JP2019533470A5 - - Google Patents

Claims (20)

1. 参照ポリケチドと比較して酵素活性が改変された１つまたは複数の異種モジュールを備える、遺伝子操作されたポリケチドシンターゼであって、遺伝子操作されたポリケチドシンターゼが、遺伝子操作されたポリケチドシンターゼによる化合物の発現を可能にするのに適した条件下で発現された場合にポリケチドを生産することができ、
   （ａ）１つまたは複数の異種モジュールが、ポリケチド生合成の間にポリケチドの転位を実質的に阻害しない；
   （ｂ）１つまたは複数の異種モジュールが、それに隣接するモジュールの連結配列と互換性がある連結配列を備える；または
   （ｃ）遺伝子操作されたポリケチドシンターゼのポリケチド発現レベルが、参照ポリケチドシンターゼのポリケチド発現レベルの少なくとも１％である、遺伝子操作されたポリケチドシンターゼ。
2. １つまたは複数の異種モジュールが、ネイティブ連結配列を備える、請求項１に記載の遺伝子操作されたポリケチドシンターゼ。
3. ２つ以上の異種モジュールを備える、請求項１に記載の遺伝子操作されたポリケチドシンターゼ。
4. ２つ以上の異種モジュールが隣接している、請求項３に記載の遺伝子操作されたポリケチドシンターゼ。
5. ３つ以上の異種モジュールを備える、請求項１に記載の遺伝子操作されたポリケチドシンターゼ。
6. ３つ以上の異種モジュールが隣接している、請求項５に記載の遺伝子操作されたポリケチドシンターゼ。
7. 異種モジュールが、ポリケチドの可変領域内のβ−カルボニルユニットを修飾する延長モジュールである、請求項１に記載の遺伝子操作されたポリケチドシンターゼ。
8. １つまたは複数の異種モジュールの少なくとも１つが、配列番号１〜１６５のいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有する部分を備える、請求項１に記載の遺伝子操作されたポリケチドシンターゼ。
9. １つまたは複数の異種モジュールの少なくとも１つが、配列番号１〜１６５のいずれか１つの配列を有する部分を備える、請求項１に記載の遺伝子操作されたポリケチドシンターゼ。
10. キメラポリケチドシンターゼの少なくとも１つのモジュールが、配列番号１６６または１６７の配列を有するポリケチドシンターゼと比較して修飾されている、キメラポリケチドシンターゼ。
11. 請求項１乃至１０のいずれか１項に記載のポリケチドシンターゼをコードする核酸。
12. 請求項１１に記載の核酸を備える発現ベクター。
13. 請求項１２に記載の発現ベクターを備える宿主細胞。
14. ポリケチドが宿主細胞に対して異種である、請求項１乃至１０のいずれか１項に記載のポリケチドシンターゼを備える宿主細胞。
15. 請求項１３の宿主細胞を、ポリケチドシンターゼがポリケチド化合物を生産するのに適した条件下で培養する工程を備える、ポリケチドを生産する方法。
16. 請求項１４に記載の宿主細胞を、ポリケチドシンターゼがポリケチド化合物を生産するのに適した条件下で培養する工程を備える、ポリケチドを生産する方法。
17. （ａ）化合物を生産することが可能な親ポリケチドシンターゼ配列を提供する工程、
    （ｂ）第２のポリケチドシンターゼの少なくとも１つのモジュールと親ポリケチドシンターゼの少なくとも２つのモジュールとの互換性を判定する工程、
    （ｃ）修飾されたポリケチドシンターゼをコードする核酸を生産する工程であって、修飾されたポリケチドシンターゼが、親ポリケチドシンターゼの少なくとも２つのモジュールと互換性があると判定されている第２のポリケチドシンターゼの少なくとも１つのモジュールを備える、工程
    を備える、化合物を生産する方法。
18. （ａ）親ポリケチドシンターゼをコードする親核酸を提供する工程、
    （ｂ）親核酸を修飾して、化合物を生産することが可能な修飾されたポリケチドシンターゼをコードする修飾された核酸を生成させる工程であって、修飾によって、少なくとも１つの異種モジュールを備える修飾されたポリケチドシンターゼが生産される、工程
    を備える、化合物を生産する方法。
19. （ａ）化合物を生産することが可能な親ポリヌクレオチド配列を提供する工程、
    （ｂ）親ポリヌクレオチド配列内の１つまたは複数のモジュールの置き換えに適した１つまたは複数の異種モジュールを同定する工程、
    （ｃ）工程（ｂ）で同定された少なくとも１つの異種モジュールを備える修飾されたポリケチドシンターゼをコードする核酸を生産する工程
    を備える、化合物を生産する方法。
20. 複数個のポリヌクレオチドを生産する方法であって、複数個のポリヌクレオチドの各々が、遺伝子操作されたポリケチドシンターゼに対応し、複数個のポリヌクレオチドの各々が、参照ポリケチドと比較して酵素活性が改変された１つまたは複数の異種モジュールを備え、前記方法が、
    （ａ）ポリケチドシンターゼをコードする親ポリヌクレオチド配列を提供する工程、
    （ｂ）親ポリヌクレオチド配列における置き換えのための１つまたは複数のモジュールを同定する工程、
    （ｃ）工程（ｂ）で同定されたモジュールの各々の置き換えに適した２つ以上の異種モジュールを同定する工程、
    （ｄ）複数個のポリヌクレオチドを生成する工程であって、複数個のポリヌクレオチドの各々が、遺伝子操作されたポリケチドシンターゼに対応し、複数個のポリヌクレオチドの各々が、工程（ｂ）で同定された置き換えようとする１つまたは複数のモジュールの各々の代わりに、工程（ｃ）で同定された２つ以上の異種モジュールから選択される異種モジュールを備える、工程
    を備える方法。