JP2022014636A - Cnt及びフルクトースデヒドロゲナーゼの電極への利用 - Google Patents
Cnt及びフルクトースデヒドロゲナーゼの電極への利用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2022014636A JP2022014636A JP2020117072A JP2020117072A JP2022014636A JP 2022014636 A JP2022014636 A JP 2022014636A JP 2020117072 A JP2020117072 A JP 2020117072A JP 2020117072 A JP2020117072 A JP 2020117072A JP 2022014636 A JP2022014636 A JP 2022014636A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- fructose
- electrode
- fructose dehydrogenase
- carbon nanotubes
- dehydrogenase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 title claims abstract description 100
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 title claims abstract description 84
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 title claims abstract description 84
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 title claims abstract description 51
- 239000002041 carbon nanotube Substances 0.000 claims abstract description 51
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 43
- 229910021393 carbon nanotube Inorganic materials 0.000 claims abstract description 41
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims abstract description 18
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 6
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 15
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 15
- NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M sodium cholate Chemical group [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M 0.000 claims description 15
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 15
- 108010051210 beta-Fructofuranosidase Proteins 0.000 claims description 11
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 claims description 11
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 9
- 239000002109 single walled nanotube Substances 0.000 claims description 9
- 229910021392 nanocarbon Inorganic materials 0.000 abstract description 10
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 20
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 17
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 17
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 15
- 238000002484 cyclic voltammetry Methods 0.000 description 12
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 7
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 5
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 5
- 239000001573 invertase Substances 0.000 description 5
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 description 5
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001069 Raman spectroscopy Methods 0.000 description 4
- XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N Zinc monoxide Chemical compound [Zn]=O XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 229920000139 polyethylene terephthalate Polymers 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920000557 Nafion® Polymers 0.000 description 3
- 229910021607 Silver chloride Inorganic materials 0.000 description 3
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 3
- HKZLPVFGJNLROG-UHFFFAOYSA-M silver monochloride Chemical compound [Cl-].[Ag+] HKZLPVFGJNLROG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000010408 sweeping Methods 0.000 description 3
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 3
- 229920002799 BoPET Polymers 0.000 description 2
- 241000589236 Gluconobacter Species 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 239000006173 Good's buffer Substances 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 2
