JP2019510739A

JP2019510739A - GFRAL receptor therapy

Info

Publication number: JP2019510739A
Application number: JP2018540415A
Authority: JP
Inventors: シンラー・ウー
Original assignee: イーライリリーアンドカンパニー
Priority date: 2016-02-29
Filing date: 2016-02-29
Publication date: 2019-04-18
Also published as: CN108697795A; EP3423094A4; EP3423094A1; WO2017147742A1

Abstract

本発明は、医薬品の分野に関する。より具体的には、本発明は、ＧＦＲＡＬ受容体を作動することによる糖尿病または肥満症の治療方法、そのような治療で使用するための化合物、及びそのような化合物を含有する薬学的組成物に関する。本発明はまた、
ＧＦＲＡＬ受容体を拮抗し、阻害し、中和し、またはブロックすることによる悪液質の治療方法、そのような治療で使用するための化合物、及びそのような化合物を含有する薬学的組成物に関する。The present invention relates to the field of medicine. More specifically, the present invention relates to methods of treating diabetes or obesity by agonizing the GFRAL receptor, compounds for use in such treatment, and pharmaceutical compositions containing such compounds. . The present invention is also
Method for the treatment of cachexia by antagonizing, inhibiting, neutralizing or blocking the GFRAL receptor, compounds for use in such treatment, and pharmaceutical compositions containing such compounds .

Description

本発明は、医薬品の分野に関する。より具体的には、本発明は、ＧＦＲＡＬ受容体を作動する（ａｇｏｎｉｚｅ）ことによる糖尿病または肥満症の治療方法、そのような治療で使用するための化合物、及びそのような化合物を含有する薬学的組成物に関する。本発明はまた、ＧＦＲＡＬ受容体を拮抗し（ａｎｔａｇｏｎｉｚｅ）、阻害し、中和し（ｎｅｕｔｒａｌｉｚｅ）、またはブロックすることによる悪液質の治療方法、そのような治療で使用するための化合物、及びそのような化合物を含有する薬学的組成物に関する。 The present invention relates to the field of medicine. More specifically, the present invention relates to a method of treating diabetes or obesity by agonizing the GFRAL receptor, compounds for use in such treatment, and pharmaceuticals containing such compounds. It relates to a composition. The invention also relates to methods of treating cachexia by antagonizing, inhibiting, neutralizing or blocking the GFRAL receptor, compounds for use in such treatment, and The present invention relates to pharmaceutical compositions containing such compounds.

ＧＤＦ１５は、トランスフォーミング増殖因子−ベータ（ＴＧＦβ）スーパーファミリーに属する。ＧＤＦ１５の多くの報告された生物学的機能の中で、エネルギー恒常性の制御は、肥満症及び代謝疾患の治療におけるその潜在性のために重要であり得る。ＧＤＦ１５と体重との間のつながりは、当初、進行性前立腺癌の個体における高い血清ＧＤＦ１５レベルと体重減少との間の相関の観察に基づくものであった。更に、動物モデルにおけるＧＤＦ１５の過剰発現は、痩せた表現型、食欲不振、及び代謝パラメータの改善をもたらす。ＧＤＦ１５が、視床下部及び脳幹に作用することによって、飼料摂取及び体重を調節することが報告されている。しかしながら、ＧＤＦ１５の作用機序は、分子レベルでは解明されておらず、ＧＤＦ１５の受容体はこれまでのところ特定されていない。 GDF15 belongs to the transforming growth factor-beta (TGFβ) superfamily. Among the many reported biological functions of GDF15, control of energy homeostasis may be important because of its potential in the treatment of obesity and metabolic diseases. The link between GDF15 and body weight was initially based on the observation of a correlation between elevated serum GDF15 levels and weight loss in individuals with advanced prostate cancer. Furthermore, overexpression of GDF15 in animal models results in an improved lean phenotype, anorexia, and metabolic parameters. GDF15 has been reported to regulate feed intake and body weight by acting on the hypothalamus and brainstem. However, the mechanism of action of GDF15 has not been elucidated at the molecular level, and the receptor for GDF15 has not been identified so far.

