JP2021003103A - Resin film and container for cell culture - Google Patents
Resin film and container for cell culture Download PDFInfo
- Publication number
- JP2021003103A JP2021003103A JP2020110430A JP2020110430A JP2021003103A JP 2021003103 A JP2021003103 A JP 2021003103A JP 2020110430 A JP2020110430 A JP 2020110430A JP 2020110430 A JP2020110430 A JP 2020110430A JP 2021003103 A JP2021003103 A JP 2021003103A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- resin film
- resin
- cell culture
- meth
- less
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 229920005989 resin Polymers 0.000 title claims abstract description 90
- 239000011347 resin Substances 0.000 title claims abstract description 90
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 title claims abstract description 71
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 claims abstract description 67
- 239000000057 synthetic resin Substances 0.000 claims abstract description 67
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 57
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims abstract description 12
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 claims description 58
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 29
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 229920002845 Poly(methacrylic acid) Polymers 0.000 claims description 17
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 claims description 10
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 claims description 10
- 230000008961 swelling Effects 0.000 claims description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 8
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 8
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 5
- 239000000470 constituent Substances 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 90
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M Acrylate Chemical compound [O-]C(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 34
- DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N acetaldehyde Diethyl Acetal Natural products CCOC(C)OCC DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 31
- -1 cyclic aldehyde Chemical class 0.000 description 30
- 239000011354 acetal resin Substances 0.000 description 29
- 229920006324 polyoxymethylene Polymers 0.000 description 29
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 13
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 13
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 description 13
- ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N butyric aldehyde Natural products CCCC=O ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 11
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N Methacrylic acid Chemical class CC(=C)C(O)=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 10
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 125000000879 imine group Chemical group 0.000 description 9
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 8
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 8
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 7
- 150000001241 acetals Chemical group 0.000 description 7
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 7
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 7
- NZZFYRREKKOMAT-UHFFFAOYSA-N diiodomethane Chemical compound ICI NZZFYRREKKOMAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 6
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 6
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 6
- HGBOYTHUEUWSSQ-UHFFFAOYSA-N pentanal Chemical compound CCCCC=O HGBOYTHUEUWSSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920002037 poly(vinyl butyral) polymer Polymers 0.000 description 6
- 150000001408 amides Chemical group 0.000 description 5
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 5
- 150000003949 imides Chemical group 0.000 description 5
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 5
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 5
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 5
- VVJKKWFAADXIJK-UHFFFAOYSA-N Allylamine Chemical compound NCC=C VVJKKWFAADXIJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 4
- NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N Propionic aldehyde Chemical compound CCC=O NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 4
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- DUVWEYQMWDHDBY-UHFFFAOYSA-N 2-(dimethylamino)prop-2-enamide Chemical compound CN(C)C(=C)C(N)=O DUVWEYQMWDHDBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N Pyrrolidine Chemical group C1CCNC1 RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 3
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000001841 imino group Chemical group [H]N=* 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 description 3
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 3
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 3
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 3
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 3
- OSSNTDFYBPYIEC-UHFFFAOYSA-N 1-ethenylimidazole Chemical compound C=CN1C=CN=C1 OSSNTDFYBPYIEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JAHNSTQSQJOJLO-UHFFFAOYSA-N 2-(3-fluorophenyl)-1h-imidazole Chemical compound FC1=CC=CC(C=2NC=CN=2)=C1 JAHNSTQSQJOJLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UJOBWOGCFQCDNV-UHFFFAOYSA-N 9H-carbazole Chemical group C1=CC=C2C3=CC=CC=C3NC2=C1 UJOBWOGCFQCDNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 2
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 description 2
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 2
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N Guanidine Chemical group NC(N)=N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N Iron oxide Chemical compound [Fe]=O UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N Morpholine Chemical group C1COCCN1 YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N Piperazine Chemical group C1CNCCN1 GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical group C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KYQCOXFCLRTKLS-UHFFFAOYSA-N Pyrazine Chemical group C1=CN=CC=N1 KYQCOXFCLRTKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical group C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KAESVJOAVNADME-UHFFFAOYSA-N Pyrrole Chemical group C=1C=CNC=1 KAESVJOAVNADME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N Quinoline Chemical compound N1=CC=CC2=CC=CC=C21 SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IKHGUXGNUITLKF-XPULMUKRSA-N acetaldehyde Chemical compound [14CH]([14CH3])=O IKHGUXGNUITLKF-XPULMUKRSA-N 0.000 description 2
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 2
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 2
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 description 2
- HUMNYLRZRPPJDN-UHFFFAOYSA-N benzaldehyde Chemical compound O=CC1=CC=CC=C1 HUMNYLRZRPPJDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KSMVZQYAVGTKIV-UHFFFAOYSA-N decanal Chemical compound CCCCCCCCCC=O KSMVZQYAVGTKIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000005370 electroosmosis Methods 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000003822 epoxy resin Substances 0.000 description 2
- UYMKPFRHYYNDTL-UHFFFAOYSA-N ethenamine Chemical compound NC=C UYMKPFRHYYNDTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000578 graft copolymer Polymers 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- FXHGMKSSBGDXIY-UHFFFAOYSA-N heptanal Chemical compound CCCCCCC=O FXHGMKSSBGDXIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VKYKSIONXSXAKP-UHFFFAOYSA-N hexamethylenetetramine Chemical group C1N(C2)CN3CN1CN2C3 VKYKSIONXSXAKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JARKCYVAAOWBJS-UHFFFAOYSA-N hexanal Chemical compound CCCCCC=O JARKCYVAAOWBJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011147 inorganic material Substances 0.000 description 2
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- AWJUIBRHMBBTKR-UHFFFAOYSA-N isoquinoline Chemical compound C1=NC=CC2=CC=CC=C21 AWJUIBRHMBBTKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 2
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical compound O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 2
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 2
- LVHBHZANLOWSRM-UHFFFAOYSA-N methylenebutanedioic acid Natural products OC(=O)CC(=C)C(O)=O LVHBHZANLOWSRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GYHFUZHODSMOHU-UHFFFAOYSA-N nonanal Chemical compound CCCCCCCCC=O GYHFUZHODSMOHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NUJGJRNETVAIRJ-UHFFFAOYSA-N octanal Chemical compound CCCCCCCC=O NUJGJRNETVAIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 229920000647 polyepoxide Polymers 0.000 description 2
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 2
- 229920001721 polyimide Polymers 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 2
- 239000011435 rock Substances 0.000 description 2
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 125000000626 sulfinic acid group Chemical group 0.000 description 2
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 150000003852 triazoles Chemical class 0.000 description 2
- DTGKSKDOIYIVQL-WEDXCCLWSA-N (+)-borneol Chemical group C1C[C@@]2(C)[C@@H](O)C[C@@H]1C2(C)C DTGKSKDOIYIVQL-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- KJPRLNWUNMBNBZ-QPJJXVBHSA-N (E)-cinnamaldehyde Chemical compound O=C\C=C\C1=CC=CC=C1 KJPRLNWUNMBNBZ-QPJJXVBHSA-N 0.000 description 1
- XLPJNCYCZORXHG-UHFFFAOYSA-N 1-morpholin-4-ylprop-2-en-1-one Chemical compound C=CC(=O)N1CCOCC1 XLPJNCYCZORXHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HYZJCKYKOHLVJF-UHFFFAOYSA-N 1H-benzimidazole Chemical compound C1=CC=C2NC=NC2=C1 HYZJCKYKOHLVJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XYHKNCXZYYTLRG-UHFFFAOYSA-N 1h-imidazole-2-carbaldehyde Chemical compound O=CC1=NC=CN1 XYHKNCXZYYTLRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SBNOTUDDIXOFSN-UHFFFAOYSA-N 1h-indole-2-carbaldehyde Chemical compound C1=CC=C2NC(C=O)=CC2=C1 SBNOTUDDIXOFSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HXDYHJGZXSPLJE-UHFFFAOYSA-N 2,4-dioxopyrimidine-1-carbaldehyde Chemical compound O=CN1C=CC(=O)NC1=O HXDYHJGZXSPLJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YHYCMHWTYHPIQS-UHFFFAOYSA-N 2-(2-hydroxyethoxy)-1-methoxyethanol Chemical compound COC(O)COCCO YHYCMHWTYHPIQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUNPIOSIKLGJER-UHFFFAOYSA-N 2-(2-hydroxyethoxy)ethane-1,1-diol Chemical compound OCCOCC(O)O OUNPIOSIKLGJER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NJPYINXHINLEFD-UHFFFAOYSA-N 2-(diethylamino)prop-2-enamide Chemical compound CCN(CC)C(=C)C(N)=O NJPYINXHINLEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKNCOURZONDCGV-UHFFFAOYSA-N 2-(dimethylamino)ethyl 2-methylprop-2-enoate Chemical compound CN(C)CCOC(=O)C(C)=C JKNCOURZONDCGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WFSMVVDJSNMRAR-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(2-ethoxyethoxy)ethoxy]ethanol Chemical compound CCOCCOCCOCCO WFSMVVDJSNMRAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LWJDREVQPMUATG-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(2-hydroxyethoxy)ethoxy]ethane-1,1-diol Chemical compound OCCOCCOCC(O)O LWJDREVQPMUATG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MPNXSZJPSVBLHP-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-n-phenylpyridine-3-carboxamide Chemical compound ClC1=NC=CC=C1C(=O)NC1=CC=CC=C1 MPNXSZJPSVBLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CSDSSGBPEUDDEE-UHFFFAOYSA-N 2-formylpyridine Chemical compound O=CC1=CC=CC=N1 CSDSSGBPEUDDEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- HFCUBKYHMMPGBY-UHFFFAOYSA-N 2-methoxyethyl prop-2-enoate Chemical compound COCCOC(=O)C=C HFCUBKYHMMPGBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHMICKWLTGFITH-UHFFFAOYSA-N 2H-isoindole Chemical compound C1=CC=CC2=CNC=C21 VHMICKWLTGFITH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AGIJRRREJXSQJR-UHFFFAOYSA-N 2h-thiazine Chemical compound N1SC=CC=C1 AGIJRRREJXSQJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HIBSYUPTCGGRSD-UHFFFAOYSA-N 3-prop-2-enoyl-1,3-oxazolidin-2-one Chemical compound C=CC(=O)N1CCOC1=O HIBSYUPTCGGRSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IDDDVXIUIXWAGJ-DDSAHXNVSA-N 4-[(1r)-1-aminoethyl]-n-pyridin-4-ylcyclohexane-1-carboxamide;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.C1CC([C@H](N)C)CCC1C(=O)NC1=CC=NC=C1 IDDDVXIUIXWAGJ-DDSAHXNVSA-N 0.000 description 1
- 239000004925 Acrylic resin Substances 0.000 description 1
- 229920000178 Acrylic resin Polymers 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- XNCOSPRUTUOJCJ-UHFFFAOYSA-N Biguanide Chemical group NC(N)=NC(N)=N XNCOSPRUTUOJCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940123208 Biguanide Drugs 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- OGCAPMDDVSWZHN-UHFFFAOYSA-N CCCCCC.C(C=C)(=O)N Chemical compound CCCCCC.C(C=C)(=O)N OGCAPMDDVSWZHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LWLHCZLCSDUDEL-UHFFFAOYSA-O C[N+](C)(C)CC(O)=P(=O)CCOC(=O)C=C Chemical compound C[N+](C)(C)CC(O)=P(=O)CCOC(=O)C=C LWLHCZLCSDUDEL-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000089 Cyclic olefin copolymer Polymers 0.000 description 1
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 description 1
- 229920000877 Melamine resin Polymers 0.000 description 1
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M Methacrylate Chemical compound CC(=C)C([O-])=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N N-methyl-guanidine Chemical group CNC(N)=N CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCQWOFVYLHDMMC-UHFFFAOYSA-N Oxazole Chemical compound C1=COC=N1 ZCQWOFVYLHDMMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PCNDJXKNXGMECE-UHFFFAOYSA-N Phenazine Chemical group C1=CC=CC2=NC3=CC=CC=C3N=C21 PCNDJXKNXGMECE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical group OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 239000004962 Polyamide-imide Substances 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000004642 Polyimide Substances 0.000 description 1
- 239000004721 Polyphenylene oxide Substances 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- WTKZEGDFNFYCGP-UHFFFAOYSA-N Pyrazole Chemical compound C=1C=NNC=1 WTKZEGDFNFYCGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical group C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 229910052581 Si3N4 Inorganic materials 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- FZWLAAWBMGSTSO-UHFFFAOYSA-N Thiazole Chemical compound C1=CSC=N1 FZWLAAWBMGSTSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100035140 Vitronectin Human genes 0.000 description 1
