JP2021112218A - Composition for adjusting enterobacterial flora - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、寒天、アガロース、及びアガロオリゴ糖からなる群より選択される少なくとも１種を有効成分とする、腸内環境改善作用を有する組成物に関する。 The present invention relates to a composition having an intestinal environment improving action, which comprises at least one selected from the group consisting of agar, agarose, and agarooligosaccharide as an active ingredient.
近年、健康、老化、免疫、代謝、及び疾病等と腸内細菌叢との関連について研究が進み、特定の細菌又は細菌群がそれらに関わっていることが明らかとなってきている。例えば、肥満の原因として、従来から食事の過剰摂取や基礎代謝量の低下などが挙げられているが、腸内細菌叢の構成の変化も肥満の原因の一つに挙げられるようになってきている。 In recent years, research has progressed on the relationship between health, aging, immunity, metabolism, diseases, etc. and the intestinal flora, and it has become clear that specific bacteria or bacterial groups are involved in them. For example, the causes of obesity have traditionally been cited as excessive dietary intake and decreased basal metabolic rate, but changes in the composition of the intestinal bacterial flora have also been cited as one of the causes of obesity. There is.
例えば、肥満型のヒトの場合、ファーミキューテス門（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）細菌の存在比率が高く、バクテロイデス門（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）細菌の存在比率が低い傾向にある。一方、正常型又は痩せ型のヒトの場合、肥満型とは逆の傾向にあり、バクテロイデス門細菌の存在比率が高く、ファーミキューテス門細菌の存在比率が低い傾向にある（非特許文献１）。なお、ファーミキューテス門に属する細菌であっても、クリステンセネラセエ科（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎｅｌｌａｃｅａｅ）細菌は正常型又は痩せ型のヒトに多い傾向にある（非特許文献２）。 For example, in obese humans, the abundance ratio of Firmicutes bacteria tends to be high, and the abundance ratio of Bacteroides bacteria tends to be low. On the other hand, in the case of normal or lean humans, the tendency is opposite to that of the obese type, the abundance ratio of Bacteroides phylum bacteria is high, and the abundance ratio of Firmicutes phylum bacteria is low (Non-Patent Document 1). .. Even among the bacteria belonging to the Firmicutes phylum, the Christiansenellaceae bacteria tend to be abundant in normal or lean humans (Non-Patent Document 2).
放線菌門（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）に属するエガセラ属（Ｅｇｇｅｒｔｈｅｌｌａ）細菌は、ダイズイソフラボンの一種であるダイゼイン（ｄａｉｚｅｉｎ）を代謝することによりエクオール（ｅｑｕｏｌ）を産生することが知られている（非特許文献３）。また、エクオールはダイゼインと比較してエストロゲン活性が数百倍高いこと、エクオール産生菌は健康な成人の２０〜６０％にのみ存在することが知られている。 Eggerthella bacteria belonging to the phylum Actinobacteria are known to produce equol by metabolizing daidzein, which is a type of soy isoflavone (Non-Patent Document 3). .. It is also known that equol has hundreds of times higher estrogen activity than daidzein, and that equol-producing bacteria are present only in 20-60% of healthy adults.
食事により、又は健康食品やサプリメント等を摂取することにより、腸内細菌叢の構成を肥満型から正常型又は痩せ型に変える試みがなされている。例えば、サラシア属植物の抽出物を有効成分とする体重増加抑制剤が知られている（特許文献１）。当該抽出物を経口摂取することにより、バクテロイデス門の存在比率が増加し、ファーミキューテス門の存在比率が低下する。 Attempts have been made to change the composition of the intestinal flora from obese to normal or lean by eating, or by ingesting health foods, supplements, and the like. For example, a weight gain inhibitor containing an extract of a plant of the genus Salacia as an active ingredient is known (Patent Document 1). Oral ingestion of the extract increases the abundance ratio of Bacteroides phylum and decreases the abundance ratio of Firmicutes phylum.
ファーミキューテス門に属するロゼブリア属（Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ）細菌は、ヒト腸内に常在する細菌であり、酪酸産生能（非特許文献５）、ムチン産生促進能（消化管の粘膜機能促進、消化管における病原微生物の増加抑制；非特許文献６）、ＩＬ−１０産生促進能（消化管における炎症抑制作用）等を有することが知られている。炎症性腸疾患は潰瘍性大腸炎とクローン病に大別される。近年の研究により、これら疾患は自己免疫性疾患ではなく、腸内細菌感染症だと考えられるようになった。多くの潰瘍性大腸炎患者において、健常者と比較して、Ｆｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ属やＲｏｓｅｂｕｒｉａ属などの酪酸産生菌の存在比率が減少していることが報告されている。炎症性腸疾患の発症原因の１つとして、酪酸産生菌が減少することによって腸内の酪酸濃度が減少することが挙げられている（非特許文献５）。 The Rosebria bacterium belonging to the phylum Pharmacutes is a bacterium resident in the human intestine, and has a butyric acid-producing ability (Non-Patent Document 5) and a mucin-producing ability (promoting mucosal function of the digestive tract, in the digestive tract). It is known to have the ability to suppress the increase of pathogenic bacteria; Non-Patent Document 6), the ability to promote IL-10 production (the effect of suppressing inflammation in the digestive tract), and the like. Inflammatory bowel disease is roughly divided into ulcerative colitis and Crohn's disease. Recent studies have led to the belief that these diseases are gut microbiota infections rather than autoimmune diseases. It has been reported that in many patients with ulcerative colitis, the abundance ratio of butyric acid-producing bacteria such as Faecalibacterium and Roseburia is reduced as compared with healthy subjects. One of the causes of the onset of inflammatory bowel disease is that the butyric acid concentration in the intestine decreases due to the decrease in butyric acid-producing bacteria (Non-Patent Document 5).
アガロオリゴ糖は寒天又はアガロースを分解して得られる素材であり、機能性食品やサプリメント等の用途に利用されている。また、アガロオリゴ糖が有する効果の一つとして、アガロオリゴ糖が骨の減少を抑制することが知られている（特許文献２）。
また、高脂肪食によってマウスで引き起こされる腸内細菌叢悪化や大腸発がんの発生をアガロオリゴ糖が抑制することが知られている（非特許文献４）。当該文献は、高脂肪食摂取による悪影響を減らすため、腸内細菌叢の変化を抑制することを課題としている。当該文献における腸内細菌叢悪化とは、マウスに高脂肪食を摂取させることによって、乳酸産生菌として知られているラクトバシラス目（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌａｌｅｓ）に属する細菌が減少すること、ならびに大腸がんや大腸ポリープの発生に関与する（１次胆汁酸を分解して、発がん促進作用を有するデオキシコール酸などの２次胆汁酸を生成する）細菌が属するＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｃｌｕｓｔｅｒ ＸＩＶａが増加すること等の腸内細菌叢の異常状態である。該文献には、前記異常状態を引き起こす高脂肪食とアガロオリゴ糖を同時に摂取させることにより、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌａｌｅｓの減少およびＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｃｌｕｓｔｅｒ ＸＩＶａの増加をそれぞれ抑制したことが開示されている。その一方で、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ門に属する細菌やＰｒｅｖｏｔｅｌｌａ属細菌の変動には影響しなかったことが開示されている。
しかしながら、アガロオリゴ糖が健常人の腸内細菌叢の構成を調整する効果については全く知られていない。
Agarooligosaccharide is a material obtained by decomposing agar or agarose, and is used for functional foods and supplements. Further, it is known that agarooligosaccharide suppresses bone loss as one of the effects of agarooligosaccharide (Patent Document 2).
