JP2021147340A - Compound, nanoparticle thereof, and therapeutic agent for cancer disease - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、癌疾患の治療に使用する薬物、特に、水溶性で難吸収性である薬物１０−ヒドロキシ７−エチルカンプトテシン（ＳＮ-３８）とポドフィロトキシが特定のリンカ―を介して結合した化合物、その化合物のナノ粒子、及び癌疾患治療用ナノ粒子化製剤等に関する。 The present invention relates to a drug used for the treatment of cancer diseases, particularly a compound in which a water-soluble and poorly absorbable drug 10-hydroxy7-ethylcamptothecin (SN-38) and podophylrotoxy are bound via a specific linker. The present invention relates to nanoparticles of the compound, nanoparticles for treating cancer diseases, and the like.
抗癌剤であるカンプトテシン（Camptothecin）及びその特定の誘導体が知られている。カンプトテシンやその誘導体の多くは水に極めて難溶であるため、この薬物の臨床利用が制約されている。水溶性カンプトテシン誘導体としては、９−ジメチルアミノメチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン(トポテカン(Ｔｏｐｏｔｅｃａｎ))、７−[（４−メチル ピペラジノ）メチル]−１０,１１−エチレンジオキシカンプトテシン、７−[（４−メチ ルピペラジノ）メチル]−１０,１１−メチレンジオキシカンプトテシン、及び７−エチル −１０−[４−（１−ピペリジノ）−１−ピペリジノ]カルボニルオキシカンプトテシン（ ＣＰＴ−１１）が挙げられる。これらの中で、ＣＰＴ−１１（イリノテカン（Ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）／カンプトサール(Ｃａｍｐｔｏｓaｒ)、登録商標）は、１９９６年６月に米国食品医薬品局からヒトでの使用が認可されたものである。 Camptothecin, an anticancer drug, and specific derivatives thereof are known. The clinical use of this drug is restricted because many of camptothecin and its derivatives are extremely sparingly soluble in water. Examples of the water-soluble camptothecin derivative include 9-dimethylaminomethyl-10-hydroxycamptothecin (Topotecan), 7-[(4-methylpiperadino) methyl] -10,11-ethylenedioxycamptothecin, 7-[(4). −Methylpiperadino) methyl] -10,11-methylenedioxycamptothecin, and 7-ethyl-10- [4- (1-piperidino) -1-piperidino] carbonyloxycamptothecin (CPT-11). Among these, CPT-11 (Irinotecan / Camptosar, a registered trademark) was approved for use in humans by the US Food and Drug Administration in June 1996.
ＣＰＴ−１１の活性本体が１０−ヒドロキシ−７−エチルカンプトテシン（ＳＮ-３８）である。しかしながら、ＳＮ-３８は、水溶性が極めて乏しいため、ヒト癌患者への直接投与はされていない。一方、近年、ヒト癌患者において、ＳＮ-３８が更に代謝を受けて不活性化グルクロニド種を形成することが報告されている。ＳＮ-３８を高分子ミセル化した製剤であるNK012の開発は行われているが、ミセル化ナノ粒子には様々な問題点があり、実用化は疑問視される。 The active body of CPT-11 is 10-hydroxy-7-ethylcamptothecin (SN-38). However, SN-38 is extremely poor in water solubility and has not been directly administered to human cancer patients. On the other hand, in recent years, it has been reported that SN-38 is further metabolized to form an inactivated glucuronide species in human cancer patients. Although NK012, which is a polymer micelle formulation of SN-38, has been developed, there are various problems with micelle nanoparticles, and its practical application is questionable.
また、ＳＮ-３８のリポソーム製剤（LE-ＳＮ-３８）の臨床開発は行われているが、プライアリー腫瘍反応エンドポイントをパスすることができていない。そのため、ＳＮ-３８を薬効成分とし、新規DDS（Drug Delivery System）を用いた新薬開発の方法が求められている。 In addition, although clinical development of a liposome preparation of SN-38 (LE-SN-38) has been carried out, it has not been able to pass the plyary tumor reaction endpoint. Therefore, there is a demand for a method for developing a new drug using SN-38 as a medicinal ingredient and using a new DDS (Drug Delivery System).
近年、がん組織周辺の血管内皮に150〜200 nmの間隙が存在することを利用して、粒径200 nm以下にサイズ制御した薬剤（ナノ薬剤）をがん病巣へ効率的に集積させる研究が試みられている。これまでに、ナノ薬剤の作製には、ナノキャリアと呼ばれる担体に薬物を内包させる手法が報告されているが、ナノキャリアによる副作用や薬物担持率が低い等の問題が残されていた。また、ナノキャリアを使用すると薬剤の分散安定性を向上させることが明らかとなっているが、薬物担持率は10%以下と低いという課題が残される（非特許文献１）。 In recent years, research has been conducted to efficiently accumulate drugs (nano-drugs) whose size is controlled to a particle size of 200 nm or less in cancer lesions by utilizing the existence of gaps of 150 to 200 nm in the vascular endothelium around cancer tissues. Is being tried. So far, a method of encapsulating a drug in a carrier called a nanocarrier has been reported for the production of a nano drug, but problems such as side effects due to the nano carrier and a low drug carrying rate remain. Further, it has been clarified that the use of nanocarriers improves the dispersion stability of the drug, but the problem that the drug loading rate is as low as 10% or less remains (Non-Patent Document 1).
一方、高い薬物担持率を有するナノ・プロドラッグの作製を目指してＳＮ-３８やポドフィロトキシの二量体分子を合成し、再沈法によりナノ・プロドラッグの作製が報告されている（特許文献１、２）。ところが、これらの二量体ナノ・プロドラッグは分散安定性が非常に低く、in vivo薬理活性の評価が困難であった。このようにナノ・プロドラッグの薬理効果を最大化するためには「分散安定性」および「薬物担持率」を向上させる薬剤の開発が切望される。 On the other hand, it has been reported that a dimer molecule of SN-38 or podophylrotoxy is synthesized with the aim of producing a nano-prodrug having a high drug-carrying ratio, and a nano-prodrug is produced by a reprecipitation method (Patent Document 1). 2, 2). However, these dimeric nano-prodrugs have very low dispersion stability, making it difficult to evaluate their in vivo pharmacological activity. In order to maximize the pharmacological effect of nano-prodrugs in this way, the development of drugs that improve "dispersion stability" and "drug loading rate" is eagerly desired.
本発明の目的は、高い分散安定性と薬物担持率を両立した抗がん活性物質であるＳＮ-３８とポドフィロトキシンを特定のリンカーで結合したプロドラッグおよびそのナノ薬剤を提供することにある。 An object of the present invention is to provide a prodrug in which SN-38, which is an anticancer active substance having both high dispersion stability and drug loading rate, and podophyllotoxin are bound with a specific linker, and a nanodrug thereof. be.
上記のような状況に鑑み、本発明者らは、ＳＮ-３８とポドフィロトキシンを薬効成分とする新規プロドラッグの開発について鋭意研究した。その結果、本発明者らは、意外にもＳＮ-３８とポドフィロトキシンが、特定のリンカーを介して結合したプロドラッグが、ナノ薬剤製造に有効であり、優れた分散安定性と薬物担持率を有し、かつ優れた癌細胞増殖抑制活性を示すことを見出した。本発明者はこの知見に基づき本発明を完成するに至った。 In view of the above situation, the present inventors have diligently studied the development of a new prodrug containing SN-38 and podophyllotoxin as medicinal ingredients. As a result, we have surprisingly found that a prodrug in which SN-38 and podophyllotoxin are bound via a specific linker is effective for nanodrug production, and has excellent dispersion stability and drug support. It was found that it has a rate and exhibits excellent cancer cell growth inhibitory activity. The present inventor has completed the present invention based on this finding.