- 108010031318 Vitronectin Proteins 0.000 description 1
- 125000004036 acetal group Chemical group 0.000 description 1
- 238000006359 acetalization reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000003926 acrylamides Chemical class 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- QRUDEWIWKLJBPS-UHFFFAOYSA-N benzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N[N][N]C2=C1 QRUDEWIWKLJBPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012964 benzotriazole Substances 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 1
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- SURLGNKAQXKNSP-DBLYXWCISA-N chlorin Chemical group C\1=C/2\N/C(=C\C3=N/C(=C\C=4NC(/C=C\5/C=CC/1=N/5)=CC=4)/C=C3)/CC\2 SURLGNKAQXKNSP-DBLYXWCISA-N 0.000 description 1
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 1
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical group C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KJPRLNWUNMBNBZ-UHFFFAOYSA-N cinnamic aldehyde Natural products O=CC=CC1=CC=CC=C1 KJPRLNWUNMBNBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940117916 cinnamic aldehyde Drugs 0.000 description 1
- WCZVZNOTHYJIEI-UHFFFAOYSA-N cinnoline Chemical group N1=NC=CC2=CC=CC=C21 WCZVZNOTHYJIEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 239000006059 cover glass Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 125000002704 decyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- NPNRJNCGQAMFGP-UHFFFAOYSA-N dimethyl-[(oxo-$l^{5}-phosphanylidyne)methyl]-(2-prop-2-enoyloxyethyl)azanium Chemical compound O=P#C[N+](C)(C)CCOC(=O)C=C NPNRJNCGQAMFGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002147 dimethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])N(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N dimethylaminoamidine Chemical group CN(C)C(N)=N SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003438 dodecyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000002573 ethenylidene group Chemical group [*]=C=C([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- CNUDBTRUORMMPA-UHFFFAOYSA-N formylthiophene Chemical compound O=CC1=CC=CS1 CNUDBTRUORMMPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000009477 glass transition Effects 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 125000002349 hydroxyamino group Chemical group [H]ON([H])[*] 0.000 description 1
- MTNDZQHUAFNZQY-UHFFFAOYSA-N imidazoline Chemical compound C1CN=CN1 MTNDZQHUAFNZQY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid group Chemical group C(\C=C/C(=O)O)(=O)O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- JDSHMPZPIAZGSV-UHFFFAOYSA-N melamine Chemical compound NC1=NC(N)=NC(N)=N1 JDSHMPZPIAZGSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 239000013212 metal-organic material Substances 0.000 description 1
- LVWZTYCIRDMTEY-UHFFFAOYSA-N metamizole Chemical compound O=C1C(N(CS(O)(=O)=O)C)=C(C)N(C)N1C1=CC=CC=C1 LVWZTYCIRDMTEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005641 methacryl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 description 1
- 229940028444 muse Drugs 0.000 description 1
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000004123 n-propyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000001400 nonyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000005311 nuclear magnetism Effects 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Al]O[Al]=O TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RVTZCBVAJQQJTK-UHFFFAOYSA-N oxygen(2-);zirconium(4+) Chemical compound [O-2].[O-2].[Zr+4] RVTZCBVAJQQJTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNGNSVIICDLXHT-UHFFFAOYSA-N para-ethylbenzaldehyde Natural products CCC1=CC=C(C=O)C=C1 QNGNSVIICDLXHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N phosphonic acid group Chemical group P(O)(O)=O ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950004354 phosphorylcholine Drugs 0.000 description 1
- PYJNAPOPMIJKJZ-UHFFFAOYSA-N phosphorylcholine chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)CCOP(O)(O)=O PYJNAPOPMIJKJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920001200 poly(ethylene-vinyl acetate) Polymers 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 229920006122 polyamide resin Polymers 0.000 description 1
- 229920002312 polyamide-imide Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 229920005668 polycarbonate resin Polymers 0.000 description 1
- 239000004431 polycarbonate resin Substances 0.000 description 1
- 229920000570 polyether Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 239000009719 polyimide resin Substances 0.000 description 1
- 229920001195 polyisoprene Polymers 0.000 description 1
- 230000000379 polymerizing effect Effects 0.000 description 1
- 229920005672 polyolefin resin Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 229920005749 polyurethane resin Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 150000004032 porphyrins Chemical group 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical group 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- CPNGPNLZQNNVQM-UHFFFAOYSA-N pteridine Chemical group N1=CN=CC2=NC=CN=C21 CPNGPNLZQNNVQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PBMFSQRYOILNGV-UHFFFAOYSA-N pyridazine Chemical group C1=CC=NN=C1 PBMFSQRYOILNGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Chemical group COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZSKGQVFRTSEPJT-UHFFFAOYSA-N pyrrole-2-carboxaldehyde Chemical compound O=CC1=CC=CN1 ZSKGQVFRTSEPJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000168 pyrrolyl group Chemical group 0.000 description 1
- JWVCLYRUEFBMGU-UHFFFAOYSA-N quinazoline Chemical compound N1=CN=CC2=CC=CC=C21 JWVCLYRUEFBMGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XSCHRSMBECNVNS-UHFFFAOYSA-N quinoxaline Chemical group N1=CC=NC2=CC=CC=C21 XSCHRSMBECNVNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 1
- 102000000568 rho-Associated Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108010041788 rho-Associated Kinases Proteins 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical group 0.000 description 1
- HQVNEWCFYHHQES-UHFFFAOYSA-N silicon nitride Chemical compound N12[Si]34N5[Si]62N3[Si]51N64 HQVNEWCFYHHQES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052814 silicon oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000542 sulfonic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- MUTNCGKQJGXKEM-UHFFFAOYSA-N tamibarotene Chemical compound C=1C=C2C(C)(C)CCC(C)(C)C2=CC=1NC(=O)C1=CC=C(C(O)=O)C=C1 MUTNCGKQJGXKEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003512 tertiary amines Chemical group 0.000 description 1
- 150000003536 tetrazoles Chemical class 0.000 description 1
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 1
- OGIDPMRJRNCKJF-UHFFFAOYSA-N titanium oxide Inorganic materials [Ti]=O OGIDPMRJRNCKJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JLGLQAWTXXGVEM-UHFFFAOYSA-N triethylene glycol monomethyl ether Chemical compound COCCOCCOCCO JLGLQAWTXXGVEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IMNIMPAHZVJRPE-UHFFFAOYSA-N triethylenediamine Chemical group C1CN2CCN1CC2 IMNIMPAHZVJRPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N urea group Chemical group NC(=O)N XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910001928 zirconium oxide Inorganic materials 0.000 description 1
Landscapes
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
Description
本発明は、細胞培養用足場材料からなる樹脂膜に関する。また、本発明は、上記樹脂膜を用いた細胞培養用容器にも関する。 The present invention relates to a resin film made of a scaffold material for cell culture. The present invention also relates to a cell culture container using the above resin film.
ヒト胚性幹細胞（ｈＥＳＣ）やヒト人工多能性幹細胞（ｈｉＰＳＣ）等のヒト多能性幹細胞（ｈＰＳＣ）は、創薬や再生医療への応用が期待されている。このような応用を果たすには、多能性幹細胞を安全に、かつ再現性良く培養し、増殖させることが必須である。特に、再生医療の産業上利用に際しては、幹細胞を未分化状態で多量に扱う必要がある。そのため、天然高分子や合成高分子を用いた培養方法について種々検討されている。 Human pluripotent stem cells (hPSC) such as human embryonic stem cells (hESC) and human induced pluripotent stem cells (hiPSC) are expected to be applied to drug discovery and regenerative medicine. In order to achieve such applications, it is essential to culture and proliferate pluripotent stem cells safely and with good reproducibility. In particular, for industrial use of regenerative medicine, it is necessary to handle a large amount of stem cells in an undifferentiated state. Therefore, various culture methods using natural polymers and synthetic polymers have been studied.
例えば、下記の非特許文献１では、ｉＰＳ細胞やＥＳ細胞の増殖用足場材料として、フィブロネクチンを縮合反応させたポリ（ビニルアルコール−ビニルアセタール−イタコン酸）共重合体が提案されている。この足場材料は、親水性及び耐水性に優れているとされている。 For example, Non-Patent Document 1 below proposes a poly (vinyl alcohol-vinyl acetal-itaconic acid) copolymer obtained by condensation reaction of fibronectin as a scaffold material for proliferation of iPS cells and ES cells. This scaffolding material is said to have excellent hydrophilicity and water resistance.
また下記の特許文献１には、カチオンとしてＤＭＡＥＭＡ、アニオンとしてアクリル酸、核酸またはヘパリンを使用した足場材料が開示されている。 Further, Patent Document 1 below discloses a scaffolding material using DMAEMA as a cation and acrylic acid, nucleic acid or heparin as an anion.
また下記の特許文献２には、ＥＳ細胞やｉＰＳ細胞の培養に用いられる足場材料として、親水かつ柔軟なポリロタキサンゲルで被覆された表面を有する培養容器が開示されている。 Further, Patent Document 2 below discloses a culture vessel having a surface coated with a hydrophilic and flexible polyrotaxane gel as a scaffold material used for culturing ES cells and iPS cells.
幹細胞の未分化性や分化特性が、増殖性に関与していることが知られており、これを制御する技術が求められている。従来、天然高分子としてのラミニンやヴィトロネクチン等の接着たんぱく質や、マウス肉腫由来のマトリゲルを用いると、播種後の細胞定着性が非常に高いことが知られている。 It is known that the undifferentiated and differentiated characteristics of stem cells are involved in proliferative properties, and a technique for controlling this is required. Conventionally, it is known that when an adhesive protein such as laminin or vitronectin as a natural polymer or a matrigel derived from mouse sarcoma is used, the cell colonization after seeding is very high.
もっとも、天然高分子やマウス肉腫由来のマトリゲル等を用いる方法では、操作が煩雑であり、コストが高くつきがちであった。また、安全性の面でも問題があった。そこで、前述した非特許文献１、特許文献１及び特許文献２に記載のような合成高分子を用いた足場材料が種々提案されている。 However, the method using a natural polymer, a mouse sarcoma-derived matrigel, or the like is complicated in operation and tends to be costly. There was also a problem in terms of safety. Therefore, various scaffolding materials using synthetic polymers as described in Non-Patent Document 1, Patent Document 1 and Patent Document 2 described above have been proposed.
しかしながら、非特許文献１に記載の細胞足場材料では、フィブロネクチンを含まない場合、すなわち、合成高分子だけの場合には、細胞が伸展せずに収縮し、浮遊するという問題があった。 However, the cell scaffold material described in Non-Patent Document 1 has a problem that cells contract and float without stretching when they do not contain fibronectin, that is, when only synthetic polymers are used.
また、特許文献１に記載の細胞足場材料では、イオン性による親水性が高く、細胞塊の収縮や細胞の凝集を引き起こすという問題があった。 Further, the cell scaffold material described in Patent Document 1 has a problem that it is highly hydrophilic due to ionicity and causes contraction of cell mass and cell aggregation.
さらに、特許文献２に記載の細胞足場材料では、親水性が高いため、膨潤しやすかった。そのため、播種した細胞が培養中に足場材料から剥離しやすく、細胞の定着性が低いという問題があった。 Further, the cell scaffold material described in Patent Document 2 has high hydrophilicity, so that it easily swells. Therefore, there is a problem that the seeded cells are easily detached from the scaffold material during culturing and the cell fixability is low.
本発明の目的は、細胞の培養に際しての細胞塊の収縮が生じ難く、細胞の伸展性に優れた細胞培養用足場材料からなる樹脂膜及び細胞培養用容器を提供することにある。 An object of the present invention is to provide a resin film and a cell culture container made of a cell culture scaffold material which is less likely to cause contraction of a cell mass during cell culture and has excellent cell extensibility.
本発明に係る樹脂膜は、合成樹脂を含有する細胞培養用足場材料からなる樹脂膜であって、ｐＨ７．０におけるゼータ電位が、−４０ｍＶ以上であり、表面自由エネルギーの分散項成分が２４．５ｍＪ／ｍ２以上、４５ｍＪ／ｍ２以下である。 The resin film according to the present invention is a resin film made of a scaffold material for cell culture containing a synthetic resin, has a zeta potential of −40 mV or more at pH 7.0, and has a dispersion term component of surface free energy of 24. It is 5 mJ / m 2 or more and 45 mJ / m 2 or less.
本発明に係る樹脂膜のある特定の局面では、前記表面自由エネルギーの極性項成分が１ｍＪ／ｍ２以上、２０ｍＪ／ｍ２以下である。 In a specific aspect of the resin film according to the present invention, the polar term component of the surface free energy is 1 mJ / m 2 or more and 20 mJ / m 2 or less.
本発明に係る樹脂膜の他の特定の局面では、ｐＨ７．０におけるゼータ電位が＋３０ｍＶ以下である。 In another particular aspect of the resin film according to the present invention, the zeta potential at pH 7.0 is +30 mV or less.
本発明に係る樹脂膜のさらに他の特定の局面では、１００℃における貯蔵弾性率が１×１０４Ｐａ以上、１×１０８Ｐａ以下であり、２５℃における貯蔵弾性率と１００℃における貯蔵弾性率との比（（２５℃における貯蔵弾性率）／（１００℃における貯蔵弾性率））が１×１０以上、１×１０５以下である。 In still another specific aspect of the resin film according to the present invention, the storage elastic modulus at 100 ° C. is 1 × 10 4 Pa or more and 1 × 10 8 Pa or less, and the storage elastic modulus at 25 ° C. and the storage elastic modulus at 100 ° C. the ratio of the rate ((storage modulus at 25 ° C.) / (storage modulus at 100 ° C.)) of 1 × 10 or more, and 1 × 10 5 or less.
本発明に係る樹脂膜のさらに他の特定の局面では、前記合成樹脂は、構成単位中にブレンステッド塩基性基を０．２モル％以上、２０モル％以下で含む。 In yet another specific aspect of the resin film according to the present invention, the synthetic resin contains Bronsted basic groups in a constituent unit of 0.2 mol% or more and 20 mol% or less.
本発明に係る樹脂膜のさらに他の特定の局面では、水膨潤倍率が５０％以下である。 In still another specific aspect of the resin film according to the present invention, the water swelling ratio is 50% or less.
本発明に係る樹脂膜のさらに他の特定の局面では、前記細胞培養用足場材料が、動物由来の原料を実質的に含まない。 In yet another particular aspect of the resin membrane according to the present invention, the cell culture scaffold material is substantially free of animal-derived material.
本発明に係る樹脂膜のさらに他の特定の局面では、前記合成樹脂がビニル重合体を含む。 In yet another particular aspect of the resin film according to the present invention, the synthetic resin comprises a vinyl polymer.
本発明に係る樹脂膜のさらに他の特定の局面では、前記合成樹脂が、少なくともポリビニルアルコール誘導体又はポリ（メタ）アクリル酸エステルを含む。 In yet another particular aspect of the resin film according to the present invention, the synthetic resin comprises at least a polyvinyl alcohol derivative or a poly (meth) acrylic acid ester.
本発明に係る細胞培養用容器は、細胞の培養領域の少なくとも一部に本発明に従って構成される樹脂膜を備える。 The cell culture container according to the present invention includes a resin film formed according to the present invention in at least a part of the cell culture area.
