JP2020180984A - Micro-particle analysis device and micro-particle analysis method - Google Patents
Micro-particle analysis device and micro-particle analysis method Download PDFInfo
- Publication number
- JP2020180984A JP2020180984A JP2020124899A JP2020124899A JP2020180984A JP 2020180984 A JP2020180984 A JP 2020180984A JP 2020124899 A JP2020124899 A JP 2020124899A JP 2020124899 A JP2020124899 A JP 2020124899A JP 2020180984 A JP2020180984 A JP 2020180984A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- data
- fine particles
- micro
- spectrum
- wavelength
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 title abstract description 16
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title description 14
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 40
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 24
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 claims abstract description 21
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 claims description 53
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 14
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 14
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 7
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 5
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 4
- 238000002189 fluorescence spectrum Methods 0.000 description 4
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 229930002875 chlorophyll Natural products 0.000 description 1
- 235000019804 chlorophyll Nutrition 0.000 description 1
- ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M chlorophyll a Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
Abstract
Description
本発明は、表示方法及び微小粒子分析装置に関する。より詳しくは、微小粒子から発せられる蛍光の種類などを分析する技術に関する。 The present invention relates to a display method and a fine particle analyzer. More specifically, the present invention relates to a technique for analyzing the type of fluorescence emitted from fine particles.
一般に、細胞、微生物及びリポソームなどの生体関連微小粒子を分析する場合は、フローサイトメトリー（フローサイトメーター）が利用されている（例えば、非特許文献１参照。）。フローサイトメトリーは、流路内を１列になって通流する微小粒子に特定波長のレーザ光（励起光）を照射して、各微小粒子から発せられた蛍光や散乱光を検出することにより、複数の微小粒子を１個ずつ分析する方法である。このフローサイトメトリーでは、光検出器で検出した光を電気的信号に変換して数値化し、統計解析を行うことにより、個々の微小粒子の種類、大きさ及び構造などを判定することができる。 In general, flow cytometry (flow cytometer) is used for analyzing biologically related fine particles such as cells, microorganisms and liposomes (see, for example, Non-Patent Document 1). Flow cytometry is performed by irradiating fine particles that flow in a row in a flow path with laser light (excitation light) of a specific wavelength and detecting fluorescence or scattered light emitted from each fine particle. , This is a method of analyzing a plurality of fine particles one by one. In this flow cytometry, the type, size, structure, etc. of individual fine particles can be determined by converting the light detected by the photodetector into an electrical signal, quantifying it, and performing statistical analysis.
また、近年、フローサイトメトリーにおいて、複数の蛍光色素を使用したマルチカラー分析が普及してきている（例えば、特許文献１，２参照。）。これら従来のフローサイトメータでは、通常、波長が異なる複数の光源と、各色素から発せられた光を検出するための複数の検出器を備えている。一方、蛍光色素はスペクトルを持つため、マルチカラー分析のように一度の測定で複数の蛍光色素を使用すると、検出器に目的以外の蛍光色素からの光が漏れ込み、分析精度が低下する。そこで、従来のフローサイトメータでは、目的の蛍光色素からの光情報のみを取り出すため、光検出器で検出した光を電気的信号に変換して数値化する際に、数学的な補正、即ち、蛍光補正を行っている。 Further, in recent years, in flow cytometry, multicolor analysis using a plurality of fluorescent dyes has become widespread (see, for example, Patent Documents 1 and 2). These conventional flow cytometers usually include a plurality of light sources having different wavelengths and a plurality of detectors for detecting the light emitted from each dye. On the other hand, since the fluorescent dye has a spectrum, if a plurality of fluorescent dyes are used in one measurement as in multicolor analysis, light from a fluorescent dye other than the intended one leaks into the detector, and the analysis accuracy is lowered. Therefore, in the conventional flow cytometer, only the light information from the target fluorescent dye is extracted. Therefore, when the light detected by the photodetector is converted into an electric signal and quantified, mathematical correction, that is, Fluorescence correction is performed.
前述したように、蛍光色素はそれぞれ特有のスペクトルを持っており、そのスペクトル情報は、蛍光色素自身の特徴を表すものとして重要なデータとなる。しかしながら、従来のフローサイトメータは、目的とする蛍光色素からの光を、例えば特定のバンド幅をもつ光を受光するセンサで検出し、その検出データを対応データとして扱っているため、各蛍光色素のスペクトル情報を提示することができないという問題点がある。 As described above, each fluorescent dye has a unique spectrum, and the spectrum information is important data for expressing the characteristics of the fluorescent dye itself. However, since the conventional flow cytometer detects the light from the target fluorescent dye with a sensor that receives light having a specific bandwidth, for example, and treats the detected data as corresponding data, each fluorescent dye There is a problem that it is not possible to present the spectral information of.
