenta non-aqueous extract, as shown in Fig. 1 (b), a cell growth promoting effect of about 20% was observed at all concentrations investigated. .
このことより、プラセンタ非水系抽出物は、正常細胞の細胞増殖に対して濃度に関係なく略一定に促進させる効果があるものと考えられた。 From this, it was considered that the placenta non-aqueous extract has the effect of promoting the cell growth of normal cells substantially constant regardless of the concentration.
また、これら水系、非水系のプラセンタ抽出物についての結果を踏まえると、プラセンタ非水系抽出物は全てのサンプル濃度で等しく正常細胞の増殖を促進したのに対し、プラセンタ水系抽出物は低いサンプル濃度ほど正常細胞の増殖が強く促進されたことは、実に興味深い点であると言える。 In addition, based on the results of these aqueous and non-aqueous placenta extracts, the non-aqueous placenta extract promoted the proliferation of normal cells equally at all sample concentrations, whereas the aqueous placenta extract promoted the proliferation of normal cells at lower sample concentrations. It is quite interesting to note that the proliferation of normal cells was strongly promoted.
図２は大腸がん細胞のコントロールに対する細胞生存率を示したグラフであり、図２（ａ）はプラセンタ水系抽出物による細胞生存率を示し、図２（ｂ）はプラセンタ非水系抽出物による細胞生存率を示している。 FIG. 2 is a graph showing the cell viability of colorectal cancer cells relative to the control, FIG. 2(a) shows the cell viability of the placenta aqueous extract, and FIG. 2(b) shows the cell viability of the placenta non-aqueous extract. Viability is shown.
図２（ａ）に示すように、プラセンタ水系抽出物に関し、10μg/mLサンプル、100μg/mLサンプル、400μg/m Lサンプルについて確認を行ったところ、100μg/mLサンプルにおいては約20％、400μg/mLサンプルにおいては約70％の細胞増殖抑制効果が認められた。 As shown in Fig. 2(a), 10 µg/mL sample, 100 µg/mL sample, and 400 µg/mL sample were confirmed for the placenta aqueous extract. About 70% of the cell growth inhibitory effect was observed in the mL sample.
このことより、プラセンタ水系抽出物には、大腸がん細胞の増殖に対して濃度依存的に強い抑制効果を呈することが明らかとなった。 From this, it was clarified that the aqueous placenta extract exerts a strong concentration-dependent inhibitory effect on colon cancer cell proliferation.
またこれに対し、プラセンタ非水系抽出物に関し各希釈サンプルについて確認を行ったところ、図２（ｂ）に示すように、100μg/mLサンプルにおいては約40％、400μg/mLサンプルにおいては約60％程度の細胞増殖抑制効果が認められた。 On the other hand, when confirming each diluted sample of the placenta non-aqueous extract, as shown in Fig. 2(b), it was about 40% in the 100 µg/mL sample and about 60% in the 400 µg/mL sample. A degree of cell growth inhibitory effect was observed.
また、これら水系、非水系のプラセンタ抽出物についての結果を踏まえると、プラセンタ水系抽出物とプラセンタ非水系抽出物とでは、大腸がん細胞の増殖に対して共に濃度依存的に強い抑制効果を示すと言える。 In addition, based on the results of these aqueous and non-aqueous placenta extracts, both the aqueous placenta extract and the non-aqueous placenta extract exhibit a strong inhibitory effect on colon cancer cell proliferation in a concentration-dependent manner. I can say.
ここで、正常細胞と大腸がん細胞とにおけるプラセンタ水系抽出物についての結果を比較検討すると、プラセンタ水系溶媒は、100μg/mLサンプルにおいて正常細胞の増殖を促進すると共に大腸がん細胞の増殖を抑制し、400μg/mLサンプルにおいて正常細胞の増殖に影響を与えることなく大腸がん細胞の増殖を抑制するものと考えられる。 Here, when comparing the results of placenta aqueous extract on normal cells and colon cancer cells, the placenta aqueous solvent promoted the proliferation of normal cells and suppressed the proliferation of colon cancer cells in the 100 μg/mL sample. However, in the 400 μg/mL sample, it appears to inhibit colon cancer cell proliferation without affecting normal cell proliferation.
また、正常細胞と大腸がん細胞とにおけるプラセンタ非水系抽出物についての結果を比較検討すると、100μg/mL以上の濃度であれば、正常細胞の増殖を略一定に促進し、大腸がん細胞の増殖を略一定に抑制するものと考えられる。 In addition, when the results of placenta non-aqueous extract on normal cells and colon cancer cells were compared, it was found that at a concentration of 100 μg/mL or more, the growth of normal cells was almost constant, and that of colon cancer cells. It is considered that the proliferation is suppressed almost constantly.
図３は子宮頸がん細胞のコントロールに対する細胞生存率を示したグラフであり、図３（ａ）はプラセンタ水系抽出物による細胞生存率を示し、図３（ｂ）はプラセンタ非水系抽出物による細胞生存率を示している。 FIG. 3 is a graph showing the cell viability of cervical cancer cells relative to the control, FIG. 3(a) showing the cell viability by placenta aqueous extract, and FIG. 3(b) by placenta non-aqueous extract. Cell viability is shown.
図３（ａ）に示すように、プラセンタ水系抽出物に関し、10μg/mLサンプル、100μg/mLサンプル、400μg/mLサンプルについて確認を行ったところ、100μg/mLおよび400μg/mLサンプルにおいて約30％の細胞増殖抑制効果が認められた。 As shown in Fig. 3(a), 10 µg/mL sample, 100 µg/mL sample, and 400 µg/mL sample were confirmed for placenta aqueous extract. A cell growth inhibitory effect was observed.
このことより、プラセンタ水系抽出物には、子宮頸がん細胞の増殖に対して所定濃度以上であれば略一定に抑制効果を呈することが明らかとなった。 From this, it was clarified that the aqueous placenta extract exhibits a substantially constant inhibitory effect on the proliferation of cervical cancer cells at a predetermined concentration or higher.
またこれに対し、プラセンタ非水系抽出物に関し各希釈サンプルについて確認を行ったところ、図３（ｂ）に示すように、100μg/mLおよび400μg/mLサンプルにおいて約30％の細胞増殖抑制効果が認められた。 On the other hand, when confirming each diluted sample of placenta non-aqueous extract, as shown in Fig. 3(b), about 30% cell growth inhibitory effect was observed in 100 µg/mL and 400 µg/mL samples. was taken.
また、これら水系、非水系のプラセンタ抽出物についての結果を踏まえると、プラセンタ水系抽出物とプラセンタ非水系抽出物とでは、子宮頸がん細胞の増殖に対し共に100μg/mL以上の濃度であれば、略一定の抑制効果をそれぞれ示すと言える。 In addition, based on the results of these aqueous and non-aqueous placenta extracts, both the aqueous placenta extract and the non-aqueous placenta extract inhibited the growth of cervical cancer cells at a concentration of 100 μg/mL or more. , respectively exhibit a substantially constant suppressing effect.
