JP2019528678A - 試料分析のための装置および方法 - Google Patents
試料分析のための装置および方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2019528678A JP2019528678A JP2018567824A JP2018567824A JP2019528678A JP 2019528678 A JP2019528678 A JP 2019528678A JP 2018567824 A JP2018567824 A JP 2018567824A JP 2018567824 A JP2018567824 A JP 2018567824A JP 2019528678 A JP2019528678 A JP 2019528678A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amplification
- nucleic acid
- substrate
- complex
- amplification product
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 191
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title description 12
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims abstract description 303
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims abstract description 288
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 424
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 311
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 293
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 293
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 259
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 115
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 61
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 32
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 32
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims description 14
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 14
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 14
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 13
- 238000000137 annealing Methods 0.000 claims description 4
- 230000011664 signaling Effects 0.000 claims description 4
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 claims 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 193
- 239000012491 analyte Substances 0.000 abstract description 185
- 239000011324 bead Substances 0.000 abstract description 125
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 105
- 238000010897 surface acoustic wave method Methods 0.000 abstract description 84
- 239000002245 particle Substances 0.000 abstract description 38
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 abstract description 22
- 238000002955 isolation Methods 0.000 abstract description 10
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 198
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 87
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 82
- 239000000463 material Substances 0.000 description 80
- 239000000047 product Substances 0.000 description 64
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 40
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 37
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 37
- 230000005291 magnetic effect Effects 0.000 description 36
- 241001131688 Coracias garrulus Species 0.000 description 34
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 33
- 230000008569 process Effects 0.000 description 32
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 31
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 29
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 26
- 239000002102 nanobead Substances 0.000 description 26
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 24
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 24
- 239000003989 dielectric material Substances 0.000 description 21
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 20
- 238000000608 laser ablation Methods 0.000 description 20
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 19
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 19
- 238000011901 isothermal amplification Methods 0.000 description 18
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 17
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 16
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 16
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 15
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 14
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 14
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 14
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 13
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 13
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 13
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 12
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000007397 LAMP assay Methods 0.000 description 11
- 102000018120 Recombinases Human genes 0.000 description 11
- 108010091086 Recombinases Proteins 0.000 description 11
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 11
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 11
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 238000003491 array Methods 0.000 description 10
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 10
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 10
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 10
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 10
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 10
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 10
- -1 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 description 10
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 9
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 9
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 9
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 9
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 8
