JP2020171279A - トマト雑種hn5003及び親系統seng9234 - Google Patents
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Abstract
Description
下記の説明及び表では、多くの用語が使用される。そのような用語に与えられる範囲等の本明細書及び特許請求の範囲の明確な且つ一貫した理解を提供するために、下記の定義を提供する。
標準的な園芸条件下(例えば温室)で成長させた場合には、雑種トマトHN5003の成熟した果実は、下記が挙げられるがこれらに限定されない多くの形質を特徴とする:濃い紫色の皮色、高いアントシアニン含有量、萼片(萼)下の赤色の星形、深い赤色の成熟した果肉、丸い形、約35〜45グラムの平均重量、及び3.5〜4.5cmの平均直径、並びに甘味(約6〜8度のBrix)、高い酸味、及び(高いグルタミン酸塩及び他の代謝産物の結果としての)風味/うま味を特徴とする良好な味感。高い入射光の条件下で見た場合には、外面の果実色はほとんど黒色に見える可能性がある。さらに、より低い光の条件下で栽培した場合には、紫色の果実色が弱い可能性がある。標準的な園芸条件下であっても、成熟した果実の外面の色は赤のいくつかの領域を保持し得、特に、より少ない入射光に曝露された果実の部分を保持し得る。
実施形態では、組織培養及び再生によりトマト植物を増殖させ得る。様々な植物組織の組織培養物、及びこの組織培養物からの植物の再生は公知である。例えば、(非特許文献4)、(非特許文献5)、(非特許文献6)、(非特許文献7)、(非特許文献8)、(非特許文献9)、及び(非特許文献10)を参照し得る。文献から明らかなように、これらの植物を得る方法が日常的に使用されており且つ高い成功率を有するような最新技術が存在する。そのため、本発明の別の態様は、成長及び分化の際に、トマト雑種HN5003又は系統SENG9234の所望の特徴を有するトマト植物を生じる細胞を提供することである。任意選択的に、トマト雑種HN5003又は系統SENG9234の生理学的特徴及び形態学的特徴の全て又は本質的に全てを含む本発明の組織培養物からトマト植物を再生し得る。
本発明はまた、第1の親トマト植物と第2の親トマト植物とを交配することによりトマト植物を作出する方法であって、第1の及び/又は第2の親トマト植物は、トマト雑種HN5003又は系統SENG9234の植物である、方法も対象である。そのため、トマト雑種HN5003又は系統SENG9234を使用する下記の例示的な方法のいずれも本発明の一部である:自殖、戻し交配、雑種作出、集団への交配、二重半数体作出、及び同類のもの。少なくとも一方の親としてトマト雑種HN5003又は系統SENG9234を使用して作出された全ての植物(例えば、トマト雑種HN5003又は系統SENG9234に由来するトマト植物から開発されたもの)は本発明の範囲内である。有利には、トマト雑種HN5003又は系統SENG9234を、他の異なるトマト植物(例えば近交系)との交配で使用して、所望の特徴を有する第1世代(F1)トマト雑種の種子及び植物を作出し得る。本発明のトマト植物を、外因性導入遺伝子が導入されて本発明の植物により発現される形質転換にも使用し得るか、又は遺伝子編集若しくは変異誘発による遺伝子変化の導入のためにも使用し得る。当業者に既知の多くのプロトコルの内のいずれかによる本発明の品種の伝統的な育種方法、遺伝子編集、変異誘発、又は形質転換のいずれかを通じて作製された遺伝的バリアントは、本発明の範囲であることが意図されている。
特定のタンパク質産物をコードする遺伝子の単離及びキャラクタリゼーションを可能にしている分子生物学的技術の出現により、植物生物学の分野の科学者は、特定の方法で植物の形質を改変するために、(任意選択により非天然のプロモータにより駆動される)天然の(内因性の)核酸のさらなる又は改変されたバージョン等の外来性の核酸を含み且つ発現するための植物のゲノムの操作に強い関心を持った。異なる種に由来するか、同一の種に由来するか、又は人工配列に由来するかに関わらず、形質転換又は様々な育種方法を使用してゲノムに導入されるあらゆる核酸配列は、本明細書では総称して「導入遺伝子」と称される。過去15〜20年にわたり、トランスジェニック植物を作出するいくつかの方法が開発されており、特定の実施形態では、本発明も、本明細書で開示されているトマト植物の形質転換バージョンに関する。