そこで、本発明は、微小粒子から発せられた蛍光のスペクトラム情報を視覚で理解することができる技術を提供することを主目的とする。 Therefore, an object of the present invention is to provide a technique capable of visually understanding the spectrum information of fluorescence emitted from fine particles.
本発明では、流路を通流する色素で修飾された複数の微小粒子に一つの励起光を照射する光照射部と、前記励起光の照射により前記微小粒子から発せられた蛍光を、複数の波長領域で同時に検出する複数の検出器を有する検出部と、前記検出部において前記微小粒子毎に前記色素の数以上の波長領域で蛍光を検出し、前記検出した蛍光データに基づいて、微小粒子に修飾した色素に関する情報を解析する解析部を有する、微小粒子分析装置を提供する。
本発明では、前記検出部で検出した各波長領域の光を電圧パルスに変換する変換部を有していてもよい。
また、本発明では、前記色素で修飾された複数の微小粒子は、無染色の微小粒子、一つの色素で修飾された微小粒子、二つ以上の色素で修飾された微小粒子、又はこれらのいずれか２種以上を混合したものであってもよい。
更に、本発明では、前記光照射部は、波長が異なる励起光を照射する複数の光源を有してしてもよい。
加えて、本発明では、前記検出器は、センサ又は多チャンネル光電子倍増管のチャンネルであってもよく、この場合、前記センサ又は多チャンネル光電子倍増管のチャンネルの数が６以上であってもよい。
また、本発明では、前記検出部は、前記微小粒子に修飾された色素の数以上の検出器を有していてもよい。
更に、本発明では、前記解析部は、前記検出した蛍光データに基づいて、微小粒子に修飾した色素に関する情報を解析し、微小粒子の群を特定してもよい。
加えて、本発明では、前記検出した蛍光データを、前記波長領域を示す波長情報をパラメーターとしてスペクトル表示する表示部を有していてもよく、この場合、前記表示部は、前記スペクトルに対するゲーティング処理に応じて前記ゲーティング処理された領域のデータを表示してもよい。また、この場合、前記ゲーティング処理された領域のデータは、二次元プロットとして表示されてもよい。
In the present invention, a light irradiation unit that irradiates a plurality of fine particles modified with a dye passing through a flow path with one excitation light, and a plurality of fluorescence emitted from the fine particles by the irradiation of the excitation light. A detection unit having a plurality of detectors that simultaneously detect in the wavelength region, and the detection unit detects fluorescence in a wavelength region equal to or greater than the number of the dyes for each of the fine particles, and the fine particles are based on the detected fluorescence data. Provided is a microparticle analyzer having an analysis unit for analyzing information on a dye modified to.
In the present invention, it may have a conversion unit that converts light in each wavelength region detected by the detection unit into a voltage pulse.
Further, in the present invention, the plurality of fine particles modified with the dye are unstained fine particles, fine particles modified with one dye, fine particles modified with two or more dyes, or any of these. Or it may be a mixture of two or more.
Further, in the present invention, the light irradiation unit may have a plurality of light sources that irradiate excitation light having different wavelengths.
In addition, in the present invention, the detector may be a sensor or multi-channel photomultiplier tube channel, in which case the number of channels of the sensor or multi-channel photomultiplier tube may be 6 or more. ..
Further, in the present invention, the detection unit may have a number of detectors equal to or more than the number of dyes modified into the fine particles.
Further, in the present invention, the analysis unit may analyze information about the dye modified into fine particles based on the detected fluorescence data and specify a group of fine particles.
In addition, the present invention may have a display unit that displays the detected fluorescence data in a spectrum using wavelength information indicating the wavelength region as a parameter. In this case, the display unit gates the spectrum. The data of the gating-processed area may be displayed according to the processing. Further, in this case, the data of the gated area may be displayed as a two-dimensional plot.
