JP2021043212A - ポリペプチドアレイおよびポリペプチドをアレイに取り付ける方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本願は、35 USC 119(e)によって、2015年3月12日に出願された同時継続中の先の米国特許仮出願第62/132,405号の恩典を主張する。本仮出願の開示はその全体が参照により本明細書に組み入れられる。
典型的なマイクロアレイシステムは、概して、ガラス、プラスチック、またはシリコンチップのような固体平面上にフォーマットされた生体分子プローブ、例えば、DNA、タンパク質、またはペプチドと、試料を扱うために必要とされる機器(自動ロボット工学)、レポーター分子を読み取るために必要とされる機器(スキャナ)、およびデータを解析するために必要とされる機器(生物情報学ツール)で構成される。マイクロアレイ技術によって、1平方センチメートルあたり多くのプローブをモニタリングすることが容易になる。複数のプローブを使用する利点には、速度、順応性、包括性、および相対的に安い大量生産コストが含まれるが、これに限定されない。このようなアレイの用途には、病原体の検出および特定を含む診断微生物学、抗菌耐性の研究、疫学的菌株分類、癌遺伝子の研究、宿主ゲノム発現を用いた微生物感染の解析、ならびに多型プロファイルが含まれるが、これに限定されない。
製剤、支持体、およびアレイが本明細書において開示される。ある特定の態様では、光活性化された結合体化化合物を用いて生体分子をアレイに取り付ける方法が開示される。生体分子をアレイに部位特異的に取り付ける方法も開示される。これらの方法によって作製されたアレイおよびこれらのアレイを使用する方法も開示される。
[本発明1001]
生体分子を表面に取り付ける方法であって、以下の工程を含む、方法:
該表面に取り付けられた複数の取り付け基を備える表面を得る工程;
該取り付け基に、光活性化可能な結合体化化合物を取り付ける工程;
該表面を生体分子と接触させる工程;および
該表面を電磁放射線に選択的に露光する工程であって、該電磁放射線が、該取り付けられた光活性化可能な結合体化化合物を活性化し、該取り付けられ、活性化された光活性化可能な結合体化化合物が該生体分子に結合し、それによって、該生体分子が該表面に取り付けられる、工程。
[本発明1002]
光活性化可能な結合体化化合物が、NHSエステル、スルホ-NHSエステル、アミン、第一級アルコール、第二級アルコール、フェノール、チオール、アニリン、ヒドロキサム酸、第一級アミド、脂肪族アミン、およびスルホンアミドからなる群より選択される官能基を含む、本発明1001の方法。
[本発明1003]
光活性化可能な結合体化化合物がエステルを含む、本発明1001の方法。
[本発明1004]
光活性化可能な結合体化化合物がカルボン酸基を含む、本発明1001の方法。
[本発明1005]
カルボキシル基が活性化される、本発明1004の方法。
[本発明1006]
光活性化可能な結合体化化合物がN-ヒドロキシスクシンイミド部分を含む、本発明1001の方法。
[本発明1007]
光活性化可能な結合体化化合物がアミン基を含む、本発明1001の方法。
[本発明1008]
光活性化可能な結合体化化合物が、ジアジリン、アリールアジド、およびベンゾフェノンからなる群より選択される光活性化可能な基を含む、本発明1001の方法。
[本発明1009]
光活性化可能な結合体化化合物が、ジアジリン部分、アリールアジド部分、およびベンゾフェノン部分からなる群より選択される光活性化された結合体化部分を含む、本発明1001の方法。
[本発明1010]
光活性化可能な結合体化化合物が、エステルに取り付けられたN-ヒドロキシスクシンイミド部分を含む、本発明1001の方法。
[本発明1011]
光活性化可能な結合体化化合物が、ジアジリン部分、アリールアジド部分、およびベンゾフェノン部分からなる群より選択される部分に機能的に取り付けられたN-ヒドロキシスクシンイミドエステルを含む、本発明1001の方法。
[本発明1012]
取り付け基がアミン基である、本発明1001の方法。
[本発明1013]
取り付け基がカルボン酸基である、本発明1001の方法。
[本発明1014]
カルボキシル基が、アミン基に結合するように活性化される、本発明1013の方法。
[本発明1015]
生体分子がポリペプチドである、本発明1001の方法。
[本発明1016]
ポリペプチドがタンパク質である、本発明1015の方法。
[本発明1017]
生体分子が、低分子、タンパク質、炭水化物、オリゴマー、ペプチド、細胞溶解産物に由来する生体分子、抗体、プロテアーゼ、および酵素からなる群より選択される、本発明1001の方法。
[本発明1018]
電磁放射線の波長が248nmである、本発明1001の方法。
[本発明1019]
電磁放射線の波長が330〜370nmである、本発明1001の方法。
[本発明1020]
表面が多孔性であり、取り付け基が複数の方向に向けられている、本発明1001の方法。
[本発明1021]
表面が、支持体の平面層の位置が定められた場所に機能的にカップリングされたピラーの表面である、本発明1001の方法。
[本発明1022]
それぞれのピラーが、支持体の平面層から伸ばされた平らな上面を有する、本発明1021の方法。
[本発明1023]
支持体のそれぞれのピラーの上面と平面層との間の距離が1,000〜5,000オングストロームである、本発明1022の方法。
[本発明1024]
ピラーが、支持体上に存在する複数のピラーのうちの1つである、本発明1021の方法。
[本発明1025]
複数のピラーが10,000/cm2を超える密度で存在する、本発明1024の方法。
[本発明1026]
それぞれのピラーの中心が他の任意のピラーの中心から少なくとも2,000オングストローム離れている、本発明1024の方法。
[本発明1027]
それぞれのピラーの表面が平面層の上面と平行である、本発明1024の方法。
[本発明1028]
それぞれのピラーの表面が平面層の上面と実質的に平行である、本発明1024の方法。
[本発明1029]
それぞれのピラーの表面積が少なくとも1μm2である、本発明1021の方法。
[本発明1030]
それぞれのピラーの表面の表面積の総面積が10,000μm2未満である、本発明1021の方法。
[本発明1031]
それぞれのピラーが二酸化ケイ素または窒化ケイ素を含む、本発明1021の方法。
[本発明1032]
それぞれのピラーが少なくとも98〜99重量%の二酸化ケイ素である、本発明1021の方法。
[本発明1033]
位置が定められた場所がそれぞれ、複数の同一の生体分子を含む、本発明1021の方法。
[本発明1034]
位置が定められた場所がそれぞれ、他の位置が定められた場所とは異なる複数の同一の配列を含む、本発明1033の方法。
[本発明1035]
位置が定められた場所がそれぞれ、位置が区別できる場所である、本発明1021の方法。