出願者は、ＧＤＦ１５が、既知のリガンドを有さない単一膜貫通ドメインを有する膜タンパク質である、ＧＦＲα受容体ファミリーの遠縁のメンバーであるＧＦＲＡＬ（ＧＤＮＦ受容体アルファ様タンパク質）に対して高親和性で結合することを見い出した。ＧＦＲＡＬは、受容体のグリア細胞由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）ファミリーのメンバーである。ＧＤＮＦファミリーリガンドは、システイン−ノットタンパク質ファミリーに属し、ホモ二量体として機能する。標準的なＴＧＦ−βスーパーファミリーメンバーとは異なり、全てのＧＤＮＦファミリーリガンドは、ＲＥＴ受容体とＧＤＮＦファミリー受容体−αとの間の複合体を通してシグナル伝達する。ＧＦＲα受容体は、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカーを有する形質膜タンパク質である。４つの異なるＧＦＲα受容体が特性化されており（ＧＦＲα１−４）、それらのリガンド特異性が決定されている。ＧＤＮＦはＧＦＲα１に結合し、ＮＲＴＮはＧＦＲα２に結合し、ＡＲＴＮはＧＦＲα３に結合し、かつＰＳＰＮはＧＦＲα４に結合する。興味深いことに、ＧＦＲα受容体の２つの遠縁のホモログであるＧＦＲＡＬ及びＧａｓ１（増殖停止時特異的遺伝子１）が、配列相同性に基づいて特定されている。それらのリガンドは、これまでまだ知られていない。 Applicants have shown that GDF15 has a high affinity for GFRAL (GDNF receptor alpha-like protein), a distant member of the GFR alpha receptor family, which is a membrane protein with a single transmembrane domain without a known ligand. It was found to couple by sex. GFRAL is a member of the glial cell derived neurotrophic factor (GDNF) family of receptors. GDNF family ligands belong to the cysteine-knot protein family and function as homodimers. Unlike the standard TGF-β superfamily members, all GDNF family ligands signal through the complex between RET receptor and GDNF family receptor-α. The GFRα receptor is a plasma membrane protein with a glycosylphosphatidylinositol (GPI) anchor. Four different GFRα receptors have been characterized (GFRα1-4) and their ligand specificities have been determined. GDNF binds to GFRα1, NRTN binds to GFRα2, ARTN binds to GFRα3, and PSPN binds to GFRα4. Interestingly, two distant homologs of the GFRα receptor, GFRAL and Gas1 (specific gene 1 at growth arrest) have been identified based on sequence homology. Those ligands are not yet known.

ＧＦＲＡＬは、ＧＦＲαファミリーの遠縁ホモログであり、これは、ＧＦＲα−１、−２、または−４に対してよりもＧＦＲα−３に対してより緊密に関連している（３０％の同一性）。ＧＦＲαファミリーのＧＦＲＡＬと他のメンバーとの間の１つの区別は、ＧＦＲＡＬがＣ末端のＧＰＩアンカーモチーフを欠くことである。その代わりに、ＧＦＲＡＬは、単一の膜貫通ドメインを有する膜タンパク質であると予測される。 GFRAL is a distant homolog of the GFRα family, which is more closely related to GFRα-3 (30% identity) than to GFRα-1, -2, or -4. One distinction between GFRAL and other members of the GFRα family is that GFRAL lacks a C-terminal GPI anchor motif. Instead, GFRAL is predicted to be a membrane protein with a single transmembrane domain.

出願者は、動物モデルにおける体重、飼料摂取及びグルコースパラメータに及ぼすＧＤＦ１５の効果が、ＧＦＲＡＬ受容体を必要とすることを本明細書で開示する。血中グルコース及び体重を低減するための組換えＧＤＦ１５の有効性は、ホモ接合性ＧＦＲＡＬ欠損マウスでは不在である。これらのデータは、ＧＦＲＡＬをＧＤＦ１５受容体として支持するための明確な証拠を提供している。この発見は、ＧＦＲＡＬ受容体と相互作用して、糖尿病、肥満症、及び悪液質のうちの１つ以上を治療するための新しい化合物を開発するための基礎である。 Applicants disclose herein that the effects of GDF15 on body weight, feed intake and glucose parameters in animal models require the GFRAL receptor. The efficacy of recombinant GDF15 to reduce blood glucose and body weight is absent in homozygous GFRAL deficient mice. These data provide clear evidence to support GFRAL as a GDF15 receptor. This finding is the basis for developing new compounds to interact with the GFRAL receptor to treat one or more of diabetes, obesity and cachexia.