本発明では、流路を通流する色素で修飾された複数の微小粒子に一つの励起光を照射し、前記励起光の照射により前記微小粒子から発せられた蛍光を、複数の波長領域で同時に検出する複数の検出器を有する検出部において、前記微小粒子毎に前記色素の数以上の波長領域で蛍光を検出し、前記検出した蛍光データに基づいて、微小粒子に修飾した色素に関する情報を解析する、微小粒子分析方法も提供する。 In the present invention, a plurality of fine particles modified with a dye passing through a flow path are irradiated with one excitation light, and the fluorescence emitted from the fine particles by the irradiation of the excitation light is simultaneously emitted in a plurality of wavelength regions. In a detection unit having a plurality of detectors to be detected, fluorescence is detected for each of the fine particles in a wavelength region equal to or greater than the number of the dyes, and information on the dye modified into the fine particles is analyzed based on the detected fluorescence data. A method for analyzing fine particles is also provided.
本発明によれば、微小粒子から発せられた蛍光のスペクトラム情報を提示することが可能であるため、ユーザーが測定データを視覚で理解することができる。 According to the present invention, since it is possible to present spectrum information of fluorescence emitted from fine particles, the user can visually understand the measurement data.
以下、本発明を実施するための形態について、添付の図面を参照して詳細に説明する。なお、本発明は、以下に示す各実施形態に限定されるものではない。また、説明は、以下の順序で行う。
１．第１の実施の形態
（スペクトル表示の方法の例）
２．第２の実施の形態
（スペクトル表示する微小粒子分析装置の例）
Hereinafter, embodiments for carrying out the present invention will be described in detail with reference to the accompanying drawings. The present invention is not limited to each of the following embodiments. The description will be given in the following order.
1. 1. First Embodiment (Example of spectrum display method)
2. Second Embodiment (Example of a fine particle analyzer for displaying a spectrum)
＜１．第１の実施の形態＞
［全体構成］
先ず、本発明の第１の実施形態のデータ表示方法について説明する。本実施形態のデータ表示方法においては、細胞やマイクロビーズなどの微小粒子から発せられた蛍光を、複数の波長領域で同時に検出し、波長領域毎の検出データをスペクトル表示する。
<1. First Embodiment>
[overall structure]
First, the data display method of the first embodiment of the present invention will be described. In the data display method of the present embodiment, fluorescence emitted from fine particles such as cells and microbeads is simultaneously detected in a plurality of wavelength regions, and the detection data for each wavelength region is displayed in a spectrum.
［検出データ］
本実施形態のデータ表示方法では、光検出器により検出された光を、波長領域毎に電圧パルス（電気的信号）に変換し、定量化して検出データとする。具体的には、電圧パルスの高さ、幅又は面積を求めて、検出データとする。
[Detected data]
In the data display method of the present embodiment, the light detected by the photodetector is converted into a voltage pulse (electrical signal) for each wavelength region and quantified to obtain detection data. Specifically, the height, width or area of the voltage pulse is obtained and used as the detection data.
［表示形態］
本実施形態のデータ表示方法では、前述した方法で求めた波長領域毎の検出データを、スペクトル表示する。その表示方法は、特に限定されるものではないが、例えば、密度プロット、ドットプロット又は等高線などが挙げられる。また、表示されているスペクトルから特定領域のデータのみを抽出し、そのスペクトラムチャートを拡大表示したり、ヒストグラムや二次元プロットを表示したりすることもできる。
[Display form]
In the data display method of the present embodiment, the detection data for each wavelength region obtained by the above method is spectrally displayed. The display method is not particularly limited, and examples thereof include a density plot, a dot plot, and contour lines. It is also possible to extract only the data of a specific region from the displayed spectrum, enlarge the spectrum chart, and display a histogram or a two-dimensional plot.
更に、このデータ表示方法では、複数の微小粒子を連続して検出することにより取得された検出データを演算処理し、その結果を表示することも可能である。その演算処理としては、例えば、検出データを積算したり、全微粒子の検出データの平均値を算出したりすることなどが挙げられる。更にまた、本実施形態のデータ表示方法では、検出しながら表示を行うこともできるが、検出データを一旦保存し、この保存されたデータを読み出して表示してもよい。その場合も、検出データを演算処理し、その結果を表示してもよい。 Further, in this data display method, it is also possible to perform arithmetic processing on the detection data acquired by continuously detecting a plurality of fine particles and display the result. Examples of the calculation process include integrating the detection data and calculating the average value of the detection data of all fine particles. Furthermore, in the data display method of the present embodiment, the display can be performed while detecting, but the detected data may be temporarily saved and the saved data may be read out and displayed. In that case as well, the detected data may be arithmetically processed and the result may be displayed.
