JP2020106535A - Fluorescence detection optical device - Google Patents

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橘高 重雄
Shigeo Kikko
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Abstract

To provide a small fluorescence detection optical device with high detection sensitivity.SOLUTION: A fluorescence detection optical device 10 irradiates a sample S with excitation light EL and detects fluorescence FL generated by the irradiation from the sample S. The fluorescence detection optical device 10 comprises: a first lens group 20 that directly receives the fluorescence FL generated from the sample S; a second lens group 22 which is arranged coaxially with the first lens group 20 and includes a gap part formed by cutting a part thereof outside the axis; and an excitation light optical system 24 which emits the excitation light EL. The excitation light optical system 24 is arranged so that the emitted excitation light EL transmits through an off-axis portion 20a of the first lens group 20 and hits the sample S. In the fluorescence detection optical device 10, a part of the excitation light optical system 24 is arranged in the gap part 30.SELECTED DRAWING: Figure 2

Description

本発明は、被検出物に励起光を照射して、該被検出物が発生した蛍光を検出する蛍光検出用光学装置に関する。 The present invention relates to an optical device for fluorescence detection, which irradiates an object to be detected with excitation light and detects the fluorescence generated by the object to be detected.

近年、ライフサイエンスの分野において、蛍光検出用光学装置が多く使われ始めている。蛍光検出用光学装置は簡便でかつ検出感度が高いため、時には増幅工程と併用して、蛍光を発する化学物質により標識されたDNAなどの核酸の定量的な検出をする際に有効である。 In recent years, many optical devices for fluorescence detection have begun to be used in the field of life science. Since an optical device for fluorescence detection is simple and has high detection sensitivity, it is sometimes used in combination with an amplification step to effectively detect nucleic acids such as DNA labeled with a fluorescent chemical substance.

例えば特許文献1に開示された光検出装置は、レーザ光を第1光導波路により導光し、第1レンズで集光して略斜め上方より検体に照射する照射光学系と、照射光によって励起された検体からの蛍光を第2レンズによって集光し、第2光導波路によって測定器に導光する受光光学系とを備える。この光検出装置では、照射光学系と受光光学系は、別々の導光経路である。 For example, the photodetector disclosed in Patent Document 1 guides a laser beam through a first optical waveguide, collects the laser beam with a first lens, and irradiates a specimen substantially obliquely from above with an irradiation optical system and excitation with the irradiation light. And a light receiving optical system that collects the fluorescence from the sample with the second lens and guides it to the measuring instrument with the second optical waveguide. In this photodetector, the irradiation optical system and the light receiving optical system are separate light guide paths.

国際公開第2007/091530号International Publication No. 2007/091530

しかしながら、特許文献1のように照射光学系と受光光学系を別個にした蛍光検出用光学装置は、以下のような問題点を有する。 However, the fluorescence detecting optical device in which the irradiation optical system and the light receiving optical system are separate as in Patent Document 1 has the following problems.

図1は、従来の蛍光検出用光学装置の一例を示す。図1に示す蛍光検出用光学装置100は、容器C内の試料Sに励起光ELを照射するための照射光学系102と、試料Sから発生した蛍光FLを蛍光集光点103に集光するための受光光学系104とを備える。照射光学系102は、励起光源106と、励起光ELを試料Sに集光する励起光用レンズ108とを備える。受光光学系104は、対物レンズ110を備え、試料S上の蛍光出射点101から出射された蛍光FLを、蛍光出射点101と共役な蛍光集光点103に集光する。図1に示すように、照射光学系102の光軸112は、受光光学系104の光軸114に対して傾斜している(励起光ELの光軸112と受光光学系104の光軸114とのなす角をθiとする)。 FIG. 1 shows an example of a conventional fluorescence detection optical device. The optical device 100 for fluorescence detection shown in FIG. 1 focuses the irradiation optical system 102 for irradiating the sample S in the container C with the excitation light EL, and the fluorescence FL generated from the sample S at the fluorescence focusing point 103. And a light receiving optical system 104 for. The irradiation optical system 102 includes an excitation light source 106 and an excitation light lens 108 that focuses the excitation light EL on the sample S. The light receiving optical system 104 includes an objective lens 110, and collects the fluorescence FL emitted from the fluorescence emission point 101 on the sample S at a fluorescence concentration point 103 that is conjugate with the fluorescence emission point 101. As shown in FIG. 1, the optical axis 112 of the irradiation optical system 102 is inclined with respect to the optical axis 114 of the light receiving optical system 104 (the optical axis 112 of the excitation light EL and the optical axis 114 of the light receiving optical system 104. The angle formed by is θi).

図1のように構成された蛍光検出用光学装置100において、検出感度を向上させるためには、より多くの蛍光FLを受光光学系104に取り込む必要がある。そのためには受光光学系104の開口数(NA:numerical aperture)を大きくすることが要件となるが、蛍光検出用光学装置100においては限界がある。これは、受光光学系104のNAを増加させるためには対物レンズ110を大きくすればよいが、対物レンズ110をあまり大きくしすぎると角度θiで照射される励起光ELと対物レンズ110が干渉するためである。 In the fluorescence detecting optical device 100 configured as shown in FIG. 1, in order to improve the detection sensitivity, it is necessary to incorporate more fluorescence FL into the light receiving optical system 104. For that purpose, it is necessary to increase the numerical aperture (NA) of the light receiving optical system 104, but there is a limit in the fluorescence detection optical device 100. This can be achieved by increasing the size of the objective lens 110 in order to increase the NA of the light receiving optical system 104, but if the size of the objective lens 110 is too large, the excitation light EL emitted at the angle θi interferes with the objective lens 110. This is because.

また、受光光学系104の十分なNAを確保しつつ、励起光ELと対物レンズ110の干渉を回避しようとした場合、試料Sから離れた位置、または角度θiが大きくなるような位置に励起光源106および励起光用レンズ108を配置しなければならない。この場合、蛍光検出用光学装置100の小型化が難しくなる。 Further, when trying to avoid the interference between the excitation light EL and the objective lens 110 while ensuring a sufficient NA of the light receiving optical system 104, the excitation light source is located at a position away from the sample S or at a position where the angle θi increases. 106 and the lens 108 for excitation light must be arranged. In this case, it becomes difficult to downsize the fluorescence detecting optical device 100.