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 8
- 238000004049 embossing Methods 0.000 description 8
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 8
- 230000006870 function Effects 0.000 description 8
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 8
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 8
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 8
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 8
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 7
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 7
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 7
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 7
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 7
- 238000000151 deposition Methods 0.000 description 7
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 7
- 238000001127 nanoimprint lithography Methods 0.000 description 7
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 7
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 7
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 7
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 6
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 6
- 239000004020 conductor Substances 0.000 description 6
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 6
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 6
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 6
- SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N Digoxigenin Natural products C1CC(C2C(C3(C)CCC(O)CC3CC2)CC2O)(O)C2(C)C1C1=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 5
- 229920001940 conductive polymer Polymers 0.000 description 5
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 5
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 5
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 5
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 5
- QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N digitoxigenin Natural products CC12CCC(C3(CCC(O)CC3CC3)C)C3C11OC1CC2C1=CC(=O)OC1 QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N digoxigenin Chemical compound C1([C@@H]2[C@@]3([C@@](CC2)(O)[C@H]2[C@@H]([C@@]4(C)CC[C@H](O)C[C@H]4CC2)C[C@H]3O)C)=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 5
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 5
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 4
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 4
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 4
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 4
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 4
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 4
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 4
- 239000012790 adhesive layer Substances 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 4
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 4
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 4
- ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N hexan-1-ol Chemical compound CCCCCCO ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 238000012205 qualitative assay Methods 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 4
- 238000005382 thermal cycling Methods 0.000 description 4
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 4
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 4
- 238000004804 winding Methods 0.000 description 4
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 3
- 239000012807 PCR reagent Substances 0.000 description 3
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 3
- 102000001218 Rec A Recombinases Human genes 0.000 description 3
- 108010055016 Rec A Recombinases Proteins 0.000 description 3
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 3
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Natural products NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 3
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 3
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 3
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 3
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 3
- 238000011143 downstream manufacturing Methods 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 230000005660 hydrophilic surface Effects 0.000 description 3
- 238000003312 immunocapture Methods 0.000 description 3
- AMGQUBHHOARCQH-UHFFFAOYSA-N indium;oxotin Chemical compound [In].[Sn]=O AMGQUBHHOARCQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001459 lithography Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 3
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 3
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 3
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 3
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000004381 surface treatment Methods 0.000 description 3
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 description 3
- 238000001039 wet etching Methods 0.000 description 3
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 2
- 241000203069 Archaea Species 0.000 description 2
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 108010017826 DNA Polymerase I Proteins 0.000 description 2
- 102000004594 DNA Polymerase I Human genes 0.000 description 2
- 108090000133 DNA helicases Proteins 0.000 description 2
- 102000003844 DNA helicases Human genes 0.000 description 2
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 2
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 2