すなわち、本発明は、下記（１）〜（１９）に記載の発明を提供することにより上記課題を解決したものである。
（１）
一般式［Ｉ］
［式中、
AおよびBは、それぞれ独立して、−C(=O)-、−C(=O)O-、または−C(=O)NR1-を示し、
R1は、水素または置換されていてもよいアルキルを示し、および
Lは、置換されていてもよいアルキレンを示す。］で表される化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（２）
AおよびBが、−C(=O)-である、（１）に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（３）
Lが、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ１８アルキレンである、（１）に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（４）
Lが、Ｃ２〜Ｃ１６アルキレンである、（１）に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（５）
AおよびBが、−C(=O)-であり、
Lが、Ｃ２〜Ｃ１６アルキレンである、（１）に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（６）
から選択される化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（７）
（１）〜（６）のいずれか1項に記載の化合物を含むナノ粒子。
（８）
平均粒径が１０〜２００ｎｍある、（７）に記載のナノ粒子。
（９）
水混和性の有機溶媒に（１）〜（６）のいずれか1項に記載の化合物を溶解させた溶液を水に注入して得ることを特徴とする、（７）または（８）に記載のナノ粒子の製造方法。
（１０）
（１）〜（６）のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物。
（１１）
（７）または（８）に記載のナノ粒子を含む医薬組成物。
（１２）
（１）〜（６）のいずれか1項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含有する癌疾患の治療剤。
（１３）
（７）または（８）に記載のナノ粒子を含有する癌疾患の治療剤。
（１４）
前記癌疾患が固形腫瘍である、（１２）または（１３）に記載の癌疾患の治療剤。
（１５）
前記固形腫瘍が食道癌、胃癌、結腸癌、大腸癌、直腸癌、膵臓癌、肝臓癌、喉頭癌、肺癌、前立腺癌、膀胱癌、乳癌、子宮癌又は卵巣癌である、（１４）に記載の癌疾患の治療剤。
That is, the present invention solves the above-mentioned problems by providing the inventions described in the following (1) to (19).
(1)
General formula [I]
[During the ceremony,
A and B independently indicate -C (= O)-, -C (= O) O-, or -C (= O) NR 1- , respectively.
R 1 indicates hydrogen or an optionally substituted alkyl, and
L indicates an alkylene that may be substituted. ], Or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
(2)
The compound according to (1), or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein A and B are -C (= O)-.
(3)
The compound according to (1), or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein L is C 1 to C 18 alkylene which may be substituted.
(4)
The compound according to (1), or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein L is C 2 to C 16 alkylene.
(5)
A and B are -C (= O)-and
The compound according to (1), or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein L is C 2 to C 16 alkylene.
(6)
A compound selected from, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
(7)
Nanoparticles containing the compound according to any one of (1) to (6).
(8)
The nanoparticles according to (7), which have an average particle size of 10 to 200 nm.
(9)
(7) or (8), wherein a solution obtained by dissolving the compound according to any one of (1) to (6) in a water-miscible organic solvent is injected into water. How to make nanoparticles.
(10)
A pharmaceutical composition containing the compound according to any one of (1) to (6) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
(11)
A pharmaceutical composition containing the nanoparticles according to (7) or (8).
(12)
A therapeutic agent for a cancer disease containing the compound according to any one of (1) to (6) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
(13)
(7) or (8) A therapeutic agent for a cancer disease containing the nanoparticles.
(14)
The therapeutic agent for a cancer disease according to (12) or (13), wherein the cancer disease is a solid tumor.
(15)
The solid tumor is esophageal cancer, gastric cancer, colon cancer, colon cancer, rectal cancer, pancreatic cancer, liver cancer, laryngeal cancer, lung cancer, prostate cancer, bladder cancer, breast cancer, uterine cancer or ovarian cancer, according to (14). A therapeutic agent for cancer diseases.
本発明のナノ薬剤は優れた分散安定性と薬物担持率を有し、有効な抗がん剤としては、期待される。 The nanopharmaceutical of the present invention has excellent dispersion stability and drug loading rate, and is expected as an effective anticancer agent.
以下、本発明について詳細に説明する。 Hereinafter, the present invention will be described in detail.
本発明の化合物 Compounds of the present invention
本発明の一実施態様において、一般式［Ｉ］
AおよびBは、それぞれ独立して、−C(=O)-、−C(=O)O-、または−C(=O)NR1-を示し、
R1は、水素または置換されていてもよいアルキルを示し、およびLは、置換されていてもよいアルキレンを示す。］で表される化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
In one embodiment of the invention, the general formula [I]
A and B independently indicate -C (= O)-, -C (= O) O-, or -C (= O) NR 1- , respectively.
R 1 indicates hydrogen or an optionally substituted alkyl, and L indicates an optionally substituted alkylene. ], Or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
一般式（I）において、AおよびBは、−C(=O)-を示し、およびLは、置換されていてもよいアルキレンを示す化合物が好ましい。 In general formula (I), A and B preferably represent −C (= O)-, and L preferably represents a optionally substituted alkylene compound.
式（I）のLが表すアルキレン基とは、飽和炭化水素から水素原子を二つ除いた二価の連結基であり、該飽和炭化水素は直鎖状、分岐鎖状又は環状の何れにも限定されないが、炭素数１乃至１８の飽和炭化水素から水素原子を二つ除いた二価の連結基（Ｃ１〜Ｃ１８アルキレン）であることが好ましく、炭素数２乃至１６の直鎖状又は分岐鎖状の飽和炭化水素基から水素原子を二つ除いた二価の連結基（Ｃ２〜Ｃ１６アルキレン）であることがより好ましい。 The alkylene group represented by L in the formula (I) is a divalent linking group obtained by removing two hydrogen atoms from a saturated hydrocarbon, and the saturated hydrocarbon can be linear, branched or cyclic. Although not limited, it is preferably a divalent linking group (C 1 to C 18 alkylene) obtained by removing two hydrogen atoms from a saturated hydrocarbon having 1 to 18 carbon atoms, and is a linear or linear hydrocarbon having 2 to 16 carbon atoms. It is more preferably a divalent linking group (C 2 to C 16 alkylene) obtained by removing two hydrogen atoms from a branched saturated hydrocarbon group.
Ｃ1〜Ｃ１８アルキレンの例としては、
-CH2-
-CH2CH2-
-CH2CH2CH2-
-CH2CH2CH2CH2-
-CH2CH2CH2CH2CH2-
-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-
-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-
-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-
-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-
-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-
-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-
-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-、
-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-、
-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-、
-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-、
-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-、
-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-、及び
-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-が挙げられる。
As an example of C 1 to C 18 alkylene,
-CH 2-
-CH 2 CH 2-
-CH 2 CH 2 CH 2-
-CH 2 CH 2 CH 2 CH 2-
-CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2-
-CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2-
-CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2-
-CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2-
-CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2-
-CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2-
-CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2-
-CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2- ,
-CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2- ,
-CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2- ,
-CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2- ,
-CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2- ,
-CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2- , and
-CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2- .