- 150000001449 anionic compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000004630 atomic force microscopy Methods 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000001767 cationic compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011787 zinc oxide Substances 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- IDOQDZANRZQBTP-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(2,4,4-trimethylpentan-2-yl)phenoxy]ethanol Chemical compound CC(C)(C)CC(C)(C)C1=CC=CC=C1OCCO IDOQDZANRZQBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JYCQQPHGFMYQCF-UHFFFAOYSA-N 4-tert-Octylphenol monoethoxylate Chemical compound CC(C)(C)CC(C)(C)C1=CC=C(OCCO)C=C1 JYCQQPHGFMYQCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- XJLXINKUBYWONI-NNYOXOHSSA-N NADP zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920001219 Polysorbate 40 Polymers 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004929 Triton X-114 Polymers 0.000 description 1
- 229920004894 Triton X-305 Polymers 0.000 description 1
- 229920004896 Triton X-405 Polymers 0.000 description 1
- 238000004847 absorption spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 239000004020 conductor Substances 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006356 dehydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- GVGUFUZHNYFZLC-UHFFFAOYSA-N dodecyl benzenesulfonate;sodium Chemical compound [Na].CCCCCCCCCCCCOS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 GVGUFUZHNYFZLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000446 fuel Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- AMGQUBHHOARCQH-UHFFFAOYSA-N indium;oxotin Chemical compound [In].[Sn]=O AMGQUBHHOARCQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000002048 multi walled nanotube Substances 0.000 description 1
- 229950006238 nadide Drugs 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 1
- 229910000510 noble metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000123 paper Substances 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920006254 polymer film Polymers 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 239000000249 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Substances 0.000 description 1
- 235000010483 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001818 polyoxyethylene sorbitan monostearate Substances 0.000 description 1
- 235000010989 polyoxyethylene sorbitan monostearate Nutrition 0.000 description 1
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 1
- 229940101027 polysorbate 40 Drugs 0.000 description 1
- 229940113124 polysorbate 60 Drugs 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 229940068965 polysorbates Drugs 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000010970 precious metal Substances 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000027756 respiratory electron transport chain Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940083575 sodium dodecyl sulfate Drugs 0.000 description 1
- 229940080264 sodium dodecylbenzenesulfonate Drugs 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
【課題】ナノカーボンを電極に利用する技術をフルクトースデヒドロゲナーゼを用いた電極に応用した電極を提供すること。【解決手段】金属基板上にカーボンナノチューブ及びフルクトースデヒドロゲナーゼを含む層を有する、電極。【選択図】なし
Description
CNTを電極に応用する技術分野について開示される。
ナノカーボンは電気の伝導率が高いことから他の物質との電子伝達を行う導電材料としての応用が進んでいる。例えばナノカーボンをカーボンと樹脂および有機溶剤からなるインクに混合し基板上に印刷してバイオセンサ用の電極として用いることが提案されている(特許文献1)。また、ナノカーボンの一種であるカーボンナノチューブは過酸化物を測定するセンサに用いられたり(特許文献2)、酵素とともにフィルム状に成形し、センサや燃料電池の電極として用いられたりしている(特許文献3)。
ナノカーボンを電極に利用する技術をフルクトースデヒドロゲナーゼを用いた電極に応用した電極を提供することが1つの課題である。
斯かる課題を解決する手段として、下記を包含する発明が提供される。
項1.
金属基板上にカーボンナノチューブ及びフルクトースデヒドロゲナーゼを含む層を有する、電極。
項2.
該カーボンナノチューブが単層カーボンナノチューブである、項1に記載の電極。
項3.
該カーボンナノチューブの平均直径が2nm未満である、項1又は2に記載の電極。
項4.
該層が分散剤を更に含む、項1~3のいずれかに記載の電極。
項5.
該分散剤がコール酸ナトリウムである、項4に記載の電極。
項6.
該層がβ-D-フルクトフラノシダーゼを更に含む、項1~5のいずれかに記載の電極。
項7.
項1~6のいずれかに記載の電極を備えたセンサ。
項8.
フルクトース測定用である、項7に記載のセンサ。
項9.
該層がβ-D-フルクトフラノシダーゼを含み、スクロース測定用である、項7に記載のセンサ。
項10.
項1~6のいずれかに記載の電極または項7~9のいずれかに記載のセンサを用いてフルクトースを検出する方法。
項11.
該層がβ-D-フルクトフラノシダーゼを含む、項7~9のいずれかに記載のセンサを用いてスクロースを測定する方法。
項1.
金属基板上にカーボンナノチューブ及びフルクトースデヒドロゲナーゼを含む層を有する、電極。
項2.
該カーボンナノチューブが単層カーボンナノチューブである、項1に記載の電極。
項3.
該カーボンナノチューブの平均直径が2nm未満である、項1又は2に記載の電極。
項4.
該層が分散剤を更に含む、項1~3のいずれかに記載の電極。
項5.
該分散剤がコール酸ナトリウムである、項4に記載の電極。
項6.
該層がβ-D-フルクトフラノシダーゼを更に含む、項1~5のいずれかに記載の電極。
項7.
項1~6のいずれかに記載の電極を備えたセンサ。
項8.
フルクトース測定用である、項7に記載のセンサ。
項9.
該層がβ-D-フルクトフラノシダーゼを含み、スクロース測定用である、項7に記載のセンサ。
項10.
項1~6のいずれかに記載の電極または項7~9のいずれかに記載のセンサを用いてフルクトースを検出する方法。
項11.
