JP2021518128A - チャイニーズハムスター卵巣細胞の遺伝子操作のためのhtpプラットフォーム - Google Patents
チャイニーズハムスター卵巣細胞の遺伝子操作のためのhtpプラットフォーム Download PDFInfo
- Publication number
- JP2021518128A JP2021518128A JP2020550175A JP2020550175A JP2021518128A JP 2021518128 A JP2021518128 A JP 2021518128A JP 2020550175 A JP2020550175 A JP 2020550175A JP 2020550175 A JP2020550175 A JP 2020550175A JP 2021518128 A JP2021518128 A JP 2021518128A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- host cell
- promoter
- cells
- cell
- gene
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 148
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 title description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 450
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 407
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 117
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims abstract description 76
- 230000037361 pathway Effects 0.000 claims abstract description 41
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 275
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 125
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 52
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 41
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 41
- 230000006870 function Effects 0.000 claims description 36
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 24
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 24
- 108091033409 CRISPR Proteins 0.000 claims description 21
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 claims description 20
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 claims description 20
- 238000010354 CRISPR gene editing Methods 0.000 claims description 15
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 claims description 14
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 14
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims description 13
- 230000004640 cellular pathway Effects 0.000 claims description 12
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims description 12
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 claims description 12
- 102100021569 Apoptosis regulator Bcl-2 Human genes 0.000 claims description 10
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 claims description 10
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 claims description 10
- 108020005004 Guide RNA Proteins 0.000 claims description 8
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 8
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 8
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 claims description 7
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 claims description 7
- 230000032258 transport Effects 0.000 claims description 7
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 claims description 6
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 claims description 6
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 claims description 6
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 claims description 6
- 230000012846 protein folding Effects 0.000 claims description 6
- 102100021266 Alpha-(1,6)-fucosyltransferase Human genes 0.000 claims description 5
- 108091012583 BCL2 Proteins 0.000 claims description 5
- 102100032305 Bcl-2 homologous antagonist/killer Human genes 0.000 claims description 5
- 102100021705 C1GALT1-specific chaperone 1 Human genes 0.000 claims description 5
- 101710163595 Chaperone protein DnaK Proteins 0.000 claims description 5
- 102100023583 Cyclic AMP-dependent transcription factor ATF-6 alpha Human genes 0.000 claims description 5
- 102100035419 DnaJ homolog subfamily B member 9 Human genes 0.000 claims description 5
- 101710173651 DnaJ homolog subfamily B member 9 Proteins 0.000 claims description 5
- 101150029774 Dnajb9 gene Proteins 0.000 claims description 5
- 108700041152 Endoplasmic Reticulum Chaperone BiP Proteins 0.000 claims description 5
- 102100021451 Endoplasmic reticulum chaperone BiP Human genes 0.000 claims description 5
- 102100034174 Eukaryotic translation initiation factor 2-alpha kinase 3 Human genes 0.000 claims description 5
- 108010042283 HSP40 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 claims description 5
- 101150112743 HSPA5 gene Proteins 0.000 claims description 5
- 101710178376 Heat shock 70 kDa protein Proteins 0.000 claims description 5
- 101710152018 Heat shock cognate 70 kDa protein Proteins 0.000 claims description 5
- 101000819490 Homo sapiens Alpha-(1,6)-fucosyltransferase Proteins 0.000 claims description 5
- 101000971171 Homo sapiens Apoptosis regulator Bcl-2 Proteins 0.000 claims description 5
- 101100325746 Homo sapiens BAK1 gene Proteins 0.000 claims description 5
- 101000896591 Homo sapiens C1GALT1-specific chaperone 1 Proteins 0.000 claims description 5
- 101000905751 Homo sapiens Cyclic AMP-dependent transcription factor ATF-6 alpha Proteins 0.000 claims description 5
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 claims description 5
- 101001090713 Homo sapiens L-lactate dehydrogenase A chain Proteins 0.000 claims description 5
- 108091006081 Inositol-requiring enzyme-1 Proteins 0.000 claims description 5
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 claims description 5
- 102100034671 L-lactate dehydrogenase A chain Human genes 0.000 claims description 5
- 108091008010 PERKs Proteins 0.000 claims description 5
- 101100111629 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) KAR2 gene Proteins 0.000 claims description 5
- 102100037082 Signal recognition particle 14 kDa protein Human genes 0.000 claims description 5
- 101710089523 Signal recognition particle 14 kDa protein Proteins 0.000 claims description 5
- 102100031877 Signal recognition particle 54 kDa protein Human genes 0.000 claims description 5
- 101710187184 Signal recognition particle 54 kDa protein Proteins 0.000 claims description 5
- 101710150385 Signal recognition particle 54 kDa protein 1 Proteins 0.000 claims description 5
- 101710150383 Signal recognition particle 54 kDa protein 2 Proteins 0.000 claims description 5
- 101710150391 Signal recognition particle 54 kDa protein 3 Proteins 0.000 claims description 5
- 101710128823 Signal recognition particle 54 kDa protein homolog Proteins 0.000 claims description 5
- 102100022055 Signal recognition particle 9 kDa protein Human genes 0.000 claims description 5
- 101710131307 Signal recognition particle 9 kDa protein Proteins 0.000 claims description 5
- 108010035430 X-Box Binding Protein 1 Proteins 0.000 claims description 5
- 102100038151 X-box-binding protein 1 Human genes 0.000 claims description 5