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 2
- 238000009015 Human TaqMan MicroRNA Assay kit Methods 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910013641 LiNbO 3 Inorganic materials 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 2
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710126859 Single-stranded DNA-binding protein Proteins 0.000 description 2
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 2
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 2
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N Zinc monoxide Chemical compound [Zn]=O XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 2
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 2
- 239000000956 alloy Substances 0.000 description 2
- 229910045601 alloy Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000003373 anti-fouling effect Effects 0.000 description 2
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 2
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 2
- 238000000231 atomic layer deposition Methods 0.000 description 2
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 2
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 2
- 238000005229 chemical vapour deposition Methods 0.000 description 2
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000004720 dielectrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 2
- 239000004205 dimethyl polysiloxane Substances 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 230000005670 electromagnetic radiation Effects 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 2
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000295 fuel oil Substances 0.000 description 2
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 238000007834 ligase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 238000007885 magnetic separation Methods 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 2
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 239000003973 paint Substances 0.000 description 2
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000000059 patterning Methods 0.000 description 2
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 2
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 239000002694 phosphate binding agent Substances 0.000 description 2
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 2
- 238000005240 physical vapour deposition Methods 0.000 description 2
- 229920000435 poly(dimethylsiloxane) Polymers 0.000 description 2
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 2
- 229920001343 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 description 2
- 239000004810 polytetrafluoroethylene Substances 0.000 description 2
- 239000002987 primer (paints) Substances 0.000 description 2
- 238000012207 quantitative assay Methods 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 description 2
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 2
- 238000007764 slot die coating Methods 0.000 description 2
- 238000004528 spin coating Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000001360 synchronised effect Effects 0.000 description 2
- UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N thiourea Chemical compound NC(N)=S UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- PYJJCSYBSYXGQQ-UHFFFAOYSA-N trichloro(octadecyl)silane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[Si](Cl)(Cl)Cl PYJJCSYBSYXGQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002264 triphosphate group Chemical class [H]OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])O* 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 2
- VRBFTYUMFJWSJY-UHFFFAOYSA-N 28804-46-8 Chemical compound ClC1CC(C=C2)=CC=C2C(Cl)CC2=CC=C1C=C2 VRBFTYUMFJWSJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020000946 Bacterial DNA Proteins 0.000 description 1
- 108020004513 Bacterial RNA Proteins 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 101710167800 Capsid assembly scaffolding protein Proteins 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- 229910003321 CoFe Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 102000052510 DNA-Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- 101710116602 DNA-Binding protein G5P Proteins 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- AHCYMLUZIRLXAA-SHYZEUOFSA-N Deoxyuridine 5'-triphosphate Chemical compound O1[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 AHCYMLUZIRLXAA-SHYZEUOFSA-N 0.000 description 1
- 108010006296 DnaB Helicases Proteins 0.000 description 1
- 101100300807 Drosophila melanogaster spn-A gene Proteins 0.000 description 1
- 229910052692 Dysprosium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 description 1
- YCKRFDGAMUMZLT-UHFFFAOYSA-N Fluorine atom Chemical compound [F] YCKRFDGAMUMZLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020000949 Fungal DNA Proteins 0.000 description 1
- 108020004460 Fungal RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000237858 Gastropoda Species 0.000 description 1
- 101710114816 Gene 41 protein Proteins 0.000 description 1
- 229910001030 Iron–nickel alloy Inorganic materials 0.000 description 1
- 101710128836 Large T antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 102000019298 Lipocalin Human genes 0.000 description 1
- 108050006654 Lipocalin Proteins 0.000 description 1
- 108020005196 Mitochondrial DNA Proteins 0.000 description 1