「置換されていてもよいアルキレン」とは、置換されていても、無置換であってもよい。置換されている場合、置換基はどの置換可能な位置で置換されてもよく、好ましく、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、およびアミノからなる群から独立して選択される１〜７個の置換基により任意選択で置換されているアルキレンを指す。 The "optionally substituted alkylene" may be substituted or unsubstituted. When substituted, the substituent may be substituted at any substitutable positions, independently preferably, C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy, cyano, halogen, hydroxy, and from the group consisting of amino Refers to an alkylene optionally substituted with 1 to 7 substituents selected.
R1が表すアルキル基とは、飽和炭化水素基であり、炭素数１乃至６の飽和炭化水素基（Ｃ１〜Ｃ６アルキル基）であることが好ましい。 The alkyl group represented by R 1 is a saturated hydrocarbon group, and is preferably a saturated hydrocarbon group having 1 to 6 carbon atoms (C 1 to C 6 alkyl groups).
Ｃ１〜Ｃ６アルキル基とは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖のアルキル基を意味する。 The C 1 to C 6 alkyl group means a linear or branched alkyl group having 1 to 6 carbon atoms.
Ｃ１〜Ｃ６アルキル基の例は、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基等を含むが、これらに限定されるものではない。 Examples of C 1 to C 6 alkyl groups include, but are not limited to, methyl groups, ethyl groups, propyl groups, isopropyl groups, butyl groups, pentyl groups, hexyl groups and the like.
Ｃ１〜Ｃ６アルコキシの例は、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキ基、ブトキシ基、ペントキシ基、ヘキソキシ基等を含むが、これらに限定されるものではない。 Examples of C 1 to C 6 alkoxy include, but are not limited to, methoxy group, ethoxy group, propoxy group, isopropoki group, butoxy group, pentoxy group, hexoxy group and the like.
ハロゲンは、クロロ、フルオロ、ブロモ、またはヨード原子を指す。 Halogen refers to a chloro, fluoro, bromo, or iodine atom.
本発明の式（I）の化合物の具体例としては、下記のものが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
ＳＮ-３８は、下記の構造式を有する既知化合物である。
ポドフィロトキシン（podophyllotoxin）は、下記の構造式を有する既知化合物である。
本発明の化合物の薬学的に許容される塩は、薬学的に許容できる有機酸と塩基、または無機酸と塩基の塩を指す。このような塩は当該技術分野でよく知られており、それにはＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，１−１９（１９７７）中に記載されているものが挙げられる。 The pharmaceutically acceptable salt of the compound of the present invention refers to a pharmaceutically acceptable organic acid and base or inorganic acid and base salt. Such salts are well known in the art, including those described in the Journal of Pharmaceutical Science, 66, 1-19 (1977).
本発明の化合物の薬学的に許容される塩としては、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩及びカリウム塩等）、アルカリ土類金属塩（例えば、マグネシウム塩及びカルシウム塩等）、アンモニウム塩、モノ−、ジ−またはトリ−低級（アルキルまたはヒドロキシアルキル）アンモニウム塩（例えば、エタノールアンモニウム塩、ジエタノールアンモニウム塩、トリエタノールアンモニウム塩、トロメタミン塩）、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝 酸塩、リン酸塩、硫酸塩、ギ酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、コハク酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、トリクロロ酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、メシチレンスルホン酸塩及びナフタレンスルホン酸塩等が挙げられる。また、塩は、無水物、または溶媒和物であってもよく、溶媒和物としては、水和物、メタノール和物、エタノール和物、プロパノール和物及び２−プロパノール和物等が挙げられる。 Pharmaceutically acceptable salts of the compounds of the present invention include alkali metal salts (eg, sodium and potassium salts, etc.), alkaline earth metal salts (eg, magnesium and calcium salts, etc.), ammonium salts, mono-. , Di- or tri-lower (alkyl or hydroxyalkyl) ammonium salts (eg, ethanolammonium salt, diethanolammonium salt, triethanolammonium salt, tromethamine salt), hydrochloride, hydrobromide, hydroiodide, Sulfate, phosphate, sulfate, formate, acetate, citrate, oxalate, fumarate, maleate, succinate, malate, tartrate, trichloroacetate, trifluoro Examples thereof include acetates, methanesulfonates, benzenesulfonates, p-toluenesulfonates, mesitylene sulfonates and naphthalene sulfonates. Further, the salt may be an anhydride or a solvate, and examples of the solvate include hydrates, methanol hydrates, ethanol hydrates, propanol sums and 2-propanol sums.
本発明の式（I）の化合物の製造方法
本発明の式（I）の化合物は、当業者には公知の方法で製造できる。例えば、ポドフィロトキシンをリーカーとしての有機酸又はその誘導体あるいは有機酸無水物と塩基及び溶媒の存在下で、反応させてから、更に、ＳＮ-３８と塩基の存在下で、反応させることによって製造することができる。
Method for Producing Compound of Formula (I) of the Present Invention The compound of formula (I) of the present invention can be produced by a method known to those skilled in the art. For example, by reacting podophylrotoxin with an organic acid as a leaker or a derivative thereof or an organic acid anhydride in the presence of a base and a solvent, and then further reacting with SN-38 in the presence of a base. Can be manufactured.
塩基としては有機塩基、例えば、脂肪 族三級アミン、芳香族三級アミン、窒素含有複素環化合物等、又は無機塩基、例えば、ＮａＯＨを例示できる。ここで、脂肪族三級アミンとしては炭素数１〜６の脂肪鎖が置換し たトリアルキルアミン類（例えば、トリメチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピル アミン、トリブチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルプ ロピルアミン等）を、芳香族三級アミンとしては炭素数１〜６の脂肪鎖が窒素原子上に２つ置換したアニリン類（例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン等）を、窒素含有複素環化合物としては、例えば、ピリジン類（具体的には、ピリジン、 Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（DMAP)、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノピリジン等）、ジア ジン類（具体的には、１，２−ジアジン、１，３−ジアジン、１，４−ジアジン等）、トリアジン類（具体的には、１，３，４−トリアジン等）、メチルイミダゾール、ヘキサメ チレンテトラミン、及び１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデセ−７−エン（ＤＢＵ）等の窒素含有複素環化合物をそれぞれ例示することができる。塩基の使用量は、ポドフィロトキシンの１モルに対し１．０〜６．０モル、好ましくは１．０〜３．０モルの範囲であればよい。 Examples of the base include organic bases such as aliphatic tertiary amines, aromatic tertiary amines, nitrogen-containing heterocyclic compounds, and inorganic bases such as NaOH. Here, as the aliphatic tertiary amine, trialkylamines substituted with a fatty chain having 1 to 6 carbon atoms (for example, trimethylamine, triethylamine, tripropylamine, tributylamine, N, N-diisopropylethylamine, N, N). -Dimethylpropyramine, etc.) as an aromatic tertiary amine, anilins in which two fat chains having 1 to 6 carbon atoms are substituted on the nitrogen atom (for example, N, N-dimethylaniline, N, N-diethylaniline, etc.) ), Examples of the nitrogen-containing heterocyclic compound include pyridines (specifically, pyridine, N, N-dimethylaminopyridine (DMAP), N, N-diethylaminopyridine, etc.) and diazines (specifically). 1,2-Diazine, 1,3-Diazine, 1,4-Diazine, etc.), triazines (specifically, 1,3,4-Triadine, etc.), methylimidazole, hexamethylenetetramine, and 1, Nitrogen-containing heterocyclic compounds such as 8-diazabicyclo [5.4.0] undece-7-ene (DBU) can be exemplified respectively. The amount of the base used may be in the range of 1.0 to 6.0 mol, preferably 1.0 to 3.0 mol, per 1 mol of podophyllotoxin.