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 claims description 5
- 101150028578 grp78 gene Proteins 0.000 claims description 5
- 230000004906 unfolded protein response Effects 0.000 claims description 5
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 claims description 4
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 claims description 4
- 230000003938 response to stress Effects 0.000 claims description 3
- 102100029721 DnaJ homolog subfamily B member 1 Human genes 0.000 claims 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 38
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 34
- 238000010801 machine learning Methods 0.000 abstract description 28
- 230000014616 translation Effects 0.000 abstract description 27
- 238000005457 optimization Methods 0.000 abstract description 17
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 abstract description 16
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 abstract description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 105
- 239000000047 product Substances 0.000 description 80
- 238000013461 design Methods 0.000 description 67
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 56
- 230000004077 genetic alteration Effects 0.000 description 48
- 231100000118 genetic alteration Toxicity 0.000 description 48
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 44
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 38
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 35
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 30
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 30
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 29
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 28
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 28
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 25
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 24
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 24
- 230000008569 process Effects 0.000 description 24
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 23
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 23
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 22
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 21
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 21
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 21
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 20
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 20
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 20
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 20
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 19
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 18
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 18
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 17
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 16
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 16
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 15
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 15
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 15
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 15
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 14
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 14
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 13
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 13
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 13
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 13
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 13
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 13
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 13
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 12
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 12
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 12
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 12
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 12
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 12
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 12
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 11
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 11
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 10
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 10
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 10
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 10
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 10
- 102000005396 glutamine synthetase Human genes 0.000 description 10
- 108020002326 glutamine synthetase Proteins 0.000 description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 10
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 10
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 9
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 9
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 9
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 9
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 9
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 9
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 9
- 241000203069 Archaea Species 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 8
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 8
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 8
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 8
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 8
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 8
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 8
- 230000004044 response Effects 0.000 description 8
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 8
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 8
- 241000894007 species Species 0.000 description 8
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 8
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 7
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 7
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 7
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 7
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 7
- 238000010362 genome editing Methods 0.000 description 7
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 7
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 7
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 7
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 7
- 238000012549 training Methods 0.000 description 7
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 6
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 6
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 6
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 6
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 6