- 229910016629 MnBi Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000713869 Moloney murine leukemia virus Species 0.000 description 1
- 108091093105 Nuclear DNA Proteins 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000549435 Pria Species 0.000 description 1
- 101710130420 Probable capsid assembly scaffolding protein Proteins 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- 101800004937 Protein C Proteins 0.000 description 1
- 108091034057 RNA (poly(A)) Proteins 0.000 description 1
- 108010012737 RecQ Helicases Proteins 0.000 description 1
- 102000019196 RecQ Helicases Human genes 0.000 description 1
- 101710162453 Replication factor A Proteins 0.000 description 1
- 101710176758 Replication protein A 70 kDa DNA-binding subunit Proteins 0.000 description 1
- 101710176276 SSB protein Proteins 0.000 description 1
- 101800001700 Saposin-D Proteins 0.000 description 1
- 102400000827 Saposin-D Human genes 0.000 description 1
- 101710204410 Scaffold protein Proteins 0.000 description 1
- 108091027568 Single-stranded nucleotide Proteins 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N Tin Chemical compound [Sn] ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003916 acid precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- NLTUCYMLOPLUHL-KQYNXXCUSA-N adenosine 5'-[gamma-thio]triphosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=S)[C@@H](O)[C@H]1O NLTUCYMLOPLUHL-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 239000007767 bonding agent Substances 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 229910000424 chromium(II) oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- FJBFPHVGVWTDIP-UHFFFAOYSA-N dibromomethane Chemical compound BrCBr FJBFPHVGVWTDIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010252 digital analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 230000026058 directional locomotion Effects 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000005686 electrostatic field Effects 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000005530 etching Methods 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 230000005293 ferrimagnetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002902 ferrimagnetic material Substances 0.000 description 1
- 239000011554 ferrofluid Substances 0.000 description 1
- 230000005294 ferromagnetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003302 ferromagnetic material Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 1
- 230000009969 flowable effect Effects 0.000 description 1
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N guanidinium thiocyanate Chemical compound SC#N.NC(N)=N ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000008282 halocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000005661 hydrophobic surface Effects 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 229910052738 indium Inorganic materials 0.000 description 1
- APFVFJFRJDLVQX-UHFFFAOYSA-N indium atom Chemical compound [In] APFVFJFRJDLVQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000007641 inkjet printing Methods 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 239000011810 insulating material Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 238000003475 lamination Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- XIXADJRWDQXREU-UHFFFAOYSA-M lithium acetate Chemical compound [Li+].CC([O-])=O XIXADJRWDQXREU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GQYHUHYESMUTHG-UHFFFAOYSA-N lithium niobate Chemical compound [Li+].[O-][Nb](=O)=O GQYHUHYESMUTHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MHCFAGZWMAWTNR-UHFFFAOYSA-M lithium perchlorate Chemical compound [Li+].[O-]Cl(=O)(=O)=O MHCFAGZWMAWTNR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910001486 lithium perchlorate Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000696 magnetic material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 229910000000 metal hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004692 metal hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010445 mica Substances 0.000 description 1
- 229910052618 mica group Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000013080 microcrystalline material Substances 0.000 description 1
- 238000005459 micromachining Methods 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002707 nanocrystalline material Substances 0.000 description 1
- 238000000054 nanosphere lithography Methods 0.000 description 1
- 239000012811 non-conductive material Substances 0.000 description 1
- 238000001821 nucleic acid purification Methods 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- 238000002205 phenol-chloroform extraction Methods 0.000 description 1
- 238000000206 photolithography Methods 0.000 description 1
- 229920000052 poly(p-xylylene) Polymers 0.000 description 1
- 239000012985 polymerization agent Substances 0.000 description 1
- 229910052573 porcelain Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007639 printing Methods 0.000 description 1
- 230000001566 pro-viral effect Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000856 protein c Drugs 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 210000005084 renal tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 150000004492 retinoid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000007761 roller coating Methods 0.000 description 1
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 1