従来の二次元プロットでは、蛍光補正を行っても、そのデータをユーザーが視覚で判断することは困難であった。これに対して、本実施形態のデータ表示方法では、微小粒子から発せられた蛍光のスペクトラム情報を提示することができるため、蛍光補正の有無及び蛍光補正の結果にかかわらず、ユーザーが測定データを視覚で理解することができる。また、本実施形態のデータ表示方法では、特定領域のデータを抽出することにより、微小粒子について種々の情報を得ることが可能である。 In the conventional two-dimensional plot, it is difficult for the user to visually judge the data even if the fluorescence correction is performed. On the other hand, in the data display method of the present embodiment, since the spectrum information of the fluorescence emitted from the fine particles can be presented, the user can display the measurement data regardless of the presence or absence of the fluorescence correction and the result of the fluorescence correction. Can be understood visually. Further, in the data display method of the present embodiment, it is possible to obtain various information about the fine particles by extracting the data in a specific region.
本実施形態のデータ表示方法は、微小粒子や細胞などの分析装置に限らず、例えば、製造装置、検査装置及び医療用装置などにも適用可能である。 The data display method of the present embodiment is applicable not only to an analyzer such as fine particles and cells, but also to, for example, a manufacturing apparatus, an inspection apparatus, a medical apparatus, and the like.
＜２．第２の実施の形態＞
［装置の全体構成］
次に、本発明の第２の実施形態に係る微小粒子分析装置について説明する。図１は本実施形態の微小粒子分析装置の構成を示す図であり、図２はその測定結果の表示例を示す図である。図１に示すように、本実施形態の微小粒子分析装置１には、少なくとも、検出部２と、変換部３と、解析部４と、表示部５が設けられている。
<2. Second Embodiment>
[Overall configuration of device]
Next, the microparticle analyzer according to the second embodiment of the present invention will be described. FIG. 1 is a diagram showing a configuration of a fine particle analyzer of the present embodiment, and FIG. 2 is a diagram showing a display example of the measurement result. As shown in FIG. 1, the microparticle analyzer 1 of the present embodiment is provided with at least a detection unit 2, a conversion unit 3, an analysis unit 4, and a display unit 5.
［検出部２の構成］
検出部２は、分析対象の微小粒子から発せられた蛍光を、複数の波長領域で同時に検出可能な構成であればよい。具体的には、波長領域毎にその波長領域を検出可能なセンサを配置した構成や、多チャンネル光電子倍増管（Photo-Multiplier Tube：ＰＭＴ）などのように複数の光を同時に検出可能な検出器を備えた構成とすることができる。この検出部２で検出する波長領域の数、即ち、検出部２に配設される検出器のチャンネル数又はセンサ数などは、使用する色素の数以上であればよいが、現在のマルチカラー分析では６〜８色が一般的で、最大でも１０〜１２色であることから、１２以上であることが好ましい。
[Configuration of detection unit 2]
The detection unit 2 may have a configuration in which fluorescence emitted from the fine particles to be analyzed can be simultaneously detected in a plurality of wavelength regions. Specifically, a configuration in which a sensor capable of detecting the wavelength region is arranged for each wavelength region, or a detector capable of simultaneously detecting a plurality of lights such as a multi-channel photomultiplier tube (PMT). Can be configured to include. The number of wavelength regions detected by the detection unit 2, that is, the number of channels or sensors of the detector arranged in the detection unit 2, may be equal to or greater than the number of dyes used, but the current multicolor analysis In general, 6 to 8 colors are common, and the maximum is 10 to 12 colors, so 12 or more is preferable.
また、本実施形態の微小粒子分析装置１では、検出部２に分光器を設け、微小粒子から発せられた蛍光が、この分光器で分光された後、多チャンネルＰＭＴなどの検出器に入射する構成としてもよい。更に、検出部２には、必要に応じて、対物レンズ、集光レンズ、ピンホール、バンドカットフィルター、ダイクロックミラーなどを設けることもできる。 Further, in the microparticle analyzer 1 of the present embodiment, a spectroscope is provided in the detection unit 2, and the fluorescence emitted from the microparticles is separated by this spectroscope and then incident on a detector such as a multi-channel PMT. It may be configured. Further, the detection unit 2 may be provided with an objective lens, a condenser lens, a pinhole, a band cut filter, a die clock mirror, or the like, if necessary.