ここで、正常細胞と子宮頸がん細胞とにおけるプラセンタ水系抽出物についての結果を比較すると、プラセンタ水系溶媒は、100μg/mLサンプルにおいて正常細胞を増殖させると共に子宮頸がん細胞の増殖を抑制し、400μg/mLサンプルにおいて正常細胞の増殖に影響を与えることなく子宮頸がん細胞の増殖を抑制するものと考えられる。 Here, comparing the results of the placenta aqueous extract on normal cells and cervical cancer cells, the placenta aqueous solvent inhibited the proliferation of cervical cancer cells while promoting the proliferation of normal cells in the 100 μg/mL sample. , appears to inhibit the proliferation of cervical cancer cells without affecting the proliferation of normal cells in the 400 μg/mL sample.
また、正常細胞と子宮頸がん細胞とにおけるプラセンタ非水系抽出物についての結果を比較検討すると、100μg/mL以上の濃度であれば、正常細胞の増殖を略一定に促進させ、子宮頸がん細胞の増殖を略一定に抑制するものと考えられる。 In addition, when comparing the results of the placenta non-aqueous extract on normal cells and cervical cancer cells, it was found that if the concentration was 100 μg/mL or more, the growth of normal cells was promoted almost constantly, and cervical cancer cells. It is considered that the growth of cells is suppressed almost constantly.
図４は神経芽細胞腫のコントロールに対する細胞生存率を示したグラフであり、図４（ａ）はプラセンタ水系抽出物による細胞生存率を示し、図４（ｂ）はプラセンタ非水系抽出物による細胞生存率を示している。 FIG. 4 is a graph showing cell viability relative to neuroblastoma control, FIG. 4(a) shows cell viability by placenta aqueous extract, and FIG. 4(b) shows cell viability by placenta non-aqueous extract. Viability is shown.
図４（ａ）に示すように、プラセンタ水系抽出物に関し、10μg/mLサンプル、100μg/mLサンプル、400μg/mLサンプルについて確認を行ったところ、検討された全ての濃度において約20％の細胞増殖抑制効果が認められた。 As shown in Fig. 4(a), 10 µg/mL samples, 100 µg/mL samples, and 400 µg/mL samples of the placenta aqueous extract were confirmed, resulting in approximately 20% cell proliferation at all concentrations studied. An inhibitory effect was observed.
このことより、プラセンタ水系抽出物は、神経芽細胞腫の増殖に対して所定濃度以上であれば略一定に抑制する効果を呈することが明らかとなった。 From this, it was clarified that the placenta water-based extract exhibits an almost constant inhibitory effect on neuroblastoma growth at a predetermined concentration or higher.
またこれに対し、プラセンタ非水系抽出物に関し各希釈サンプルについて確認を行ったところ、図４（ｂ）に示すように、10μg/mLおよび100μg/mLにおいて約10％、400μg/mLにおいて約90％の細胞増殖抑制効果が認められた。 On the other hand, when confirming each diluted sample of placenta non-aqueous extract, as shown in FIG. A cell growth inhibitory effect was observed.
また、これら水系、非水系のプラセンタ抽出物についての結果を踏まえると、プラセンタ水系抽出物とプラセンタ非水系抽出物とでは、神経芽細胞腫の増殖に対し共に所定の抑制効果を示すと言える。特に、プラセンタ非水系抽出物400μg/mLにおいては、著しく強い細胞増殖抑制効果が確認された。 In addition, based on the results of these aqueous and non-aqueous placenta extracts, it can be said that both the aqueous placenta extract and the non-aqueous placenta extract exhibit a certain inhibitory effect on the growth of neuroblastoma. In particular, 400 μg/mL of placenta non-aqueous extract was confirmed to have a remarkably strong cell growth inhibitory effect.
ここで、正常細胞と神経芽種細胞とにおけるプラセンタ水系抽出物についての結果を比較すると、プラセンタ水系溶媒は、10μg/mLおよび100μg/mLサンプルにおいて正常細胞を増殖させると共に神経芽細胞腫の増殖を抑制し、400μg/mLサンプルにおいて正常細胞の増殖に影響を与えることなく神経芽細胞腫の増殖を抑制するものと考えられる。 Comparing the results for the aqueous placenta extract on normal and neuroblastoma cells here, the aqueous placenta solvent increased normal cell proliferation and neuroblastoma growth in the 10 μg/mL and 100 μg/mL samples. It appears to inhibit neuroblastoma growth without affecting normal cell growth in the 400 μg/mL sample.
また、正常細胞と神経芽細胞腫とにおけるプラセンタ非水系抽出物についての結果を比較すると、検討した全てのサンプル濃度において正常細胞の増殖を促進させ、神経芽種細胞の増殖を抑制するものと考えられる。特に、プラセンタ非水系抽出物400μg/mLにおいては、正常細胞の増殖は他のサンプル濃度と比して差異はないが、神経芽細胞腫の増殖を強く抑制する効果を呈するものと考えられる。 In addition, when comparing the results of placenta non-aqueous extracts on normal cells and neuroblastoma, it is considered that all sample concentrations tested promote the growth of normal cells and suppress the growth of neuroblastoma cells. be done. In particular, 400 μg/mL of placenta non-aqueous extract is considered to have a strong inhibitory effect on neuroblastoma proliferation, although there is no difference in proliferation of normal cells compared to other sample concentrations.
図５はヒトアストロサイトーマ細胞のコントロールに対する細胞生存率を示したグラフであり、図５（ａ）はプラセンタ水系抽出物による細胞生存率を示し、図５（ｂ）はプラセンタ非水系抽出物による細胞生存率を示している。 FIG. 5 is a graph showing the cell viability of human astrocytoma cells relative to the control, FIG. 5(a) shows the cell viability by placenta aqueous extract, and FIG. 5(b) shows the cell viability by placenta non-aqueous extract. Cell viability is shown.
図５（ａ）に示すように、プラセンタ水系抽出物に関し、10μg/mLサンプル、100μg/mLサンプル、400μg/mLサンプルについて確認を行ったところ、100μg/mLおよび400μg/mLサンプルにおいては約20％の細胞増殖抑制効果が認められた。 As shown in Fig. 5(a), 10 µg/mL samples, 100 µg/mL samples, and 400 µg/mL samples were confirmed for the placenta aqueous extract, and about 20% of the 100 µg/mL and 400 µg/mL samples A cell growth inhibitory effect was observed.