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical compound C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 6
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 238000003153 stable transfection Methods 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 5
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 5
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 5
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 5
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 5
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 5
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 5
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 5
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 5
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 5
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 5
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- -1 etc.) Substances 0.000 description 5
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 5
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 5
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 5
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 5
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 5
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 5
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 4
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 4
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 4
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 4
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 4
- 230000000243 photosynthetic effect Effects 0.000 description 4
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 4
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 4
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 4
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 4
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 102000004447 HSP40 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 3
- 101000780643 Homo sapiens Protein argonaute-2 Proteins 0.000 description 3
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 3
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 3
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 3
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 3
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 3
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- 108091005461 Nucleic proteins Chemical group 0.000 description 3
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 3
- 102100034207 Protein argonaute-2 Human genes 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 108091027544 Subgenomic mRNA Proteins 0.000 description 3
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 3
- 108010017070 Zinc Finger Nucleases Proteins 0.000 description 3
- 238000013528 artificial neural network Methods 0.000 description 3
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 3
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 3
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 3
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 3
- 230000009194 climbing Effects 0.000 description 3
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 3
- 230000006854 communication Effects 0.000 description 3
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 3
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 3
- 238000012226 gene silencing method Methods 0.000 description 3
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 3
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 3
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 3
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 238000007834 ligase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 238000007477 logistic regression Methods 0.000 description 3
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 3
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 3
- 230000001254 nonsecretory effect Effects 0.000 description 3
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 230000003094 perturbing effect Effects 0.000 description 3
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 3
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 3
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 3
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 3
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 3
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 3
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 3
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 238000010446 CRISPR interference Methods 0.000 description 2
- 108700004991 Cas12a Proteins 0.000 description 2
- 108010051219 Cre recombinase Proteins 0.000 description 2
- 241001137853 Crenarchaeota Species 0.000 description 2
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 2
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 2
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 241001137858 Euryarchaeota Species 0.000 description 2
- 108010046276 FLP recombinase Proteins 0.000 description 2
- 101150074355 GS gene Proteins 0.000 description 2
- 230000010558 Gene Alterations Effects 0.000 description 2
- 101000840258 Homo sapiens Immunoglobulin J chain Proteins 0.000 description 2
- 101000952182 Homo sapiens Max-like protein X Proteins 0.000 description 2
- 102100029571 Immunoglobulin J chain Human genes 0.000 description 2
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 2
- 102100037423 Max-like protein X Human genes 0.000 description 2
- 241000192041 Micrococcus Species 0.000 description 2
- 108010006519 Molecular Chaperones Proteins 0.000 description 2
- 102000005431 Molecular Chaperones Human genes 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 102000000574 RNA-Induced Silencing Complex Human genes 0.000 description 2
- 108010016790 RNA-Induced Silencing Complex Proteins 0.000 description 2
- 108010091086 Recombinases Proteins 0.000 description 2
- 102000018120 Recombinases Human genes 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 2
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 2
- 238000003491 array Methods 0.000 description 2
- 210000004507 artificial chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- 230000010310 bacterial transformation Effects 0.000 description 2
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 2
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 2
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001736 capillary Anatomy 0.000 description 2