[本発明1036]
生体分子が表面に共有結合的に取り付けられる、本発明1001の方法。
[本発明1037]
選択的に露光された表面における生体分子の取り付けの取り付け効率が、少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、または99%である、本発明1001の方法。
[本発明1038]
アレイへの生体分子の取り付けの安定性が高い、本発明1001の方法。
[本発明1039]
表面の選択された場所に取り付けられた複数のユニークな生体分子を備える表面を生じるように任意で繰り返される、本発明1001の方法。
[本発明1040]
表面が、該表面の選択された場所に取り付けられた少なくとも2種類のユニークな生体分子を含む、本発明1001の方法。
[本発明1041]
表面が、該表面の選択された場所に取り付けられた少なくとも10種類のユニークな生体分子を含む、本発明1040の方法。
[本発明1042]
表面が、該表面の選択された場所に取り付けられた少なくとも100種類のユニークな生体分子を含む、本発明1041の方法。
[本発明1043]
表面が、該表面の選択された場所に取り付けられた少なくとも1,000種類のユニークな生体分子を含む、本発明1042の方法。
[本発明1044]
表面が、該表面の選択された場所に取り付けられた少なくとも10,000種類のユニークな生体分子を含む、本発明1043の方法。
[本発明1045]
ポリペプチドを表面に取り付ける方法であって、以下の工程を含む、方法:
該表面に取り付けられた複数の遊離アミン基を備える表面を得る工程;
該表面を、結合体化化合物を含む結合体化溶液と接触させることによって、該表面に結合体化化合物を取り付ける工程であって、該結合体化化合物が、活性化されたカルボン酸基を含み、該活性化されたカルボン酸基が、該表面に取り付けられた遊離アミン基に結合する、工程;
該表面をポリペプチドと接触させる工程;および
該表面を電磁放射線に選択的に露光する工程であって、該電磁放射線が、該取り付けられた結合体化化合物を活性化し、該取り付けられ、活性化された結合体化化合物が該ポリペプチドに結合し、それによって、該ポリペプチドが該表面に取り付けられる、工程。
[本発明1046]
ポリペプチドを表面に取り付ける方法であって、以下の工程を含む、方法:
該表面に取り付けられた複数の遊離カルボン酸基を備える表面を得る工程;
該表面をカルボン酸活性化溶液と接触させ、それによって、アミン基との結合のために該カルボン酸基を活性化する工程;
該表面を、結合体化化合物を含む結合体化溶液と接触させることによって、該表面に結合体化化合物を取り付ける工程であって、該結合体化化合物がアミン基を含み、該アミン基が、該表面に取り付けられた活性化されたカルボン酸基に結合する、工程;
該表面をポリペプチドと接触させる工程;および
該表面を電磁放射線に選択的に露光する工程であって、該電磁放射線が、該取り付けられた結合体化化合物を活性化し、該取り付けられ、活性化された結合体化化合物が該ポリペプチドに結合し、それによって、該ポリペプチドが該表面に取り付けられる、工程。
[本発明1047]
結合体化化合物を表面に取り付けた後に、該表面を洗浄する工程をさらに含む、本発明1045または1046の方法。
[本発明1048]
表面に取り付けられたカルボン酸基を活性化した後に、該表面を洗浄する工程をさらに含む、本発明1046の方法。
[本発明1049]
活性化された結合体化化合物が、ペプチドバックボーン、側鎖、アミン基、カルボン酸基からなる群より選択されるポリペプチドの部位に結合する、本発明1045または1046の方法。
[本発明1050]
表面を結合体化溶液と接触させる工程が、該結合体化溶液を該表面上にスピンコーティングする工程を含む、本発明1045または1046の方法。
[本発明1051]
電磁放射線の波長が248nmである、本発明1045または1046の方法。
[本発明1052]
電磁放射線の波長が330〜370nmである、本発明1045または1046の方法。
[本発明1053]
結合体化化合物が、ジアジリン部分、アリールアジド部分、およびベンゾフェノン部分からなる群より選択される光活性化された結合体化部分を含む、本発明1045または1046の方法。
[本発明1054]
結合体化化合物が、エステルに取り付けられたN-ヒドロキシスクシンイミド部分を含む、本発明1046の方法。
[本発明1055]
結合体化化合物が、ジアジリン部分、アリールアジド部分、およびベンゾフェノン部分からなる群より選択される部分に機能的に取り付けられたN-ヒドロキシスクシンイミドエステルを含む、本発明1046の方法。
[本発明1056]
結合体化溶液がポリマーを含む、本発明1045または1046の方法。
[本発明1057]
ポリマーがポリビニルピロリドンである、本発明1056の方法。
[本発明1058]
カルボン酸活性化溶液がカルボジイミドまたはN-ヒドロキシスクシンイミドを含む、本発明1046の方法。
[本発明1059]
カルボン酸活性化溶液が、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド、N,N'-ジイソプロピルカルボジイミド、(ベンゾトリアゾール-1-イルオキシ)トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート、ブロモ(トリピロリジン-1-イル)ホスホニウムヘキサフルオロホスファート、O-(7-アザベンゾトリアゾール-1-イル)-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、O-ベンゾトリアゾール-N,N,N',N'-テトラメチル-ウロニウム-ヘキサフルオロ-ホスファート、およびO-(ベンゾトリアゾール-1-イル)-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラートからなる群より選択される化合物を含む、本発明1046の方法。
[本発明1060]
カルボン酸活性化溶液が、N,N-ジイソプロピルエチルアミン、1-ヒドロキシ-7-アザベンゾトリアゾール、およびヒドロキシベンゾトリアゾールからなる群より選択される化合物を含む、本発明1045または1046の方法。
[本発明1061]
ポリペプチドがタンパク質である、本発明1045または1046の方法。
[本発明1062]
選択的に露光された表面における生体分子の取り付けの取り付け効率が、少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、または99%である、本発明1045または1046の方法。
[本発明1063]
アレイへの生体分子の取り付けの安定性が高い、本発明1045または1046の方法。
[本発明1064]