本発明に係る樹脂膜及び細胞培養用容器によれば、細胞の培養に際し、細胞塊の収縮を抑制しつつ、細胞の伸展性を高めることができる。 According to the resin film and the cell culture container according to the present invention, it is possible to enhance the extensibility of cells while suppressing the contraction of cell clusters when culturing cells.
以下、図面を参照しつつ、本発明の具体的な実施形態を説明することにより、本発明を明らかにする。 Hereinafter, the present invention will be clarified by explaining specific embodiments of the present invention with reference to the drawings.
本発明に係る樹脂膜は、細胞を培養するために用いられる。 The resin film according to the present invention is used for culturing cells.
本発明に係る樹脂膜は、合成樹脂を含有する細胞培養用足場材料からなる樹脂膜である。本発明に係る樹脂膜のｐＨ７．０におけるゼータ電位は、−４０ｍＶ以上であり、表面自由エネルギーの分散項成分は、２４．５ｍＪ／ｍ２以上、４５ｍＪ／ｍ２以下である。 The resin film according to the present invention is a resin film made of a scaffold material for cell culture containing a synthetic resin. The zeta potential of the resin film according to the present invention at pH 7.0 is −40 mV or more, and the dispersion term component of the surface free energy is 24.5 mJ / m 2 or more and 45 mJ / m 2 or less.
本発明に係る樹脂膜では、ゼータ電位及び表面自由エネルギーの分散項成分が上記特定の範囲にあるため、細胞の培養に際し、細胞塊の収縮が生じ難く、細胞の伸展性を高めることができる。以下、これを説明する。 In the resin film according to the present invention, since the dispersion term components of the zeta potential and the surface free energy are in the above-mentioned specific ranges, the cell mass is less likely to contract during cell culture, and the extensibility of the cells can be enhanced. This will be described below.
（ゼータ電位）
本発明に係る樹脂膜のゼータ電位は、樹脂膜を溶液中に配置した場合、界面である樹脂膜の表面と、樹脂膜の表面から十分に離れた溶液中のバルク部分との電位差である。ゼータ電位は、測定対象物の形状に応じて、流動電位法、電気泳動法、電気浸透法等の方法を適宜選択し求めることができる。
(Zeta potential)
The zeta potential of the resin film according to the present invention is the potential difference between the surface of the resin film, which is an interface, and the bulk portion in the solution sufficiently separated from the surface of the resin film when the resin film is placed in the solution. The zeta potential can be obtained by appropriately selecting a method such as a flow potential method, an electrophoresis method, or an electroosmosis method according to the shape of the object to be measured.
例えば、測定対象物が膜である場合は、流動電位法により測定することができる。また、測定対象物が繊維である場合、粒子である場合は電気浸透法により測定することができる。 For example, when the object to be measured is a membrane, it can be measured by the flow potential method. Further, when the object to be measured is a fiber or a particle, it can be measured by an electroosmosis method.
したがって、本発明に係る樹脂膜のゼータ電位は、流動電位法により測定されたゼータ電位であることが好ましい。流動電位法は、例えば、アントンパール社製ゼータ電位測定機器により測定することができる。具体的には、ＫＣｌ希薄溶液中にて、後述の実施例に記載された方法により測定することができる。電気泳動法としては、例えば、ゼータ電位・粒径・分子量測定システム（大塚電子社製）を用いて、水中で光散乱することにより、測定する方法が挙げられる。 Therefore, the zeta potential of the resin film according to the present invention is preferably the zeta potential measured by the flow potential method. The flow potential method can be measured by, for example, a zeta potential measuring device manufactured by Anton Pearl Co., Ltd. Specifically, it can be measured in a diluted solution of KCl by the method described in Examples described later. Examples of the electrophoresis method include a method of measuring by light scattering in water using a zeta potential / particle size / molecular weight measurement system (manufactured by Otsuka Electronics Co., Ltd.).
本発明に係る樹脂膜では、ｐＨ７．０におけるゼータ電位が、−４０ｍＶ以上であるので、細胞の伸展性を高めることができる。 In the resin film according to the present invention, since the zeta potential at pH 7.0 is −40 mV or more, the extensibility of cells can be enhanced.
細胞の伸展性の評価は、シェイプファクター（ＳＦ）を求めることにより評価することができる。 The extensibility of cells can be evaluated by determining the shape factor (SF).
ここで、シェイプファクター（ＳＦ）とは、細胞を培養した後の細胞塊の平面視における領域の形状評価係数であり、ＳＦ＝４×π×(細胞塊の平面積)／（細胞塊の外周縁の長さ）２で求められる。 Here, the shape factor (SF) is a shape evaluation coefficient of a region in a plan view of the cell mass after culturing the cell, and SF = 4 × π × (flat area of the cell mass) / (outside the cell mass). Peripheral length) Obtained by 2 .
図２に示すように、上記ＳＦが１であれば、細胞塊の平面形状は円形となる。ＳＦが小さくなるほど、円から遠ざかり、細胞塊の収縮が生じ難く、かつ細胞の伸展性が高くなる。例えば、図２に示す星形形状の場合、ＳＦは０．３であり、ＳＦ＝１の円の場合よりも伸展性に優れているといえる。 As shown in FIG. 2, when the SF is 1, the planar shape of the cell mass is circular. The smaller the SF, the farther away from the circle, the less likely it is that the cell mass contracts, and the higher the extensibility of the cell. For example, in the case of the star shape shown in FIG. 2, the SF is 0.3, which can be said to be superior to the case of the circle with SF = 1.
本発明では、上記ゼータ電位が−４０ｍＶ以上であるため、上記ＳＦ値を小さくすることができ、細胞の伸展性を高めることができる。上記樹脂膜のｐＨ７．０におけるゼータ電位は、好ましくは−３５ｍＶ以上、より好ましくは−３０ｍＶ以上、さらに好ましくは−２５ｍＶ以上、特に好ましくは−２０ｍＶ以上であり、好ましくは＋３０ｍＶ以下、より好ましくは＋３０ｍＶ未満、さらに好ましくは＋２５ｍＶ未満、特に好ましくは＋２０ｍＶ未満である。この場合には、ＳＦ値をより一層小さくすることができ、細胞の伸展性をより一層高めることができる。 In the present invention, since the zeta potential is −40 mV or more, the SF value can be reduced and the extensibility of cells can be enhanced. The zeta potential of the resin film at pH 7.0 is preferably −35 mV or higher, more preferably -30 mV or higher, further preferably -25 mV or higher, particularly preferably -20 mV or higher, preferably + 30 mV or lower, more preferably + 30 mV or higher. Less than, more preferably less than +25 mV, particularly preferably less than +20 mV. In this case, the SF value can be further reduced, and the extensibility of the cells can be further enhanced.
上記ゼータ電位は、上記合成樹脂においてアミノ基等のカチオン性官能基の含有量を増やすことにより、高めることができる。また、上記ゼータ電位は、上記合成樹脂においてカルボキシル基等のアニオン性官能基の含有量を増やすことにより、低くすることができる。 The zeta potential can be increased by increasing the content of a cationic functional group such as an amino group in the synthetic resin. Further, the zeta potential can be lowered by increasing the content of an anionic functional group such as a carboxyl group in the synthetic resin.
（表面自由エネルギー）
細胞塊の収縮を抑え、細胞の伸展性を高める観点から、本発明に係る樹脂膜の表面自由エネルギーの分散項成分は、２４．５ｍＪ／ｍ２以上、４５ｍＪ／ｍ２以下である。上記分散項成分は、２９．０ｍＪ／ｍ２以上、４５．０ｍＪ／ｍ２未満であることが好ましく、３０．０ｍＪ／ｍ２以上、３６．０ｍＪ／ｍ２未満であることがより好ましい。この場合には、細胞塊の収縮をより一層抑え、細胞の伸展性をより一層高めることができる。
(Surface free energy)
From the viewpoint of suppressing the contraction of the cell mass and enhancing the extensibility of the cells, the dispersion term component of the surface free energy of the resin film according to the present invention is 24.5 mJ / m 2 or more and 45 mJ / m 2 or less. The dispersion term component, 29.0mJ / m 2 or more, preferably less than 45.0mJ / m 2, 30.0mJ / m 2 or more, and more preferably less than 36.0mJ / m 2. In this case, the contraction of the cell mass can be further suppressed and the extensibility of the cell can be further enhanced.
本発明に係る樹脂膜の表面自由エネルギーの極性項成分は、１ｍＪ／ｍ２以上、２０ｍＪ／ｍ２以下であることが好ましく、１．０ｍＪ／ｍ２以上、１０．０ｍＪ／ｍ２未満であることがより好ましく、１．５ｍＪ／ｍ２以上、６．０ｍＪ／ｍ２未満であることがさらに好ましい。この場合には、細胞塊の収縮をより一層抑え、細胞の伸展性をより一層高めることができる。 Polar term component of the surface free energy of the resin film according to the present invention, 1 mJ / m 2 or more, preferably 20 mJ / m 2 or less, 1.0 mJ / m 2 or more, is less than 10.0 mJ / m 2 more preferably, 1.5 mJ / m 2 or more, and more preferably less than 6.0 mJ / m 2. In this case, the contraction of the cell mass can be further suppressed and the extensibility of the cell can be further enhanced.
なお、上記表面自由エネルギーの分散項成分γｄ及び極性項成分である双極子成分γｐは、Ｋａｅｌｂｌｅ−Ｕｙの理論式を用いて算出される。Ｋａｅｌｂｌｅ−Ｕｙの理論式は、下記式（１）で示されるように、トータル表面自由エネルギーγが、分散項成分γｄと双極子成分γｐとの和になるとの仮定に基づく理論式である。 The dispersion term component γ d of the surface free energy and the dipole component γ p, which is a polar term component, are calculated using the theoretical formula of Kaelble-Uy. The Kaelble-Uy theoretical formula is a theoretical formula based on the assumption that the total surface free energy γ is the sum of the dispersion term component γ d and the dipole component γ p , as shown by the following formula (1). ..
また、Ｋａｅｌｂｌｅ−Ｕｙの理論式では、液体の表面自由エネルギーをγｌ（ｍＪ／ｍ２）とし、固体の表面自由エネルギーをγｓ（ｍＪ／ｍ２）とし、接触角をθ（°）とすると、下記式（２）が成立する。 In the Kaelble-Uy theoretical formula, the surface free energy of the liquid is γ l (mJ / m 2 ), the surface free energy of the solid is γ s (mJ / m 2 ), and the contact angle is θ (°). Then, the following equation (2) is established.
したがって、液体の表面自由エネルギーγｌが既知である液体を２種類用いて、上記樹脂膜に対するそれぞれの接触角θを測定し、γｓ ｄ及びγｓ ｐの連立方程式を解くことにより、上記樹脂膜の表面自由エネルギーの分散項成分γｄ及び双極子成分γｐを求めることができる。 Thus, the liquid surface free energy gamma l of liquid is known using two, measuring the respective contact angle θ with respect to the resin film, by solving the simultaneous equations of gamma s d and gamma s p, the resin The dispersion term component γ d and the dipole component γ p of the surface free energy of the film can be obtained.
なお、本明細書においては、上記表面自由エネルギーγｌが既知である２種類の上記液体として、純水及びジヨードメタンが用いられている。 In this specification, pure water and diiodomethane are used as the two types of liquids whose surface free energy γ l is known.
上記接触角θは、接触角計（例えば、協和界面科学社製「ＤＭｏ−７０１」）を用いて、以下のようにして測定される。 The contact angle θ is measured as follows using a contact angle meter (for example, “DMo-701” manufactured by Kyowa Interface Science Co., Ltd.).
上記樹脂膜の表面に、純水又はジヨードメタンを１μＬ滴下する。滴下してから３０秒後の純水と、該樹脂膜とのなす角度を、純水に対する接触角θとする。また、同様に、滴下してから３０秒後のジヨードメタンと、該樹脂膜とのなす角度を、ジヨードメタンに対する接触角θとする。 1 μL of pure water or diiodomethane is added dropwise to the surface of the resin film. The angle formed by the pure water 30 seconds after the dropping and the resin film is defined as the contact angle θ with respect to the pure water. Similarly, the angle formed by the diiodomethane 30 seconds after the dropping and the resin film is defined as the contact angle θ with respect to the diiodomethane.
合成樹脂における疎水性官能基の含有率を高くしたり、環状構造を有する官能基の含有率を高くしたり、ブチル基の含有率を少なくしたりすることにより、上記表面自由エネルギーの分散項成分γｄを小さくすることができる。また、合成樹脂における親水性官能基の含有率を高くしたり、ブチル基の含有率を高くしたりすることにより、上記表面自由エネルギーの双極子成分γｐを小さくすることができる。 By increasing the content of hydrophobic functional groups in the synthetic resin, increasing the content of functional groups having a cyclic structure, and decreasing the content of butyl groups, the dispersion term component of the surface free energy is described. γ d can be reduced. Further, by increasing the content of hydrophilic functional groups in the synthetic resin or increasing the content of butyl groups, the dipole component γ p of the surface free energy can be reduced.
（貯蔵弾性率）
上記樹脂膜の１００℃における貯蔵弾性率は、好ましくは０．６×１０４Ｐａ以上、より好ましくは０．８×１０４Ｐａ以上、さらに好ましくは１．０×１０４Ｐａ以上、好ましくは１．０×１０８Ｐａ以下、より好ましくは０．８×１０８Ｐａ以下、さらに好ましくは１．０×１０７Ｐａ以下である。
(Storage modulus)
The storage elastic modulus of the resin film at 100 ° C. is preferably 0.6 × 10 4 Pa or more, more preferably 0.8 × 10 4 Pa or more, still more preferably 1.0 × 10 4 Pa or more, preferably 1 .0 × 10 8 Pa or less, more preferably 0.8 × 10 8 Pa or less, more preferably 1.0 × 10 7 Pa or less.