- 239000004065 semiconductor Substances 0.000 description 1
- 238000011896 sensitive detection Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 229910000679 solder Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005476 soldering Methods 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000001138 tear Anatomy 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 229910052718 tin Inorganic materials 0.000 description 1
- XOLBLPGZBRYERU-UHFFFAOYSA-N tin dioxide Chemical compound O=[Sn]=O XOLBLPGZBRYERU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910001887 tin oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 239000012780 transparent material Substances 0.000 description 1
- 230000007723 transport mechanism Effects 0.000 description 1
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N triphosphoric acid Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- 108090000195 villin Proteins 0.000 description 1
- 239000011787 zinc oxide Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/6853—Nucleic acid amplification reactions using modified primers or templates
Abstract
Description
本出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、2016年9月15日に出願された、米国仮特許出願第62/395,255号の利益を主張する。
一体型デジタルマイクロ流体および分析物検出装置に関するシステム、装置、および方法を、本明細書に記載する。
本明細書で提供される装置を使用して、試料中の対象となる分析物の量を測定し得る。本明細書で使用される場合、「分析物」、「標的分析物」、「対象となる分析物」という用語は、本明細書に開示される方法および装置において測定される分析物を指す。分析物は、小分子、ペプチド、タンパク質、RNA、DNA、脂質、炭水化物、毒素、または細胞であり得る。試料中に存在する分析物の量を決定するためにアッセイされ得る試料は、例えば、血液、血漿、血清、唾液、汗、尿などの生体液試料を含み得る。
一体型表面音響波試料調製および分析物検出装置に関連するシステム、装置、および方法を本開示によって提供する。
本明細書で使用される場合、「試料調製要素」およびその文法上の等価物は、その上に液滴が最初に分散され、本明細書に記載されるようなイムノアッセイの工程が実施され得る、略平面状の表面を指す。いくつかの例では、基板は、高音響反射を有する材料から作製され得る。
いくつかの実施形態では、分析物検出要素は、分子、粒子、ビーズ、もしくは細胞が、分析物もしくは生物学的試料の検出目的のために単離され得る、ウェルのアレイを含み得る。TSAW(進行表面音響波)は、流体チャネルにわたって表面上に音響流を生成して、流体(液滴または細胞のいずれか)をウェルアレイに向かって押す。
いくつかの実施形態では、ウェルのアレイは、試料調製要素と同じスーパーストレート上に位置付けられる。いくつかの例では、スーパーストレートおよびウェルのアレイは、第1の基板上に位置付けられ得る。第1の基板は、分析されるべき液滴が最初に配設される近位部分と、液滴が分析物検出のためにそれに向かって移動される遠位部分と、に分割され得る。スーパーストレートは、第1の基板の近位部分上に存在し得、ウェルのアレイは、第1の基板の遠位部分上に位置付けられ得る。このように、試料調製要素を形成するスーパーストレートと、分析物検出要素を形成するウェルのアレイとは、直接隣接し得る。本明細書で使用される場合、「直接隣接する」という用語は、試料調製要素と、ウェルのアレイと、を分離または分割する目的物がないことを指す。試料調製要素およびウェルのアレイが互いに直接隣接している例では、試料調製要素の表面にわたる液滴の伝播は、ウェルのアレイの表面上にシームレスに移行される。他の例では、ウェルのアレイは、試料調製要素に間接的に隣接して位置付けられる。本明細書で使用される場合、「間接的に隣接する」という用語は、試料調製要素を分離または分割する目的物もしくは要素があることを指す。
いくつかの実施形態では、ウェルのアレイ(検出要素)は、液滴が操作される空間によって分離された試料調製要素上に位置付けられる。いくつかの例では、注入口またはチャネルは、2つの構成要素間に位置付けられ得る。注入口またはチャネルは、2つの構成要素の間に試料または分析物を配向し得る。
図14A〜図14Bは、前述の節に開示されているSAW装置を別々に製作するための例示的な方法を例示する。図14Aは、単一のベース基板上にフォノニック構造およびウェルのアレイを製作することによって、試料調製要素およびナノウェルアレイ構成要素が互いに隣接して位置付けられることを例示する。スーパーストレート(820を参照のこと)が、組み立てライン900上に配置される。組み立てライン900に沿ったスーパーストレート(820を参照のこと)の伝播は、一連のローラを利用するコンベヤベルト状機構によって容易にされる。スーパーストレートのロールは、スプールされず、かつエンボス加工ユニット910に供され、エンボス加工ユニット910は、スーパーストレート上にフォノニック構造を形成するため、または金型を使用してスーパーストレート内に埋め込むために、材料を強い熱、圧力、または紫外線に供する。その後、スーパーストレートは、複数のローラを通過して表面処理構成要素920に進行し、これが、スーパーストレートの特性を改変する。その後、スーパーストレートは、スーパーストレート上にアッセイ試薬を堆積させる、インクジェットプリンタ930を通過する。ウェルのアレイは、レーザアブレーション924を使用して形成される。いくつかの例では、結果として生じる構造は、硬化工程に供され得る。他の例では、結果として生じる構造は、それらの物理的特性を改変するために表面処理、例えば、アッセイプロトコルに必要な官能化試薬を組み込むことに供され得る。カバーは、スーパーストレート上に積層されるそれらである940。カバーをスーパーストレート上に配置する前に、好適なスペーサを、スーパーストレートとカバーとの間に配置して、液滴が2つの表面間を移動できるようにする。組み立てられた構造は、ダイシングされて、個々の装置を生成し得る950。
核酸検査(NAT)は、生物学的試料中の標的核酸の存在を検出することを伴う診断方法において使用されることが多い。生物学的試料中の標的分析物を確実に検出するために必要とされる標的核酸の増幅のレベルのために、NATは、高価で時間がかかるプロセスである。さらに、NATは、熟練した技術者および実験室設定においてのみ利用可能な高価な機器を必要とする。このように、最小限の増幅しか必要とせず、単純化された試料調製および標的分析物検出を使用してポイントオブケア設定で実施することができる、NATへの必要性がある。
特定の実施形態では、一体型デジタルマイクロ流体および分析物検出装置は、所与の試料中の標的核酸の検出に用途を見出すことができる。特定の場合には、標的核酸を含有する所与の試料(例えば、ヒト血液試料)は、本開示の一体型システムによる検出の前に、いくつかの工程を受ける場合がある。そのような工程には、i)試料からの標的核酸を含有する全核酸の単離、ii)標的核酸の濃縮、およびiii)標的核酸の処理が含まれる。標的核酸の処理時に、それは、検出のために本開示の一体型システムに転移され得る。
いくつかの場合には、いったん標的核酸を含有する全核酸が所与の試料から単離されると、試料内の標的核酸の濃度を増加させる(すなわち、非標的汚染材料の濃度を減少させる)ために、標的濃縮工程が行われる。標的核酸は、DNAまたはRNAであり得る。標的濃縮は、当業者に知られている方法を使用して行われる。そのような方法は、捕捉プローブで被覆された磁性粒子が使用されるプローブ捕捉アプローチを伴い得る。核酸を単離するためのさらなる方法は、当業者であれば認識されるだろう。
標的核酸を含有する核酸は、本明細書に記載されるような一体型装置を使用することによって、または手動で、自動的に(例えば、ロボットによって)、もしくはそれらの組み合わせによって行われ得る、当該技術分野において知られている標準的な核酸単離手順を使用することによって、得られ得る。標的核酸がDNAまたはRNAであり得る標的核酸(単離された核酸調製物中に存在するような)の単離時に、標的増幅を行って、増幅本開示の分析物検出装置(一体型デジタルマイクロ流体および分析物検出装置)によって検出可能な濃度まで標的を増幅させることができる。核酸増幅は、様々な様式、例えば、指数関数的増幅、非対称的増幅、連鎖線形増幅、ライゲーションベースの増幅、および転写ベースの増幅によって達成され得る。ポリメラーゼ連鎖反応は、指数関数的核酸増幅の一例である(参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第4,582,788号を参照のこと)。ライゲーションベースの増幅、例えば、ライゲーション増幅反応(LAR)は、Wuら、Genomics、1989.4(4):560−569に記載されている。本明細書に述べられるように、標的増幅はまた、全核酸の精製の不在下で、細胞が溶解されて全核酸を放出した試料に対して実施され得る。全核酸は、ゲノムDNAまたはゲノムRNA(例えば、核DNA、ミトコンドリアDNA、ウイルスDNA、ウイルスRNA)または転写RNAであり得る。「ポリヌクレオチド」は、一本鎖または二本鎖の核酸を意味する。「オリゴヌクレオチド」という用語は、短いポリヌクレオチド、一般に、約50個以下のヌクレオチドを指す。
特定の実施形態では、開示される方法は、増幅によって標的核酸の複製数が増加することから生成される増幅生成物を検出することができ、その場合、1000分子程度の少ない増幅生成物が生成される。したがって、特定の実施形態では、流体試料中の標的核酸の存在を検出するための方法は、試料中の標的核酸を増幅によって増幅させて、1000分子程度の少ない増幅産物を生成することであって、増幅により、増幅産物にタグを組み込む、増幅産物を生成することと、タグに特異的に結合する結合メンバーを含む複数の捕捉物上で増幅産物を捕捉し、それによって捕捉物−増幅産物を含む複合体を生成することと、複合体中の増幅産物を検出可能に標識して、検出可能に標識された複合体を生成することと、各ウェルが1つ以下の捕捉物を含有するように捕捉物を空間的に複数のウェルに分離することと、複数のウェル中の検出可能に標識された複合体の存在を検出することと、を含む。
いったん所望の程度の標的核酸配列増幅が達成されると、増幅産物は、本開示の一体型デジタルマイクロ流体および分析物検出装置のアッセイ処理モジュール(上記に記載される)に転移される。様々な様式のアッセイ処理を用いることができる。例えば、イムノアッセイは、増幅された標的核酸に組み込まれたタグを使用して、増幅された標的核酸配列を捕捉するために行われ得る。注目すべきは、本明細書に開示されるNAT法は、捕捉物上で増幅された核酸配列を捕捉するために、核酸配列のハイブリダイゼーションを利用しないことである。言い換えれば、捕捉物(ビーズ、例えば、磁性ビーズなど)は、増幅された標的核酸中の配列に相補的であり、かつ増幅された標的核酸にアニールすることができる、捕捉核酸を含まない。むしろ、捕捉物は、特異的結合対の結合メンバーを含み、かつ結合対のメンバーと結合対の他のメンバーとの相互作用を介して、増幅された標的核酸を捕捉し、ここで結合対の他のメンバーとは、増幅中の増幅された核酸に導入された他のメンバーである。特異的結合対のメンバーは、互いに相補的な核酸を含まない。したがって、捕捉物は、増幅された標的核酸に結合することができる核酸で被覆されていない。