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 230000033077 cellular process Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 230000000368 destabilizing effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 230000034431 double-strand break repair via homologous recombination Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000001094 effect on targets Effects 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 238000012224 gene deletion Methods 0.000 description 2
- 238000003209 gene knockout Methods 0.000 description 2
- 238000010363 gene targeting Methods 0.000 description 2
- 230000007614 genetic variation Effects 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 238000012804 iterative process Methods 0.000 description 2
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 2
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 2
- 235000019689 luncheon sausage Nutrition 0.000 description 2
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 2
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 2
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 239000002987 primer (paints) Substances 0.000 description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 2
- 238000002708 random mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 230000008844 regulatory mechanism Effects 0.000 description 2
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000009291 secondary effect Effects 0.000 description 2
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 2
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 2
- 238000012706 support-vector machine Methods 0.000 description 2
- 238000003151 transfection method Methods 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- 238000012384 transportation and delivery Methods 0.000 description 2
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 238000012070 whole genome sequencing analysis Methods 0.000 description 2
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSFSPUZXLOGKHJ-PGYHGBPZSA-N 2-amino-3-O-[(R)-1-carboxyethyl]-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound OC(=O)[C@@H](C)O[C@@H]1[C@@H](N)C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O MSFSPUZXLOGKHJ-PGYHGBPZSA-N 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005345 3' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020003589 5' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000186046 Actinomyces Species 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 102000041194 Ago family Human genes 0.000 description 1
- 108091061188 Ago family Proteins 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 1
- 244000303258 Annona diversifolia Species 0.000 description 1
- 235000002198 Annona diversifolia Nutrition 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 239000005552 B01AC04 - Clopidogrel Substances 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 108091032955 Bacterial small RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000606125 Bacteroides Species 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710155857 C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710167800 Capsid assembly scaffolding protein Proteins 0.000 description 1
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 1
- 241000191368 Chlorobi Species 0.000 description 1
- 241001142109 Chloroflexi Species 0.000 description 1
- 241001112696 Clostridia Species 0.000 description 1
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 1
- 241000192700 Cyanobacteria Species 0.000 description 1
- 101150074155 DHFR gene Proteins 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 1
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010008177 Fd immunoglobulins Proteins 0.000 description 1
- 241000230562 Flavobacteriia Species 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 241000545744 Hirudinea Species 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 108090000177 Interleukin-11 Proteins 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 1
- 108050003558 Interleukin-17 Proteins 0.000 description 1
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 108010002335 Interleukin-9 Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 1
- 101710128836 Large T antigen Proteins 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 1
- 241001430197 Mollicutes Species 0.000 description 1
- MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N Muraminsaeure Natural products OC(=O)C(C)OC1C(N)C(O)OC(CO)C1O MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 102000019040 Nuclear Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010051791 Nuclear Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102100030569 Nuclear receptor corepressor 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710153660 Nuclear receptor corepressor 2 Proteins 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091081548 Palindromic sequence Proteins 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 108700001094 Plant Genes Proteins 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 101710130420 Probable capsid assembly scaffolding protein Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010026552 Proteome Proteins 0.000 description 1
- 238000004617 QSAR study Methods 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108700005075 Regulator Genes Proteins 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 102000003661 Ribonuclease III Human genes 0.000 description 1
- 108010057163 Ribonuclease III Proteins 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000002278 Ribosomal Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000605 Ribosomal Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 101710204410 Scaffold protein Proteins 0.000 description 1
- 238000010266 Sephadex chromatography Methods 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000204315 Thermosipho <sea snail> Species 0.000 description 1
- 241000204652 Thermotoga Species 0.000 description 1
- 108700009124 Transcription Initiation Site Proteins 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000006096 absorbing agent Substances 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002457 bidirectional effect Effects 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 238000003766 bioinformatics method Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 229930189065 blasticidin Natural products 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 1
- 238000010370 cell cloning Methods 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 108091092328 cellular RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000010001 cellular homeostasis Effects 0.000 description 1
- 239000013000 chemical inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 101150040312 cho gene Proteins 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000013377 clone selection method Methods 0.000 description 1