さらに、特に図1に示すように容器Cが深底である場合には、角度θiが大きいと容器Cの側壁によって励起光ELが遮られるおそれがある。この場合、容器Cの底に位置する試料Sに十分な励起光ELを照射できず、その結果試料Sから蛍光を検出できない可能性がある。 Further, particularly when the container C has a deep bottom as shown in FIG. 1, the excitation light EL may be blocked by the side wall of the container C when the angle θi is large. In this case, the sample S located at the bottom of the container C cannot be irradiated with sufficient excitation light EL, and as a result, fluorescence may not be detected from the sample S.

本発明はこうした状況に鑑みてなされたものであり、その目的は、高検出感度且つ小型の蛍光検出用光学装置を提供することにある。 The present invention has been made in view of such circumstances, and an object thereof is to provide a compact fluorescence detection optical device with high detection sensitivity.

上記課題を解決するために、本発明のある態様の蛍光検出用光学装置は、被検出物に対して励起光を照射し、該照射により被検出物から発生した蛍光を検出する。この蛍光検出用光学装置は、被検出物から発生した蛍光を直接受光する第1レンズ群と、第1レンズ群と同軸に配置され、第1レンズ群を通過した蛍光を受光する第2レンズ群であって、軸外の一部が切除されて空隙部分が形成された第2レンズ群と、励起光を出射する励起光光学系であって、出射した励起光が第1レンズ群の軸外を通って被検出物に照射されるよう配置される励起光光学系とを備える。この蛍光検出用光学装置においては、励起光光学系の一部が、前記第2レンズ群の前記空隙部分に配置される。 In order to solve the above problems, an optical device for fluorescence detection according to an aspect of the present invention irradiates an object to be detected with excitation light and detects fluorescence generated from the object to be detected by the irradiation. This fluorescence detection optical device includes a first lens group that directly receives fluorescence generated from an object to be detected, and a second lens group that is arranged coaxially with the first lens group and that receives fluorescence that has passed through the first lens group. And a second lens group in which a part of the off-axis is cut off to form a void portion, and an excitation light optical system for emitting excitation light, wherein the emitted excitation light is off-axis of the first lens group. And an excitation light optical system arranged to irradiate the object to be detected. In this fluorescence detecting optical device, a part of the excitation light optical system is arranged in the void portion of the second lens group.

第1レンズ群は、被検出物から発生した蛍光を平行光にしてもよい。第2レンズ群は、第1レンズ群からの蛍光の平行光を集光してもよい。 The first lens group may collimate the fluorescence generated from the object to be detected into parallel light. The second lens group may collect the parallel light of fluorescence from the first lens group.

空隙部分は、第2レンズ群の周縁部に形成されてもよい。 The void portion may be formed on the peripheral portion of the second lens group.

励起光光学系は、励起光を発出する励起光源と、励起光源からの励起光を平行光にして第1レンズ群の軸外に入射させる励起光用レンズ群とを備えてもよい。 The pumping light optical system may include a pumping light source that emits pumping light, and a pumping light lens group that collimates the pumping light from the pumping light source and makes it enter off-axis of the first lens group.

励起光源は、励起光を発光する発光素子を備えてもよい。 The excitation light source may include a light emitting element that emits excitation light.

励起光源は、励起光を導光する励起光用光ファイバの出射端面を備えてもよい。 The excitation light source may include an emission end face of an excitation light optical fiber that guides the excitation light.

励起光源は、第2レンズ群の像側空間に設けられた発光素子を備えてもよい。励起光用レンズ群は、発光素子の発光領域の中間像を空隙部分に形成するよう配置されたリレーレンズ系を備えてもよい。 The excitation light source may include a light emitting element provided in the image side space of the second lens group. The excitation light lens group may include a relay lens system arranged to form an intermediate image of the light emitting region of the light emitting element in the void portion.

複数の励起光光学系を備えてもよい。第2レンズ群に複数の空隙部分が形成され、複数の空隙部分のそれぞれに励起光光学系の一部が配置されてもよい。 A plurality of excitation light optical systems may be provided. A plurality of void portions may be formed in the second lens group, and a part of the excitation light optical system may be arranged in each of the plurality of void portions.

本発明によれば、高検出感度且つ小型の蛍光検出用光学装置を提供できる。 According to the present invention, it is possible to provide an optical device for fluorescence detection which has a high detection sensitivity and a small size.

従来の蛍光検出用光学装置の一例を示す図である。It is a figure which shows an example of the conventional optical device for fluorescence detection. 本実施形態に係る蛍光検出用光学装置を説明するための図である。It is a figure for explaining the optical device for fluorescence detection concerning this embodiment. 図3(a)〜(c)は、第2レンズ群に形成される空隙部分の形状および大きさを説明するための図である。3A to 3C are views for explaining the shape and size of the void portion formed in the second lens group. 第1実施例に係る蛍光検出用光学装置を説明するための図である。It is a figure for explaining the optical device for fluorescence detection concerning the 1st example. 第2実施例に係る蛍光検出用光学装置を説明するための図である。It is a figure for demonstrating the fluorescence detection optical apparatus which concerns on 2nd Example. 第3実施例に係る蛍光検出用光学装置を説明するための図である。It is a figure for demonstrating the fluorescence detection optical apparatus which concerns on 3rd Example. 本発明の別の実施形態に係る蛍光検出用光学装置を説明するための図である。It is a figure for demonstrating the fluorescence detection optical device which concerns on another embodiment of this invention. 図7に示す蛍光検出用光学装置において、第2レンズ群を光軸方向から見た平面図を示す図である。FIG. 8 is a diagram showing a plan view of the second lens group as seen from the optical axis direction in the fluorescence detecting optical device shown in FIG. 7.

以下、本発明の実施形態に係る蛍光検出用光学装置について説明する。各図面に示される同一または同等の構成要素、部材、処理には、同一の符号を付するものとし、適宜重複した説明は省略する。また、実施の形態は、発明を限定するものではなく例示であって、実施の形態に記述されるすべての特徴やその組み合わせは、必ずしも発明の本質的なものであるとは限らない。 Hereinafter, the fluorescence detection optical device according to the embodiment of the present invention will be described. The same or equivalent constituent elements, members, and processes shown in each drawing are denoted by the same reference numerals, and duplicated description will be omitted as appropriate. Further, the embodiments are merely examples and do not limit the invention, and all features and combinations thereof described in the embodiments are not necessarily essential to the invention.