このことより、プラセンタ水系抽出物には、ヒトアストロサイトーマ細胞の増殖に対して所定濃度以上であれば略一定の抑制効果を呈することが明らかとなった。 From this, it was clarified that the aqueous placenta extract exhibits a substantially constant inhibitory effect on the proliferation of human astrocytoma cells at a predetermined concentration or higher.
またこれに対し、プラセンタ非水系抽出物に関し各希釈サンプルについて確認を行ったところ、図５（ｂ）に示すように、検討された全ての濃度において約10％の細胞増殖抑制効果が認められた。 On the other hand, when confirming each diluted sample of placenta non-aqueous extract, as shown in Fig. 5(b), a cell growth inhibitory effect of about 10% was observed at all concentrations investigated. .
このことより、プラセンタ非水系抽出物は、ヒトアストロサイトーマ細胞の増殖に対してサンプル濃度に関わらず略同じ程度に抑制する効果を呈することが認められた。 From this, it was confirmed that the placenta non-aqueous extract exhibited the effect of inhibiting the proliferation of human astrocytoma cells to approximately the same extent regardless of the sample concentration.
また、これら水系、非水系のプラセンタ抽出物についての結果を踏まえると、プラセンタ水系抽出物とプラセンタ非水系抽出物とでは、ヒトアストロサイトーマ細胞の増殖に対し100μg/mL以上のサンプル濃度であれば、略一定の抑制効果を示すことが確認された。 In addition, based on the results of these aqueous and non-aqueous placenta extracts, it was found that both the aqueous placenta extract and the non-aqueous placenta extract inhibited the growth of human astrocytoma cells at a sample concentration of 100 μg/mL or more. , was confirmed to exhibit a substantially constant inhibitory effect.
ここで、正常細胞とヒトアストロサイトーマ細胞とにおけるプラセンタ水系抽出物についての結果を比較すると、プラセンタ水系溶媒は、100μg/mLサンプルにおいて正常細胞を増殖させると共に神経芽細胞腫の増殖を抑制し、400μg/mLサンプルにおいて正常細胞の増殖に影響を与えることなく神経芽細胞腫の増殖を抑制するものと考えられる。 Here, when comparing the results for the aqueous placenta extract in normal cells and human astrocytoma cells, the aqueous placenta solvent inhibited the growth of neuroblastoma as well as the proliferation of normal cells in the 100 μg/mL sample. It appears to inhibit neuroblastoma growth without affecting normal cell growth in the 400 μg/mL sample.
また、正常細胞とヒトアストロサイトーマ細胞とにおけるプラセンタ非水系抽出物についての結果を比較すると、検討した全てのサンプル濃度において正常細胞の増殖を促進させた。特に、各サンプル濃度の細胞増殖抑制は、ヒトアストロサイトーマ細胞に対して略一定の効果を示した。 Also, comparing results for placental non-aqueous extracts on normal cells and human astrocytoma cells, all sample concentrations tested promoted normal cell proliferation. In particular, cell growth inhibition at each sample concentration showed a substantially constant effect on human astrocytoma cells.
本試験の結果を踏まえると、プラセンタ水系抽出物は、in vitroで培養された大腸がん細胞、子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫又はヒトアストロサイトーマ細胞に0μg/mLを超え400μg/mL以下の濃度のプラセンタ水系抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量で使用されれば、正常細胞を増殖させつつ、大腸がん細胞、子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫又はヒトアストロサイトーマ細胞の増殖を抑制する製剤における作用成分を提供することができる。 Based on the results of this study, the aqueous placenta extract exceeded 0 μg/mL and exceeded 400 μg/mL in in vitro cultured colon cancer cells, cervical cancer cells, neuroblastoma cells, or human astrocytoma cells. When used in an amount that can produce the same growth inhibitory effect as when exposed to the following concentrations of placenta aqueous extract, normal cells can grow and colorectal cancer cells and cervical cancer cells can grow. An active ingredient in a formulation that inhibits proliferation of cells, neuroblastoma or human astrocytoma cells can be provided.
また、プラセンタ水系抽出物は、in vitroで培養された大腸がん細胞、子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫又はヒトアストロサイトーマ細胞に400μg/mLを超える濃度のプラセンタ水系抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量で使用されれば、正常細胞の増殖に影響を与えることなく、大腸がん細胞、子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫又はヒトアストロサイトーマ細胞の増殖を抑制する製剤における作用成分を提供することができる。 In addition, in vitro cultured colon cancer cells, cervical cancer cells, neuroblastoma or human astrocytoma cells were exposed to a concentration of placenta aqueous extract exceeding 400 μg/mL. If it is used in an amount that can express an effect equivalent to the growth inhibitory effect on the body in vivo, it will not affect the growth of normal cells, colorectal cancer cells, cervical cancer cells, neuroblastoma or An active ingredient in a formulation that inhibits proliferation of human astrocytoma cells can be provided.
一方で、プラセンタ非水系抽出物は、in vitroで培養された大腸がん細胞、子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫又はヒトアストロサイトーマ細胞に0μg/mLを超える濃度のプラセンタ非水系抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量で使用されれば、正常細胞を増殖させつつ、大腸がん細胞、子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫又はヒトアストロサイトーマ細胞の増殖を抑制する製剤における作用成分を提供することができる。 On the other hand, the placenta non-aqueous extract was added to colon cancer cells, cervical cancer cells, neuroblastoma or human astrocytoma cells cultured in vitro at concentrations exceeding 0 μg/mL. If it is used in an amount that can express an effect equivalent to the growth inhibitory effect on exposure in vivo, it will proliferate normal cells while colon cancer cells, cervical cancer cells, neuroblastoma or human An active ingredient in a formulation that inhibits astrocytoma cell proliferation can be provided.
しかも、プラセンタ抽出物は、大腸がん細胞に使用されることにより、濃度依存的に増殖を抑制することができる。また、子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫又はヒトアストロサイトーマ細胞に使用されることにより、所定の濃度以上で略一定に抑制することができる。 Moreover, the placenta extract can suppress the growth of colon cancer cells in a concentration-dependent manner by being used in colon cancer cells. In addition, by using cervical cancer cells, neuroblastoma cells or human astrocytoma cells, it is possible to inhibit the cells almost constantly at a predetermined concentration or higher.
〔３．細胞増殖試験２〕
本試験では、がん細胞とサンプルとを共培養し、細胞生存率を測定した。
[3. Cell proliferation test 2]
In this test, cancer cells and samples were co-cultured and cell viability was measured.
本試験において、がん細胞は、ヒト乳がん細胞（MDA-MB-453）、ヒト肝がん細胞（HuH-7）、ヒト卵巣がん細胞（OVK18）、ヒト膵臓がん細胞（KLM-1）を採用した。 The cancer cells used in this study were human breast cancer cells (MDA-MB-453), human liver cancer cells (HuH-7), human ovarian cancer cells (OVK18), and human pancreatic cancer cells (KLM-1). It was adopted.