- 238000012411 cloning technique Methods 0.000 description 1
- GKTWGGQPFAXNFI-HNNXBMFYSA-N clopidogrel Chemical compound C1([C@H](N2CC=3C=CSC=3CC2)C(=O)OC)=CC=CC=C1Cl GKTWGGQPFAXNFI-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002301 combined effect Effects 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 238000012864 cross contamination Methods 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000012517 data analytics Methods 0.000 description 1
- 238000013500 data storage Methods 0.000 description 1
- 238000003066 decision tree Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000013135 deep learning Methods 0.000 description 1
- 238000012350 deep sequencing Methods 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001840 diploid cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009510 drug design Methods 0.000 description 1
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 239000003256 environmental substance Substances 0.000 description 1
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 1
- 230000008472 epithelial growth Effects 0.000 description 1
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000002360 explosive Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000446 fuel Substances 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 238000012215 gene cloning Methods 0.000 description 1
- 108091008053 gene clusters Proteins 0.000 description 1
- 238000003197 gene knockdown Methods 0.000 description 1
- 230000008303 genetic mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000037442 genomic alteration Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- 229940022353 herceptin Drugs 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002868 homogeneous time resolved fluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 238000000126 in silico method Methods 0.000 description 1
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000006148 magnetic separator Substances 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 210000005060 membrane bound organelle Anatomy 0.000 description 1
- 230000008986 metabolic interaction Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000007524 negative regulation of DNA replication Effects 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 210000000633 nuclear envelope Anatomy 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 229940124276 oligodeoxyribonucleotide Drugs 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 238000005580 one pot reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013307 optical fiber Substances 0.000 description 1
- 229940037201 oris Drugs 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000596 photon cross correlation spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 238000013439 planning Methods 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 1
- 210000002729 polyribosome Anatomy 0.000 description 1
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000011027 product recovery Methods 0.000 description 1
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 230000006916 protein interaction Effects 0.000 description 1
- 238000001814 protein method Methods 0.000 description 1
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 1
- 230000020978 protein processing Effects 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 1
- 238000012175 pyrosequencing Methods 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002787 reinforcement Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 1
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 description 1
- 238000010079 rubber tapping Methods 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 238000007480 sanger sequencing Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 101150091813 shfl gene Proteins 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 210000001138 tear Anatomy 0.000 description 1
- 101150065190 term gene Proteins 0.000 description 1
- 229920001169 thermoplastic Polymers 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 1
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 210000000605 viral structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 239000011800 void material Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1034—Isolating an individual clone by screening libraries
- C12N15/1079—Screening libraries by altering the phenotype or phenotypic trait of the host
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1034—Isolating an individual clone by screening libraries
- C12N15/1058—Directional evolution of libraries, e.g. evolution of libraries is achieved by mutagenesis and screening or selection of mixed population of organisms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/102—Mutagenizing nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
- C12N15/90—Stable introduction of foreign DNA into chromosome
- C12N15/902—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination
- C12N15/907—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination in mammalian cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/22—Ribonucleases RNAses, DNAses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/20—Type of nucleic acid involving clustered regularly interspaced short palindromic repeats [CRISPRs]
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
- Ecology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
本出願は、全体が参照により組み込まれる2018年3月20日に出願された米国仮出願第62/645,708号に基づく優先権の利益を主張する。
本出願と関連する配列表は、紙コピーの代わりにテキスト形式で提供され、参照により本明細書に組み込まれる。配列表を含有するテキストファイルの名称は、ZYMR_024_01WO_SeqList ST25.txtである。このテキストファイルは、約98KBであり、2019年3月20日に作成されたものであり、EFS−Webを介して電子的に提出される。
本開示は、CHO細胞中での治療タンパク質の産生を改善するための高効率(HTP)ゲノム操作プラットフォームに関する。開示されるHTPゲノム操作プラットフォームは、コンピュータにより駆動され、分子生物学、自動化、および先端機械学習プロトコールを統合する。
本開示は、CHO細胞中での治療タンパク質の産生を改善するための高効率(HTP)ゲノム操作プラットフォームに関する。
以下の用語は当業者によってよく理解されると考えられるが、本開示の主題の説明を容易にするために、以下の定義を記載する。
チャイニーズハムスター卵巣細胞
CHO細胞株改善の伝統的な方法
A.生体プロセスおよびトランスジーン発現の最適化
B.CHO細胞の標的化された操作
1.遺伝子の導入
2.遺伝子ノックアウト
C.RNAi媒介性遺伝子サイレンシング
D.miRNA過剰発現/抑制
CHO細胞操作が進歩するにも拘わらず重大なハードルが残っている
HTPツールおよびアッセイはオミクス空間を探索するのに必要である
遺伝子設計&CHO細胞操作:1組のHTP分子ツールとHTP遺伝子設計ライブラリーを使用するCHO細胞改善のための体系的組合せ手法
プロモータースワップ:プロモータースワップCHO細胞ライブラリーの誘導のための分子ツール
プロモータースワップ低レベル発現変化
2.上位性マッピング−有益な遺伝子併合を可能にする予測分析ツール
遺伝子設計&HTP CHO細胞操作プラットフォームにおける使用のための遺伝子多様性プールの生成
現存のCHO細胞系に由来する多様性プールの利用
多様性を生成するための単一遺伝子座突然変異
プロモーターラダー
仮説誘導性多様性プールおよびヒルクライミング
細胞培養および発酵
生成物の回収および定量
選択基準および目標
配列決定
ゲノムワイド遺伝子設計基準の効果のコンピュータ分析および予測
構築されたCHO細胞を特徴付けるための線形回帰
予測設計モデリング
構成の生成
新しいCHO細胞設計の性能予測
二次特徴のフィルタリング
変化の多様性
予測された性能の多様性
反復CHO細胞設計最適化