上記樹脂膜の２５℃における貯蔵弾性率と１００℃における貯蔵弾性率との比（（２５℃における貯蔵弾性率）／（１００℃における貯蔵弾性率））は、好ましくは１．０×１０以上、より好ましくは５．０×１０１以上、さらに好ましくは８．０×１０２以上、好ましくは１．０×１０５以下、より好ましくは０．７５×１０５以下、さらに好ましくは０．５×１０５以下である。上記比を上記範囲内とすることにより、播種後の細胞の定着性をより一層高めることができる。 The ratio of the storage elastic modulus at 25 ° C. to the storage elastic modulus at 100 ° C. ((storage elastic modulus at 25 ° C.) / (storage elastic modulus at 100 ° C.)) of the resin film is preferably 1.0 × 10 or more. more preferably 5.0 × 10 1 or more, more preferably 8.0 × 10 2 or more, preferably 1.0 × 10 5 or less, more preferably 0.75 × 10 5 or less, more preferably 0.5 × It is 105 or less. By setting the above ratio within the above range, the colonization of cells after seeding can be further enhanced.
２５℃及び１００℃における貯蔵弾性率は、例えば、動的粘弾性測定装置（アイティー計測制御社製、ＤＶＡ−２００）を用いて、引張条件下、周波数１０Ｈｚ、ひずみ０．１％、温度範囲−１５０℃〜１５０℃、及び昇温速度５℃／分の測定条件で測定することにより求めることができる。得られた引張貯蔵弾性率のグラフから２５℃及び１００℃における貯蔵弾性率を求め、また、比（２５℃における貯蔵弾性率／１００℃における貯蔵弾性率）を算出する。なお、測定サンプルは、長さ５０ｍｍ、幅５ｍｍ〜２０ｍｍ、厚み０．１ｍｍ〜１．０ｍｍのサイズとする。 The storage elastic modulus at 25 ° C. and 100 ° C. is, for example, using a dynamic viscoelasticity measuring device (manufactured by IT Measurement Control Co., Ltd., DVA-200) under tensile conditions, frequency 10 Hz, strain 0.1%, temperature range. It can be obtained by measuring under the measurement conditions of −150 ° C. to 150 ° C. and a heating rate of 5 ° C./min. From the graph of the obtained tensile storage elastic modulus, the storage elastic modulus at 25 ° C. and 100 ° C. is obtained, and the ratio (storage elastic modulus at 25 ° C./storage elastic modulus at 100 ° C.) is calculated. The measurement sample has a length of 50 mm, a width of 5 mm to 20 mm, and a thickness of 0.1 mm to 1.0 mm.
上記２５℃及び１００℃における貯蔵弾性率は、例えば、上記合成樹脂における架橋度を高めること、上記合成樹脂を延伸すること等により、高めることができる。また、上記２５℃及び１００℃における貯蔵弾性率は、上記合成樹脂において数平均分子量を下げること、ガラス転移温度を下げること等により、低くすることができる。 The storage elastic modulus at 25 ° C. and 100 ° C. can be increased, for example, by increasing the degree of cross-linking in the synthetic resin, stretching the synthetic resin, or the like. Further, the storage elastic modulus at 25 ° C. and 100 ° C. can be lowered by lowering the number average molecular weight of the synthetic resin, lowering the glass transition temperature, and the like.
（水膨潤倍率）
上記樹脂膜の水膨潤倍率は、好ましくは５０％以下、より好ましくは４０％以下、さらに好ましくは３０％以下、特に好ましくは２０％以下である。この場合には、細胞塊の収縮をより一層抑え、細胞の伸展性をより一層高めることができ、播種後の細胞の定着性をより一層高めることができる。
(Water swelling ratio)
The water swelling ratio of the resin film is preferably 50% or less, more preferably 40% or less, still more preferably 30% or less, and particularly preferably 20% or less. In this case, the contraction of the cell mass can be further suppressed, the extensibility of the cells can be further enhanced, and the colonization of the cells after seeding can be further enhanced.
水膨潤倍率は、以下のようにして測定することができる。例えば、長さ５０ｍｍ、幅１０ｍｍ、厚み０．０５ｍｍ〜０．１５ｍｍの細胞培養用足場材料からなる樹脂膜（測定サンプル）を、２５℃の水に２４時間浸漬する。浸漬前と後のサンプルの重さを測定し、水膨潤倍率＝（浸漬後のサンプル重量−浸漬前のサンプル重量）／（浸漬前のサンプル重量）×１００（％）を算出する。 The water swelling ratio can be measured as follows. For example, a resin membrane (measurement sample) made of a cell culture scaffold material having a length of 50 mm, a width of 10 mm, and a thickness of 0.05 mm to 0.15 mm is immersed in water at 25 ° C. for 24 hours. The weights of the samples before and after immersion are measured, and the water swelling ratio = (sample weight after immersion-sample weight before immersion) / (sample weight before immersion) × 100 (%) is calculated.
上記水膨潤倍率は、例えば、上記合成樹脂の疎水性官能基を増やすこと、数平均分子量を下げること等により、小さくできる。 The water swelling ratio can be reduced, for example, by increasing the hydrophobic functional groups of the synthetic resin, lowering the number average molecular weight, and the like.
［合成樹脂］
細胞培養用足場材料が含有している上記合成樹脂（以下、合成樹脂Ｘと記載することがある）としては、上記特定のゼータ電位及び上記特定の範囲の表面自由エネルギーを有する限り、特に限定されるものではない。なお、本明細書において、「構造単位」とは、合成樹脂Ｘを構成するモノマーの繰り返し単位をいう。なお、合成樹脂Ｘがグラフト鎖を有する場合は、そのグラフト鎖を構成するモノマーの繰り返し単位を含む。
[Synthetic resin]
The synthetic resin (hereinafter, may be referred to as synthetic resin X) contained in the scaffold material for cell culture is particularly limited as long as it has the specific zeta potential and the surface free energy in the specific range. It's not something. In the present specification, the "structural unit" means a repeating unit of the monomer constituting the synthetic resin X. When the synthetic resin X has a graft chain, it contains a repeating unit of the monomers constituting the graft chain.
合成樹脂Ｘは、構成単位中にブレンステッド塩基性基を、０．２モル％以上で含むことが好ましく、２モル％以上で含むことがより好ましく、３０モル％以下で含むことが好ましく、２０モル％以下で含むことがより好ましく、１５モル％以下で含むことがさらに好ましい。この場合には、本発明の効果をより一層効果的に発揮することができる。なお、ブレンステッド塩基性基等については、後述する。 The synthetic resin X preferably contains a Bronsted basic group in a constituent unit in an amount of 0.2 mol% or more, more preferably 2 mol% or more, and preferably 30 mol% or less. It is more preferably contained in an amount of mol% or less, and further preferably contained in an amount of 15 mol% or less. In this case, the effect of the present invention can be exhibited even more effectively. The Bronsted basic group and the like will be described later.
（ビニル重合体）
合成樹脂Ｘは、ビニル重合体を含むことが好ましく、ビニル重合体であることがより好ましい。なお、ビニル重合体とは、ビニル基又はビニリデン基を有する化合物の重合体である。上記合成樹脂Ｘがビニル重合体である場合、水中における細胞培養用足場材料の膨潤をより抑制しやすくすることができる。ビニル重合体としては、例えば、ポリビニルアルコール誘導体、ポリ（メタ）アクリル酸エステル、ポリビニルピロリドン、ポリスチレン、エチレン・酢酸ビニル共重合体等が挙げられる。ビニル重合体は、細胞との接着性をより高める観点から、ポリビニルアルコール誘導体又はポリ（メタ）アクリル酸エステルであることが好ましい。上記合成樹脂Ｘは、少なくともポリビニルアルコール誘導体又はポリ（メタ）アクリル酸エステルを含むことが好ましい。上記合成樹脂Ｘは、ポリビニルアルコール誘導体であることが好ましく、ポリ（メタ）アクリル酸エステルであることも好ましい。
(Vinyl polymer)
The synthetic resin X preferably contains a vinyl polymer, and more preferably a vinyl polymer. The vinyl polymer is a polymer of a compound having a vinyl group or a vinylidene group. When the synthetic resin X is a vinyl polymer, it is possible to more easily suppress the swelling of the scaffold material for cell culture in water. Examples of the vinyl polymer include polyvinyl alcohol derivatives, poly (meth) acrylic acid esters, polyvinylpyrrolidone, polystyrene, ethylene-vinyl acetate copolymers and the like. The vinyl polymer is preferably a polyvinyl alcohol derivative or a poly (meth) acrylic acid ester from the viewpoint of further enhancing the adhesiveness to cells. The synthetic resin X preferably contains at least a polyvinyl alcohol derivative or a poly (meth) acrylic acid ester. The synthetic resin X is preferably a polyvinyl alcohol derivative, and is also preferably a poly (meth) acrylic acid ester.
（ポリビニルアセタール骨格を有する合成樹脂Ｘ）
細胞培養用足場材料は、ポリビニルアセタール骨格を有する合成樹脂Ｘを含むことが好ましい。上記合成樹脂Ｘは、ポリビニルアセタール骨格を有する合成樹脂を含むことが好ましく、ポリビニルアセタール骨格を有する合成樹脂であることがより好ましい。
(Synthetic resin X having a polyvinyl acetal skeleton)
The scaffold material for cell culture preferably contains a synthetic resin X having a polyvinyl acetal skeleton. The synthetic resin X preferably contains a synthetic resin having a polyvinyl acetal skeleton, and more preferably a synthetic resin having a polyvinyl acetal skeleton.
本明細書において、「ポリビニルアセタール骨格を有する合成樹脂Ｘ」を、「ポリビニルアセタール樹脂Ｘ」と記載することがある。 In the present specification, "synthetic resin X having a polyvinyl acetal skeleton" may be referred to as "polyvinyl acetal resin X".
ポリビニルアセタール樹脂Ｘは、側鎖にアセタール基と、アセチル基と、水酸基とを有する。 The polyvinyl acetal resin X has an acetal group, an acetyl group, and a hydroxyl group in the side chain.
ポリビニルアセタール樹脂Ｘを合成する際には、ポリビニルアルコールをアルデヒドによりアセタール化する工程を少なくとも備える。 When synthesizing the polyvinyl acetal resin X, at least a step of acetalizing polyvinyl alcohol with an aldehyde is provided.
ポリビニルアセタール樹脂Ｘを得るためのポリビニルアルコールのアセタール化に用いられるアルデヒドは、特に限定されない。アルデヒドとしては、例えば、炭素数が１〜１０のアルデヒドが挙げられる。アルデヒドは、鎖状脂肪族基、環状脂肪族基又は芳香族基を有していてもよい。アルデヒドは、鎖状アルデヒドであってもよく、環状アルデヒドであってもよい。 The aldehyde used for acetalizing polyvinyl alcohol for obtaining the polyvinyl acetal resin X is not particularly limited. Examples of the aldehyde include aldehydes having 1 to 10 carbon atoms. The aldehyde may have a chain aliphatic group, a cyclic aliphatic group or an aromatic group. The aldehyde may be a chain aldehyde or a cyclic aldehyde.
上記アルデヒドとしては、ホルムアルデヒド、アセトアルデヒド、プロピオンアルデヒド、ブチルアルデヒド、ペンタナール、ヘキサナール、ヘプタナール、オクタナール、ノナナール、デカナール、アクロレイン、ベンズアルデヒド、シンナムアルデヒド、ペリルアルデヒド、ホルミルピリジン、ホルミルイミダゾール、ホルミルピロール、ホルミルピペリジン、ホルミルトリアゾール、ホルミルテトラゾール、ホルミルインドール、ホルミルイソインドール、ホルミルプリン、ホルミルベンゾイミダゾール、ホルミルベンゾトリアゾール、ホルミルキノリン、ホルミルイソキノリン、ホルミルキノキサリン、ホルミルシンノリン、ホルミルプテリジン、ホルミルフラン、ホルミルオキソラン、ホルミルオキサン、ホルミルチオフェン、ホルミルチオラン、ホルミルチアン、ホルミルアデニン、ホルミルグアニン、ホルミルシトシン、ホルミルチミン、及びホルミルウラシル等が挙げられる。上記アルデヒドは、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。 Examples of the above aldehydes include formaldehyde, acetaldehyde, propionaldehyde, butylaldehyde, pentanal, hexanal, heptanal, octanal, nonanal, decanal, achlorine, benzaldehyde, cinnamaldehyde, perylaldehyde, formylpyridine, formylimidazole, formylpyrrole, formylpiperidin, formyl. Triazole, formyltetrazole, formylindole, formylisoindole, formylpurine, formylbenzoimidazole, formylbenzotriazole, formylquinoline, formylisoquinolin, formylquinoxalin, formylcinnoline, formylpteridine, formylfuran, formyloxolane, formyloxane, Examples thereof include formylthiophene, formylthiolan, formyltian, formyladenine, formylguanine, formylcitosine, formyltimine, and formyluracil. Only one kind of the above aldehyde may be used, or two or more kinds may be used in combination.
アルデヒドは、ホルムアルデヒド、アセトアルデヒド、プロピオンアルデヒド、ブチルアルデヒド、又はペンタナールであることが好ましく、ブチルアルデヒドであることがより好ましい。したがって、ポリビニルアセタール骨格は、ポリビニルブチラール骨格であることが好ましい。ポリビニルアセタール樹脂Ｘは、ポリビニルブチラール樹脂であることが好ましい。 The aldehyde is preferably formaldehyde, acetaldehyde, propionaldehyde, butyraldehyde, or pentanal, and more preferably butyraldehyde. Therefore, the polyvinyl acetal skeleton is preferably a polyvinyl butyral skeleton. The polyvinyl acetal resin X is preferably a polyvinyl butyral resin.
