JP2020167971A - Fermented milk, and method of manufacturing fermented milk - Google Patents

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Aoi Murakami
葵 村上
茂樹 加田
Shigeki Kada
茂樹 加田
彰 木村
Akira Kimura
彰 木村
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Abstract

To improve survival property of a Bifidobacterium bacterium, and a specific Lactobacillus bacterium, particularly survival property when storing in refrigeration without affecting a flavor of a fermented milk, and without requiring addition of a material other than a raw material for production of the fermented milk.SOLUTION: The problem can be solved by a fermented milk in which the viable bacteria count of a Bifidobacterium bacterium at a final storage day is 1.0E+7 cfu/g or more, and a viable bacteria count of a Lactobacillus bacterium is 1.0E+7 cfu/g or more when the fermented milk is stored at 1-10°C for 15-24 days where the Lactobacillus bacterium is one or more selected from the group consisting of Lactobacillus gasseri, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus crispatus, Lactobacilus amylovorus, Lactobacillus gallinarum, and Lactobacillus johnsonii.SELECTED DRAWING: Figure 1

Description

本発明は、冷蔵保存15〜24日目においてビフィドバクテリウム属細菌及び特定のラクトバチルス属細菌の生菌数を、それぞれ、1.0E+7cfu/g以上及び1.0E+7cfu/g以上保持した発酵乳に関する。本発明は、冷蔵保存15〜24日目においてビフィドバクテリウム属細菌及び特定のラクトバチルス属細菌の生菌数を向上させた発酵乳の製造方法に関する。また、本発明は、発酵乳中のビフィドバクテリウム属細菌及び特定のラクトバチルス属細菌の生残性向上方法にも関する。 The present invention is a fermented milk in which the viable numbers of bifidobacteria and specific Lactobacillus bacteria are maintained at 1.0E + 7cfu / g or more and 1.0E + 7cfu / g, respectively, on the 15th to 24th days of refrigerated storage. Regarding. The present invention relates to a method for producing fermented milk in which the viable numbers of Bifidobacterium spp. And specific Lactobacillus spp. Have been improved on the 15th to 24th days of refrigerated storage. The present invention also relates to a method for improving the survival of bifidobacteria and specific Lactobacillus bacteria in fermented milk.

近年、ビフィドバクテリウム属細菌やラクトバチルス属細菌に代表される乳酸菌が有する整腸作用、免疫作用等の機能性が次々と明らかとなっている。製品中でのビフィドバクテリウム属細菌や乳酸菌の生残性を向上させることは、特定保健用食品や機能性表示食品のような保健機能食品への活用といった産業上の大きな利点がある。しかしながら、冷蔵保存中における発酵乳製品はビフィドバクテリウム属細菌や乳酸菌の生存に適した環境ではなく、これまでに、乳中でビフィドバクテリウム属細菌や乳酸菌の生残性を向上させるための様々な解決手段が開示されている。
特許文献1は、酸性(pHが低い)環境にあるプロバイオティクスの乳酸菌及びビフィドバクテリウム属細菌の生残性を向上させることができる、乳酸菌及び/又はビフィドバクテリウム属細菌の生残性向上剤及びそれを用いた食品組成物並びにその製造方法の提供を課題とし、その解決手段として、アミノ酸を有効成分とする、乳酸菌および/またはビフィドバクテリウム属細菌の生残性向上剤を開示している。
特許文献2は、ビフィドバクテリウム属細菌を多く含有する発酵乳を得ることができる後発酵タイプの発酵乳の製造方法の提供を課題として、乳を主成分とする培地にビフィドバクテリウム属細菌を接種し、一次培養した後、得られた培養液に乳酸菌を接種し、容器に充填した後に二次培養する方法を開示している。
特許文献3は、乳酸菌の発酵を促進して、発酵時間を短縮させながら、冷蔵保存中における酸度の上昇を抑制し、適度にマイルドな酸味を維持した嗜好性の高い発酵乳およびその製造方法の提供を課題とし、混合スターターを用いる発酵乳の製造において、原料乳中にラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシズ・ブルガリクスの単独培養液を配合する方法を開示している。
しかしながら、特許文献1に記載の技術では、ヨーグルトミックスに種々のアミノ酸を添加する必要があり、このアミノ酸が最終製品の風味に影響を与える可能性が大きい。特許文献2や3においては、ビフィドバクテリウム属細菌のみではなく、ビフィドバクテリウム属細菌及び乳酸菌の両方の生残性を同時に向上させる方法は開示されていない。
In recent years, the functionality of lactic acid bacteria represented by Bifidobacterium and Lactobacillus, such as intestinal regulation and immunity, has been clarified one after another. Improving the survivability of bifidobacteria and lactic acid bacteria in products has great industrial advantages such as utilization in foods with health claims such as foods for specified health use and foods with functional claims. However, fermented dairy products during refrigerated storage are not an environment suitable for the survival of bifidobacteria and lactic acid bacteria, and have been used to improve the survival of bifidobacteria and lactic acid bacteria in milk. Various solutions to the above are disclosed.
Patent Document 1 describes the survival of lactic acid bacteria and / or bifidobacteria, which can improve the survival of probiotic lactic acid bacteria and bifidobacteria in an acidic (low pH) environment. Providing a sex improver, a food composition using the same, and a method for producing the same is an issue, and as a solution thereof, a survivability improver for lactic acid bacteria and / or bifidobacteria, which contains an amino acid as an active ingredient, is used. It is disclosed.
Patent Document 2 has an object of providing a method for producing a post-fermentation type fermented milk capable of obtaining fermented milk containing a large amount of bacteria of the genus Bifidobacterium, and presents the genus Bifidobacterium in a medium containing milk as a main component. It discloses a method of inoculating bacteria, primary culturing, then inoculating the obtained culture medium with lactic acid bacteria, filling the container, and then secondary culturing.
Patent Document 3 describes a highly palatable fermented milk and a method for producing the same, which promotes fermentation of lactic acid bacteria, shortens the fermentation time, suppresses an increase in acidity during refrigerated storage, and maintains an appropriately mild acidity. Disclosed is a method of blending a single culture solution of Lactobacillus delbrucky subspecies bulgaricus into raw material milk in the production of fermented milk using a mixed starter.
However, in the technique described in Patent Document 1, it is necessary to add various amino acids to the yogurt mix, and it is highly possible that these amino acids affect the flavor of the final product. Patent Documents 2 and 3 do not disclose a method for simultaneously improving the viability of not only bifidobacteria but also bifidobacteria and lactic acid bacteria.

特許第6088821号Patent No. 6088821 特許第5829483号Patent No. 5829483 特許第6317251号Patent No. 6317251

本発明の課題は、冷蔵保存15〜24日目においてビフィドバクテリウム属細菌及び特定のラクトバチルス属細菌の生菌数を、それぞれ、1.0E+7cfu/g以上及び1.0E+7cfu/g以上保持した発酵乳、並びに前記発酵乳を製造するための製造方法を提供することである。 The subject of the present invention is to maintain the viable cell counts of bifidobacteria and specific Lactobacillus bacteria at 1.0E + 7cfu / g or more and 1.0E + 7cfu / g or more, respectively, on the 15th to 24th days of refrigerated storage. It is to provide fermented milk and a production method for producing said fermented milk.