この実施例は、デジタル検出により、アナログベースの検出に必要な増幅時間と比較して、増幅時間を短縮することができることを実証する。標識された標的の確率的閉じ込めに基づくデジタル検出技術は、およそ6000分子を検出することができるが、標準的なアナログベースの検出は、最低およそ9000万分子を必要とする。
この例は、デジタル検出が、アナログベースの検出を使用した検出に必要とされるよりも少ない数の標的DNAの検出を可能にすることを実証する。この例では、1ml当たり50複製のHBVを含有する血液試料を、出発材料として使用する。1mlの試料を、例えば、Boom化学を使用してDNA抽出/精製に供する。この例では、精製された全核酸を、1mlの増幅緩衝液に再懸濁する。増幅緩衝液を構成する構成物質は、増幅方法(すなわち、PCR、等温など)に適しており、かつ増幅プライマー(標識および/または非標識)、デオキシヌクレオチド三リン酸(非標識および/または標識)、塩、およびDNAポリメラーゼ(すなわち、Taqポリメラーゼ、Bstポリメラーゼ、クレノウ断片など)を含有する。等温増幅のために、他のタンパク質構成物質が含まれてもよい。およそ150mlのこの緩衝液は、およそ8複製のDNA標的を含有する。
ビーズ上の標的核酸の捕捉、および各ウェルが1個以下のビーズを含有するウェルのアレイへのビーズの分離を利用する、デジタル検出方法の検出限界(LOD)を決定するために、標的核酸を、一本鎖DNAとして化学的に合成し、かつ一方の端をビオチンで、反対の端をジゴキシゲニン(DIG)で、二重標識(DL)した。DL一本鎖DNAを、アルカリホスファターゼ(AP)標識抗DIG抗体の結合によって検出された、ストレプトアビジン被覆ビーズ上で捕捉した(図22を参照のこと)。100aM(約6000分子)の濃度で存在するDL一本鎖DNAが、検出可能であった(図23を参照のこと)。方法のLODは、約24.6aM(約1481分子)であった(図24を参照のこと)。
Claims (33)
- 流体試料中の標的核酸の存在を検出するための方法であって、
増幅によって前記試料中の前記標的核酸を増幅させて、増幅産物を生成することであって、
前記増幅によって、タグを前記増幅産物に組み込み、
前記増幅が、15サイクル未満の増幅を含む、増幅産物を生成することと、
前記タグに特異的に結合する結合メンバーを含む複数の捕捉物上で前記増幅産物を捕捉し、それによって捕捉物−増幅産物を含む複合体を生成することと、
前記複合体中の前記増幅産物を検出可能に標識して、検出可能に標識された複合体を生成することと、
各ウェルが1つ以下の捕捉物を含有するように、前記捕捉物を複数のウェルに空間的に分離することと、
前記複数のウェル中の前記検出可能に標識された複合体の存在を検出することと、を含む、方法。 - 前記増幅が、14サイクル未満の増幅を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記増幅が、13サイクル未満の増幅を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記増幅が、12サイクル未満の増幅を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記増幅が、11サイクル未満の増幅を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記増幅が、10サイクル未満の増幅を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記増幅が、5〜15サイクルの増幅を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記増幅が、5〜13サイクルの増幅を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記増幅が、6〜15サイクルの増幅を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記増幅が、6〜10サイクルの増幅を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記増幅が、8〜15サイクルの増幅を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記増幅が、8〜13サイクルの増幅を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記増幅が、8〜10サイクルの増幅を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記増幅が、約1000分子の前記増幅産物を生成する、請求項1に記載の方法。
- 前記増幅が、約3000分子の前記増幅産物を生成する、請求項1記載の方法。
- 前記増幅が、約6000分子の前記増幅産物を生成する、請求項1に記載の方法。
- 流体試料中の標的核酸の存在を検出するための方法であって、
増幅産物を生成するために、増幅によって前記試料中の前記標的核酸を増幅することであって、
前記増幅によって、タグを前記増幅産物に組み込み、
前記増幅が、10分未満の時間行われる、増幅することと、
前記タグに特異的に結合する結合メンバーを含む複数の捕捉物上で前記増幅産物を捕捉し、それによって捕捉物−増幅産物を含む複合体を生成することと、
前記複合体中の前記増幅産物を検出可能に標識して、検出可能に標識された複合体を生成することと、
各ウェルが1つ以下の捕捉物を含有するように、前記捕捉物を複数のウェルに空間的に分離することと、
前記複数のウェル中の前記検出可能に標識された複合体の存在を検出することと、を含む、方法。 - 前記増幅が、1〜5分の間行われる、請求項17に記載の方法。
- 流体試料中の標的核酸の存在を検出するための方法であって、
1000分子程度の少ない増幅産物を生成するために、前記試料中の前記標的核酸を増幅によって増幅することであって、
前記増幅によって、タグを前記増幅産物に組み込み、
前記タグに特異的に結合する結合メンバーを含む複数の捕捉物上で前記増幅産物を捕捉し、それによって捕捉物−増幅産物を含む複合体を生成することと、
前記複合体中の前記増幅産物を検出可能に標識して、検出可能に標識された複合体を生成することと、
各ウェルが1つ以下の捕捉物を含有するように、前記捕捉物を複数のウェルに空間的に分離することと、
前記複数のウェル中の前記検出可能に標識された複合体の存在を検出することと、を含む、方法。 - 前記方法が、2000分子程度の少ない増幅産物の存在を検出する、請求項19に記載の方法。
- 前記方法が、3000分子程度の少ない増幅産物の存在を検出する、請求項19に記載の方法。
- 前記方法が、6000分子程度の少ない増幅産物の存在を検出する、請求項19に記載の方法。
- 流体試料中の標的核酸の存在を検出するための方法であって、
10aM程度の低い濃度の増幅産物を生成するために、前記試料中の前記標的核酸を増幅によって増幅することであって、
前記増幅によって、タグを前記増幅産物に組み込み、
前記タグに特異的に結合する結合メンバーを含む複数の捕捉物上で前記増幅産物を捕捉し、それによって捕捉物−増幅産物を含む複合体を生成する、増幅することと、
前記複合体中の前記増幅産物を検出可能に標識して、検出可能に標識された複合体を生成することと、
各ウェルが1つ以下の捕捉物を含有するように、前記捕捉物を複数のウェルに空間的に分離することと、
前記複数のウェル中の前記検出可能に標識された複合体の存在を検出することと、を含む、方法。 - 前記増幅産物の濃度が、20aM程度の低さである、請求項23に記載の方法。
- 前記増幅産物の濃度が、30aM程度の低さである、請求項23に記載の方法。
- 前記増幅産物の濃度が、100aM程度の低さである、請求項23に記載の方法。
- 前記方法が、前記検出可能に標識された複合体を含有するウェルの割合を決定することをさらに含み、前記ウェルの割合が、前記流体試料中の前記標的核酸の濃度を決定するために使用される、請求項1〜26のいずれか一項に記載の方法。
- 前記方法が、前記ウェル中の前記検出可能に標識された複合体の信号の測定された強度レベルに少なくとも部分的に基づいて、前記流体試料中の前記標的核酸の濃度の測定値を決定することをさらに含む、請求項1〜26のいずれか一項に記載の方法。
- 前記方法が、前記増幅産物の複数の捕捉物上での前記捕捉の前に、
第1の核酸鎖および第2の核酸鎖を生成するために、前記増幅産物を変性することであって、前記第1の核酸鎖が、前記タグを含み、前記タグが、第1のタグである、変性することと、
前記第1の核酸鎖のセグメントに相補的であるプローブを前記第1の核酸鎖にアニールして、二重タグ付き増幅産物を生成することであって、
前記プローブが、前記第1のタグとは異なる第2のタグを含む、二重タグ付き増幅産物を生成することと、
前記第1のタグに特異的に結合する第1の結合メンバーである、前記結合メンバーを含む前記複数の捕捉物上で、前記第1のタグを含む前記第1の核酸鎖を含む前記二重タグ付き増幅産物を捕捉して、捕捉物−第1の核酸複合体を生成することと、
前記捕捉物−第1の核酸複合体を、前記プローブ中の前記第2のタグに特異的に結合する第2の結合メンバーであって、検出可能に標識される、前記第2の結合メンバーと接触させ、それによって前記検出可能に標識された複合体を生成することと、を含む、請求項1〜28のいずれか一項に記載の方法。 - 前記増幅産物が、第1の核酸鎖および第2の核酸鎖を含み、前記増幅によって、第1のタグを前記第1の核酸鎖に、そして第2のタグを前記第2の核酸鎖に組み込み、前記増幅産物の前記捕捉が、
a.前記第1のタグに特異的に結合する第1の結合メンバーを含む複数の捕捉物上で前記第1の核酸鎖を捕捉し、それによって捕捉物−増幅産物を含む複合体を生成することであって、
前記検出可能に標識された複合体を生成するために、前記複合体中の前記増幅産物を検出可能に標識することが、
前記複合体を、前記第2のタグに特異的に結合する第2の結合メンバーであって、検出可能に標識される、第2の結合メンバーと接触させ、それによって前記検出可能に標識された複合体を生成することを含む、複合体を生成すること、または
b.前記第2のタグに特異的に結合する第2の結合メンバーを含む複数の捕捉物上で前記第2の核酸鎖を捕捉し、それによって捕捉物−増幅産物を含む複合体を生成することであって、
前記複合体中の前記増幅産物を検出可能に標識して、前記検出可能に標識された複合体を生成することが、
前記複合体を、前記第1のタグに特異的に結合する第1の結合メンバーであって、検出可能に標識される、第1の結合メンバーと接触させ、それによって前記検出可能に標識された複合体を生成することを含む、複合体を生成すること、を含む、請求項1〜28のいずれか一項に記載の方法。 - 前記増幅産物中の第1の核酸鎖が、第1のタグを含み、前記複数の捕捉物が、前記第1のタグに特異的に結合する第1の結合メンバーを含み、前記第1の核酸鎖が、第2のタグを含む複数のヌクレオチドを含み、
前記増幅産物を捕捉することが、前記増幅産物を、第1の結合メンバーを含む複数の捕捉物と接触させて、前記捕捉物−増幅産物を含む前記複合体を生成することを含み、
検出可能に標識された複合体を生成するために、前記複合体中の前記増幅産物を前記検出可能に標識することが、
前記複合体を、前記第2のタグに特異的に結合する第2の結合メンバーであって、検出可能に標識される、第2の結合メンバーと接触させ、それによって前記検出可能に標識された複合体を生成することを含む、請求項1〜28のいずれか一項に記載の方法。 - 前記検出可能に標識された複合体が、検出可能な信号を生成する信号伝達部分を含む、請求項1〜28のいずれか一項に記載の方法。
- 前記信号伝達部分が、基板に作用して検出可能な信号を生成する酵素である、請求項32に記載の方法。