細胞培養の方法としては、ヒト乳がん細胞、ヒト肝がん細胞およびヒト膵臓がん細胞にはRPMI-1640（含1％SP、および10％FBS）を、ヒト卵巣がん細胞にはMEMα（含1％SP、および10％FBS）を用いて前培養を行った。 For the cell culture method, RPMI-1640 (containing 1% SP and 10% FBS) was used for human breast cancer cells, human liver cancer cells, and human pancreatic cancer cells, and MEMα (containing 1% SP and 10% FBS) was used for pre-culture.
その後、96穴プレートに0.5×104cells/wellの濃度で播種し、CO2インキュベータ(37℃、5％ CO2)にてオーバーナイト培養した。なお、ヒト乳がん細胞(MDA-MB-453)は、プレートをシールで密閉し37℃、0％CO2の環境下でオーバーナイト培養した。 After that, they were seeded in a 96-well plate at a density of 0.5×10 4 cells/well and cultured overnight in a CO 2 incubator (37° C., 5% CO 2 ). Human breast cancer cells (MDA-MB-453) were cultured overnight in an environment of 37°C, 0% CO 2 after sealing the plate with a seal.
オーバーナイト後、培地を除去し、サンプル溶液を含む血清培地（含む1％SP）に交換し、37℃、5％CO2（MDA-MB-453：37℃、0％CO2）で24時間培養した。なお、サンプル溶液は、水系および非水系ともに終濃度が5、50、100、500μg/mLとなるように添加した。 After overnight, remove the medium, replace with serum medium containing sample solution (containing 1% SP), and incubate at 37°C, 5% CO 2 (MDA-MB-453: 37°C, 0% CO 2 ) for 24 hours. cultured. The sample solutions were added to both aqueous and non-aqueous systems at final concentrations of 5, 50, 100 and 500 μg/mL.
細胞生存率の測定は、MTT法により行った。
MTT法では、24時間の培養が行われたプレートから培地を除去し、各ウェルにサンプル溶液を含まない無血清培地（含む1％SP）を100μL加えた。次いで、各ウェルにMTT染色液（5mg/mL in Phosphate-buffered saline（以下、PBSともいう。）)を20μLずつ添加し、CO2インキュベーターにて4時間静置培養した。ヒト乳がん細胞も、同様の操作を行い37℃、0％CO2の環境下で4時間静置培養した
Measurement of cell viability was performed by the MTT method.
In the MTT method, the medium was removed from the plate after culturing for 24 hours, and 100 μL of serum-free medium (containing 1% SP) containing no sample solution was added to each well. Then, 20 μL of MTT staining solution (5 mg/mL in Phosphate-buffered saline (hereinafter also referred to as PBS)) was added to each well, and static culture was performed in a CO 2 incubator for 4 hours. Human breast cancer cells were cultured statically for 4 hours at 37°C and 0% CO 2 in the same manner.
4時間の静置培養後、無血清培地を除去し、各ウェルに塩酸－イソプロパノール溶液を100μLずつ加え、ピペッティングにてホルマザンを完全に溶解させた。そして、マイクロプレートリーダーで570nmにおける吸光度を測定し、細胞生存率を算出した。 After static culture for 4 hours, the serum-free medium was removed, 100 μL of hydrochloric acid-isopropanol solution was added to each well, and formazan was completely dissolved by pipetting. Then, the absorbance at 570 nm was measured with a microplate reader to calculate the cell viability.
図６はヒト乳がん細胞のコントロールに対する細胞生存率を示したグラフであり、図６（ａ）はプラセンタ水系溶媒による細胞生存率を示し、図６（ｂ）はプラセンタ非水系抽出物による細胞生存率を示している。 FIG. 6 is a graph showing the cell viability of human breast cancer cells relative to the control, FIG. 6(a) shows the cell viability with placenta aqueous solvent, and FIG. 6(b) shows the cell viability with placenta non-aqueous extract. is shown.
図６（ａ）に示すように、プラセンタ水系抽出物に関し、5μg/mLサンプル、50μg/mLサンプル、100μg/mLサンプル、500μg/mLサンプルについて確認を行ったところ、検討された全ての濃度において細胞増殖抑制効果が認められた。特に、50μg/mLサンプル以上の濃度条件下では約60％の細胞増殖抑制効果が認められた。 As shown in Fig. 6(a), 5 µg/mL sample, 50 µg/mL sample, 100 µg/mL sample, and 500 µg/mL sample were confirmed for placenta aqueous extract. A growth inhibitory effect was observed. In particular, about 60% cell proliferation inhibitory effect was observed under conditions of concentrations of 50 μg/mL or higher samples.
このことより、プラセンタ水系抽出物には、ヒト乳がん細胞の増殖に対して所定濃度以上であれば略一定の抑制効果を呈することが明らかとなった。 From this, it was clarified that the aqueous placenta extract exhibits a substantially constant inhibitory effect on the proliferation of human breast cancer cells at a predetermined concentration or higher.
またこれに対し、プラセンタ非水系抽出物に関し各希釈サンプルについて確認を行ったところ、図６（ｂ）に示すように、検討された全ての濃度において細胞増殖を抑制する効果が認められた。特に、50μg/mLサンプル以上の濃度条件下では約60％の細胞増殖抑制効果が認められた。 On the other hand, when each diluted sample of the placenta non-aqueous extract was confirmed, as shown in FIG. In particular, about 60% cell proliferation inhibitory effect was observed under conditions of concentrations of 50 μg/mL or higher samples.
また、これら水系、非水系のプラセンタ抽出物についての結果を踏まえると、プラセンタ水系抽出物とプラセンタ非水系抽出物とでは、ヒト乳がん細胞の増殖に対し共に抑制し、特に50μg/mL以上の濃度であれば、略一定の抑制効果をそれぞれ示すと言える。 In addition, based on the results of these aqueous and non-aqueous placenta extracts, both the aqueous placenta extract and the non-aqueous placenta extract inhibited the growth of human breast cancer cells, especially at concentrations of 50 μg / mL or more. If there is, it can be said that a substantially constant inhibitory effect is exhibited.
ここで、本試験におけるヒト乳がん細胞と、細胞増殖試験１で試験した正常細胞とにおけるプラセンタ水系抽出物についての結果を比較検討すると、プラセンタ水系抽出物は低い濃度（10μg/mLサンプル）であればヒト乳がん細胞の増殖を抑制すると共に正常細胞を増殖させ、400μg/mL以上の濃度において正常細胞の増殖に影響を与えることなくヒト乳がん細胞の増殖を抑制するものと考えられる。 Here, when comparing the results of the placenta aqueous extract in the human breast cancer cells in this test and the normal cells tested in the cell proliferation test 1, it was found that the placenta aqueous extract had a low concentration (10 μg / mL sample). It is thought that it suppresses the proliferation of human breast cancer cells as well as the proliferation of normal cells, and suppresses the proliferation of human breast cancer cells without affecting the proliferation of normal cells at concentrations of 400 μg/mL or higher.