溶媒としては塩化メチレン、エチレン ジクロリド（ＥＤＣ）、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）又はジメトキシエタン（ＤＭＥ）のような適当な溶剤が挙げられる。 Suitable solvents include methylene chloride, ethylene dichloride (EDC), tetrahydrofuran, ethyl acetate, dimethylformamide (DMF) or dimethoxyethane (DME).
反応温度は、溶媒の沸点以下の温度範囲で任意に選ぶことができるが、０〜６０℃の範囲を好ましい反応温度として例示できる。より好ましくは、２０〜３０℃である。反応の反応時間は、反応条件（例えば、用いた化合物や溶媒の種類及び量、反応温度等）の影響を受けるため一概には言えないが、通常は１〜２４時間である。 The reaction temperature can be arbitrarily selected in a temperature range equal to or lower than the boiling point of the solvent, and a range of 0 to 60 ° C. can be exemplified as a preferable reaction temperature. More preferably, it is 20 to 30 ° C. The reaction time of the reaction cannot be unequivocally determined because it is affected by the reaction conditions (for example, the type and amount of the compound and solvent used, the reaction temperature, etc.), but is usually 1 to 24 hours.
本発明の式（I）の化合物のナノ粒子の製造方法 Method for Producing Nanoparticles of Compound of Formula (I) of the Present Invention
本発明の式（I）の化合物のナノ粒子を製造するにあたっては、式（I）の化合物は、まず良溶媒である有機溶媒に溶解される。有機溶媒としては、式（I）の化合物を溶解することができ、水と混和性のある有機溶媒ならば適宜選択できる。具体的な有機溶媒としては、溶解させる化合物にもよるが、例えば、アセトン、テトラヒドロフラン、ジオキサン、アセトニトリル、メタノール、エタノール、プロパノール、Ｎ−メチルピロリドン、ジメチルスルホキシド等を例示することができ、これらを単独であるいは混合して用いることができる。有機溶媒としては、溶解性と安全性の観点からは、アセトン、テトラヒドロフラン、エタノール及びジメチルスルホキシドが特に好ましい。 In producing nanoparticles of the compound of the formula (I) of the present invention, the compound of the formula (I) is first dissolved in an organic solvent which is a good solvent. As the organic solvent, the compound of the formula (I) can be dissolved, and any organic solvent miscible with water can be appropriately selected. Specific examples of the organic solvent include acetone, tetrahydrofuran, dioxane, acetonitrile, methanol, ethanol, propanol, N-methylpyrrolidone, dimethyl sulfoxide and the like, which may be used alone, although they depend on the compound to be dissolved. It can be used in or mixed. As the organic solvent, acetone, tetrahydrofuran, ethanol and dimethyl sulfoxide are particularly preferable from the viewpoint of solubility and safety.
本発明の式（I）の化合物の有機溶媒への溶解濃度は、生成するナノ粒子の粒径に影響を与える大きな要因であるため、その濃度は所望の粒径に応じて適宜変更される。後述するように平均粒径が１０〜２００ｎｍのナノ粒子を得ようとする場合、溶解濃度は、通常 ０．１〜１５質量％程度で調整されるが、平均粒径が１０〜２００ｎｍのナノ粒子を得ようとする場合、０．５質量％前後の溶液を用いて調製される。 Since the concentration of the compound of the formula (I) of the present invention dissolved in an organic solvent is a major factor affecting the particle size of the nanoparticles produced, the concentration is appropriately changed according to the desired particle size. As will be described later, when trying to obtain nanoparticles having an average particle size of 10 to 200 nm, the dissolution concentration is usually adjusted to about 0.1 to 15% by mass, but nanoparticles having an average particle size of 10 to 200 nm. When trying to obtain, it is prepared using a solution of about 0.5% by mass.
式（I）の化合物の有機溶媒溶液（以下単に有機溶媒溶液という。）が、貧溶媒である水に注入されると、水に分散した状態の式（I）の化合物のナノ粒子が生成する。本発明では、式（I）の化合物が脂溶性有機酸を複数有することにより、式（I）の化合物の水への溶解性は、元のＳＮ-３８及びポドフィロトキシンよりも低くなる。その結果、式（I）の化合物は、元のＳＮ-３８及びポドフィロトキシンよりも水中で迅速に結晶化し、粒径や粒度分布がより小さいナノ粒子となる。 When an organic solvent solution of the compound of the formula (I) (hereinafter, simply referred to as an organic solvent solution) is injected into water which is a poor solvent, nanoparticles of the compound of the formula (I) in a state of being dispersed in water are produced. .. In the present invention, the compound of formula (I) has a plurality of fat-soluble organic acids, so that the solubility of the compound of formula (I) in water is lower than that of the original SN-38 and podophylrotoxin. As a result, the compound of formula (I) crystallizes more rapidly in water than the original SN-38 and podophyllotoxin, resulting in nanoparticles with smaller particle sizes and particle size distributions.
有機溶媒溶液が注入される水の量は、通常、本発明の式（I）の化合物の体積基準で、１０倍以上である。上限は特にないが、水が多すぎると式（I）の化合物のナノ粒子の濃度が薄くなり、濃縮する必要も生じるため、通常、１００倍以下である。 The amount of water into which the organic solvent solution is injected is usually 10 times or more based on the volume of the compound of the formula (I) of the present invention. There is no particular upper limit, but if there is too much water, the concentration of nanoparticles of the compound of formula (I) becomes thin and it becomes necessary to concentrate, so it is usually 100 times or less.
有機溶媒溶液が注入される水の温度を変化させると、生成するナノ粒子の粒径も変化するので、有機溶媒溶液の注入中に、水を特定の温度に一定に保つことで、得られる式（I）の化合物のナノ粒子の粒径を制御することができる。例えば、低い温度の水を用いると、式（I）の化合物のナノ粒子の粒径が大きくなる傾向がある。通常、−２０℃〜６０℃の範囲で、所望の粒径に応じて温度が制御される。 When the temperature of the water into which the organic solvent solution is injected is changed, the particle size of the nanoparticles produced also changes. Therefore, the formula obtained by keeping the water constant at a specific temperature during the injection of the organic solvent solution. The particle size of the nanoparticles of the compound (I) can be controlled. For example, the use of low temperature water tends to increase the particle size of the nanoparticles of the compound of formula (I). Generally, the temperature is controlled in the range of −20 ° C. to 60 ° C. according to the desired particle size.
有機溶媒溶液の注入は、粒径のばらつきを防ぐため、攪拌状態の水に、短時間に一気に行うことが好ましい。注入後、しばらく攪拌を続けることにより、結晶化あるいはナノ粒子化した式（I）の化合物が水に均一に分散された、水分散液を得ることができる。得られた式（I）の化合物のナノ粒子は、水に分散された状態まま、水性懸濁薬剤として利用することができ、また濾過等の固液分離操作を行うことによって、微粒子粉末として単離することもできる。 Injecting the organic solvent solution into agitated water at once in a short time is preferable in order to prevent variations in particle size. By continuing stirring for a while after the injection, an aqueous dispersion in which the crystallized or nanoparticulated compound of the formula (I) is uniformly dispersed in water can be obtained. The obtained nanoparticles of the compound of the formula (I) can be used as an aqueous suspension agent while being dispersed in water, and can be simply obtained as a fine particle powder by performing a solid-liquid separation operation such as filtration. It can also be separated.