・入力および出力変数、例えば、入力としての遺伝子変化および出力としての性能特性の訓練セットを生成する(3302)。以前の遺伝子変化およびこれらの遺伝子変化を含むCHO細胞の対応する測定された性能に基づいて分析機器214によって生成を実施することができる。
・訓練セットに基づいて初期モデル(例えば、線形回帰モデル)を開発する(3304)。これを、分析機器214によって実施することができる。
・設計候補を生成する(3306)。
○一実施形態では、分析機器214は、変化の組合せの形態で、バックグラウンド細胞に対して作製される遺伝子変化の数を固定することができる。これらの変化を表示するために、分析機器214は、インタープリター204に、これらの変化の組合せを表す1つまたは複数のDNA明細発現(specification expressions)を提供することができる(これらの遺伝子変化またはこれらの変化を含む宿主細胞を、「試験入力」と呼ぶことができる)。インタープリター204は、1つまたは複数のDNA明細を解釈し、実行エンジン207は、DNA明細を実行して、これらの変化に関する個々の候補設計細胞を表す出力が分解されたDNA明細を投入する。
・モデルに基づいて、分析機器214は、それぞれの候補設計の期待される性能を予測する(3308)。
・分析機器214は、最も高い予測された性能を用いて、限定数、例えば、100の候補設計を選択する(3310)。
○上位性マッピングに関して本明細書に他の箇所に記載されたように、分析機器214は、例えば、上位性効果のトップの設計をフィルタリングするか、または上位性を予測モデルに組み入れることによって、上位性などの二次効果を説明することができる。
・発注エンジン208によって生成された製造指図書に基づいてフィルタリングされた候補細胞を構築する(工場210で)(3312)。
・分析機器214は、選択された細胞の実際の性能を測定し、その優れた実際の性能に基づいて限定数のこれらの選択された細胞を選択し(3314)、設計変化およびその得られる性能を予測モデルに追加する(3316)。
・次いで、分析機器214は、新しい設計候補細胞の生成に反復して戻り(3306)、停止状態が満たされるまで反復を継続する。停止状態は、例えば、目的の治療タンパク質の収率などの、性能測定基準を満たす少なくとも1つの細胞の測定された性能を含んでもよい。
CHO細胞設計を最適化するための機械学習
サービスとしてのゲノム設計および操作
ゲノム自動化
HTPロボットシステム
コンピュータシステムハードウェア
遺伝子設計予測に基づくHTP CHO細胞操作:ワークフロー例
構築特異的DNAオリゴヌクレオチド
宿主細胞のトランスフェクション
安定なトランスフェクション
哺乳動物細胞中での陽性選択
例示的な目的の遺伝子−抗体
標的経路遺伝子の遺伝子全体像を探索するためのプロモータースワップライブラリーのインプリメンテーションのための一般的ワークフロー
A.プロモータースワッピングのための標的の識別
B.プロモーターラダーの作出
C.ラダーに由来するプロモーターと標的遺伝子との会合
D.CHO細胞のHTPスクリーニング
(実施例2)
経路抗体発現依存性を探索するためのプロモータースワップライブラリーの特異的インプリメンテーション
フェーズI−mAB産生クローンの構築および単離*
フェーズII−標的経路遺伝子のCRISPR支援プロモータースワップ
フェーズIII−PROSWAPミニプールのクローニングおよび個々のクローンの評価
(実施例3)
プロモータースワップライブラリーの併合および多因子組合せ試験
1.免疫グロブリン発現細胞経路依存性を探索するためのHTP法であって、
a.宿主細胞にとって内因性である細胞経路標的遺伝子および異なる発現プロファイルを示す複数のプロモーターを含むプロモーターラダーを提供するステップ;
b.宿主細胞のゲノムを操作して、標的遺伝子に作動可能に連結されたプロモーターラダーに由来するプロモーターのユニークな組合せを含む個々の宿主細胞を含む複数の宿主細胞を含む初期プロモータースワップ宿主細胞ライブラリーを作出するステップ;ならびに
c.目的の免疫グロブリンおよび/または宿主細胞の表現型特性について、初期プロモータースワップ宿主細胞ライブラリーの細胞をスクリーニングするステップ
を含む、方法。
2.宿主細胞が哺乳動物細胞である、実施形態1に記載の方法。
3.宿主細胞がマウス細胞である、実施形態1に記載の方法。
4.宿主細胞がチャイニーズハムスター卵巣細胞である、実施形態1に記載の方法。
5.標的遺伝子が、分泌、タンパク質輸送、ストレス、グリコシル化、アポトーシス、アンフォールディングされたタンパク質の応答、タンパク質のフォールディング、ER関連分解、および代謝からなる群から選択される細胞経路に由来する、実施形態1に記載の方法。
6.標的遺伝子が、SRP14、SRP9、SRP54、XBP−1、bcl−2、IGF1、COSMC、FUT8、BCL2、BAK、ATF6、PERK、IRE1α、BiP/GRP78(HSP70)、Dnajb9(ERdj4/HSP40)、およびLDHAからなる群から選択される、実施形態1に記載の方法。
7.プロモーターラダーが、CMV、EF1α、SV40、RSV、およびPGKからなる群から選択される少なくとも2つのプロモーターを含む、実施形態1に記載の方法。
8.プロモーターラダーが、配列番号1〜5からなる群から選択される少なくとも2つのプロモーターを含む、実施形態1に記載の方法。
9.免疫グロブリンが、IgG、IgM、IgA、IgE、およびIgDからなる群から選択される、実施形態1に記載の方法。
10.免疫グロブリンが、IgG1、IgG2、IgG3、およびIgG4からなる群から選択される、実施形態1に記載の方法。
11.宿主細胞のゲノムの操作が、CRISPR適合性エンドヌクレアーゼおよび関連するgRNAを使用して、標的遺伝子の上流で宿主細胞ゲノムを標的にし、切断することを含む、実施形態1に記載の方法。
12.宿主細胞のゲノムの操作が、CRISPR適合性エンドヌクレアーゼおよび関連するgRNAを使用して、標的遺伝子の上流で宿主細胞ゲノムを標的にし、切断すること、ならびに相同組換えによってプロモーターラダーに由来するプロモーターを挿入することを含む、実施形態1に記載の方法。
13.目的の免疫グロブリンの表現型特性についての初期プロモータースワップ宿主細胞ライブラリーの細胞をスクリーニングするステップが、目的の免疫グロブリンの力価、N末端切断、および/またはグリコシル化パターンを確認すること、または特徴付けることを含む、実施形態1に記載の方法。
14.宿主細胞の表現型特性についての初期プロモータースワップ宿主細胞ライブラリーの細胞をスクリーニングするステップが、細胞増殖、培養中の細胞生存能力のパターン、細胞密度、および1日あたり、細胞あたりに産生される免疫グロブリンの細胞比生産性を確認すること、または特徴付けることを含む、実施形態1に記載の方法。
15.1つより多い細胞経路標的遺伝子が提供される、実施形態1に記載の方法。
16.ステップa)〜c)が繰り返される、実施形態1に記載の方法。
17.d.前記ステップにおいてスクリーニングされた少なくとも2つの個々の宿主細胞中に存在する遺伝的変異から選択される遺伝的変異のユニークな組合せをそれぞれ含む、その後の複数の宿主細胞を提供することによって、その後のプロモータースワップ宿主細胞ライブラリーを作出するステップ
をさらに含む、実施形態1に記載の方法。
18.d.前記ステップにおいてスクリーニングされた少なくとも2つの個々の宿主細胞中に存在する遺伝的変異から選択される遺伝的変異のユニークな組合せをそれぞれ含む、その後の複数の宿主細胞を提供することによって、その後のプロモータースワップ宿主細胞ライブラリーを作出するステップ;ならびに
e.目的の免疫グロブリンおよび/または宿主細胞の表現型特性について、その後のプロモータースワップ宿主細胞ライブラリーの個々の宿主細胞をスクリーニングするステップ
をさらに含む、実施形態1に記載の方法。
19.d.前記ステップにおいてスクリーニングされた少なくとも2つの個々の宿主細胞中に存在する遺伝的変異から選択される遺伝的変異のユニークな組合せをそれぞれ含む、その後の複数の宿主細胞を提供することによって、その後のプロモータースワップ宿主細胞ライブラリーを作出するステップ;
e.目的の免疫グロブリンおよび/または宿主細胞の表現型特性について、その後のプロモータースワップ宿主細胞ライブラリーの個々の宿主細胞をスクリーニングするステップ;ならびに
f.ステップd)〜e)を1回または複数回繰り返すステップ
をさらに含む、実施形態1に記載の方法。
20.実施形態1に記載の方法によって誘導される、宿主細胞の集団。
21.目的の生成物の発現を改善するためのHTP法であって、
a.宿主細胞にとって内因性である細胞経路標的遺伝子および異なる発現プロファイルを示す複数のプロモーターを含むプロモーターラダーを提供するステップ;
b.宿主細胞のゲノムを操作して、標的遺伝子に作動可能に連結されたプロモーターラダーに由来する異なるプロモーターを含む個々の宿主細胞を含む複数の宿主細胞を含む初期プロモータースワップ宿主細胞ライブラリーを作出するステップ;ならびに
c.目的の生成物および/または宿主細胞の表現型特性について、初期プロモータースワップ宿主細胞ライブラリーの細胞をスクリーニングするステップ
を含む、方法。
22.宿主細胞が哺乳動物細胞である、実施形態21に記載の方法。
23.宿主細胞がマウス細胞である、実施形態21に記載の方法。
24.宿主細胞がチャイニーズハムスター卵巣細胞である、実施形態21に記載の方法。
25.標的遺伝子が、分泌、タンパク質輸送、ストレス応答、グリコシル化、アポトーシス、アンフォールディングされたタンパク質の応答、タンパク質フォールディング、ER関連分解、および代謝からなる群から選択される機能を有する分子をコードする、実施形態21に記載の方法。
26.標的遺伝子が、SRP14、SRP9、SRP54、XBP−1、bcl−2、IGF1、COSMC、FUT8、BCL2、BAK、ATF6、PERK、IRE1α、BiP/GRP78(HSP70)、Dnajb9(ERdj4/HSP40)、およびLDHAからなる群から選択される分子をコードする、実施形態21に記載の方法。
27.プロモーターラダーが、CMV、EF1α、SV40、RSV、およびPGKからなる群から選択される少なくとも2つのプロモーターを含む、実施形態21に記載の方法。
28.プロモーターラダーが、配列番号1〜5からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有する少なくとも2つのプロモーターを含む、実施形態21に記載の方法。
29.目的の生成物がタンパク質である、実施形態21に記載の方法。
30.目的の生成物が免疫グロブリンである、実施形態21に記載の方法。
31.目的の生成物が、IgG、IgM、IgA、IgE、およびIgDからなる群から選択される、実施形態21に記載の方法。
32.目的の生成物が、IgG1、IgG2、IgG3、およびIgG4からなる群から選択される、実施形態21に記載の方法。
33.宿主細胞のゲノムの操作が、CRISPR適合性エンドヌクレアーゼおよび関連するgRNAを使用して、標的遺伝子の上流で宿主細胞ゲノムを標的にし、切断することを含む、実施形態21に記載の方法。
34.相同組換えによってプロモーターラダーに由来するプロモーターを挿入することをさらに含む、実施形態33に記載の方法。
35.目的の生成物の表現型特性についての初期プロモータースワップ宿主細胞ライブラリーの細胞をスクリーニングするステップが、目的の生成物の力価、N末端切断、および/またはグリコシル化パターンを確認すること、または特徴付けることを含む、実施形態21に記載の方法。
36.宿主細胞の表現型特性についての初期プロモータースワップ宿主細胞ライブラリーの細胞をスクリーニングするステップが、以下のもの:細胞増殖、培養中の細胞生存能力のパターン、細胞密度、および1日あたり、細胞あたりに産生される目的の生成物の細胞比生産性のうち1つまたは複数を確認すること、または特徴付けることを含む、実施形態21に記載の方法。
37.1つより多い細胞経路標的遺伝子が提供される、実施形態21に記載の方法。
38.ステップa)〜c)が繰り返される、実施形態21に記載の方法。
39.d.前記ステップにおいてスクリーニングされた少なくとも2つの個々の宿主細胞中に存在する遺伝的変異から選択される遺伝的変異のユニークな組合せをそれぞれ含む、その後の複数の宿主細胞を提供することによって、その後のプロモータースワップ宿主細胞ライブラリーを作出するステップ
をさらに含む、実施形態21に記載の方法。
40.d.前記ステップにおいてスクリーニングされた少なくとも2つの個々の宿主細胞中に存在する遺伝的変異から選択される遺伝的変異のユニークな組合せをそれぞれ含む、その後の複数の宿主細胞を提供することによって、その後のプロモータースワップ宿主細胞ライブラリーを作出するステップ;ならびに
e.目的の生成物および/または宿主細胞の表現型特性について、その後のプロモータースワップ宿主細胞ライブラリーの個々の宿主細胞をスクリーニングするステップ
をさらに含む、実施形態21に記載の方法。
41.d.前記ステップにおいてスクリーニングされた少なくとも2つの個々の宿主細胞中に存在する遺伝的変異から選択される遺伝的変異のユニークな組合せをそれぞれ含む、その後の複数の宿主細胞を提供することによって、その後のプロモータースワップ宿主細胞ライブラリーを作出するステップ;
e.目的の生成物および/または宿主細胞の表現型特性について、その後のプロモータースワップ宿主細胞ライブラリーの個々の宿主細胞をスクリーニングするステップ;ならびに
f.ステップd)〜e)を1回または複数回繰り返すステップ
をさらに含む、実施形態21に記載の方法。
42.実施形態21に記載の方法によって誘導される、宿主細胞の集団。
43.実施形態42における宿主細胞の集団に由来する宿主細胞によって産生される目的の生成物。
参照による組込み
Claims (42)
- 免疫グロブリン発現を改善するためのHTP法であって、
a.宿主細胞にとって内因性である細胞経路標的遺伝子および異なる発現プロファイルを示す複数のプロモーターを含むプロモーターラダーを提供するステップ;
b.前記宿主細胞のゲノムを操作して、前記標的遺伝子に作動可能に連結された前記プロモーターラダーに由来する異なるプロモーターを含む個々の宿主細胞を含む複数の宿主細胞を含む初期プロモータースワップ宿主細胞ライブラリーを作出するステップ;ならびに
c.目的の免疫グロブリンおよび/または前記宿主細胞の表現型特性について、前記初期プロモータースワップ宿主細胞ライブラリーの細胞をスクリーニングするステップ
を含む、方法。 - 前記宿主細胞が哺乳動物細胞である、請求項1に記載の方法。
- 前記宿主細胞がマウス細胞である、請求項1または2に記載の方法。