上記課題を解決するため、本発明には以下の構成が含まれる。
<1>1〜10℃で15〜24日目まで保存した場合に、保存最終日において、ビフィドバクテリウム属細菌の生菌数が、1.0E+7cfu/g以上であり、ラクトバチルス属細菌の生菌数が、1.0E+7cfu/g以上である発酵乳であって、前記ラクトバチルス属細菌が、ラクトバチルス・ガセリ、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・クリスパータス、ラクトバチルス・アミロボラス、ラクトバチルス・ガリナラム、及びラクトバチルス・ジョンソニーからなる群から選択される一種以上である、前記発酵乳。
<2>ビフィドバクテリウム属細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガムであり、そしてラクトバチルス属細菌が、ラクトバチルス・ガセリである、<1>に記載の発酵乳。
<3>(A)ビフィドバクテリウム属細菌を原料ミックスに添加する工程と
(B)前記原料ミックスを発酵させ、発酵乳ミックスを得る工程と
(C)ラクトバチルス属細菌のバルクスターターを前記発酵乳ミックスに添加する工程と
(D)前記発酵乳ミックスを冷蔵及び保存し、発酵乳を得る工程と
を含む、発酵乳の製造方法であって、
前記ラクトバチルス属細菌が、ラクトバチルス・ガセリ、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・クリスパータス、ラクトバチルス・アミロボラス、ラクトバチルス・ガリナラム、及びラクトバチルス・ジョンソニーからなる群から選択される一種以上である、前記製造方法。
<4>ビフィドバクテリウム属細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガムであり、そしてラクトバチルス属細菌が、ラクトバチルス・ガセリである、<3>に記載の発酵乳の製造方法。
<5>(A)工程においてビフィドバクテリウム属細菌に加えて、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシズ・ブルガリクス及びストレプトコッカス・サーモフィルスが添加される、<3>又は<4>に記載の発酵乳の製造方法。
<6>工程(D)が、(C)工程後6時間以内に実施される、<3>〜<5>のいずれかに記載の発酵乳の製造方法。
<7>工程(B)と(C)との間に、(E)前記発酵乳ミックスを20℃以下に冷却する工程を含む、<3>〜<6>のいずれかに記載の発酵乳の製造方法。
<8>(A)ビフィドバクテリウム属細菌を原料ミックスに添加する工程と
(B)前記原料ミックスを発酵させ、発酵乳ミックスを得る工程と
(C)ラクトバチルス属細菌のバルクスターターを発酵乳ミックスに添加する工程と
(D)前記発酵乳ミックスを冷蔵及び保存し、発酵乳を得る工程と
を含む、発酵乳中のビフィドバクテリウム属細菌及びラクトバチルス属細菌の生残性向上方法であって、
前記ラクトバチルス属細菌が、ラクトバチルス・ガセリ、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・クリスパータス、ラクトバチルス・アミロボラス、ラクトバチルス・ガリナラム、及びラクトバチルス・ジョンソニーからなる群から選択される一種以上である、前記生残性向上方法。
<9>ビフィドバクテリウム属細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガムであり、そしてラクトバチルス属細菌が、ラクトバチルス・ガセリである、<8>に記載の発酵乳中のビフィドバクテリウム属細菌及びラクトバチルス属細菌の生残性向上方法。
<10>工程(D)が、(C)工程後6時間以内に実施される、<8>又は<9>に記載の発酵乳中のビフィドバクテリウム属細菌及びラクトバチルス属細菌の生残性向上方法。
<11>工程(B)と(C)との間に、(E)前記発酵乳ミックスを20℃以下に冷却する工程を含む、<8>〜<10>のいずれかに記載の発酵乳中のビフィドバクテリウム属細菌及びラクトバチルス属細菌の生残性向上方法。
In order to solve the above problems, the present invention includes the following configurations.
<1> When stored at 1 to 10 ° C. for 15 to 24 days, the viable count of Bifidobacterium spp. Is 1.0 E + 7 cfu / g or more on the final day of storage, and Lactobacillus spp. Fermented milk having a viable cell count of 1.0E + 7 cfu / g or more, and the Lactobacillus bacteria are Lactobacillus gasseri, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus crispatas, Lactobacillus amyloboras, Lactobacillus galinarum. , And one or more selected from the group consisting of Lactobacillus johnsony, said fermented milk.
<2> The fermented milk according to <1>, wherein the Bifidobacterium bacterium is Bifidobacterium longum, and the Lactobacillus bacterium is Lactobacillus gasseri.
<3> (A) A step of adding Bifidobacterium spp. To a raw material mix, (B) a step of fermenting the raw material mix to obtain a fermented milk mix, and (C) fermenting a bulk starter of Lactobacillus spp. A method for producing fermented milk, which comprises a step of adding to the milk mix and (D) a step of refrigerating and storing the fermented milk mix to obtain fermented milk.
The bacterium belonging to the genus Lactobacillus is one or more selected from the group consisting of Lactobacillus gasseri, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus crispatas, Lactobacillus amylovoras, Lactobacillus galinarum, and Lactobacillus Johnson. The manufacturing method.
<4> The method for producing fermented milk according to <3>, wherein the bacterium belonging to the genus Bifidobacterium is Bifidobacterium longum, and the bacterium belonging to the genus Lactobacillus is Lactobacillus gasseri.
<5> The fermented milk according to <3> or <4>, wherein Lactobacillus delbrucky subspecies bulgaricus and Streptococcus thermophilus are added in addition to Bifidobacterium spp. In step (A). Manufacturing method.
<6> The method for producing fermented milk according to any one of <3> to <5>, wherein the step (D) is carried out within 6 hours after the step (C).
<7> The fermented milk according to any one of <3> to <6>, which comprises (E) a step of cooling the fermented milk mix to 20 ° C. or lower between steps (B) and (C). Production method.
<8> (A) Step of adding Bifidobacterium bacterium to raw material mix, (B) Step of fermenting the raw material mix to obtain fermented milk mix, and (C) Fermented milk of lactobacillus bacterium bulk starter A method for improving the survivability of Bifidobacterium spp. And Lactobacillus spp. In fermented milk, which comprises a step of adding to the mix and (D) a step of refrigerating and storing the fermented milk mix to obtain fermented milk. There,
The bacterium belonging to the genus Lactobacillus is one or more selected from the group consisting of Lactobacillus gasseri, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus crispatas, Lactobacillus amylovoras, Lactobacillus galinarum, and Lactobacillus Johnson. The method for improving survivability.
<9> The Bifidobacterium bacterium in fermented milk according to <8>, wherein the Bifidobacterium bacterium is Bifidobacterium longum and the Lactobacillus bacterium is Lactobacillus gasseri. And a method for improving the survival of Lactobacillus bacteria.
<10> Survival of Bifidobacterium and Lactobacillus bacteria in fermented milk according to <8> or <9>, wherein step (D) is carried out within 6 hours after step (C). How to improve sex.
<11> The fermented milk according to any one of <8> to <10>, which comprises (E) a step of cooling the fermented milk mix to 20 ° C. or lower between steps (B) and (C). Method for improving the viability of Bifidobacterium and Lactobacillus bacteria.

本発明は、冷蔵保存15〜24日目においてビフィドバクテリウム属細菌及び特定のラクトバチルス属細菌の生菌数を、それぞれ、1.0E+7cfu/g以上及び1.0E+7cfu/g以上保持した発酵乳を提供するものである。本発明によれば、発酵乳の製造原料以外のものを添加する必要がなく、そして発酵乳の風味に影響を与えることなく、ビフィドバクテリウム属細菌及び特定のラクトバチルス属細菌の生残性、特に冷蔵保存時における生残性を向上させることができる。 The present invention is a fermented milk in which the viable numbers of bifidobacteria and specific Lactobacillus bacteria are maintained at 1.0E + 7cfu / g or more and 1.0E + 7cfu / g, respectively, on the 15th to 24th days of refrigerated storage. Is to provide. According to the present invention, the survivability of bifidobacteria and certain Lactobacillus bacteria does not need to be added other than the raw material for producing fermented milk and does not affect the flavor of fermented milk. In particular, the survivability during refrigerated storage can be improved.

本発明の発酵乳の製造方法の各工程を示す工程図である。It is a process drawing which shows each process of the manufacturing method of fermented milk of this invention. 従来技術の発酵乳の製造方法の各工程を示す工程図である。It is a process diagram which shows each process of the manufacturing method of fermented milk of the prior art. 冷蔵保存1日目及び24日目における、コントロール及び本発明の発酵乳におけるビフィドバクテリウム・ロンガムの生菌数を表すグラフである。It is a graph which shows the viable cell count of Bifidobacterium longum in the control and the fermented milk of this invention on the 1st day and the 24th day of refrigerated storage. 冷蔵保存1日目及び24日目における、コントロール及び本発明の発酵乳におけるラクトバチルス・ガセリの生菌数を表すグラフである。It is a graph which shows the viable cell count of Lactobacillus gasseri in the control and the fermented milk of this invention on the 1st day and the 24th day of refrigerated storage. 冷蔵保存時における、コントロール及び本発明の発酵乳におけるビフィドバクテリウム・ロンガムの生菌数の推移を表すグラフである。It is a graph which shows the transition of the viable cell count of Bifidobacterium longum in the control and the fermented milk of this invention at the time of refrigerated storage. 冷蔵保存時における、コントロール及び本発明の発酵乳におけるラクトバチルス・ガセリの生菌数の推移を表すグラフである。It is a graph which shows the transition of the viable cell count of Lactobacillus gasseri in the control and the fermented milk of this invention at the time of refrigerated storage.

1.発酵乳
(ビフィドバクテリウム属細菌)
本明細書において「ビフィドバクテリウム属細菌」とは、ビフィドバクテリウム属に属する細菌を意味する。ビフィドバクテリウム属細菌は、ビフィドバクテリウム属に属する細菌であれば特に限定されないが、ビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム・シュードロンガム、ビフィドバクテリウム・ビフィダム、ビフィドバクテリウム・インファンティス、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・アニマリス、ビフィドバクテリウム・アドレスセンティス、ビフィドバクテリウム・ラクティス、ビフィドバクテリウム・カテヌラタム、ビフィドバクテリウム・デンティウムなどが挙げられる。このうち、好ましい例として、ビフィドバクテリウム・ロンガムが挙げられる。また、菌株としては、ビフィドバクテリウム・ロンガムSBT2928株(受託番号:FERM P−10657,寄託日:1989年4月13日,独立行政法人 産業技術総合研究所 特許生物寄託センター)、及びビフィドバクテリウム・シュードロンガムSBT2908株(受託番号:FERM P−10138,寄託日:1988年7月20日,独立行政法人 産業技術総合研究所 特許生物寄託センター)を例示できる。
1. 1. Fermented milk (Bifidobacterium spp.)
As used herein, the term "Bifidobacterium bacterium" means a bacterium belonging to the genus Bifidobacterium. The bacterium belonging to the genus Bifidobacterium is not particularly limited as long as it is a bacterium belonging to the genus Bifidobacterium, but Bifidobacterium longum, Bifidobacterium pseudolongum, Bifidobacterium bifidam, and Bifidobacterium. Umm Infantis, Bifidobacterium Breve, Bifidobacterium Animalis, Bifidobacterium Addresscentis, Bifidobacterium Ractis, Bifidobacterium Catenuratam, Bifidobacterium Dentium, etc. Can be mentioned. Of these, preferred examples include Bifidobacterium longum. The strains include Bifidobacterium longum SBT2928 strain (trust number: FERM P-10657, deposit date: April 13, 1989, Patent Organism Deposit Center, Industrial Technology Research Institute), and Bifido. Bacterium pseudolongum SBT2908 strain (trust number: FERM P-10138, deposit date: July 20, 1988, Patent Organism Deposit Center, Industrial Technology Research Institute) can be exemplified.

(ラクトバチルス属細菌)
本明細書において「ラクトバチルス属細菌」とは、ラクトバチルス属に属する細菌を意味する。本発明において使用されるラクトバチルス属細菌は、ラクトバチルス・ガセリ、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・クリスパータス、ラクトバチルス・アミロボラス、ラクトバチルス・ガリナラム、及びラクトバチルス・ジョンソニーである。本明細書では、これら6種のラクトバチルス属細菌を「特定のラクトバチルス属細菌」と称することがある。ラクトバチルス属細菌は、ラクトバチルス・ガセリが最も好ましい。また、ラクトバチルス・ガセリの菌株としては、ラクトバチルス・ガセリSBT2055株(受託番号:FERM BP−10953,寄託日:2008年2月26日,独立行政法人 産業技術総合研究所 特許生物寄託センター)を例示できる。
(Lactobacillus bacteria)
As used herein, the term "Lactobacillus bacterium" means a bacterium belonging to the genus Lactobacillus. The Lactobacillus bacteria used in the present invention are Lactobacillus gasseri, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus crispatas, Lactobacillus amylovoras, Lactobacillus galinarum, and Lactobacillus Johnson. In the present specification, these six types of Lactobacillus bacteria may be referred to as "specific Lactobacillus bacteria". The Lactobacillus bacterium is most preferably Lactobacillus gasseri. In addition, as a strain of Lactobacillus gasseri, Lactobacillus gasseri SBT2055 strain (trust number: FERM BP-10953, deposit date: February 26, 2008, Patent Organism Depositary, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology) It can be illustrated.