本明細書に記載の本発明は、ＧＤＦ１５及びＧＦＲＡＬ活性を、ＧＦＲＡＬ受容体を作動し、拮抗し、阻害し、中和し、またはブロックすることを含む化合物で調節する方法を提供する。この化合物は、ＧＤＦ１５よりも大きな親和性でＧＦＲＡＬ受容体に結合し、ＧＤＦ１５がＧＦＲＡＬ受容体に結合することをブロックする抗体を含んでもよい。本発明はまた、ＧＦＲＡＬ受容体を作動する化合物または薬学的組成物を投与することを含む、哺乳動物における血中グルコースを低下させ、かつ体重を減少させる方法も含む。本発明は、ＧＦＲＡＬ受容体を拮抗し、阻害し、中和し、またはブロックする化合物または薬学的組成物を投与することを含む、哺乳動物における血中グルコースを増加させかつ体重を増加させる方法を更に含む。 The invention described herein provides a method of modulating GDF15 and GFRAL activity with compounds comprising agonizing, antagonizing, inhibiting, neutralizing or blocking the GFRAL receptor. The compound may comprise an antibody that binds to the GFRAL receptor with greater affinity than GDF15 and blocks GDF15 from binding to the GFRAL receptor. The invention also includes methods of lowering blood glucose and reducing body weight in a mammal, comprising administering a compound or pharmaceutical composition that agonizes the GFRAL receptor. The present invention relates to a method of increasing blood glucose and gaining weight in a mammal comprising administering a compound or pharmaceutical composition that antagonizes, inhibits, neutralizes or blocks the GFRAL receptor. Further include.

本発明は、哺乳動物における血中グルコースを低下させる方法であって、それを必要とする哺乳動物に、ＧＦＲＡＬ受容体を作動する有効量の化合物を投与することを含む、方法を含む。本発明は、哺乳動物における血中グルコースを増加させる方法であって、それを必要とする哺乳動物に、ＧＦＲＡＬ受容体を拮抗する有効量の化合物を投与することを含む、方法を含む。また、本発明は、哺乳動物における体重を減少させる方法であって、それを必要とする哺乳動物に、ＧＦＲＡＬ受容体を作動する有効量の化合物を投与することを含む、方法を含む。本発明は、哺乳動物における体重を増加させる方法であって、それを必要とする哺乳動物に、ＧＦＲＡＬ受容体を拮抗し、阻害し、中和し、またはブロックする有効量の化合物を投与することを含む、方法を更に含む。 The invention includes a method of lowering blood glucose in a mammal comprising administering to a mammal in need thereof an effective amount of a compound that agonizes the GFRAL receptor. The invention includes a method of increasing blood glucose in a mammal, comprising administering to a mammal in need thereof an effective amount of a compound that antagonizes the GFRAL receptor. The invention also includes a method of reducing body weight in a mammal, comprising administering to the mammal in need thereof an effective amount of a compound that agonizes the GFRAL receptor. The present invention is a method of gaining weight in a mammal comprising administering to the mammal in need thereof an effective amount of a compound that antagonizes, inhibits, neutralizes or blocks the GFRAL receptor. Further comprising the method.