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2022093525A JP7345599B2 (ja) | 2016-09-15 | 2022-06-09 | 試料分析のための装置および方法 |
JP2023142849A JP2023179443A (ja) | 2016-09-15 | 2023-09-04 | 試料分析のための装置および方法 |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201662395255P | 2016-09-15 | 2016-09-15 | |
US62/395,255 | 2016-09-15 | ||
PCT/US2017/051627 WO2018053174A1 (en) | 2016-09-15 | 2017-09-14 | Devices and methods for sample analysis |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2022093525A Division JP7345599B2 (ja) | 2016-09-15 | 2022-06-09 | 試料分析のための装置および方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2019528678A true JP2019528678A (ja) | 2019-10-17 |
JP2019528678A5 JP2019528678A5 (ja) | 2021-10-14 |
Family
ID=61619707
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018567824A Pending JP2019528678A (ja) | 2016-09-15 | 2017-09-14 | 試料分析のための装置および方法 |
JP2022093525A Active JP7345599B2 (ja) | 2016-09-15 | 2022-06-09 | 試料分析のための装置および方法 |
JP2023142849A Pending JP2023179443A (ja) | 2016-09-15 | 2023-09-04 | 試料分析のための装置および方法 |
Family Applications After (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2022093525A Active JP7345599B2 (ja) | 2016-09-15 | 2022-06-09 | 試料分析のための装置および方法 |
JP2023142849A Pending JP2023179443A (ja) | 2016-09-15 | 2023-09-04 | 試料分析のための装置および方法 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11578358B2 (ja) |
EP (1) | EP3512862B1 (ja) |
JP (3) | JP2019528678A (ja) |
CN (1) | CN109715646B (ja) |
AU (1) | AU2017325833B2 (ja) |
CA (1) | CA3029274A1 (ja) |
WO (1) | WO2018053174A1 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2022045811A1 (ko) * | 2020-08-31 | 2022-03-03 | 성균관대학교산학협력단 | 전도성 고분자의 표면 플라즈모닉 현상을 이용한 광 pcr 시스템 및 이를 이용한 타겟 핵산의 실시간 검출 |
Families Citing this family (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US11305236B2 (en) * | 2014-06-13 | 2022-04-19 | Gattaco Inc. | Surface tension driven filtration |
CN110201590B (zh) * | 2019-05-27 | 2021-10-19 | 东南大学 | 一种三明治结构的纳米颗粒二聚体及多聚体的制备方法 |
DE102020202274A1 (de) | 2020-02-21 | 2021-08-26 | Robert Bosch Gesellschaft mit beschränkter Haftung | Mikrofluidikkanalelement zur verbesserten Separation von Zielpartikeln aus Nicht-Zielpartikeln innerhalb eines Mediums auf der Basis von Dielektrophorese |
CN111484920A (zh) * | 2020-04-23 | 2020-08-04 | 浙江大学 | 一种传感系统及其检测方法 |
CN113025690B (zh) * | 2021-05-27 | 2021-08-10 | 广东品博易视生物科技有限公司 | 一种核酸探针组及其应用 |
WO2023056065A1 (en) * | 2021-09-30 | 2023-04-06 | Guardant Health, Inc. | Compositions and methods for synthesis and use of probes targeting nucleic acid rearrangements |
CN113996355B (zh) * | 2021-10-28 | 2023-06-06 | 上海浚真生命科学有限公司 | 取样装置 |
WO2023079310A1 (en) | 2021-11-05 | 2023-05-11 | Nuclera Nucleics Ltd | Protein purification using a digital microfluidic device |
JP2024027562A (ja) | 2022-08-18 | 2024-03-01 | セイコーエプソン株式会社 | 提供システム、提供方法、及び管理装置 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2009529883A (ja) * | 2006-03-15 | 2009-08-27 | マイクロニクス, インコーポレイテッド | 一体型の核酸アッセイ |
WO2012070618A1 (ja) * | 2010-11-24 | 2012-05-31 | 株式会社カネカ | 増幅核酸検出方法及び検出デバイス |
JP2013521499A (ja) * | 2010-03-01 | 2013-06-10 | クワンテリクス コーポレーション | ビーズまたは他の捕捉物を用いた分子または粒子の超高感度検出 |
US20150353997A1 (en) * | 2013-01-15 | 2015-12-10 | Quanterix Corporation | Detection of dna or rna using single molecule arrays and other techniques |
Family Cites Families (21)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US1745309A (en) | 1926-09-07 | 1930-01-28 | Norris Nelson Howard | Milking machine |
US4582788A (en) | 1982-01-22 | 1986-04-15 | Cetus Corporation | HLA typing method and cDNA probes used therein |
US5750338A (en) | 1986-10-23 | 1998-05-12 | Amoco Corporation | Target and background capture methods with amplification for affinity assays |
ZA877772B (en) | 1986-10-23 | 1988-04-20 | Amoco Corporation | Target and background capture methods and apparatus for affinity assays |
US5234809A (en) | 1989-03-23 | 1993-08-10 | Akzo N.V. | Process for isolating nucleic acid |
KR20010012175A (ko) | 1997-05-02 | 2001-02-15 | 다니엘 엘. 캐시앙, 헨리 엘. 노르호프, 피터 알. 쉬어리 | 폴리뉴클레오티드의 2단계 혼성화 및 포획법 |
US6534273B2 (en) | 1997-05-02 | 2003-03-18 | Gen-Probe Incorporated | Two-step hybridization and capture of a polynucleotide |
US7632651B2 (en) | 1997-09-15 | 2009-12-15 | Mds Analytical Technologies (Us) Inc. | Molecular modification assays |
US7070921B2 (en) | 2000-04-28 | 2006-07-04 | Molecular Devices Corporation | Molecular modification assays |
US6294326B1 (en) | 1997-11-07 | 2001-09-25 | Abbott Laboratories | Analyte detection process using dual labeled probes |
ES2393056T3 (es) | 1998-11-09 | 2012-12-18 | Eiken Kagaku Kabushiki Kaisha | Procedimiento de síntesis de ácido nucleico |
US7270981B2 (en) | 2002-02-21 | 2007-09-18 | Asm Scientific, Inc. | Recombinase polymerase amplification |
GB0207975D0 (en) | 2002-04-05 | 2002-05-15 | Genovision As | Isolating nucleic acid |
EP2418018B1 (en) | 2004-12-23 | 2013-05-22 | Abbott Point of Care Inc. | Methods for the separation nucleic acids |
US9051601B2 (en) | 2006-08-01 | 2015-06-09 | Gen-Probe Incorporated | Methods of nonspecific target capture of nucleic acids |
US9689031B2 (en) | 2007-07-14 | 2017-06-27 | Ionian Technologies, Inc. | Nicking and extension amplification reaction for the exponential amplification of nucleic acids |
US8222047B2 (en) | 2008-09-23 | 2012-07-17 | Quanterix Corporation | Ultra-sensitive detection of molecules on single molecule arrays |