In addition, it is known that agarooligosaccharides suppress the deterioration of the intestinal bacterial flora and the development of colorectal carcinogenesis caused in mice by a high-fat diet (Non-Patent Document 4). This document aims to suppress changes in the intestinal bacterial flora in order to reduce the adverse effects of high-fat diet intake. In the literature, the deterioration of the intestinal flora means that by feeding mice a high-fat diet, the number of bacteria belonging to the order Lactobacilliales known as lactic acid-producing bacteria is reduced, and colon cancer and colon polyps. In the intestinal flora, such as an increase in Clostridium cluster XIVa, to which bacteria involved in the development of (decomposes primary bile acids to produce secondary bile acids such as deoxycholic acid, which has a carcinogenic promoting effect) belong. It is in an abnormal state. The literature discloses that the simultaneous ingestion of a high-fat diet and agarooligosaccharides that cause the abnormal condition suppressed the decrease in Lactobacillales and the increase in Clostridium cluster XIVa, respectively. On the other hand, it is disclosed that it did not affect the fluctuation of bacteria belonging to the phylum Bacteroides and Prevotella.
However, the effect of agarooligosaccharides on regulating the composition of the intestinal flora of healthy individuals is completely unknown.
本発明の目的は、寒天、アガロース、及びアガロオリゴ糖からなる群より選択される少なくとも１種を有効成分として含有する腸内細菌叢の調整用組成物を提供することにある。 An object of the present invention is to provide a composition for adjusting an intestinal bacterial flora containing at least one selected from the group consisting of agar, agarose, and agarooligosaccharide as an active ingredient.
本発明者らは、上記の事情を鑑みて鋭意努力した結果、寒天、アガロース、又はアガロオリゴ糖あるいはそれらの組み合わせが腸内細菌叢の構成を正常型又は痩せ型に変える効果を有することを見出し、本発明を完成させた。 As a result of diligent efforts in view of the above circumstances, the present inventors have found that agar, agarose, or agarooligosaccharide or a combination thereof has an effect of changing the composition of the intestinal flora into a normal type or a lean type. The present invention has been completed.
すなわち、本発明の第１の発明は、寒天、アガロース、及びアガロオリゴ糖からなる群より選択される少なくとも１種を有効成分として含有する、腸内細菌叢の調整用組成物に関する。 That is, the first invention of the present invention relates to a composition for adjusting the intestinal bacterial flora, which contains at least one selected from the group consisting of agar, agarose, and agarooligosaccharide as an active ingredient.
本発明の第１の発明の組成物の一態様として、腸内細菌叢を構成する細菌の存在比率を変化させる作用を有する、寒天、アガロース、及びアガロオリゴ糖からなる群より選択される少なくとも１種を有効成分として含有する組成物が挙げられる。前記組成物の作用により生じる腸内細菌叢を構成する細菌の存在比率の変化としては、（ａ）Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ門細菌の存在割合の減少及び／又はＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ門細菌の存在割合の増加、（ｂ）Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎｅｌｌａｃｅａｅ科細菌の存在割合の増加、（ｃ）エクオール産生能を有する細菌の存在割合の増加、及び（ｄ）酪酸産生能を有する細菌の存在割合の増加、の少なくとも１つが例示される。 As one aspect of the composition of the first invention of the present invention, at least one selected from the group consisting of agar, agarose, and agarooligosaccharide, which has an action of changing the abundance ratio of bacteria constituting the intestinal flora. Examples thereof include compositions containing the above as an active ingredient. Changes in the abundance ratio of bacteria constituting the intestinal flora caused by the action of the composition include (a) a decrease in the abundance ratio of Firmicutes phylum bacteria and / or an increase in the abundance ratio of Bacteroidetes phylum bacteria, and (b) Christiansenellaceae. At least one of an increase in the abundance of family bacteria, (c) an increase in the abundance of bacteria capable of producing equol, and (d) an increase in the abundance of bacteria capable of producing butyric acid is exemplified.
本発明の第２の発明は、寒天、アガロース、及びアガロオリゴ糖からなる群より選択される少なくとも１種を有効成分として含有する、体重減少用、体重増加抑制用、イソフラボン類の変換促進用、消化管の粘膜機能促進用、消化管における病原微生物の増加抑制用、消化管における抗炎症用、又は大腸がんの抑制用の組成物が挙げられる。 The second invention of the present invention contains at least one selected from the group consisting of agar, agarose, and agarooligosaccharide as an active ingredient, for weight loss, for suppressing weight gain, for promoting conversion of isoflavones, and for digestion. Compositions for promoting mucosal function of the tract, suppressing the increase of pathogenic microorganisms in the gastrointestinal tract, anti-inflammatory in the gastrointestinal tract, or suppressing colorectal cancer can be mentioned.
本発明の第１または第２の発明の組成物に使用するアガロオリゴ糖として、アガロビオース、アガロテトラオース及びアガロヘキサオースからなる群より選択される少なくとも１種のアガロオリゴ糖、が挙げられる。 Examples of the agarooligosaccharide used in the composition of the first or second invention of the present invention include at least one agarooligosaccharide selected from the group consisting of agarobiose, agarotetraose and agarohexaose.
本発明の第１または第２の発明の組成物を含有する製品として、食品、飲料、サプリメント及び医薬、が挙げられる。 Products containing the compositions of the first or second invention of the present invention include foods, beverages, supplements and pharmaceuticals.
本発明により、寒天、アガロース、又はアガロオリゴ糖あるいはそれらの組み合わせを有効成分として含有する腸内細菌叢の調整用組成物が提供される。 INDUSTRIAL APPLICABILITY The present invention provides a composition for adjusting an intestinal bacterial flora containing agar, agarose, or agarooligosaccharide or a combination thereof as an active ingredient.
以下に本発明を詳細に説明する。 The present invention will be described in detail below.
（１）本発明の組成物
本発明の腸内細菌叢調整用組成物は、寒天、アガロース、又はアガロオリゴ糖、あるいはそれらの組み合わせを含有する。
寒天は、アガロースとアガロペクチンからなる多糖であり、広く食品素材として使用されている。寒天の原料としては、藻類が好適であり、例えば、テングサ科のマクサ、オニグサ、オオブサ、ヒラクサ、オバクサ、ユイキリ等、オゴノリ科のオゴノリ、オオオゴノリ等、イギス科のイギス、エゴノリ等、その他の紅藻類が例示される。寒天の原料となる藻類は、通常、天日に干して乾燥させたものを用いるが、生の藻類から寒天を調製しても良い。また、藻類を乾燥時に散水しながら漂白した、いわゆるさらし原藻も寒天の原料として使用できる。原料となる藻類を熱水抽出し、得られた抽出物を冷却することによって寒天のゲル、いわゆる「ところてん」が得られる。この「ところてん」から凍結脱水又は圧搾脱水によって水分を除き、乾燥させることによって市販されている形状の寒天が得られる。本発明において、寒天はその起源となる藻類を問わず、また、棒状、帯状、板状、糸状、粉末状等の種々の形態の乾燥物やゲル状の寒天を使用できる。また、寒天はいろいろな強度のゲルを形成できるものが市販されているが、本発明にはそのいずれもが使用できる。
(1) Composition of the present invention The composition for adjusting the intestinal bacterial flora of the present invention contains agar, agarose, agarooligosaccharide, or a combination thereof.
Agar is a polysaccharide consisting of agarose and agaropectin, and is widely used as a food material. As a raw material for agar, algae are preferable, and for example, algae of the family Gelidiaceae, Onigusa, Oobusa, Hirakusa, Obakusa, Yuikiri, etc. Is illustrated. The algae used as a raw material for agar is usually dried in the sun, but agar may be prepared from raw algae. In addition, so-called bleached algae, which are bleached while sprinkling water during drying, can also be used as a raw material for agar. Agar gel, so-called "Tokoroten", is obtained by extracting the algae as a raw material with hot water and cooling the obtained extract. Moisture is removed from this "Tokoroten" by freeze dehydration or squeeze dehydration, and the agar is dried to obtain a commercially available agar. In the present invention, the agar is not limited to the algae from which it originates, and various forms of dried or gel-like agar such as rod-shaped, strip-shaped, plate-shaped, thread-shaped, and powder-shaped can be used. In addition, agar that can form gels of various strengths is commercially available, and any of them can be used in the present invention.