ポリビニルアセタール樹脂Ｘには、ビニル化合物が共重合されていてもよい。すなわち、ポリビニルアセタール樹脂Ｘは、ポリビニルアセタール樹脂の構造単位とビニル化合物との共重合体であってもよい。本発明では、ビニル化合物と共重合したポリビニルアセタール樹脂も、ポリビニルアセタール樹脂というものとする。 A vinyl compound may be copolymerized with the polyvinyl acetal resin X. That is, the polyvinyl acetal resin X may be a copolymer of a structural unit of the polyvinyl acetal resin and a vinyl compound. In the present invention, the polyvinyl acetal resin copolymerized with the vinyl compound is also referred to as a polyvinyl acetal resin.
ビニル化合物は、ビニル基（Ｈ２Ｃ＝ＣＨ−）を有する化合物である。ビニル化合物は、ビニル基を有する構造単位を有する重合体であってもよい。 The vinyl compound is a compound having a vinyl group (H 2 C = CH−). The vinyl compound may be a polymer having a structural unit having a vinyl group.
上記共重合体は、ポリビニルアセタール樹脂とビニル化合物とのブロック共重合体であってもよく、ポリビニルアセタール樹脂にビニル化合物がグラフトしたグラフト共重合体であってもよい。上記共重合体は、グラフト共重合体であることが好ましい。 The copolymer may be a block copolymer of a polyvinyl acetal resin and a vinyl compound, or may be a graft copolymer obtained by grafting a vinyl compound on the polyvinyl acetal resin. The copolymer is preferably a graft copolymer.
ビニル化合物としては、エチレン、アリルアミン、ビニルピロリドン、ビニルイミダゾール、無水マレイン酸、マレイミド、イタコン酸、（メタ）アクリル酸、ビニルアミン及、又は（メタ）アクリル酸エステル等が挙げられる。これらのビニル化合物は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。 Examples of the vinyl compound include ethylene, allylamine, vinylpyrrolidone, vinylimidazole, maleic anhydride, maleimide, itaconic acid, (meth) acrylic acid, vinylamine, and (meth) acrylic acid ester. Only one kind of these vinyl compounds may be used, or two or more kinds may be used in combination.
細胞の接着性をより一層高める観点からは、ポリビニルアセタール樹脂Ｘは、ブレンステッド塩基性基又はブレンステッド酸性基を有することが好ましく、ブレンステッド塩基性基を有することがより好ましい。すなわち、ポリビニルアセタール樹脂Ｘの一部がブレンステッド塩基性基又はブレンステッド酸性基により変性されていることが好ましく、ポリビニルアセタール樹脂Ｘの一部がブレンステッド塩基性基で変性されていることがより好ましい。 From the viewpoint of further enhancing the adhesiveness of cells, the polyvinyl acetal resin X preferably has a Bronsted basic group or a Bronsted acidic group, and more preferably has a Bronsted basic group. That is, it is preferable that a part of the polyvinyl acetal resin X is modified with a Bronsted basic group or a Bronsted acidic group, and a part of the polyvinyl acetal resin X is modified with a Bronsted basic group. preferable.
ポリビニルアセタール樹脂Ｘは、ブレンステッド塩基性基又はブレンステッド酸性基を有することが好ましく、ブレンステッド塩基性基を有することがより好ましい。その場合には、細胞の伸展性をより一層高めることができる。このブレンステッド塩基性基又はブレンステッド酸性基は、ポリビニルアセタール樹脂Ｘの一部に有しておればよく、その場合、ブレンステッド塩基性基又はブレンステッド酸性基を有するモノマーが共重合されていてもよく、グラフトをされていてもよい。上記ブレンステッド塩基性基による変性度は、好ましくは０．２モル％以上、より好ましくは２モル％以上、好ましくは３０モル％以下、より好ましくは２０モル％以下、さらに好ましくは１５モル％以下である。ブレンステッド塩基性基による変性度が上記特定の範囲内であれば、細胞の伸展性より一層高めることができる。 The polyvinyl acetal resin X preferably has a Bronsted basic group or a Bronsted acidic group, and more preferably has a Bronsted basic group. In that case, the extensibility of the cells can be further enhanced. The Bronsted basic group or Bronsted acidic group may be present in a part of the polyvinyl acetal resin X, in which case the monomer having the Bronsted basic group or Bronsted acidic group is copolymerized. It may be grafted. The degree of modification by the Bronsted basic group is preferably 0.2 mol% or more, more preferably 2 mol% or more, preferably 30 mol% or less, more preferably 20 mol% or less, still more preferably 15 mol% or less. Is. If the degree of denaturation by the Bronsted basic group is within the above-mentioned specific range, the extensibility of the cell can be further enhanced.
上記ブレンステッド塩基性基としては、イミン構造を有する置換基、イミド構造を有する置換基、アミン構造を有する置換基、及びアミド構造を有する置換基等のアミン系塩基性基が挙げられる。例えば、特に限定されないが、ヒドロキシアミノ基、ウレア基、グアニジン、ビグアニド等の共役アミン系官能基、ピペラジン、ピペリジン、ピロリジン、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン、ヘキサメチレンテトラアミン、モルホリン、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、ピロール、アザトロピリデン、ピリドン、イミダゾール、ベンゾイミダゾール、ベンゾトリアゾール、ピラゾール、オキサゾール、イミダゾリン、トリアゾール、チアゾール、チアジン、テトラゾール、インドール、イソインドール、プリン、キノリン、イソキノリン、キナゾリン、キノキサリン、シンノリン、プテリジン、カルバゾール、アクリジン、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル、メラミン等のヘテロ環アミノ系官能基、ポルフィリン、クロリン、コリン等の環状ピロール系官能基及びそれらの誘導体等が挙げられる。 Examples of the blended basic group include amine-based basic groups such as a substituent having an imine structure, a substituent having an imide structure, a substituent having an amine structure, and a substituent having an amide structure. For example, without particular limitation, conjugated amine-based functional groups such as hydroxyamino group, urea group, guanidine, biguanide, piperazine, piperidine, pyrrolidine, 1,4-diazabicyclo [2.2.2] octane, hexamethylenetetraamine, Morpholine, pyridine, pyridazine, pyrimidine, pyrazine, pyrrole, azatropylidene, pyridone, imidazole, benzoimidazole, benzotriazole, pyrazole, oxazole, imidazoline, triazole, thiazole, thiazine, tetrazole, indol, isoindole, purine, quinoline, isoquinoline, quinazoline , Heterocyclic amino functional groups such as quinoxalin, cinnoline, pteridine, carbazole, acrydin, adenine, guanine, cytosine, timine, uracil, melamine, cyclic pyrrole functional groups such as porphyrin, chlorin, choline and derivatives thereof. Be done.
ブレンステッド酸性基としては、カルボキシル基、スルホン酸基、マレイン酸基、スルフィン酸基、スルフェン酸基、リン酸基、ホスホン酸基、又はこれらの塩等が挙げられる。ブレンステッド酸性基は、カルボキシル基であることが好ましい。 Examples of the blended acidic group include a carboxyl group, a sulfonic acid group, a maleic acid group, a sulfinic acid group, a sulfinic acid group, a phosphoric acid group, a phosphonic acid group, and salts thereof. The Bronsted acidic group is preferably a carboxyl group.
ポリビニルアセタール樹脂Ｘは、イミン構造を有する構造単位、イミド構造を有する構造単位、アミン構造を有する構造単位、又はアミド構造を有する構造単位を有することが好ましく、イミン構造を有する構造単位、又はアミン構造を有する構造単位を有することがより好ましい。この場合、これらの構造単位のうちの１種のみを有していてもよく、２種以上を有していてもよい。 The polyvinyl acetal resin X preferably has a structural unit having an imine structure, a structural unit having an imide structure, a structural unit having an amine structure, or a structural unit having an amide structure, and has a structural unit having an imine structure or an amine structure. It is more preferable to have a structural unit having. In this case, it may have only one kind of these structural units, or may have two or more kinds.
ポリビニルアセタール樹脂Ｘは、イミン構造を有する構造単位を有していてもよい。イミン構造とは、Ｃ＝Ｎ結合を有する構造をいう。特に、ポリビニルアセタール樹脂Ｘは、イミン構造を側鎖に有することが好ましい。 The polyvinyl acetal resin X may have a structural unit having an imine structure. The imine structure refers to a structure having a C = N bond. In particular, the polyvinyl acetal resin X preferably has an imine structure in the side chain.
ポリビニルアセタール樹脂Ｘは、イミド構造を有する構造単位を有していてもよい。イミド構造を有する構造単位は、イミノ基（＝ＮＨ）を有する構造単位であることが好ましい。 The polyvinyl acetal resin X may have a structural unit having an imide structure. The structural unit having an imide structure is preferably a structural unit having an imino group (= NH).
ポリビニルアセタール樹脂Ｘは、イミノ基を側鎖に有することが好ましい。この場合、イミノ基は、ポリビニルアセタール樹脂Ｘの主鎖を構成する炭素原子に直接結合していてもよく、アルキレン基等の連結基を介して主鎖に結合していてもよい。 The polyvinyl acetal resin X preferably has an imino group in the side chain. In this case, the imino group may be directly bonded to the carbon atom constituting the main chain of the polyvinyl acetal resin X, or may be bonded to the main chain via a linking group such as an alkylene group.
ポリビニルアセタール樹脂Ｘは、アミン構造を有する構造単位を有していてもよい。上記アミン構造におけるアミン基は、第一級アミン基であってもよく、第二級アミン基であってもよく、第三級アミン基であってもよく、第四級アミン基であってもよい。 The polyvinyl acetal resin X may have a structural unit having an amine structure. The amine group in the above amine structure may be a primary amine group, a secondary amine group, a tertiary amine group, or a quaternary amine group. Good.
アミン構造を有する構造単位は、アミド構造を有する構造単位であってもよい。上記アミド構造とは、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−を有する構造をいう。 The structural unit having an amine structure may be a structural unit having an amide structure. The amide structure refers to a structure having -C (= O) -NH-.
ポリビニルアセタール樹脂Ｘは、アミン構造又はイミン構造を側鎖に有することが好ましい。この場合、アミン構造又はイミン構造は、ポリビニルアセタール樹脂Ｘの主鎖を構成する炭素原子に直接結合していてもよく、アルキレン基等の連結基を介して主鎖に結合していてもよい。 The polyvinyl acetal resin X preferably has an amine structure or an imine structure in the side chain. In this case, the amine structure or the imine structure may be directly bonded to the carbon atom constituting the main chain of the polyvinyl acetal resin X, or may be bonded to the main chain via a linking group such as an alkylene group.
なお、イミン構造を有する構造単位の含有率、イミド構造を有する構造単位の含有率、アミン構造を有する構造単位の含有率、アミド構造を有する構造単位の含有率は、１Ｈ−ＮＭＲ（核磁気共鳴スペクトル）により測定することができる。 The content of structural units having an imine structure, the content of structural units having an imide structure, the content of structural units having an amine structure, and the content of structural units having an amide structure are 1 H-NMR (nuclear magnetism). It can be measured by the resonance spectrum).
（ポリ（メタ）アクリル酸エステル骨格を有する合成樹脂Ｘ）
細胞培養用足場材料は、ポリ（メタ）アクリル酸エステル骨格を有する合成樹脂Ｘを含むことが好ましい。上記合成樹脂Ｘは、ポリ（メタ）アクリル酸エステル骨格を有する合成樹脂を含むことが好ましく、ポリ（メタ）アクリル酸エステル骨格を有する合成樹脂であることがより好ましい。
(Synthetic resin X having a poly (meth) acrylic acid ester skeleton)
The scaffold material for cell culture preferably contains a synthetic resin X having a poly (meth) acrylic acid ester skeleton. The synthetic resin X preferably contains a synthetic resin having a poly (meth) acrylic acid ester skeleton, and more preferably a synthetic resin having a poly (meth) acrylic acid ester skeleton.
本明細書において、「ポリ（メタ）アクリル酸エステル骨格を有する合成樹脂Ｘ」を、「ポリ（メタ）アクリル酸エステル樹脂Ｘ」と記載することがある。 In the present specification, "synthetic resin X having a poly (meth) acrylic acid ester skeleton" may be referred to as "poly (meth) acrylic acid ester resin X".
従って、ポリ（メタ）アクリル酸エステル樹脂Ｘは、ポリ（メタ）アクリル酸エステル骨格を有する樹脂である。 Therefore, the poly (meth) acrylic acid ester resin X is a resin having a poly (meth) acrylic acid ester skeleton.
ポリ（メタ）アクリル酸エステル樹脂Ｘは、（メタ）アクリル酸エステルの重合により、あるいは、（メタ）アクリル酸エステルと、他のモノマーとの共重合により得られる。 The poly (meth) acrylic acid ester resin X is obtained by polymerizing the (meth) acrylic acid ester or by copolymerizing the (meth) acrylic acid ester with another monomer.
（メタ）アクリル酸エステルとしては、（メタ）アクリル酸アルキルエステル、（メタ）アクリル酸環状アルキルエステル、（メタ）アクリル酸アリールエステル、（メタ）アクリルアミド類、（メタ）アクリル酸ポリエチレングリコール類、（メタ）アクリル酸ホスホリルコリン等が挙げられる。 Examples of the (meth) acrylic acid ester include (meth) acrylic acid alkyl ester, (meth) acrylic acid cyclic alkyl ester, (meth) acrylic acid aryl ester, (meth) acrylamide, (meth) acrylic acid polyethylene glycol, and ( Meta) Phosphorylcholine acrylate and the like can be mentioned.