- 前記宿主細胞がチャイニーズハムスター卵巣細胞である、請求項1から3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記標的遺伝子が、分泌、タンパク質輸送、ストレス応答、グリコシル化、アポトーシス、アンフォールディングされたタンパク質の応答、タンパク質フォールディング、ER関連分解、および代謝からなる群から選択される機能を有する分子をコードする、請求項1から4のいずれか一項に記載の方法。
- 前記標的遺伝子が、SRP14、SRP9、SRP54、XBP−1、bcl−2、IGF1、COSMC、FUT8、BCL2、BAK、ATF6、PERK、IRE1α、BiP/GRP78(HSP70)、Dnajb9(ERdj4/HSP40)、およびLDHAからなる群から選択される分子をコードする、請求項1から5のいずれか一項に記載の方法。
- 前記プロモーターラダーが、CMV、EF1α、SV40、RSV、およびPGKからなる群から選択される少なくとも2つのプロモーターを含む、請求項1から6のいずれか一項に記載の方法。
- 前記プロモーターラダーが、配列番号1〜5からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有する少なくとも2つのプロモーターを含む、請求項1から7のいずれか一項に記載の方法。
- 前記免疫グロブリンが、IgG、IgM、IgA、IgE、およびIgDからなる群から選択される、請求項1から8のいずれか一項に記載の方法。
- 前記免疫グロブリンが、IgG1、IgG2、IgG3、およびIgG4からなる群から選択される、請求項1から9のいずれか一項に記載の方法。
- 前記宿主細胞のゲノムの操作が、CRISPR適合性エンドヌクレアーゼおよび関連するgRNAを使用して、前記標的遺伝子の上流で前記宿主細胞ゲノムを標的にし、切断することを含む、請求項1から10のいずれか一項に記載の方法。
- 相同組換えによって前記プロモーターラダーに由来するプロモーターを挿入することをさらに含む、請求項11に記載の方法。
- 目的の免疫グロブリンの表現型特性についての前記初期プロモータースワップ宿主細胞ライブラリーの細胞をスクリーニングするステップが、前記目的の免疫グロブリンの力価、N末端切断、および/またはグリコシル化パターンを確認すること、または特徴付けることを含む、請求項1から12のいずれか一項に記載の方法。
- 前記宿主細胞の表現型特性についての前記初期プロモータースワップ宿主細胞ライブラリーの細胞をスクリーニングするステップが、以下のもの:細胞増殖、培養中の細胞生存能力のパターン、細胞密度、および1日あたり、細胞あたりに産生される免役グロブリンの細胞比生産性のうち1つまたは複数を確認すること、または特徴付けることを含む、請求項1から13のいずれか一項に記載の方法。
- 1つより多い細胞経路標的遺伝子が提供される、請求項1から14のいずれか一項に記載の方法。
- ステップa)〜c)が繰り返される、請求項1から15のいずれか一項に記載の方法。
- d.前記ステップにおいてスクリーニングされた少なくとも2つの個々の宿主細胞中に存在する遺伝的変異から選択される遺伝的変異のユニークな組合せをそれぞれ含む、その後の複数の宿主細胞を提供することによって、その後のプロモータースワップ宿主細胞ライブラリーを作出するステップ
をさらに含む、請求項1から16のいずれか一項に記載の方法。 - d.前記ステップにおいてスクリーニングされた少なくとも2つの個々の宿主細胞中に存在する遺伝的変異から選択される遺伝的変異のユニークな組合せをそれぞれ含む、その後の複数の宿主細胞を提供することによって、その後のプロモータースワップ宿主細胞ライブラリーを作出するステップ;ならびに
e.目的の免疫グロブリンおよび/または前記宿主細胞の表現型特性について、前記その後のプロモータースワップ宿主細胞ライブラリーの個々の宿主細胞をスクリーニングするステップ
をさらに含む、請求項1から16のいずれか一項に記載の方法。 - d.前記ステップにおいてスクリーニングされた少なくとも2つの個々の宿主細胞中に存在する遺伝的変異から選択される遺伝的変異のユニークな組合せをそれぞれ含む、その後の複数の宿主細胞を提供することによって、その後のプロモータースワップ宿主細胞ライブラリーを作出するステップ;
e.目的の免疫グロブリンおよび/または前記宿主細胞の表現型特性について、前記その後のプロモータースワップ宿主細胞ライブラリーの個々の宿主細胞をスクリーニングするステップ;ならびに
f.ステップd)〜e)を1回または複数回繰り返すステップ
をさらに含む、請求項1から16のいずれか一項に記載の方法。 - 請求項1から19のいずれか一項に記載の方法によって誘導される、宿主細胞の集団。
- 目的の生成物の発現を改善するためのHTP法であって、
a.宿主細胞にとって内因性である細胞経路標的遺伝子および異なる発現プロファイルを示す複数のプロモーターを含むプロモーターラダーを提供するステップ;
b.前記宿主細胞のゲノムを操作して、前記標的遺伝子に作動可能に連結された前記プロモーターラダーに由来する異なるプロモーターを含む個々の宿主細胞を含む複数の宿主細胞を含む初期プロモータースワップ宿主細胞ライブラリーを作出するステップ;ならびに
c.目的の生成物および/または前記宿主細胞の表現型特性について、前記初期プロモータースワップ宿主細胞ライブラリーの細胞をスクリーニングするステップ
を含む、方法。 - 前記宿主細胞が哺乳動物細胞である、請求項21に記載の方法。
- 前記宿主細胞がマウス細胞である、請求項21または22に記載の方法。
- 前記宿主細胞がチャイニーズハムスター卵巣細胞である、請求項21から23のいずれか一項に記載の方法。
- 前記標的遺伝子が、分泌、タンパク質輸送、ストレス応答、グリコシル化、アポトーシス、アンフォールディングされたタンパク質の応答、タンパク質フォールディング、ER関連分解、および代謝からなる群から選択される機能を有する分子をコードする、請求項21から24のいずれか一項に記載の方法。
- 前記標的遺伝子が、SRP14、SRP9、SRP54、XBP−1、bcl−2、IGF1、COSMC、FUT8、BCL2、BAK、ATF6、PERK、IRE1α、BiP/GRP78(HSP70)、Dnajb9(ERdj4/HSP40)、およびLDHAからなる群から選択される分子をコードする、請求項21から25のいずれか一項に記載の方法。
- 前記プロモーターラダーが、CMV、EF1α、SV40、RSV、およびPGKからなる群から選択される少なくとも2つのプロモーターを含む、請求項21から26のいずれか一項に記載の方法。
- 前記プロモーターラダーが、配列番号1〜5からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有する少なくとも2つのプロモーターを含む、請求項21から27のいずれか一項に記載の方法。
- 前記目的の生成物がタンパク質である、請求項21から28のいずれか一項に記載の方法。
- 前記目的の生成物が免疫グロブリンである、請求項21から29のいずれか一項に記載の方法。
- 前記目的の生成物が、IgG、IgM、IgA、IgE、およびIgDからなる群から選択される、請求項21から30のいずれか一項に記載の方法。
- 前記目的の生成物が、IgG1、IgG2、IgG3、およびIgG4からなる群から選択される、請求項21から31のいずれか一項に記載の方法。
- 前記宿主細胞のゲノムの操作が、CRISPR適合性エンドヌクレアーゼおよび関連するgRNAを使用して、前記標的遺伝子の上流で前記宿主細胞ゲノムを標的にし、切断することを含む、請求項21から32のいずれか一項に記載の方法。
- 相同組換えによって前記プロモーターラダーに由来するプロモーターを挿入することをさらに含む、請求項33に記載の方法。
- 目的の生成物の表現型特性についての前記初期プロモータースワップ宿主細胞ライブラリーの細胞をスクリーニングするステップが、前記目的の生成物の力価、N末端切断、および/またはグリコシル化パターンを確認すること、または特徴付けることを含む、実施形態21から34のいずれか一項に記載の方法。
- 前記宿主細胞の表現型特性についての前記初期プロモータースワップ宿主細胞ライブラリーの細胞をスクリーニングするステップが、以下のもの:細胞増殖、培養中の細胞生存能力のパターン、細胞密度、および1日あたり、細胞あたりに産生される目的の生成物の細胞比生産性のうち1つまたは複数を確認すること、または特徴付けることを含む、請求項21から35のいずれか一項に記載の方法。
- 1つより多い細胞経路標的遺伝子が提供される、請求項21から36のいずれか一項に記載の方法。
- ステップa)〜c)が繰り返される、請求項21から37のいずれか一項に記載の方法。
- d.前記ステップにおいてスクリーニングされた少なくとも2つの個々の宿主細胞中に存在する遺伝的変異から選択される遺伝的変異のユニークな組合せをそれぞれ含む、その後の複数の宿主細胞を提供することによって、その後のプロモータースワップ宿主細胞ライブラリーを作出するステップ
をさらに含む、請求項21から38のいずれか一項に記載の方法。 - d.前記ステップにおいてスクリーニングされた少なくとも2つの個々の宿主細胞中に存在する遺伝的変異から選択される遺伝的変異のユニークな組合せをそれぞれ含む、その後の複数の宿主細胞を提供することによって、その後のプロモータースワップ宿主細胞ライブラリーを作出するステップ;ならびに
e.目的の生成物および/または前記宿主細胞の表現型特性について、前記その後のプロモータースワップ宿主細胞ライブラリーの個々の宿主細胞をスクリーニングするステップ
をさらに含む、請求項21から38のいずれか一項に記載の方法。 - d.前記ステップにおいてスクリーニングされた少なくとも2つの個々の宿主細胞中に存在する遺伝的変異から選択される遺伝的変異のユニークな組合せをそれぞれ含む、その後の複数の宿主細胞を提供することによって、その後のプロモータースワップ宿主細胞ライブラリーを作出するステップ;
e.目的の生成物および/または前記宿主細胞の表現型特性について、前記その後のプロモータースワップ宿主細胞ライブラリーの個々の宿主細胞をスクリーニングするステップ;ならびに
f.ステップd)〜e)を1回または複数回繰り返すステップ
をさらに含む、請求項21から38のいずれか一項に記載の方法。 - 請求項21から41のいずれか一項に記載の方法によって誘導される、宿主細胞の集団。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2023192963A JP2024010245A (ja) | 2018-03-20 | 2023-11-13 | チャイニーズハムスター卵巣細胞の遺伝子操作のためのhtpプラットフォーム |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201862645708P | 2018-03-20 | 2018-03-20 | |
US62/645,708 | 2018-03-20 | ||
PCT/US2019/023106 WO2019183183A1 (en) | 2018-03-20 | 2019-03-20 | A htp platform for the genetic engineering of chinese hamster ovary cells |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023192963A Division JP2024010245A (ja) | 2018-03-20 | 2023-11-13 | チャイニーズハムスター卵巣細胞の遺伝子操作のためのhtpプラットフォーム |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2021518128A true JP2021518128A (ja) | 2021-08-02 |
JPWO2019183183A5 JPWO2019183183A5 (ja) | 2022-03-29 |
Family
ID=67987984
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020550175A Withdrawn JP2021518128A (ja) | 2018-03-20 | 2019-03-20 | チャイニーズハムスター卵巣細胞の遺伝子操作のためのhtpプラットフォーム |
JP2023192963A Withdrawn JP2024010245A (ja) | 2018-03-20 | 2023-11-13 | チャイニーズハムスター卵巣細胞の遺伝子操作のためのhtpプラットフォーム |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023192963A Withdrawn JP2024010245A (ja) | 2018-03-20 | 2023-11-13 | チャイニーズハムスター卵巣細胞の遺伝子操作のためのhtpプラットフォーム |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US10988761B2 (ja) |
EP (1) | EP3768844A4 (ja) |
JP (2) | JP2021518128A (ja) |
KR (1) | KR20200132870A (ja) |
CN (1) | CN111902540A (ja) |
CA (1) | CA3091228A1 (ja) |
WO (1) | WO2019183183A1 (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20200132870A (ko) | 2018-03-20 | 2020-11-25 | 지머젠 인코포레이티드 | 중국 햄스터 난소 세포의 유전자 조작을 위한 htp 플랫폼 |
GB202001211D0 (en) * | 2020-01-29 | 2020-03-11 | Imperial College Innovations Ltd | Methods |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20170159045A1 (en) * | 2015-12-07 | 2017-06-08 | Zymergen, Inc. | Microbial strain improvement by a htp genomic engineering platform |
Family Cites Families (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4435504A (en) | 1982-07-15 | 1984-03-06 | Syva Company | Immunochromatographic assay with support having bound "MIP" and second enzyme |
