JP2021014432A - Composition for ameliorating or preventing anxiety disorders and/or mood disorders - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、不安障害及び／又は気分障害を改善等するための組成物に関し、より詳しくは、エンテロコッカス属に属する細菌を有効成分として含む、不安障害及び／又は気分障害を、改善療又は予防するための組成物に関する。また、本発明は、前記細菌を有効成分として含む、β３アドレナリン受容体、ドパミンＤ５受容体及びバソプレシン受容体１Ａからなる群から選択される少なくとも１の受容体の発現を増強するための組成物に関する。さらに、本発明は、前記細菌を有効成分として含む、脳の神経伝達を活性化するための組成物に関する。 The present invention relates to a composition for improving anxiety disorder and / or mood disorder, and more specifically, ameliorating treatment or prevention of anxiety disorder and / or mood disorder containing a bacterium belonging to the genus Enterococcus as an active ingredient. With respect to the composition for. The present invention also relates to a composition for enhancing the expression of at least one receptor selected from the group consisting of β3 adrenergic receptor, dopamine D5 receptor and vasopressin receptor 1A, which comprises the bacterium as an active ingredient. .. Furthermore, the present invention relates to a composition for activating neurotransmission in the brain, which comprises the bacterium as an active ingredient.
近年の分子及びメタゲノムツールの開発によって、腸内細菌コミュニティの構造と機能に関する様々な知見が続々と明らかになっている。なかでも、脳腸軸（ｇｕｔ ｂｒａｉｎ ａｘｉｓ）と称される、自律神経系や液性因子（ホルモン、サイトカイン等）を介した脳と腸との双方向的な情報伝達は、非常に注目されている。 Recent developments in molecular and metagenomic tools have revealed a series of insights into the structure and function of the gut flora community. Among them, the two-way communication between the brain and the intestine via the autonomic nervous system and humoral factors (hormones, cytokines, etc.) called the cerebral intestinal axis (gut brain axis) has attracted much attention. There is.
脳腸軸は、ヒトの体の健康だけでなく、精神的な健康においても、重要な役割を果たしていることが明らかになっている。例えば、ヒト及びげっ歯類の研究成果から、うつ状態において腸内細菌叢の多様性及び豊かさが低下していることが示されている（非特許文献１）。さらに、うつ病患者の糞便を移植したラットにおいて、うつ症状、不安及び性的冷感等の抑うつ行動が誘導されると共に、セロトニン等の神経伝達物質の生合成を担うトリプトファン代謝が変化することも報告されている（非特許文献１）。また、腸内細菌叢の変化は、ストレスに対する防御反応を担うＨＰＡ軸（視床下部−下垂体−副腎系 軸）にも影響し、それに関与するプロバイオティクス（所謂、善玉菌）も検出されている（非特許文献２）。さらに、細菌叢とＨＰＡ反応性との直接的な関連は、須藤らによって証明されている。具体的には、無菌マウス（ｇｅｒｍ−ｆｒｅｅ ｍｉｃｅ）における、コルチコステロン及び副腎皮質刺激ホルモンの拘束ストレスに対する応答は、通常のＳＰＦマウス（ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌｌｙ ｈｏｕｓｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐａｔｈｏｇｅｎ−ｆｒｅｅ ｍｉｃｅ）と比較して増強されることが、須藤らによって報告されており（非特許文献２）、この研究成果によって、腸の環境は、免疫だけでなく、脳の発達や内分泌系に大きく貢献していることが明らかとなっている。 The cerebrointestinal axis has been shown to play an important role not only in human physical health but also in mental health. For example, research results on humans and rodents have shown that the diversity and abundance of the intestinal flora is reduced in depression (Non-Patent Document 1). Furthermore, in rats transplanted with feces of depressed patients, depressive behavior such as depressive symptoms, anxiety and sexual coldness is induced, and tryptophan metabolism, which is responsible for the biosynthesis of neurotransmitters such as serotonin, may be altered. It has been reported (Non-Patent Document 1). In addition, changes in the intestinal flora also affect the HPA axis (hypothalamic-pituitary-adrenal axis), which is responsible for the defense response to stress, and the probiotics (so-called good bacteria) involved in it have also been detected. (Non-Patent Document 2). Furthermore, the direct association between bacterial flora and HPA reactivity has been demonstrated by Sudo et al. Specifically, the response of corticosterone and adrenocorticotropic hormone to restraint stress in germ-free mice was enhanced as compared to normal SPF mice (conventionally house-specific pathegen-free mice). It has been reported by Sudo et al. (Non-Patent Document 2), and the results of this research reveal that the intestinal environment contributes not only to immunity but also to brain development and the endocrine system. ing.
また、最近のいくつかの研究において、プロバイオティクスが、ストレス反応性及びストレス関連行動を調整する可能性があることが示されている。例えば、プロバイオティック Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆａｒｃｉｍｉｎｉｓにて前処理したラットにおいては、拘束ストレスから典型的に生じる腸透過性を低下させると共に、関連するＨＰＡ反応性の亢進を抑制することが認められている（非特許文献３）。さらに、最近の研究によって、健康な雄のＢａｌｂ／Ｃマウスに．Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓを摂食させた結果、高架式十字迷路試験（ＥＰＭ）、強制水泳試験（ＦＳＴ）及びオープンフィールドテスト（ＯＦ）において、不安様及び抑うつ様の行動が減少することが明らかになっている（非特許文献４）。より具体的には、プロバイオティクス処理されたマウス群は、ＥＰＭにおいてオープンアームへの侵入回数を増やし、ＦＳＴにおいては不動の時間を減らし、ＯＦにおいては中央領域への侵入回数及び滞在時間を増加させた。また、同様の研究において、新生児期に母仔分離を受けていた成体ラットにおいて、プロバイオティクス Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓによる処置後に、抑うつ様症状の軽減、及び抗うつ剤治療においても認められる行動的影響が認められている（非特許文献５）。 In addition, several recent studies have shown that probiotics may regulate stress responsiveness and stress-related behaviors. For example, rats pretreated with probiotic Lactobacillus farciminis have been found to reduce intestinal permeability typically resulting from restraint stress and suppress associated increased HPA responsiveness (non-patent). Document 3). In addition, recent studies have shown that healthy male Balb / C mice. Feeding Lactobacillus rhamnosus has been shown to reduce anxiety-like and depressive-like behavior in elevated cross maze tests (EPM), forced swimming tests (FST) and open field tests (OF). (Non-Patent Document 4). More specifically, the probiotic-treated mouse population increased the number of invasions into the open arm in EPM, decreased the immobility time in FST, and increased the number of invasions and staying time in the central region in OF. I let you. In a similar study, adult rats that had undergone maternal and offspring segregation during the neonatal period were found to have reduced depressive symptoms and behavioral effects seen in antidepressant treatment after treatment with the probiotic Bifidobacterium infantis. (Non-Patent Document 5).
このように、不安障害やうつ等の気分障害の治療等に関し、プロバイオティクスの使用に関する研究成果が報告されている。 As described above, research results on the use of probiotics have been reported regarding the treatment of mood disorders such as anxiety disorders and depression.
本発明は、抗不安効果及び/又は抗うつ効果を奏する細菌を見出し、当該細菌を有効成分とする、不安障害及び／又は気分障害を、改善又は予防するための組成物を提供することを目的とする。 An object of the present invention is to find a bacterium having an anxiolytic effect and / or antidepressant effect, and to provide a composition for improving or preventing anxiety disorder and / or mood disorder containing the bacterium as an active ingredient. And.
本発明者らは、前記目的を達成すべく、エンテロコッカス属に属する細菌をマウスに摂取させ、各種行動試験（オープンフィールド試験、高架式十字迷路試験、強制水泳試験）に供し、行動を分析した。その結果、不安・恐怖を評価するための試験であるオープンフィールド試験及び高架式十字迷路試験において、エンテロコッカス非摂取群（コントロール群）との有意差が認められ、エンテロコッカスは抗不安効果を有していることが明らかとなった。 In order to achieve the above object, the present inventors fed a bacterium belonging to the genus Enterococcus into a mouse and subjected it to various behavioral tests (open field test, elevated cross maze test, forced swimming test) to analyze the behavior. As a result, in the open field test and the elevated cross labyrinth test, which are tests for evaluating anxiety and fear, a significant difference from the enterococcus non-ingestion group (control group) was observed, and enterococcus has an anxiolytic effect. It became clear that there was.
エンテロコッカスは、ヒト及び動物の正常な腸内細菌である乳酸菌の１種である。これまでの研究では、エンテロコッカス・フェカリス ＥＣ−１２株の加熱処理物（死菌）をヒトに服用させたところ、糞便代謝成分や微生物叢等の脂肪酸、乳酸、ビフィズス菌が変化したことが示されている（非特許文献６）。別の研究では、ＥＣ−１２がｉｎ ｓｉｔｕ実験においてインターフェロン−γ放出を誘発することが示されている（非特許文献７）。さらに、ＥＣ−１２は宿主免疫系と情報伝達して、若年仔牛のＩｇＡの産生を誘導することも報告されている（非特許文献８）。しかしながら、エンテロコッカスに属する細菌の脳への影響についての報告はこれまでになかった。 Enterococcus is a type of lactic acid bacterium that is a normal intestinal bacterium of humans and animals. Previous studies have shown that when humans were given a heat-treated product (killed bacteria) of Enterococcus faecalis EC-12 strain, fatty acids such as fecal metabolic components and microbiota, lactic acid, and bifidobacteria changed. (Non-Patent Document 6). Another study has shown that EC-12 induces interferon-γ release in in situ experiments (Non-Patent Document 7). Furthermore, it has been reported that EC-12 communicates with the host immune system to induce IgA production in young calves (Non-Patent Document 8). However, there have been no reports of the effects of bacteria belonging to Enterococcus on the brain.