アガロースは、［Ｄ−ガラクトシル−（β１→４）−３，６−アンヒドロ−α−ガラクトシル−（β１→３）］ｎで表わされる構造を有する多糖類である。寒天は通常、約７０％のアガロースと約３０％のアガロペクチンを含んでおり、寒天から公知の方法で精製を行うことによりアガロースを調製することができる。 Agarose is a polysaccharide having a structure represented by [D-galactosyl- (β1 → 4) -3,6-anhydro-α-galactosyl- (β1 → 3)] n. Agar usually contains about 70% agarose and about 30% agaropectin, and agarose can be prepared by purifying the agar by a known method.
寒天又はアガロースは、化学的、物理的又は酵素的方法で部分分解することにより低分子化することができる。本発明においては、低分子化された寒天、低分子化されたアガロースを使用しても良い。寒天又はアガロースの化学的分解方法の例としては酸性条件下での加水分解、物理的分解方法の例としては電磁波や超音波の照射による細断・分解、酵素的分解方法の例としてはアガラーゼ等の加水分解酵素による加水分解が挙げられる。低分子化寒天は、例えば伊那食品工業株式会社より「ウルトラ寒天」の名称で市販されている。ウルトラ寒天は、１．５％溶液を調製した場合のゼリー強度が約１０〜２５０ｇ／ｃｍ２という低いゼリー強度を示す（例えば、特許第３０２３２４４号参照）。なお、寒天やアガロースを経口摂取した場合、胃酸による分解産物として後述のアガロオリゴ糖を生じる。 Agar or agarose can be reduced in molecular weight by partial decomposition by chemical, physical or enzymatic methods. In the present invention, low molecular weight agar and low molecular weight agarose may be used. Examples of chemical decomposition methods for agar or agarose include hydrolysis under acidic conditions, examples of physical decomposition methods include shredding / decomposition by irradiation with electromagnetic waves or ultrasonic waves, and examples of enzymatic decomposition methods include agarase. Hydrolase of the above can be mentioned. The low molecular weight agar is commercially available, for example, from Ina Food Industry Co., Ltd. under the name of "ultra agar". Ultra agar shows a low jelly strength of about 10 to 250 g / cm 2 when a 1.5% solution is prepared (see, for example, Japanese Patent No. 30232444). When agar or agarose is orally ingested, agarooligosaccharide described later is produced as a decomposition product by gastric acid.
アガロオリゴ糖は、３，６−アンハイドロガラクトピラノースを還元末端に有する、構成単位であるＤ−ガラクトシル−（β１→４）−３，６−アンヒドロ−α−ガラクトース（この二糖類はアガロビオースと呼ばれる）がα−１，３結合で結合したオリゴ糖である。アガロオリゴ糖としては、アガロビオース、アガロテトラオース、アガロヘキサオース、アガロオクタオース、及びアガロデカオースが例示される。アガロオリゴ糖の製造方法は公知であり、本発明に使用されるアガロオリゴ糖の製造方法には特に限定はない。例えば、国際公開第００／６９２８５号パンフレットには原料寒天を固体酸により酸分解することでアガロビオース、アガロテトラオース、アガロヘキサオース、及びアガロオクタオース等を含有するアガロオリゴ糖の混合物を製造できることが知られている。なお、このように原料として寒天を用いて調製されたアガロオリゴ糖は、寒天オリゴ糖と呼ばれることもある。 Agarooligosaccharide is a constituent unit D-galactosyl- (β1 → 4) -3,6-anhydro-α-galactose (this disaccharide is called agarobiose) having 3,6-anhydrogalactopyranose at the reducing end. Is an oligosaccharide bound by α-1,3 bond. Examples of agarooligosaccharides include agarobiose, agarotetraose, agarohexaose, agarooctaose, and agarodechaose. The method for producing agarooligosaccharide is known, and the method for producing agarooligosaccharide used in the present invention is not particularly limited. For example, in the pamphlet of International Publication No. 00/69285, a mixture of agarooligosaccharides containing agarobiose, agarotetraose, agarohexaose, agarooctaose, etc. is produced by acid-decomposing the raw material agar with a solid acid. It is known that it can be done. The agar oligosaccharide prepared by using agar as a raw material in this way is sometimes called an agar oligosaccharide.
本発明においては、１種のアガロオリゴ糖を単独で用いても良いし、２種以上のアガロオリゴ糖の混合物を用いても良い。例えば、アガロオリゴ糖として、アガロビオース、アガロテトラオース及びアガロヘキサオースからなる群より選択される少なくとも１種を含有する本発明の組成物が例示できる。さらに、アガロビオース、アガロテトラオース及びアガロヘキサオースを含有する本発明の組成物が例示できる。さらに、アガロオリゴ糖として、アガロオクタオースを含有する本発明の組成物が例示できる。アガロビオース、アガロテトラオース、アガロヘキサオース、及びアガロオクタオースを含有するアガロオリゴ糖の混合物は、上記したアガロオリゴ糖の製造方法を利用して、あるいは市販されているアガロオリゴ糖を用いて、任意の形態で製造することができる。市販の健康食品であるアガフィット〔製品名（登録商標）、１粒あたり２５０ｍｇ、タカラバイオ社製〕は、アガロビオース、アガロテトラオース、アガロヘキサオース、及びアガロオクタオースを構成成分として含むアガロオリゴ糖混合物を１粒あたり１００ｍｇ含有している。この他に、該アガロオリゴ糖混合物を含有する市販の健康食品として、飲む寒天（登録商標）やグルコサミン＋アガロオリゴ糖〔いずれも製品名、タカラバイオ社製〕がある。 In the present invention, one kind of agarooligosaccharide may be used alone, or a mixture of two or more kinds of agarooligosaccharides may be used. For example, the composition of the present invention containing at least one selected from the group consisting of agarobiose, agarotetraose and agarohexaose can be exemplified as the agarooligosaccharide. Furthermore, the composition of the present invention containing agarobiose, agarotetraose and agarohexaose can be exemplified. Further, as the agarooligosaccharide, the composition of the present invention containing agarooctaose can be exemplified. The mixture of agarooligosaccharides containing agarobiose, agarotetraose, agarohexaose, and agarooctaose can be optionally prepared by using the above-mentioned method for producing agarooligosaccharides or by using commercially available agarooligosaccharides. Can be manufactured in the form of. Agafit [product name (registered trademark), 250 mg per grain, manufactured by Takara Bio Inc.], which is a commercially available health food, contains agarobiose, agarotetraose, agarohexaose, and agarooctaose as constituents. Each grain contains 100 mg of agarooligosaccharide mixture. In addition, as commercially available health foods containing the agarooligosaccharide mixture, there are drinking agar (registered trademark) and glucosamine + agarooligosaccharide [both product names, manufactured by Takara Bio Inc.].