(生菌数)
本発明の発酵乳は、1〜10℃で、好ましくは5〜10℃で、より好ましくは8〜10℃で15〜24日目まで保存した場合に、保存最終日において、ビフィドバクテリウム属細菌の生菌数及び特定のラクトバチルス属細菌の生菌数が、それぞれ、1.0E+7cfu/g以上及び1.0E+7cfu/g以上である。本明細書において特定の温度の記載、例えば「10℃」とは、微小な温度の変化を許容する概念であり、例えば、保存又は冷蔵温度が「10±1℃」となることを許容する。本発明の発酵乳を冷蔵庫等において保存開始した日が冷蔵保存0日目であり、保存開始した次の日を冷蔵保存1日目とする。「1.0E+7cfu/g」とは1.0×10cfu/gを意味する。1〜10℃で15〜24日目までの保存は、冷蔵庫等において、プラスチックなどの酸素透過性を有する容器に充填された状態で行うことができる。
保存最終日におけるビフィドバクテリウム属細菌の生菌数の上限は、本発明の効果が得られる限りにおいて特に限定されるものではないが、1.0E+11cfu/g、1.0E+10cfu/g、1.0E+9cfu/g、5.0E+8cfu/g、1.5E+8cfu/g、又は1.4E+8cfu/gであることができる。
保存最終日における特定のラクトバチルス属細菌の生菌数の上限は、本発明の効果が得られる限りにおいて特に限定されるものではないが、1.0E+11cfu/g、1.0E+10cfu/g、1.0E+9cfu/g、5.0E+8cfu/g、1.0E+8cfu/g、3.0E+7cfu/g、又は2.3E+7cfu/gであることができる。
ビフィドバクテリウム属細菌の生菌数及び特定のラクトバチルス属細菌の生菌数は、プレートカウント法により測定することができる。
具体的には、滅菌した希釈水(0.6% リン酸水素二ナトリウム,0.45% リン酸二水素カリウム,0.05% L−システイン塩酸塩一水和物,0.05% Tween80,0.05% 寒天)を用いて発酵乳を段階希釈する。ビフィドバクテリウム属細菌の生菌数測定ではムピロシン添加TOSプロピオン酸寒天培地を用いて希釈試料を混釈し、ラクトバチルス属細菌の生菌数測定ではMRS/CL/CIP寒天培地の平板培地に希釈試料を塗抹し、段階希釈した発酵乳における生菌数を測定する。MRS/CL/CIP寒天培地としては、滅菌したMRS培地にクリンダマイシンを0.1μg/mL、シプロフロキサシンを10μg/mL添加し、シャーレに流し固めた平板培地を使用する。嫌気培養システムを用いて37℃、72時間嫌気培養する。培養終了後、コロニー数を計数して生菌数を測定する。
本明細書において、「1〜10℃で15〜24日目まで保存した場合に、保存最終日において、ビフィドバクテリウム属細菌の生菌数が、1.0E+7cfu/g以上であり、特定のラクトバチルス属細菌の生菌数が、1.0E+7cfu/g以上である」とは、1〜10℃で15、16、17、18、19、20、21、22、23、又は24日目まで保存した場合に、15、16、17、18、19、20、21、22、23、又は24日目の各々の日の、ビフィドバクテリウム属細菌の生菌数が、1.0E+7cfu/g以上であり、特定のラクトバチルス属細菌の生菌数が、1.0E+7cfu/g以上であることを意味する
(Number of viable bacteria)
The fermented milk of the present invention belongs to the genus Bifidobacterium on the final day of storage when stored at 1 to 10 ° C., preferably 5 to 10 ° C., more preferably 8 to 10 ° C. for up to 15 to 24 days. The viable cell count of the bacterium and the viable cell count of the specific Lactobacillus spp. Are 1.0 E + 7 cfu / g or more and 1.0 E + 7 cfu / g or more, respectively. In the present specification, the description of a specific temperature, for example, "10 ° C." is a concept that allows a minute change in temperature, and for example, the storage or refrigeration temperature is allowed to be "10 ± 1 ° C.". The day when the fermented milk of the present invention is stored in a refrigerator or the like is the 0th day of refrigerated storage, and the day after the start of storage is the 1st day of refrigerated storage. “1.0E + 7 cfu / g” means 1.0 × 10 7 cfu / g. Storage at 1 to 10 ° C. for 15 to 24 days can be performed in a refrigerator or the like in a state of being filled in a container having oxygen permeability such as plastic.
The upper limit of the viable cell count of Bifidobacterium spp. On the final day of storage is not particularly limited as long as the effects of the present invention can be obtained, but 1.0E + 11 cfu / g, 1.0E + 10 cfu / g, 1. It can be 0E + 9cfu / g, 5.0E + 8cfu / g, 1.5E + 8cfu / g, or 1.4E + 8cfu / g.
The upper limit of the viable cell count of a specific Lactobacillus bacterium on the last day of storage is not particularly limited as long as the effect of the present invention can be obtained, but 1.0E + 11 cfu / g, 1.0E + 10 cfu / g, 1. It can be 0E + 9cfu / g, 5.0E + 8cfu / g, 1.0E + 8cfu / g, 3.0E + 7cfu / g, or 2.3E + 7cfu / g.
The viable cell count of Bifidobacterium spp. And the viable cell count of a specific Lactobacillus spp. Can be measured by the plate counting method.
Specifically, sterilized diluted water (0.6% disodium hydrogen phosphate, 0.45% potassium dihydrogen phosphate, 0.05% L-cysteine hydrochloride monohydrate, 0.05% Agar80, The fermented milk is serially diluted with 0.05% agar). Diluted samples were mixed using a mupyrosin-added TOS propionic acid agar medium to measure the viable cell count of Bifidobacterium spp., And on a flat plate medium of MRS / CL / CIP agar medium to measure the viable cell count of Lactobacillus spp. Smear the diluted sample and measure the viable cell count in the serially diluted fermented milk. As the MRS / CL / CIP agar medium, a plate medium obtained by adding 0.1 μg / mL of clindamycin and 10 μg / mL of ciprofloxacin to a sterilized MRS medium and pouring it into a petri dish is used. Incubate anaerobically at 37 ° C. for 72 hours using an anaerobic culture system. After the culture is completed, the number of colonies is counted and the number of viable bacteria is measured.
In the present specification, "when stored at 1 to 10 ° C. for 15 to 24 days, the viable count of Bifidobacterium spp. Is 1.0 E + 7 cfu / g or more on the final day of storage, which is specific. "The viable count of Lactobacillus bacteria is 1.0E + 7cfu / g or more" means that at 1 to 10 ° C., 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, or until the 24th day. When stored, the viable count of Bifidobacterium spp. On each day of 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, or 24th day is 1.0E + 7cfu / g. This means that the viable number of specific Lactobacillus bacteria is 1.0E + 7cfu / g or more.

本発明の発酵乳は、1〜10℃で15〜24日目まで保存した場合に、保存最終日において、ビフィドバクテリウム属細菌の生菌数及び特定のラクトバチルス属細菌の生菌数が、好ましくは1.2E+7cfu/g以上及び1.2E+7cfu/g以上であり、さらに好ましくは1.5E+7cfu/g以上及び1.5E+7cfu/g以上である。 When the fermented milk of the present invention is stored at 1 to 10 ° C. for 15 to 24 days, the viable number of bifidobacteria and the viable number of specific Lactobacillus bacteria are increased on the final storage day. , Preferably 1.2E + 7cfu / g or more and 1.2E + 7cfu / g or more, and more preferably 1.5E + 7cfu / g or more and 1.5E + 7cfu / g or more.

本発明の発酵乳は、1〜10℃で21〜24日目まで保存した場合に、保存最終日において、ビフィドバクテリウム属細菌の生菌数及び特定のラクトバチルス属細菌の生菌数が、1.0E+7cfu/g以上及び1.0E+7cfu/g以上であり、好ましくは1.2E+7cfu/g以上及び1.2E+7cfu/g以上であり、さらに好ましくは1.5E+7cfu/g以上及び1.5E+7cfu/g以上であることができる。 When the fermented milk of the present invention is stored at 1 to 10 ° C. for days 21 to 24, the viable count of bifidobacteria and the viable number of specific Lactobacillus bacteria are increased on the final storage day. , 1.0E + 7cfu / g or more and 1.0E + 7cfu / g or more, preferably 1.2E + 7cfu / g or more and 1.2E + 7cfu / g or more, and more preferably 1.5E + 7cfu / g or more and 1.5E + 7cfu / g. It can be more than that.

本発明の発酵乳では、1〜10℃で24日目まで保存した場合に、保存最終日において、ビフィドバクテリウム属細菌の生菌数は、保存開始から1日目の生菌数に対して10.0%以上であることが好ましく、10.5%以上であることがさらに好ましい。
本発明の発酵乳では、1〜10℃で24日目まで保存した場合に、保存最終日において、特定のラクトバチルス属細菌の生菌数は、保存開始から1日目の生菌数に対して80%以上であることが好ましく、82%以上であることがさらに好ましい。
In the fermented milk of the present invention, when stored at 1 to 10 ° C. for up to the 24th day, the viable cell count of Bifidobacterium spp. On the final storage day is the same as the viable cell count on the first day from the start of storage. It is preferably 10.0% or more, and more preferably 10.5% or more.
In the fermented milk of the present invention, when stored at 1 to 10 ° C. for up to the 24th day, the viable cell count of a specific Lactobacillus spp. On the final storage day is the same as the viable cell count on the first day from the start of storage. It is preferably 80% or more, and more preferably 82% or more.

本発明の発酵乳では、発酵スターター乳酸菌として他の細菌、例えばラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシズ・ブルガリクス及びストレプトコッカス・サーモフィルスを含むこともできる。 The fermented milk of the present invention may also contain other bacteria as the fermented starter lactic acid bacteria, such as Lactobacillus delbrucky subspecies bulgaricus and Streptococcus thermophilus.

本発明の発酵乳を充填するための容器としては、本発明の効果が得られる限りにおいて特に限定されることはなく、プラスチック製の容器、紙製の容器等が挙げられる。本発明の発酵乳は、好ましくは、容器入りの発酵乳である。 The container for filling the fermented milk of the present invention is not particularly limited as long as the effect of the present invention can be obtained, and examples thereof include a plastic container and a paper container. The fermented milk of the present invention is preferably fermented milk in a container.