表面の選択された場所に取り付けられた複数のユニークな生体分子を備える表面を生じるように任意で繰り返される、本発明1045または1046の方法。
[本発明1065]
表面が、該表面の選択された場所に取り付けられた少なくとも2種類のユニークな生体分子を含む、本発明1045または1046の方法。
[本発明1066]
表面が、該表面の選択された場所に取り付けられた少なくとも10種類のユニークな生体分子を含む、本発明1065の方法。
[本発明1067]
表面が、該表面の選択された場所に取り付けられた少なくとも100種類のユニークな生体分子を含む、本発明1066の方法。
[本発明1068]
表面が、該表面の選択された場所に取り付けられた少なくとも1,000種類のユニークな生体分子を含む、本発明1067の方法。
[本発明1069]
表面が、該表面の選択された場所に取り付けられた少なくとも10,000種類のユニークな生体分子を含む、本発明1068の方法。
[本発明1070]
アレイ表面に複数の取り付け基を含むアレイであって、該複数の取り付け基のうち少なくとも1つが、光活性化可能な結合体化化合物に共有結合的に連結される、アレイ。
[本発明1071]
光活性化可能な結合体化化合物に取り付けられた生体分子を含む、本発明1070のアレイ。
[本発明1072]
生体分子がポリペプチドである、本発明1071のアレイ。
[本発明1073]
ポリペプチドがタンパク質である、本発明1072のアレイ。
[本発明1074]
生体分子が、低分子、タンパク質、炭水化物、オリゴマー、ペプチド、細胞溶解産物に由来する生体分子、抗体、プロテアーゼ、および酵素からなる群より選択される、本発明1071のアレイ。
[本発明1075]
1cm2あたり少なくとも100個、1,000個、10,000個、100,000個、1,000,000個、または10,000,000個の生体分子を含む、本発明1071のアレイ。
[本発明1076]
アレイの表面積が1μm2〜10mm2である、本発明1070のアレイ。
[本発明1077]
光活性化可能な結合体化化合物が、NHSエステル、スルホ-NHSエステル、アミン、第一級アルコール、第二級アルコール、フェノール、チオール、アニリン、ヒドロキサム酸、第一級アミド、脂肪族アミン、およびスルホンアミドからなる群より選択される官能基を含む、本発明1070のアレイ。
[本発明1078]
光活性化可能な結合体化化合物がエステルを含む、本発明1070のアレイ。
[本発明1079]
光活性化可能な結合体化化合物がカルボン酸基を含む、本発明1070のアレイ。
[本発明1080]
カルボン酸基が活性化される、本発明1079のアレイ。
[本発明1081]
光活性化可能な結合体化化合物がN-ヒドロキシスクシンイミド部分を含む、本発明1070のアレイ。
[本発明1082]
光活性化可能な結合体化化合物がアミン基を含む、本発明1070のアレイ。
[本発明1083]
光活性化可能な結合体化化合物が、ジアジリン、アリールアジド、およびベンゾフェノンからなる群より選択される光活性化可能な基を含む、本発明1070のアレイ。
[本発明1084]
光活性化可能な結合体化化合物が、248nmの波長を含む電磁放射線によって活性化される、本発明1070のアレイ。
[本発明1085]
光活性化可能な結合体化化合物が、330〜360nmの波長を含む電磁放射線によって活性化される、本発明1070のアレイ。
[本発明1086]
光活性化可能な結合体化化合物が、ジアジリン部分、アリールアジド部分、およびベンゾフェノン部分からなる群より選択される光活性化された結合体化部分を含む、本発明1070のアレイ。
[本発明1087]
光活性化可能な結合体化化合物が、エステルに取り付けられたN-ヒドロキシスクシンイミド部分を含む、本発明1070のアレイ。
[本発明1088]
光活性化可能な結合体化化合物が、ジアジリン部分、アリールアジド部分、およびベンゾフェノン部分からなる群より選択される部分に機能的に取り付けられたN-ヒドロキシスクシンイミドエステルを含む、本発明1070のアレイ。
[本発明1089]
表面が多孔性であり、取り付け基が複数の方向に向けられている、本発明1070のアレイ。
[本発明1090]
表面が、支持体の平面層の位置が定められた場所に機能的にカップリングされたピラーの表面である、本発明1070のアレイ。
[本発明1091]
それぞれのピラーが、支持体の平面層から伸ばされた平らな上面を有する、本発明1090のアレイ。
[本発明1092]
それぞれのピラーの上面と支持体の平面層との間の距離が1,000〜5,000オングストロームである、本発明1091のアレイ。
[本発明1093]
ピラーが、支持体上に存在する複数のピラーのうちの1つである、本発明1090のアレイ。
[本発明1094]
ピラーが10,000/cm2を超える密度で存在する、本発明1093のアレイ。
[本発明1095]
それぞれのピラーの中心が他の任意のピラーの中心から少なくとも2,000オングストローム離れている、本発明1093のアレイ。
[本発明1096]
それぞれのピラーの表面が平面層の上面と平行である、本発明1093のアレイ。
[本発明1097]
それぞれのピラーの表面が平面層の上面と実質的に平行である、本発明1093のアレイ。
[本発明1098]
それぞれのピラーの表面積が少なくとも1μm2である、本発明1090のアレイ。
[本発明1099]
それぞれのピラーの表面の表面積の総面積が10,000μm2未満である、本発明1090のアレイ。
[本発明1100]
それぞれのピラーが二酸化ケイ素または窒化ケイ素を含む、本発明1090のアレイ。
[本発明1101]
それぞれのピラーが少なくとも98〜99重量%の二酸化ケイ素である、本発明1090のアレイ。
[本発明1102]
位置が定められた場所がそれぞれ、複数の同一の生体分子を含む、本発明1090のアレイ。
[本発明1103]
位置が定められた場所がそれぞれ、他の位置が定められた場所とは異なる複数の同一の配列を含む、本発明1102のアレイ。
[本発明1104]
位置が定められた場所がそれぞれ、位置が区別できる場所である、本発明1090のアレイ。
[本発明1105]
1cm2あたり少なくとも100個、1,000個、10,000個、100,000個、1,000,000個、または10,000,000個のピラーを含む、本発明1090のアレイ。
[本発明1106]
表面が、該表面の選択された場所に取り付けられた少なくとも2種類のユニークな生体分子を含む、本発明1070のアレイ。
[本発明1107]
表面が、該表面の選択された場所に取り付けられた少なくとも10種類のユニークな生体分子を含む、本発明1106のアレイ。
[本発明1108]
表面が、該表面の選択された場所に取り付けられた少なくとも100種類のユニークな生体分子を含む、本発明1107のアレイ。
[本発明1109]
表面が、該表面の選択された場所に取り付けられた少なくとも1,000種類のユニークな生体分子を含む、本発明1108のアレイ。