本発明に使用する寒天、アガロース、又はアガロオリゴ糖は、精製品、粗抽出物のいずれでもよい。所望により、さらに他の成分を混合してもよい。当該他の成分は、寒天、アガロース、又はアガロオリゴ糖の効果を阻害しない成分であればよく、同様の効果を有するあるいは異なる効果を有する成分であってもよい。当該他の成分としては、特に限定するものではないが、例えば、腸内細菌叢に対して良好な効果を示す公知の物質、例えばオリゴ糖類（例えば、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、ミルクオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、難消化性オリゴ糖等）や乳酸菌類（例えば、Ｅｎｔｅｒｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ ＦＫ−２３、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｅｎｔｏｓｕｓ Ｓ−ＰＴ８４、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ等）をアガロオリゴ糖と組み合わせることができる。また、腸内細菌によりエクオールに変換されることが知られているイソフラボン類（例えば、ダイズ由来ダイゼイン）を組み合わせることができる。これらの他、抗肥満や抗ロコモティブシンドローム効果を有するカルコン類（例えば、アシタバ由来カルコン：タカラバイオ社製）やジオスゲニン配糖体（例えば、トゲドコロ由来ヤムスゲニン（登録商標）：タカラバイオ社製）と組み合わせ、前記効果が増強された組成物とすることができる。さらに、前記以外の化合物、例えば、発がん抑制作用やがんの増殖又は転移抑制作用を有するフコイダン（例えば、ガゴメコンブ由来フコイダン：タカラバイオ社製）やキノコテルペン（例えば、ブナシメジ由来テルペン：タカラバイオ社製）；ボタンボウフウ由来イソサミジン（タカラバイオ社製）等を組み合わせてもよい。 The agar, agarose, or agarooligosaccharide used in the present invention may be a refined product or a crude extract. If desired, other components may be further mixed. The other component may be a component having the same effect or a different effect as long as it does not inhibit the effect of agar, agarose, or agarooligosaccharide. The other components are not particularly limited, but are, for example, known substances having a good effect on the intestinal flora, such as oligosaccharides (for example, fructooligosaccharide, galactooligosaccharide, milk oligosaccharide, iso). Malto-oligosaccharides, indigestible oligosaccharides, etc.) and lactic acid bacteria (eg, Enterococcus faecalis FK-23, Lactobacillus pentosus S-PT84, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium longum, Bacillus coagulans, Lactobacillus Can be done. In addition, isoflavones known to be converted to equol by intestinal bacteria (for example, soybean-derived daidzein) can be combined. In addition to these, in combination with chalcones having anti-obesity and anti-locomotive syndrome effects (for example, Ashitaba-derived chalcone: manufactured by Takara Bio Inc.) and diosgenin glycosides (for example, Dioscorea esculenta-derived yamsgenin (registered trademark): manufactured by Takara Bio Inc.) , The composition can have the above-mentioned effect enhanced. Further, compounds other than the above, for example, fucoidan (for example, fucoidan derived from Gagomekonbu: manufactured by Takara Bio Inc.) and mushroom terpene (for example, terpene derived from Bunashimeji mushroom: manufactured by Takara Bio Inc.) having a carcinogenic inhibitory effect and an inhibitory effect on cancer growth or metastasis. ); Isosamidine derived from Button Bow Fu (manufactured by Takara Bio Inc.) and the like may be combined.
本発明の組成物は、有効成分である寒天、アガロース、又はアガロオリゴ糖自体、もしくはそれらを組み合わせてなる組成物であってもよく、前記成分やそれらの組み合せを賦形剤あるいは担体と混合して製造される組成物であってもよい。賦形剤及び担体としては、薬学的に許容されるものであれば特に限定はない。例えば、液状賦形剤及び担体としては水、塩溶液、エタノールやポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール）等のアルコール類もしくは大豆油、ピーナッツ油、ゴマ油、ミネラル油などの動植物油又は合成油が用いられる。固体賦形剤及び担体としては、乳糖、マルトース、スクロース、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチなどの糖類、アミノ酸類、ヒドロキシプロピルセルロースなどのセルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウムなどの有機酸塩、デキストラン、デキストラン硫酸、コンドロイチン硫酸、ヘパリン、ゼラチンなどが使用される。これらの固体担体又は液状担体を用いて、任意の形状として製造することができる。さらに、保存時の安定化のための種々の成分（界面活性剤、等張剤、防腐剤、抗菌剤、抗真菌剤、保存料、キレート化剤等）等を含有してもよい。
また、寒天、アガロース、又はアガロオリゴ糖の有効成分比率は、後述の本発明の組成物による作用を生じる比率であればよく、任意の量を使用することができる。
The composition of the present invention may be an active ingredient such as agar, agarose, or agarooligosaccharide itself, or a composition obtained by combining them, and the above ingredients or a combination thereof may be mixed with an excipient or a carrier. It may be a composition produced. The excipient and carrier are not particularly limited as long as they are pharmaceutically acceptable. For example, liquid excipients and carriers include water, salt solutions, alcohols such as ethanol and polyols (eg, glycerol, propylene glycol, liquid polyethylene glycol) or animal and vegetable oils such as soybean oil, peanut oil, sesame oil and mineral oil. Synthetic oil is used. Examples of solid excipients and carriers include saccharides such as lactose, maltose, sucrose, carboxymethyl cellulose and corn starch, amino acids, cellulose derivatives such as hydroxypropyl cellulose, organic acid salts such as magnesium stearate, dextran, dextran sulfate and chondroitin sulfate. , Heparin, gelatin, etc. are used. These solid carriers or liquid carriers can be used to produce any shape. Furthermore, various components for stabilization during storage (surfactant, isotonic agent, preservative, antibacterial agent, antifungal agent, preservative, chelating agent, etc.) may be contained.
Further, the ratio of the active ingredient of agar, agarose, or agarooligosaccharide may be any amount as long as it is a ratio that causes the action of the composition of the present invention described later.
本発明の組成物は、医薬品に適した原材料ならびに製造工程で製造することにより、医薬品とすることができる。さらに、任意の形状の食品、飲料に寒天、アガロース、又はアガロオリゴ糖を添加することにより、食品または飲料の形態の組成物としてもよい。また、本発明の組成物は、サプリメントと称される、一般的な食品とは異なる形状（錠剤、カプセル等）の食品であってもよい。前記の食品、飲料、サプリメントを包含する本発明の組成物は、栄養機能食品、特定保健用食品、特別用途食品及び機能性表示食品等に関する行政上の制度に従い、機能等の表示を付したものであってもよい。 The composition of the present invention can be made into a pharmaceutical product by producing it with a raw material suitable for a pharmaceutical product and a manufacturing process. Furthermore, agar, agarose, or agarooligosaccharide may be added to a food or beverage of any shape to form a composition in the form of a food or beverage. Further, the composition of the present invention may be a food having a shape (tablet, capsule, etc.) different from that of a general food, which is called a supplement. The composition of the present invention including the above-mentioned foods, beverages and supplements is labeled with functions, etc. in accordance with the administrative system for nutritionally functional foods, foods for specified health uses, special-purpose foods, foods with functional claims, etc. It may be.
（２）本発明の組成物による作用
本発明の組成物の投与対象としては、ヒト又は非ヒト動物が例示される。非ヒト動物としては、例えば、ペット（愛玩動物）、実験動物、動物園や水族館で飼育されている動物や魚類等が挙げられる。
本発明の組成物をヒトが摂取または又は非ヒト動物へ投与することにより、当該ヒトまたは又は非ヒト動物の腸内細菌叢の構成を調整することが可能となる。本発明を特に限定するものではないが、例えば、本発明の組成物を摂取することにより、腸内細菌叢において以下に示す変化が誘導される。
(2) Action by the composition of the present invention Examples of the administration target of the composition of the present invention include humans and non-human animals. Examples of non-human animals include pets (pets), laboratory animals, animals and fish bred in zoos and aquariums.
By ingesting or administering the composition of the present invention to a non-human animal, it is possible to adjust the composition of the intestinal flora of the human or non-human animal. Although the present invention is not particularly limited, for example, ingestion of the composition of the present invention induces the following changes in the intestinal flora.