本発明者らは、さらに、エンテロコッカス摂取マウスの前頭葉における遺伝子発現を解析した。その結果、Ａｄｒｂ３（β３アドレナリン受容体）遺伝子、Ａｖｐｒ１ａ（バソプレシン受容体１Ａ）遺伝子及びＤｒｄ５（ドパミンＤ５受容体）遺伝子の発現が亢進していることも明らかにした。これらは、いずれも神経伝達の活性化に関与する受容体をコードする遺伝子である。また、Ａｄｒｂ３に関しては、抗不安様行動及び抗うつ様行動を誘導することが報告されており、Ｄｒｄ５に関しては、恐怖の消去及び報酬の獲得行動を促進することが報告されている。 We further analyzed gene expression in the frontal lobe of Enterococcus-fed mice. As a result, it was also clarified that the expression of Adrb3 (β3 adrenergic receptor) gene, Avpr1a (vasopressin receptor 1A) gene and Drd5 (dopamine D5 receptor) gene was enhanced. These are all genes encoding receptors involved in the activation of neurotransmission. In addition, it has been reported that Drb3 induces anxiolytic-like behavior and antidepressant-like behavior, and Drd5 promotes fear elimination and reward acquisition behavior.
したがって、ＥＣ−１２摂取によって、Ａｄｒｂ３、Ａｖｐｒ１ａ及びＤｒｄ５、これら神経受容体の発現亢進に伴い、脳内の神経伝達が活性化され、ひいては、抗不安効果、さらには抗うつ効果が奏されることを見出し、本発明を完成するに至った。 Therefore, ingestion of EC-12 activates neurotransmission in the brain with increased expression of Adrb3, Avpr1a, Drd5, and these nerve receptors, which in turn produces anxiolytic and antidepressant effects. And completed the present invention.
すなわち、本発明は、不安障害及び／又は気分障害を改善等するための組成物に関する。また、本発明は、前記細菌を有効成分として含む、β３アドレナリン受容体、ドパミンＤ５受容体及びバソプレシン受容体１Ａからなる群から選択される少なくとも１の受容体の発現を増強するための組成物に関する。さらに、本発明は、前記細菌を有効成分として含む、脳の神経伝達を活性化するための組成物に関し、より具体的には、以下のとおりである。
＜１＞ エンテロコッカス属に属する細菌を有効成分として含む、不安障害及び／又は気分障害を、改善又は予防するための組成物。
＜２＞ エンテロコッカス属に属する細菌を有効成分として含む、脳の神経伝達を活性化するための組成物。
＜３＞ エンテロコッカス属に属する細菌を有効成分として含む、β３アドレナリン受容体、ドパミンＤ５受容体及びバソプレシン受容体１Ａからなる群から選択される少なくとも１の受容体の発現を増強するための組成物。
＜４＞ エンテロコッカス属に属する細菌がエンテロコッカス・フェカリスである、＜１＞〜＜３＞のいずれか一項に記載の組成物。
＜５＞ エンテロコッカス属に属する細菌がエンテロコッカス・フェカリス ＥＣ−１２株である、＜１＞〜＜３＞のいずれか一項に記載の組成物。
That is, the present invention relates to a composition for improving anxiety disorder and / or mood disorder. The present invention also relates to a composition for enhancing the expression of at least one receptor selected from the group consisting of β3 adrenergic receptor, dopamine D5 receptor and vasopressin receptor 1A, which comprises the bacterium as an active ingredient. .. Furthermore, the present invention relates to a composition for activating neurotransmission in the brain, which comprises the bacterium as an active ingredient, and more specifically, it is as follows.
<1> A composition for improving or preventing anxiety disorders and / or mood disorders, which comprises a bacterium belonging to the genus Enterococcus as an active ingredient.
<2> A composition for activating neurotransmission in the brain, which contains a bacterium belonging to the genus Enterococcus as an active ingredient.
<3> A composition for enhancing the expression of at least one receptor selected from the group consisting of β3 adrenergic receptor, dopamine D5 receptor and vasopressin receptor 1A, which comprises a bacterium belonging to the genus Enterococcus as an active ingredient.
<4> The composition according to any one of <1> to <3>, wherein the bacterium belonging to the genus Enterococcus is Enterococcus faecalis.
<5> The composition according to any one of <1> to <3>, wherein the bacterium belonging to the genus Enterococcus is Enterococcus faecalis EC-12 strain.
本発明によれば、β３アドレナリン受容体、バソプレシン受容体１Ａ及びドパミンＤ５受容体の発現を増強することが可能となる。また、これら神経伝達物質受容体の発現を増強することにより、脳の神経伝達を活性化することも可能となる。さらに、本発明によれば、抗不安効果及び／又は抗うつ効果を奏することにより、不安障害及び／又はうつ等の気分障害を、改善又は予防することも可能となる。 According to the present invention, it is possible to enhance the expression of β3 adrenergic receptor, vasopressin receptor 1A and dopamine D5 receptor. In addition, by enhancing the expression of these neurotransmitter receptors, it becomes possible to activate neurotransmission in the brain. Furthermore, according to the present invention, it is possible to improve or prevent anxiety disorders and / or mood disorders such as depression by exerting anxiolytic and / or antidepressant effects.
後述の実施例に示すとおり、本発明者らは、エンテロコッカス属に属する細菌をマウスに摂取させ行動を分析した。その結果、不安・恐怖を評価するための試験であるオープンフィールド試験及び高架式十字迷路試験において、エンテロコッカス非摂取群（コントロール群）との有意差が認められ、エンテロコッカスは抗不安効果を有していることを明らかにした。さらに、エンテロコッカス摂取マウスの前頭葉における遺伝子発現を解析した結果、Ａｄｒｂ３（β３アドレナリン受容体）遺伝子、Ａｖｐｒ１ａ（バソプレシン受容体１Ａ）遺伝子及びＤｒｄ５（ドパミンＤ５受容体）遺伝子の発現が亢進していることも明らかにした。これらは、いずれも神経伝達の活性化に関与し、Ａｄｒｂ３に関しては、抗不安様行動及び抗うつ様行動を誘導することが報告されており、また、Ｄｒｄ５に関しては、恐怖の消去及び報酬の獲得行動を促進することが報告されている。 As shown in Examples described later, the present inventors analyzed the behavior of mice ingesting bacteria belonging to the genus Enterococcus. As a result, in the open field test and the elevated cross labyrinth test, which are tests for evaluating anxiety and fear, a significant difference from the enterococcus non-ingestion group (control group) was observed, and enterococcus has an anxiolytic effect. It was revealed that there was. Furthermore, as a result of analyzing the gene expression in the frontal lobe of enterococcus-fed mice, the expression of Adrb3 (β3 adrenergic receptor) gene, Avpr1a (vasopressin receptor 1A) gene and Drd5 (dopamine D5 receptor) gene was also enhanced. Revealed. All of these are involved in the activation of neurotransmission, and it has been reported that for Drb3, anxiolytic-like behavior and antidepressant-like behavior are induced, and for Drd5, fear elimination and reward acquisition. It has been reported to promote behavior.
したがって、本発明は、エンテロコッカス属に属する細菌を有効成分として含む、β３アドレナリン受容体、ドパミンＤ５受容体及びバソプレシン受容体１Ａからなる群から選択される少なくとも１の受容体の発現を増強するための組成物に関する。 Therefore, the present invention is for enhancing the expression of at least one receptor selected from the group consisting of β3 adrenergic receptor, dopamine D5 receptor and vasopressin receptor 1A, which comprises a bacterium belonging to the genus Enterococcus as an active ingredient. Regarding the composition.
また、前記細菌を有効成分として含む、脳の神経伝達を活性化するための組成物に関する。 It also relates to a composition for activating neurotransmission in the brain, which comprises the bacterium as an active ingredient.
さらに、前記細菌を有効成分として含む、不安障害及び／又は気分障害を、改善又は予防するための組成物に関する。 Furthermore, it relates to a composition for ameliorating or preventing anxiety disorder and / or mood disorder containing the bacterium as an active ingredient.
本発明の組成物において有効成分として含有される「エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する細菌」は、乳酸菌のフィルミクテス門に属し、腸球菌に含まれる細菌である。例えば、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ・ｆａｅｃａｌｉｓ）、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ・ｆａｅｃｉｕｍ）、エンテロコッカス・ヒラエ（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ・ｈｉｒａｅ）が挙げられる。エンテロコッカス・フェカリスとしては、例えば、エンテロコッカス・フェカリス ＥＣ−１２株、ＡＴＣＣ １９４３３、ＡＴＣＣ １４５０８、ＡＴＣＣ ２３６５５、ＩＦＯ １６８０３、ＩＦＯ １６８０４等の菌株又はそれらの変異株が例示できる。なお、「変異株」とは、特定の菌株に対し、当業者に周知の方法により当業者がその性質に変化を及ぼさない範囲で変異させたもの、あるいは、それと同等であると当業者が確認できるものを包含する意味である。 The "bacteria belonging to the genus Enterococcus" contained as an active ingredient in the composition of the present invention is a bacterium belonging to the phylum Firmicutes of lactic acid bacteria and contained in enterococci. For example, Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium, Enterococcus hirae can be mentioned. Examples of Enterococcus faecalis include strains such as Enterococcus faecalis EC-12 strain, ATCC 19433, ATCC 14508, ATCC 23655, IFO 16803, and IFO 16804, or mutant strains thereof. A "mutant strain" is a strain that has been mutated to a specific strain by a method well known to those skilled in the art to the extent that the person skilled in the art does not change its properties, or is confirmed by those skilled in the art to be equivalent thereto. It means to include what can be done.