水性懸濁薬剤として使用する場合、用途や、使用した良溶媒の種類によっては、このまま使用することもできるが、通常、良溶媒として添加された有機溶媒は、薬剤としての安全性を向上させるために除去される。有機溶媒の除去方法に制限はなく、公知の方法で水性懸濁剤から除去することができる。通常は、有機溶媒は、減圧（あるいは常圧）下で留去することによって容易に除去されるが、透析を用いて取り除くこともできる。 When used as an aqueous suspension drug, it can be used as it is depending on the application and the type of good solvent used, but usually, an organic solvent added as a good solvent is used to improve the safety as a drug. Is removed. The method for removing the organic solvent is not limited, and the organic solvent can be removed from the aqueous suspension by a known method. Normally, the organic solvent is easily removed by distillation under reduced pressure (or normal pressure), but it can also be removed by dialysis.
以上のような操作を行うことにより、粒径が非常に小さく、また粒度分布が狭い式（I）の化合物のナノ粒子を得ることができる、水の温度や、良溶媒の種類、添加量等を制御することにより、狭い粒度分布を保ちつつも、粒径を大きくさせた式（I）の化合物のナノ粒子を製造することが可能であり、通常、製造条件を変更することにより、平均粒径が １０ｎｍ〜２００ｎｍ程度の式（I）の化合物のナノ粒子を製造することができる。 By performing the above operations, nanoparticles of the compound of formula (I) having a very small particle size and a narrow particle size distribution can be obtained, such as the temperature of water, the type of good solvent, and the amount of addition. It is possible to produce nanoparticles of the compound of the formula (I) having a large particle size while maintaining a narrow particle size distribution by controlling the above, and usually, by changing the production conditions, the average particles Nanoparticles of the compound of the formula (I) having a diameter of about 10 nm to 200 nm can be produced.
式（I）の化合物は、生体内において、生体内を通過する際のｐＨの変化や、エステラーゼ等の酵素の働きにより、本来の薬剤ＳＮ-３８及びポドフィロトキシンの形に加水分解される。したがって、生体内ではＳＮ-３８及びポドフィロトキシンそのものとして機能するため、本発明の式（I）の化合物のナノ粒子の薬効及び安全性を確保することができる。 The compound of formula (I) is hydrolyzed in the form of the original drug SN-38 and podophyllotoxin in the living body by the change of pH when passing through the living body and the action of enzymes such as esterase. .. Therefore, since it functions as SN-38 and podophyllotoxin itself in the living body, the efficacy and safety of nanoparticles of the compound of the formula (I) of the present invention can be ensured.
EPR効果（enhanced permeability and retention effect）を利用するためには、ナノ粒子の大きさは、腎排泄を抑えるために１０ｎｍ以上である必要がある。また、脾臓などのマクロファージや肝臓のクッパー細胞などに捕捉されないために、２００ｎｍ 以下である必要がある（がんターゲティングのためのナノメディスン、www.dojindo.co.jp/le tterj/151/review/01.html (総説、片山 佳樹 教授）。従って、本発明のナノ粒子の平均粒径は、１０〜２００ｎｍであることが好ましく、１０〜１００ｎｍであることがより好ましい。 In order to utilize the EPR effect (enhanced permeability and retention effect), the size of nanoparticles needs to be 10 nm or more in order to suppress renal excretion. In addition, it must be 200 nm or less so that it is not captured by macrophages such as the spleen or Kupffer cells in the liver (nanomedicine for cancer targeting, www.dojindo.co.jp/le tterj / 151 / review / 01.html (Review, Professor Yoshiki Katayama) Therefore, the average particle size of the nanoparticles of the present invention is preferably 10 to 200 nm, more preferably 10 to 100 nm.
更に、本発明は、上記の癌治療用ナノ粒子化製剤を含む各種治療用の医薬組成物に係る。このような医薬組成物には、該医薬組成物の投与対象、投与経路、用途、形態、及び含まれる薬物の種類・量等の様々な条件に応じて、当業者に公知の任意の医薬上許容されるその他の各種の緩衝液、補助剤及び添加剤等を適宜含有させることができる。 Furthermore, the present invention relates to various therapeutic pharmaceutical compositions including the above-mentioned nanoparticulate preparation for cancer treatment. Such a pharmaceutical composition may be used on any pharmaceutical substance known to those skilled in the art, depending on various conditions such as the administration target, administration route, use, form, and type / amount of the drug contained in the pharmaceutical composition. Various other acceptable buffers, auxiliaries, additives and the like can be appropriately contained.
本発明の癌疾患治療用ナノ粒子化製剤の治療の対象となる腫瘍としては、特に限定されないが固形腫瘍であり、具体的には食道癌、胃癌、結腸癌、大腸癌、直腸癌、膵臓癌、肝臓癌、喉頭癌、肺癌、前立腺癌、膀胱癌、乳癌、子宮癌又は卵巣癌が挙げられる。標的部位は、腫瘍の細胞、組織、器官又は臓器及びそれらの内部等である。 The tumor to be treated by the nanoparticulate preparation for treating cancer diseases of the present invention is not particularly limited, but is a solid tumor, and specifically, esophageal cancer, gastric cancer, colon cancer, colon cancer, rectal cancer, pancreatic cancer. , Liver cancer, laryngeal cancer, lung cancer, prostate cancer, bladder cancer, breast cancer, uterine cancer or ovarian cancer. Target sites are tumor cells, tissues, organs or organs and their interiors.
本発明の癌疾患治療用ナノ粒子化製剤は、例えば非経口的、経口的、経皮的、経鼻的あるいは肺投与の形態で調製される。 The nanoparticulate preparation for treating cancer diseases of the present invention is prepared, for example, in the form of parenteral, oral, transdermal, nasal or pulmonary administration.
製薬上許容される賦形剤を含有する本発明の組成物は、賦形剤を薬あるいは治療剤と混合することを含むよく知られている調剤技術のいずれかによって調製することができる。 Compositions of the invention containing pharmaceutically acceptable excipients can be prepared by any of the well-known dispensing techniques involving mixing excipients with a drug or therapeutic agent.
非経口としては、例えば注射投与用の無菌水溶液として処方することができる。 As parenteral, it can be formulated, for example, as a sterile aqueous solution for injection administration.
本発明による医薬組成物は、例えば脳癌、骨癌や基底細胞癌腫、腺癌、食道癌、小腸癌及び胃癌のような上皮細胞由来の新生物（上皮癌腫）、結腸癌、肝臓癌、膀胱癌、膵臓癌 、卵巣癌、子宮頚癌、肺癌、胸癌、皮膚癌等の癌、前立腺癌、腎臓癌腫及び体中の上皮細胞に影響する他の知られている癌を含む良性あるいは悪性の腫瘍／新生物の防止、改善及び／又は治療に有用である。本発明の組成物が特に有用であると考えられる癌は胃腸癌、特に結腸直腸癌、肺癌、特に小細胞肺癌、子宮頚癌及び膵臓癌である。 The pharmaceutical composition according to the present invention comprises epithelial cell-derived neoplasms (epithelial carcinoma) such as brain cancer, bone cancer and basal cell carcinoma, adenocarcinoma, esophageal cancer, small bowel cancer and gastric cancer, colon cancer, liver cancer, bladder. Benign or malignant, including cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, cervical cancer, lung cancer, breast cancer, skin cancer and other cancers, prostate cancer, kidney cancer and other known cancers that affect epithelial cells throughout the body It is useful for the prevention, amelioration and / or treatment of tumors / neoplasms. Cancers for which the compositions of the present invention are considered to be particularly useful are gastrointestinal cancers, especially colorectal cancers, lung cancers, especially small cell lung cancers, cervical cancers and pancreatic cancers.