（ａ）門レベルでの腸内細菌叢の構成の変化
本発明の組成物をヒトが摂取又は非ヒト動物へ投与することにより、Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ門細菌の存在割合が減少し、及び／又はＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ細菌の存在割合が増加する。非特許文献１で報告されているとおり、Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ門細菌の存在割合に対するＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ門細菌の存在割合の割合は、肥満傾向のヒトでは低く、正常型又は痩せ型のヒトの場合には高い傾向にある。本発明の組成物を摂取することによって腸内細菌叢の構成が肥満型から正常型又は痩せ型へ変化することから、肥満の軽減、肥満防止、非肥満状態の維持が期待される。言い換えれば、体重減少や体重増加抑制が期待される。逆に、吸収不良性症候群、体質性ヤセ、症候性ヤセ等の改善を目的として腸内細菌叢の構成を痩せ型から肥満型へ変化させる食品や飲料のスクリーニング法としても期待できる。
(A) Changes in the composition of the gut microbiota at the phylum level When the composition of the present invention is ingested by humans or administered to non-human animals, the abundance of Firmicutes phylum bacteria is reduced and / or of Bacteroidetes bacteria. The abundance ratio increases. As reported in Non-Patent Document 1, the ratio of the abundance ratio of Bacteroidetes phylum bacteria to the abundance ratio of Firmicutes phylum bacteria tends to be low in obese humans and high in normal or lean humans. .. Since the composition of the intestinal flora changes from the obese type to the normal type or the lean type by ingesting the composition of the present invention, it is expected to reduce obesity, prevent obesity, and maintain a non-obese state. In other words, weight loss and suppression of weight gain are expected. On the contrary, it can be expected as a screening method for foods and beverages that change the composition of the intestinal flora from a lean type to an obese type for the purpose of improving malabsorption syndrome, constitutional spoilage, symptomatological spoilage and the like.
（ｂ）生体に有益な細菌の存在割合の増加
Ｃｈｒｉｓｅｎｓｅｎｅｌｌａｃｅａｅ科の腸内細菌の存在は、生体の肥満抵抗性に寄与していると報告されている（非特許文献２）。本発明の組成物を摂取した後に前記細菌が検出される割合が増加することが示されている。すなわち、本発明の組成物は抗肥満効果が期待される腸内細菌叢の形成に有用である。
(B) Increase in the abundance ratio of bacteria beneficial to the living body It has been reported that the presence of intestinal bacteria of the family Chrysensenellaceae contributes to obesity resistance of the living body (Non-Patent Document 2). It has been shown that the rate at which the bacteria are detected increases after ingestion of the compositions of the invention. That is, the composition of the present invention is useful for the formation of the intestinal flora, which is expected to have an anti-obesity effect.
また、本発明の組成物を摂取したヒトにおいては、エクオール産生菌として知られているＥｇｇｅｒｔｈｅｌｌａ ｌｅｎｔａの存在割合が増加する。前記細菌はイソフラボン類をよりエストロゲン様活性の高いエクオールに変換することから、本発明の組成物を摂取することによってイソフラボン類などフィトエストロゲン（ｐｈｙｔｏｅｓｔｒｏｇｅｎ、外因性エストロゲン又は植物エストロゲンとも呼ばれる）を含む食品等の効果が高められる。すなわち、本発明の組成物により、体内でのイソフラボン類の代謝改善、活性化が促進される。ヒトにおけるイソフラボン類またはエクオールの作用としては、下記効果が知られている。（ア）更年期障害の症状（のぼせ・ほてり・ホットフラッシュ、頭痛、めまい、自律神経失調症様の症状、頻脈、血圧変動など）の緩和。（イ）過酸化脂質産生の抑制、皮脂の過剰分泌の抑制（にきび、吹き出物の予防・改善）。（ウ）がん（乳がん、子宮体がん、前立腺がん、胃がんなど）の予防。（エ）ＩＩ型糖尿病（空腹時血糖値、ＬＤＬコレステロール値、インスリン耐性など）の予防・改善。（オ）生活習慣病（糖尿病、高脂血症、動脈硬化、コレステロール値など）の予防・改善。（カ）骨粗しょう症の予防・改善、骨密度の上昇、骨中ミネラル濃度の増加。（キ）皮膚の老化（肌のハリ・弾力がなくなる、シミ・シワ・たるみが多くなるなど）の予防・改善。（ク）血流改善（冷え症、肩こり、緊張性頭痛、肌のくすみや乾燥などを予防・改善）。（ケ）男性型脱毛の予防・改善、髪の潤いを保つ。上記（ア）〜（ケ）から選択される効果が期待される腸内細菌叢の形成に本発明の組成物は有用である。 In addition, in humans who have ingested the composition of the present invention, the abundance ratio of Eggerthella lenta, which is known as an equol-producing bacterium, increases. Since the bacteria convert isoflavones into equol having higher estrogen-like activity, foods containing phytoestrogens (also called phytoestrogens, exogenous estrogens or phytoestrogens) such as isoflavones by ingesting the composition of the present invention, etc. The effect of is enhanced. That is, the composition of the present invention promotes improvement and activation of isoflavones in the body. The following effects are known as the actions of isoflavones or equol in humans. (A) Relief of symptoms of menopause (hot flashes, hot flashes, headaches, dizziness, autonomic imbalance-like symptoms, tachycardia, blood pressure fluctuations, etc.). (B) Suppression of lipid peroxide production and suppression of excess sebum secretion (prevention / improvement of acne and pimples). (C) Prevention of cancer (breast cancer, endometrial cancer, prostate cancer, stomach cancer, etc.). (D) Prevention and improvement of type II diabetes (fasting blood glucose level, LDL cholesterol level, insulin resistance, etc.). (E) Prevention and improvement of lifestyle-related diseases (diabetes, hyperlipidemia, arteriosclerosis, cholesterol level, etc.). (F) Prevention / improvement of osteoporosis, increase in bone density, increase in bone mineral concentration. (G) Prevention and improvement of skin aging (skin firmness / loss of elasticity, increased spots / wrinkles / sagging, etc.). (H) Improvement of blood flow (prevention / improvement of poor circulation, stiff shoulders, tension headache, dullness and dryness of skin, etc.). (K) Prevents and improves male pattern baldness and keeps hair moisturized. The composition of the present invention is useful for the formation of the intestinal flora, which is expected to have the effect selected from the above (a) to (ke).
また、本発明の組成物を摂取したヒトにおいては、酪酸産生菌として知られているＲｏｓｅｂｕｒｉａ属細菌の存在割合が増加することが示されている。すなわち、本発明の組成物は消化管の粘膜機能促進、消化管における病原微生物の増加抑制、消化管における炎症抑制、又は大腸がんの抑制などの効果が期待される腸内細菌叢の形成に有用である。 In addition, it has been shown that in humans who ingest the composition of the present invention, the abundance ratio of bacteria of the genus Roseburia known as butyric acid-producing bacteria increases. That is, the composition of the present invention is expected to promote the mucosal function of the gastrointestinal tract, suppress the increase of pathogenic microorganisms in the gastrointestinal tract, suppress inflammation in the gastrointestinal tract, or suppress colon cancer. It is useful.
（３）本発明の組成物の摂取又は投与方法
本発明の組成物の摂取又は投与方法は、当該組成物の形態に応じた方法であればよく、経口、経鼻、経皮、経粘膜、腹腔内投与、注射（皮内、皮下、筋肉内又は静脈）などが例示される。
(3) Ingestion or administration method of the composition of the present invention The ingestion or administration method of the composition of the present invention may be a method according to the form of the composition, and may be oral, nasal, transdermal, transmucosal, etc. Intraperitoneal administration, injection (intradermal, subcutaneous, intramuscular or intravenous) and the like are exemplified.