本発明の組成物において有効成分として含有される細菌としては、好ましくはエンテロコッカス・フェカリスであり、より好ましくはエンテロコッカス・フェカリス ＥＣ−１２株である。 The bacterium contained as an active ingredient in the composition of the present invention is preferably Enterococcus faecalis, and more preferably Enterococcus faecalis EC-12 strain.
なお、エンテロコッカス・フェカリス ＥＣ−１２株（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ ＥＣ−１２）は、平成１７年（２００５年）２月２５日（原寄託日）付で独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センター（〒３０５−５４６６ 日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１ 中央第６）に寄託された。受託番号は、ＦＥＲＭ ＢＰ−１０２８４である。なお、２０１２年４月に特許微生物寄託業務は、独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センター（旧称：ＩＰＯＤ）から独立行政法人製品評価技術基盤機構（ＮＩＴＥ、〒２９２−０８１８ 千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８ １２２号室）に承継された。 Enterococcus faecalis EC-12 strain (Enterococcus faecalis EC-12) was issued on February 25, 2005 (original deposit date) at the Patent Organism Depositary Center of the Industrial Technology Research Institute (〒). 305-5466 Deposited at 1-1-1, Central 6), East, Tsukuba City, Ibaraki Prefecture, Japan. The accession number is FERM BP-10284. In April 2012, the patented microorganism deposit business was carried out by the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, Patent Organism Depositary Center (former name: IPOD), and the National Institute of Technology and Evaluation (NITE, Kisarazu City, Chiba Prefecture 292-0818). It was succeeded to Kazusakamatari 2-5-8 Room 122).
本発明の組成物において、エンテロコッカス属に属する細菌は、生菌として、また、死菌体として含有される。死菌体は、耐熱性に優れ、品質が安定しており、また、製造ラインを汚染しないため食品・医薬品として幅広く使用できる点で、本発明の組成物の有効成分として好ましい。 In the composition of the present invention, the bacterium belonging to the genus Enterococcus is contained as a live bacterium and as a dead bacterium. The killed cells are preferable as the active ingredient of the composition of the present invention in that they have excellent heat resistance, stable quality, and can be widely used as foods and pharmaceuticals because they do not contaminate the production line.
本発明の組成物における「死菌体」としては、例えば、加熱殺菌した菌体（加熱殺菌体）が挙げられる。加熱殺菌体は、エンテロコッカス属に属する細菌を常法に従って培養して得られた培養物から調製することができる。かかる調製方法として、特に制限はないが、例えば、濾過、遠心分離等の方法により菌体を回収し、水洗後、水等（蒸留水、生理食塩水等）に懸濁して、１２０℃以下（好ましくは８０〜１２０℃）、３０分以内（好ましくは３０分〜３秒）加熱処理することにより調製することができる。 Examples of the "killed cells" in the composition of the present invention include heat-sterilized cells (heat-sterilized bodies). The heat sterilized product can be prepared from a culture obtained by culturing a bacterium belonging to the genus Enterococcus according to a conventional method. The preparation method is not particularly limited, but for example, the cells are collected by a method such as filtration or centrifugation, washed with water, suspended in water or the like (distilled water, physiological saline, etc.), and at 120 ° C. or lower ( It can be prepared by heat treatment within 30 minutes (preferably 30 minutes to 3 seconds) at 80 to 120 ° C.).
また、本発明にかかる「死菌体」は、前記加熱処理に代えて、例えば、焼成、蒸煮（例えば、１７０℃以下、６０分以内）、ガンマ線或いは中性子線の照射に供することで得られるもの（例えば、焼成殺菌体、蒸煮殺菌体、放射線照射殺菌体）であってもよい。 Further, the "killed cells" according to the present invention can be obtained by subjecting to, for example, firing, steaming (for example, 170 ° C. or lower, within 60 minutes), gamma ray or neutron beam irradiation instead of the heat treatment. (For example, a fire sterilizer, a steam sterilizer, an irradiation sterilizer) may be used.
さらに、これら死菌体は、上記水等による懸濁液の形態であってもよく、その乾燥物の形態であってもよい。懸濁液からの乾燥方法は、特に制限はなく、例えば、噴霧乾燥、凍結乾燥が挙げられる。また、場合によっては、加熱等による殺菌処理の前後、あるいは、乾燥処理の前後に、酵素処理、界面活性剤処理、磨砕・粉砕処理を行うこともでき、これらの処理により得られるものも、本発明の死菌体に含まれる。 Further, these killed cells may be in the form of a suspension with water or the like, or may be in the form of a dried product thereof. The method of drying from the suspension is not particularly limited, and examples thereof include spray drying and freeze drying. In some cases, enzyme treatment, surfactant treatment, and grinding / crushing treatment can be performed before and after the sterilization treatment by heating or the like, or before and after the drying treatment, and those obtained by these treatments are also available. It is included in the killed cells of the present invention.
なお、エンテロコッカス・フェカリス ＥＣ−１２株の加熱殺菌菌体は、製品名「ＥＣ−１２」（コンビ株式会社ライフサイエンス事業部製造）として市販されている。また、本発明の組成物において有効成分として含まれるエンテロコッカス属に属する細菌は、前述の通り菌体であってもよく、該細菌に含まれる物質、該細菌の分泌産物、該細菌による代謝産物であってもよい。 The heat-sterilized cells of Enterococcus faecalis EC-12 strain are commercially available under the product name "EC-12" (manufactured by Combi Corporation Life Science Division). In addition, the bacterium belonging to the genus Enterococcus contained as an active ingredient in the composition of the present invention may be a bacterial cell as described above, and may be a substance contained in the bacterium, a secretory product of the bacterium, or a metabolite of the bacterium. There may be.
本発明において、エンテロコッカス属に属する細菌によって発現が増強される、β３アドレナリン受容体（Ａｄｒｂ３）は、アドレナリン、ノルアドレナリン等のカテコールアミン類によって活性化されるＧタンパク共役型受容体の１種であり、ヒト由来のものであれば、典型的にはＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＰ＿００００１６にて特定されるアミノ酸配列からなるタンパク質（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＭ＿００００２５にて特定されるヌクレオチド配列がコードするタンパク質）であり、マウス由来のものであれば、典型的にはＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＰ＿０３８４９０にて特定されるアミノ酸配列からなるタンパク質（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＭ＿０１３４６２にて特定されるヌクレオチド配列がコードするタンパク質）である。 In the present invention, the β3 adrenaline receptor (Adrb3) whose expression is enhanced by bacteria belonging to the genus Enterococcus is one of the G protein-conjugated receptors activated by catecholamines such as adrenaline and noradrenaline, and is human. If it is derived, it is typically a protein consisting of the amino acid sequence specified by GenBank accession number: NP_0000016 (protein encoded by the nucleotide sequence specified by GenBank accession number: NM_0000025), and is a mouse. If it is derived, it is typically a protein consisting of the amino acid sequence specified by GenBank accession number: NP_038490 (protein encoded by the nucleotide sequence specified by GenBank accession number: NM_013462).
本発明において、エンテロコッカス属に属する細菌によって発現が増強される、ドパミンＤ５受容体（Ｄｒｄ５）は、ドパミン（ドーパミン）によって活性化されるＧタンパク共役型受容体であり、ヒト由来のものであれば、典型的にはＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＰ＿０００７８９にて特定されるアミノ酸配列からなるタンパク質（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＭ＿０００７９８にて特定されるヌクレオチド配列がコードするタンパク質）であり、マウス由来のものであれば、典型的にはＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＰ＿０３８５３１にて特定されるアミノ酸配列からなるタンパク質（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＭ＿０１３５０３にて特定されるヌクレオチド配列がコードするタンパク質）である。 In the present invention, the dopamine D5 receptor (Drd5) whose expression is enhanced by a bacterium belonging to the genus Enterococcus is a G protein-conjugated receptor activated by dopamine (dopamine) and is of human origin. , Typically, a protein consisting of an amino acid sequence specified by GenBank accession number: NP_000789 (protein encoded by a nucleotide sequence specified by GenBank accession number: NM_000798), and if it is derived from a mouse. , Typically a protein consisting of an amino acid sequence specified by GenBank accession number: NP_038531 (protein encoded by the nucleotide sequence specified by GenBank accession number: NM_013503).
本発明において、エンテロコッカス属に属する細菌によって発現が増強される、バソプレシン受容体１Ａ（Ａｖｐｒ１ａ）は、アルギニンバソプレシン（ＡＶＰ）によって活性化されるＧタンパク共役型受容体であり、ヒト由来のものであれば、典型的にはＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＰ＿０００６９７にて特定されるアミノ酸配列からなるタンパク質（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＭ＿０００７０６にて特定されるヌクレオチド配列がコードするタンパク質）であり、マウス由来のものであれば、典型的にはＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＰ＿０５８５４３にて特定されるアミノ酸配列からなるタンパク質（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＭ＿０１６８４７にて特定されるヌクレオチド配列がコードするタンパク質）である。 In the present invention, the vasopressin receptor 1A (Avpr1a) whose expression is enhanced by a bacterium belonging to the genus Enterococcus is a G protein-conjugated receptor activated by arginine vasopressin (AVP) and may be of human origin. For example, it is typically a protein consisting of an amino acid sequence specified by GenBank accession number: NP_000697 (a protein encoded by a nucleotide sequence specified by GenBank accession number: NM_000706), and may be derived from a mouse. For example, it is typically a protein consisting of the amino acid sequence specified by GenBank accession number: NP_058543 (protein encoded by the nucleotide sequence specified by GenBank accession number: NM_016847).