図2は、本実施形態に係る蛍光検出用光学装置10を説明するための図である。蛍光検出用光学装置10は、被検出物としての試料Sに対して励起光を照射し、該照射により試料Sから発生した蛍光を検出するものである。試料Sは、容器C内に入れられている。 FIG. 2 is a diagram for explaining the fluorescence detection optical device 10 according to the present embodiment. The fluorescence detection optical device 10 irradiates the sample S as the object to be detected with excitation light and detects the fluorescence generated from the sample S by the irradiation. The sample S is contained in the container C.

図2に示すように、蛍光検出用光学装置10は、容器C内の試料Sに励起光ELを照射するための照射光学系12と、試料Sから発生した蛍光FLを集光するための受光光学系14とを備える。蛍光検出用光学装置10は、照射光学系12と受光光学系14を一体的に保持するための保持部材(図示せず)を備えてもよい。このように照射光学系12と受光光学系14とが一体化された蛍光検出用光学装置10は「光学ヘッド」とも呼ばれる。 As shown in FIG. 2, the fluorescence detection optical device 10 includes an irradiation optical system 12 for irradiating the sample S in the container C with the excitation light EL, and a light reception for collecting the fluorescence FL generated from the sample S. And an optical system 14. The fluorescence detecting optical device 10 may include a holding member (not shown) for integrally holding the irradiation optical system 12 and the light receiving optical system 14. The fluorescence detecting optical device 10 in which the irradiation optical system 12 and the light receiving optical system 14 are thus integrated is also referred to as an “optical head”.

受光光学系14は、試料S上の蛍光出射点11から出射された蛍光FLを、蛍光出射点11と共役な蛍光集光点13に集光する。受光光学系14は、試料S上の蛍光出射点11から発生した蛍光FLを直接受光して、平行光にする第1レンズ群20と、第1レンズ群20を通過した蛍光FLの平行光を受光して、蛍光集光点13に集光する第2レンズ群22とから構成される。本明細書において、「レンズ群」とは1または複数のレンズを表す。本願明細書では、受光光学系14において、試料Sのある空間を物点側空間、受光光学系14によって試料Sの像が形成される空間を像側空間とし、さらに、ある基準や構成物からの方向を「物点側」または「像側」という用語により指定する。この場合、蛍光出射点11は第1レンズ群20の物点側焦点と略一致し、蛍光集光点13は第2レンズ群22の像側焦点と略一致する。 The light receiving optical system 14 condenses the fluorescence FL emitted from the fluorescence emission point 11 on the sample S to a fluorescence condensing point 13 that is conjugate with the fluorescence emission point 11. The light receiving optical system 14 directly receives the fluorescent light FL generated from the fluorescent light emission point 11 on the sample S and converts it into parallel light, and the parallel light of the fluorescent light FL that has passed through the first lens group 20. The second lens group 22 receives the light and focuses it on the fluorescence converging point 13. In this specification, the “lens group” refers to one or a plurality of lenses. In the present specification, in the light receiving optical system 14, the space in which the sample S is located is the object side space, the space in which the image of the sample S is formed by the light receiving optical system 14 is the image side space, Is designated by the term "object side" or "image side". In this case, the fluorescence emission point 11 substantially coincides with the object-side focal point of the first lens group 20, and the fluorescence condensing point 13 substantially coincides with the image-side focal point of the second lens group 22.

このように第1レンズ群20と第2レンズ群22を用いて受光光学系14を構成することにより、共役長の調整が容易となり、光学ヘッドの鏡筒長の設定がしやすく、さらにこのような構成は収差の低減にも有利である。第2レンズ群22は、第1レンズ群20と同軸に配置されることが好ましい。この場合、レンズ系による収差を低減させて、蛍光集光点13への集光効率を向上させることができる。第1レンズ群20と第2レンズ群22とは同一の仕様である必要はない。 By configuring the light receiving optical system 14 using the first lens group 20 and the second lens group 22 in this way, the conjugate length can be easily adjusted, and the lens barrel length of the optical head can be easily set. Such a configuration is also advantageous for reducing aberrations. The second lens group 22 is preferably arranged coaxially with the first lens group 20. In this case, the aberration due to the lens system can be reduced, and the efficiency of focusing on the fluorescent light focusing point 13 can be improved. The first lens group 20 and the second lens group 22 do not have to have the same specifications.

照射光学系12は、励起光ELを出射する励起光光学系24と、励起光光学系24からの励起光ELを屈折して試料Sに集光させる第1レンズ群20の軸外部分20aとから構成される。励起光光学系24は、第1レンズ群20より像側に配置される。励起光光学系24は、出射した励起光ELが第1レンズ群20の軸外部分20aを通って試料Sの蛍光出射点11に集光されるよう配置される。蛍光出射点11に入射する励起光ELの光軸19は、第1レンズ群20の光軸17に対して傾斜している(励起光ELの光軸19と受光光学系14の光軸17とのなす角をθiとする)。 The irradiation optical system 12 includes an excitation light optical system 24 that emits the excitation light EL, and an off-axis portion 20a of the first lens group 20 that refracts the excitation light EL from the excitation light optical system 24 and focuses it on the sample S. Composed of. The excitation light optical system 24 is arranged on the image side of the first lens group 20. The excitation light optical system 24 is arranged so that the emitted excitation light EL passes through the off-axis portion 20a of the first lens group 20 and is condensed at the fluorescence emission point 11 of the sample S. The optical axis 19 of the excitation light EL that enters the fluorescence emission point 11 is inclined with respect to the optical axis 17 of the first lens group 20 (the optical axis 19 of the excitation light EL and the optical axis 17 of the light receiving optical system 14). The angle formed by is θi).