また、本試験におけるヒト乳がん細胞と、細胞増殖試験１で試験した正常細胞とにおけるプラセンタ非水系抽出物についての結果を比較検討すると、プラセンタ非水系抽出物は10μg/mL以上の濃度であればヒト乳がん細胞の増殖を抑制すると共に正常細胞を増殖させるものと考えられる。特に50μg/mL以上の濃度であれば、ヒト乳がん細胞の増殖を約60％抑制し、正常細胞の増殖を約20％促進させるものと考えられる。 In addition, when comparing the results of the placenta non-aqueous extract on the human breast cancer cells in this test and the normal cells tested in the cell proliferation test 1, it was found that the placenta non-aqueous extract had a concentration of 10 μg/mL or more. It is thought that it suppresses the proliferation of breast cancer cells and proliferates normal cells. In particular, at a concentration of 50 μg/mL or more, it is thought that the proliferation of human breast cancer cells is inhibited by about 60% and the proliferation of normal cells is promoted by about 20%.
図７はヒト肝がん細胞のコントロールに対する細胞生存率を示したグラフであり、図７（ａ）はプラセンタ水系溶媒による細胞生存率を示し、図７（ｂ）はプラセンタ非水系抽出物による細胞生存率を示している。 FIG. 7 is a graph showing the cell viability of human liver cancer cells relative to the control, FIG. 7(a) shows the cell viability with placenta aqueous solvent, and FIG. 7(b) shows cells with placenta non-aqueous extract. Viability is shown.
図７（ａ）に示すように、プラセンタ水系抽出物に関し、5μg/mLサンプル、50μg/mLサンプル、100μg/mLサンプル、500μg/mLサンプルについて確認を行ったところ、検討された全ての濃度において細胞増殖抑制効果が認められた。特に、サンプル濃度に依存してヒト肝がん細胞の増殖を強く抑制する効果が認められた。 As shown in Fig. 7(a), 5 µg/mL sample, 50 µg/mL sample, 100 µg/mL sample, and 500 µg/mL sample were confirmed for placenta aqueous extract. A growth inhibitory effect was observed. In particular, the effect of strongly suppressing the proliferation of human hepatoma cells was observed depending on the sample concentration.
このことより、プラセンタ水系抽出物には、ヒト肝がん細胞の増殖に対して濃度依存的に強い抑制効果を呈することが明らかとなった。 From this, it was clarified that the aqueous placenta extract exerts a concentration-dependent strong inhibitory effect on the proliferation of human liver cancer cells.
またこれに対し、プラセンタ非水系抽出物に関し各希釈サンプルについて確認を行ったところ、図７（ｂ）に示すように、検討された全ての濃度において細胞の増殖を抑制する効果が認められた。特に、50μg/mLサンプル以上の濃度条件下では約60％の細胞増殖抑制効果が認められた。 On the other hand, when each diluted sample of placenta non-aqueous extract was confirmed, as shown in FIG. In particular, about 60% cell proliferation inhibitory effect was observed under conditions of concentrations of 50 μg/mL or higher samples.
また、これら水系、非水系のプラセンタ抽出物についての結果を踏まえると、プラセンタ水系抽出物とプラセンタ非水系抽出物とでは、ヒト肝がん細胞の増殖に対し共に抑制する効果を呈すると言える。特に、サンプル濃度に依存してその抑制効果が高くなると言える。 In addition, based on the results of these aqueous and non-aqueous placenta extracts, it can be said that both the aqueous placenta extract and the non-aqueous placenta extract exhibit the effect of suppressing the proliferation of human liver cancer cells. In particular, it can be said that the suppression effect increases depending on the sample concentration.
ここで、本試験におけるヒト肝がん細胞と、細胞増殖試験１で試験した正常細胞とにおけるプラセンタ水系抽出物についての結果を比較検討すると、プラセンタ水系抽出物は低い濃度（10μg/mLサンプル）であればヒト肝がん細胞の増殖を抑制すると共に正常細胞を増殖させ、400μg/mL以上の濃度において正常細胞の増殖に影響を与えることなくヒト肝がん細胞の増殖を抑制するものと考えられる。 Here, when comparing the results of the placenta aqueous extract in the human hepatoma cells in this test and the normal cells tested in the cell proliferation test 1, the placenta aqueous extract was at a low concentration (10 μg/mL sample). If there is, it suppresses the proliferation of human hepatoma cells and also proliferates normal cells. .
また、本試験におけるヒト肝がん細胞と、細胞増殖試験１で試験した正常細胞とにおけるプラセンタ非水系抽出物についての結果を比較検討すると、プラセンタ非水系抽出物は10μg/mL以上の濃度であればヒト肝がん細胞の増殖を抑制すると共に正常細胞を増殖させるものと考えられる。特に50μg/mL以上の濃度であれば、ヒト乳がん細胞の増殖を約60％抑制し、正常細胞の増殖を約20％促進させるものと考えられる。 In addition, when comparing the results of the placenta non-aqueous extract on the human hepatoma cells in this test and the normal cells tested in the cell proliferation test 1, the placenta non-aqueous extract was found to be at a concentration of 10 μg/mL or more. In this case, it is thought that it suppresses the proliferation of human hepatoma cells and promotes the proliferation of normal cells. In particular, at a concentration of 50 μg/mL or more, it is thought that the proliferation of human breast cancer cells is inhibited by about 60% and the proliferation of normal cells is promoted by about 20%.
図８はヒト卵巣がん細胞のコントロールに対する細胞生存率を示したグラフであり、図８（ａ）はプラセンタ水系溶媒における細胞生存率を示し、図８（ｂ）はプラセンタ非水系抽出物による細胞生存率を示している。 FIG. 8 is a graph showing the cell viability of human ovarian cancer cells relative to the control, FIG. 8(a) shows the cell viability in placenta aqueous solvent, and FIG. 8(b) shows cells from placenta non-aqueous extract. Viability is shown.
図８（ａ）に示すように、プラセンタ水系抽出物に関し、5μg/mLサンプル、50μg/mLサンプル、100μg/mLサンプル、500μg/mLサンプルについて確認を行ったところ、検討された全ての濃度において約20％の細胞増殖抑制効果が認められた。 As shown in Fig. 8(a), when confirming the placenta aqueous extract with a 5 µg/mL sample, a 50 µg/mL sample, a 100 µg/mL sample, and a 500 µg/mL sample, approximately A 20% cell growth inhibitory effect was observed.