なお、自然界において（すなわち、非人工的に）ヌクレオチド配列は変化する。したがって、上述の神経伝達物質受容体には、典型例として挙げた上記配列に特定されることなく、このような天然の変異体も含まれる。 It should be noted that the nucleotide sequence changes in nature (that is, non-artificially). Therefore, the neurotransmitter receptors described above also include such naturally occurring variants without being specified in the sequences cited as typical examples.
本発明において「発現」には、転写レベルでの発現（ｍＲＮＡとしての発現）のみならず、翻訳レベルでの発現（タンパク質としての発現）も含まれる。本発明において、上記神経伝達物質受容体の発現が増強される部位としては特に制限はないが、例えば中枢神経系、好ましくは脳、より好ましくは前頭葉である。本発明において、エンテロコッカス属に属する細菌によって活性化される脳の神経伝達としては、特に制限はないが、例えば、カテコールアミン作動性神経、ドパミン作動性神経又はバソプレシン神経が関与する神経伝達が挙げられる。また、本発明において、前記神経伝達が活性化される部位としては、脳内であれば特に制限はないが、好ましくは前頭葉である。 In the present invention, "expression" includes not only expression at the transcription level (expression as mRNA) but also expression at the translation level (expression as a protein). In the present invention, the site where the expression of the neurotransmitter receptor is enhanced is not particularly limited, but is, for example, the central nervous system, preferably the brain, and more preferably the frontal lobe. In the present invention, the neurotransmission of the brain activated by bacteria belonging to the genus Enterococcus is not particularly limited, and examples thereof include neurotransmission involving catecholaminergic nerves, dopaminergic nerves or vasopressin nerves. Further, in the present invention, the site where the neurotransmission is activated is not particularly limited as long as it is in the brain, but is preferably the frontal lobe.
本発明において、エンテロコッカス属に属する細菌によって改善等される「不安障害」とは、行き過ぎた不安を感じる状態を意味する。また「不安」とは、不快刺激に対する情動応答を意味し、明確な対象が存在しない場合のみならず、存在する場合（所謂、恐怖）も含まれる。 In the present invention, the "anxiety disorder" that is improved by bacteria belonging to the genus Enterococcus means a state in which an excessive anxiety is felt. Further, "anxiety" means an emotional response to an unpleasant stimulus, and includes not only the case where a clear object does not exist but also the case where it exists (so-called fear).
本発明において「不安障害」として、例えば、全般性不安障害（ＧＡＤ）、社会不安障害、物質誘発不安障害、パニック障害、強迫性障害（ＯＣＤ）、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、急性ストレス障害（ＡＳＤ）、分離不安障害、恐慌性障害（恐怖症：社会的恐怖症、高所恐怖症、広所恐怖症、先端恐怖症、動物恐怖症等）、過敏腸管症候群、線維筋痛症が挙げられる。 In the present invention, "anxiety disorder" includes, for example, generalized anxiety disorder (GAD), social anxiety disorder, substance-induced anxiety disorder, panic disorder, compulsive disorder (OCD), post-traumatic stress disorder (PTSD), and acute stress. Disorders (ASD), separation anxiety disorder, panic disorder (phobia: social phobia, height phobia, generalized anxiety disorder, advanced phobia, animal phobia, etc.), hypersensitivity intestinal syndrome, fibromyalgia Can be mentioned.
本発明において、エンテロコッカス属に属する細菌によって改善等される「気分障害」とは、行き過ぎて気分が落ち込んだりする状態（所謂、うつ、抑うつ）を意味する。 In the present invention, the "mood disorder" that is improved by the bacteria belonging to the genus Enterococcus means a state in which the person goes too far and feels depressed (so-called depression, depression).
本発明において「気分障害」として、例えば、大うつ病性障害（ＭＤＤ）、双極性障害（ＢＤ）、非定型うつ病、憂うつ症のうつ病、精神病性大うつ病、緊張性うつ病、産後うつ病、季節性情緒障害、気分変調症、特定不能の抑うつ性障害（ＤＤ−ＮＯＳ）、物質誘発気分障害、閉経後うつ、思春期うつが挙げられる。 In the present invention, "mood disorders" include, for example, major depressive disorder (MDD), bipolar disorder (BD), atypical depression, depressive depression, psychotic major depression, tension depression, and postpartum. Depression, seasonal emotional disorders, dysthymia, unspecified depressive disorder (DD-NOS), substance-induced mood disorders, postmenopausal depression, and adolescent depression.
本発明において、「改善」には、上記障害からの完全な回復（治療）のみならず、上記障害の症状を緩和し、またその進行を抑制することも含まれる。「予防」には上記障害の発症を抑制する又は遅延させ、またその再発を抑制することが含まれる。 In the present invention, "improvement" includes not only complete recovery (treatment) from the disorder, but also alleviation of the symptom of the disorder and suppression of its progression. "Prevention" includes suppressing or delaying the onset of the disorder and suppressing its recurrence.
本発明の組成物は、医薬組成物、飲食品（動物用飼料を含む）、あるいはモデル動物実験等に用いられる試薬の形態であり得る。 The composition of the present invention may be in the form of a pharmaceutical composition, food or drink (including animal feed), or a reagent used in a model animal experiment or the like.
本発明における組成物は、公知の製剤学的方法により製剤化することができる。例えば、カプセル剤、錠剤、丸剤、液剤、散剤、顆粒剤、細粒剤、フィルムコーティング剤、ペレット剤、トローチ剤、舌下剤、咀嚼剤、バッカル剤、ペースト剤、シロップ剤、懸濁剤、エリキシル剤、乳剤、塗布剤、軟膏剤、硬膏剤、パップ剤、経皮吸収型製剤、ローション剤、吸引剤、エアゾール剤、注射剤、坐剤等として、経口的又は非経口的に使用することができる。本発明は、後述の実施例において示すとおり、経口により、非侵襲的かつ簡便に摂取させることができる。すなわち、本発明の組成物の好ましい摂取の方法は、経口による摂取である。 The composition in the present invention can be formulated by a known pharmaceutical method. For example, capsules, tablets, pills, liquids, powders, granules, fine granules, film coatings, pellets, lozenges, sublinguals, chews, buccal agents, pastes, syrups, suspensions, Orally or parenterally as an elixir, emulsion, coating, ointment, ointment, pap, transdermal absorption type preparation, lotion, inhalant, aerosol, injection, suppository, etc. Can be done. The present invention can be orally ingested non-invasively and easily, as shown in Examples described later. That is, the preferred method of ingesting the composition of the present invention is oral ingestion.
これら製剤化においては、薬理学上若しくは飲食品として許容される担体、具体的には、生理食塩水、滅菌水、植物油、溶剤、賦形剤、基剤、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、安定剤、香味剤、芳香剤、ベヒクル、防腐剤、結合剤、希釈剤、等張化剤、無痛化剤、増量剤、崩壊剤、緩衝剤、コーティング剤、滑沢剤、着色剤、甘味剤、粘稠剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤あるいはその他の添加剤等と適宜組み合わせることができる。 In these formulations, pharmacologically or food and drink acceptable carriers, specifically saline, sterile water, vegetable oils, solvents, excipients, bases, emulsifiers, suspending agents, surfactants , Stabilizers, flavors, fragrances, vehicles, preservatives, binders, diluents, isotonic agents, soothing agents, bulking agents, disintegrants, buffers, coating agents, lubricants, colorants, sweetness It can be appropriately combined with an agent, a thickener, a flavoring agent, a solubilizing agent, or other additives.
本発明の組成物を医薬組成物として用いる場合には、上記障害の改善や予防に用いられる公知の物質と併用してもよい。かかる公知の物質としては、例えば、抗不安薬（ベンゾジアゼピン系抗不安薬等）、抗うつ薬（選択的セロトニン再取り込み阻害薬（ＳＳＲＩ）、セロトニン・ノルエピネフリン（ノルアドレナリン）再取り込み阻害薬（ＳＮＲＩ）、三環系抗うつ薬（ＴＣＡ）、四環系抗うつ薬、トリアゾロピリジン系抗うつ薬（ＳＡＲＩ）、モノアミン酸化酵素阻害薬（ＭＡＯ阻害薬）、ノルアドレナリン作動性・特異的セロトニン作動性抗うつ薬（ＮａＳＳＡ）、ノルエピネフリン・ドパミン再取り込み阻害薬（ＮＤＲＩ））が挙げられる。 When the composition of the present invention is used as a pharmaceutical composition, it may be used in combination with a known substance used for improving or preventing the above-mentioned disorders. Examples of such known substances include antidepressants (benzodiazepine antidepressants, etc.), antidepressants (selective serotonin reuptake inhibitor (SSRI), serotonin norepinephrin (noradrenaline) reuptake inhibitor (SNRI), etc. Tricyclic antidepressants (TCA), tetracyclic antidepressants, triazolopyridine antidepressants (SARI), monoamine oxidase inhibitors (MAO inhibitors), noradrenergic and specific serotoninergic antidepressants Drugs (NaSSA), norepinephrine / dopamine reuptake inhibitors (NDRI)).