該層がβ-D-フルクトフラノシダーゼを含む、項7~9のいずれかに記載のセンサを用いてスクロースを測定する方法。
フルクトースデヒドロゲナーゼを用いた糖の検出を感度良く行うことができる。
電極は、金属基板上にカーボンナノチューブ(「CNT」とも称する。)及び/又はフルクトースデヒドロゲナーゼを含む層を有することが好ましい。CNTとフルクトースデヒドロゲナーゼとは、単一の層に存在しても別々の層に存在してもよい。一実施形態において、CNT及びフルクトースデヒドロゲナーゼは、2つの層に明確に分離できない層(実質的に単一の層)に存在することが好ましい。
CNTの種類は特に制限されず、例えば、単層CNT、二層CNT、三層以上の多層CNTであってもよい。一実施形態において、CNTは、良好な検出感度を実現するため、単層CNTであることが好ましい。一実施形態において、CNTの直径は、2nm未満であることが好ましく、1.5nm以下が好ましく、1.4nm以下が好ましく、1.3nm以下が好ましく、1.2nm以下が好ましい。一実施形態において、CNTの直径は、0.1nm以上、0.5nm以上、0.6nm以上、0.7nm以上、又は0.8nm以上が好ましい。一実施形態において、CNTの長さは0.1~1000μmであることが好ましい。CNTは市販されているものを購入して使用してもよく、合成して使用してもよい。CNTの製造方法は公知である。カーボンナノチューブの直径は、ラマン分光法、光吸収スペクトル、近赤外蛍光分光法、透過電子顕微鏡(TEM)又は原子間力顕微鏡(AFM)によって測定することができる。
フルクトースデヒドロゲナーゼは、フルクトースの脱水素反応を触媒する活性を有し、その反応に伴って、電子をCNTを介して電極に受け渡すことができる酵素であれば、その種類は制限されない。フルクトースデヒドロゲナーゼがフルクトースを酸化する際に生じる電子の量を測定することにより、試料中のフルクトースの量を測定することができる。よって、該層が積層された金属基板または電極を備えたセンサを用いて試料中のフルクトースを検出し、その量を測定することができる。
一実施形態において、フルクトースデヒドロゲナーゼは、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドまたはニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸以外の補酵素を持つものであることが好ましい。フルクトースデヒドロゲナーゼの由来については特定されないが、一実施形態においてグルコノバクター由来または酢酸菌由来のものが好ましい。
該層に含有させる酵素の量は任意であり、目的に応じて設定できるが、例えば、0.1~100U/mm2とすることができる。ここで1Uは1分間に1マイクロモルのフルクトースが酸化される酵素量である。
金属基板は、電極として用いることができるものであれば特に制限されない。金属電極は、絶縁性基板に金属膜が固定されたものであることが好ましい。金属膜は、例えば、白金、金、パラジウムなどの貴金属、カーボン、銅、アルミニウム、ニッケル、チタン、ITO(Indium Tin Oxide:酸化インジウム錫)、又はZnO(酸化亜鉛)などで形成することができる。一実施形態において、金属膜は、白金、金、パラジウムなどの貴金属で形成されていることが好ましい。絶縁性の基板としては、例えば、プラスチック(例えば、PET)、感光性材料、紙、ガラス、セラミック、または、生分解性材料などで形成されたものが挙げられる。このような金属電極は公知である。
金属基板上のCNT及び/又はフルクトースデヒドロゲナーゼを含む層は、CNTが該層内で分散した状態で存在するように、分散剤を含有することが好ましい。分散剤は、CNTの凝集(bundling)を防止することができる化合物であれば特に限定されない。分散剤としては、例えば、アニオン系化合物、カチオン系化合物およびノニオン系化合物から選択される少なくとも1種の化合物を用いることができる。
アニオン系化合物としては、例えば、コール酸ナトリウム、ドデシル硫酸ナトリウム、またはドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムが挙げられる。カチオン系化合物としては、例えば、セチルトリメチルアンモニウムブロミドが挙げられる。ノニオン系化合物としては、オクチルフェノールエトキシレート(ダウケミカル社製のTriton-X-100、Triton-X-114、Triton-X-305、Triton-X-405など)、または、ポリソルベート類(ポリソルベート20(Tween20)、ポリソルベート40(Tween40)、ポリソルベート60(Tween60)、ポリソルベート80(Tween80)など)が挙げられる。一実施形態において好ましい分散剤は、コール酸ナトリウムである。
一実施形態において、分散剤(例えば、コール酸ナトリウム)は、0.25w/v%~0.75w/v%の濃度で液体に溶解して使用することが好ましい。