[本発明1110]
表面が、該表面の選択された場所に取り付けられた少なくとも10,000種類のユニークな生体分子を含む、本発明1109のアレイ。
[本発明1111]
取り付け基がアミン基である、本発明1070のアレイ。
[本発明1112]
取り付け基がカルボン酸基である、本発明1070のアレイ。
[本発明1113]
カルボキシル基が、アミン基に結合するように活性化される、本発明1112のアレイ。
[本発明1114]
試料中の生体分子を検出する方法であって、以下の工程を含む、方法:
本発明1070〜1113のいずれかの支持体を準備する工程;
該支持体を該試料と接触させる工程;および
該試料内にある生体分子と、該支持体に取り付けられた生体分子との結合事象を検出する工程。
本発明のこれらのおよび他の特徴、局面、および利点は、以下の説明および添付の図面に関して、さらによく理解されるようになる。
特許請求の範囲および明細書において用いられる用語は、他で特定しない限り、以下で示されるように定義される。
製剤
光活性結合体化溶液およびポリペプチド製剤などの製剤が本明細書において開示される。これらの製剤は、例えば、本明細書において開示された支持体および/またはポリペプチドアレイの製造および/または使用において有用な場合がある。
光活性結合体化溶液が本明細書において開示される。一部の局面では、光活性結合体化溶液は、溶媒、光活性結合体化化合物、およびポリマーなどの成分を含んでもよい。
式中、nは、1より大きな任意の正の整数である。
カルボン酸が生体分子、例えば、結合体化化合物の遊離アミン基と反応するように、カルボン酸を活性化するための活性化製剤が本明細書において開示される。活性化製剤は、カルボン酸基活性化化合物および溶媒などの成分を含んでもよい。一態様では、カルボン酸基活性化化合物はカルボジイミドまたはカルボジイミド前駆体である。一部の局面では、カルボジイミドは1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミドである。一部の態様では、カルボン酸基活性化化合物はN-ヒドロキシスクシンイミド(NHS)である。一部の態様では、溶媒は水である。一部の態様では、カルボン酸基活性化化合物はカルボン酸をカルボニル基(すなわち、カルボン酸基活性化)に変換する。一部の態様では、カルボン酸基は、活性化製剤に曝露されて5分後、10分後、15分後、20分後、30分後、45分後、または60分後に活性化される。
リンカー製剤も本明細書において開示される。リンカー製剤は、溶媒、ポリマー、リンカー分子、およびカップリング試薬などの成分を含んでもよい。一部の局面では、ポリマーは1重量%のポリビニルアルコールと2.5重量%のポリビニルピロリドンであり、リンカー分子は1.25重量%のポリエチレンオキシドであり、カップリング試薬は1重量%の1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミドであり、溶媒は水を含む。一部の局面では、ポリマーは0.5〜5重量%のポリビニルアルコールと0.5〜5重量%のポリビニルピロリドンであり、リンカー分子は0.5〜5重量%のポリエチレンオキシドであり、カップリング試薬は0.5〜5重量%の1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミドであり、溶媒は水を含む。
支持体も本明細書において開示される。一部の局面では、支持体表面は平面(すなわち、2次元)である。一部の局面では、支持体は、第1の単量体基本要素を結合するための官能基を含む多孔層(すなわち、3次元層)を含んでもよい。一部の局面では、支持体表面は、ペプチドを取り付けまたは合成するためのピラーを含む。一部の態様では、多孔層はピラーの上部に加えられる。
使用することができる多孔層は、第1のペプチド基本要素を取り付けるために(構成要素ポリマーに固有の、または多孔層に導入された)カルボン酸官能基を有する、多孔構造からなる平らな透過性のポリマー材料である。例えば、多孔層は多孔性ケイ素で構成されてもよく、多孔性ケイ素の表面にはポリマー基本要素を取り付けるための官能基が取り付けられている。別の例では、多孔層は架橋ポリマー材料を含んでもよい。一部の態様では、多孔層は、ポリスチレン、サッカロース、デキストラン、ポリアクリロイルモルホリン、ポリアクリレート、ポリメチルアクリレート、ポリアクリルアミド、ポリアクリロルピロリドン(polyacrylolpyrrolidone)、ポリ酢酸ビニル、ポリエチレングリコール、アガロース、セファロース、他の従来のクロマトグラフィー型材料、ならびにその誘導体および混合物を使用することができる。一部の態様では、多孔層構成材料は、ポリ(ビニルアルコール)、デキストラン、アルギン酸ナトリウム、ポリ(アスパラギン酸)、ポリ(エチレングリコール)、ポリ(エチレンオキシド)、ポリ(ビニルピロリドン)、ポリ(アクリル酸)、ポリ(アクリル酸)-ナトリウム塩、ポリ(アクリルアミド)、ポリ(N-イソプロピルアクリルアミド)、ポリ(ヒドロキシエチルアクリレート)、ポリ(アクリル酸)、ポリ(スチレンスルホン酸ナトリウム)、ポリ(2-アクリルアミド-2-メチル-1-プロパンスルホン酸)、多糖類、およびセルロース誘導体より選択される。好ましくは、多孔層の多孔度は10〜80%である。一態様では、多孔層の厚さは0.01μm〜約1,000μmである。多孔層に含まれる孔径は2nm〜約100μmでもよい。
一部の態様では、支持体は、金属を含みかつ上面および下面を有する平面層と、前記層の位置が定められた場所に機能的に連結された複数のピラーを備える。ここで、それぞれのピラーは、前記層から伸ばされた平らな表面を有し、それぞれのピラーの表面と前記層の上面との間の距離は約1,000〜5,000オングストロームであり、複数のピラーは約10,000/cm2を超える密度で存在する。
アレイも本明細書において開示される。一部の局面では、アレイは、三次元アレイ、例えば、特徴が多孔性アレイの表面に取り付けられている多孔性アレイでもよい。多孔層の表面は、外面と、多孔性アレイ内の孔容積を規定する表面を含む。一部の局面では、三次元アレイは、表面の位置が定められた場所に取り付けられた特徴を含んでもよく、前記特徴はそれぞれ、決定可能な配列および意図された長さのペプチド鎖のコレクションを含む。一態様では、前記アレイ内にあるポリペプチドの一部分は、98%を超える各カップリング工程の平均ポリペプチド結合体化効率を特徴とする。
支持体を製造する方法