経口用の組成物の形状としては、公知の経口用加工食品又は医薬の剤型、例えば錠剤、カプセル剤、粉剤、顆粒剤、液剤、ドライシロップ剤、マイクロスフェア製剤等の形状が挙げられる。これら経口用の形状では糖衣又や胃溶性もしくは腸溶性物質のフィルムでの被覆を施してもよい。 Examples of the shape of the composition for oral use include known dosage forms of processed oral foods or pharmaceuticals, such as tablets, capsules, powders, granules, liquids, dry syrups, and microsphere formulations. These oral forms may be coated with a sugar coating or a film of a gastric or enteric substance.
非経口投与用の水溶液組成物は、例えば、適切に緩衝化されており、かつ食塩又はグルコース等で等張化された無菌の溶液である。当該水溶液は、例えば、静脈内、筋肉内、皮下及び腹腔内投与において使用することができる。 The aqueous composition for parenteral administration is, for example, a sterile solution that is appropriately buffered and isotonic with salt, glucose, or the like. The aqueous solution can be used, for example, for intravenous, intramuscular, subcutaneous and intraperitoneal administration.
本発明を特に限定するものではないが、摂取者又は被投与者の負担を考慮すると、本発明の組成物は経口摂取又は経口投与されることが好ましい。 Although the present invention is not particularly limited, the composition of the present invention is preferably orally ingested or orally administered in consideration of the burden on the ingestor or the recipient.
本発明の組成物の摂取又は投与量は、投与対象の状態に応じて適切な量を適宜投与すればよい。本発明を限定するものではないが、例えばヒトにおける摂取量は、アガロオリゴ糖として０．２〜２０００００ｍｇ／ｄａｙ、好ましくは２〜２００００ｍｇ／ｄａｙ、さらに好ましくは２０〜２０００ｍｇ／ｄａｙ、特に好ましくは４０〜１０００ｍｇ／ｄａｙである。 The ingestion or dose of the composition of the present invention may be appropriately administered in an appropriate amount according to the condition of the subject to be administered. Although not limiting the present invention, for example, the intake in humans is 0.2 to 200,000 mg / day, preferably 2 to 20000 mg / day, more preferably 20 to 2000 mg / day, and particularly preferably 40 to 40 to agarooligosaccharide. It is 1000 mg / day.
言い換えれば、本発明を限定するものではないが、例えばヒトにおける摂取量は、アガロオリゴ糖として０．００４〜４０００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、好ましくは０．０４〜４００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、さらに好ましくは０．４〜４０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、特に好ましくは０．８〜２０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙである。 In other words, although not limiting the present invention, for example, the intake in humans is 0.004 to 4000 mg / kg / day, preferably 0.04 to 400 mg / kg / day, and more preferably 0. It is 4 to 40 mg / kg / day, particularly preferably 0.8 to 20 mg / kg / day.
本発明の組成物の摂取又は投与回数は、投与対象の状態に応じて適切な回数、摂取又は投与すればよい。本発明を限定するものではないが、前記の１日摂取量を目安に、１〜３回／日摂取又は投与すればよい。１日あたりの摂取又は投与の回数は、毎日同じでもよいし、変更してもよい。摂取又は投与の方法は、毎回同じでもよいし、変更してもよい。 The composition of the present invention may be ingested or administered at an appropriate number of times according to the condition of the subject to be administered. The present invention is not limited, but it may be ingested or administered 1 to 3 times / day with the above-mentioned daily intake as a guide. The number of ingestions or administrations per day may be the same or changed daily. The method of ingestion or administration may be the same or changed each time.
本発明の組成物を摂取又は投与する期間は、投与対象の状態に応じて適切な期間摂取又は投与すればよい。例えば、1日間〜1年間程度で摂取又は投与を中止してもよいが、効果の維持を望む場合にはさらに長期間摂取又は投与してもよい。 The period for ingesting or administering the composition of the present invention may be an appropriate period for ingestion or administration depending on the condition of the subject to be administered. For example, ingestion or administration may be discontinued after about 1 day to 1 year, but if it is desired to maintain the effect, ingestion or administration may be performed for a longer period of time.
本発明の組成物を摂取又は投与することにより、腸内細菌叢の構成を調整することができる。特に限定はされないが、例えば、肥満型、正常型あるいは痩せ型と特徴づけられる構成の腸内細菌叢を保持しうる体質へ人為的に誘導することができる。あるいは、例えば、腸内でイソフラボン類の代謝が活性化される構成の腸内細菌叢を保持しうる体質へ人為的に誘導することができる。さらに例えば、酪酸産生菌が増加するまたは酪酸産生量が増加する構成の腸内細菌叢を保持しうる体質へ人為的に誘導することができる。 By ingesting or administering the composition of the present invention, the composition of the intestinal flora can be adjusted. Although not particularly limited, for example, it is possible to artificially induce a constitution capable of retaining the intestinal bacterial flora having a constitution characterized as obese, normal or lean. Alternatively, for example, it can be artificially induced into a constitution capable of retaining the intestinal bacterial flora having a constitution in which the metabolism of isoflavones is activated in the intestine. Further, for example, it is possible to artificially induce a constitution capable of retaining an intestinal flora having a structure in which butyric acid-producing bacteria increase or butyric acid-producing amount increases.
また、本発明の組成物の効果を、腸内細菌叢の構成に基づいて評価しながら摂取又は投与することもできる。なお、本発明の組成物を摂取又は投与することに起因する重大な不具合は確認されていない。 In addition, the effect of the composition of the present invention can be ingested or administered while being evaluated based on the composition of the intestinal bacterial flora. No serious problems caused by ingesting or administering the composition of the present invention have been confirmed.
（４）腸内細菌叢の解析
本発明の組成物が腸内細菌叢にもたらす効果は、例えば下記の方法により確認することができる。
(4) Analysis of intestinal bacterial flora The effect of the composition of the present invention on the intestinal bacterial flora can be confirmed, for example, by the following method.
腸内など環境中の細菌叢は難培養微生物が大半を占めることがすでに知られており、培養によるバイアスをさけるため、培養工程を必要としない解析手法が主流となっている。例えば、試料中の微生物のゲノムＤＮＡ中に存在している、ｓｍａｌｌ ｓｕｂｕｎｉｔ ｒｉｂｏｓｏｍａｌ ＲＮＡをコードする遺伝子（ｒＤＮＡ）の全長又は一部、あるいはｒＤＮＡ間のスペーサー領域（ＩＴＳ）をＰＣＲ増幅し、得られた増幅産物の塩基配列について次世代シーケンサを用いて網羅的に配列解析する方法、あるいは次世代シーケンサを用いたｔｅｒｍｉｎａｌ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｌｅｎｇｔｈ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ（Ｔ−ＲＦＬＰ）法にて該増幅産物を網羅的に解析する方法が知られている。こうして得られた解析データから、試料中に存在する微生物の種類ならびにその存在割合を知ることができる。目的に応じ、前記解析方法のうち１種のみを用いてもよいし、両者の結果を組み合わせてデータ解析してもよい。 It is already known that difficult-to-culture microorganisms occupy most of the bacterial flora in the environment such as the intestine, and in order to avoid bias due to culture, an analysis method that does not require a culture step has become the mainstream. For example, the full length or part of the gene (rDNA) encoding small subjunit ribosomal RNA present in the genomic DNA of the microorganism in the sample, or the spacer region (ITS) between the rDNA was obtained by PCR amplification. A method of comprehensively analyzing the base sequence of an amplification product using a next-generation sequencer, or a method of comprehensively analyzing the amplification product by a terminal fragment length polymorphism (T-RFLP) method using a next-generation sequencer. It has been known. From the analytical data thus obtained, it is possible to know the types of microorganisms present in the sample and their abundance ratios. Depending on the purpose, only one of the above analysis methods may be used, or the results of both may be combined for data analysis.