（メタ）アクリル酸アルキルエステルとしては、メチル（メタ）アクリレート、エチル（メタ）アクリレート、ｎ−プロピル（メタ）アクリレート、イソプロピル（メタ）アクリレート、ｎ−ブチル（メタ）アクリレート、イソブチル（メタ）アクリレート、ｔ−ブチル（メタ）アクリレート、ｎ−オクチル（メタ）アクリレート、イソオクチル（メタ）アクリレート、２−エチルヘキシル（メタ）アクリレート、ノニル（メタ）アクリレート、イソノニル（メタ）アクリレート、デシル（メタ）アクリレート、イソデシル（メタ）アクリレート、ラウリル（メタ）アクリレート、及びステアリル（メタ）アクリレート、イソテトラデシル（メタ）アクリレート等が挙げられる。 Examples of the (meth) acrylic acid alkyl ester include methyl (meth) acrylate, ethyl (meth) acrylate, n-propyl (meth) acrylate, isopropyl (meth) acrylate, n-butyl (meth) acrylate, and isobutyl (meth) acrylate. t-butyl (meth) acrylate, n-octyl (meth) acrylate, isooctyl (meth) acrylate, 2-ethylhexyl (meth) acrylate, nonyl (meth) acrylate, isononyl (meth) acrylate, decyl (meth) acrylate, isodecyl ( Examples thereof include meth) acrylate, lauryl (meth) acrylate, stearyl (meth) acrylate, and isotetradecyl (meth) acrylate.
なお、（メタ）アクリル酸アルキルエステルは、炭素数１〜３のアルコキシ基及びテトラヒドロフルフリル基等の置換基で置換されていてもよい。このような（メタ）アクリル酸アルキルエステルの例としては、メトキシエチルアクリレート、テトラヒドロフルフリルアクリレート等が挙げられる。 The (meth) acrylic acid alkyl ester may be substituted with a substituent such as an alkoxy group having 1 to 3 carbon atoms and a tetrahydrofurfuryl group. Examples of such (meth) acrylic acid alkyl esters include methoxyethyl acrylate and tetrahydrofurfuryl acrylate.
（メタ）アクリル酸環状アルキルエステルとしては、シクロヘキシル（メタ）アクリレート、及びイソボルニル（メタ）アクリレート等が挙げられる。 Examples of the (meth) acrylic acid cyclic alkyl ester include cyclohexyl (meth) acrylate and isobornyl (meth) acrylate.
（メタ）アクリル酸アリールエステルとしては、フェニル（メタ）アクリレート、及びベンジル（メタ）アクリレート等が挙げられる。 Examples of the (meth) acrylic acid aryl ester include phenyl (meth) acrylate and benzyl (meth) acrylate.
（メタ）アクリルアミド類としては、（メタ）アクリルアミド、Ｎ−イソプロピル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ’−ジメチル（メタ）アクリルアミド、(３−（メタ）アクリルアミドプロピル)トリメチルアンモニウムクロリド、４−（メタ）アクリロイルモルホリン、３−（メタ）アクリロイル−２−オキサゾリジノン、Ｎ−[３−(ジメチルアミノ)プロピル]（メタ）アクリルアミド、Ｎ−(２−ヒドロキシエチル)（メタ）アクリルアミド、Ｎ−メチロール（メタ）アクリルアミド、及び６−（メタ）アクリルアミドヘキサン酸等が挙げられる。 Examples of (meth) acrylamides include (meth) acrylamide, N-isopropyl (meth) acrylamide, N-tert-butyl (meth) acrylamide, N, N'-dimethyl (meth) acrylamide, and (3- (meth) acrylamide propyl). ) Trimethylammonium chloride, 4- (meth) acryloylmorpholine, 3- (meth) acryloyl-2-oxazolidinone, N- [3- (dimethylamino) propyl] (meth) acrylamide, N- (2-hydroxyethyl) (meth) ) Acrylamide, N-methylol (meth) acrylamide, 6- (meth) acrylamide hexane acid and the like.
（メタ）アクリル酸ポリエチレングリコール類としては、例えば、メトキシ−ポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、エトキシ−ポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、ヒドロキシ−ポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、メトキシ−ジエチレングリコール（メタ）アクリレート、エトキシ−ジエチレングリコール（メタ）アクリレート、ヒドロキシ−ジエチレングリコール（メタ）アクリレート、メトキシ−トリエチレングルコール（メタ）アクリレート、エトキシ−トリエチレングルコール（メタ）アクリレート、及びヒドロキシ−トリエチレングルコール（メタ）アクリレート等が挙げられる。 Examples of polyethylene glycols (meth) acrylate include methoxy-polyethylene glycol (meth) acrylate, ethoxy-polyethylene glycol (meth) acrylate, hydroxy-polyethylene glycol (meth) acrylate, methoxy-diethylene glycol (meth) acrylate, and ethoxy-. Diethylene glycol (meth) acrylate, hydroxy-diethylene glycol (meth) acrylate, methoxy-triethylene glycol (meth) acrylate, ethoxy-triethylene glycol (meth) acrylate, hydroxy-triethylene glycol (meth) acrylate and the like can be mentioned. Be done.
（メタ）アクリル酸ホスホリルコリンとしては、２−（メタ）アクリロイルオキシエチルホスホリルコリン等が挙げられる。 Examples of phosphorylcholine (meth) acrylate include 2- (meth) acryloyloxyethyl phosphorylcholine.
（メタ）アクリル酸エステルと共重合される他のモノマーとしては、ビニル化合物が好適に用いられる。ビニル化合物としては、エチレン、アリルアミン、ビニルピロリドン、無水マレイン酸、マレイミド、イタコン酸、（メタ）アクリル酸、ビニルアミン、又は（メタ）アクリル酸エステル等が挙げられる。ビニル化合物は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。 As the other monomer copolymerized with the (meth) acrylic acid ester, a vinyl compound is preferably used. Examples of the vinyl compound include ethylene, allylamine, vinylpyrrolidone, maleic anhydride, maleimide, itaconic acid, (meth) acrylic acid, vinylamine, and (meth) acrylic acid ester. Only one kind of vinyl compound may be used, or two or more kinds may be used in combination.
なお、本明細書において、「（メタ）アクリル」とは、「アクリル」又は「メタクリル」を意味し、「（メタ）アクリレート」とは、「アクリレート」又は「メタクリレート」を意味する。 In addition, in this specification, "(meth) acrylic" means "acrylic" or "methacryl", and "(meth) acrylate" means "acrylate" or "methacrylate".
上記ポリ（メタ）アクリル酸エステル樹脂Ｘは、ポリビニルアセタール骨格を有する合成樹脂Ｘと同様に、ブレンステッド塩基性基、またはブレンステッド酸性基を有することが好ましい。その場合には、細胞の伸展性をより一層高めることができる。このブレンステッド塩基性基は、ポリ（メタ）アクリル酸エステル樹脂Ｘの一部に有しておればよく、その場合、ブレンステッド塩基性基を有するモノマーが共重合されていてもよく、グラフトをされていてもよい。上記ブレンステッド塩基性基による変性度は、好ましくは０．２モル％以上、より好ましくは２モル％以上、好ましくは３０モル％以下、より好ましくは２０モル％以下、さらに好ましくは１５モル％以下である。ブレンステッド塩基性基による変性度が上記特定の範囲内であれば、細胞の伸展性より一層高めることができる。 The poly (meth) acrylic acid ester resin X preferably has a Bronsted basic group or a Bronsted acidic group, similarly to the synthetic resin X having a polyvinyl acetal skeleton. In that case, the extensibility of the cells can be further enhanced. The Bronsted basic group may be present in a part of the poly (meth) acrylic acid ester resin X, and in that case, the monomer having the Bronsted basic group may be copolymerized, and the graft may be formed. It may have been. The degree of modification by the Bronsted basic group is preferably 0.2 mol% or more, more preferably 2 mol% or more, preferably 30 mol% or less, more preferably 20 mol% or less, still more preferably 15 mol% or less. Is. If the degree of denaturation by the Bronsted basic group is within the above-mentioned specific range, the extensibility of the cell can be further enhanced.
（その他の樹脂）
細胞培養用足場材料は、上述した合成樹脂以外のポリマーを含んでいてもよい。該ポリマーとしては、ポリオレフィン樹脂、ポリエーテル樹脂、ポリビニルアルコール樹脂、ポリエステル、エポキシ樹脂、ポリアミド樹脂、ポリイミド樹脂、ポリウレタン樹脂、及びポリカーボネート樹脂等が挙げられる。
(Other resins)
The scaffold material for cell culture may contain a polymer other than the synthetic resin described above. Examples of the polymer include polyolefin resin, polyether resin, polyvinyl alcohol resin, polyester, epoxy resin, polyamide resin, polyimide resin, polyurethane resin, polycarbonate resin and the like.
［細胞培養用足場材料］
細胞培養用足場材料は、上記合成樹脂Ｘを含む。本発明の効果を効果的に発揮させる観点及び生産性を高める観点からは、上記細胞培養用足場材料１００重量％中、上記合成樹脂Ｘの含有量は、好ましくは９０重量％以上、より好ましくは９５重量％以上、更に好ましくは９７．５重量％以上、特に好ましくは９９重量％以上、最も好ましくは１００重量％（全量）である。したがって、上記細胞培養用足場材料は、上記合成樹脂Ｘであることが最も好ましい。上記合成樹脂Ｘの含有量が上記下限以上であると、本発明の効果をより一層効果的に発揮させることができる。
[Scaffold material for cell culture]
The scaffold material for cell culture contains the above synthetic resin X. From the viewpoint of effectively exerting the effect of the present invention and increasing the productivity, the content of the synthetic resin X in 100% by weight of the scaffold material for cell culture is preferably 90% by weight or more, more preferably 90% by weight or more. It is 95% by weight or more, more preferably 97.5% by weight or more, particularly preferably 99% by weight or more, and most preferably 100% by weight (total amount). Therefore, it is most preferable that the scaffold material for cell culture is the synthetic resin X. When the content of the synthetic resin X is at least the above lower limit, the effect of the present invention can be exhibited even more effectively.
上記細胞培養用足場材料は、上記合成樹脂Ｘ以外の成分を含んでいてもよい。上記合成樹脂以外の成分としては、多糖類、セルロース、合成ペプチド、ポリペプチド等が挙げられる。 The scaffold material for cell culture may contain components other than the synthetic resin X. Examples of components other than the synthetic resin include polysaccharides, celluloses, synthetic peptides, polypeptides and the like.
本発明の効果を効果的に発揮させる観点から、上記合成樹脂Ｘ以外の成分の含有量は少ないほどよい。上記細胞培養用足場材料１００重量％中、該成分の含有量は、好ましくは１０重量％以下、より好ましくは５重量％以下、更に好ましくは２．５重量％以下、特に好ましくは１重量％以下、最も好ましくは０重量％（未含有）である。したがって、細胞培養用足場材料は、合成樹脂Ｘ以外の成分を含まないことが最も好ましい。 From the viewpoint of effectively exerting the effects of the present invention, the smaller the content of the components other than the synthetic resin X, the better. The content of the component in 100% by weight of the scaffold material for cell culture is preferably 10% by weight or less, more preferably 5% by weight or less, still more preferably 2.5% by weight or less, and particularly preferably 1% by weight or less. , Most preferably 0% by weight (not contained). Therefore, it is most preferable that the scaffold material for cell culture does not contain any component other than the synthetic resin X.
上記細胞培養用足場材料は、動物由来の原料を実質的に含まないことが好ましい。動物由来の原料を含まないことにより、安全性が高く、かつ、製造時に品質のばらつきが少ない細胞培養用足場材料を提供することができる。なお、「動物由来の原料を実質的に含まない」とは、細胞培養用足場材料中における動物由来の原料が、３重量％以下であることをいう。上記細胞培養用足場材料は、細胞培養用足場材料中における動物由来の原料が、１重量％以下であることが好ましく、０重量％であることがより好ましい。すなわち、上記細胞培養用足場材料は、動物由来の原料を全く含まないことがより好ましい。 It is preferable that the scaffold material for cell culture does not substantially contain an animal-derived raw material. By not containing an animal-derived raw material, it is possible to provide a scaffold material for cell culture, which is highly safe and has little variation in quality during production. In addition, "substantially free of animal-derived raw materials" means that the animal-derived raw materials in the cell culture scaffold material are 3% by weight or less. In the cell culture scaffold material, the animal-derived raw material in the cell culture scaffold material is preferably 1% by weight or less, and more preferably 0% by weight. That is, it is more preferable that the scaffold material for cell culture does not contain any animal-derived raw materials.
（細胞培養用足場材料を用いた細胞培養）
上記細胞培養用足場材料は、細胞を培養するために用いられる。上記細胞培養用足場材料は、細胞を培養する際の該細胞の足場として用いられる。したがって、本発明に係る樹脂膜は、細胞を培養するために用いられ、また、細胞を培養する際の該細胞の足場として用いられる。
(Cell culture using scaffold material for cell culture)
The above-mentioned scaffold material for cell culture is used for culturing cells. The above-mentioned scaffold material for cell culture is used as a scaffold for the cells when culturing the cells. Therefore, the resin film according to the present invention is used for culturing cells, and is also used as a scaffold for the cells when culturing the cells.
上記細胞としては、ヒト、マウス、ラット、ブタ、ウシ及びサル等の動物細胞が挙げられる。また、上記細胞としては、体細胞等が挙げられ、例えば、幹細胞、前駆細胞及び成熟細胞等が挙げられる。上記体細胞は、癌細胞であってもよい。 Examples of the cells include animal cells such as humans, mice, rats, pigs, cows and monkeys. Examples of the cells include somatic cells and the like, and examples thereof include stem cells, progenitor cells and mature cells. The somatic cells may be cancer cells.
上記幹細胞としては、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、ｉＰＳ細胞、ＥＳ細胞、Ｍｕｓｅ細胞、胚性がん細胞、胚性生殖幹細胞、及びｍＧＳ細胞等が挙げられる。 Examples of the stem cells include mesenchymal stem cells (MSCs), iPS cells, ES cells, Muse cells, embryonic cancer cells, embryonic reproductive stem cells, mGS cells and the like.
上記成熟細胞としては、神経細胞、心筋細胞、網膜細胞及び肝細胞等が挙げられる。 Examples of the mature cells include nerve cells, cardiomyocytes, retinal cells, hepatocytes and the like.