発現ベクターは概して、調節エレメント(例えばプロモータ)に作動可能に連結された、選択マーカーを含むか又はコードする少なくとも1種の核酸を含み、この調節エレメントは、このマーカーを含む形質転換細胞が、負の選択(例えば、この選択マーカーを含まない細胞の増殖を阻害すること)又は正の選択(例えば、この選択マーカーによりコードされる産生物に関するスクリーニング)により回収されることを可能にする。植物形質転換のために一般に使用される多くの選択マーカーが形質転換分野で公知であり、例えば、抗生物質若しくは除草剤であり得る選択的化学物質を代謝的に解毒する酵素をコードする核酸、又は阻害剤に対して非感受性である改変標的をコードする核酸が挙げられる。正の選択方法もこの分野で既知である。
発現ベクターに含まれる導入遺伝子は一般に、調節エレメント(例えばプロモータ)を含むヌクレオチド配列により駆動される。単独で又はプロモータと組み合わせて使用され得る他の調節エレメントと同様に、形質転換分野では多数のタイプのプロモータが公知である。
導入遺伝子により生成されたポリペプチドの細胞内区画(例えば、葉緑体、液胞、ペルオキシソーム、グリオキシソーム、細胞壁、若しくはミトコンドリア)への輸送、又はアポプラストへの分泌のための輸送は一般に、シグナル配列をコードするヌクレオチド配列を、目的のポリペプチドをコードする核酸の5’領域及び/又は3’領域に作動可能に連結することにより達成される。このコード配列の5’末端及び/又は3’末端でのシグナル配列は、このポリペプチドを特定の細胞内区画の標的に定める。
本発明に係るトランスジェニック植物により、外来性タンパク質を商業的な量で製造し得る。そのため、当分野で十分に理解されている、形質転換植物の選択及び増殖のための技術により、従来の方法で収穫される複数のトランスジェニック植物が得られ、次いで目的の組織又は全バイオマスから外来性ポリペプチドを抽出し得る。植物バイオマスからのタンパク質抽出を、例えば(非特許文献22)により考察されている既知の方法により達成し得る。代表的な実施形態によれば、外来性タンパク質の商業的製造のために用意されるトランスジェニック植物は、本発明のトマト植物である。別の実施形態では、目的のバイオマスは種子及び/又は果実である。
生物学的植物形質転換プロトコル及び物理的植物形質転換プロトコル等の、様々な植物形質転換の方法が開発されている。例えば(非特許文献23)を参照されたい。加えて、植物細胞又は組織の形質転換及び植物再生のための発現ベクター及びインビトロでの培養方法が利用可能である。例えば(非特許文献24)を参照されたい。一般に使用される植物形質転換方法として、アグロバクテリウム媒介形質転換、並びに直接導入遺伝子導入方法(例えば、マイクロプロジェクタイル媒介形質転換、超音波処理、リポソーム融合又はスフェロプラスト融合、及びプロトプラスト又は全細胞のエレクトロポレーション)が挙げられる。
用語「トマト植物」が本発明の文脈で使用される場合、この用語はまた、例えば、戻し交配、ゲノム編集、誘発される若しくは天然に存在する変異、又は遺伝子操作により開発された植物又は変種のあらゆる単一遺伝子座変換も含み、変種の所望の形態学的特徴及び生理学的特徴の本質的に全て(例えば、トマト雑種HN5003の場合、濃い紫色の皮色、萼片(萼)下の皮上の赤色の星形、深い赤色の成熟した果肉、及び/若しくは丸い形、又は本明細書(例えば表1)で説明されているあらゆる他の形質を有する成熟した果実;並びにトマト系列SENG9234の場合、濃い紫色の皮色、萼片(萼)下の皮上の緑色の星形、淡い黄色がかった緑色の成熟した果肉、及び/若しくは丸い形、又は本明細書(例えば表1)で説明されているあらゆる他の形質を有する成熟した果実)が、この変種に導入される所望の追加形質を付与する1つ又は複数の遺伝子座に加えて回復される。