(発酵乳)
本明細書において「発酵乳」は、乳及び乳製品の成分規格等に関する省令(乳等省令)の発酵乳を指し、いわゆる撹拌型ヨーグルト、静置型ヨーグルト、前発酵ヨーグルト、後発酵ヨーグルト、ソフトヨーグルト、ハードヨーグルトを例示できる。
(Fermented milk)
In the present specification, "fermented milk" refers to fermented milk of the ministry ordinance (Ministry of Milk, etc.) concerning component standards of milk and dairy products, so-called stirring yogurt, static yogurt, pre-fermented yogurt, post-fermented yogurt, soft yogurt. , Hard yogurt can be exemplified.

本発明の発酵乳の製造のために用いられる乳原料は、通常の発酵乳の製造で用いられるものであれば良く、特に限定されない。
例えば、生乳、牛乳、特別牛乳、生山羊乳、殺菌山羊乳、生めん羊乳、成分調整牛乳、低脂肪牛乳、無脂肪牛乳、加工乳、クリーム、バター、バターオイル、チーズ、濃縮ホエー、アイスクリーム類、濃縮乳、脱脂濃縮乳、無糖練乳、無糖脱脂練乳、加糖練乳、加糖脱脂練乳、全粉乳、脱脂粉乳、クリームパウダー、ホエーパウダー、たんぱく質濃縮ホエーパウダー、バターミルクパウダー、加糖粉乳、ホエーたんぱく質濃縮物(Whey Protein Concentrate:WPC)、ホエーたんぱく質分離物(Whey Protein Isolate:WPI)、乳たんぱく質濃縮物(Milk Protein Concentrate:MPC)、乳たんぱく質分離物(Milk Protein Isolate:MPI)、トータルミルクプロテイン(Total Milk Protein:TMP)、脱乳糖パーミエイト粉末(牛乳の限外濾過膜透過成分)、変性たんぱく質球状粒子(Microparticulated Whey)、酸カゼイン、レンネットカゼイン、カゼインナトリウム、カゼインカリウム等を挙げることができる。これらの乳原料のいずれでも使用することができ、これらの乳原料を二種以上組み合わせたものであっても使用することができる。また、油脂、オリゴ糖、甘味料、酸味料、香料、果汁、果肉、乳化剤等を配合してもよい。
The dairy raw material used for producing the fermented milk of the present invention is not particularly limited as long as it is used in the production of ordinary fermented milk.
For example, raw milk, milk, special milk, raw goat milk, sterilized goat milk, raw noodle sheep milk, ingredient-adjusted milk, low-fat milk, non-fat milk, processed milk, cream, butter, butter oil, cheese, concentrated whey, ice cream Kind, concentrated milk, defatted concentrated milk, unsweetened milk, unsweetened defatted milk, sweetened milk, sweetened defatted milk, whole milk powder, defatted milk powder, cream powder, whey powder, protein concentrated whey powder, butter milk powder, sweetened milk powder, whey Protein Concentrate (WPC), Whey Protein Isolate (WPI), Milk Protein Concentrate (MPC), Milk Protein Isolate Milk Protein I (Total Milk Protein: TMP), demilked sugar permeate powder (extra-filtered membrane permeating component of milk), modified protein spherical particles (Microparticulated Why), acid casein, rennet casein, sodium caseinate, potassium casein, etc. can be mentioned. .. Any of these dairy ingredients can be used, and even a combination of two or more of these dairy ingredients can be used. Further, fats and oils, oligosaccharides, sweeteners, acidulants, flavors, fruit juices, pulps, emulsifiers and the like may be blended.

本発明の発酵乳のpHは、好ましくは4.00〜4.80、より好ましくは4.20〜4.60である。 The pH of the fermented milk of the present invention is preferably 4.00 to 4.80, more preferably 4.20 to 4.60.

2.発酵乳の製造方法
(工程(A))
本発明の発酵乳の製造方法は、ビフィドバクテリウム属細菌を原料ミックスに添加する工程を含む。原料ミックスは、上述の乳原料を含む、ビフィドバクテリウム属細菌及びラクトバチルス属細菌等の培養に適したミックスである。乳原料を溶媒に溶解させて溶液とする方法としては特に限定されず、通常用いられている方法により行なうことができる。原料ミックスは、ビフィドバクテリウム属細菌を添加する時点において、バッチ殺菌等により殺菌済みであることが好ましい。
2. Fermented milk production method (step (A))
The method for producing fermented milk of the present invention includes a step of adding Bifidobacterium spp. To the raw material mix. The raw material mix is a mix suitable for culturing Bifidobacterium spp. And Lactobacillus spp., Including the above-mentioned milk raw material. The method of dissolving the dairy raw material in a solvent to prepare a solution is not particularly limited, and it can be carried out by a commonly used method. The raw material mix is preferably sterilized by batch sterilization or the like at the time of adding Bifidobacterium spp.

ビフィドバクテリウム属細菌は、ビフィドバクテリウム属に属する細菌であれば特に限定されないが、ビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム・シュードロンガム、ビフィドバクテリウム・ビフィダム、ビフィドバクテリウム・インファンティス、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・アニマリス、ビフィドバクテリウム・アドレスセンティス、ビフィドバクテリウム・ラクティス、ビフィドバクテリウム・カテヌラタム、ビフィドバクテリウム・デンティウムなどが挙げられる。このうち、好ましい例として、ビフィドバクテリウム・ロンガムが挙げられる。また、菌株としては、ビフィドバクテリウム・ロンガムSBT2928株、及びビフィドバクテリウム・シュードロンガムSBT2908株を例示できる。ビフィドバクテリウム・ロンガムSBT2928株、及び/又はビフィドバクテリウム・シュードロンガムSBT2908株を用いる場合、ラクトバチルス属細菌は、ラクトバチルス・ガセリが好ましく、ラクトバチルス・ガセリSBT2055株が更に好ましい。 The bacterium of the genus Bifidobacterium is not particularly limited as long as it is a bacterium belonging to the genus Bifidobacterium, but is Bifidobacterium longum, Bifidobacterium pseudolongum, Bifidobacterium bifidam, and Bifidobacterium. Umm Infantis, Bifidobacterium Breve, Bifidobacterium Animalis, Bifidobacterium Addresscentis, Bifidobacterium Ractis, Bifidobacterium Catenuratam, Bifidobacterium Dentium, etc. Can be mentioned. Of these, preferred examples include Bifidobacterium longum. In addition, examples of the strains include Bifidobacterium longum SBT2928 strain and Bifidobacterium pseudolongum SBT2908 strain. When the Bifidobacterium longum SBT2928 strain and / or the Bifidobacterium pseudolongum SBT2908 strain is used, the Lactobacillus genus bacterium is preferably Lactobacillus gasseri, and more preferably Lactobacillus gasseri SBT2055 strain.

ビフィドバクテリウム属細菌は、バルクスターターの形態で添加されることが好ましい。本明細書において、「バルクスターター」とは、濃縮菌体または培養物等の菌体サンプルを培地で培養し、中間発酵を経て調製されたスターターである。すなわち、バルクスターターは、菌体と培養培地とを含むものである。これに対して、本明細書においては、濃縮菌体または培養物等の菌体サンプルそのものである乳酸菌スターターを「菌体スターター」と称する。
ビフィドバクテリウム属細菌をバルクスターターとして添加する場合、原料ミックス基準で0.10〜20%、好ましくは0.50〜15%、より好ましくは1.0〜10%、さらに好ましくは2.0〜8.0%添加することができる。ビフィドバクテリウム属細菌をバルクスターターとして添加する場合、原料ミックスでの培養中に生菌数の変化が少ないことを考慮して、ビフィドバクテリウム属細菌の生菌数が、原料ミックス基準で1.0E+8cfu/g〜1.0E+9cfu/g、より好ましくは1.2E+8cfu/g〜5.0E+8cfu/g、さらに好ましくは1.4E+8cfu/g〜3.0E+8cfu/gとなるように添加することができる。バルクスターターは、本発明の効果が得られる限りにおいて特に限定されることはなく、菌体サンプルを培養培地に添加して独自で調製したものが使用できる。ビフィドバクテリウム属細菌のバルクスターターを調製する場合、必要に応じて、酵母エキス、ペプトン、及びアミノ酸などのビフィドバクテリウム属細菌生育のための外部添加物質を添加することができる。
Bifidobacterium spp. Are preferably added in the form of bulk starters. As used herein, the term "bulk starter" is a starter prepared by culturing a bacterial cell sample such as a concentrated bacterial cell or a culture in a medium and undergoing intermediate fermentation. That is, the bulk starter contains cells and a culture medium. On the other hand, in the present specification, a lactic acid bacterium starter which is a bacterial cell sample itself such as a concentrated bacterial cell or a culture is referred to as a “bacterial cell starter”.
When Bifidobacterium spp. Are added as a bulk starter, 0.10 to 20%, preferably 0.50 to 15%, more preferably 1.0 to 10%, still more preferably 2.0, based on the raw material mix. ~ 8.0% can be added. When Bifidobacterium spp. Are added as a bulk starter, the viable cell count of Bifidobacterium is based on the raw material mix, considering that there is little change in the viable cell count during culturing in the raw material mix. It can be added so as to be 1.0E + 8cfu / g to 1.0E + 9cfu / g, more preferably 1.2E + 8cfu / g to 5.0E + 8cfu / g, and even more preferably 1.4E + 8cfu / g to 3.0E + 8cfu / g. .. The bulk starter is not particularly limited as long as the effect of the present invention can be obtained, and a bulk starter prepared by adding a bacterial cell sample to a culture medium can be used. When preparing a bulk starter for bifidobacteria, external additives for the growth of bifidobacteria such as yeast extract, peptone, and amino acids can be added, if necessary.

本発明の発酵乳の製造方法では、ビフィドバクテリウム属細菌に加えて、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシズ・ブルガリクス及びストレプトコッカス・サーモフィルスを発酵スターター乳酸菌として添加することが好ましい。ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシズ・ブルガリクス及びストレプトコッカス・サーモフィルスは、菌体スターターの形態で添加されることが好ましい。ビフィドバクテリウム属細菌をバルクスターターで添加し、さらにラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシズ・ブルガリクス及びストレプトコッカス・サーモフィルスを菌体スターターの形態で添加することがさらに好ましい。菌体スターターの投与量としては、原料ミックス基準で、0.010〜10%、好ましくは0.010〜3.0%、より好ましくは0.020〜1.0%、最も好ましくは0.050〜0.50%である。ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシズ・ブルガリクス及びストレプトコッカス・サーモフィルスは、単独で添加してもよく、予め混合して添加してもよい。工程(A)の完了後、速やかに工程(B)を開始することが好ましい。 In the method for producing fermented milk of the present invention, it is preferable to add Lactobacillus delbrucky subspecies bulgaricus and Streptococcus thermophilus as fermented starter lactic acid bacteria in addition to the bacteria of the genus Bifidobacterium. Lactobacillus delbrucky subspecies bulgarix and streptococcus thermophilus are preferably added in the form of a cell starter. It is more preferred to add Bifidobacterium spp. In bulk starter, and further add Lactobacillus delbrucky subspecies bulgaricus and Streptococcus thermophilus in the form of a cell starter. The dose of the bacterial cell starter is 0.010 to 10%, preferably 0.010 to 3.0%, more preferably 0.020 to 1.0%, and most preferably 0.050% based on the raw material mix. ~ 0.50%. Lactobacillus delbrucky subspecies bulgaricus and streptococcus thermophilus may be added alone or mixed in advance. It is preferable to start the step (B) immediately after the completion of the step (A).