治療効果を得るために本発明による組成物を投与する個々の用量は、もちろん、例えば年齢、体重、患者の状況、投与経路等を含めた個々の投与環境によって決まる。個々の投薬計画は、それぞれの個人的必要性及び前記組成物の投与を管理監督する人の専門的判断に基づいて特定の対象に適合させることができる。 The individual dose at which the composition according to the present invention is administered in order to obtain a therapeutic effect is, of course, determined by the individual administration environment including, for example, age, body weight, patient condition, administration route, and the like. Individual dosing regimens can be tailored to a particular subject based on their individual needs and the professional judgment of the person who supervises the administration of the composition.
採用する用量範囲は、投与経路、処置される患者の年齢、体重、状況に依存する。例を挙げると本発明の組成物の日投与量は一般に非経口投与、具体的にはボーラス又は輸液による静脈投与の場合、１〜１０００ｍｇ／ｍ２体表面積、好ましくは１０〜５００ｍｇ／ｍ２体表面積である。前記用量は一時に投与してもよいし、様々な時間間隔で数回に分割して少しずつ行ってもよい。非経口投与の適当なスケジュールのある特定の例を挙げると、第１週目から第４週目までの各週の初日に静脈輸液で９０分かけて１２５ｍｇ／ｍ２体 表面積を投与する６週間の投与計画である。別の治療計画では３５０ｍｇ／ｍ２体表面積の非経口投与が３週間ごとに９０分かけて静脈注射で行われる。
The dose range adopted depends on the route of administration, the age, weight and circumstances of the patient being treated. For example, the daily dose of the composition of the present invention is generally 1 to 1000 mg / m2 body surface area, preferably 10 to 500 mg / m2 body surface area in the case of parenteral administration, specifically intravenous administration by bolus or infusion. be. The dose may be administered at one time, or may be divided into several doses at various time intervals and administered little by little. To give a specific example of a suitable schedule for parenteral administration, a 6-week administration of 125 mg / m2 body surface area over 90 minutes by intravenous infusion on the first day of each week from
以下に実施例を示して本発明をさらに詳細かつ具体的に説明するが、実施例は本発明の範囲を限定するものと解してはならない。 Hereinafter, the present invention will be described in more detail and concretely with reference to Examples, but the Examples should not be construed as limiting the scope of the present invention.
本発明の化合物Aの製造方法
スターラーバーを備えたナスフラスコにポドフィロトキシン（１２６ｍｇ、０．３０５ｍｍｏｌ）、無水コハク酸（３３ｍｇ、０．３２６ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（６．４ｍｇ、０．０５２４ｍｍｏｌ）を入れ、ジクロロメタン５ｍLに溶解させた。室温で終夜撹拌後、クロロホルムで希釈し、飽和塩化アンモニウム水溶液および飽和塩化ナトリウム水溶液を用いて洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過、溶媒の減圧留去により得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝１：１→１：２）で精製してカルボン酸（７３．０ｍｇ、４６％）を白色固体として得た。スターラーバーを備えたナスフラスコに得られたカルボン酸（１００ｍｇ、０．１９５ｍｍｏｌ）、ＳＮ−３８（８２ｍｇ、０．２０８ｍｍｏｌ）、１−エチル−３−(３−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩（１０９ｍｇ、０．５６７ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（１１ｍｇ、０．０９００ｍｍｏｌ）を入れ、ジクロロメタン５ｍLに溶解させた。室温で終夜撹拌後、クロロホルムで希釈し、飽和塩化アンモニウム水溶液および飽和塩化ナトリウム水溶液を用いて洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過、溶媒の減圧留去により得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム→クロロホルム／メタノール＝５０：１）で精製して化合物A（７５ｍｇ、４３％）を淡黄色固体として得た。
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz):δ＝1.00 (3H, t, J = 8.4 Hz), 1.35 (3H, t, J = 7.6 Hz), 1.88 (2H, m), 2.89 (4H, m), 3.07 (4H, m), 3.73 (6H, s), 3.76 (3H, s), 4.23 (1H, m), 4.37 (1H, q, J = 6.4 Hz), 4.58 (1H, d, J = 4.0 Hz), 5.21 (2H, s), 5.28 (1H, d, J = 16.4 Hz), 5.71 (1H, d, , J = 16.4 Hz), 5.94 (3H, s), 6.37 (2H, s), 6.52 (1H, s), 6.79 (1H, s), 7.51 (1H, d, J = 6.8 Hz ), 7.66 (1H, s), 7.89 (1H, s), 8.24 (1H, d, J = 9.2 Hz)
Method for producing compound A of the present invention
Podophilotoxin (126 mg, 0.305 mmol), succinic anhydride (33 mg, 0.326 mmol), 4-dimethylaminopyridine (6.4 mg, 0.0524 mmol) were placed in an eggplant flask equipped with a stirrer bar, and 5 mL of dichloromethane was added. Was dissolved in. After stirring overnight at room temperature, the mixture was diluted with chloroform and washed with saturated aqueous ammonium chloride solution and saturated aqueous sodium chloride solution. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered, and the residue obtained by distilling off the solvent under reduced pressure was purified by silica gel column chromatography (hexane / ethyl acetate = 1: 1 → 1: 2) to purify the carboxylic acid (73. 0 mg, 46%) was obtained as a white solid. Carboxylic acid (100 mg, 0.195 mmol), SN-38 (82 mg, 0.208 mmol), 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (109 mg) obtained in a eggplant flask equipped with a stirrer bar. , 0.567 mmol), 4-dimethylaminopyridine (11 mg, 0.0900 mmol) was added and dissolved in 5 mL of dichloromethane. After stirring overnight at room temperature, the mixture was diluted with chloroform and washed with saturated aqueous ammonium chloride solution and saturated aqueous sodium chloride solution. The organic layer is dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered, and the residue obtained by distilling off the solvent under reduced pressure is purified by silica gel column chromatography (chloroform → chloroform / methanol = 50: 1) to purify compound A (75 mg, 43%). Was obtained as a pale yellow solid.