［変換部３の構成］
変換部３は、検出部２で検出した各波長領域の光を、それぞれ電圧パルス（電気的信号）に変換するものであり、例えばＡＤコンバータなどを使用することができる。
[Structure of conversion unit 3]
The conversion unit 3 converts the light in each wavelength region detected by the detection unit 2 into voltage pulses (electrical signals), and an AD converter or the like can be used, for example.
［解析部４の構成］
解析部４では、電子計算機などを用いて変換部３で変換された電圧パルスを処理して定量化し、検出データとする。具体的には、電圧パルスの高さ（ｐｅａｋ）、幅（ｗｉｄｔｈ）又は面積（ｉｎｔｅｇｒａｌ）を求め、これらを検出データとして使用する。そして、その結果は、波長領域毎に関連付けられ、記憶部（図示せず）などに保存される。
[Structure of analysis unit 4]
The analysis unit 4 processes and quantifies the voltage pulse converted by the conversion unit 3 using a computer or the like, and uses it as detection data. Specifically, the height (peak), width (wise) or area (integral) of the voltage pulse is obtained, and these are used as detection data. Then, the result is associated with each wavelength region and stored in a storage unit (not shown) or the like.
［表示部５の構成］
表示部５は、解析部４での処理で得た検出データ、即ち、本実施形態の微小粒子分析装置１の測定結果を表示するものである。具体的には、表示部５には、例えば、図２に示すように、横軸に検出部のチャンネル番号をとり、縦軸に強度をとって、チャンネル毎の蛍光強度を示した「密度プロット」などが表示される。このとき、チャンネル番号が大きくなるに従い、検出波長が高くなるようにすると、検出光（蛍光）のスペクトラム情報が得られる。
[Structure of display unit 5]
The display unit 5 displays the detection data obtained by the processing in the analysis unit 4, that is, the measurement result of the fine particle analyzer 1 of the present embodiment. Specifically, on the display unit 5, for example, as shown in FIG. 2, the horizontal axis represents the channel number of the detection unit, the vertical axis represents the intensity, and the fluorescence intensity for each channel is indicated by a “density plot”. ] Etc. are displayed. At this time, if the detection wavelength is increased as the channel number increases, spectrum information of the detected light (fluorescence) can be obtained.
［微小粒子分析装置１の動作］
次に、本実施形態の微小粒子分析装置１の動作について説明する。本実施形態の微小粒子分析装置１で分析とする微小粒子は、特に限定されるものではないが、例えば細胞やマイクロビーズなどが挙げられる。また、これら微小粒子を修飾する蛍光色素の種類及び数も、特に限定されるものではなくＦＩＴＣ（fluorescein isothiocyanete：Ｃ２１Ｈ１１ＮＯ５Ｓ）、ＰＥ（phycoerythrin）、ＰｅｒＣＰ（periidinin chlorophyll protein）、ＰＥ−Ｃｙ５及びＰＥ−Ｃｙ７などの公知の色素を、必要に応じて適宜選択して使用することができる。更に、各微小粒子が複数の蛍光色素で修飾されていてもよい。
[Operation of microparticle analyzer 1]
Next, the operation of the fine particle analyzer 1 of the present embodiment will be described. The fine particles to be analyzed by the fine particle analyzer 1 of the present embodiment are not particularly limited, and examples thereof include cells and microbeads. The type and number of fluorescent dyes that modify these fine particles are also not particularly limited, and FITC (fluorescein isothiocyanete: C21H11NO5S), PE (phycoerythrin), PerCP (periidinin chlorophyll protein), PE-Cy5 and PE-Cy7. A known dye such as the above can be appropriately selected and used as needed. Further, each fine particle may be modified with a plurality of fluorescent dyes.
この微小粒子分析装置１を使用して微小粒子を光学的に分析する際は、先ず、光照射部の光源から励起光を出射し、流路内を通流する微小粒子に照射する。次に、微小粒子から発せられた蛍光を、検出部２で検出する。その際、例えば、微小粒子から発せられた蛍光を、プリズムや回折格子などの分光器で分光し、検出部２に配設された各センサやＰＭＴの各チャンネルに、それぞれ異なる波長領域の光を入射させる。 When optically analyzing fine particles using this fine particle analyzer 1, first, excitation light is emitted from the light source of the light irradiation unit, and the fine particles passing through the flow path are irradiated. Next, the detection unit 2 detects the fluorescence emitted from the fine particles. At that time, for example, the fluorescence emitted from the fine particles is separated by a spectroscope such as a prism or a diffraction grating, and light in a different wavelength region is transmitted to each sensor and each channel of the PMT arranged in the detection unit 2. Make it incident.