本発明の組成物を飲食品として用いる場合、当該飲食品は、例えば、健康食品、機能性食品、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、栄養補助食品、病者用食品、あるいは動物用飼料であり得る。なお、機能性食品は、通常、その作用メカニズムに基づき、プロバイオティクス、バイオジェニクス、プレバイオティクスの３つに分類され、本発明においては、プロバイオティクス、バイオジェニクスの態様をとり得る。 When the composition of the present invention is used as a food or drink, the food or drink may be, for example, a health food, a functional food, a food for specified health use, a food with a nutritional function, a food with a functional claim, a nutritional supplement, a food for the sick, or It can be an animal feed. Functional foods are usually classified into three categories, probiotics, biogenics, and prebiotics, based on their mechanism of action, and in the present invention, the modes of probiotics and biogenics can be taken. ..
本発明の飲食品は、上記のような組成物として摂取することができる他、種々の飲食品として摂取することもできる。飲食品の具体例としては、ヨーグルト、ドリンクヨーグルト等の発酵食品、発酵飲料；食用油、ドレッシング、マヨネーズ、マーガリン等の油分を含む製品；スープ類、乳飲料、清涼飲料水、茶飲料、アルコール飲料、ドリンク剤、ゼリー状飲料、機能性飲料等の液状食品；飯類、麺類、パン類等の炭水化物含有食品；ハム、ソーセージ等の畜産加工食品；かまぼこ、干物、塩辛等の水産加工食品；漬物等の野菜加工食品；ゼリー等の半固形状食品；みそ等の発酵食品；洋菓子類、和菓子類、キャンディー類、ガム類、グミ、冷菓、氷菓等の各種菓子類；カレー、あんかけ、中華スープ等のレトルト製品；インスタントスープ，インスタントみそ汁等のインスタント食品や電子レンジ対応食品等が挙げられる。さらには、粉末、穎粒、錠剤、カプセル剤、液状、ペースト状またはゼリー状に調製された健康飲食品も挙げられる。なお、本発明における飲食品の製造は、当該技術分野に公知の製造技術により実施することができる。当該飲食品においては、上記障害の改善又は予防に有効な１種もしくは２種以上の成分（例えば、他の乳酸菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆａｒｃｉｍｉｎｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ等）、エンテロコッカス属に属する細菌の腸管等での増殖に有効な１種もしくは２種以上の成分（例えば、オリゴ糖類、食物繊維類等のプレバイオティクス成分）を添加してもよい。また、当該改善等以外の機能を発揮する他の成分あるいは他の機能性食品と組み合わせることによって、多機能性の飲食品としてもよい。 The food and drink of the present invention can be ingested as the composition as described above, and can also be ingested as various foods and drinks. Specific examples of foods and drinks include fermented foods such as yogurt and drink yogurt, fermented beverages; products containing oils such as cooking oil, dressings, mayonnaise and margarine; soups, dairy beverages, soft drinks, tea beverages and alcoholic beverages. Liquid foods such as drinks, jelly-like beverages and functional beverages; carbohydrate-containing foods such as rice, noodles and bread; processed livestock foods such as ham and sausage; processed marine foods such as kamaboko, dried food and salty foods; pickles Processed vegetable foods such as; Semi-solid foods such as jelly; Fermented foods such as miso; Western confectionery, Japanese confectionery, candy, gums, gummy, chilled confectionery, ice confectionery, etc.; curry, ankake, Chinese soup, etc. Retort products; Instant foods such as instant soup and instant miso soup, and microwave-compatible foods. Further, healthy foods and drinks prepared in the form of powder, granules, tablets, capsules, liquid, paste or jelly can be mentioned. The food and drink according to the present invention can be produced by a production technique known in the art. In the food or drink, one or more components effective for improving or preventing the above disorders (for example, other lactic acid bacteria (for example, Lactobacillus farciminis, Lactobacillus rhamnosus, Bifidobacterium infantis, etc.), intestinal tract of bacteria belonging to the genus Enterococcus, etc. One or more components (for example, prebiotic components such as oligosaccharides and dietary fibers) that are effective for the growth of the above may be added, and other components that exert functions other than the improvement and the like may be added. Alternatively, it may be a multifunctional food or drink by combining with other functional foods.
本発明の組成物は、ヒトを含む動物を対象として使用することができるが、ヒト以外の動物としては特に制限はなく、種々の家畜、家禽、ペット、実験用動物等を対象とすることができる。具体的には、ブタ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ、カモ、ダチョウ、アヒル、イヌ、ネコ、ウサギ、ハムスター、マウス、ラット、サル等が挙げられるが、これらに制限されない。 The composition of the present invention can be used for animals including humans, but there are no particular restrictions on animals other than humans, and various domestic animals, poultry, pets, laboratory animals and the like can be targeted. it can. Specific examples include, but are not limited to, pigs, cows, horses, sheep, goats, chickens, ducks, ostriches, ducks, dogs, cats, rabbits, hamsters, mice, rats, monkeys and the like.
また、本発明の組成物の対象としては、その発症の如何を問わず、上記障害を罹患している動物が挙げられ、また予防の観点からは、上記障害を発症していない又は上記障害を罹患している疑いのある動物に、本発明の組成物を投与し又は摂取させてもよい。さらに、再発予防の観点からは、その症状がでていない動物にも、本発明の組成物は好適に用いることができる。 In addition, the target of the composition of the present invention includes animals suffering from the above-mentioned disorder regardless of the onset thereof, and from the viewpoint of prevention, the above-mentioned disorder is not developed or the above-mentioned disorder is defined. Animals suspected of being affected may be administered or ingested the compositions of the invention. Furthermore, from the viewpoint of preventing recurrence, the composition of the present invention can be suitably used even for animals that do not have the symptoms.
本発明の組成物を投与又は摂取する場合、その投与量または摂取量は、対象の年齢、体重、上記障害の症状、健康状態、組成物の種類（医薬品、飲食品等）等に応じて、適宜選択される。例えば、１日当たりのエンテロコッカス属に属する細菌の投与量又は摂取量は、一般に、０．５×１０９個／ｋｇ体重〜５０×１０９／ｋｇ体重であり、好ましくは、２×１０９個／ｋｇ体重〜５０×１０９個／ｋｇ体重である。また、１日当たりのエンテロコッカス属に属する細菌の投与量又は摂取量として、好ましくは１０ｍｇ／ｋｇ体重〜１ｇ／ｋｇ体重、より好ましくは２０ｍｇ／ｋｇ体重〜５００ｍｇ／ｋｇ体重、さらに好ましくは５０ｍｇ／ｋｇ体重〜２００ｍｇ／ｋｇ体重とも例示し得る。 When the composition of the present invention is administered or ingested, the dose or ingestion thereof depends on the age, body weight, symptoms of the above-mentioned disorders, health condition, type of composition (pharmaceutical products, foods and drinks, etc.), etc. It is selected as appropriate. For example, the daily dose or intake of bacteria belonging to the genus Enterococcus is generally 0.5 × 10 9 / kg body weight to 50 × 10 9 / kg body weight, preferably 2 × 10 9 / kg body weight. kg body weight ~ 50 × 10 9 pieces / kg body weight. The daily dose or intake of bacteria belonging to the genus Enterococcus is preferably 10 mg / kg body weight to 1 g / kg body weight, more preferably 20 mg / kg body weight to 500 mg / kg body weight, and further preferably 50 mg / kg body weight. It can also be exemplified by a body weight of ~ 200 mg / kg.
また、本発明は、このように、エンテロコッカス属に属する細菌又はそれを有効成分として含む組成物を対象に投与すること又は摂取させることを特徴とする、対象における不安障害及び/又は気分障害を改善又は予防するための方法をも提供するものである。 In addition, the present invention thus improves anxiety disorders and / or mood disorders in a subject, which comprises administering or ingesting a bacterium belonging to the genus Enterococcus or a composition containing the same as an active ingredient. Alternatively, it also provides a method for prevention.
なお、エンテロコッカス属に属する細菌又はそれを有効成分として含む組成物の投与又は摂取量としては上述のとおりであるが、１日当り１回又は複数回（例えば、２回）に分けて投与又は摂取させてもよい。また、投与又は摂取の期間は、上記障害の改善の程度に応じて中止することもできるが、再発予防の観点から、中止することなく継続して投与又は摂取させても良い。なお、「継続」については、毎日継続でもよく、間隔を空けての継続でもよいが、効果の点で毎日継続してエンテロコッカス属に属する細菌又はそれを有効成分として含む組成物を投与又は摂取することが好ましい。 The administration or ingestion of a bacterium belonging to the genus Enterococcus or a composition containing it as an active ingredient is as described above, but the administration or ingestion is divided into once or a plurality of times (for example, twice) per day. You may. The period of administration or ingestion may be discontinued depending on the degree of improvement of the above-mentioned disorder, but from the viewpoint of preventing recurrence, administration or ingestion may be continued without discontinuation. Regarding "continuation", it may be continued every day or at intervals, but in terms of effect, bacteria belonging to the genus Enterococcus or a composition containing it as an active ingredient is administered or ingested continuously every day. Is preferable.