励起光光学系24は、励起光ELを発出する励起光源16と、励起光源16からの励起光ELを平行光にして第1レンズ群20の軸外部分20aに入射させる励起光用レンズ群25とから構成される。励起光用レンズ群25は、その光軸21が第1レンズ群20の光軸17と平行となるように配置される。これにより、第1レンズ群20の軸外部分20aを通過した励起光ELを蛍光出射点11(すなわち第1レンズ群20の物点側焦点)に集光することができる。 The excitation light optical system 24 includes an excitation light source 16 that emits the excitation light EL, and an excitation light lens group 25 that makes the excitation light EL from the excitation light source 16 parallel light and makes it enter the off-axis portion 20 a of the first lens group 20. Composed of and. The excitation light lens group 25 is arranged such that its optical axis 21 is parallel to the optical axis 17 of the first lens group 20. As a result, the excitation light EL that has passed through the off-axis portion 20a of the first lens group 20 can be condensed at the fluorescence emission point 11 (that is, the object-side focus of the first lens group 20).

本実施形態に係る蛍光検出用光学装置10において、第2レンズ群22の軸外の一部が切除されて空隙部分30が形成されている。そして、この空隙部分30に、励起光光学系24の一部である励起光源16が配置されている。励起光光学系24の励起光用レンズ群25は、第1レンズ群20と第2レンズ群22の間に配置されている。 In the fluorescence detecting optical device 10 according to the present embodiment, the off-axis part of the second lens group 22 is cut off to form the void portion 30. Then, the excitation light source 16 which is a part of the excitation light optical system 24 is arranged in the void portion 30. The excitation light lens group 25 of the excitation light optical system 24 is arranged between the first lens group 20 and the second lens group 22.

以上のように構成された蛍光検出用光学装置10では、励起光源16から発出された励起光ELは、励起光用レンズ群25によって平行光とされた後、第1レンズ群20の軸外部分20aを通って試料Sの蛍光出射点11に角度θiで入射する。試料Sの蛍光出射点11で生じた蛍光FLは、第1レンズ群20に取り込まれて平行光とされた後、第2レンズ群22によって蛍光集光点13に集光される。蛍光集光点13に例えばPD(Photodiode)等の受光素子の受光面を置くことで、試料Sで生じた蛍光FLを検出することができる。 In the fluorescence detecting optical device 10 configured as described above, the excitation light EL emitted from the excitation light source 16 is collimated by the excitation light lens group 25, and then the off-axis portion of the first lens group 20. The light passes through 20a and enters the fluorescence emission point 11 of the sample S at an angle θi. The fluorescence FL generated at the fluorescence emission point 11 of the sample S is taken into the first lens group 20 and made into parallel light, and then is condensed at the fluorescence condensing point 13 by the second lens group 22. By placing the light receiving surface of a light receiving element such as a PD (Photodiode) at the fluorescence condensing point 13, the fluorescence FL generated in the sample S can be detected.

本実施形態に係る蛍光検出用光学装置10では、受光光学系14のNAを規定する第1レンズ群20の軸外部分20aを利用して、励起光ELを試料Sに集光している。言い換えると、受光光学系14内に照射光学系12が配置されている。この構成によれば、図1で説明した蛍光検出用光学装置100とは異なり、第1レンズ群20を大きくしても、第1レンズ群20と励起光ELが干渉することはない。言い換えると、照射光学系12の存在によって受光光学系14のNAが制限されることはない。従って、本実施形態に係る蛍光検出用光学装置10によれば、受光光学系14のNAを大きくすることができるため、多くの蛍光を受光光学系14に取り込むことが可能となり、その結果、蛍光の検出感度を向上できる。 In the fluorescence detecting optical device 10 according to the present embodiment, the excitation light EL is focused on the sample S by utilizing the off-axis portion 20a of the first lens group 20 that defines the NA of the light receiving optical system 14. In other words, the irradiation optical system 12 is arranged in the light receiving optical system 14. According to this configuration, unlike the fluorescence detecting optical device 100 described with reference to FIG. 1, even if the first lens group 20 is enlarged, the first lens group 20 and the excitation light EL do not interfere with each other. In other words, the NA of the light receiving optical system 14 is not limited by the presence of the irradiation optical system 12. Therefore, according to the fluorescence detecting optical device 10 of the present embodiment, since the NA of the light receiving optical system 14 can be increased, a large amount of fluorescence can be taken into the light receiving optical system 14, and as a result, fluorescence The detection sensitivity of can be improved.

また、本実施形態に係る蛍光検出用光学装置10では、第2レンズ群22の軸外の一部が切除されて空隙部分30が形成され、該空隙部分30に励起光光学系24の一部(ここでは励起光源16)が配置されている。仮に空隙部分が形成されていない第2レンズ群を用いた場合、第1レンズ群と第2レンズ群の間に励起光光学系を配置するためには第1レンズ群と第2レンズ群の間隔を広くとらなければならず、蛍光検出用光学装置の小型化が難しくなる。本実施形態のように、第2レンズ群22の空隙部分30に励起光光学系24の一部を配置する構成をとることにより、第1レンズ群20と第2レンズ群22の間隔を狭くすることができるため、蛍光検出用光学装置10の小型化を実現できる。また、励起光光学系24の配置に余裕が生じるため、蛍光検出用光学装置10の組立を容易にすることができる。 Further, in the fluorescence detecting optical device 10 according to the present embodiment, the off-axis part of the second lens group 22 is cut off to form the void portion 30, and the excitation light optical system 24 is partly formed in the void portion 30. (Here, the excitation light source 16) is arranged. If a second lens group in which no void portion is formed is used, in order to dispose the excitation light optical system between the first lens group and the second lens group, the distance between the first lens group and the second lens group is required. Therefore, it becomes difficult to reduce the size of the fluorescence detection optical device. As in this embodiment, the gap between the first lens group 20 and the second lens group 22 is narrowed by arranging a part of the excitation light optical system 24 in the void portion 30 of the second lens group 22. Therefore, the fluorescence detection optical device 10 can be downsized. Further, since there is a margin in the arrangement of the excitation light optical system 24, it is possible to easily assemble the fluorescence detection optical device 10.