(工程(B))
本発明の発酵乳の製造方法では、ビフィドバクテリウム属細菌を原料ミックスに添加した後発酵させ、発酵乳ミックスを得る。本明細書において発酵とは、適切な温度において原料ミックスをインキュベートして、原料ミックスに含まれる細菌を増殖させることである。
(Step (B))
In the method for producing fermented milk of the present invention, bacteria of the genus Bifidobacterium are added to the raw material mix and then fermented to obtain a fermented milk mix. Fermentation as used herein is to incubate the raw material mix at an appropriate temperature to grow the bacteria contained in the raw material mix.

発酵温度は、本発明の効果が得られる限りにおいて特に限定されることはなく、例えば30〜50℃、好ましくは35〜45℃で行うことができる。発酵時間は、3〜24時間程度、好ましくは3〜12時間程度である。 The fermentation temperature is not particularly limited as long as the effects of the present invention can be obtained, and can be carried out, for example, at 30 to 50 ° C., preferably 35 to 45 ° C. The fermentation time is about 3 to 24 hours, preferably about 3 to 12 hours.

工程(B)は、好ましくは、原料ミックスの酸度が0.75、好ましくは0.80になるまで行うことができる。 Step (B) can be carried out until the acidity of the raw material mix is preferably 0.75, preferably 0.80.

本発明の発酵乳の製造方法では、工程(B)の後に、(E)発酵乳ミックスを20℃以下に冷却する工程を含むことが好ましい。発酵乳ミックスを冷却することにより、ラクトバチルス・ガセリ又はビフィドバクテリウム属細菌の存在がもう一方の存在に影響されることを、より効果的に防止することができる。発酵乳ミックスは、より好ましくは15℃以下に、さらに好ましくは10±5℃に冷却される。 In the method for producing fermented milk of the present invention, it is preferable to include (E) a step of cooling the fermented milk mix to 20 ° C. or lower after the step (B). Cooling the fermented milk mix can more effectively prevent the presence of Lactobacillus gasseri or Bifidobacterium spp. From being affected by the presence of the other. The fermented milk mix is more preferably cooled to 15 ° C. or lower, even more preferably 10 ± 5 ° C.

(工程(C))
本発明の発酵乳の製造方法では、工程(B)の後に特定のラクトバチルス属細菌のバルクスターターを発酵乳ミックスに添加する(図1参照)。特定のラクトバチルス属細菌のバルクスターターは、20℃以下に、好ましくは15℃以下に、より好ましくは10±5℃に冷却して発酵乳ミックスに添加する。本発明において使用されるラクトバチルス属細菌は、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・クリスパータス、ラクトバチルス・アミロボラス、ラクトバチルス・ガリナラム、及びラクトバチルス・ジョンソニーである。ラクトバチルス属細菌は、ラクトバチルス・ガセリが最も好ましい。また、ラクトバチルス・ガセリの菌株としては、ラクトバチルス・ガセリSBT2055株を例示できる。ラクトバチルス・ガセリSBT2055株を用いる場合、ビフィドバクテリウム属細菌は、ビフィドバクテリウム・ロンガムが好ましく、ビフィドバクテリウム・ロンガムSBT2928株及び/又はビフィドバクテリウム・シュードロンガムSBT2908株が更に好ましい。
(Step (C))
In the method for producing fermented milk of the present invention, a bulk starter of a specific Lactobacillus bacterium is added to the fermented milk mix after the step (B) (see FIG. 1). The bulk starter of a particular Lactobacillus bacterium is cooled to 20 ° C. or lower, preferably 15 ° C. or lower, more preferably 10 ± 5 ° C. and added to the fermented milk mix. The Lactobacillus bacteria used in the present invention are Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus crispatas, Lactobacillus amyloboras, Lactobacillus galinarum, and Lactobacillus Johnson. The Lactobacillus bacterium is most preferably Lactobacillus gasseri. Further, as the strain of Lactobacillus gasseri, the Lactobacillus gasseri SBT2055 strain can be exemplified. When Lactobacillus gasseri SBT2055 strain is used, the Bifidobacterium genus bacterium is preferably Bifidobacterium longum, and Bifidobacterium longum SBT2928 strain and / or Bifidobacterium pseudolongum SBT2908 strain is further used. preferable.

工程(C)では、特定のラクトバチルス属細菌のバルクスターターを添加する。発酵乳ミックス基準で0.010〜10%、好ましくは0.10〜5.0%、より好ましくは0.20〜3.0%、さらに好ましくは0.30〜2.0%のバルクスターターを添加することができる。また、特定のラクトバチルス属細菌のバルクスターターを、発酵乳ミックス基準で、2.0E+7cfu/g〜1.0E+9cfu/g、2.0E+7cfu/g〜5.0E+8cfu/g、2.0E+7cfu/g〜1.0E+8cfu/gとなるように添加することができる。バルクスターターは、本発明の効果が得られる限りにおいて特に限定されることはなく、菌体サンプルを培養培地に添加して独自で調製したものが使用できる。ラクトバチルス属細菌のバルクスターターを調製する場合、必要に応じて、酵母エキス、ペプトン、及びアミノ酸などのラクトバチルス属細菌生育のための外部添加物質を添加することができる。 In step (C), a bulk starter of a specific Lactobacillus bacterium is added. A bulk starter of 0.010 to 10%, preferably 0.10 to 5.0%, more preferably 0.25 to 3.0%, and even more preferably 0.30 to 2.0% based on the fermented milk mix. Can be added. In addition, a bulk starter of a specific Lactobacillus bacterium was added to 2.0E + 7cfu / g to 1.0E + 9cfu / g, 2.0E + 7cfu / g to 5.0E + 8cfu / g, 2.0E + 7cfu / g to 1 based on the fermented milk mix standard. It can be added so as to be 0.0E + 8 cfu / g. The bulk starter is not particularly limited as long as the effect of the present invention can be obtained, and a bulk starter prepared by adding a bacterial cell sample to a culture medium can be used. When preparing a bulk starter for Lactobacillus bacteria, external additives for growth of Lactobacillus bacteria such as yeast extract, peptone, and amino acids can be added, if necessary.

(工程(D))
本発明の発酵乳の製造方法では、特定のラクトバチルス属細菌のバルクスターターを発酵乳ミックスに添加した後に、発酵乳ミックスを冷蔵及び保存する。特定のラクトバチルス属細菌のバルクスターターを発酵乳ミックスに添加した後、速やかに冷蔵及び保存を行うことが好ましく、具体的には、添加後6時間以内、好ましくは5時間以内、より好ましくは3時間以内、最も好ましくは1時間以内に、発酵乳ミックスを冷蔵及び保存する。
(Step (D))
In the method for producing fermented milk of the present invention, a bulk starter of a specific Lactobacillus bacterium is added to the fermented milk mix, and then the fermented milk mix is refrigerated and stored. After adding a bulk starter of a specific Lactobacillus bacterium to the fermented milk mix, it is preferable to immediately refrigerate and store it, specifically, within 6 hours, preferably within 5 hours, and more preferably 3 after the addition. Refrigerate and store the fermented milk mix within hours, most preferably within 1 hour.

本明細書において、「冷蔵」とは、冷蔵庫等において10℃以下の温度で発酵乳ミックスを保存することを意味する。発酵乳ミックスは、好ましくは1℃〜10℃で保存され、より好ましくは5℃〜10℃で保存され、さらに好ましくは8〜10℃で保存される。 As used herein, "refrigerating" means storing the fermented milk mix at a temperature of 10 ° C. or lower in a refrigerator or the like. The fermented milk mix is preferably stored at 1 ° C. to 10 ° C., more preferably 5 ° C. to 10 ° C., and even more preferably 8 to 10 ° C.

本発明の発酵乳の製造方法では、工程(D)の開始から15〜24日目まで保存した場合に(あるいは、21〜24日目まで保存した場合に)、保存最終日において、ビフィドバクテリウム属細菌の生菌数及び特定のラクトバチルス属細菌の生菌数が、それぞれ、1.0E+7cfu/以上及び1.0E+7cfu/以上であることが好ましい。
本発明の発酵乳の製造方法では、工程(C)ではなく工程(A)においてラクトバチルス属細菌の菌体スターターを投与した場合と比較して、ビフィドバクテリウム属細菌の生残率が1.5倍以上、好ましくは2倍以上であることができ、特定のラクトバチルス属細菌の生残率が、5倍以上、好ましくは8倍以上であることができる。
In the method for producing fermented milk of the present invention, bifidobacteria are stored on the final day of storage when they are stored from the start of step (D) to the 15th to 24th days (or when they are stored from the 21st to the 24th day). It is preferable that the viable cell count of the Umm spp. And the viable cell count of the specific Lactobacillus spp. Are 1.0 E + 7 cfu / or more and 1.0 E + 7 cfu / or more, respectively.
In the method for producing fermented milk of the present invention, the survival rate of bifidobacteria is 1 as compared with the case where the cell starter of Lactobacillus bacteria is administered in step (A) instead of step (C). It can be 5.5 times or more, preferably 2 times or more, and the survival rate of a specific Lactobacillus bacterium can be 5 times or more, preferably 8 times or more.