本発明の組成物の製品（医薬品、飲食品、試薬）又はその説明書は、不安障害及び/又は気分障害を改善又は予防、脳内の神経伝達を活性化、又は上述の神経伝達物質受容体の発現を増強するために用いられる旨の表示を付したものであり得る。また、飲食品に関しては、形態及び対象者等において一般食品との区別がつくよう、保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品）として健康機能の表示を、本発明の組成物の製品等に付したものであり得る。ここで「製品又は説明書に表示を付した」とは、製品の本体、容器、包装等に表示を付したこと、あるいは製品の情報を開示する説明書、添付文書、宣伝物、その他の印刷物等に表示を付したことを意味する。 The products (pharmaceuticals, foods and drinks, reagents) of the compositions of the present invention or instructions thereof improve or prevent anxiety disorders and / or mood disorders, activate neurotransmission in the brain, or the above-mentioned neurotransmitter receptors. It may be labeled as being used to enhance the expression of. In addition, regarding foods and drinks, the labeling of health functions as health functional foods (foods for specified health use, nutritional functional foods, foods with functional claims) can be distinguished from general foods in terms of form and subject, etc. It may be attached to a product of the composition or the like. Here, "marked on a product or instruction manual" means that a label is attached to the main body, container, packaging, etc. of the product, or a manual, package insert, promotional material, or other printed matter that discloses product information. It means that the display is attached to.
以下、実施例に基づいて本発明をより具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。本実施例は、以下の材料及び方法を用いて行なった。 Hereinafter, the present invention will be described in more detail based on Examples, but the present invention is not limited to the following Examples. This example was carried out using the following materials and methods.
（動物）
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（８週齢、雄）１６頭を、１４−ｈ照明下（５：００〜１９：００の間に照明）、２３±２℃で自由飲水・摂食下で飼育した。摂食に関しては、コントロール食にエンテロコッカス・フェカリス ＥＣ−１２株の加熱殺菌菌体（製品名「ＥＣ−１２」、コンビ株式会社ライフサイエンス事業部製造、以下、単に「ＥＣ−１２」」とも称する）を混合したもの（０．１２５質量％ＥＣ−１２配合ＡＩＮ９３−Ｍ）を摂食する群（ＥＣ−１２摂取群、ｎ＝８）と、コントロール食のみを摂食する群（コントロール群、ｎ＝８）とに分け、４週間飼育した。なお、コントロール食として、ＡＩＮ９３−Ｍ（オリエンタル酵母工業社製）を用いた。また、前記０．１２５質量％ＥＣ−１２配合ＡＩＮ９３−Ｍという量は、１日あたり、１ｋｇ体重あたり、ＥＣ−１２を１００ｍｇ摂取されることを予測して設定された量である。
(animal)
Sixteen C57BL / 6J mice (8 weeks old, male) were bred under 14-h illumination (illuminated between 5:00 and 19:00) at 23 ± 2 ° C. under free drinking and feeding. Regarding ingestion, heat-sterilized cells of Enterococcus faecalis EC-12 strain in the control diet (product name "EC-12", manufactured by Combi Co., Ltd. Life Science Division, hereinafter simply referred to as "EC-12") (EC-12 ingestion group, n = 8) and a group that ingests only the control diet (control group, n = 8) and a group that ingests a mixture of (0.125 mass% EC-12 compounded AIN93-M). It was divided into 8) and bred for 4 weeks. As a control food, AIN93-M (manufactured by Oriental Yeast Co., Ltd.) was used. The amount of AIN93-M containing 0.125 mass% EC-12 is an amount set by predicting that 100 mg of EC-12 will be ingested per 1 kg of body weight per day.
４週間経過後（１２週齢の適切な期間中）に、行動試験を行なった。行動試験は、ビデオシステムによって記録し、ビデオトラッキングソフトウェア（室町機械株式会社製、製品名：ＡＮＹ−ｍａｚｅ）を用いて分析した。各試験が終了した後、器具を７０％エタノールで洗浄し、臭い又は毛髪といった刺激となるようなもの（ｃｕｅ）が残っておらず、意図しないバイアスが実験結果にかからないようにした。 A behavioral test was performed after 4 weeks (during the appropriate period of 12 weeks of age). The behavioral test was recorded by a video system and analyzed using video tracking software (manufactured by Muromachi Machinery Co., Ltd., product name: ANY-maze). After each test was completed, the instruments were washed with 70% ethanol to ensure that no irritating substances (cues) such as odors or hair remained and that unintended bias was not applied to the experimental results.
行動試験は、オープンフィールド試験（コントロール：ｎ＝８、ＥＣ−１２摂取群：ｎ＝８）、高架式十字迷路試験（コントロール：ｎ＝７、ＥＣ−１２摂取群：ｎ＝８）、強制水泳試験（コントロール：ｎ＝８、ＥＣ−１２摂取群：ｎ＝８）を行なった。これらの試験は、間隔を少なくとも１日は空けて行なった。 Behavioral tests include open field test (control: n = 8, EC-12 intake group: n = 8), elevated cross maze test (control: n = 7, EC-12 intake group: n = 8), forced swimming. A test (control: n = 8, EC-12 intake group: n = 8) was performed. These tests were performed at least one day apart.
行動試験バッテリーを終えた後、マウスをイソフルラン（和光純薬株式会社製）にて麻酔し、前頭葉と盲腸内容物を採取した。そして、全てのサンプルは−８０℃で保存した。前頭葉から抽出した全ＲＮＡを鋳型として合成したｃＤＮＡを神経伝達物質受容体のＰＣＲアレイに供し、またリアルタイムＰＣＲにも供した。盲腸内容物からは、ゲノムＤＮＡを抽出し、次世代シークエンス解析に供した。 After finishing the behavior test battery, the mice were anesthetized with isoflurane (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), and the frontal lobe and the contents of the cecum were collected. All samples were then stored at −80 ° C. The cDNA synthesized using the total RNA extracted from the frontal lobe as a template was subjected to a PCR array of neurotransmitter receptors and also to real-time PCR. Genomic DNA was extracted from the contents of the cecum and used for next-generation sequence analysis.
（行動試験）
オープンフィールド試験
オープンフィールド試験において、マウスの運動、行動活動レベル及び不安様行動を、包括的に評価した。行動活動は、うつや不安等の感情的な反応を示す。この試験において、正方形ケージ（４０×４０×３０ｃｍ）を装置として用いた。
(Behavioral test)
Open Field Test In the open field test, mouse movement, behavioral activity level, and anxiety-like behavior were comprehensively evaluated. Behavioral activities show emotional reactions such as depression and anxiety. In this test, a square cage (40 x 40 x 30 cm) was used as the device.
この試験においては、前記装置の床の中央を２０ルクスで照らし、各マウスを当該オープンフィールド装置に入れ、１０分間それらの行動を記録した。そして、中央ゾーンにおける滞在時間及び中央ゾーンへの侵入回数をＡＮＹ−ｍａｚｅによって測定した。得られた結果を、図１Ａ〜Ｃに示す。 In this test, the center of the floor of the device was illuminated with 20 lux and each mouse was placed in the open field device and their behavior was recorded for 10 minutes. Then, the staying time in the central zone and the number of invasions into the central zone were measured by ANY-maze. The obtained results are shown in FIGS. 1A to 1C.
高架式十字迷路試験
不安様行動を測定するため、高架式十字迷路試験を行った。この試験において用いた装置においては、２つのオープンアーム（２５×５ｃｍ、高さ３ｃｍの壁（ｌｅｄｇｅ）が付いている）と２つのクローズドアーム（２５×５ｃｍ、高さ３０ｃｍの透明な壁が付いている）とが、中央のプラットフォーム（５×５ｃｍ）において十字型に交差している。アームと中央のプラットホームは白いプラスチック板で作製した。また、当該装置全体は床から５５ｃｍの所に設置した。
Elevated cross maze test An elevated cross maze test was performed to measure anxiety-like behavior. The device used in this test has two open arms (25 x 5 cm, with a 3 cm high wall (ledge)) and two closed arms (25 x 5 cm, with a 30 cm high transparent wall). Crosses in a cross shape on the central platform (5 x 5 cm). The arm and central platform were made of white plastic plate. The entire device was installed 55 cm from the floor.
この試験においては、前記装置の中央のプラットフォームを２０ルクスで照らし、各マウスは、クローズドアームの１つに対向するよう中央のプラットホームに入れ、１０分間の試験に供した。中央のプラットホームでビデオカメラを用いて行動を記録し、オープンアームにおける滞在時間をＡＮＹ−ｍａｚｅによって分析した。得られた結果を、図１Ｄ〜Ｆに示す。 In this test, the central platform of the device was illuminated at 20 lux and each mouse was placed on a central platform facing one of the closed arms and subjected to a 10 minute test. Behavior was recorded using a video camera on the central platform and the time spent in the open arm was analyzed by ANY-maze. The results obtained are shown in FIGS. 1D-F.
強制水泳試験
強制水泳試験は、げっ歯類にうつ様症状を引き起こさせる実験方法の１つであり、抗うつ病薬、新規化合物の抗うつ病効果を評価するために用いられる。この試験において、ガラスで作られた円筒形のビーカー（２８ｃｍの高さ、１６ｃｍの直径）を、水槽として用いた。水位は底から１０ｃｍとした。水の温度を温度計で測定し、２３〜２５℃に設定した。
Forced swimming test The forced swimming test is one of the experimental methods for causing depressive symptoms in rodents, and is used to evaluate the antidepressant effect of antidepressants and novel compounds. In this test, a cylindrical beaker made of glass (height 28 cm, diameter 16 cm) was used as the aquarium. The water level was 10 cm from the bottom. The temperature of the water was measured with a thermometer and set to 23-25 ° C.