本実施形態では、第2レンズ群22の空隙部分30に励起光源16を配置したが、空隙部分30には励起光光学系24の別の要素、例えば励起光用レンズ群25、励起光源16に必要な電力供給ライン、励起光源16を保持するための機械的構成などが配置されてもよい。 In the present embodiment, the excitation light source 16 is arranged in the void portion 30 of the second lens group 22, but in the void portion 30 another element of the excitation light optical system 24, for example, the excitation light lens group 25 and the excitation light source 16 is provided. Required power supply lines, mechanical arrangements for holding the pump light source 16, etc. may be arranged.

また、本実施形態に係る蛍光検出用光学装置10では、受光光学系14内に照射光学系12が配置されていることにより、励起光ELの光軸19と受光光学系14の光軸17とのなす角度θiを小さく設定することができる。これにより、特に図2に示すように容器Cが深底である場合であっても、容器Cの側壁によって励起光ELが遮られ難くなる。その結果、容器Cの底に位置する試料Sに十分な励起光ELを照射できるようになるため、試料Sからの蛍光発生量が増大し、蛍光の検出感度を向上できる。受光光学系および励起光光学系は、レンズ系の中間に平行光が形成されるような本実施形態に限定されるものではなく、それらの光学系を適切に設計することにより受光光学系14内に照射光学系12が設置されるように構成されることにより、励起光ELの光軸と受光光学系14の光軸とのなす角度θiを小さく設定することができるという作用がもたらされる場合にも本願発明と同一の効果が得られることは云うまでもない。 Further, in the fluorescence detecting optical device 10 according to the present embodiment, the irradiation optical system 12 is arranged in the light receiving optical system 14, so that the optical axis 19 of the excitation light EL and the optical axis 17 of the light receiving optical system 14 are provided. The angle θi formed by can be set small. This makes it difficult for the side wall of the container C to block the excitation light EL even when the container C has a deep bottom as shown in FIG. 2. As a result, the sample S located at the bottom of the container C can be irradiated with sufficient excitation light EL, so that the amount of fluorescence generated from the sample S is increased and the fluorescence detection sensitivity can be improved. The light receiving optical system and the excitation light optical system are not limited to the present embodiment in which parallel light is formed in the middle of the lens system, and by appropriately designing these optical systems, the light receiving optical system 14 In the case where the irradiation optical system 12 is configured to be installed in the case where the angle θi formed by the optical axis of the excitation light EL and the optical axis of the light receiving optical system 14 can be set small, Needless to say, the same effects as those of the present invention can be obtained.

図3(a)〜(c)は、第2レンズ群22に形成される空隙部分30の形状および大きさを説明するための図である。図3(a)〜(c)は、第2レンズ群22を光軸方向から見た平面図を示す。図3(a)〜(c)には励起光用レンズ群25もあわせて図示されている。 FIGS. 3A to 3C are views for explaining the shape and size of the void portion 30 formed in the second lens group 22. 3A to 3C are plan views of the second lens group 22 viewed from the optical axis direction. 3A to 3C, the excitation light lens group 25 is also shown.

図3(a)は、第2レンズ群22の軸外部分を凵の字状に切除することにより形成された空隙部分30を示す。図3(a)に示す空隙部分30は、励起光用レンズ群25と略同等の大きさに形成されている。図3(b)は、第2レンズ群22の軸外部分を光軸に平行な面で切除することにより形成された空隙部分30を示す。図3(b)に示す空隙部分30は、励起光用レンズ群25よりも大きく形成されている。図3(c)は、第2レンズ群22の軸外部分を穿孔することにより形成された空隙部分30を示す。図3(c)に示す空隙部分30は、励起光用レンズ群25よりも小さく形成されている。 FIG. 3A shows a void portion 30 formed by cutting the off-axis portion of the second lens group 22 into a cuboid shape. The void portion 30 shown in FIG. 3A is formed to have substantially the same size as the excitation light lens group 25. FIG. 3B shows a void portion 30 formed by cutting off the off-axis portion of the second lens group 22 with a plane parallel to the optical axis. The void portion 30 shown in FIG. 3B is formed larger than the excitation light lens group 25. FIG. 3C shows the void portion 30 formed by punching the off-axis portion of the second lens group 22. The void portion 30 shown in FIG. 3C is formed smaller than the excitation light lens group 25.

図3(a)〜(c)は空隙部分30の形状および大きさの一例を示しており、当然ながら空隙部分30の形状および大きさは図3(a)〜(c)に示す形状に限定されない。空隙部分30の形状および大きさは、空隙部分30に配置される要素の形状および大きさによって変わる。空隙部分30に入射した蛍光は蛍光集光点13に集光されずに損失されてしまうため、空隙部分30の大きさは必要最小限とすることが好ましい。 3A to 3C show an example of the shape and size of the void portion 30, and of course, the shape and size of the void portion 30 are limited to the shapes shown in FIGS. 3A to 3C. Not done. The shape and size of the void portion 30 depends on the shape and size of the elements arranged in the void portion 30. Since the fluorescence that has entered the void portion 30 is lost without being focused on the fluorescent light focusing point 13, it is preferable that the size of the void portion 30 is set to a necessary minimum.

励起光用レンズ群25を構成するレンズの一部または全部は、ボールレンズであってもよい。励起光用レンズ群25については、その径や幅が小さければ小さいほどよい。しかしながら小径のレンズは一般的に高価である場合が多い。その点ボールレンズは比較的安価で大量に生産されており、多用な屈折率や透過特性を有する材料によるものや、小径のものが入手しやすいという利点がある。 A part or all of the lenses forming the excitation light lens group 25 may be ball lenses. As for the excitation light lens group 25, the smaller the diameter and the width, the better. However, small-diameter lenses are often expensive in general. In that respect, ball lenses are relatively inexpensive and are mass-produced, and there is an advantage in that a ball lens made of a material having various refractive indexes and transmission characteristics and a lens having a small diameter are easily available.

空隙部分30は、第2レンズ群22の周縁部に形成されることが好ましい。これは、受光光学系14によって取り込まれるレンズ単位面積あたりの蛍光量は、通常光軸に近いほど大きくなるためである。光量密度が光軸付近に比べて低い周縁部に空隙部分30を形成することで、より多くの蛍光を蛍光集光点13に集光でき、蛍光の検出感度を向上することができる。 The void portion 30 is preferably formed on the peripheral portion of the second lens group 22. This is because the amount of fluorescence taken in by the light receiving optical system 14 per unit area of the lens is usually larger as it is closer to the optical axis. By forming the void portion 30 in the peripheral portion where the light amount density is lower than that near the optical axis, more fluorescence can be condensed at the fluorescence condensing point 13 and the fluorescence detection sensitivity can be improved.