1 1 H-NMR (CDCl 3 , 400 MHz): δ = 1.00 (3H, t, J = 8.4 Hz), 1.35 (3H, t, J = 7.6 Hz), 1.88 (2H, m), 2.89 (4H, m) ), 3.07 (4H, m), 3.73 (6H, s), 3.76 (3H, s), 4.23 (1H, m), 4.37 (1H, q, J = 6.4 Hz), 4.58 (1H, d, J = 4.0 Hz), 5.21 (2H, s), 5.28 (1H, d, J = 16.4 Hz), 5.71 (1H, d,, J = 16.4 Hz), 5.94 (3H, s), 6.37 (2H, s), 6.52 (1H, s), 6.79 (1H, s), 7.51 (1H, d, J = 6.8 Hz), 7.66 (1H, s), 7.89 (1H, s), 8.24 (1H, d, J = 9.2 Hz) )
本発明の化合物Bの製造方法
スターラーバーを備えたナスフラスコに10-(Benzyloxy)-10-oxodecanoic acid（６４ｍｇ、０．２１９ｍｍｏｌ）、ポドフィロトキシン（１０５ｍｇ、０．２５４ｍｍｏｌ）、１−エチル−３−(３−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩（９４ｍｇ、０．４９２ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（９ｍｇ、０．０６９６ｍｍｏｌ）を入れ、ジクロロメタン４．４ｍLに溶解させた。室温で終夜撹拌後、溶媒の減圧留去により得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム）で精製してエステル（１５６ｍｇ、９４％）を透明液体として得た。スターラーバーを備えたナスフラスコに得られたエステル（１４４ｍｇ、０．２０９ｍｍｏｌ）、パラジウム炭素（１４ｍｇ）を入れ、ジクロロメタン２．１ｍLを加えた。水素雰囲気下、室温で３時間撹拌後、セライトろ過、溶媒の減圧留去によりカルボン酸（１０４ｍｇ、８３％）を透明液体として得た。スターラーバーを備えたナスフラスコに得られたカルボン酸（３０ｍｇ、０．５０１ｍｍｏｌ）、ＳＮ−３８（２５ｍｇ、０．０６２７ｍｍｏｌ）、１−エチル−３−(３−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩（２４ｍｇ、０．１２６ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（２．２ｍｇ、０．０１８０ｍｍｏｌ）を入れ、ジクロロメタン１ｍLに溶解させた。室温で終夜撹拌後、クロロホルムで希釈し、飽和塩化アンモニウム水溶液および飽和塩化ナトリウム水溶液を用いて洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過、溶媒の減圧留去により得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム→クロロホルム／メタノール＝１００：１）で精製して化合物B（３９ｍｇ、８０％）を淡黄色固体として得た。
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz): δ＝1.04 (3H, t, J = 7.2 Hz), 1.31-1.68 (12H, m), 1.40 (3H, m), 1.90 (2H, m), 2.42 (2H, m), 2.66 (2H, t, J = 7.2 Hz), 2.82 (1H, m), 2.93 (2H, d, J = 4.4 Hz), 3.17 (2H, q, J = 7.6 Hz), 3.76 (6H, s), 3.81 (3H, s), 4.20 (1H, t, J = 9.2 Hz), 4.36 (1H, q, J = 7.2 Hz), 4.60 (1H, d, J = 4.4 Hz), 5.26 (2H, s), 5.31 (1H, d, J = 16.4 Hz), 5.76 (1H, d, J = 16.0 Hz), 5.87 (1H, d, J = 9.2 Hz), 5.99 (2H, d, J = 3.6 Hz), 6.38 (2H, s), 6.53 (1H, s), 6.73 (1H, s), 7.55 (1H, d, J = 6.8 Hz ), 7.65 (1H,s), 7.83 (1H, d, J = 2.4 Hz), 8.23 (1H, s)
Method for producing compound B of the present invention
10- (Benzyloxy) -10-oxodecanoic acid (64 mg, 0.219 mmol), podophylrotoxin (105 mg, 0.254 mmol), 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) in a eggplant flask equipped with a stirrer bar. ) Carbodiimide hydrochloride (94 mg, 0.492 mmol) and 4-dimethylaminopyridine (9 mg, 0.0696 mmol) were added and dissolved in 4.4 mL of dichloromethane. After stirring overnight at room temperature, the residue obtained by distilling off the solvent under reduced pressure was purified by silica gel column chromatography (chloroform) to obtain an ester (156 mg, 94%) as a transparent liquid. The obtained ester (144 mg, 0.209 mmol) and palladium carbon (14 mg) were placed in an eggplant flask equipped with a stirrer bar, and 2.1 mL of dichloromethane was added. After stirring at room temperature for 3 hours under a hydrogen atmosphere, carboxylic acid (104 mg, 83%) was obtained as a transparent liquid by filtration through Celite and distillation of the solvent under reduced pressure. Carboxylic acid (30 mg, 0.501 mmol), SN-38 (25 mg, 0.0627 mmol), 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (24 mg) obtained in a eggplant flask equipped with a stirrer bar. , 0.126 mmol), 4-dimethylaminopyridine (2.2 mg, 0.0180 mmol) was added and dissolved in 1 mL of dichloromethane. After stirring overnight at room temperature, the mixture was diluted with chloroform and washed with saturated aqueous ammonium chloride solution and saturated aqueous sodium chloride solution. The organic layer is dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered, and the residue obtained by distilling off the solvent under reduced pressure is purified by silica gel column chromatography (chloroform → chloroform / methanol = 100: 1) to purify compound B (39 mg, 80%). Was obtained as a pale yellow solid.
1 H-NMR (CDCl 3 , 400 MHz): δ = 1.04 (3H, t, J = 7.2 Hz), 1.31-1.68 (12H, m), 1.40 (3H, m), 1.90 (2H, m), 2.42 (2H, m), 2.66 (2H, t, J = 7.2 Hz), 2.82 (1H, m), 2.93 (2H, d, J = 4.4 Hz), 3.17 (2H, q, J = 7.6 Hz), 3.76 (6H, s), 3.81 (3H, s), 4.20 (1H, t, J = 9.2 Hz), 4.36 (1H, q, J = 7.2 Hz), 4.60 (1H, d, J = 4.4 Hz), 5.26 (2H, s), 5.31 (1H, d, J = 16.4 Hz), 5.76 (1H, d, J = 16.0 Hz), 5.87 (1H, d, J = 9.2 Hz), 5.99 (2H, d, J = 3.6 Hz), 6.38 (2H, s), 6.53 (1H, s), 6.73 (1H, s), 7.55 (1H, d, J = 6.8 Hz), 7.65 (1H, s), 7.83 (1H, d, J = 2.4 Hz), 8.23 (1H, s)
本発明の化合物Cの製造方法
スターラーバーを備えたナスフラスコに18-(Benzyloxy)-18-oxooctadecanoic acid（１０８ｍｇ、０．２６６ｍｍｏｌ）、ポドフィロトキシン（１１０ｍｇ、０．２６６ｍｍｏｌ）、１−エチル−３−(３−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩（１０４ｍｇ、０．５４１ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（８ｍｇ、０．０６７９ｍｍｏｌ）を入れ、ジクロロメタン５．３ｍLに溶解させた。室温で終夜撹拌後、溶媒の減圧留去により得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム）で精製してエステル（１７３ｍｇ、８１％）を透明液体として得た。スターラーバーを備えたナスフラスコに得られたエステル（１７３ｍｇ、０．２０９ｍｍｏｌ）、パラジウム炭素（１７ｍｇ）を入れ、ジクロロメタン２．２ｍLを加えた。水素雰囲気下、室温を終夜撹拌後、セライトろ過、溶媒の減圧留去により得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム→クロロホルム／メタノール＝１００：１）で精製してカルボン酸（１２７ｍｇ、８３％）を透明液体として得た。スターラーバーを備えたナスフラスコに得られたカルボン酸（４０ｍｇ、０．５６７ｍｍｏｌ）、ＳＮ−３８（２４ｍｇ、０．０６１２ｍｍｏｌ）、１−エチル−３−(３−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩（２３ｍｇ、０．１２０ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（５．５ｍｇ、０．０４５０ｍｍｏｌ）を入れ、ジクロロメタン１．１ｍLに溶解させた。室温で終夜撹拌後、クロロホルムで希釈し、飽和塩化アンモニウム水溶液および飽和塩化ナトリウム水溶液を用いて洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過、溶媒の減圧留去により得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム→クロロホルム／メタノール＝１００：１）で精製して化合物C（５６ｍｇ、９１％）を淡黄色固体として得た。