(その他の工程)
本発明の発酵乳の製造方法では、本発明の効果が得られる限りにおいて、(F)安定剤、添加剤、香料、フルーツ、フルーツソース等を添加して撹拌する工程、(G)容器への充填工程を含むことができる。(F)安定剤、添加剤、香料、フルーツ、フルーツソース等の添加撹拌工程、(G)容器への充填工程は、工程(C)と工程(D)との間に含まれることが好ましい。本発明の発酵乳の製造方法では、工程(C)と工程(D)との間に(G)容器への充填工程を含み、工程(D)を容器に充填された状態で行うことが好ましい。容器としては、本発明の効果が得られる限りにおいて特に限定されることはなく、プラスチック製の容器、紙製の容器等が挙げられる。
(Other processes)
In the method for producing fermented milk of the present invention, (F) a step of adding stabilizers, additives, flavors, fruits, fruit sauces, etc. and stirring, as long as the effects of the present invention can be obtained, (G) to a container. A filling step can be included. It is preferable that (F) a step of adding and stirring stabilizers, additives, flavors, fruits, fruit sauces and the like, and (G) a step of filling a container are included between the steps (C) and (D). In the method for producing fermented milk of the present invention, it is preferable that the step (C) includes a step of filling the container (G) between the steps (C) and the step (D), and the step (D) is carried out in a state of being filled in the container. .. The container is not particularly limited as long as the effect of the present invention can be obtained, and examples thereof include a plastic container and a paper container.

3.生残性向上方法
(生残性向上)
本発明における「生残性向上」とは、菌体の死滅を抑え、生き残っている菌体数を維持すること(減少抑制)を意味する。本発明において「生残性向上」は、特定の条件下、例えば1〜10℃、好ましくは5〜10℃、より好ましくは8〜10℃の保存条件で、一定期間保存した場合に、菌体数の減少を抑制することを含む。本発明において「生残性向上」は、1〜10℃で15〜24日目まで保存した場合に(あるいは、21〜24日目まで保存した場合に)、保存最終日において、ビフィドバクテリウム属細菌の生菌数及び特定のラクトバチルス属細菌の生菌数が、それぞれ、例えば、1.0E+7cfu/g以上及び1.0E+7cfu/g以上、さらに好ましくは1.2E+7cfu/g以上及び1.2E+7cfu/g以上、最も好ましくは1.5E+7cfu/g以上及び1.5E+7cfu/g以上に保持することである。
3. 3. Survivability improvement method (survival improvement)
"Improvement of survivability" in the present invention means suppressing the death of bacterial cells and maintaining the number of surviving bacterial cells (suppression of decrease). In the present invention, "improvement of survivability" refers to bacterial cells when stored for a certain period of time under specific conditions, for example, storage conditions of 1 to 10 ° C, preferably 5 to 10 ° C, more preferably 8 to 10 ° C. Includes suppressing the decrease in numbers. In the present invention, "improvement of survivability" refers to bifidobacteria on the final day of storage when stored at 1 to 10 ° C. for 15 to 24 days (or when stored for 21 to 24 days). The viable cell counts of the genus bacteria and the viable cell counts of specific Lactobacillus spp. Are, for example, 1.0E + 7cfu / g or more and 1.0E + 7cfu / g or more, more preferably 1.2E + 7cfu / g or more and 1.2E + 7cfu, respectively. It is held at / g or more, most preferably 1.5E + 7cfu / g or more and 1.5E + 7cfu / g or more.

本発明において「生残性向上」は、好ましくは、1〜10℃で24日目まで保存した場合に、保存最終日においてビフィドバクテリウム属細菌の生菌数が、保存開始から1日目の生菌数に対して5.5%以上であり、且つ1〜10℃で24日目まで保存した場合に、保存最終日において特定のラクトバチルス属細菌の生菌数が、保存開始から1日目の生菌数に対して30%以上であることを含む。本発明において「生残性向上」は、より好ましくは、1〜10℃で24日目まで保存した場合に、保存最終日においてビフィドバクテリウム属細菌の生菌数が、保存開始から1日目の生菌数に対して6%以上であり、且つ1〜10℃で24日目まで保存した場合に、保存最終日において特定のラクトバチルス属細菌の生菌数が、保存開始から1日目の生菌数に対して50%以上であることを含む。本発明において「生残性向上」は、さらに好ましくは、1〜10℃で24日目まで保存した場合に、保存最終日においてビフィドバクテリウム属細菌の生菌数が、保存開始から1日目の生菌数に対して10%以上であり、且つ1〜10℃で24日目まで保存した場合に、保存最終日において特定のラクトバチルス属細菌の生菌数が、保存開始から1日目の生菌数に対して80%以上であることを含む。 In the present invention, "improvement of survivability" means that, preferably, when stored at 1 to 10 ° C. for up to 24 days, the viable number of Bifidobacterium spp. On the final day of storage is the first day from the start of storage. When the viable cell count is 5.5% or more and is stored at 1 to 10 ° C. until the 24th day, the viable cell count of a specific Lactobacillus spp. Is 1 from the start of storage on the last day of storage. It includes 30% or more of the viable cell count on the day. In the present invention, "improvement of survivability" is more preferably when the viable cell count of Bifidobacterium spp. Is stored at 1 to 10 ° C. for up to 24 days, and the viable count of Bifidobacterium spp. When it is 6% or more of the viable cell count of the eye and stored at 1 to 10 ° C. until the 24th day, the viable cell count of a specific Lactobacillus spp. It includes 50% or more of the viable cell count of the eye. In the present invention, "improvement of survival" is more preferably performed when the viable cell count of Bifidobacterium spp. Is stored at 1 to 10 ° C. for up to 24 days, and the viable count of Bifidobacterium spp. Is one day from the start of storage. When the viable cell count of the eye is 10% or more and the viable cell count of a specific Lactobacillus spp. Is stored at 1 to 10 ° C. until the 24th day, the viable cell count of a specific Lactobacillus spp. It includes 80% or more of the viable cell count of the eye.

(作用)
本発明の発酵乳は、製造時における特定のラクトバチルス属細菌の添加形態及び添加タイミングの変更を特徴とする。添加タイミングの変更により、ビフィドバクテリウム属細菌と特定のラクトバチルス属細菌の同時培養を避けることができる。また、特定のラクトバチルス属細菌と発酵スターターとなる乳酸菌の同時培養を避け個別に培養することが、特定のラクトバチルス属細菌の生残性に好ましい影響を与えると考えられる。
本発明において効果が得られる理由としては以下のように推論することができる。しかしながら、本発明は以下の説明によって限定されるものではない。
ラクトバチルス・ガセリとビフィドバクテリウム属細菌とを混在させると、一方の存在がもう一方の存在に影響され、いずれか一方または両方の生育が阻害されると考えられる。ラクトバチルス属細菌の投与形態及び投与タイミングを変更することで、ラクトバチルス属細菌とビフィドバクテリウム属細菌とが互いに大きく影響し合う生育ステージをずらすことができると考えられる。
なお、上記作用を考慮すると、ラクトバチルス・ガセリのみならず、ラクトバチルス・ガセリの近縁種であり、同様の生物学的性質を有するラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・クリスパータス、ラクトバチルス・アミロボラス、ラクトバチルス・ガリナラム、及びラクトバチルス・ジョンソニーにおいても効果が得られると考えられる。
(Action)
The fermented milk of the present invention is characterized by a change in the form and timing of addition of a specific Lactobacillus bacterium during production. By changing the addition timing, it is possible to avoid simultaneous culture of Bifidobacterium spp. And specific Lactobacillus spp. In addition, avoiding simultaneous culture of specific Lactobacillus bacteria and lactic acid bacteria as a fermentation starter and culturing them individually is considered to have a favorable effect on the survivability of specific Lactobacillus bacteria.
The reason why the effect is obtained in the present invention can be inferred as follows. However, the present invention is not limited by the following description.
When Lactobacillus gasseri and Bifidobacterium spp. Are mixed, it is considered that the presence of one is affected by the presence of the other and the growth of either or both is inhibited. By changing the administration form and timing of administration of Lactobacillus bacteria, it is considered that the growth stage in which Lactobacillus bacteria and Bifidobacterium bacteria have a great influence on each other can be shifted.
Considering the above action, not only Lactobacillus gasseri but also Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus crispatas, Lactobacillus amyloboras, which are closely related species of Lactobacillus gasseri and have similar biological properties, It is thought that the effect can also be obtained in Lactobacillus galinaram and Lactobacillus Johnson.

以下、本発明の実施例を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。なお、本明細書において特に明示しない場合、%表示は重量%を示す。 Examples of the present invention will be described in detail below, but the present invention is not limited thereto. Unless otherwise specified in the present specification,% indication indicates weight%.

〔実施例1〕
(1) ビフィドバクテリウム・ロンガムのバルクスターター培地調製及び培養
0.5%の酵母エキスを添加した15%還元脱脂乳培地を調製し、95℃、30分間の加熱処理にて培地の殺菌を実施した。そこへ、ビフィドバクテリウム・ロンガムSBT2928(受託番号:FERM P−10657,寄託日:1989年4月13日,独立行政法人 産業技術総合研究所 特許生物寄託センター)の菌体スターターを還元脱脂乳培地基準で1%添加し、36℃、16時間培養した。この操作により、生菌数1.0E+9cfu/g程度のバルクスターターを得た。
[Example 1]
(1) Preparation and culture of Bifidobacterium longum bulk starter medium A 15% reduced defatted milk medium containing 0.5% yeast extract was prepared, and the medium was sterilized by heat treatment at 95 ° C. for 30 minutes. Carried out. There, the bacterial cell starter of Bifidobacterium Longum SBT2928 (trust number: FERM P-10657, deposit date: April 13, 1989, Patent Organism Deposit Center, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology) is reduced and degreased milk. 1% was added based on the medium, and the cells were cultured at 36 ° C. for 16 hours. By this operation, a bulk starter having a viable cell count of about 1.0 E + 9 cfu / g was obtained.

(2) ラクトバチルス・ガセリのバルクスターター培地調製及び培養
0.50%の酵母エキスを添加した12%還元脱脂乳培地を調製し、95℃、30分間の加熱処理にて培地の殺菌を実施した。そこへ、ラクトバチルス・ガセリSBT2055(受託番号:FERM BP−10953,寄託日:2008年2月26日,独立行政法人 産業技術総合研究所 特許生物寄託センター)の菌体スターターを還元脱脂乳培地基準で1%添加し、36℃、16時間培養した。この操作により、生菌数1.0E+9cfu/g程度のバルクスターターを得た。
(2) Preparation and culture of bulk starter medium of Lactobacillus gasseri A 12% reduced defatted milk medium containing 0.50% yeast extract was prepared, and the medium was sterilized by heat treatment at 95 ° C. for 30 minutes. .. Lactobacillus gasseri SBT2055 (trust number: FERM BP-10953, deposit date: February 26, 2008, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, Patent Organism Deposit Center) is reduced to reduce the bacterial cell starter. 1% was added and cultured at 36 ° C. for 16 hours. By this operation, a bulk starter having a viable cell count of about 1.0 E + 9 cfu / g was obtained.