金属基板上にCNT及びフルクトースデヒドロゲナーゼを含む層を形成することは、例えば、適当な液体にCNT及びフルクトースデヒドロゲナーゼ(並びに、必要に応じて分散剤等)を添加し、これらが分散した液体を基板上に滴下し、乾燥させることで実施することができる。CNT及びフルクトースデヒドロゲナーゼを分散させる液体は特に制限されないが、水またはpH2~pH10の緩衝液であることが望ましく、例えば超純水、グリシン緩衝液、酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、グッド緩衝液、及びトリス緩衝液等が挙げられる。一実施形態において、CNTを適当な液体(好ましくは、分散剤を含む)に添加し、音波破砕機等を用いて分散させ、それを金属基板上に滴下し、乾燥させた後、フルクトースデヒドロゲナーゼを含有する液体をその上に滴下し、乾燥させて、CNT及びフルクトースデヒドロゲナーゼを含む該層を形成することが好ましい。
該層には、フルクトースデヒドロゲナーゼの活性やフルクトースデヒドロゲナーゼとCNT及びCNTと金属基板の間の電子の授受を阻害しない限り、任意の他の成分を含むことができる。他の成分としては、例えば、フルクトースデヒドロゲナーゼ以外の酵素、pH緩衝剤(例えばリン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、及びグッド緩衝液等)、糖(ショ糖、乳糖等)、塩(リン酸塩、硫酸アンモニウム等)、アミノ酸(グリシン、アラニン、セリン等))等を挙げることができる。これら酵素以外の物質は、酵素の安定化剤として機能する場合がある。
一実施形態において、該層は、フルクトースデヒドロゲナーゼに加えて、β-D-フルクトフラノシダーゼを含むことが好ましい。β-D-フルクトフラノシダーゼは、サッカラーゼ、インベルターゼ、インバーターゼ、又はインベルチンとも称され、スクロースを加水分解し、フルクトースを遊離する活性を有する。よって、β-D-フルクトフラノシダーゼでスクロースを加水分解し、遊離したフルクトースをフルクトースデヒドロゲナーゼが更に脱水素することによって生じた電子の量を測定することにより、試料中に存在するスクロースの量を測定することが可能である。このようにして、フルクトースデヒドロゲナーゼとβ-D-フルクトフラノシダーゼを含む層が積層された金属基板または電極を備えたセンサをスクロース測定用のセンサとして用いることができる。
一実施形態において、金属基板の表面には、上記層を形成し易くするために、親水性高分子膜が形成されていてもよい。親水性高分子膜としては、例えば、アセトニトリルプラズマ重合膜、カルボキシメチルセルロースやメチルセルロールなどの親水性高分子、または、ポリビニルピロリドンなどの両親媒性高分子からなる膜などが挙げられる。
センサは上記の金属基板または電極を備えることが好ましい。上記電極は、通常、センサ中の作用電極となる。センサは、更に、カウンター電極及び参照電極を備えることが好ましい。このようなセンサの構成は、当該技術分野において公知である。また、センサは、ポテンションスタット及び電流検出回路等のバイオセンサが通常備える構成を備えることができる。
上述の電極またはそれを備えたセンサを用いてフルクトースを精度良く検出することができる。フルクトースは任意の物質に由来し得、例えば、他の糖類(例えば、スクロース)に由来し得る。センサは、通常測定器に装着されて使用される。測定器に装着されたセンサに試料(血液など)を供給すると、試料中の測定対象物質(フルクトース)とフルクトースデヒドロゲナーゼが反応し、活性中心近傍に存在するCNTへ、トンネル効果によって電子が伝達され、電流が生じる。センサの作用極および対極と電気的に接続された測定器により、この電流を計測することで、試料に含まれる測定対象物質の定量が可能である。作用極と対極の間に電圧を印加した際に流れる電流は、分析対象物濃度と相関がある。電流値と予め作成した検量線から分析対象物の濃度を決定することができる。
以下、実施例により本発明についてさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに制限されるものではない。
実施例1
以下の(1)~(5)のカーボンナノチューブのそれぞれの粉末30mgを別個の0.5w/v%コール酸ナトリウム水溶液に懸濁し30mLの懸濁液を5種類調製した。
(1)単層カーボンナノチューブ、直径:0.8nm(中央値),0.7-0.9nm(測定法:近赤外蛍光分光法)(SG65i:Sigma-Aldrich)
(2)単層カーボンナノチューブ、直径:1.0nm(中央値),0.5-1.5nm(測定法:ラマン分光法(RBM))(MEIJO eDIPS EC1.0:(株)名城ナノカーボン)
(3)単層カーボンナノチューブ、直径:1.5nm(中央値),1.2-1.7nm(測定法:ラマン分光法(RBM))(MEIJO eDIPS EC1.5:(株)名城ナノカーボン)
(4)単層カーボンナノチューブ、直径:2.0nm(中央値),1.5-2.5nm(測定法:ラマン分光法(RBM))(MEIJO eDIPS EC2.0:(株)名城ナノカーボン)
(5)多層カーボンナノチューブ、直径:9.5nm(中央値),5-15nm(測定法:TEM)(NC7000:Nanocyl)
以下の(1)~(5)のカーボンナノチューブのそれぞれの粉末30mgを別個の0.5w/v%コール酸ナトリウム水溶液に懸濁し30mLの懸濁液を5種類調製した。