このことより、プラセンタ水系抽出物には、ヒト卵巣がん細胞の細胞増殖に対して5μg/mLサンプル以上であれば略一定の抑制効果を呈することが明らかとなった。 From this, it was clarified that the aqueous placenta extract exhibits a substantially constant inhibitory effect on cell proliferation of human ovarian cancer cells if the sample concentration is 5 μg/mL or more.
またこれに対し、プラセンタ非水系抽出物に関し各希釈サンプルについて確認を行ったところ、図８（ｂ）に示すように、検討された全ての濃度において細胞の増殖を抑制する効果が認められた。特に、50μg/mLサンプル以上の濃度条件下では約30％の細胞増殖抑制効果が認められた。 On the other hand, when each diluted sample of the placenta non-aqueous extract was confirmed, as shown in FIG. In particular, about 30% cell proliferation inhibitory effect was observed under conditions of concentrations of 50 μg/mL or higher.
また、これら水系、非水系のプラセンタ抽出物についての結果を踏まえると、プラセンタ水系抽出物とプラセンタ非水系抽出物とでは、ヒト卵巣がん細胞の増殖に対し共に抑制する効果を呈すると言える。特に、所定サンプル濃度以上であれば略一定の細胞増殖抑制効果をそれぞれ得ることができると言える。 In addition, based on the results of these aqueous and non-aqueous placenta extracts, it can be said that both the aqueous placenta extract and the non-aqueous placenta extract exhibit the effect of suppressing the growth of human ovarian cancer cells. In particular, it can be said that a substantially constant cell growth inhibitory effect can be obtained if the sample concentration is equal to or higher than a predetermined sample concentration.
ここで、本試験におけるヒト卵巣がん細胞と、細胞増殖試験１で試験した正常細胞とにおけるプラセンタ水系抽出物についての結果を比較検討すると、プラセンタ水系抽出物は低い濃度（10μg/mLサンプル）であればヒト卵巣がん細胞の増殖を抑制すると共に正常細胞を増殖させ、400μg/mL以上の濃度において正常細胞の増殖に影響を与えることなくヒト卵巣がん細胞の増殖を抑制するものと考えられる。 Here, when comparing the results of the placenta aqueous extract in the human ovarian cancer cells in this test and the normal cells tested in the cell proliferation test 1, the placenta aqueous extract was at a low concentration (10 μg/mL sample). If there is, it suppresses the proliferation of human ovarian cancer cells and also increases the proliferation of normal cells. .
また、本試験におけるヒト卵巣がん細胞と、細胞増殖試験１で試験した正常細胞とにおけるプラセンタ非水系抽出物についての結果を比較検討すると、プラセンタ非水系抽出物は10μg/mL以上の濃度であればヒト卵巣がん細胞の増殖を抑制すると共に正常細胞を増殖させるものと考えられる。特に50μg/mL以上の濃度であれば、ヒト卵巣がん細胞の増殖を約20％抑制し、正常細胞の増殖を約20％促進させるものと考えられる。 In addition, when comparing the results of the placenta non-aqueous extract on the human ovarian cancer cells in this test and the normal cells tested in the cell proliferation test 1, the placenta non-aqueous extract was found to be at a concentration of 10 μg/mL or more. It is thought that the growth of human ovarian cancer cells is inhibited and that normal cells grow. In particular, concentrations of 50 μg/mL or higher are thought to inhibit human ovarian cancer cell proliferation by about 20% and promote normal cell proliferation by about 20%.
図９はヒト膵臓がん細胞のコントロールに対する細胞生存率を示したグラフであり、図９（ａ）はプラセンタ水系溶媒による細胞生存率を示し、図９（ｂ）はプラセンタ非水系抽出物による細胞生存率を示している。 FIG. 9 is a graph showing the cell viability of human pancreatic cancer cells relative to the control, FIG. 9(a) shows the cell viability with placenta aqueous solvent, and FIG. 9(b) shows cells with placenta non-aqueous extract. Viability is shown.
図９（ａ）に示すように、プラセンタ水系抽出物に関し、5μg/mLサンプル、50μg/mLサンプル、100μg/mLサンプル、500μg/mLサンプルについて確認を行ったところ、5μg/mLサンプルでは約30％、500μg/mLサンプルでは約60％の細胞増殖抑制効果が認められた。 As shown in Fig. 9(a), regarding the placenta aqueous extract, 5 µg/mL sample, 50 µg/mL sample, 100 µg/mL sample, and 500 µg/mL sample were confirmed. , Approximately 60% of cytostatic effect was observed in the 500 μg/mL sample.
このことより、プラセンタ水系抽出物には、ヒト膵臓がん細胞の増殖に対して濃度依存的に強く抑制効果を呈することが明らかとなった。 From this, it was clarified that the aqueous placenta extract exerts a strong concentration-dependent inhibitory effect on the proliferation of human pancreatic cancer cells.
またこれに対し、プラセンタ非水系抽出物に関し、各希釈サンプルについて確認を行ったところ、図９（ｂ）に示すように、検討された全ての濃度において細胞の増殖を抑制する効果が認められた。特に、50μg/mLサンプル以上の濃度条件下では約60％の細胞増殖抑制効果が認められた。 On the other hand, regarding the placenta non-aqueous extract, each diluted sample was confirmed, and as shown in FIG. . In particular, about 60% cell proliferation inhibitory effect was observed under conditions of concentrations of 50 μg/mL or higher samples.
また、これら水系、非水系のプラセンタ抽出物についての結果を踏まえると、プラセンタ水系抽出物とプラセンタ非水系抽出物とでは、ヒト膵臓がん細胞に対し検討された全てのサンプル濃度で抑制効果を示すことが確認された。 In addition, based on the results of these aqueous and non-aqueous placenta extracts, both the aqueous placenta extract and the non-aqueous placenta extract exhibit an inhibitory effect on human pancreatic cancer cells at all sample concentrations examined. It was confirmed.
ここで、本試験におけるヒト膵臓がん細胞と、細胞増殖試験１で試験した正常細胞とにおけるプラセンタ水系抽出物についての結果を比較検討すると、プラセンタ水系抽出物は低い濃度（10μg/mLサンプル）であればヒト膵臓がん細胞の増殖を抑制すると共に正常細胞を増殖させ、400μg/mL以上の濃度において正常細胞の増殖に影響を与えることなくヒト膵臓がん細胞の増殖を抑制するものと考えられる。 Here, when comparing the results of the placenta aqueous extract in the human pancreatic cancer cells in this test and the normal cells tested in the cell proliferation test 1, the placenta aqueous extract was at a low concentration (10 μg/mL sample). If there is, it is thought to suppress the proliferation of human pancreatic cancer cells and to proliferate normal cells, and at concentrations of 400 μg/mL or higher, it suppresses the proliferation of human pancreatic cancer cells without affecting the proliferation of normal cells. .