(3) 発酵乳の調製・保存
脱脂粉乳12%、無塩バター2%を混合溶解し、60℃で加温して、均質後、95℃で5分間保持して加熱殺菌し、40℃に冷却して原料ミックスを調製した。原料ミックスを殺菌した後、調製したビフィドバクテリウム・ロンガムのバルクスターターを原料ミックス基準で4%添加した。さらに、発酵スターター乳酸菌としてラクトバチルス・デルブリッキー・サブスピーシズ・ブルガリカス、ストレプトコッカス・サーモフィルスの菌体スターターを原料基準で0.1%添加した。コントロールの原料ミックスには、これに加えてラクトバチルス・ガセリの菌体スターターを原料ミックス基準で0.005%添加した。添加後、酸度が0.8に達するまで39℃で発酵させた。
(3) Preparation and storage of fermented milk 12% skim milk powder and 2% unsalted butter are mixed and dissolved, heated at 60 ° C, homogenized, held at 95 ° C for 5 minutes, sterilized by heating, and sterilized at 40 ° C. The raw material mix was prepared by cooling. After sterilizing the raw material mix, 4% of the prepared bulk starter of Bifidobacterium longum was added based on the raw material mix. Further, 0.1% of Lactobacillus delbricky Subspecies Bulgaricus and Streptococcus thermophilus cell starters were added as fermentation starter lactic acid bacteria based on the raw material. In addition to this, 0.005% of Lactobacillus gasseri cell starter was added to the control raw material mix based on the raw material mix. After the addition, it was fermented at 39 ° C. until the acidity reached 0.8.

発酵終了後、本発明の発酵乳を調製するための発酵乳ミックスにおいては、ラクトバチルス・ガセリのバルクスターターを発酵乳ミックス基準で1.0%(コントロールに添加した菌体スターター0.005%と培養終了時の菌数が同程度になるように調整した量)添加した。発酵乳を酸素透過性を有する保存用容器に分注し、アルミ蓋のシールを施した。24日目まで冷蔵(10℃)保存した。 After the fermentation is completed, in the fermented milk mix for preparing the fermented milk of the present invention, the bulk starter of Lactobacillus gasseri is 1.0% based on the fermented milk mix (the bacterial cell starter added to the control is 0.005%). The amount adjusted so that the number of bacteria at the end of the culture was about the same) was added. The fermented milk was dispensed into an oxygen-permeable storage container and sealed with an aluminum lid. It was stored refrigerated (10 ° C) until the 24th day.

(4) 生菌数および生残性の確認
滅菌した希釈水(0.6% リン酸水素二ナトリウム,0.45% リン酸二水素カリウム,0.05% L−システイン塩酸塩一水和物,0.05% Tween80,0.05% 寒天)を用いて発酵乳を段階希釈した。ビフィドバクテリウム・ロンガムの生菌数測定ではムピロシン添加TOSプロピオン酸寒天培地を用いて希釈試料を混釈し、ラクトバチルス・ガセリの生菌数測定ではMRS/CL/CIP寒天培地の平板培地に希釈試料を塗抹し、段階希釈した発酵乳における生菌数を測定した。MRS/CL/CIP寒天培地は、滅菌したMRS培地にクリンダマイシンを0.1μg/mL、シプロフロキサシンを10μg/mL添加し、シャーレに流し固めた平板培地を使用した。嫌気培養システム(商品名:アネロパック,三菱ガス化学株式会社)を用いて37℃、72時間嫌気培養した。培養終了後、プレートカウント法により生菌数を測定し、冷蔵保存24日目の生菌数を1日目の生菌数で除算し、商を%に換算して生残率を求めた。結果を図3及び4、表1及び2に示す。冷蔵保存中の生菌数の推移を図5及び6に示す。図5及び6の各々において、生菌数をプロットしているのは、冷蔵保存1、14、21、及び24日目である。
(4) Confirmation of viable cell count and survivability Diluted water (0.6% disodium hydrogen phosphate, 0.45% potassium dihydrogen phosphate, 0.05% L-cysteine hydrochloride monohydrate) , 0.05% Tween 80, 0.05% agar) was used to serially dilute the fermented milk. Diluted samples were mixed using a mupyrosin-added TOS propionic acid agar medium to measure the viable cell count of Bifidobacterium longum, and a plate medium of MRS / CL / CIP agar medium was used to measure the viable cell count of Lactobacillus gasseri. The diluted sample was smeared and the viable cell count in the serially diluted fermented milk was measured. As the MRS / CL / CIP agar medium, 0.1 μg / mL of clindamycin and 10 μg / mL of ciprofloxacin were added to the sterilized MRS medium, and the plate medium was poured into a petri dish and solidified. An anaerobic culture system (trade name: Aneropack, Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc.) was used for anaerobic culture at 37 ° C. for 72 hours. After completion of the culture, the viable cell count was measured by the plate counting method, the viable cell count on the 24th day of refrigerated storage was divided by the viable cell count on the first day, and the quotient was converted to% to obtain the survival rate. The results are shown in FIGS. 3 and 4, Tables 1 and 2. Changes in the number of viable bacteria during refrigerated storage are shown in FIGS. 5 and 6. In each of FIGS. 5 and 6, the viable cell counts are plotted on days 1, 14, 21, and 24 refrigerated storage.

結果、ビフィドバクテリウム・ロンガムに関しては、コントロールの発酵乳の冷蔵保存1日目の生菌数が1.4E+8cfu/g、冷蔵保存24日目の生菌数が7.0E+6cfu/gであったことに対して、本発明の発酵乳では冷蔵保存1日目の生菌数が1.5E+8cfu/g、冷蔵保存24日目の生菌数が1.6E+7cfu/gであった(図3)。冷蔵保存24日目における生残率は、コントロールの発酵乳では5.0%であったことに対して、本発明の発酵乳では10.7%であった(表1)。 As a result, regarding Bifidobacterium longum, the viable cell count on the first day of refrigerated storage of the control fermented milk was 1.4E + 8cfu / g, and the viable cell count on the 24th day of refrigerated storage was 7.0E + 6cfu / g. On the other hand, in the fermented milk of the present invention, the viable cell count on the first day of refrigerated storage was 1.5E + 8 cfu / g, and the viable cell count on the 24th day of refrigerated storage was 1.6E + 7 cfu / g (FIG. 3). The survival rate on the 24th day of refrigerated storage was 5.0% in the control fermented milk, whereas it was 10.7% in the fermented milk of the present invention (Table 1).

また、ラクトバチルス・ガセリに関しては、コントロールの発酵乳の冷蔵保存1日目の生菌数が3.0E+7cfu/g、冷蔵保存24日目の生菌数が2.6E+6cfu/gであったことに対して、本発明の発酵乳では冷蔵保存1日目の生菌数が2.3E+7cfu/g、冷蔵保存24日目の生菌数が1.9E+7cfu/gであった(図4)。冷蔵保存24日目における生残率は、コントロールの発酵乳では8.7%であったことに対して、本発明の発酵乳では82.6%であった(表2)。 Regarding Lactobacillus gasseri, the viable cell count on the first day of refrigerated storage of the control fermented milk was 3.0E + 7cfu / g, and the viable cell count on the 24th day of refrigerated storage was 2.6E + 6cfu / g. On the other hand, in the fermented milk of the present invention, the viable cell count on the first day of refrigerated storage was 2.3E + 7 cfu / g, and the viable cell count on the 24th day of refrigerated storage was 1.9E + 7 cfu / g (FIG. 4). The survival rate on the 24th day of refrigerated storage was 8.7% in the control fermented milk, whereas it was 82.6% in the fermented milk of the present invention (Table 2).

以上、ビフィドバクテリウム・ロンガム及びラクトバチルス・ガセリ両者について、冷蔵保存24日目における生菌数及び生残率ともに本発明の発酵乳のほうが高値であった。また、冷蔵保存24日目におけるビフィドバクテリウム・ロンガム及びラクトバチルス・ガセリの生菌数が、1.0E+7cfu/g及び1.0E+7cfu/gを上回った。
また、本発明の発酵乳では冷蔵保存15〜24日目の全ての期間にわたり、ビフィドバクテリウム・ロンガム及びラクトバチルス・ガセリ両者について、1.0E+7cfu/g及び1.0E+7cfu/gを上回った(図5および図6)。一方で、コントロールの発酵乳では、保存15日目に、ラクトバチルス・ガセリの生菌数が1.0E+7cfu/gを下回る結果となった。
As described above, the fermented milk of the present invention had higher viable cell counts and survival rates on the 24th day of refrigerated storage for both Bifidobacterium longum and Lactobacillus gasseri. In addition, the viable cell counts of Bifidobacterium longum and Lactobacillus gasseri on the 24th day of refrigerated storage exceeded 1.0E + 7cfu / g and 1.0E + 7cfu / g.
In addition, the fermented milk of the present invention exceeded 1.0E + 7cfu / g and 1.0E + 7cfu / g for both Bifidobacterium longum and Lactobacillus gasseri over the entire period of 15 to 24 days of refrigerated storage (). 5 and 6). On the other hand, in the controlled fermented milk, the viable cell count of Lactobacillus gasseri was less than 1.0E + 7cfu / g on the 15th day of storage.

〔比較例1〕
発酵終了後にラクトバチルス・ガセリのバルクスターターを発酵乳ミックス基準で1.0%添加する代わりに、発酵終了後にラクトバチルス・ガセリの菌体スターターを発酵乳ミックス基準で0.5%添加したこと(ラクトバチルス・ガセリの発酵後(冷蔵保存1日目)の菌数が1.0E+7cfu/g以上となるように調整)以外は実施例1と同様の操作を行い、発酵乳を製造した。製造した発酵乳に関して、冷蔵保存24日目のラクトバチルス・ガセリの生菌数を計測した。
その結果、ラクトバチルス・ガセリの冷蔵保存24日目の生菌数は1.0E+3cfu/g未満であり、ラクトバチルス・ガセリの生残性は非常に低い結果となった。
[Comparative Example 1]
Instead of adding 1.0% of Lactobacillus gasseri bulk starter after fermentation, 0.5% of Lactobacillus gasseri cell starter was added after fermentation (based on fermented milk mix). Fermented milk was produced by performing the same operation as in Example 1 except that the number of bacteria after fermentation of Lactobacillus gasseri (1st day of refrigerated storage) was adjusted to 1.0E + 7 cfu / g or more). With respect to the fermented milk produced, the viable cell count of Lactobacillus gasseri was measured on the 24th day of refrigerated storage.
As a result, the viable cell count of Lactobacillus gasseri on the 24th day of refrigerated storage was less than 1.0E + 3cfu / g, and the survivability of Lactobacillus gasseri was very low.