(1)単層カーボンナノチューブ、直径:0.8nm(中央値),0.7-0.9nm(測定法:近赤外蛍光分光法)(SG65i:Sigma-Aldrich)
(2)単層カーボンナノチューブ、直径:1.0nm(中央値),0.5-1.5nm(測定法:ラマン分光法(RBM))(MEIJO eDIPS EC1.0:(株)名城ナノカーボン)
(3)単層カーボンナノチューブ、直径:1.5nm(中央値),1.2-1.7nm(測定法:ラマン分光法(RBM))(MEIJO eDIPS EC1.5:(株)名城ナノカーボン)
(4)単層カーボンナノチューブ、直径:2.0nm(中央値),1.5-2.5nm(測定法:ラマン分光法(RBM))(MEIJO eDIPS EC2.0:(株)名城ナノカーボン)
(5)多層カーボンナノチューブ、直径:9.5nm(中央値),5-15nm(測定法:TEM)(NC7000:Nanocyl)
これらのカーボンナノチューブ懸濁液を18℃でチップ型超音波破砕機(Branson Sonifier 450D:日本エマソン株式会社)を用いて出力30%、1時間処理することによりカーボンナノチューブを分散させた。これらの超音波処理液を210,000g、2時間の超遠心にかけ上清の80%を回収した。これらの回収液をアミコンウルトラ遠心式フィルターユニット 100k(Merck)を用いて濃縮し、0.75~1.5mg/mLのカーボンナノチューブ分散液を得た。
PETシートに金を蒸着させ、9mm2の作用電極部位を持つ電極チップを作製した(図1)。上記(1)~(5)のカーボンナノチューブの分散液又は0.5w/v%コール酸ナトリウム水溶液のいずれかを5μL作用電極部位に滴下し乾燥させた。乾燥後、50mMクエン酸緩衝液(pH5.3)に溶解したフルクトースデヒドロゲナーゼ(東洋紡(株)製、2U/μL、グルコノバクター由来)5μLを作用電極部位に滴下し乾燥させた。乾燥後、作用電極部位に2%ナフィオン液を5μL滴下し、乾燥させ、カーボンナノチューブ及びフルクトースデヒドロゲナーゼを作用電極に固定化した。
電気化学アナライザー(ALS/CHI 660B:ビー・エー・エス社)の作用極に上記で作製した電極チップ、参照電極に銀/塩化銀電極、対極に白金線をセットした。この3電極をフルクトースを含む50mMクエン酸緩衝液(pH5.3)に浸漬し、サイクリックボルタンメトリーによる測定を実施した。0mM、10mM、20mM、又は48mMのフルクトース濃度についてそれぞれ測定したサイクリックボルタモグラムを図2(直径0.8nmのカーボンナノチューブ)、図3(直径:1.0nmのカーボンナノチューブ)、図4(直径:1.5nmのカーボンナノチューブ)、図5(直径2.0nmのカーボンナノチューブ)、図6(直径9.5nmのカーボンナノチューブ)、図7(コール酸ナトリウム水溶液;カーボンナノチューブなし)に示す。これらのサイクリックボルタモグラムにおいて-0.8Vから+0.8Vへ掃引する際の+0.6Vの電流値は以下の通りであった。
以上の結果より、フルクトースの測定には、単層カーボンナノチューブが好ましく、カーボンナノチューブの直径が2.0nm未満の場合により精度良くフルクトースの測定が可能であることが確認された。
実施例2
直径1.0nm(中央値)の単層カーボンナノチューブ(MEIJO eDIPS EC1.0:(株)名城ナノカーボン)の粉末30mgを0.25w/v%、0.5w/v%、又は1w/v%のコール酸ナトリウム水溶液に懸濁し30mLの懸濁液を3種類調製した。
直径1.0nm(中央値)の単層カーボンナノチューブ(MEIJO eDIPS EC1.0:(株)名城ナノカーボン)の粉末30mgを0.25w/v%、0.5w/v%、又は1w/v%のコール酸ナトリウム水溶液に懸濁し30mLの懸濁液を3種類調製した。
これらのカーボンナノチューブ懸濁液を18℃でチップ型超音波破砕機(Branson Sonifier 450D:日本エマソン株式会社)を用いて出力30%、1時間処理することによりカーボンナノチューブを分散させた。これらの超音波処理液を210,000g、2時間の超遠心にかけ上清の80%を回収した。これらの回収液をアミコンウルトラ遠心式フィルターユニット 100k(Merck)を用いて濃縮し、0.75~1.5mg/mLのカーボンナノチューブ分散液を得た。
実施例1と同様に、PETシートに金を蒸着させ、9mm2の作用電極部位を持つ電極チップを作製した。上記3種類のいずれかのカーボンナノチューブの分散液を5μL作用電極部位に滴下し乾燥させた。乾燥後、50mMクエン酸緩衝液(pH5.3)に溶解したフルクトースデヒドロゲナーゼ(2U/μL)5μLを作用電極部位に滴下し乾燥させた。乾燥後、作用電極部位に2%ナフィオン液を5μL滴下し、乾燥させ、カーボンナノチューブ及びフルクトースデヒドロゲナーゼを作用電極に固定化した。
電気化学アナライザー(ALS/CHI 660B:ビー・エー・エス社)の作用極に上記で作製した電極チップ、参照電極に銀/塩化銀電極、対極に白金線をセットした。この3電極をフルクトースを含む50mMクエン酸緩衝液(pH5.3)に浸漬し、サイクリックボルタンメトリーによる測定を実施した。0mM、10mM、20mM、又は48mMのフルクトース濃度についてそれぞれ測定したサイクリックボルタモグラムは図8(0.25w/v%コール酸ナトリウム)、図9(0.5w/v%コール酸ナトリウム)、図10(1w/v%コール酸ナトリウム)に示すものとなった。このサイクリックボルタモグラムにおいて-0.8Vから+0.8Vへ掃引する際の+0.6Vの電流値は以下の通りであった。