その後、検出部２において取得された各波長領域のデータは、変換部３で電圧パルスに変換され、更に、解析部４において定量化され、保存される。そして、その結果は、例えば図２に示す「密度プロット」などの形式で、表示部５に表示される。なお、図２に示す「密度プロット」は、３２チャンネルＰＭＴを使用し、ＦＩＴＣのみで修飾されているサンプル、ＰＥのみで修飾されているサンプル及びＮｅｇａｔｉｖｅサンプルを混合したものを測定した結果である。 After that, the data in each wavelength region acquired by the detection unit 2 is converted into voltage pulses by the conversion unit 3, and further quantified and stored by the analysis unit 4. Then, the result is displayed on the display unit 5 in a format such as the "density plot" shown in FIG. The "density plot" shown in FIG. 2 is the result of measuring a mixture of a sample modified only with FITC, a sample modified only with PE, and a Negative sample using a 32-channel PMT.
この「密度プロット」は、横軸にＰＭＴのチャンネル番号（波長依存番号）をとり、縦軸に蛍光強度をとって、積算数０を青色とし、積算数が増す、即ち、密度が高くなるに従い赤色になるようにしている。このとき、検出波長が最も小さいチャンネルの番号を１とし、番号が大きくなるに従い検出波長が高くなるようにすれば、蛍光スペクトルに相当する情報が得られる。そして、このスペクトラム情報から、ユーザーは、サンプルが何の蛍光にラベルされているかを認識することができる。 In this "density plot", the horizontal axis is the PMT channel number (wavelength-dependent number), the vertical axis is the fluorescence intensity, the integrated number 0 is blue, and the integrated number increases, that is, as the density increases. I try to make it red. At this time, if the number of the channel having the smallest detection wavelength is set to 1 and the detection wavelength becomes higher as the number increases, information corresponding to the fluorescence spectrum can be obtained. Then, from this spectrum information, the user can recognize what fluorescence the sample is labeled with.
更に、本実施形態の微小粒子分析装置１では、図２に示すデータについて、特定のサンプル群だけを選び出し、そのサンプル（微小粒子）のみのデータを抽出し表示するゲーティングを行うこともできる。その際の表示形態は特に限定されるものではなく、ヒストグラム、二次元プロット及びスペクトラムチャートなど、種々の形態で表示することが可能である。図３は図２に示す表示例についてゲートをかける方法を示す図であり、図４はゲート後の表示例を示す図である。従来のフローサイトメータでは、通常、二次元プロットに対してゲーティング処理を行っているため、２チャンネル分の情報にのみゲートをかけることとなる。 Further, in the microparticle analyzer 1 of the present embodiment, it is also possible to perform gating that selects only a specific sample group from the data shown in FIG. 2 and extracts and displays the data of only the sample (fine particles). The display form at that time is not particularly limited, and can be displayed in various forms such as a histogram, a two-dimensional plot, and a spectrum chart. FIG. 3 is a diagram showing a method of gated the display example shown in FIG. 2, and FIG. 4 is a diagram showing a display example after the gate. In the conventional flow cytometer, since the gating process is usually performed on the two-dimensional plot, only the information for two channels is gated.
これに対して、図３に示すように、本実施形態の微小粒子分析装置１では、蛍光スペクトルについて、例えば１０チャンネル分まとめてゲートをかける。そして、図４に示すように、ゲーティングしたサンプルのデータを、スペクトラムプロットで、ドットプロットモードにしたり、色を変化させたりすることも可能である。これにより、より明示的なゲーティングを実現することが可能であり、そのデータをユーザーが明確に確認することができる。また、ゲーティングしたサンプルのデータを、二次元プロットで表示することも可能である。 On the other hand, as shown in FIG. 3, in the microparticle analyzer 1 of the present embodiment, for example, 10 channels are collectively gated for the fluorescence spectrum. Then, as shown in FIG. 4, it is also possible to set the gated sample data to the dot plot mode or change the color in the spectrum plot. This makes it possible to achieve more explicit gating and allows the user to clearly see the data. It is also possible to display the data of the gated sample in a two-dimensional plot.