（細胞培養用足場材料の形状）
本発明に係る樹脂膜は、細胞培養用足場材料により形成される。上記樹脂膜は、細胞培養用足場材料を用いて形成される。上記樹脂膜は、膜状の細胞培養用足場材料であることが好ましい。上記樹脂膜は、細胞培養用足場材料の膜状物であることが好ましい。上記樹脂膜の厚みは特に限定されない。
(Shape of scaffold material for cell culture)
The resin film according to the present invention is formed of a scaffold material for cell culture. The resin film is formed by using a scaffold material for cell culture. The resin film is preferably a film-like scaffold material for cell culture. The resin film is preferably a film-like material for a scaffold material for cell culture. The thickness of the resin film is not particularly limited.
本明細書では、上記細胞培養用足場材料を含む、粒子、繊維、多孔体、又はフィルムも提供する。この場合、上記細胞培養用足場材料の形状は特に限定されず、粒子であっても、繊維であっても、多孔体であっても、フィルムであってもよい。なお、上記粒子、繊維、多孔体、又はフィルムは、上記細胞培養用足場材料以外の構成要素を含んでいてもよい。 The present specification also provides particles, fibers, porous bodies, or films containing the above-mentioned scaffold material for cell culture. In this case, the shape of the scaffold material for cell culture is not particularly limited, and may be particles, fibers, porous bodies, or films. The particles, fibers, porous body, or film may contain components other than the scaffold material for cell culture.
上記細胞培養用足場材料を含むフィルムは、細胞を平面培養（二次元培養）するために用いられることが好ましい。また、上記細胞培養用足場材料を含む、粒子、繊維、又は多孔体は、細胞を三次元培養するために用いられることが好ましい。 The film containing the scaffold material for cell culture is preferably used for plane culture (two-dimensional culture) of cells. In addition, particles, fibers, or porous bodies containing the above-mentioned scaffold material for cell culture are preferably used for three-dimensional culture of cells.
（細胞培養用容器）
本発明は、細胞の培養領域の少なくとも一部に上記樹脂膜を備える、細胞培養用容器にも関する。図１は、本発明の一実施形態に係る細胞培養用容器を模式的に示す正面断面図である。
(Cell culture container)
The present invention also relates to a cell culture container provided with the above resin film in at least a part of the cell culture area. FIG. 1 is a front sectional view schematically showing a cell culture container according to an embodiment of the present invention.
細胞培養用容器１は、容器本体２と、樹脂膜３とを備える。容器本体２の表面２ａ上に樹脂膜３が配置されている。容器本体２の底面上に樹脂膜３が配置されている。細胞培養用容器１に液体培地を添加し、また、細胞を樹脂膜３の表面に播種することで、細胞を平面培養することができる。 The cell culture container 1 includes a container body 2 and a resin film 3. The resin film 3 is arranged on the surface 2a of the container body 2. The resin film 3 is arranged on the bottom surface of the container body 2. The cells can be cultured in a plane by adding a liquid medium to the cell culture container 1 and seeding the cells on the surface of the resin film 3.
なお、容器本体は、第１の容器本体の底面上にカバーガラス等の第２の容器本体を備えていてもよい。第１の容器本体と第２の容器本体とは分離可能であってもよい。この場合、第２の容器本体の表面上に、該細胞培養用足場材料が配置されていてもよい。 The container body may be provided with a second container body such as a cover glass on the bottom surface of the first container body. The first container body and the second container body may be separable. In this case, the cell culture scaffold material may be arranged on the surface of the second container body.
上記容器本体として、従来公知の容器本体（容器）を用いることができる。上記容器本体の形状及び大きさは特に限定されない。 As the container body, a conventionally known container body (container) can be used. The shape and size of the container body are not particularly limited.
上記容器本体としては、１個又は複数個のウェル（穴）を備える細胞培養用プレート、及び細胞培養用フラスコ等が挙げられる。上記プレートのウェル数は特に限定されない。該ウェル数としては、特に限定されないが、例えば、２、４、６、１２、２４、４８、９６、３８４等が挙げられる。上記ウェルの形状としては、特に限定されないが、真円、楕円、三角形、正方形、長方形、五角形等が挙げられる。上記ウェル底面の形状としては、特に限定されないが、平底、丸底、凹凸等が挙げられる。 Examples of the container body include a cell culture plate provided with one or more wells (holes), a cell culture flask, and the like. The number of wells in the plate is not particularly limited. The number of wells is not particularly limited, and examples thereof include 2, 4, 6, 12, 24, 48, 96, and 384. The shape of the well is not particularly limited, and examples thereof include a perfect circle, an ellipse, a triangle, a square, a rectangle, and a pentagon. The shape of the bottom surface of the well is not particularly limited, and examples thereof include a flat bottom, a round bottom, and unevenness.
上記容器本体の材質は特に限定されないが、樹脂、金属及び無機材料が挙げられる。上記樹脂としては、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリカーボネート、ポリエステル、ポリイソプレン、シクロオレフィンポリマー、ポリイミド、ポリアミド、ポリアミドイミド、（メタ）アクリル樹脂、エポキシ樹脂、シリコーン等が挙げられる。上記金属としては、ステンレス、銅、鉄、ニッケル、アルミ、チタン、金、銀、白金等が挙げられる。上記無機材料としては、酸化ケイ素（ガラス）、酸化アルミ、酸化チタン、酸化ジルコニウム、酸化鉄、窒化ケイ素等が挙げられる。 The material of the container body is not particularly limited, and examples thereof include resin, metal, and inorganic materials. Examples of the resin include polystyrene, polyethylene, polypropylene, polycarbonate, polyester, polyisoprene, cycloolefin polymer, polyimide, polyamide, polyamideimide, (meth) acrylic resin, epoxy resin, silicone and the like. Examples of the metal include stainless steel, copper, iron, nickel, aluminum, titanium, gold, silver, platinum and the like. Examples of the inorganic material include silicon oxide (glass), aluminum oxide, titanium oxide, zirconium oxide, iron oxide, silicon nitride and the like.
以下、本発明の実施例及び比較例を挙げ、より詳細に説明する。なお、本発明は、以下の実施例に限定されるものではない。 Hereinafter, examples and comparative examples of the present invention will be given and described in more detail. The present invention is not limited to the following examples.
細胞培養用足場材料の原料として、以下の合成樹脂Ｘ１を合成した。 The following synthetic resin X1 was synthesized as a raw material for a scaffold material for cell culture.
撹拌装置を備えた反応機に、イオン交換水２７００ｍＬ、平均重合度１６００、アミン変性度２．０モル％、鹸化度９７．５モル％のアミン変性ポリビニルアルコールを３００重量部投入し、撹拌しながら加熱溶解し、溶液を得た。得られた溶液に、触媒として、塩酸濃度が０．２重量％となるように３５重量％塩酸を添加した。次いで、温度を１５℃に調整し、撹拌しながらｎ−ブチルアルデヒド２２重量部を添加した。次いで、ｎ−ブチルアルデヒド１４８重量部を添加し、白色粒子状のポリビニルブチラール樹脂を析出させた。析出してから１５分後に、塩酸濃度が１．８重量％となるように３５重量％塩酸を添加した後、５０℃に加熱し、５０℃で２時間保持した。次いで、溶液を冷却し、中和した後、ポリビニルブチラール樹脂を水洗し、乾燥させて、ポリビニルブチラール樹脂である合成樹脂Ｘ１を得た。 300 parts by weight of amine-modified polyvinyl alcohol having an ion-exchanged water of 2700 mL, an average degree of polymerization of 1600, an amine modification degree of 2.0 mol%, and a saponification degree of 97.5 mol% was added to a reactor equipped with a stirrer while stirring. It was dissolved by heating to obtain a solution. To the obtained solution, 35% by weight hydrochloric acid was added as a catalyst so that the hydrochloric acid concentration was 0.2% by weight. Then, the temperature was adjusted to 15 ° C., and 22 parts by weight of n-butyraldehyde was added with stirring. Then, 148 parts by weight of n-butyraldehyde was added to precipitate a white particulate polyvinyl butyral resin. Fifteen minutes after the precipitation, 35% by weight hydrochloric acid was added so that the hydrochloric acid concentration became 1.8% by weight, and then the mixture was heated to 50 ° C. and maintained at 50 ° C. for 2 hours. Then, the solution was cooled and neutralized, and then the polyvinyl butyral resin was washed with water and dried to obtain a synthetic resin X1 which is a polyvinyl butyral resin.
得られたポリビニルブチラール樹脂（合成樹脂Ｘ１）は、平均重合度１６００、水酸基量２１モル％、アミン基量２モル％、アセチル化度１モル％、アセタール化度（ブチラール化度）７６モル％であった。 The obtained polyvinyl butyral resin (synthetic resin X1) had an average degree of polymerization of 1600, a hydroxyl group amount of 21 mol%, an amine group amount of 2 mol%, an acetylation degree of 1 mol%, and an acetalization degree (butyralization degree) of 76 mol%. there were.
なお、得られた合成樹脂における構造単位の含有率は、合成樹脂をＤＭＳＯ−Ｄ６(ジメチルスルホキサイド)に溶解した後、１Ｈ−ＮＭＲ（核磁気共鳴スペクトル）により測定した。 The content of structural units in the obtained synthetic resin was measured by 1 H-NMR (nuclear magnetic resonance spectrum) after dissolving the synthetic resin in DMSO-D6 (dimethylsulfoxide).
（実施例１〜６及び比較例１〜４）
実施例１では上記合成樹脂Ｘ１を、実施例２〜６では合成樹脂Ｘ２〜Ｘ６をそれぞれ用いた。
(Examples 1 to 6 and Comparative Examples 1 to 4)
In Example 1, the synthetic resin X1 was used, and in Examples 2 to 6, synthetic resins X2 to X6 were used.
合成樹脂Ｘ２は、ブチラール化度７１モル％、アセチル化度１モル％及び水酸基量２８モル％であるポリビニルアセタール樹脂に、モノマーとして、ジメチルアミノアクリルアミド２ｍｏｌ％が配合された樹脂であり、表１に示す構成を備える樹脂である。合成条件は、次の通りとした。すなわち、上記ポリビニルアセタール樹脂をＴＨＦに濃度２０ｗｔ％で溶解させ、ジメチルアミノアクリルアミドを２重量部添加した後、開始剤を３重量部溶解させ、ＵＶ重合試験機にて２０分間ＵＶ照射した。 Synthetic resin X2 is a polyvinyl acetal resin having a butyralization degree of 71 mol%, an acetylation degree of 1 mol%, and a hydroxyl group amount of 28 mol%, in which 2 mol% of dimethylaminoacrylamide is blended as a monomer. It is a resin having the structure shown. The synthesis conditions were as follows. That is, the polyvinyl acetal resin was dissolved in THF at a concentration of 20 wt%, 2 parts by weight of dimethylaminoacrylamide was added, then 3 parts by weight of the initiator was dissolved, and UV irradiation was performed for 20 minutes with a UV polymerization tester.
また、合成樹脂Ｘ３及び合成樹脂Ｘ４は、表１に示すように、合成樹脂中のジメチルアミノアクリルアミドの含有割合を、２ｍｏｌ％から５ｍｏｌ％、２１ｍｏｌ％としたことを除いては、合成樹脂Ｘ２と同様である。 Further, as shown in Table 1, the synthetic resin X3 and the synthetic resin X4 are different from the synthetic resin X2 except that the content ratio of dimethylaminoacrylamide in the synthetic resin is 2 mol% to 5 mol% and 21 mol%. The same is true.
合成樹脂Ｘ５は、モノマーとして、ジエチルアミノアクリルアミドを用いて、その含有割合を２８ｍｏｌ％としたことを除いては、合成樹脂Ｘ２と同様である。合成樹脂Ｘ６は、モノマーとして、ビニルイミダゾールを用いて、その含有割合を１６ｍｏｌ％としたことを除いて、合成樹脂Ｘ２と同様である。 The synthetic resin X5 is the same as the synthetic resin X2 except that diethylaminoacrylamide is used as a monomer and the content ratio is 28 mol%. The synthetic resin X6 is the same as the synthetic resin X2 except that vinyl imidazole is used as a monomer and the content ratio is 16 mol%.
また、比較例２〜４では、表２に示す組成のポリビニルアセタール樹脂を用いた。 Further, in Comparative Examples 2 to 4, the polyvinyl acetal resin having the composition shown in Table 2 was used.
細胞培養用容器の作製；
表１及び表２に示す合成樹脂０．１重量部をブタノール・メタノール混合溶媒（９：１）１９.９重量部に溶解させた。得られた溶液２００μＬを、ポリスチレンディッシュにキャストした後、６０℃で１２０分間加熱して、表面が平滑な樹脂膜（細胞培養用足場材料からなる樹脂膜）が形成された細胞培養用容器を得た。
Preparation of cell culture container;
0.1 part by weight of the synthetic resin shown in Tables 1 and 2 was dissolved in 19.9 parts by weight of a butanol / methanol mixed solvent (9: 1). 200 μL of the obtained solution was cast into a polystyrene dish and then heated at 60 ° C. for 120 minutes to obtain a cell culture container on which a resin film having a smooth surface (a resin film made of a scaffold material for cell culture) was formed. It was.
なお、比較例１では、ポリスチレンディッシュ自体を細胞培養用容器として用いた。 In Comparative Example 1, the polystyrene dish itself was used as a cell culture container.
ｐＨ７．０におけるゼータ電位の測定；
ゼータ電位測定機器（アントンパール社製、型番ＳＵＲＰＡＳＳ ３）を用いて、実施例１〜６及び比較例２〜４で得られた樹脂膜のゼータ電位をそれぞれ求めた。まず、０．１ｍＭのＫＣｌ溶液を用意した。次に、セルに足場材料の樹脂膜をセットしたあと、ｐＨ電極及び導電率計を設定した。ＨＣｌとＮａＯＨ溶液を用いて、ｐＨ９〜３まで滴定することで各ｐＨでのゼータ電位を測定した。
Measurement of zeta potential at pH 7.0;
Using a zeta potential measuring device (manufactured by Anton Pearl Co., Ltd., model number SURPASS 3), the zeta potentials of the resin films obtained in Examples 1 to 6 and Comparative Examples 2 to 4 were obtained, respectively. First, a 0.1 mM KCl solution was prepared. Next, after setting the resin film of the scaffolding material in the cell, the pH electrode and the conductivity meter were set. The zeta potential at each pH was measured by titrating to pH 9-3 using HCl and NaOH solution.