支持体を作るための方法も本明細書において開示される。一部の局面では、支持体を生成する方法は、多孔層を支持層にカップリングする工程を含んでもよい。支持層は、任意の金属またはプラスチックまたはケイ素または酸化ケイ素または窒化ケイ素を含んでもよい。一態様では、支持体は、ペプチド合成およびタンパク質カップリングの間にペプチドを結合するために支持体に取り付けられた複数のカルボン酸支持体を含む。一部の局面では、支持体を生成する方法は、多孔層を複数のピラーにカップリングする工程を含んでもよく、多孔層は化合物を支持体に取り付けるための官能基を含み、複数のピラーは平面層の位置が定められた場所にカップリングされ、それぞれのピラーは、平面層から伸ばされた平らな表面を有し、それぞれのピラーの表面と平面層の上面との間の距離は約1,000〜5,000オングストロームであり、複数のピラーは約10,000/cm2を超える密度で存在する。
支持体は、米国特許出願第20100240555号に説明したように半導体モジュールにおいて表面誘導体化することができる。米国特許出願第20100240555号は、その全体が全ての目的のために参照により本明細書に組み入れられる。本発明の代表的な支持体は、表面誘導体化の準備ができている酸化物のピラーを有する。表面誘導体化とは、生体分子をカップリングために遊離アミノ基を利用できるようにアミノシラン基を支持体に付加する方法である。一部の局面では、表面誘導体化された支持体に取り付けられる最初の分子は、tbocで保護されたグリシンである。このカップリング手順は、当業者に広く知られている標準的なメリフィールド固相ペプチド合成手順と同様である。
アレイを製造するための方法も本明細書において開示される。一部の局面では、本明細書において開示されたアレイは、表面、例えば、本明細書において開示された支持体上で、インサイチューで合成することができる。場合によっては、アレイは光リソグラフィを用いて作られる。例えば、支持体は、光活性結合体化溶液と接触される。光活性結合体化溶液中の光活性化合物は、アレイの表面に取り付けられた取り付け基(例えば、カルボン酸またはアミン基)に結合する。マスクを用いて、表面上の特定の場所への放射線または光の露光を制御することができる。露光された場所では結合体化化合物は活性化され、その結果、結合体化化合物上に1つまたは複数の新しく反応性になった部分が生じる。次いで、望ましい生体分子またはポリペプチドが結合体化化合物に連結される。表面上の特定の場所または位置が定められた場所において多数の特徴を合成するために、このプロセスは繰り返されてもよい(例えば、Pirrungらへの米国特許第5,143,854号、米国特許出願公開第2007/0154946号(2005年12月29日に出願された)、同第2007/0122841号(2005年11月30日に出願された)、同第2007/0122842号(2006年3月30日に出願された)、同第2008/0108149号(2006年10月23日に出願された)、および同第2010/0093554号(2008年6月2日に出願された)を参照されたい。これらはそれぞれ参照により本明細書に組み入れられる)。
支持体、製剤、および/またはアレイを使用する方法も本明細書において開示される。本明細書において開示されたアレイの用途は、研究用途、治療目的、医療診断、および/または1名もしくは複数名の患者の層別化を含んでもよい。
本実施例は、ピラーの上部に表面がある支持体の構築について説明する。このプロセスを図1に視覚的に概説した。2.4μmの熱成長酸化物があるシリコンウェーハをUniversity Wafersから入手した。最初に、これらのウェーハをスプレーモジュールにおいてプライマーでプライミングした。ヘキサメチルジシラザン(HMDS)をSigma Aldrich Incから入手した。次いで、ウェーハをフォトレジストコートモジュールに入れて、Rohm and Haasから入手した市販の遠紫外線フォトレジストP5107、またはAZ Electronic Materialsから入手したAZ DX7260p 700を用いて、6000Åの厚さとなるようにスピンコーティングした。次いで、ウェーハをホットプレートにおいて120℃で60秒間ベークした。
実施例1からのウェーハを以下の方法を用いて表面誘導体化した。アミノプロピルトリエトキシシラン(APTES)をSigma Aldrichから入手した。エタノール200プルーフをVWRから入手した。最初に、ウェーハをエタノールで5分間洗浄し、次いで、シラン層を成長させるために1重量%APTES/エタノールで20〜30分間洗浄した。次いで、リンカー分子を取り付けるための-NH2基を含むシラン単層を成長させるために、ウェーハを110℃の窒素ベークオーブンに入れて硬化させた。
ケイ素支持体上にニッケル1000Aを付着させたシリコンウェーハをUniversity Wafersから入手した。Dextran Bio Xtra(MW40000)をSigma Aldrichから入手した。Bis-ポリエチレングリコールカルボキシメチルエーテルをSigma Aldrichから入手した。ポリビニルピロリドン1000000をPoly Sciences Incから入手した。上記の3種類のポリマーを2:2:1の重量比で、50重量%乳酸エチル/50重量%水の溶媒組成物に、Oakwood Chemicals Incから入手した2重量%の光酸発生剤ジメチル-2,4-ジヒドロキシフェニルスルホニウムトリフラートと一緒に溶解した。この溶液を、ケイ素支持体上にニッケル1000Aを付着させたシリコンウェーハ上にスピンコーティングした。
平面支持体と比較して、多孔性支持体上では層に沿ってCOOH基の2次元濃度を増やすことができる。表面誘導体化したウェーハ上にデキストランをカップリングした。Pierce Scientificから入手した1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミドと、Pierce Scientificから入手したN-ヒドロキシスクシンイミド(NHS)を、それぞれ0.2Mおよび0.1Mのモル濃度で、10重量%のデキストランと一緒に脱イオン水に溶解した。このカップリング溶液を3000rpmの速度でウェーハにスピンコーティングし、デキストラン-COOH支持体に完全にカップリングするまで65℃で90秒間ベークした。架橋溶液を添加し、架橋して、多次元COOH支持体を得た。
Bis-ポリエチレングリコールカルボキシメチルエーテルを表面誘導体化ウェーハ上にカップリングした。Pierce Scientificから入手した1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミドと、Pierce Scientificから入手したN-ヒドロキシスクシンイミド(NHS)をそれぞれ0.2Mおよび0.1Mのモル濃度で、10重量%のポリエチレングリコール(PEG)と一緒に脱イオン水に溶解した。このカップリング溶液を3000rpmの速度でウェーハにスピンコーティングし、PEG-COOH支持体に完全にカップリングするまで65℃で90秒間ベークした。架橋溶液を添加し、架橋して、多次元COOH支持体を得た。