また、蛍光スペクトルに基づきゲートする領域を選択できるため、例えば１つの微小粒子に２種類の蛍光色素が固定されているのか、それぞれ異なる蛍光色素で修飾された２個の微小粒子を含むのかも、容易に切り分けることができる。更に、他の蛍光色素からの漏れ込みがない部分をゲーティングすることにより、蛍光補正の有無及び蛍光補正の結果にかかわらず、ユーザーは、視覚によって、表示されているデータから、種々の情報を得ることが可能である。 In addition, since the region to be gated can be selected based on the fluorescence spectrum, for example, it may be that two types of fluorescent dyes are fixed to one fine particle, or two fine particles modified with different fluorescent dyes are included. It can be easily separated. Furthermore, by gating the part that does not leak from other fluorescent dyes, the user can visually obtain various information from the displayed data regardless of the presence or absence of fluorescence correction and the result of the fluorescence correction. It is possible to obtain.
なお、本実施形態の微小粒子分析装置１では、前述した「密度プロット」、「ドットプロット」だけでなく、「等高線プロット」、「二次元プロット」、「二次元ヒストグラム」などを表示することも可能である。また、複数の微小粒子を連続して測定し、検出部２で検出されたデータを随時積算し、表示部５に表示されている蛍光スペクトルにリアルタイムで反映させることもできる。更に、保存されたデータを読み出して使用して表示したり、複数の微小粒子を連続して測定した結果を一旦保存し、全サンプルの平均値を使用して表示したりすることもできる。 The microparticle analyzer 1 of the present embodiment may display not only the above-mentioned "density plot" and "dot plot" but also "contour line plot", "two-dimensional plot", "two-dimensional histogram" and the like. It is possible. It is also possible to continuously measure a plurality of fine particles, integrate the data detected by the detection unit 2 at any time, and reflect it in the fluorescence spectrum displayed on the display unit 5 in real time. Further, the stored data can be read out and used for display, or the results of continuous measurement of a plurality of fine particles can be temporarily stored and displayed using the average value of all samples.
１ 微小粒子分析装置
２ 検出部
３ 変換部
４ 解析部
５ 表示部
1 Fine particle analyzer 2 Detection unit 3 Conversion unit 4 Analysis unit 5 Display unit
Claims (1)
前記スペクトルに対するゲーティング処理に応じて前記ゲーティング処理された領域のデータのみを表示し、
前記検出データは、前記複数の微小粒子のうち流路を通流する一の微小粒子から発せられた蛍光を、複数の波長領域で検出した光を示す値である表示方法。 Based on a plurality of detection data detected for each wavelength region for a plurality of fine particles, information indicating the number of detections of the detection data specified for each intensity in the wavelength region is obtained as wavelength information indicating the wavelength region. Display the spectrum against
Only the data of the gated region is displayed according to the gating process for the spectrum.
The detection data is a display method in which the fluorescence emitted from one of the plurality of fine particles passing through the flow path is a value indicating light detected in a plurality of wavelength regions.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2020124899A JP7028287B2 (en) | 2020-07-22 | 2020-07-22 | Fine particle analysis system and fine particle analysis method |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2020124899A JP7028287B2 (en) | 2020-07-22 | 2020-07-22 | Fine particle analysis system and fine particle analysis method |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2019035531A Division JP6741100B2 (en) | 2019-02-28 | 2019-02-28 | Microparticle analyzer and microparticle analysis method |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2020180984A true JP2020180984A (en) | 2020-11-05 |
| JP7028287B2 JP7028287B2 (en) | 2022-03-02 |
Family
ID=73023967
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2020124899A Active JP7028287B2 (en) | 2020-07-22 | 2020-07-22 | Fine particle analysis system and fine particle analysis method |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP7028287B2 (en) |
Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0572113A (en) * | 1991-09-11 | 1993-03-23 | Hitachi Ltd | Fine particle measurement and quantitative determination using fine particle |
| JPH06148076A (en) * | 1992-11-10 | 1994-05-27 | Hamamatsu Photonics Kk | Sequence determination for nucleic acid, method and device for detecting single molecule, and sample preparing method |
| DE19935047A1 (en) * | 1999-07-26 | 2001-02-22 | Johannes L J Frank | Flow-cytometric analysis of leukocyte subpopulations, comprises combining fluorescence-labeled components with a cell system and detecting in a single batch through fluorescence-induced label reactions |
| US6738502B1 (en) * | 1999-06-04 | 2004-05-18 | Kairos Scientific, Inc. | Multispectral taxonomic identification |