また、本試験におけるヒト膵臓がん細胞と、細胞増殖試験１で試験した正常細胞とにおけるプラセンタ非水系抽出物についての結果を比較検討すると、プラセンタ非水系抽出物は10μg/mL以上の濃度であればヒト膵臓がん細胞の増殖を抑制すると共に正常細胞を増殖させるものと考えられる。特に50μg/mL以上の濃度であれば、ヒト乳がん細胞の増殖を約60％抑制し、正常細胞の増殖を約20％促進させるものと考えられる。 In addition, when comparing the results of the placenta non-aqueous extract on the human pancreatic cancer cells in this test and the normal cells tested in the cell proliferation test 1, it was found that the placenta non-aqueous extract had a concentration of 10 μg/mL or higher. In this case, it is thought that it suppresses the proliferation of human pancreatic cancer cells and promotes the proliferation of normal cells. In particular, at a concentration of 50 μg/mL or more, it is thought that the proliferation of human breast cancer cells is inhibited by about 60% and the proliferation of normal cells is promoted by about 20%.
本試験の結果を踏まえると、プラセンタ水系抽出物および非水系抽出物は、in vitroで培養されたヒト乳がん細胞、ヒト肝がん細胞、ヒト卵巣がん細胞又はヒト膵臓がん細胞にプラセンタ水系抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量で使用されれば、ヒト乳がん細胞、ヒト肝がん細胞、ヒト卵巣がん細胞又はヒト膵臓がん細胞の増殖を抑制する製剤における作用成分を提供することができる。 Based on the results of this study, the aqueous placenta extract and the non-aqueous placenta extract were added to in vitro cultured human breast cancer cells, human liver cancer cells, human ovarian cancer cells, or human pancreatic cancer cells. Proliferation of human breast cancer cells, human liver cancer cells, human ovarian cancer cells, or human pancreatic cancer cells, provided that the amount used is such that an effect equivalent to the growth inhibitory effect on exposure to the substance can be expressed in vivo. It is possible to provide an active ingredient in a formulation that inhibits
さらに、細胞増殖試験１で示した正常細胞の増殖を促進する結果を考慮すれば、プラセンタ水系抽出物は、in vitroで培養されたヒト乳がん細胞、ヒト肝がん細胞、ヒト卵巣がん細胞又はヒト膵臓がん細胞に0μg/Lを超え500μg/L以下の濃度のプラセンタ水系抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量で使用されれば、正常細胞を増殖させつつ、ヒト乳がん細胞、ヒト肝がん細胞、ヒト卵巣がん細胞又はヒト膵臓がん細胞の増殖を抑制する製剤における作用成分を提供することができるとも言える。 Furthermore, considering the results of promoting the proliferation of normal cells shown in Cell Proliferation Test 1, placenta aqueous extract can be used for in vitro cultured human breast cancer cells, human liver cancer cells, human ovarian cancer cells or If human pancreatic cancer cells are exposed to placenta aqueous extract at a concentration of more than 0 μg/L and 500 μg/L or less, the same effect as suppressing proliferation of normal cells can be expressed in vivo. It can also be said that it is possible to provide an active ingredient in a preparation that suppresses the proliferation of human breast cancer cells, human liver cancer cells, human ovarian cancer cells, or human pancreatic cancer cells while allowing the proliferation of human cancer cells.
また、プラセンタ水系抽出物は、in vitroで培養されたヒト乳がん細胞、ヒト肝がん細胞、ヒト卵巣がん細胞又はヒト膵臓がん細胞に500μg/Lを超える濃度のプラセンタ水系抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量で使用されれば、正常細胞の増殖に影響を与えることなく、ヒト乳がん細胞、ヒト肝がん細胞、ヒト卵巣がん細胞又はヒト膵臓がん細胞の増殖を抑制する製剤における作用成分を提供することができるとも言える。 In addition, the aqueous placenta extract was exposed to in vitro cultured human breast cancer cells, human liver cancer cells, human ovarian cancer cells, or human pancreatic cancer cells at concentrations exceeding 500 μg/L. Human breast cancer cells, human liver cancer cells, human ovarian cancer cells or human breast cancer cells, human liver cancer cells, human ovarian cancer cells, or It can also be said that it is possible to provide an active ingredient in a preparation that suppresses the proliferation of human pancreatic cancer cells.
一方で、プラセンタ非水系抽出物は、in vitroで培養されたヒト乳がん細胞、ヒト肝がん細胞、ヒト卵巣がん細胞又はヒト膵臓がん細胞に0μg/Lを超える濃度のプラセンタ非水系抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量で使用されれば、正常細胞を増殖させつつ、ヒト乳がん細胞、ヒト肝がん細胞、ヒト卵巣がん細胞又はヒト膵臓がん細胞の増殖を抑制する製剤における作用成分を提供することができる。 On the other hand, the placenta non-aqueous extract was added to in vitro cultured human breast cancer cells, human liver cancer cells, human ovarian cancer cells, or human pancreatic cancer cells at concentrations exceeding 0 μg/L. When used in an amount that can express an effect equivalent to the growth inhibitory effect in vivo when exposed to, human breast cancer cells, human liver cancer cells, human ovarian cancer cells, or human It is possible to provide an active ingredient in a formulation that suppresses the proliferation of pancreatic cancer cells.
しかも、プラセンタ抽出物は、大腸がん細胞に使用されることにより、濃度依存的に増殖を抑制することができる。また、子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫又はヒトアストロサイトーマ細胞に使用されることにより、所定の濃度以上で略一定に抑制することができる。 Moreover, the placenta extract can suppress the growth of colon cancer cells in a concentration-dependent manner by being used in colon cancer cells. Moreover, by using cervical cancer cells, neuroblastoma cells, or human astrocytoma cells, it is possible to inhibit the cells at a predetermined concentration or higher to a substantially constant level.
〔４．総括〕
プラセンタ抽出物は、細胞増殖試験１の結果（図２から図５）に示すように、大腸がん細胞、子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫、ヒトアストロサイトーマ細胞に対して増殖抑制をする効果を備えている。また、細胞増殖試験２の結果（図６から図９）に示すように、ヒト乳がん細胞、ヒト肝がん細胞、ヒト卵巣がん細胞、ヒト膵臓がんに対して増殖抑制をする効果を備えている。
[4. Summary]
As shown in the results of Cell Proliferation Test 1 (Figs. 2 to 5), the placenta extract suppresses the proliferation of colon cancer cells, cervical cancer cells, neuroblastoma cells, and human astrocytoma cells. It has the effect of In addition, as shown in the results of Cell Proliferation Test 2 (Figs. 6 to 9), it has the effect of suppressing the growth of human breast cancer cells, human liver cancer cells, human ovarian cancer cells, and human pancreatic cancer. ing.