微生物の種類を同定するための指標とするｒＤＮＡあるいはｒＤＮＡ間のスペーサー領域としては、本発明を特に限定するものではないが、例えば、原核生物では１６Ｓ ｒＤＮＡ、真核生物では１８Ｓ ｒＤＮＡと５．８Ｓ ｒＤＮＡ間のスペーサー領域（ＩＴＳ１）が挙げられる。１６Ｓ ｒＤＮＡを増幅するプライマーセットは、１６Ｓ ｒＤＮＡのＶ３−Ｖ４領域を増幅するように設計された３４１Ｆ／８０６Ｒや第十六改正日本薬局方（参考情報 Ｇ４ 微生物関連 遺伝子解析による微生物の迅速同定法）収録の１０Ｆ／８００Ｒ及び／又は８００Ｆ／１５００Ｒが、ＩＴＳ１を増幅するプライマーセットは、同収録のＩＴＳ１Ｆ／ＩＴＳ１Ｒが好適に使用できるが、これらに限定されるものではない。 The present invention is not particularly limited as the rDNA used as an index for identifying the type of microorganism or the spacer region between rDNA, but for example, 16S rDNA in prokaryotes and 18S rDNA and 5.8S in eukaryotes. The spacer region between rDNA (ITS1) can be mentioned. Primer sets that amplify 16S rDNA include 341F / 806R designed to amplify the V3-V4 region of 16S rDNA and the 16th revised Japanese Pharmacopoeia (Reference Information: Rapid Identification of Microorganisms by G4 Microbial-Related Genetic Analysis) As the primer set in which the recorded 10F / 800R and / or 800F / 1500R amplifies ITS1, the recorded ITS1F / ITS1R can be preferably used, but the primer set is not limited thereto.
次世代シーケンサとしては、本発明を特に限定するものではないが、例えば、ＨｉＳｅｑシステム、ＭｉＳｅｑシステム（いずれもイルミナ社製）、Ｉｏｎ Ｐｒｏｔｏｎ／Ｉｏｎ ＰＧＭシステム（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）、ＰａｃＢｉｏ ＲＳ ＩＩ、Ｓｅｑｕｅｌシステム（いずれもパシフィックバイオサイエンス社製）及びＰｒｏｍｅｔｈＩＯＮ、ＭｉｎＩＯＮ（いずれもオックスフォードナノポアテクノロジーズ社製）等が挙げられる。 The next-generation sequencer is not particularly limited to the present invention, and is, for example, a HiSeq system, a MiSeq system (all manufactured by Illumina), an Ion Proton / Ion PGM system (manufactured by Thermo Fisher Scientific), and a PacBio RS. II, Sequence system (all manufactured by Pacific Bioscience), PromethION, MinION (all manufactured by Oxford Nanopore Technologies) and the like.
Ｔ−ＲＦＬＰ法は、一方のプライマーの５’末端が蛍光標識されたプライマーセットを用いて１６Ｓ ｒＤＮＡを増幅し、その増幅産物を制限酵素で切断し、蛍光標識された末端ＤＮＡ断片長をシーケンサにて検出する方法である。当該方法で使用する制限酵素は、例えば、Ｂｓｌ Ｉ又は、Ｂｆａ ＩとＲｓａ Ｉの組み合わせ等が挙げられる（例えば、長島浩二ら、腸内細菌学雑誌、２０１４年、第２８巻、第４号、１５５〜１６４ページ参照）。 In the T-RFLP method, 16S rDNA is amplified using a primer set in which the 5'end of one primer is fluorescently labeled, the amplification product is cleaved with a restriction enzyme, and the length of the fluorescently labeled terminal DNA fragment is used as a sequencer. It is a method of detecting. Examples of restriction enzymes used in this method include Bsl I or a combination of Bfa I and RSA I (for example, Koji Nagashima et al., Journal of Gut Bacteriology, 2014, Vol. 28, No. 4, etc.). See pages 155 to 164).
本発明の組成物の摂取前後に腸内細菌を含有する試料、例えば糞便を採取し、そこに含まれる微生物由来ＤＮＡを前記の方法により網羅的に解析する。摂取の前後における腸内細菌叢の状態（構成細菌の種類ならびに存在比率）を比較することにより、本発明の組成物の効果を明らかにすることができる。 A sample containing intestinal bacteria, for example, feces, is collected before and after ingestion of the composition of the present invention, and the microbial-derived DNA contained therein is comprehensively analyzed by the above method. By comparing the state of the intestinal flora (type and abundance ratio of constituent bacteria) before and after ingestion, the effect of the composition of the present invention can be clarified.
以下に本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明の範囲はこれら実施例に限定されるものではない。 Hereinafter, the present invention will be specifically described with reference to Examples, but the scope of the present invention is not limited to these Examples.
実施例１
インフォームドコンセントの得られた健常成人被験者１３名（男性９名、女性４名）にタカラバイオ社製のアガフィット（担体として結晶セルロース、微粒酸化ケイ素、ステアリン酸カルシウムを含む）を１日２粒（アガロオリゴ糖として１日２００ｍｇ）、毎日１か月間摂取させた。摂取期間中、被験者の食事は普段どおりとし、特段の制限は課さなかったが、被験者の過半数において共通の健康食品等（アガフィットを除く）を摂取した事実はない。また、すべての被験者は摂取期間中に医薬品を服用していない。今回の試験において、アガロオリゴ糖の摂取に起因するとみられる被験者の不調等は認められなかった。
Example 1
TAKARA Bio Inc.'s Agafit (including crystalline cellulose, fine silicon oxide, and calcium stearate as carriers) was applied to 13 healthy adult subjects (9 males and 4 females) who gave informed consent 2 tablets per day (2 tablets per day). Agarooligosaccharide (200 mg daily) was ingested daily for 1 month. During the ingestion period, the subjects' diets were normal and no special restrictions were imposed, but the majority of the subjects did not ingest common health foods (excluding Agafit). Also, all subjects did not take any medications during the ingestion period. In this study, no upsets were found in the subjects, which seemed to be caused by the intake of agarooligosaccharides.
摂取期間の前後に採取した新鮮便のサンプルからそれぞれＤＮＡを抽出し、細菌類のゲノムＤＮＡに含まれる１６ＳリボソーマルＲＮＡコード領域に相当するＤＮＡ断片をＰＣＲによって増幅させた。次いで、得られたＤＮＡ断片の塩基配列について次世代シークエンサーを用いて解読した。こうして得られた塩基配列情報について、相同性解析による細菌種の同定と出現頻度解析による各細菌種の存在割合の推定を実施することにより、サンプルごとの腸内細菌叢解析データ（検出された菌種とその存在割合）を取得した。その結果を表１〜３に示す。 DNA was extracted from each fresh stool sample collected before and after the ingestion period, and a DNA fragment corresponding to the 16S ribosomal RNA coding region contained in bacterial genomic DNA was amplified by PCR. Next, the base sequence of the obtained DNA fragment was deciphered using a next-generation sequencer. For the nucleotide sequence information obtained in this way, the intestinal flora analysis data (detected bacteria) for each sample was performed by identifying the bacterial species by homology analysis and estimating the abundance ratio of each bacterial species by the appearance frequency analysis. Species and their abundance ratio) were acquired. The results are shown in Tables 1 to 3.
得られたすべての腸内細菌叢解析データについて相互の類似度の評価を行った。すると、同一被験者のアガロオリゴ糖接種前後のデータが最も類似するものと判定されることはなかった。このことから、アガロオリゴ糖の摂取によって腸内細菌叢に含まれている菌種の構成が変化することが明らかとなった。 The similarity between all the obtained intestinal flora analysis data was evaluated. Then, it was not judged that the data before and after the agarooligosaccharide inoculation of the same subject were the most similar. From this, it was clarified that the composition of bacterial species contained in the intestinal flora changes depending on the intake of agarooligosaccharide.