US8940487B2 (en) | 2010-02-09 | 2015-01-27 | UmiTaq Bio | Methods and compositions for universal detection of nucleic acids |
US9678068B2 (en) * | 2010-03-01 | 2017-06-13 | Quanterix Corporation | Ultra-sensitive detection of molecules using dual detection methods |
US8415171B2 (en) | 2010-03-01 | 2013-04-09 | Quanterix Corporation | Methods and systems for extending dynamic range in assays for the detection of molecules or particles |
JP1628115S (ja) * | 2012-10-24 | 2019-04-01 |
-
2017
- 2017-09-14 CA CA3029274A patent/CA3029274A1/en active Pending
- 2017-09-14 AU AU2017325833A patent/AU2017325833B2/en active Active
- 2017-09-14 US US16/312,489 patent/US11578358B2/en active Active
- 2017-09-14 EP EP17851550.8A patent/EP3512862B1/en active Active
- 2017-09-14 CN CN201780056500.9A patent/CN109715646B/zh active Active
- 2017-09-14 JP JP2018567824A patent/JP2019528678A/ja active Pending
- 2017-09-14 WO PCT/US2017/051627 patent/WO2018053174A1/en unknown
-
2022
- 2022-06-09 JP JP2022093525A patent/JP7345599B2/ja active Active
-
2023
- 2023-09-04 JP JP2023142849A patent/JP2023179443A/ja active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2009529883A (ja) * | 2006-03-15 | 2009-08-27 | マイクロニクス, インコーポレイテッド | 一体型の核酸アッセイ |
JP2013521499A (ja) * | 2010-03-01 | 2013-06-10 | クワンテリクス コーポレーション | ビーズまたは他の捕捉物を用いた分子または粒子の超高感度検出 |
WO2012070618A1 (ja) * | 2010-11-24 | 2012-05-31 | 株式会社カネカ | 増幅核酸検出方法及び検出デバイス |
US20150353997A1 (en) * | 2013-01-15 | 2015-12-10 | Quanterix Corporation | Detection of dna or rna using single molecule arrays and other techniques |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2022045811A1 (ko) * | 2020-08-31 | 2022-03-03 | 성균관대학교산학협력단 | 전도성 고분자의 표면 플라즈모닉 현상을 이용한 광 pcr 시스템 및 이를 이용한 타겟 핵산의 실시간 검출 |
KR20220028636A (ko) * | 2020-08-31 | 2022-03-08 | 성균관대학교산학협력단 | 전도성 고분자의 표면 플라즈모닉 현상을 이용한 광 pcr 시스템 및 이를 이용한 타겟 핵산의 실시간 검출 |
KR102492974B1 (ko) * | 2020-08-31 | 2023-01-30 | 성균관대학교산학협력단 | 전도성 고분자의 표면 플라즈모닉 현상을 이용한 광 pcr 시스템 및 이를 이용한 타겟 핵산의 실시간 검출 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN109715646B (zh) | 2023-02-10 |
EP3512862A4 (en) | 2020-03-18 |
EP3512862A1 (en) | 2019-07-24 |
US11578358B2 (en) | 2023-02-14 |
EP3512862B1 (en) | 2024-05-01 |
US20190153524A1 (en) | 2019-05-23 |
CN109715646A (zh) | 2019-05-03 |
WO2018053174A1 (en) | 2018-03-22 |
JP2023179443A (ja) | 2023-12-19 |
JP2022130450A (ja) | 2022-09-06 |
JP7345599B2 (ja) | 2023-09-15 |
CA3029274A1 (en) | 2018-03-22 |
AU2017325833A1 (en) | 2019-01-17 |
AU2017325833B2 (en) | 2022-06-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7345599B2 (ja) | 試料分析のための装置および方法 | |
US20200384470A1 (en) | Devices and methods for sample analysis | |
AU2021209235B2 (en) | Devices and methods for sample analysis | |
Du et al. | Multiplexed efficient on-chip sample preparation and sensitive amplification-free detection of Ebola virus | |
Sin et al. | Advances and challenges in biosensor-based diagnosis of infectious diseases | |
EP2014761B1 (en) | A device for processing an analyte and a method of processing and/or detecting an analyte using said device | |
JP5798647B2 (ja) | 磁性粒子を有する多数区画装置 | |
US8614056B2 (en) | Microfluidic method for measurement or detection involving cells or biomolecules | |
US9512421B1 (en) | Miniature acoustic wave lysis system and uses thereof | |
US20040018611A1 (en) | Microfluidic devices for high gradient magnetic separation | |
KR20110008174A (ko) | 마이크로 훌루이딕 칩 디바이스 및 그의 용도 | |
Gao et al. | Recent advances in microfluidic devices for foodborne pathogens detection | |
Fu et al. | Microfabricated Renewable Beads-Trapping/Releasing Flow Cell for Rapid Antigen− Antibody Reaction in Chemiluminescent Immunoassay | |
Tong et al. | Combining sensors and actuators with electrowetting-on-dielectric (EWOD): advanced digital microfluidic systems for biomedical applications | |
Gabriel et al. | Recent advances in toner-based microfluidic devices for bioanalytical applications | |
US9442108B2 (en) | Centrifugally-enhanced capture method and device | |
JP2020536255A (ja) | 標的分子をナノポアに送達するシステム及び方法 | |
Shao et al. | Poly (dimethylsiloxane) microchip-based immunoassay with multiple reaction zones: Toward on-chip multiplex detection platform | |
KR20200013932A (ko) | 종이기반 핵산검출용 키트 및 pcr 증폭산물을 분석하기 위한 방법 | |
Xiang et al. | A versatile integrated microfluidic chip based on sonic toothbrush-assisted mixing for analyses of diverse biomolecules | |
Liu et al. | Biospecies capture and detection at low concentration | |
Yang et al. | Principles and applications of the nano-in-nano integration for multidisciplinary nanofluidics | |
Ben Aissa Soler | Rapid diagnostic test for the detection of communicable diseases | |
Yoon | Development of disposable lab-on-a-chip system for point-of-care-testing | |
Esfandyarpour et al. | Rapid, label free, high throughput, miniaturized, and inexpensive nanoelectronic array as a cancer diagnosis tool |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20200820 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20210430 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210525 |
|
A524 | Written submission of copy of amendment under article 19 pct |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A524 Effective date: 20210825 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220118 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20220418 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20220809 |