したがって、プラセンタ抽出物は、がん細胞の増殖抑制をする効果を備えている。換言すれば、がん細胞の増殖抑制を目的としてプラセンタ抽出物を使用することができると言える。 Therefore, the placenta extract has the effect of suppressing the proliferation of cancer cells. In other words, it can be said that the placenta extract can be used for the purpose of suppressing the proliferation of cancer cells.
また、プラセンタ抽出物は、細胞増殖試験１の結果（図１）に示すように、正常細胞に対して増殖を促進させる効果を備えている。 In addition, the placenta extract has the effect of promoting proliferation of normal cells, as shown in the results of Cell Proliferation Test 1 (Fig. 1).
したがって、プラセンタ抽出物は、正常細胞を増殖させつつ、がん細胞の増殖を抑制する効果を備えている。換言すれば、正常細胞を増殖させつつ、がん細胞の増殖を抑制する製剤における作用成分としてプラセンタ抽出物を使用することができると言える。 Therefore, the placenta extract has the effect of suppressing the proliferation of cancer cells while allowing normal cells to proliferate. In other words, it can be said that the placenta extract can be used as an active ingredient in a preparation that suppresses the proliferation of cancer cells while allowing normal cells to proliferate.
また、プラセンタ水系抽出物は、細胞試験１の結果（図１）に示すように、10μg/mLサンプルにおいては約20％、100μg/mLサンプルにおいては約15％の細胞増殖促進効果が認められ、400μg/mLサンプルにおいてはコントロールと比して有意な促進効果が認められなかった。すなわち、プラセンタ水系抽出物は、正常細胞に対して低濃度であるほど細胞の増殖を促進させ、高濃度であるほど細胞の増殖に影響を与えない傾向を備えている。 In addition, as shown in the results of cell test 1 (Fig. 1), the placenta aqueous extract has a cell growth promoting effect of about 20% in the 10 µg/mL sample and about 15% in the 100 µg/mL sample. No significant stimulatory effect was observed in the 400 μg/mL sample compared to controls. That is, the aqueous placenta extract tends to promote cell proliferation at lower concentrations than normal cells, and to have less effect on cell proliferation at higher concentrations.
したがって、プラセンタ水系抽出物の使用は、正常細胞に曝すプラセンタ水系抽出物の濃度を調整することにより、がん細胞の増殖を抑制させながらも、正常細胞への影響を異とする使用方法を提供することができる。 Therefore, the use of the aqueous placenta extract provides a method of use that suppresses the proliferation of cancer cells while exerting different effects on normal cells by adjusting the concentration of the aqueous placenta extract exposed to normal cells. can do.
具体的には、プラセンタ抽出物の使用は、プラセンタ抽出物は水を主成分とする水系溶媒により抽出された抽出物であって、in vitroで培養されたがん細胞に0μg/mLを超え400μg/mL以下の濃度の前記抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量を製剤１回分の用量中に含有させることを特徴とすることにより、正常細胞の増殖を促進させながら、がん細胞の増殖を抑制することができる。 Specifically, the use of the placenta extract is an extract extracted with an aqueous solvent containing water as the main component, and the in vitro cultured cancer cells exceed 0 μg/mL and 400 μg /mL or less concentration of the extract is characterized by containing an amount that can express in vivo an effect equivalent to the growth inhibitory effect when exposed to the above-mentioned extract at a concentration of 1 dose of normal cells. It is possible to suppress the proliferation of cancer cells while promoting proliferation.
また、プラセンタ抽出物の使用は、プラセンタ抽出物は水を主成分とする水系溶媒により抽出された抽出物であって、in vitroで培養されたがん細胞に400μg/mLを超える濃度の前記抽出物を曝した際に及ぼす増殖抑制効果と同等の効果が生体内で発現できる量を前記製剤１回分の用量中に含有させることを特徴とすることにより、正常細胞の増殖に影響を与えることなく、がん細胞の増殖を抑制することができる。 In addition, the use of the placenta extract is an extract extracted with an aqueous solvent containing water as a main component, and the extract is applied to cancer cells cultured in vitro at a concentration exceeding 400 μg / mL. A single dose of the preparation contains an amount that can exhibit an effect equivalent to the growth inhibitory effect when exposed to a substance in vivo, without affecting the growth of normal cells. , can suppress the proliferation of cancer cells.
また、プラセンタ抽出物（特に、プラセンタ水系抽出物）は、細胞増殖試験１（図２）および細胞増殖試験２（図７、図９）に示すように、大腸がん細胞、ヒト肝がん細胞又はヒト膵臓がん細胞に対して濃度依存的に強く増殖を抑制する効果を備えている。 In addition, the placenta extract (particularly, placenta water-based extract), colon cancer cells, human liver cancer cells, as shown in cell proliferation test 1 (Fig. 2) and cell proliferation test 2 (Fig. 7, Fig. 9) Alternatively, it has the effect of strongly suppressing the growth of human pancreatic cancer cells in a dose-dependent manner.
したがって、プラセンタ抽出物の使用は、大腸がん細胞、ヒト肝がん細胞又はヒト膵臓がん細胞に使用することを特徴とすることにより、プラセンタ抽出物の濃度に応じて大腸がん細胞、ヒト肝がん細胞又はヒト膵臓がん細胞の増殖への影響を調整することができる。 Therefore, the use of the placenta extract is characterized in that it is used for colon cancer cells, human liver cancer cells or human pancreatic cancer cells. Effects on proliferation of liver cancer cells or human pancreatic cancer cells can be modulated.
また、プラセンタ抽出物（特に、プラセンタ水系抽出物）は、細胞増殖試験１（図３から図５）および細胞増殖試験２（図６、図８）に示すように、子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫、ヒトアストロサイトーマ細胞、ヒト乳がん細胞、ヒト卵巣がん細胞に対して濃度に関係なく略一定の抑制効果をそれぞれ示す効果を備えている。 In addition, placenta extracts (especially, placenta aqueous extracts) were used in cervical cancer cells, nerve It has the effect of exhibiting a substantially constant inhibitory effect on blastoma cells, human astrocytoma cells, human breast cancer cells, and human ovarian cancer cells, regardless of concentration.
したがって、プラセンタ抽出物の使用は、子宮頸がん細胞、神経芽細胞腫、ヒトアストロサイトーマ細胞、ヒト乳がん細胞、ヒト卵巣がん細胞に使用することを特徴とすることにより、プラセンタ抽出物が所定濃度以上であれば略一定の抑制効果をそれぞれ得ることができる。 Therefore, the use of the placenta extract is characterized in that it is used for cervical cancer cells, neuroblastoma cells, human astrocytoma cells, human breast cancer cells, and human ovarian cancer cells. If the concentration is equal to or higher than the predetermined concentration, a substantially constant inhibitory effect can be obtained.
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