1H-NMR (CDCl3, 400 MHz):δ＝1.04 (3H, t, J = 7.6 Hz), 1.26-1.69 (28H, m), 1.399 (3H, m), 1.91 (2H, m), 2.42 (2H, m), 2.66 (2H, t, J = 7.6 Hz), 2.82 (1H, m), 2.93 (2H, d, J = 4.4 Hz), 3.15 (2H, q, J = 7.6 Hz), 3.76 (6H, s), 3.81 (3H, s), 4.20 (1H, t, J = 9.2 Hz), 4.36 (1H, q, J = 7.2 Hz), 4.60 (1H, d, J = 4.4 Hz), 5.27 (2H, s), 5.32 (1H, d, J = 16.4 Hz), 5.76 (1H, d, J = 16.4 Hz), 5.88 (1H, d, J = 9.2 Hz), 5.98 (2H, d, J = 3.6 Hz), 6.39 (2H, s), 6.54 (1H, s), 6.74 (1H, s), 7.55 (1H, d, J = 6.8 Hz ), 7.65 (1H,s), 7.83 (1H, d, J = 2.4 Hz), 8.23 (1H, s)
Method for producing compound C of the present invention
18- (Benzyloxy) -18-oxooctadecanoic acid (108 mg, 0.266 mmol), podophylrotoxin (110 mg, 0.266 mmol), 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) in a eggplant flask equipped with a stirrer bar. ) Carbodiimide hydrochloride (104 mg, 0.541 mmol) and 4-dimethylaminopyridine (8 mg, 0.0679 mmol) were added and dissolved in 5.3 mL of dichloromethane. After stirring overnight at room temperature, the residue obtained by distilling off the solvent under reduced pressure was purified by silica gel column chromatography (chloroform) to obtain an ester (173 mg, 81%) as a transparent liquid. The obtained ester (173 mg, 0.209 mmol) and palladium carbon (17 mg) were placed in an eggplant flask equipped with a stirrer bar, and 2.2 mL of dichloromethane was added. After stirring overnight at room temperature under a hydrogen atmosphere, the residue obtained by filtration through Celite and distillation of the solvent under reduced pressure was purified by silica gel column chromatography (chloroform → chloroform / methanol = 100: 1) and carboxylic acid (127 mg, 83%). ) Was obtained as a transparent liquid. Carboxylic acid (40 mg, 0.567 mmol), SN-38 (24 mg, 0.0612 mmol), 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (23 mg) obtained in a eggplant flask equipped with a stirrer bar. , 0.120 mmol), 4-dimethylaminopyridine (5.5 mg, 0.0450 mmol) was added and dissolved in 1.1 mL of dichloromethane. After stirring overnight at room temperature, the mixture was diluted with chloroform and washed with saturated aqueous ammonium chloride solution and saturated aqueous sodium chloride solution. The organic layer is dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered, and the residue obtained by distilling off the solvent under reduced pressure is purified by silica gel column chromatography (chloroform → chloroform / methanol = 100: 1) to purify compound C (56 mg, 91%). Was obtained as a pale yellow solid.
1 H-NMR (CDCl 3 , 400 MHz): δ = 1.04 (3H, t, J = 7.6 Hz), 1.26-1.69 (28H, m), 1.399 (3H, m), 1.91 (2H, m), 2.42 (2H, m), 2.66 (2H, t, J = 7.6 Hz), 2.82 (1H, m), 2.93 (2H, d, J = 4.4 Hz), 3.15 (2H, q, J = 7.6 Hz), 3.76 (6H, s), 3.81 (3H, s), 4.20 (1H, t, J = 9.2 Hz), 4.36 (1H, q, J = 7.2 Hz), 4.60 (1H, d, J = 4.4 Hz), 5.27 (2H, s), 5.32 (1H, d, J = 16.4 Hz), 5.76 (1H, d, J = 16.4 Hz), 5.88 (1H, d, J = 9.2 Hz), 5.98 (2H, d, J = 3.6 Hz), 6.39 (2H, s), 6.54 (1H, s), 6.74 (1H, s), 7.55 (1H, d, J = 6.8 Hz), 7.65 (1H, s), 7.83 (1H, d, J = 2.4 Hz), 8.23 (1H, s)
本発明の化合物A〜Cのナノ粒子の作製方法
１０ｍＭに調製した化合物A〜CのＴＨＦ溶液１００μＬを水１０ｍＬ中に注射器を用いて室温下注入し、ナノ粒子の水分散液を得た。最終的な水分散液の濃度は、０．１ｍＭとなった。
Method for Producing Nanoparticles of Compounds A to C of the
（H. Kasai et al., Angew. Chem. Int. Ed. 2012, 51, 10315-10318）に記載の方法に基づき、ＳＮ-３８二量体から作製したナノ・プロドラッグの分散安定性は非常に低かったことが判明した（図４）。
（Y. Ikuta et al., Chem. Comm. 2015, 51, 12835-12838）に記載の方法に基づき、ポドフィロトキシン二量体から作製したナノ・プロドラッグの分散安定性は非常に低かったことが判明した(図５)。
in vitro活性試験
ヒト肝癌細胞株ＨｅＰＧ２ＨｅｐＧ２を９６ウェルプレートに２×１０4ｃｅｌｌｓ／ウェルで播種した。翌日、イリノテカン、SN-38誘導体（化合物A、化合物B、化合物C）ナノ粒子分散液を、０．０１〜１０μＭとなるようにＨｅｐＧ２細胞培養液に添加した。その後４８時間培養し、Cell Counting Kit-8（DOJINDO社製）とマイクロプレートリーダーを用いて、比色法により細胞生存率を測定した(図６)。
In vitro activity test The human liver cancer cell line HePG2HepG2 was seeded on a 96-well plate at 2 × 10 4 cells / well. The next day, irinotecan, an SN-38 derivative (Compound A, Compound B, Compound C) nanoparticle dispersion was added to the HepG2 cell culture medium to a concentration of 0.01 to 10 μM. After that, the cells were cultured for 48 hours, and the cell viability was measured by the colorimetric method using a Cell Counting Kit-8 (manufactured by DOJINDO) and a microplate reader (Fig. 6).
Claims (15)
AおよびBは、それぞれ独立して、−C(=O)-、−C(=O)O-、または−C(=O)NR1-を示し、
R1は、水素または置換されていてもよいアルキルを示し、および
Lは、置換されていてもよいアルキレンを示す。］で表される化合物、またはその薬学的に許容される塩。 General formula [I]
A and B independently indicate -C (= O)-, -C (= O) O-, or -C (= O) NR 1- , respectively.
R 1 indicates hydrogen or an optionally substituted alkyl, and
L indicates an alkylene that may be substituted. ], Or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Lが、Ｃ２〜Ｃ１６アルキレンである、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。 A and B are -C (= O)-and
The compound according to claim 1, wherein L is C 2 to C 16 alkylene, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
の治療剤。 The therapeutic agent for a cancer disease according to claim 12 or 13, wherein the cancer disease is a solid tumor.
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