なお、比較例１では、ポリスチレンディッシュのゼータ電位を求めた。また、比較例２及び比較例３は、ゼータ電位が測定下限値未満だったため測定不能とした。 In Comparative Example 1, the zeta potential of the polystyrene dish was determined. Further, in Comparative Example 2 and Comparative Example 3, the zeta potential was less than the lower limit of measurement, so that the measurement was impossible.
表面自由エネルギーの測定；
実施例１〜６及び比較例２〜４で得られた樹脂膜の表面自由エネルギーについて接触角計（協和界面科学社製、ＤＭｏ−７０１）を用いて測定した。上記樹脂膜上に純水１μＬを着滴させ、３０秒後の液滴像を撮影することで純水の接触角を得た。また、上記樹脂膜上にジヨードメタン１μＬを着滴させ、３０秒後の液滴像を撮影することでジヨードメタンの接触角を得た。得られた上記接触角をＫａｅｌｂｌｅ−Ｕｙ理論を用いて表面自由エネルギーγ、分散項成分γｄ、極性項成分である双極子成分γｐを導出した。なお、比較例１では、ポリスチレンディッシュの表面自由エネルギーを求めた。
Measurement of surface free energy;
The surface free energy of the resin films obtained in Examples 1 to 6 and Comparative Examples 2 to 4 was measured using a contact angle meter (DMo-701, manufactured by Kyowa Interface Science Co., Ltd.). A contact angle of pure water was obtained by dripping 1 μL of pure water on the resin film and photographing a droplet image 30 seconds later. Further, 1 μL of diiodomethane was dropleted on the resin film, and a droplet image after 30 seconds was taken to obtain a contact angle of diiodomethane. From the obtained contact angle, the surface free energy γ, the dispersion term component γ d , and the dipole component γ p , which is a polar term component, were derived using the Kaelble-Uy theory. In Comparative Example 1, the surface free energy of the polystyrene dish was determined.
水膨潤倍率；
長さ５０ｍｍ、幅１０ｍｍ、厚み０．０５ｍｍ〜０．１５ｍｍの各足場材料からなる樹脂膜（測定サンプル）を、２５℃の水に２４時間に浸漬した。浸漬前と後のサンプルの重さを測定し、水膨潤倍率＝（浸漬後のサンプル重量−浸漬前のサンプル重量）／（浸漬前のサンプル重量）×１００（％）を算出した。
Water swelling ratio;
A resin film (measurement sample) made of each scaffold material having a length of 50 mm, a width of 10 mm, and a thickness of 0.05 mm to 0.15 mm was immersed in water at 25 ° C. for 24 hours. The weights of the samples before and after immersion were measured, and the water swelling ratio = (sample weight after immersion-sample weight before immersion) / (sample weight before immersion) × 100 (%) was calculated.
貯蔵弾性率；
各樹脂膜の２５℃及び１００℃における貯蔵弾性率は、動的粘弾性測定装置（アイティー計測制御社製、ＤＶＡ−２００）により測定した。上記動的粘弾性測定装置による測定は、長さ５０ｍｍ、幅５ｍｍ〜２０ｍｍ、厚み０．１ｍｍ〜１ｍｍの測定サンプルを用いて、周波数１０Ｈｚ、ひずみ０．１％、温度−１５０℃〜１５０℃、及び昇温速度５℃／ｍｉｎの条件で行った。なお、比較例１では、ポリスチレンディッシュの貯蔵弾性率を求めた。また、得られた２５℃及び１００℃における貯蔵弾性率から、比（（２５℃における貯蔵弾性率）／（１００℃における貯蔵弾性率））を算出した。
Storage modulus;
The storage elastic modulus of each resin film at 25 ° C. and 100 ° C. was measured by a dynamic viscoelasticity measuring device (DVA-200, manufactured by IT Measurement Control Co., Ltd.). The measurement by the dynamic viscoelasticity measuring device uses a measurement sample having a length of 50 mm, a width of 5 mm to 20 mm, and a thickness of 0.1 mm to 1 mm, and has a frequency of 10 Hz, a strain of 0.1%, and a temperature of −150 ° C. to 150 ° C. And the temperature rise rate was 5 ° C./min. In Comparative Example 1, the storage elastic modulus of the polystyrene dish was determined. Further, the ratio ((storage elastic modulus at 25 ° C.) / (storage elastic modulus at 100 ° C.)) was calculated from the obtained storage elastic moduli at 25 ° C. and 100 ° C.
細胞の播種及び培養；
以下の液体培地及びＲＯＣＫ（Ｒｈｏ結合キナーゼ）特異的阻害剤を用意した。
Seeding and culturing cells;
The following liquid medium and ROCK (Rho-associated kinase) -specific inhibitor were prepared.
ＴｅＳＲ Ｅ８培地（ＳＴＥＭ ＣＥＬＬ社製）
ＲＯＣＫ−Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ（Ｙ２７６３２）
TeSR E8 medium (manufactured by STEM CELL)
ROCK-Inhibitor (Y27632)
得られた細胞培養用容器にリン酸緩衝生理食塩水１ｍＬを加えて３７℃のインキュベーター内で１時間静置後、細胞培養用容器からリン酸緩衝生理食塩水を除去した。 1 mL of phosphate buffered saline was added to the obtained cell culture vessel, and the mixture was allowed to stand in an incubator at 37 ° C. for 1 hour, and then the phosphate buffered saline was removed from the cell culture vessel.
φ３５ｍｍのディッシュにコンフルエント状態になったｈ−ｉＰＳ細胞２５３Ｇ１のコロニーを配置し、０．５ｍＭエチレンジアミン／リン酸緩衝溶液１ｍＬを加え、室温で２分静置した。エチレンジアミン／リン酸緩衝溶液を除去した後、ＴｅＳＲ Ｅ８培地１ｍＬでピペッティングすることにより５０μｍ〜２００μｍの大きさに砕かれた細胞塊を得た。得られた細胞塊（細胞数０．５×１０５ｃｅｌｌｓ）を上記の細胞培養用容器にクランプ播種した。 Colonies of h-iPS cells 253G1 in a confluent state were placed on a dish having a diameter of 35 mm, 1 mL of 0.5 mM ethylenediamine / phosphate buffer solution was added, and the mixture was allowed to stand at room temperature for 2 minutes. After removing the ethylenediamine / phosphate buffer solution, the cell mass was obtained by pipetting with 1 mL of TeSR E8 medium to obtain a cell mass crushed to a size of 50 μm to 200 μm. The resulting cell mass (cell number 0.5 × 10 5 cells) were clamped seeded into a container for said cell culture.
播種時は１．５ｍＬの液体培地と、終濃度が１０μＭとなるようにＲＯＣＫ特異的阻害剤とを細胞培養用容器に添加した、３７℃及びＣＯ２濃度５％のインキュベーター内で１日間培養を行った。 At the time of seeding, 1.5 mL of liquid medium and a ROCK-specific inhibitor were added to a cell culture vessel so that the final concentration was 10 μM, and the cells were cultured for 1 day in an incubator at 37 ° C. and a CO 2 concentration of 5%. went.
（評価）
ＳＦの評価；
１日間培養を行った後、前述したように、シェイプファクター（ＳＦ）を評価した。評価に際しては、位相差顕微鏡による倍率４倍における観察画像を得た。画像解析ソフト（Ｉｍａｇｅ Ｊ）を用いて細胞塊の周囲長及びその面積を算出し、ＳＦ＝４×π×（細胞塊の平面積／細胞塊の外周縁の長さ）２でＳＦ値を求めた。図３は、ＳＦ≒０．２の場合の細胞塊の平面形状を示す写真であり、図４はＳＦ≒１である場合の細胞塊の平面形状の写真である。
(Evaluation)
Evaluation of SF;
After culturing for 1 day, the shape factor (SF) was evaluated as described above. In the evaluation, an observation image at a magnification of 4 times with a phase-contrast microscope was obtained. Calculate the peripheral length of the cell mass and its area using image analysis software (Image J), and obtain the SF value with SF = 4 × π × (flat area of cell mass / length of outer peripheral edge of cell mass) 2. It was. FIG. 3 is a photograph showing the planar shape of the cell mass when SF≈0.2, and FIG. 4 is a photograph of the planar shape of the cell mass when SF≈1.
また、以下の基準によりＳＦを評価した。
〇〇〇：ＳＦが０．２未満
〇〇：ＳＦが０．２以上、０．４未満
〇：ＳＦが０．４以上、０．５未満
×：ＳＦが０．５以上
In addition, SF was evaluated according to the following criteria.
〇 〇 〇: SF is less than 0.2 〇 〇: SF is 0.2 or more and less than 0.4 〇: SF is 0.4 or more and less than 0.5 ×: SF is 0.5 or more
結果を下記の表１及び表２に示す。 The results are shown in Tables 1 and 2 below.
表１及び表２から明らかなように、比較例１ではＳＦ値が０．８２と大きく、細胞の伸展性が低いことがわかる。比較例２〜４においても、ＳＦ値が０．５６以上と大きく、細胞の伸展性が低いことがわかる。これに対して、実施例１〜６では、ＳＦ値が０．４１以下であり、細胞の伸展性が大幅に優れていることがわかる。特に、実施例１，２，３では、ＳＦ値が０．２５以下であり、より好ましく、実施例２，３では、ＳＦ値が０．１７以下とさらに好ましいことがわかる。また、実施例１〜６では、細胞塊の収縮も見られなかった。 As is clear from Tables 1 and 2, in Comparative Example 1, the SF value is as large as 0.82, and the cell extensibility is low. Also in Comparative Examples 2 to 4, it can be seen that the SF value is as large as 0.56 or more and the cell extensibility is low. On the other hand, in Examples 1 to 6, the SF value was 0.41 or less, and it can be seen that the extensibility of the cells was significantly excellent. In particular, in Examples 1, 2 and 3, the SF value is 0.25 or less, which is more preferable, and in Examples 2 and 3, the SF value is 0.17 or less, which is even more preferable. Moreover, in Examples 1 to 6, no contraction of the cell mass was observed.
１…細胞培養用容器
２…容器本体
２ａ…表面
３…樹脂膜
1 ... Cell culture container 2 ... Container body 2a ... Surface 3 ... Resin film
Claims (10)
ｐＨ７．０におけるゼータ電位が、−４０ｍＶ以上であり、
表面自由エネルギーの分散項成分が２４．５ｍＪ／ｍ２以上、４５ｍＪ／ｍ２以下である、樹脂膜。 A resin membrane made of a scaffold material for cell culture containing a synthetic resin.
The zeta potential at pH 7.0 is -40 mV or higher.
A resin film having a dispersion term component of surface free energy of 24.5 mJ / m 2 or more and 45 mJ / m 2 or less.
２５℃における貯蔵弾性率と１００℃における貯蔵弾性率との比（（２５℃における貯蔵弾性率）／（１００℃における貯蔵弾性率））が１×１０以上、１×１０５以下である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の樹脂膜。 The storage elastic modulus at 100 ° C. is 1 × 10 4 Pa or more and 1 × 10 8 Pa or less.
The ratio of the storage modulus and the storage modulus at 100 ° C. at 25 ° C. ((storage modulus at 25 ° C.) / (storage modulus at 100 ° C.)) of 1 × 10 or more, and 1 × 10 5 or less, wherein Item 2. The resin film according to any one of Items 1 to 3.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2019119070 | 2019-06-26 | ||
| JP2019119070 | 2019-06-26 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2021003103A true JP2021003103A (en) | 2021-01-14 |
Family
ID=74097355
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2020110430A Pending JP2021003103A (en) | 2019-06-26 | 2020-06-26 | Resin film and container for cell culture |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2021003103A (en) |
-
2020
- 2020-06-26 JP JP2020110430A patent/JP2021003103A/en active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| WO2020230886A1 (en) | Resin film formed of scaffold material for cell culture, carrier for cell culture and container for cell culture | |
| WO2019131982A1 (en) | Scaffolding material for stem cell cultures and stem cell culture method using same | |
| JP2021091872A (en) | Biocompatible resin, culture medium additive for cells, culture medium for cell culture, and coating agent for cell culture including the same, and use thereof | |
| JP7480037B2 (en) | Scaffold material for cell culture and cell culture vessel | |
| JP2021023287A (en) | Cell culture scaffolding material and cell culture container | |
| WO2020203769A1 (en) | Cell culture scaffold material, cell culture vessel, cell culture fiber and method for culturing cell | |
| WO2021024943A1 (en) | Scaffold material for cell culture and cell culture container | |
| JP2021003103A (en) | Resin film and container for cell culture | |
| WO2020203770A1 (en) | Cell culture scaffold material, cell culture vessel, cell culture carrier, cell culture fiber and cell culture method | |
| JP2021003102A (en) | Resin film and container for cell culture | |
| WO2022168871A1 (en) | Cell culture microcarrier and cell culturing method | |
| WO2020241675A1 (en) | Resin film formed by scaffold material for cell culture and container for cell culture | |
| TW202246483A (en) | Microcarrier for cell culture and cell culture method | |
| JP2021003062A (en) | Scaffold material for cell culture and container for cell culture | |
| JP2021003061A (en) | Scaffold material for cell culture, and container for cell culture | |
| TWI839518B (en) | Resin membrane formed by cell culture scaffold material, cell culture carrier, and cell culture container | |
| EP4239051A1 (en) | Microfluidic chip, cell analysis device, cell analysis system, and cell analysis method | |
| JP6996972B2 (en) | Stem cell culture container | |
| JP2022077840A (en) | Scaffold material for cell culture, resin film, container for cell culture, and culture method of cells | |
| JP2019115322A (en) | Stem cell culture container | |
| CN116829695A (en) | Microcarrier for cell culture and method for culturing cells |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20230307 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20240130 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20240325 |