GB8406752D0 (en) | 1984-03-15 | 1984-04-18 | Unilever Plc | Chemical and clinical tests |
CA1303983C (en) | 1987-03-27 | 1992-06-23 | Robert W. Rosenstein | Solid phase assay |
US4855240A (en) | 1987-05-13 | 1989-08-08 | Becton Dickinson And Company | Solid phase assay employing capillary flow |
US5837458A (en) | 1994-02-17 | 1998-11-17 | Maxygen, Inc. | Methods and compositions for cellular and metabolic engineering |
US5605793A (en) | 1994-02-17 | 1997-02-25 | Affymax Technologies N.V. | Methods for in vitro recombination |
US6090592A (en) | 1994-08-03 | 2000-07-18 | Mosaic Technologies, Inc. | Method for performing amplification of nucleic acid on supports |
DE69837913T2 (de) | 1997-04-01 | 2008-02-07 | Solexa Ltd., Saffron Walden | Verfahren zur vervielfältigung von nukleinsäure |
JPH1180185A (ja) | 1997-09-05 | 1999-03-26 | Res Dev Corp Of Japan | オリゴヌクレオチドの化学合成法 |
AR021833A1 (es) | 1998-09-30 | 2002-08-07 | Applied Research Systems | Metodos de amplificacion y secuenciacion de acido nucleico |
US6300070B1 (en) | 1999-06-04 | 2001-10-09 | Mosaic Technologies, Inc. | Solid phase methods for amplifying multiple nucleic acids |
US8808986B2 (en) | 2008-08-27 | 2014-08-19 | Gen9, Inc. | Methods and devices for high fidelity polynucleotide synthesis |
US20100137143A1 (en) | 2008-10-22 | 2010-06-03 | Ion Torrent Systems Incorporated | Methods and apparatus for measuring analytes |
EP2398915B1 (en) | 2009-02-20 | 2016-08-24 | Synthetic Genomics, Inc. | Synthesis of sequence-verified nucleic acids |
US8574835B2 (en) | 2009-05-29 | 2013-11-05 | Life Technologies Corporation | Scaffolded nucleic acid polymer particles and methods of making and using |
EP2395087A1 (en) | 2010-06-11 | 2011-12-14 | Icon Genetics GmbH | System and method of modular cloning |
CA2896908A1 (en) * | 2013-01-03 | 2014-07-10 | Merck Patent Gmbh | Method of producing secretable antibodies by expression in saccharomyces cerevisiae |
US20170002378A1 (en) * | 2013-11-29 | 2017-01-05 | Ucb Biopharma Sprl | Synthetic Promoters |
DK3215618T3 (da) | 2014-11-05 | 2019-10-14 | Illumina Inc | Transposasesammensætninger til reduktion af insertionsbias |
US11293029B2 (en) | 2015-12-07 | 2022-04-05 | Zymergen Inc. | Promoters from Corynebacterium glutamicum |
US11151497B2 (en) | 2016-04-27 | 2021-10-19 | Zymergen Inc. | Microbial strain design system and methods for improved large-scale production of engineered nucleotide sequences |
KR20200132870A (ko) | 2018-03-20 | 2020-11-25 | 지머젠 인코포레이티드 | 중국 햄스터 난소 세포의 유전자 조작을 위한 htp 플랫폼 |
-
2019
- 2019-03-20 KR KR1020207026356A patent/KR20200132870A/ko not_active Application Discontinuation
- 2019-03-20 JP JP2020550175A patent/JP2021518128A/ja not_active Withdrawn
- 2019-03-20 CA CA3091228A patent/CA3091228A1/en active Pending
- 2019-03-20 EP EP19770957.9A patent/EP3768844A4/en active Pending
- 2019-03-20 WO PCT/US2019/023106 patent/WO2019183183A1/en unknown
- 2019-03-20 CN CN201980019507.2A patent/CN111902540A/zh active Pending
-
2020
- 2020-07-20 US US16/933,540 patent/US10988761B2/en active Active
-
2021
- 2021-04-23 US US17/238,965 patent/US20210254050A1/en not_active Abandoned
-
2023
- 2023-02-09 US US18/166,746 patent/US20230235318A1/en active Pending
- 2023-11-13 JP JP2023192963A patent/JP2024010245A/ja not_active Withdrawn
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20170159045A1 (en) * | 2015-12-07 | 2017-06-08 | Zymergen, Inc. | Microbial strain improvement by a htp genomic engineering platform |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
ATLA, 2006 SSCT-EST CONFERENCE PROCEEDINGS, 2007年, vol. 35, JPN6023009181, pages 349 - 352, ISSN: 0005004639 * |
BIOTECHNOL LETT, 2015年, JPN6023009182, pages 1 - 12, ISSN: 0005004638 * |
CYTOTECHNOLOGY, 2015年, vol. 67, JPN6023009179, pages 237 - 254, ISSN: 0005004641 * |
METABOLIC ENGINEERING, 2014年, vol. 21, JPN6023009183, pages 91 - 102, ISSN: 0005004637 * |
METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY, 2012年, vol. 824, JPN6023009180, pages 595 - 608, ISSN: 0005004640 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20200347383A1 (en) | 2020-11-05 |
US20210254050A1 (en) | 2021-08-19 |
EP3768844A1 (en) | 2021-01-27 |
KR20200132870A (ko) | 2020-11-25 |
CA3091228A1 (en) | 2019-09-26 |
JP2024010245A (ja) | 2024-01-23 |
EP3768844A4 (en) | 2021-12-15 |
CN111902540A (zh) | 2020-11-06 |
US10988761B2 (en) | 2021-04-27 |
WO2019183183A1 (en) | 2019-09-26 |
US20230235318A1 (en) | 2023-07-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US10883101B2 (en) | Automated system for HTP genomic engineering | |
ES2928728T3 (es) | Mejora de cepas microbianas mediante una plataforma de ingeniería genómica HTP | |
US20230235318A1 (en) | A htp platform for the genetic engineering of chinese hamster ovary cells | |
EP3485013B1 (en) | A htp genomic engineering platform for improving escherichia coli | |
Wuest et al. | Genomics in mammalian cell culture bioprocessing | |
Noh et al. | Development of recombinant Chinese hamster ovary cell lines for therapeutic protein production | |
Boscolo et al. | Simple scale-up of recombinant antibody production using an UCOE containing vector | |
KR20090053893A (ko) | 전사를 증가시키기 위한 기질부착부위(mars) 및 그의 용도 | |
US11208649B2 (en) | HTP genomic engineering platform | |
US20200102554A1 (en) | High throughput transposon mutagenesis | |
Vito et al. | Defining lncRNAs correlated with CHO cell growth and IgG productivity by RNA-seq | |
O’Neill et al. | Protein-specific signal peptides for mammalian vector engineering | |
Srila et al. | Glutamine synthetase (GS) knockout (KO) using CRISPR/Cpf1 diversely enhances selection efficiency of CHO cells expressing therapeutic antibodies | |
Brüggemann et al. | Strategies to obtain diverse and specific human monoclonal antibodies from transgenic animals | |
Torres et al. | An Omic’s data-driven approach towards engineering mammalian cell factories and bioprocesses for biopharmaceutical Production | |
Zaragoza | Data-Driven Cell Engineering of Chinese Hamster Ovary Cells through Machine Learning | |
WO2023225668A1 (en) | Multiparametric discovery and optimization platform |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220318 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20220318 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230306 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230606 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20230713 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20231113 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20231117 |
|
A761 | Written withdrawal of application |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A761 Effective date: 20231124 |