次に、蛍光検出用光学装置10の実施例を説明する。 Next, an embodiment of the fluorescence detecting optical device 10 will be described.

図4は、第1実施例に係る蛍光検出用光学装置40を説明するための図である。図4に示す蛍光検出用光学装置40は、発光素子42を備える。この発光素子42は、少なくとも一部が第2レンズ群22の空隙部分30に位置するように配置される。本第1実施例では、発光素子42を図2に示す蛍光検出用光学装置10の励起光源16と見なすことができる。発光素子42は、試料Sの励起に適した波長を発光帯域に含むLED(Light-Emitting Diode)やLD(Laser Diode)などを用いることができる。 FIG. 4 is a diagram for explaining the fluorescence detection optical device 40 according to the first example. The fluorescence detecting optical device 40 shown in FIG. 4 includes a light emitting element 42. The light emitting element 42 is arranged such that at least a part thereof is located in the void portion 30 of the second lens group 22. In the first embodiment, the light emitting element 42 can be regarded as the excitation light source 16 of the fluorescence detecting optical device 10 shown in FIG. As the light emitting element 42, an LED (Light-Emitting Diode), an LD (Laser Diode), or the like that includes a wavelength suitable for exciting the sample S in an emission band can be used.

また、本第1実施例においては、受光光学系14により集光された蛍光は、入射端面44aから蛍光用ファイバ44内に入射し、受光ユニット46に導光される。受光ユニット46は、受光光学系14から離間して配置される。本第1実施例では、蛍光用ファイバ44の入射端面44aを図2に示す蛍光検出用光学装置10の蛍光集光点13と見なすことができる。 Further, in the first embodiment, the fluorescence collected by the light receiving optical system 14 enters the fluorescence fiber 44 from the incident end face 44a and is guided to the light receiving unit 46. The light receiving unit 46 is arranged apart from the light receiving optical system 14. In the first embodiment, the incident end face 44a of the fluorescence fiber 44 can be regarded as the fluorescence converging point 13 of the fluorescence detecting optical device 10 shown in FIG.

蛍光用ファイバ44としては、シングルモードファイバやマルチモードファイバを使用することができる。受光ユニット46は、蛍光を光電変換する光電変換素子と、電気信号に増幅等の所定の処理を行う電気回路とを備える。光電変換素子としては、PD(Photodiode)、APD(Avalanche Photodiode)、PMT(Photomultiplier Tube)等を利用することができる。 As the fluorescent fiber 44, a single mode fiber or a multimode fiber can be used. The light receiving unit 46 includes a photoelectric conversion element that photoelectrically converts fluorescence, and an electric circuit that performs a predetermined process such as amplification on an electric signal. As the photoelectric conversion element, PD (Photodiode), APD (Avalanche Photodiode), PMT (Photomultiplier Tube), or the like can be used.

図5は、第2実施例に係る蛍光検出用光学装置50を説明するための図である。図5に示す蛍光検出用光学装置50は、励起光光学系24から離間して配置された光源ユニット52と、光源ユニット52から出射された励起光を導光する励起光用ファイバ54とを備える。 FIG. 5 is a diagram for explaining a fluorescence detection optical device 50 according to the second embodiment. The fluorescence detection optical device 50 shown in FIG. 5 includes a light source unit 52 which is arranged apart from the excitation light optical system 24, and an excitation light fiber 54 which guides the excitation light emitted from the light source unit 52. ..

光源ユニット52は、LED、LD、キセノンランプ等の光源と、該光源に給電するための電気回路とを備える。励起光用ファイバ54としては、シングルモードファイバやマルチモードファイバを使用することができる。 The light source unit 52 includes a light source such as an LED, an LD, and a xenon lamp, and an electric circuit for supplying power to the light source. As the pumping light fiber 54, a single mode fiber or a multimode fiber can be used.

本第2実施例において、励起光用ファイバ54の出射端面54aは、第2レンズ群22の空隙部分30に配置されており、励起光用ファイバ54の出射端面54aから出射された励起光は、励起光用レンズ群25に入射する。本第2実施例では、励起光用ファイバ54の出射端面54aを図2に示す蛍光検出用光学装置10の励起光源16と見なすことができる。 In the second embodiment, the emission end face 54a of the excitation light fiber 54 is arranged in the void portion 30 of the second lens group 22, and the excitation light emitted from the emission end face 54a of the excitation light fiber 54 is It is incident on the excitation light lens group 25. In the second embodiment, the emission end face 54a of the excitation light fiber 54 can be regarded as the excitation light source 16 of the fluorescence detecting optical device 10 shown in FIG.