実施例3
直径1.0nm(中央値)の単層カーボンナノチューブ(MEIJO eDIPS EC1.0:(株)名城ナノカーボン)の粉末30mgを0.5w/v%コール酸ナトリウム水溶液に懸濁し30mLの懸濁液を調製した。
直径1.0nm(中央値)の単層カーボンナノチューブ(MEIJO eDIPS EC1.0:(株)名城ナノカーボン)の粉末30mgを0.5w/v%コール酸ナトリウム水溶液に懸濁し30mLの懸濁液を調製した。
このカーボンナノチューブ懸濁液を18℃でチップ型超音波破砕機(Branson Sonifier 450D:日本エマソン株式会社)を用いて出力30%、1時間処理することによりカーボンナノチューブを分散させた。これらの超音波処理液を210,000g、2時間の超遠心にかけ上清の80%を回収した。これらの回収液をアミコンウルトラ遠心式フィルターユニット 100k(Merck)を用いて濃縮し、0.75~1.5mg/mLのカーボンナノチューブ分散液を得た。
実施例1と同様に、PETシートに金を蒸着させ、9mm2の作用電極部位を持つ電極チップを作製した。上記のカーボンナノチューブの分散液を5μL作用電極部位に滴下し乾燥させた。乾燥後、以下の(1)または(2)のいずれかの酵素液5μLを作用電極部位に滴下し乾燥させた。
(1)50mMクエン酸緩衝液(pH5.3)にフルクトースデヒドロゲナーゼ(2U/μL)を溶解
(2)50mMクエン酸緩衝液(pH5.3)にフルクトースデヒドロゲナーゼ(2U/μL)とβ-D-フルクトフラノシダーゼ(東洋紡(株)製「インベルターゼ」;4U/μL)を溶解
酵素液を乾燥後、作用電極部位に2%ナフィオン液を5μL滴下し、乾燥させ、カーボンナノチューブ及び酵素を作用電極に固定化した。
(1)50mMクエン酸緩衝液(pH5.3)にフルクトースデヒドロゲナーゼ(2U/μL)を溶解
(2)50mMクエン酸緩衝液(pH5.3)にフルクトースデヒドロゲナーゼ(2U/μL)とβ-D-フルクトフラノシダーゼ(東洋紡(株)製「インベルターゼ」;4U/μL)を溶解
酵素液を乾燥後、作用電極部位に2%ナフィオン液を5μL滴下し、乾燥させ、カーボンナノチューブ及び酵素を作用電極に固定化した。
電気化学アナライザー(ALS/CHI 660B:ビー・エー・エス社)の作用極に上記で作製した電極チップ、参照電極に銀/塩化銀電極、対極に白金線をセットした。この3電極をフルクトースまたはスクロースを含む50mMクエン酸緩衝液(pH5.3)に浸漬し、サイクリックボルタンメトリーによる測定を実施した。0mM、10mM、20mM、又は48mMのフルクトース濃度についてそれぞれ測定したサイクリックボルタモグラムは図11(酵素:フルクトースデヒドロゲナーゼのみ)、図12(酵素:フルクトースデヒドロゲナーゼとβ-D-フルクトフラノシダーゼ)、0mM、10mM、20mM、又は48mMのスクロース濃度についてそれぞれ測定したサイクリックボルタモグラムは図13(酵素:フルクトースデヒドロゲナーゼのみ)、図14(酵素:フルクトースデヒドロゲナーゼとβ-D-フルクトフラノシダーゼ)に示すものとなった。このサイクリックボルタモグラムにおいて-0.8Vから+0.8Vへ掃引する際の+0.6Vの電流値は以下の通りであった。
以上の結果より、フルクトースデヒドロゲナーゼを用いる電極にβ-D-フルクトフラノシダーゼを追加することで、スクロースの測定が可能であることが示された。
Claims (11)
- 金属基板上にカーボンナノチューブ及びフルクトースデヒドロゲナーゼを含む層を有する、電極。
- 該カーボンナノチューブが単層カーボンナノチューブである、請求項1に記載の電極。
- 該カーボンナノチューブの平均直径が2nm未満である、請求項1又は2に記載の電極。
- 該層が分散剤を更に含む、請求項1~3のいずれかに記載の電極。
- 該分散剤がコール酸ナトリウムである、請求項4に記載の電極。
- 該層がβ-D-フルクトフラノシダーゼを更に含む、請求項1~5のいずれかに記載の電極。
- 請求項1~6のいずれかに記載の電極を備えたセンサ。
- フルクトース測定用である、請求項7に記載のセンサ。
- 該層がβ-D-フルクトフラノシダーゼを含み、スクロース測定用である、請求項7に記載のセンサ。
- 請求項1~6のいずれかに記載の電極または請求項7~9のいずれかに記載のセンサを用いてフルクトースを検出する方法。