この試験においては、前記水槽の底を１５ルクスで照らし、先ず、各マウスを、トレーニングステージ（１５分）に供し、その２４時間後にテストステージ（６分）に供した。マウスをケージに戻す前に、マウスをペーパータオルにて乾燥させ、低体温を防ぐためにヒーターで温めた。行動はビデオカメラによって記録し、不動の時間をＡＮＹ−ｍａｚｅによって分析した。テストステージの時間は６分間としたが、分析は最後の４分間を対象として行なった。得られた結果を図２に示す。 In this test, the bottom of the aquarium was illuminated with 15 lux, and each mouse was first subjected to a training stage (15 minutes) and 24 hours later to a test stage (6 minutes). Before returning the mice to their cages, the mice were dried on paper towels and heated with a heater to prevent hypothermia. Behavior was recorded by a video camera and immobility time was analyzed by ANY-maze. The test stage time was 6 minutes, but the analysis was performed over the last 4 minutes. The obtained results are shown in FIG.
（定量的リアルタイムＰＣＲ）
ＲＮＡ抽出用試薬（株式会社ニッポンジーン製、製品名：ＩＳＯＧＥＮ II）を用い、全（トータル）ＲＮＡを脳前頭葉から単離した。全ＲＮＡ量はナノドロップで測定した。各全ＲＮＡを純水で希釈し、濃度を２５０ｎｇ／μＬとした。それらを鋳型として、ｃＤＮＡ合成キット（タカラバイオ株式会社製、製品名：Ｐｒｉｍｅ Ｓｃｒｉｐｔ ファーストストランドｃＤＮＡ合成キット）を用い、ｃＤＮＡを合成した。
(Quantitative real-time PCR)
Total RNA was isolated from the frontal lobe of the brain using a reagent for RNA extraction (manufactured by Nippon Gene Co., Ltd., product name: ISOGEN II). Total RNA was measured by nanodrop. Each total RNA was diluted with pure water to a concentration of 250 ng / μL. Using them as templates, cDNA was synthesized using a cDNA synthesis kit (manufactured by Takara Bio Inc., product name: Prime Script First Strand cDNA Synthesis Kit).
得られた各ｃＤＮＡを鋳型とし、ＰＣＲ反応を、パワーアップＳＹＢＲグリーンマスターミックス（アプライドバイオ・バイオシステム社製）及び７５００高速リアルタイムＰＣＲ（アプライドバイオ・バイオシステム社製）を用い、その使用説明書に従って１０μＬの容量で行った。なお、この定量的リアルタイムＰＣＲに用いたオリゴヌクレオチドプライマーは、プライマー設計ソフトウェア（Ｐｒｉｍｅｒ ３）を使用して設計した。
Ｔｕｂｌｉｎの発現量も各サンプルのノーマライザーとして併せて測定した。測定結果は、相対量（ΔΔＣｔ）法によって分析した。得られた結果を図３Ｂ及び３Ｃに示す。
Using each of the obtained cDNAs as a template, perform the PCR reaction using the power-up SYBR Green Master Mix (manufactured by Applied Bio Biosystem) and 7500 high-speed real-time PCR (manufactured by Applied Bio Biosystem) according to the instruction manual. The volume was 10 μL. The oligonucleotide primer used for this quantitative real-time PCR was designed using primer design software (Primer 3).
The expression level of Tubulin was also measured as a normalizer for each sample. The measurement results were analyzed by the relative quantity (ΔΔCt) method. The results obtained are shown in FIGS. 3B and 3C.
（ＰＣＲアレイ）
各マウスの前頭葉から調製した全ＲＮＡ溶液を２μＬずつ採取し、各群において混合した。次いで、全ＲＮＡカクテルを４μＬ使用した。ｃＤＮＡは、ＲＴ２ファーストストランドｃＤＮＡ合成キット マウス神経伝達物質受容体（キアゲン社製）を用いて合成した。
(PCR array)
2 μL of total RNA solution prepared from the frontal lobe of each mouse was collected and mixed in each group. Then 4 μL of total RNA cocktail was used. The cDNA was synthesized using the RT2 First Strand cDNA Synthesis Kit Mouse Neurotransmitter Receptor (manufactured by Qiagen).
定量的リアルタイムＰＣＲは、パワーアップＳＹＢＲグリーンマスターミックス（アプライドバイオ・バイオシステム社製）及び７５００高速リアルタイムＰＣＲ（アプライドバイオ・バイオシステム社製）を用い、その使用説明書に従って２５μＬの容量で行なった。ＰＣＲサイクルの条件は次のとおりである。９５℃で１０分間、その後、９５℃で１５秒間、６０℃で１分間を４０サイクル繰り返す。結果は、ＧｅｎｅＧｌｏｂｅデータ解析センター（キアゲン）にて解析してもらった。得られた結果を図３Ａ〜３Ｃに示す。 Quantitative real-time PCR was performed using Power-up SYBR Green Master Mix (manufactured by Applied Bio Biosystems) and 7500 high-speed real-time PCR (manufactured by Applied Bio Biosystems) in a volume of 25 μL according to the instructions for use. The conditions of the PCR cycle are as follows. Repeat 40 cycles of 95 ° C. for 10 minutes, then 95 ° C. for 15 seconds and 60 ° C. for 1 minute. The results were analyzed at the GeneGlobal Data Analysis Center (Qiagen). The obtained results are shown in FIGS. 3A to 3C.
（次世代シーケンス解析）
盲腸内容物から細菌のゲノムＤＮＡを抽出し、次世代シーケンス解析に供した。ゲノムＤＮＡの抽出及び次世代シーケンス解析は、Ｗａｔｃｈａｒｉｎ Ｎ．Ｓｏｖｉｊｉｔら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｒｅｓ．、２０１９年４月２２日、ｐｉｉ：Ｓ０１６８−０１０２（１９）３０１４２−７に記載の方法（「２．４． Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡ ｆｒｏｍ ｆｅｃａｌ ｓａｍｐｌｅｓ」及び「２．５． Ｌｉｂｒａｒｙ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ」）に沿って行なった。
(Next-generation sequence analysis)
Bacterial genomic DNA was extracted from the cecal contents and used for next-generation sequence analysis. Genomic DNA extraction and next-generation sequence analysis can be performed by Watcharin N. et al. Sovigit et al., Neurosci Res. , April 22, 2019, pii: S0168-0102 (19) 30142-7 ("2.4. Execution of DNA from DNA sequencing" and "2.5. Library preparation and DNA sequencing"). It was done along.
（統計分析）
得られた数値は、平均±標準誤差（ＳＥＭ）として表す。スチューデントｔ検定を使用し、全ての分析において、コントロール群とＥＣ−１２摂取群とのグループ間の違いを評価し、Ｐ＜０．０５となった場合に有意差が認められると判断した。また、Ｃｏｈｅｎ’ｓ ｄは効果の大きさを測定するために使用した。効果の大きさにおいては、その低い効果をランク付けした（低効果：ｄ＞０．２、中効果：ｄ＞０．５、高効果：ｄ＞０．８）。
(Statistical analysis)
The numbers obtained are expressed as mean ± standard error (SEM). The Student's t-test was used to evaluate the differences between the control group and the EC-12 intake group in all analyzes, and it was determined that a significant difference was observed when P <0.05. Cohen's d was also used to measure the magnitude of the effect. In terms of the magnitude of the effect, the low effect was ranked (low effect: d> 0.2, medium effect: d> 0.5, high effect: d> 0.8).
（実施例１） 行動試験
上記材料及び方法を用いて行動試験を行った結果、図１Ａ及び１Ｂに示すとおり、オープンフィールド試験において、ＥＣ−１２摂取群は、コントロール群と比較して、中央ゾーンにおいてより活発であり、また滞在時間も有意に長かった（ｐ＝０．０４）。なお、中央ゾーンへの侵入回数においては、図１Ｃに示すとおり、ＥＣ−１２摂取群とコントロール群とで有意差は認められなかった（ｐ＝０．３９）。
(Example 1) Behavioral test As a result of conducting a behavioral test using the above materials and methods, as shown in FIGS. 1A and 1B, in the open field test, the EC-12 intake group was compared with the control group in the central zone. They were more active in and also had a significantly longer stay (p = 0.04). As shown in FIG. 1C, there was no significant difference in the number of invasions into the central zone between the EC-12 intake group and the control group (p = 0.39).
高架式十字迷路試験においては、図１Ｄ及びＥに示すとおり、クローズドアーム及びオープンアームの滞在時間に関しては共に、ＥＣ−１２摂取群とコントロール群とで有意差は認められなかった（図１Ｄ ｐ＝０．１２、図１Ｅ ｐ＝０．３２）。しかし、図１Ｆに示すとおり、中央ゾーンにおける滞在時間においては大きな差が認められた（ｐ＝０．０２）。 In the elevated cross maze test, as shown in FIGS. 1D and E, no significant difference was observed between the EC-12 intake group and the control group in terms of the residence time of the closed arm and the open arm (Fig. 1D p = 0.12, FIG. 1E p = 0.32). However, as shown in FIG. 1F, a large difference was observed in the staying time in the central zone (p = 0.02).
ＥＣ−１２摂取群とコントロール群とで有意差が認められた、オープンフィールド試験及び高架式十字迷路試験は共に、不安・恐怖を評価するための試験である。したがって、上記結果から、エンテロコッカス属に属する細菌は抗不安効果を有していることが明らかとなった。なお、図２に示すとおり、強制水泳試験においてはＥＣ−１２摂取群とコントロール群とで有意な差は認められなかった（ｐ＝０．１７）。 Both the open field test and the elevated cross maze test, in which a significant difference was observed between the EC-12 intake group and the control group, are tests for evaluating anxiety and fear. Therefore, from the above results, it was clarified that the bacteria belonging to the genus Enterococcus have an anxiolytic effect. As shown in FIG. 2, no significant difference was observed between the EC-12 intake group and the control group in the forced swimming test (p = 0.17).