シリコンウェーハをUniversity Wafersから入手した。図34A(6)では、ウェーハ上に金属を付着させた。この金属をクロム、チタン、またはアルミニウムから選択した。スパッタ堆積と呼ばれるプロセスによって金属を付着させた。スパッタ堆積とは、供給源である「ターゲット」から材料を放出し、次いで、材料がウェーハ上に付着するスパッタリングによって薄膜を付着させる物理蒸着(PVD)法である。金属付着の厚さは支持体の上部で少なくとも500Åになることが保証された。
実施例2に説明したように、支持体上にアミン基があるようにウェーハを表面誘導体化する(図2A)。ジアジリン、アリールアジド、またはベンゾフェノンのカルボキシルNHSエステルなどの光結合体化基をSigma Aldrichから入手した。結合体化溶液を作製するために、0.1mMのNHS-ジアジリンを1%PVP/水に溶解する。PVP(ポリビニルピロリドン)をPolysciencesから入手した。ウェーハ上に結合体化溶液を2000rpmで30秒間スピンコーティングし、完全にカップリングされるまで30分間そのままにする(図2B)。このカップリングプロセスは、カップリング効率を改善するために、また、時間を短くするためにベークオーブン内で、またはマイクロ波で加熱することによって行うこともできる。反応しなかったNHSをクエンチするために、結合体化溶液を含むウェーハを、VWRから入手したtris緩衝食塩水で洗浄した(図2C)。キャッピング溶液を以下の通りに調製する。Spectrum chemicalsから入手した50%無水酢酸と、VWRから入手した50%Nメチルピロリドンを混合する。ウェーハ上にキャッピング溶液をコーティングし、反応しなかったアミンをキャッピングするために75℃で90秒間ベークする。次に、ウェーハをN-メチルピロリドンで洗浄し、その後に、DI水でリンスし、乾燥させる。組換えIL-6をLife Techから入手した。50ug/ml IL-6および1%PVPを脱イオン水に溶解することによってIL-6カップリング溶液を調製する。このタンパク質カップリング溶液をウェーハ上に2000rpmで30秒間スピンコーティングする(図2D)。次いで、ウェーハを、Nikon S203スキャナに入れてレチクルを用いて248nmの遠紫外線を用いて100mJ/cm2で露光する(図2E)。これは、デジタルマイクロミラー(digital micromirror)または他のマスクレス(maskless)リソグラフィに基づく装置でも行うことができる。露光中に、ジアジレンのUV光分解によって、IL-6のようなタンパク質中にある任意のX-H結合との反応性が非常に高いカルベンが形成され、安定した共有結合が形成される。次いで、結合したIL-6を部位特異的な場所に残すために、タンパク質カップリング溶液をアレイから洗い流す(図2F)。このプロセスによって、1回のタンパク質結合体化が完了する。
実施例6に説明したように、支持体上にCOOH基があるように表面誘導体化したウェーハを準備する(図4A)。Sigma Aldrichから入手したEDC/NHSでウェーハを室温で10分間、活性化する(図4B)。
Claims (114)
- 生体分子を表面に取り付ける方法であって、以下の工程を含む、方法:
該表面に取り付けられた複数の取り付け基を備える表面を得る工程;
該取り付け基に、光活性化可能な結合体化化合物を取り付ける工程;
該表面を生体分子と接触させる工程;および
該表面を電磁放射線に選択的に露光する工程であって、該電磁放射線が、該取り付けられた光活性化可能な結合体化化合物を活性化し、該取り付けられ、活性化された光活性化可能な結合体化化合物が該生体分子に結合し、それによって、該生体分子が該表面に取り付けられる、工程。 - 光活性化可能な結合体化化合物が、NHSエステル、スルホ-NHSエステル、アミン、第一級アルコール、第二級アルコール、フェノール、チオール、アニリン、ヒドロキサム酸、第一級アミド、脂肪族アミン、およびスルホンアミドからなる群より選択される官能基を含む、請求項1記載の方法。
- 光活性化可能な結合体化化合物がエステルを含む、請求項1記載の方法。
- 光活性化可能な結合体化化合物がカルボン酸基を含む、請求項1記載の方法。
- カルボキシル基が活性化される、請求項4記載の方法。
- 光活性化可能な結合体化化合物がN-ヒドロキシスクシンイミド部分を含む、請求項1記載の方法。
- 光活性化可能な結合体化化合物がアミン基を含む、請求項1記載の方法。
- 光活性化可能な結合体化化合物が、ジアジリン、アリールアジド、およびベンゾフェノンからなる群より選択される光活性化可能な基を含む、請求項1記載の方法。
- 光活性化可能な結合体化化合物が、ジアジリン部分、アリールアジド部分、およびベンゾフェノン部分からなる群より選択される光活性化された結合体化部分を含む、請求項1記載の方法。
- 光活性化可能な結合体化化合物が、エステルに取り付けられたN-ヒドロキシスクシンイミド部分を含む、請求項1記載の方法。
- 光活性化可能な結合体化化合物が、ジアジリン部分、アリールアジド部分、およびベンゾフェノン部分からなる群より選択される部分に機能的に取り付けられたN-ヒドロキシスクシンイミドエステルを含む、請求項1記載の方法。
- 取り付け基がアミン基である、請求項1記載の方法。
- 取り付け基がカルボン酸基である、請求項1記載の方法。
- カルボキシル基が、アミン基に結合するように活性化される、請求項13記載の方法。
- 生体分子がポリペプチドである、請求項1記載の方法。
- ポリペプチドがタンパク質である、請求項15記載の方法。
- 生体分子が、低分子、タンパク質、炭水化物、オリゴマー、ペプチド、細胞溶解産物に由来する生体分子、抗体、プロテアーゼ、および酵素からなる群より選択される、請求項1記載の方法。
- 電磁放射線の波長が248nmである、請求項1記載の方法。
- 電磁放射線の波長が330〜370nmである、請求項1記載の方法。
- 表面が多孔性であり、取り付け基が複数の方向に向けられている、請求項1記載の方法。
- 表面が、支持体の平面層の位置が定められた場所に機能的にカップリングされたピラーの表面である、請求項1記載の方法。
- それぞれのピラーが、支持体の平面層から伸ばされた平らな上面を有する、請求項21記載の方法。
- 支持体のそれぞれのピラーの上面と平面層との間の距離が1,000〜5,000オングストロームである、請求項22記載の方法。
- ピラーが、支持体上に存在する複数のピラーのうちの1つである、求項21記載の方法。
- 複数のピラーが10,000/cm2を超える密度で存在する、請求項24記載の方法。
- それぞれのピラーの中心が他の任意のピラーの中心から少なくとも2,000オングストローム離れている、請求項24記載の方法。
- それぞれのピラーの表面が平面層の上面と平行である、請求項24記載の方法。
- それぞれのピラーの表面が平面層の上面と実質的に平行である、請求項24記載の方法。
- それぞれのピラーの表面積が少なくとも1μm2である、請求項21記載の方法。