本発明はさらに、トマト雑種HN5003若しくは系統SENG9234又はその子孫の遺伝的特徴を決定する方法(例えば、トマト雑種HN5003若しくは系統SENG9234又はその子孫の遺伝子型を決定する方法)を提供する。実施形態では、この方法は、(例えば、核酸の増幅及び/又は核酸の配列決定を含む方法により核酸マーカーを検出することによって)トマト雑種HN5003若しくは系統SENG9234の植物又はその子孫植物のゲノム中で少なくとも第1の多型を検出することを含む。例証するために、実施形態では、この方法は、この植物から核酸のサンプルを得ること、及びこの核酸サンプル中で少なくとも第1の多型を検出することを含む。任意選択的に、この方法は、この植物のゲノム中で複数種の多型(例えば、2種以上、3種以上、4種以上、5種以上、6種以上、8種以上、又は10種以上の多型等)を検出することを含み得る。代表的な実施形態では、この方法は、多型を検出する工程の結果をコンピュータ読み取り可能な媒体に保存することをさらに含む。本発明は、そのような方法により製造されたコンピュータ読み取り可能媒体をさらに提供する。
出願人は、ブダペスト条約の規定の下にて2019年4月9日にそれぞれアクセッション番号NCIMB 43381及びアクセッション番号NCIMB 43380でNCIMB,Aberdeen AB21 9YA,Scotland,UKによりトマト系統SENG9234及びトマト雑種HN5003の少なくとも2500個の種子の寄託を行なっている。トマト系統SENG9234及びトマト雑種HN5003のこれらの寄託は、30年の期間にわたり、又は最新の請求から5年にわたり、又は特許の有効期間にわたり(いずれか長い方)公的な寄託機関であるNCIMB寄託機関で維持され、この期間の最中に寄託された種子の内のいずれかが生存不能になる場合には交換される。加えて、出願人は、サンプルの生存能力の指標の提示等の37 C.F.R.§§1.801−1.809の全て要件を満たしている。これらの寄託へのアクセスは、本出願の長官への継続中に、請求に応じて有効であるだろう。一般に対するNCIMBからの寄託物質の利用可能性への全ての制限は取消不能であり、特許の付与時に制限は解除されない。出願人は、NCIMBからの寄託物質の利用可能性に制限を課さないが、出願人は、生物物質の譲渡又はこの生物物質の商業目的での輸送に関する法律によって課されたあらゆる制限を放棄する権限を有しない。出願人は、この特許下で又は植物品種保護法(Plant Variety Protection Act)(7 USC § 2321以下)下で付与される権利のいかなる侵害も放棄しない。
Claims (30)
- トマト雑種HN5003又は系統SENG9234を生じる種子であって、種子の代表サンプルはそれぞれ、NCIMBアクセッション番号43380及びNCIMBアクセッション番号43381で寄託されている、種子。
- 請求項1に記載の種子から生じたトマト雑種HN5003又は系統SENG9234の植物。
- 請求項2に記載のトマト植物の全ての生理学的特徴及び形態学的特徴を有するトマト植物又はその一部。
- 請求項3に記載の植物を生じる種子。
- 請求項2に記載の植物に由来する子孫トマト植物であって、請求項2に記載の植物の対立遺伝子の少なくとも90%を含み、且つ濃い紫色の果実色を特徴とする子孫トマト植物。
- 請求項2に記載の植物の植物部位。
- 前記植物部位は、葉、果実、F1種子、新芽、花粉、胚珠、葯、根、根茎、接ぎ穂、又は細胞である、請求項6に記載の植物部位。
- 請求項2に記載のトマト植物の再生可能な細胞の組織培養物。
- 請求項8に記載の組織培養物から再生されたトマト植物又はその自殖子孫であって、前記トマト植物は、トマト雑種HN5003又は系統SENG9234の生理学的特徴及び形態学的特徴の全てを含む、トマト植物又はその自殖子孫。
- トマト種子を作出する方法であって、請求項2に記載の植物と、それ自体又は第2のトマト植物とを交配すること、及び得られた種子を収穫することを含む方法。
- 請求項10に記載の方法により作出されたF1種子。
- 請求項11に記載の種子を成長させることにより生じたトマト植物又はその一部。
- 根茎及び接ぎ穂を含む接木トマト植物であって、請求項2に記載の植物を前記接ぎ穂として使用し、前記根茎は別のトマト植物由来である、接木トマト植物。
- 接木トマト植物を作出する方法であって、
(a)請求項2に記載の植物から接ぎ穂を準備すること、
及び
(b)前記接ぎ穂を、別のトマト植物由来の根茎に接ぎ木すること
を含む方法。 - トマト雑種HN5003又は系統SENG9234に由来するトマト植物の種子を作出する方法であって、