| US20050275839A1 (en) * | 2004-04-08 | 2005-12-15 | Robinson Joseph P | Multi-spectral detector and analysis system |
| JP2009109218A (en) * | 2007-10-26 | 2009-05-21 | Sony Corp | Optical measuring method and optical measuring device of fine particle |
| JP2009270990A (en) * | 2008-05-09 | 2009-11-19 | Sony Corp | Optical measurement method using passage and device therefor |
| JP2010071662A (en) * | 2008-09-16 | 2010-04-02 | Nikon Corp | Spectral image processing method, spectral image processing program and spectral imaging system |
| JP6172356B2 (en) * | 2016-07-21 | 2017-08-02 | ソニー株式会社 | Display method and fine particle analyzer |
-
2020
- 2020-07-22 JP JP2020124899A patent/JP7028287B2/en active Active
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0572113A (en) * | 1991-09-11 | 1993-03-23 | Hitachi Ltd | Fine particle measurement and quantitative determination using fine particle |
| JPH06148076A (en) * | 1992-11-10 | 1994-05-27 | Hamamatsu Photonics Kk | Sequence determination for nucleic acid, method and device for detecting single molecule, and sample preparing method |
| US6738502B1 (en) * | 1999-06-04 | 2004-05-18 | Kairos Scientific, Inc. | Multispectral taxonomic identification |
| DE19935047A1 (en) * | 1999-07-26 | 2001-02-22 | Johannes L J Frank | Flow-cytometric analysis of leukocyte subpopulations, comprises combining fluorescence-labeled components with a cell system and detecting in a single batch through fluorescence-induced label reactions |
| US20050275839A1 (en) * | 2004-04-08 | 2005-12-15 | Robinson Joseph P | Multi-spectral detector and analysis system |
| JP2009109218A (en) * | 2007-10-26 | 2009-05-21 | Sony Corp | Optical measuring method and optical measuring device of fine particle |
| JP2009270990A (en) * | 2008-05-09 | 2009-11-19 | Sony Corp | Optical measurement method using passage and device therefor |
| JP2010071662A (en) * | 2008-09-16 | 2010-04-02 | Nikon Corp | Spectral image processing method, spectral image processing program and spectral imaging system |
| JP6172356B2 (en) * | 2016-07-21 | 2017-08-02 | ソニー株式会社 | Display method and fine particle analyzer |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP7028287B2 (en) | 2022-03-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US9625388B2 (en) | Cell analysis apparatus and cell analysis method | |
| US9025145B2 (en) | Flow cytometry system and method for applying gain to flow cytometry data | |
| US11727612B2 (en) | Microparticle analyzing apparatus and data displaying method | |
| US11454588B2 (en) | Fluorescent spectrum correcting method and fluorescent spectrum measuring device | |
| US8779387B2 (en) | Method and system for detecting fluorochromes in a flow cytometer | |
| CN107525585B (en) | Spectrum analysis apparatus, spectrum analysis method, and method of displaying spectrogram | |
| JP2018527559A (en) | System and method for adjusting cytometer measurements | |
| JP2020122803A (en) | Microparticle measuring device, information processing device and information processing method | |
| JP6172356B2 (en) | Display method and fine particle analyzer | |
| EP3882603A1 (en) | Information processing device, information processing method, and computer program | |
| JP5975074B2 (en) | Data display method, program, data analysis apparatus, and fine particle analysis system | |
| Grégori et al. | Hyperspectral cytometry | |
| JP7028287B2 (en) | Fine particle analysis system and fine particle analysis method | |
| JP6741100B2 (en) | Microparticle analyzer and microparticle analysis method | |
| JP6489167B2 (en) | Data display method and fine particle analyzer | |
| JP2018163162A (en) | Microparticle measuring apparatus | |
| CN114008444A (en) | Particle analysis system with autofluorescence spectrum correction | |
| Goddard et al. | Cellular discrimination based on spectral analysis of instrinic fluorescence |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20200820 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210706 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210831 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20220118 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20220131 |
|
| R151 | Written notification of patent or utility model registration |
Ref document number: 7028287 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R151 |