- それぞれのピラーの表面の表面積の総面積が10,000μm2未満である、請求項21記載の方法。
- それぞれのピラーが二酸化ケイ素または窒化ケイ素を含む、請求項21記載の方法。
- それぞれのピラーが少なくとも98〜99重量%の二酸化ケイ素である、請求項21記載の方法。
- 位置が定められた場所がそれぞれ、複数の同一の生体分子を含む、請求項21記載の方法。
- 位置が定められた場所がそれぞれ、他の位置が定められた場所とは異なる複数の同一の配列を含む、請求項33記載の方法。
- 位置が定められた場所がそれぞれ、位置が区別できる場所である、請求項21記載の方法。
- 生体分子が表面に共有結合的に取り付けられる、請求項1記載の方法。
- 選択的に露光された表面における生体分子の取り付けの取り付け効率が、少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、または99%である、請求項1記載の方法。
- アレイへの生体分子の取り付けの安定性が高い、請求項1記載の方法。
- 表面の選択された場所に取り付けられた複数のユニークな生体分子を備える表面を生じるように任意で繰り返される、請求項1記載の方法。
- 表面が、該表面の選択された場所に取り付けられた少なくとも2種類のユニークな生体分子を含む、請求項1記載の方法。
- 表面が、該表面の選択された場所に取り付けられた少なくとも10種類のユニークな生体分子を含む、請求項40記載の方法。
- 表面が、該表面の選択された場所に取り付けられた少なくとも100種類のユニークな生体分子を含む、請求項41記載の方法。
- 表面が、該表面の選択された場所に取り付けられた少なくとも1,000種類のユニークな生体分子を含む、請求項42記載の方法。
- 表面が、該表面の選択された場所に取り付けられた少なくとも10,000種類のユニークな生体分子を含む、請求項43記載の方法。
- ポリペプチドを表面に取り付ける方法であって、以下の工程を含む、方法:
該表面に取り付けられた複数の遊離アミン基を備える表面を得る工程;
該表面を、結合体化化合物を含む結合体化溶液と接触させることによって、該表面に結合体化化合物を取り付ける工程であって、該結合体化化合物が、活性化されたカルボン酸基を含み、該活性化されたカルボン酸基が、該表面に取り付けられた遊離アミン基に結合する、工程;
該表面をポリペプチドと接触させる工程;および
該表面を電磁放射線に選択的に露光する工程であって、該電磁放射線が、該取り付けられた結合体化化合物を活性化し、該取り付けられ、活性化された結合体化化合物が該ポリペプチドに結合し、それによって、該ポリペプチドが該表面に取り付けられる、工程。 - ポリペプチドを表面に取り付ける方法であって、以下の工程を含む、方法:
該表面に取り付けられた複数の遊離カルボン酸基を備える表面を得る工程;
該表面をカルボン酸活性化溶液と接触させ、それによって、アミン基との結合のために該カルボン酸基を活性化する工程;
該表面を、結合体化化合物を含む結合体化溶液と接触させることによって、該表面に結合体化化合物を取り付ける工程であって、該結合体化化合物がアミン基を含み、該アミン基が、該表面に取り付けられた活性化されたカルボン酸基に結合する、工程;
該表面をポリペプチドと接触させる工程;および
該表面を電磁放射線に選択的に露光する工程であって、該電磁放射線が、該取り付けられた結合体化化合物を活性化し、該取り付けられ、活性化された結合体化化合物が該ポリペプチドに結合し、それによって、該ポリペプチドが該表面に取り付けられる、工程。 - 結合体化化合物を表面に取り付けた後に、該表面を洗浄する工程をさらに含む、請求項45または46記載の方法。
- 表面に取り付けられたカルボン酸基を活性化した後に、該表面を洗浄する工程をさらに含む、請求項46記載の方法。
- 活性化された結合体化化合物が、ペプチドバックボーン、側鎖、アミン基、カルボン酸基からなる群より選択されるポリペプチドの部位に結合する、請求項45または46記載の方法。
- 表面を結合体化溶液と接触させる工程が、該結合体化溶液を該表面上にスピンコーティングする工程を含む、請求項45または46記載の方法。
- 電磁放射線の波長が248nmである、請求項45または46記載の方法。
- 電磁放射線の波長が330〜370nmである、請求項45または46記載の方法。
- 結合体化化合物が、ジアジリン部分、アリールアジド部分、およびベンゾフェノン部分からなる群より選択される光活性化された結合体化部分を含む、請求項45または46記載の方法。
- 結合体化化合物が、エステルに取り付けられたN-ヒドロキシスクシンイミド部分を含む、請求項46記載の方法。
- 結合体化化合物が、ジアジリン部分、アリールアジド部分、およびベンゾフェノン部分からなる群より選択される部分に機能的に取り付けられたN-ヒドロキシスクシンイミドエステルを含む、請求項46記載の方法。
- 結合体化溶液がポリマーを含む、請求項45または46記載の方法。
- ポリマーがポリビニルピロリドンである、請求項56記載の方法。
- カルボン酸活性化溶液がカルボジイミドまたはN-ヒドロキシスクシンイミドを含む、請求項46記載の方法。
- カルボン酸活性化溶液が、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド、N,N'-ジイソプロピルカルボジイミド、(ベンゾトリアゾール-1-イルオキシ)トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート、ブロモ(トリピロリジン-1-イル)ホスホニウムヘキサフルオロホスファート、O-(7-アザベンゾトリアゾール-1-イル)-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、O-ベンゾトリアゾール-N,N,N',N'-テトラメチル-ウロニウム-ヘキサフルオロ-ホスファート、およびO-(ベンゾトリアゾール-1-イル)-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラートからなる群より選択される化合物を含む、請求項46記載の方法。
- カルボン酸活性化溶液が、N,N-ジイソプロピルエチルアミン、1-ヒドロキシ-7-アザベンゾトリアゾール、およびヒドロキシベンゾトリアゾールからなる群より選択される化合物を含む、請求項45または46記載の方法。
- ポリペプチドがタンパク質である、請求項45または46記載の方法。
- 選択的に露光された表面における生体分子の取り付けの取り付け効率が、少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、または99%である、請求項45または46記載の方法。
- アレイへの生体分子の取り付けの安定性が高い、請求項45または46記載の方法。