(a)請求項2に記載の植物と別のトマト植物とを交配すること、
(b)種子を生じさせること、
(c)工程(b)の前記種子から植物を成長させて、トマト雑種HN5003又は系統SENG9234に由来する植物を生じさせること、
(d)工程(c)の前記植物を自殖させるか、又は第2のトマト植物と交配して、トマト雑種HN5003又は系統SENG9234に由来するさらなるトマト種子を形成すること、
並びに
(e)任意に工程(c)及び(d)を1回以上繰り返して、トマト雑種HN5003又は系統SENG9234から、さらに由来するトマト種子を生成することであり、工程(c)では、工程(b)の前記種子から植物を成長させる代わりに、工程(d)の前記さらなるトマト種子から植物を成長させること
を含む方法。 - 請求項15に記載の方法により作出されたトマト種子。
- トマト雑種HN5003又は系統SENG9234を栄養繁殖させる方法であって、
(a)請求項2に記載の前記植物から繁殖されることが可能な組織を採取すること、
(b)前記組織を培養して、増殖した新芽を得ること、
(c)前記増殖した新芽を発根させて、発根した小植物を得ること、
及び
(d)任意に、前記発根した小植物から植物を成長させること
を含む方法。 - 請求項17に記載の方法により得られたトマト小植物又はトマト植物であって、トマト雑種HN5003又は系統SENG9234の生理学的特徴及び形態学的特徴の全てを含むトマト小植物又はトマト植物。
- 単一遺伝子座変換をさらに含む請求項2に記載の植物。
- 前記単一遺伝子座変換により、雄性不稔、昆虫抵抗性、線虫抵抗性、耐病性、除草剤耐性、非生物的ストレス耐性、脂肪酸代謝の改変、炭水化物代謝の改変、果実の甘味の増加、果実の熟成の改善、果実のフラボノイド含有量の増加、果実色の改変、又は上述の組み合わせが付与される、請求項19に記載の植物。
- 請求項20に記載の植物を生じる種子。
- トマト雑種HN5003又は系統SENG9234に所望の追加形質を導入する方法であって、
(a)反復親としての請求項2に記載の植物と、所望の追加形質を含む別のトマト植物とを交配して、F1子孫を作出すること、
(b)前記所望の追加形質を含むF1子孫を選択すること、
(c)前記選択されたF1子孫と、工程(a)と同一の反復親とを交配して、戻し交配子孫を作出すること、
(d)前記所望の追加形質を含む戻し交配子孫を選択すること、
並びに
(e)任意に工程(c)及び(d)を1回以上繰り返して、前記所望の追加形質を含み、他の点ではトマト雑種HN5003又は系統SENG9234の生理学的特徴及び形態学的特徴の全てを含む、トマト雑種HN5003又は系統SENG9234に由来する植物を作出することであり、工程(c)では、工程(b)の前記選択されたF1子孫の代わりに、工程(d)で得られた、前記選択された戻し交配子孫を使用すること
を含む方法。 - 請求項22に記載の方法により作出されたトマト植物又はその自殖子孫であって、前記トマト植物は前記所望の追加形質を有する、トマト植物又はその自殖子孫。
- 請求項23に記載の植物を生じる種子。
- 請求項22に記載の方法であって、工程(c)の戻し交配を少なくとも3回繰り返して、トマト雑種HN5003又は系統SENG9234に由来する近交系を作出し、前記方法は、前記得られた近交系と別のトマト系統とを交配して、F1雑種子孫植物を作出することをさらに含む、方法。
- 所望の追加形質を含むトマト雑種HN5003又は系統SENG9234の植物を作出する方法であって、請求項2に記載の植物に、前記所望の形質を付与する導入遺伝子を導入することを含む方法。
- 請求項26に記載の方法により作出されたトマト植物又はその自殖子孫であって、前記トマト植物は、前記導入遺伝子を含み且つ前記所望の追加形質を有する、トマト植物又はその自殖子孫。
- 請求項27に記載の植物を生じる種子。
- トマト果実を生産する方法であって、
(a)請求項2に記載のトマト植物を成長させてトマト果実を実らせること、
及び
(b)前記トマト果実を収穫すること
を含む方法。 - トマト加工品を製造する方法であって、
(a)請求項2に記載の植物の果実を得ること、
及び
(b)前記果実を加工して加工品を製造すること
を含む方法。
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