個々の腸内細菌叢解析データについて、被験者ごとのＦｉｒｍｉｃｕｔｅｓ門細菌とＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ門細菌それぞれの存在割合ならびに被験者ごとのＦｉｒｍｉｃｕｔｅｓ門細菌／Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ門細菌の比を算出し、アガロオリゴ糖摂取前、摂取後の両群の平均値を得た。このデータを表１に示す。 For each gut microbiota analysis data, the abundance ratio of Firmicutes and Bacteroidetes for each subject and the ratio of Firmicutes / Bacteroidetes for each subject were calculated, and both before and after ingestion of agarooligosaccharide. The mean value of the group was obtained. This data is shown in Table 1.
表１に示すように、アガロオリゴ糖の摂取後に、糞便中のＦｉｒｍｉｃｕｔｅｓ門細菌の存在割合の減少及びＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ門細菌の存在割合の増加が認められた。 As shown in Table 1, after ingestion of agarooligosaccharide, a decrease in the abundance rate of Firmicutes phylum bacteria in feces and an increase in the abundance rate of Bacteroidetes phylum bacteria were observed.
個々の腸内細菌叢解析データから、Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎｅｌｌａｃｅａｅ科細菌を検出したものを抽出した結果を表２に示す。 Table 2 shows the results of extracting the detected Bacteria of the family Christensenellaceae from the individual gut microbiota analysis data.
表２に示すように、アガロオリゴ糖の摂取前には１３例中５例にＣｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎｅｌｌａｃｅａｅ科細菌が検出されていたのに対して、摂取後には１３例中１０例から検出された。 As shown in Table 2, Christianenellaceae bacteria were detected in 5 of 13 cases before ingestion of agarooligosaccharide, whereas they were detected in 10 of 13 cases after ingestion.
個々の腸内細菌叢解析データから、エクオール産生菌であるＥｇｇｅｒｔｈｅｌｌａ ｌｅｎｔａを検出したものを抽出した結果を表３に示す。 Table 3 shows the results of extracting the detected Eggerthella lenta, which is an equol-producing bacterium, from the individual intestinal flora analysis data.
表３に示すように、アガロオリゴ糖の摂取前にはすべての被験者においてＥｇｇｅｒｔｈｅｌｌａ ｌｅｎｔａが検出されていなかったのに対して、摂取後には１３例中１２例から検出された。 As shown in Table 3, Eggerthella lenta was not detected in all the subjects before ingestion of agarooligosaccharide, whereas it was detected in 12 out of 13 cases after ingestion.
実施例２
インフォームドコンセントの得られた健常成人被験者６２名（男性３６名、女性２６名）にタカラバイオ社製のアガフィット（担体として結晶セルロース、微粒酸化ケイ素、ステアリン酸カルシウムを含む）を１日２粒（アガロオリゴ糖として１日２００ｍｇ）、毎日１か月間摂取させた。実施例１と同様に、摂取期間中、被験者の食事は普段どおりとし、特段の制限は課さなかったが、被験者の過半数において共通の健康食品等（アガフィットを除く）を摂取した事実はない。また、すべての被験者は摂取期間中に医薬品を服用していない。今回の試験において、アガロオリゴ糖の摂取に起因するとみられる被験者の不調等は認められなかった。
Example 2
62 healthy adult subjects (36 males and 26 females) who gave informed consent were given 2 tablets per day (including crystalline cellulose, fine silicon oxide, and calcium stearate as carriers) manufactured by Takara Bio Inc. Agarooligosaccharide (200 mg daily) was ingested daily for 1 month. Similar to Example 1, during the ingestion period, the subjects' diets were normal and no special restrictions were imposed, but the majority of the subjects did not ingest common health foods (excluding Agafit). Also, all subjects did not take any medications during the ingestion period. In this study, no upsets were found in the subjects, which seemed to be caused by the intake of agarooligosaccharides.
実施例１と同様に、摂取期間の前後に採取した新鮮便のサンプルからそれぞれＤＮＡを抽出、解析し、サンプルごとの腸内細菌叢解析データ（検出された菌種とその存在割合）を取得した。その結果を表４〜５に示す。 Similar to Example 1, DNA was extracted and analyzed from fresh stool samples collected before and after the ingestion period, and intestinal flora analysis data (detected bacterial species and their abundance ratio) for each sample was obtained. .. The results are shown in Tables 4-5.
得られたすべての腸内細菌叢解析データについて相互の類似度の評価を行った。すると、同一被験者のアガロオリゴ糖接種前後のデータが最も類似するものと判定されることはなかった。このことから、アガロオリゴ糖の摂取によって腸内細菌叢に含まれている菌種の存在割合が変化することが明らかとなった。 The similarity between all the obtained intestinal flora analysis data was evaluated. Then, it was not judged that the data before and after the agarooligosaccharide inoculation of the same subject were the most similar. From this, it was clarified that the abundance ratio of bacterial species contained in the intestinal flora changes depending on the intake of agarooligosaccharide.
個々の腸内細菌叢解析データについて、被験者ごとのＦｉｒｍｉｃｕｔｅｓ門細菌とＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ門細菌それぞれの存在割合ならびに被験者ごとのＦｉｒｍｉｃｕｔｅｓ門細菌／Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ門細菌の比を算出し、アガロオリゴ糖摂取前、摂取後の両群の平均値を得た。このデータを表４に示す。 For each gut microbiota analysis data, the abundance ratio of Firmicutes and Bacteroidetes for each subject and the ratio of Firmicutes / Bacteroidetes for each subject were calculated, and both before and after ingestion of agarooligosaccharide. The mean value of the group was obtained. This data is shown in Table 4.
表４に示すように、アガロオリゴ糖の摂取後に、糞便中のＦｉｒｍｉｃｕｔｅｓ門細菌の存在割合の減少及びＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ門細菌の存在割合の増加が認められた。 As shown in Table 4, after ingestion of agarooligosaccharide, a decrease in the abundance rate of Firmicutes phylum bacteria in feces and an increase in the abundance rate of Bacteroidetes phylum bacteria were observed.
個々の腸内細菌叢解析データについて、酪酸産生菌であるＲｏｓｅｂｕｒｉａ属細菌の存在割合を算出し、アガロオリゴ糖摂取前、摂取後の平均値を得た。このデータを表５に示す。 For each intestinal flora analysis data, the abundance ratio of the butyric acid-producing bacterium Roseburia was calculated, and the average value before and after ingestion of agarooligosaccharide was obtained. This data is shown in Table 5.
表５に示すように、アガロオリゴ糖の摂取後に、糞便中のＲｏｓｅｂｕｒｉａ属細菌の存在割合の増加が認められた。 As shown in Table 5, an increase in the abundance ratio of Roseburia bacteria in feces was observed after ingestion of agarooligosaccharide.
以上の通り、アガロオリゴ糖摂取前と比べて摂取１か月後には腸内細菌叢の構成について有意な変化が認められた。また、それらの変化はヒトの健康維持に関して有益なものであった。
この結果から、アガロオリゴ糖の摂取が、腸内細菌叢の構成を調整することに対して効果を発揮することが明らかになった。
As described above, a significant change in the composition of the intestinal flora was observed 1 month after the intake of the agarooligosaccharide as compared with that before the intake. In addition, these changes were beneficial for maintaining human health.
From this result, it was clarified that the intake of agarooligosaccharide exerts an effect on regulating the composition of the intestinal flora.
本発明は、食品、飲料、機能性食品、サプリメント及び医療分野において有用である。 The present invention is useful in the fields of foods, beverages, functional foods, supplements and medical fields.
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