- 表面の選択された場所に取り付けられた複数のユニークな生体分子を備える表面を生じるように任意で繰り返される、請求項45または46記載の方法。
- 表面が、該表面の選択された場所に取り付けられた少なくとも2種類のユニークな生体分子を含む、請求項45または46記載の方法。
- 表面が、該表面の選択された場所に取り付けられた少なくとも10種類のユニークな生体分子を含む、請求項65記載の方法。
- 表面が、該表面の選択された場所に取り付けられた少なくとも100種類のユニークな生体分子を含む、請求項66記載の方法。
- 表面が、該表面の選択された場所に取り付けられた少なくとも1,000種類のユニークな生体分子を含む、請求項67記載の方法。
- 表面が、該表面の選択された場所に取り付けられた少なくとも10,000種類のユニークな生体分子を含む、請求項68記載の方法。
- アレイ表面に複数の取り付け基を含むアレイであって、該複数の取り付け基のうち少なくとも1つが、光活性化可能な結合体化化合物に共有結合的に連結される、アレイ。
- 光活性化可能な結合体化化合物に取り付けられた生体分子を含む、請求項70記載のアレイ。
- 生体分子がポリペプチドである、請求項71記載のアレイ。
- ポリペプチドがタンパク質である、請求項72記載のアレイ。
- 生体分子が、低分子、タンパク質、炭水化物、オリゴマー、ペプチド、細胞溶解産物に由来する生体分子、抗体、プロテアーゼ、および酵素からなる群より選択される、請求項71記載のアレイ。
- 1cm2あたり少なくとも100個、1,000個、10,000個、100,000個、1,000,000個、または10,000,000個の生体分子を含む、請求項71記載のアレイ。
- アレイの表面積が1μm2〜10mm2である、請求項70記載のアレイ。
- 光活性化可能な結合体化化合物が、NHSエステル、スルホ-NHSエステル、アミン、第一級アルコール、第二級アルコール、フェノール、チオール、アニリン、ヒドロキサム酸、第一級アミド、脂肪族アミン、およびスルホンアミドからなる群より選択される官能基を含む、請求項70記載のアレイ。
- 光活性化可能な結合体化化合物がエステルを含む、請求項70記載のアレイ。
- 光活性化可能な結合体化化合物がカルボン酸基を含む、請求項70記載のアレイ。
- カルボン酸基が活性化される、請求項79記載のアレイ。
- 光活性化可能な結合体化化合物がN-ヒドロキシスクシンイミド部分を含む、請求項70記載のアレイ。
- 光活性化可能な結合体化化合物がアミン基を含む、請求項70記載のアレイ。
- 光活性化可能な結合体化化合物が、ジアジリン、アリールアジド、およびベンゾフェノンからなる群より選択される光活性化可能な基を含む、請求項70記載のアレイ。
- 光活性化可能な結合体化化合物が、248nmの波長を含む電磁放射線によって活性化される、請求項70記載のアレイ。
- 光活性化可能な結合体化化合物が、330〜360nmの波長を含む電磁放射線によって活性化される、請求項70記載のアレイ。
- 光活性化可能な結合体化化合物が、ジアジリン部分、アリールアジド部分、およびベンゾフェノン部分からなる群より選択される光活性化された結合体化部分を含む、請求項70記載のアレイ。
- 光活性化可能な結合体化化合物が、エステルに取り付けられたN-ヒドロキシスクシンイミド部分を含む、請求項70記載のアレイ。
- 光活性化可能な結合体化化合物が、ジアジリン部分、アリールアジド部分、およびベンゾフェノン部分からなる群より選択される部分に機能的に取り付けられたN-ヒドロキシスクシンイミドエステルを含む、請求項70記載のアレイ。
- 表面が多孔性であり、取り付け基が複数の方向に向けられている、請求項70記載のアレイ。
- 表面が、支持体の平面層の位置が定められた場所に機能的にカップリングされたピラーの表面である、請求項70記載のアレイ。
- それぞれのピラーが、支持体の平面層から伸ばされた平らな上面を有する、請求項90記載のアレイ。
- それぞれのピラーの上面と支持体の平面層との間の距離が1,000〜5,000オングストロームである、請求項91記載のアレイ。
- ピラーが、支持体上に存在する複数のピラーのうちの1つである、請求項90記載のアレイ。
- ピラーが10,000/cm2を超える密度で存在する、請求項93記載のアレイ。
- それぞれのピラーの中心が他の任意のピラーの中心から少なくとも2,000オングストローム離れている、請求項93記載のアレイ。
- それぞれのピラーの表面が平面層の上面と平行である、請求項93記載のアレイ。
- それぞれのピラーの表面が平面層の上面と実質的に平行である、請求項93記載のアレイ。
- それぞれのピラーの表面積が少なくとも1μm2である、請求項90記載のアレイ。
- それぞれのピラーの表面の表面積の総面積が10,000μm2未満である、請求項90記載のアレイ。
- それぞれのピラーが二酸化ケイ素または窒化ケイ素を含む、請求項90記載のアレイ。
- それぞれのピラーが少なくとも98〜99重量%の二酸化ケイ素である、請求項90記載のアレイ。
- 位置が定められた場所がそれぞれ、複数の同一の生体分子を含む、請求項90記載のアレイ。
- 位置が定められた場所がそれぞれ、他の位置が定められた場所とは異なる複数の同一の配列を含む、請求項102記載のアレイ。
- 位置が定められた場所がそれぞれ、位置が区別できる場所である、請求項90記載のアレイ。
- 1cm2あたり少なくとも100個、1,000個、10,000個、100,000個、1,000,000個、または10,000,000個のピラーを含む、請求項90記載のアレイ。
- 表面が、該表面の選択された場所に取り付けられた少なくとも2種類のユニークな生体分子を含む、請求項70記載のアレイ。
- 表面が、該表面の選択された場所に取り付けられた少なくとも10種類のユニークな生体分子を含む、請求項106記載のアレイ。
- 表面が、該表面の選択された場所に取り付けられた少なくとも100種類のユニークな生体分子を含む、請求項107記載のアレイ。
- 表面が、該表面の選択された場所に取り付けられた少なくとも1,000種類のユニークな生体分子を含む、請求項108記載のアレイ。
- 表面が、該表面の選択された場所に取り付けられた少なくとも10,000種類のユニークな生体分子を含む、請求項109記載のアレイ。
- 取り付け基がアミン基である、請求項70記載のアレイ。
- 取り付け基がカルボン酸基である、請求項70記載のアレイ。
- カルボキシル基が、アミン基に結合するように活性化される、請求項112記載のアレイ。
- 試料中の生体分子を検出する方法であって、以下の工程を含む、方法:
請求項70〜113のいずれか一項記載の支持体を準備する工程;
該支持体を該試料と接触させる工程;および
該試料内にある生体分子と、該支持体に取り付けられた生体分子との結合事象を検出する工程。
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