本第2実施例に係る蛍光検出用光学装置50によれば、レンズや光ファイバ等の光学系のみを備える部分(すなわち「光学ヘッド」)と、電気回路や光電変換型の発光/受光素子とを別体とすることができる。この第2実施例の構成によれば、以下の作用効果が得られる。
(a)励起光用ファイバ54の出射端面54aを励起光源とし、蛍光用ファイバ44の入射端面44aを蛍光集光点としている。光ファイバの直径は通常1mm以下であるため、光電変換型の発光/受光素子そのものを光学ヘッドに搭載した場合よりも光学ヘッドを小型化することができる。
(b)電気的なノイズを生じやすい電気回路や発光/受光素子を光学ヘッドから離しているため、ノイズの影響を抑えることができる。外乱によるノイズの影響を受けやすい電気系を光学ヘッドと別体としているため、測定環境を選ばない。
(c)蛍光検出の分野では単色性が求められる。その場合は別体となる光源/受光ユニットに所定のフィルタを搭載させることにより、希求レベルの調整を容易に図ることができ、設計仕様の自由度が高くなる。
(d)通常直径1mm以下の光ファイバの先端が配置可能な程度に第2レンズ群22に空隙部分30を設ければよいため、第2レンズ群22の切除領域をより小さく設定することができ、検出される蛍光量を増加させることができる。
According to the fluorescence detecting optical device 50 in the second example, a portion including only an optical system such as a lens and an optical fiber (that is, an “optical head”), an electric circuit, and a photoelectric conversion type light emitting/receiving element. Can be a separate body. According to the configuration of the second embodiment, the following operational effects can be obtained.
(A) The exit end face 54a of the excitation light fiber 54 is used as the excitation light source, and the entrance end face 44a of the fluorescence fiber 44 is used as the fluorescence focusing point. Since the diameter of the optical fiber is usually 1 mm or less, the optical head can be made smaller than when the photoelectric conversion type light emitting/receiving element itself is mounted on the optical head.
(B) Since the electric circuit and the light emitting/receiving element that easily generate electrical noise are separated from the optical head, the influence of noise can be suppressed. Since the electrical system, which is easily affected by noise due to disturbance, is separate from the optical head, the measurement environment is not limited.
(C) Monochromaticity is required in the field of fluorescence detection. In that case, by mounting a predetermined filter on a separate light source/light receiving unit, the desired level can be easily adjusted, and the degree of freedom in design specifications increases.
(D) Since the void portion 30 may be provided in the second lens group 22 to such an extent that the tip of an optical fiber having a diameter of 1 mm or less can be normally arranged, the excision region of the second lens group 22 can be set smaller. , The amount of fluorescence detected can be increased.

図6は、第3実施例に係る蛍光検出用光学装置60を説明するための図である。図6に示す蛍光検出用光学装置60の励起光光学系24は、第2レンズ群22の像側に設けられた発光素子42と、発光素子42からの励起光を平行光にして第1レンズ群20の軸外部分20aに入射させるリレーレンズ系62とを備える。リレーレンズ系62は、第2レンズ群22を間に挟むように配置された第1レンズ62aと第2レンズ62bから構成される。リレーレンズ系62は、発光素子42の発光領域の中間像64を第2レンズ群22の空隙部分30に形成する。 FIG. 6 is a diagram for explaining the fluorescence detecting optical device 60 according to the third embodiment. The excitation light optical system 24 of the optical device 60 for fluorescence detection shown in FIG. 6 includes a light emitting element 42 provided on the image side of the second lens group 22 and the excitation light from the light emitting element 42 to be parallel light for the first lens. And a relay lens system 62 which is incident on the off-axis portion 20a of the group 20. The relay lens system 62 is composed of a first lens 62a and a second lens 62b arranged so as to sandwich the second lens group 22 therebetween. The relay lens system 62 forms an intermediate image 64 of the light emitting area of the light emitting element 42 in the void portion 30 of the second lens group 22.

上述した第1実施例に係る蛍光検出用光学装置40(図4参照)では、発光素子42の少なくとも一部を第2レンズ群22の空隙部分30に配置した。しかしながら、たとえば砲弾型LEDを発光素子42として用いる場合、その外径は3mmくらいあるため、空隙部分30が大きくなりがちであり、集めることのできる蛍光量が減る可能性がある。そこで、本発明者は、LEDの発光領域が例えば0.3×0.3mmといった小さいものであることに着目し、リレーレンズ系62を使って空隙部分30に発光素子42の発光領域の中間像を作ることを想到した。本第3実施例に係る蛍光検出用光学装置60によれば、第2レンズ群22の空隙部分30を小さくすることができ、検出される蛍光量を増加させることができる。 In the fluorescence detecting optical device 40 (see FIG. 4) according to the first example described above, at least a part of the light emitting element 42 is arranged in the void portion 30 of the second lens group 22. However, for example, when a bullet LED is used as the light emitting element 42, since the outer diameter thereof is about 3 mm, the void portion 30 tends to be large, and the amount of fluorescent light that can be collected may decrease. Therefore, the present inventor pays attention to the fact that the light emitting area of the LED is as small as 0.3×0.3 mm 2 , and the relay lens system 62 is used to fill the void portion 30 with an intermediate light emitting area of the light emitting element 42. I thought about making a statue. According to the fluorescence detecting optical device 60 in the third example, the void portion 30 of the second lens group 22 can be made small, and the detected fluorescence amount can be increased.

図7は、本発明の別の実施形態に係る蛍光検出用光学装置70を説明するための図である。図8は、図7に示す蛍光検出用光学装置70において、第2レンズ群22を光軸方向から見た平面図を示す。 FIG. 7 is a diagram for explaining a fluorescence detecting optical device 70 according to another embodiment of the present invention. FIG. 8 is a plan view of the second lens group 22 in the fluorescence detecting optical device 70 shown in FIG. 7 as seen from the optical axis direction.

本実施形態に係る蛍光検出用光学装置70は、4つの励起光光学系24を備える。また、第2レンズ群22の周縁部に90°間隔で4つの空隙部分30が形成されている。これら4つの空隙部分30のそれぞれに、励起光光学系24の一部である励起光源16が配置されている。図8には凵の字状の空隙部分30を示したが、空隙部分30の形状は特に限定されない。 The fluorescence detection optical device 70 according to the present embodiment includes four excitation light optical systems 24. Further, four void portions 30 are formed at 90° intervals on the peripheral portion of the second lens group 22. The pumping light source 16 which is a part of the pumping light optical system 24 is arranged in each of these four void portions 30. Although the hollow portion 30 having a square shape is shown in FIG. 8, the shape of the void portion 30 is not particularly limited.

本実施形態に係る蛍光検出用光学装置70では、4つの励起光光学系24を、波長などの光学特性が同一の光学系とすることができる。この場合、励起光量を増大させることができ、絶対的な蛍光出射量が少ない試料についても、検出可能なレベルの蛍光を発生させることが可能となる。 In the fluorescence detecting optical device 70 according to the present embodiment, the four excitation light optical systems 24 can be optical systems having the same optical characteristics such as wavelength. In this case, the amount of excitation light can be increased, and it becomes possible to generate fluorescence at a detectable level even for a sample having a small absolute fluorescence emission amount.