- 該層がβ-D-フルクトフラノシダーゼを含む、請求項7~9のいずれかに記載のセンサを用いてスクロースを測定する方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2020117072A JP2022014636A (ja) | 2020-07-07 | 2020-07-07 | Cnt及びフルクトースデヒドロゲナーゼの電極への利用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2020117072A JP2022014636A (ja) | 2020-07-07 | 2020-07-07 | Cnt及びフルクトースデヒドロゲナーゼの電極への利用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2022014636A true JP2022014636A (ja) | 2022-01-20 |
Family
ID=80120422
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020117072A Pending JP2022014636A (ja) | 2020-07-07 | 2020-07-07 | Cnt及びフルクトースデヒドロゲナーゼの電極への利用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP2022014636A (ja) |
-
2020
- 2020-07-07 JP JP2020117072A patent/JP2022014636A/ja active Pending
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Gong et al. | Sol− gel-derived ceramic− carbon nanotube nanocomposite electrodes: tunable electrode dimension and potential electrochemical applications | |
Niu et al. | Platinum nanoparticle-decorated carbon nanotube clusters on screen-printed gold nanofilm electrode for enhanced electrocatalytic reduction of hydrogen peroxide | |
Ivnitski et al. | Direct bioelectrocatalysis of PQQ‐dependent glucose dehydrogenase | |
Liang et al. | Direct electron transfer glucose biosensor based on glucose oxidase self-assembled on electrochemically reduced carboxyl graphene | |
Shahrokhian et al. | Multi-walled carbon nanotubes with immobilised cobalt nanoparticle for modification of glassy carbon electrode: Application to sensitive voltammetric determination of thioridazine | |
Li et al. | DNA biosensor based on chitosan film doped with carbon nanotubes | |
Yin et al. | Electrocatalytic oxidation behavior of guanosine at graphene, chitosan and Fe3O4 nanoparticles modified glassy carbon electrode and its determination | |
Cui et al. | Electrochemical sensor for epinephrine based on a glassy carbon electrode modified with graphene/gold nanocomposites | |
Zhu et al. | Simultaneous electrochemical determination of uric acid, dopamine, and ascorbic acid at single-walled carbon nanohorn modified glassy carbon electrode | |
Rahman et al. | Development of amperometric glucose biosensor based on glucose oxidase co-immobilized with multi-walled carbon nanotubes at low potential | |
You et al. | Reductive determination of hydrogen peroxide with MWCNTs-Pd nanoparticles on a modified glassy carbon electrode | |
Yang et al. | Copper nanoparticle/graphene oxide/single wall carbon nanotube hybrid materials as electrochemical sensing platform for nonenzymatic glucose detection | |