〔比較例2〕
発酵終了後にラクトバチルス・ガセリのバルクスターターを発酵乳ミックス基準で1.0%添加する代わりに、発酵スターター乳酸菌の添加直後にラクトバチルス・ガセリのバルクスターターを原料ミックス基準で0.05%添加したこと(ラクトバチルス・ガセリの発酵後(冷蔵保存1日目)の菌数が1.0E+7cfu/g以上となるように調整)以外は実施例1と同様の操作を行い、発酵乳を製造した。製造した発酵乳に関して、冷蔵保存24日目のビフィドバクテリウム・ロンガム及びラクトバチルス・ガセリの生菌数を計測した。
その結果、ラクトバチルス・ガセリの冷蔵保存24日目の生菌数は2.1E+6cfu/gであり、ラクトバチルス・ガセリの生残性は低い結果となった。また、ビフィドバクテリウム・ロンガムの冷蔵保存24日目の生菌数は9.9E+6cfu/gで、ビフィドバクテリウム・ロンガムの生残性向上は確認できなかった。
[Comparative Example 2]
Instead of adding 1.0% of Lactobacillus gasseri bulk starter after fermentation based on the fermented milk mix standard, 0.05% of Lactobacillus gasseri bulk starter was added immediately after the addition of fermented starter lactic acid bacteria. Fermented milk was produced by performing the same operation as in Example 1 except that (adjusted so that the number of bacteria after fermentation of Lactobacillus gasseri (1st day of refrigerated storage) was 1.0E + 7cfu / g or more). With respect to the fermented milk produced, the viable cell counts of Bifidobacterium longum and Lactobacillus gasseri were measured on the 24th day of refrigerated storage.
As a result, the viable cell count of Lactobacillus gasseri on the 24th day of refrigerated storage was 2.1E + 6cfu / g, and the survivability of Lactobacillus gasseri was low. In addition, the viable cell count of Bifidobacterium longum on the 24th day of refrigerated storage was 9.9E + 6 cfu / g, and improvement in survival of Bifidobacterium longum could not be confirmed.

したがって、ラクトバチルス・ガセリの投与形態及び投与タイミングのいずれか一方の変更では、ラクトバチルス・ガセリの生残性を改善することはできず、投与形態及び投与タイミングの両方をコントロールから変更することが必要であった。 Therefore, changing either the dosage form or the timing of administration of Lactobacillus gasseri cannot improve the survival of Lactobacillus gasseri, and both the dosage form and the timing of administration may be changed from the control. It was necessary.

本発明によれば、発酵乳の製造原料以外のものを添加する必要がなく、そして発酵乳の風味に影響を与えることなく、ビフィドバクテリウム属細菌及び特定のラクトバチルス属細菌の生残性、特に冷蔵保存時における生残性を向上させることができる。 According to the present invention, the survivability of bifidobacteria and certain Lactobacillus bacteria does not need to be added other than the raw material for producing fermented milk and does not affect the flavor of fermented milk. In particular, the survivability during refrigerated storage can be improved.

Claims (11)

1〜10℃で15〜24日目まで保存した場合に、保存最終日において、ビフィドバクテリウム属細菌の生菌数が、1.0E+7cfu/g以上であり、ラクトバチルス属細菌の生菌数が、1.0E+7cfu/g以上である発酵乳であって、前記ラクトバチルス属細菌が、ラクトバチルス・ガセリ、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・クリスパータス、ラクトバチルス・アミロボラス、ラクトバチルス・ガリナラム、及びラクトバチルス・ジョンソニーからなる群から選択される一種以上である、前記発酵乳。 When stored at 1 to 10 ° C. for 15 to 24 days, the viable cell count of Bifidobacterium spp. Is 1.0E + 7 cfu / g or more on the final storage day, and the viable cell count of Lactobacillus spp. Is 1.0E + 7 cfu / g or more, and the lactobacillus bacteria are lactobacillus gasseri, lactobacillus acidophilus, lactobacillus crispatas, lactobacillus amyloboras, lactobacillus galinarum, and lacto. The fermented milk, which is one or more selected from the group consisting of Bacillus Johnson. ビフィドバクテリウム属細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガムであり、そしてラクトバチルス属細菌が、ラクトバチルス・ガセリである、請求項1に記載の発酵乳。 The fermented milk according to claim 1, wherein the Bifidobacterium bacterium is Bifidobacterium longum, and the Lactobacillus bacterium is Lactobacillus gasseri. (A)ビフィドバクテリウム属細菌を原料ミックスに添加する工程と
(B)前記原料ミックスを発酵させ、発酵乳ミックスを得る工程と
(C)ラクトバチルス属細菌のバルクスターターを前記発酵乳ミックスに添加する工程と
(D)前記発酵乳ミックスを冷蔵及び保存し、発酵乳を得る工程と
を含む、発酵乳の製造方法であって、
前記ラクトバチルス属細菌が、ラクトバチルス・ガセリ、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・クリスパータス、ラクトバチルス・アミロボラス、ラクトバチルス・ガリナラム、及びラクトバチルス・ジョンソニーからなる群から選択される一種以上である、前記製造方法。
(A) A step of adding Bifidobacterium bacterium to the raw material mix, (B) a step of fermenting the raw material mix to obtain a fermented milk mix, and (C) a bulk starter of Lactobacillus bacterium into the fermented milk mix. A method for producing fermented milk, which comprises a step of adding and (D) a step of refrigerating and preserving the fermented milk mix to obtain fermented milk.
The bacterium belonging to the genus Lactobacillus is one or more selected from the group consisting of Lactobacillus gasseri, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus crispatas, Lactobacillus amylovoras, Lactobacillus galinarum, and Lactobacillus Johnson. The manufacturing method.
ビフィドバクテリウム属細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガムであり、そしてラクトバチルス属細菌が、ラクトバチルス・ガセリである、請求項3に記載の発酵乳の製造方法。 The method for producing fermented milk according to claim 3, wherein the Bifidobacterium bacterium is Bifidobacterium longum, and the Lactobacillus bacterium is Lactobacillus gasseri. (A)工程においてビフィドバクテリウム属細菌に加えて、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシズ・ブルガリクス及びストレプトコッカス・サーモフィルスが添加される、請求項3又は4に記載の発酵乳の製造方法。 The method for producing fermented milk according to claim 3 or 4, wherein Lactobacillus delbrucky subspecies bulgaricus and Streptococcus thermophilus are added in addition to the bacteria of the genus Bifidobacterium in the step (A). 工程(D)が、(C)工程後6時間以内に実施される、請求項3〜5のいずれかに記載の発酵乳の製造方法。 The method for producing fermented milk according to any one of claims 3 to 5, wherein the step (D) is carried out within 6 hours after the step (C). 工程(B)と(C)との間に、(E)前記発酵乳ミックスを20℃以下に冷却する工程を含む、請求項3〜6のいずれかに記載の発酵乳の製造方法。 The method for producing fermented milk according to any one of claims 3 to 6, which comprises (E) a step of cooling the fermented milk mix to 20 ° C. or lower between steps (B) and (C). (A)ビフィドバクテリウム属細菌を原料ミックスに添加する工程と
(B)前記原料ミックスを発酵させ、発酵乳ミックスを得る工程と
(C)ラクトバチルス属細菌のバルクスターターを発酵乳ミックスに添加する工程と
(D)前記発酵乳ミックスを冷蔵及び保存し、発酵乳を得る工程と
を含む、発酵乳中のビフィドバクテリウム属細菌及びラクトバチルス属細菌の生残性向上方法であって、
前記ラクトバチルス属細菌が、ラクトバチルス・ガセリ、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・クリスパータス、ラクトバチルス・アミロボラス、ラクトバチルス・ガリナラム、及びラクトバチルス・ジョンソニーからなる群から選択される一種以上である、前記生残性向上方法。
(A) Step of adding Bifidobacterium bacterium to raw material mix, (B) Step of fermenting the raw material mix to obtain fermented milk mix, and (C) Add bulk starter of lactobacillus bacterium to fermented milk mix A method for improving the survivability of Bifidobacterium spp. And Lactobacillus spp. In fermented milk, which comprises a step of refrigerating and preserving the fermented milk mix to obtain fermented milk.
The bacterium belonging to the genus Lactobacillus is one or more selected from the group consisting of Lactobacillus gasseri, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus crispatas, Lactobacillus amylovoras, Lactobacillus galinarum, and Lactobacillus Johnson. The method for improving survivability.
ビフィドバクテリウム属細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガムであり、そしてラクトバチルス属細菌が、ラクトバチルス・ガセリである、請求項8に記載の発酵乳中のビフィドバクテリウム属細菌及びラクトバチルス属細菌の生残性向上方法。 The Bifidobacterium and Lactobacillus in fermented milk according to claim 8, wherein the Bifidobacterium bacterium is Bifidobacterium longum and the Lactobacillus bacterium is Lactobacillus gasseri. How to improve the survival of genus bacteria. 工程(D)が、(C)工程後6時間以内に実施される、請求項8又は9に記載の発酵乳中のビフィドバクテリウム属細菌及びラクトバチルス属細菌の生残性向上方法。 The method for improving the viability of Bifidobacterium spp. And Lactobacillus spp. In fermented milk according to claim 8 or 9, wherein step (D) is carried out within 6 hours after step (C). 工程(B)と(C)との間に、(E)前記発酵乳ミックスを20℃以下に冷却する工程を含む、請求項8〜10のいずれかに記載の発酵乳中のビフィドバクテリウム属細菌及びラクトバチルス属細菌の生残性向上方法。 The bifidobacteria in fermented milk according to any one of claims 8 to 10, comprising (E) a step of cooling the fermented milk mix to 20 ° C. or lower between steps (B) and (C). A method for improving the viability of genus bacteria and Lactobacillus genus bacteria.
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