あるいは、4つの励起光光学系24を、波長などの光学特性が相互に異なった光学系とすることもできる。異なった波長の励起光の照射により試料から出射される蛍光を検出することで、より多面的な試料の分析が可能となる。 Alternatively, the four excitation light optical systems 24 may be optical systems having mutually different optical characteristics such as wavelength. By detecting the fluorescence emitted from the sample by irradiating the excitation light of different wavelengths, it becomes possible to analyze the sample in a more multifaceted manner.

図7に示す実施形態では、4つの励起光光学系24を4つの空隙部分30にそれぞれ配置したが、励起光光学系24および空隙部分30の数は特に限定されない。 In the embodiment shown in FIG. 7, the four excitation light optical systems 24 are arranged in the four void portions 30, respectively, but the numbers of the excitation light optical system 24 and the void portions 30 are not particularly limited.

以上、本発明を実施の形態をもとに説明した。この実施の形態は例示であり、それらの各構成要素や各処理プロセスの組合せにいろいろな変形例が可能なこと、またそうした変形例も本発明の範囲にあることは当業者に理解されるところである。 The present invention has been described above based on the embodiment. This embodiment is merely an example, and it is understood by those skilled in the art that various modifications can be made to the combinations of their respective constituent elements and processing processes, and that such modifications are also within the scope of the present invention. is there.

10、40、50、60、70 蛍光検出用光学装置、 11 蛍光出射点、 12 照射光学系、 13 蛍光集光点、 14 受光光学系、 16 励起光源、 20 第1レンズ群、 22 第2レンズ群、 24 励起光光学系、 25 励起光用レンズ群、 30 空隙部分、 42 発光素子、 44 蛍光用ファイバ、 46 受光ユニット、 52 光源ユニット、 54 励起光用ファイバ、 62 リレーレンズ系。 10, 40, 50, 60, 70 Fluorescence detection optical device, 11 Fluorescence emission point, 12 Irradiation optical system, 13 Fluorescence focusing point, 14 Receiving optical system, 16 Excitation light source, 20 First lens group, 22 Second lens Group, 24 excitation light optical system, 25 excitation light lens group, 30 void part, 42 light emitting element, 44 fluorescence fiber, 46 light receiving unit, 52 light source unit, 54 excitation light fiber, 62 relay lens system.

Claims (8)

被検出物に対して励起光を照射し、該照射により前記被検出物から発生した蛍光を検出する蛍光検出用光学装置であって、
前記被検出物から発生した蛍光を直接受光する第1レンズ群と、
前記第1レンズ群と同軸に配置され、前記第1レンズ群を通過した蛍光を受光する第2レンズ群であって、軸外の一部が切除されて空隙部分が形成された第2レンズ群と、
励起光を出射する励起光光学系であって、出射した励起光が前記第1レンズ群の軸外を通って前記被検出物に照射されるよう配置される励起光光学系と、
を備え、
前記励起光光学系の一部が、前記第2レンズ群の前記空隙部分に配置されることを特徴とする蛍光検出用光学装置。
An optical device for fluorescence detection, which irradiates excitation light to an object to be detected, and detects fluorescence generated from the object to be detected by the irradiation,
A first lens group for directly receiving the fluorescence generated from the object to be detected,
A second lens group that is arranged coaxially with the first lens group and that receives the fluorescence that has passed through the first lens group, the off-axis part being cut away to form a void portion. When,
A pumping light optical system that emits pumping light, wherein the pumping light that is emitted is arranged so as to be irradiated onto the object to be detected through the off-axis of the first lens group.
Equipped with
An optical device for fluorescence detection, characterized in that a part of the excitation light optical system is arranged in the void portion of the second lens group.
前記第1レンズ群は、前記被検出物から発生した蛍光を平行光にし、
前記第2レンズ群は、前記第1レンズ群からの蛍光の平行光を集光する、
ことを特徴とする請求項1に記載の蛍光検出用光学装置。
The first lens group collimates fluorescence emitted from the object to be detected,
The second lens group collects the parallel light of fluorescence from the first lens group,
The optical device for fluorescence detection according to claim 1, wherein:
前記空隙部分は、前記第2レンズ群の周縁部に形成されることを特徴とする請求項1または2に記載の蛍光検出用光学装置。 The optical device for fluorescence detection according to claim 1, wherein the void portion is formed at a peripheral portion of the second lens group. 前記励起光光学系は、
励起光を発出する励起光源と、
前記励起光源からの励起光を平行光にして前記第1レンズ群の軸外に入射させる励起光用レンズ群と、
を備えることを特徴とする請求項1から3のいずれかに記載の蛍光検出用光学装置。
The excitation light optical system,
An excitation light source that emits excitation light,
A lens group for excitation light, which makes excitation light from the excitation light source parallel light and makes it incident off-axis of the first lens group;
The optical device for fluorescence detection according to claim 1, further comprising:
前記励起光源は、励起光を発光する発光素子を備えることを特徴とする請求項4に記載の蛍光検出用光学装置。 The optical device for fluorescence detection according to claim 4, wherein the excitation light source includes a light emitting element that emits excitation light. 前記励起光源は、励起光を導光する励起光用光ファイバの出射端面を備えることを特徴とする請求項4に記載の蛍光検出用光学装置。 The fluorescence detection optical device according to claim 4, wherein the excitation light source includes an emission end face of an excitation light optical fiber that guides the excitation light. 前記励起光源は、前記第2レンズ群の像側空間に設けられた発光素子を備え、
前記励起光用レンズ群は、前記発光素子の発光領域の中間像を前記空隙部分に形成するよう配置されたリレーレンズ系を備えることを特徴とする請求項4に記載の蛍光検出用光学装置。
The excitation light source includes a light emitting element provided in the image side space of the second lens group,
5. The optical device for fluorescence detection according to claim 4, wherein the excitation light lens group includes a relay lens system arranged to form an intermediate image of a light emitting region of the light emitting element in the void portion.
複数の前記励起光光学系を備え、
前記第2レンズ群に複数の前記空隙部分が形成され、
複数の前記空隙部分のそれぞれに前記励起光光学系の一部が配置されることを特徴とする請求項1から7のいずれかに記載の蛍光検出用光学装置。
A plurality of the excitation light optical system,
A plurality of the void portions are formed in the second lens group,
The fluorescence detection optical device according to claim 1, wherein a part of the excitation light optical system is arranged in each of the plurality of void portions.
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