Zhou et al. | Direct electrochemistry and reagentless biosensing of glucose oxidase immobilized on chitosan wrapped single-walled carbon nanotubes | |
Jothi et al. | Ultrasensitive and selective non-enzymatic electrochemical glucose sensor based on hybrid material of graphene nanosheets/graphene nanoribbons/nickel nanoparticle | |
Thiagarajan et al. | Palladium nanoparticles modified electrode for the selective detection of catecholamine neurotransmitters in presence of ascorbic acid | |
Du et al. | One-step electrochemical deposition of Prussian Blue–multiwalled carbon nanotube nanocomposite thin-film: preparation, characterization and evaluation for H 2 O 2 sensing | |
Bai et al. | Electrochemical biosensor based on reduced graphene oxide modified electrode with Prussian blue and poly (toluidine blue O) coating | |
Jönsson-Niedziolka et al. | Pyrene-functionalised single-walled carbon nanotubes for mediatorless dioxygen bioelectrocatalysis | |
Tang et al. | Simultaneous determination of adenine guanine and thymine at multi-walled carbon nanotubes incorporated with poly (new fuchsin) composite film | |
Haghighi et al. | Fabrication of a novel electrochemiluminescence glucose biosensor using Au nanoparticles decorated multiwalled carbon nanotubes | |
Zhang et al. | Carbon nanotubes and glucose oxidase bionanocomposite bridged by ionic liquid-like unit: Preparation and electrochemical properties | |
Lei et al. | Nanotubes in biosensing | |
Shi et al. | Hydrogen peroxide biosensor based on direct electrochemistry of soybean peroxidase immobilized on single-walled carbon nanohorn modified electrode | |
Yang et al. | Electrochemical activity and electrocatalytic property of cobalt phthalocyanine nanoparticles-based immunosensor for sensitive detection of procalcitonin | |
Kwon et al. | High-performance biosensors based on enzyme precipitate coating in gold nanoparticle-conjugated single-walled carbon nanotube network films |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20230412 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20231130 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20240109 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20240308 |