（実施例２） 前頭葉における遺伝子発現
上記のとおり、ＰＣＲアレイ解析により、前頭葉における神経伝達物質受容体遺伝子の発現を網羅的に解析した。また、前頭葉における神経伝達物質受容体遺伝子の発現を定量的リアルタイムＰＣＲ法で解析した。その結果、図３Ａ〜３Ｃに示すとおり、Ａｄｒｂ３遺伝子、Ａｖｐｒ１ａ遺伝子及びＤｒｄ５遺伝子に関し、ＥＣ−１２摂取による有意な発現量の亢進が認められた（図３Ｂ Ａｄｒｂ３：ｐ＝０．０５、Ａｖｐｒ１ａ：ｐ＝０．０２、Ｄｒｄ５：ｐ＝０．０３）。
(Example 2) Gene expression in the frontal lobe As described above, the expression of the neurotransmitter receptor gene in the frontal lobe was comprehensively analyzed by PCR array analysis. In addition, the expression of neurotransmitter receptor genes in the frontal lobe was analyzed by quantitative real-time PCR. As a result, as shown in FIGS. 3A to 3C, a significant increase in the expression level of the Adrb3 gene, Avpr1a gene and Drd5 gene was observed by ingestion of EC-12 (Fig. 3B Adrb3: p = 0.05, Avpr1a: p). = 0.02, Drd5: p = 0.03).
一方、図３Ｂ及び３Ｃに示すとおり、Ｃｈｒｎｅ遺伝子、ＢＤＮＦ遺伝子、Ｇａｂｒａ５遺伝子、Ｇａｂｒｑ遺伝子、Ｇｒｍ５遺伝子及びＨｔｒ２ｂ遺伝子に関しては、ＥＣ−１２摂取による有意な発現量の変化は認められなかった（図３Ｂ Ｃｈｒｎｅ：ｐ＝０．０７、ＢＤＮＦ：ｐ＝０．１９、図３Ｃ Ｇａｂｒａ５：ｐ＝０．１９、Ｇａｂｒｑ：ｐ＝０．２５、Ｇｒｍ５：ｐ＝０．９２、Ｈｔｒ２ｂ：ｐ＝０．９１）。 On the other hand, as shown in FIGS. 3B and 3C, no significant change in the expression level of the Chrne gene, BDNF gene, Gabra5 gene, Gabrq gene, Grm5 gene and Htr2b gene was observed due to EC-12 intake (Fig. 3B Chrne). : P = 0.07, BDNF: p = 0.19, FIG. 3C Gabra5: p = 0.19, Gabrq: p = 0.25, Grm5: p = 0.92, Htr2b: p = 0.91).
ＥＣ−１２摂取によって遺伝子発現の亢進が認められた、Ａｄｒｂ３（β３アドレナリン受容体）、Ａｖｐｒ１ａ（バソプレシン受容体１Ａ）及びＤｒｄ５（ドパミンＤ５受容体）は、いずれも神経伝達の活性化に関与する受容体である。したがって、エンテロコッカス属に属する細菌摂取による、これら神経伝達物質受容体の増加に伴い、前頭葉等の脳内において神経伝達が活性化されることが示唆される。 Adrb3 (β3 adrenergic receptor), Avpr1a (vasopressin receptor 1A) and Drd5 (dopamine D5 receptor), whose gene expression was enhanced by EC-12 intake, are all receptors involved in the activation of neurotransmission. The body. Therefore, it is suggested that neurotransmission is activated in the brain such as the frontal lobe with the increase of these neurotransmitter receptors due to the ingestion of bacteria belonging to the genus Enterococcus.
また、Ａｄｒｂ３に関しては、その選択的アゴニストであるアミベグロンを用いた研究成果から、抗不安様行動及び抗うつ様行動を誘導することが明らかとなっている（Ｔａｎｙｅｒｉ、Ｐｅｌｉｎら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｅｈａｖ．、２０１３年９月、１１０巻、２７〜３２ページ 参照）。
Ｄｒｄ５は、そのファミリーであるＤｒｄ１と共に、恐怖の消去及び報酬の獲得行動を促進することが報告されている（Ｐｅｒｒｅａｕｌｔ、Ｍｅｌｉｓｓａ Ｌ.ら、Ｅｕｒ Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、２０１７年８月、４６巻、４号、２０１５〜２０２５ページ 参照）。
In addition, regarding Adrb3, it has been clarified from the results of research using its selective agonist amibegron that it induces anxiolytic-like behavior and antidepressant-like behavior (Tanyeri, Pelin et al., Pharmacol Biochem Behav., See September 2013, Volume 110, pp. 27-32).
Drd5, along with its family Drd1, has been reported to promote fear-eliminating and reward-earning behaviors (Perreal, Melissa L. et al., Eur J Neurosci., August 2017, Vol. 46, No. 4). , 2015-2025).
以上のとおり、ＥＣ−１２摂取によって、Ａｄｒｂ３、Ａｖｐｒ１ａ及びＤｒｄ５の発現が亢進されることが明らかとなった。そして、これら神経伝達物質受容体の発現亢進に伴い、脳内の神経伝達が活性化され、ひいては、上記行動試験において認められた抗不安効果、さらには抗うつ効果が奏されることが示された。 As described above, it was clarified that the expression of Adrb3, Avpr1a and Drd5 was enhanced by ingestion of EC-12. Then, it was shown that the neurotransmitters in the brain are activated along with the increased expression of these neurotransmitter receptors, and that the anxiolytic effect and the antidepressant effect observed in the above behavioral test are exhibited. It was.
（実施例３） 盲腸便の菌叢解析
ＥＣ−１２摂取マウスの盲腸便について、次世代シークエンサーにより、その菌叢を網羅的に解析した。その結果、図４Ａ及びＢに示すとおり、Ｂｕｔｙｒｉｃｉｃｏｃｃｕｓ属細菌及びＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属細菌の各々の占有率は、コントロール群と比較して、ＥＣ−１２摂取群において高かった。一方、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌の占有率は、ＥＣ−１２摂取群の方が低かった。
(Example 3) Analysis of cecal stool cecal stool The cecal stool of EC-12-fed mice was comprehensively analyzed by a next-generation sequencer. As a result, as shown in FIGS. 4A and 4B, the occupancy rates of each of the bacteria of the genus Butyricococcus and the bacterium of the genus Enterococcus were higher in the EC-12 intake group than in the control group. On the other hand, the occupancy rate of Lactobacillus bacteria was lower in the EC-12 intake group.
Ｂｕｔｙｒｉｃｉｃｏｃｃｕｓ属細菌は、酪酸を産生することが明らかとなっている。そのため、エンテロコッカス属に属する細菌摂取によるｕｔｙｒｉｃｉｃｏｃｃｕｓ属細菌の増加に伴い、酪酸が多く生産され、それが、前記神経伝達物質受容体遺伝子等の脳内遺伝子の発現制御に関与していることが想定される。 Bacteria of the genus Butyricoccus have been shown to produce butyric acid. Therefore, it is presumed that a large amount of butyric acid is produced as the number of bacteria belonging to the genus Utyricoccus increases due to ingestion of bacteria belonging to the genus Enterococcus, which is involved in the regulation of expression of genes in the brain such as the neurotransmitter receptor gene. To.
以上説明したように、本発明によれば不安及びうつを抑制することが可能となる。したがって、本発明の組成物は、不安障害、うつ等の気分障害の改善、治療又は予防等において有用である。 As described above, according to the present invention, it is possible to suppress anxiety and depression. Therefore, the composition of the present invention is useful in improving, treating or preventing mood disorders such as anxiety disorders and depression.
（１）識別の表示：Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ ＥＣ−１２
（２）受託番号：ＦＥＲＭ ＢＰ−１０２８４
（３）受託日２００５年２月２５日
（４）寄託機関：独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センター
(1) Display of identification: Enterococcus faecalis EC-12
(2) Contract number: FERM BP-10284
(3) Date of deposit February 25, 2005 (4) Depositary organization: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology Patented Biological Deposit Center
本発明は、不安障害及び／又は気分障害を改善等するための組成物に関し、より詳しくは、エンテロコッカス属に属する細菌を有効成分として含む、不安障害及び／又は気分障害を、改善又は予防するための組成物に関する。また、本発明は、前記細菌を有効成分として含む、β３アドレナリン受容体、ドパミンＤ５受容体及びバソプレシン受容体１Ａからなる群から選択される少なくとも１の受容体の発現を増強するための組成物に関する。さらに、本発明は、前記細菌を有効成分として含む、脳の神経伝達を活性化するための組成物に関する。 The present invention relates to a composition for improving anxiety disorder and / or mood disorder, and more specifically, for improving or preventing anxiety disorder and / or mood disorder containing a bacterium belonging to the genus Enterococcus as an active ingredient. With respect to the composition of. The present invention also relates to a composition for enhancing the expression of at least one receptor selected from the group consisting of β3 adrenergic receptor, dopamine D5 receptor and vasopressin receptor 1A, which comprises the bacterium as an active ingredient. .. Furthermore, the present invention relates to a composition for activating neurotransmission in the brain, which comprises the bacterium as an active ingredient.
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