本発明は、本化合物が、ＧＤＦ１５の結合を阻害することによってＧＦＲＡＬ受容体をブロックし、本化合物が抗体またはその断片を含むところの、前述の方法を含む。本発明は、哺乳動物がヒトであり、ＧＦＲＡＬ受容体が、配列番号４のアミノ酸配列を有し、ＧＤＦ１５が、配列番号２のアミノ酸配列を有するところの、前述の方法を更に含む。本発明は、哺乳動物がマウスであり、ＧＦＲＡＬ受容体が、配列番号９のアミノ酸配列を有し、ＧＤＦ１５が、配列番号７のアミノ酸配列を有するところの、前述の方法を更に含む。 The invention includes the method as described above, wherein the compound blocks the GFRAL receptor by inhibiting the binding of GDF15, the compound comprising an antibody or a fragment thereof. The invention further comprises the method as described above, wherein the mammal is human and the GFRAL receptor has the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4 and GDF15 has the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2. The invention further comprises the method as described above, wherein the mammal is a mouse, the GFRAL receptor has the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9 and GDF 15 has the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7.

本発明は、本化合物が１つ以上の薬学的に許容される賦形剤と共に投与され、本化合物が、ＧＬＰ−１、インスリン、インスリン類似体、ＤＰＰ−４阻害剤、ＳＧＬＴ２阻害剤、及びグルカゴンのうちの１つ以上と共に投与されるところの、前述の方法を含む。 The present invention provides that the compound is administered with one or more pharmaceutically acceptable excipients, wherein the compound comprises GLP-1, insulin, an insulin analogue, a DPP-4 inhibitor, an SGLT2 inhibitor, and glucagon Methods as described above, which are administered with one or more of

本発明は、ＧＦＲＡＬ受容体を作動する化合物と、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤とを含む薬学的組成物を含む。本発明は、ＧＦＲＡＬ受容体を拮抗し、阻害し、中和し、またはブロックする化合物と、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤とを含む薬学的組成物を含む。本発明はまた、ＧＬＰ−１、インスリン、インスリン類似体、ＤＰＰ−４阻害剤、ＳＧＬＴ２阻害剤、及びグルカゴンのうちの１つ以上を更に含む前述の組成物を含む。本発明は、本化合物と、ＧＬＰ−１、インスリン、インスリン類似体、ＤＰＰ−４阻害剤、ＳＧＬＴ２阻害剤、及びグルカゴンのうちの１つ以上とが融合されている前述の組成物を更に含む。 The present invention includes pharmaceutical compositions comprising a compound that actuates the GFRAL receptor and one or more pharmaceutically acceptable excipients. The present invention includes a pharmaceutical composition comprising a compound that antagonizes, inhibits, neutralizes or blocks the GFRAL receptor and one or more pharmaceutically acceptable excipients. The present invention also includes the aforementioned composition further comprising one or more of GLP-1, insulin, insulin analogues, DPP-4 inhibitors, SGLT2 inhibitors, and glucagon. The invention further includes the aforementioned compositions, wherein the compound is fused with one or more of GLP-1, insulin, insulin analogues, DPP-4 inhibitors, SGLT2 inhibitors, and glucagon.

本発明は、ＧＦＲＡＬ受容体を作動する単離された化合物を含む。本発明は、ＧＦＲＡＬ受容体を拮抗し、阻害し、中和し、またはブロックする単離された化合物を更に含む。本発明はまた、前記化合物がペプチド、タンパク質、抗体またはその断片であるところの、前述の化合物も含む。本発明は、前記抗体またはその断片が、ＧＦＲＡＬ上のＧＤＦ１５と同じエピトープまたはアミノ酸領域に結合するところの、前述の化合物を更に含む。 The present invention includes isolated compounds that agonize the GFRAL receptor. The invention further includes isolated compounds that antagonize, inhibit, neutralize or block the GFRAL receptor. The present invention also includes the aforementioned compounds, wherein said compound is a peptide, a protein, an antibody or a fragment thereof. The invention further includes the aforementioned compounds, wherein said antibody or fragment thereof binds to the same epitope or amino acid region as GDF15 on GFRAL.

本発明は、哺乳動物における糖尿病の治療方法であって、それを必要とする哺乳動物に、ＧＦＲＡＬ受容体を作動する有効量の化合物を投与することを含む、方法を含む。本発明は、哺乳動物における肥満症の治療方法であって、それを必要とする哺乳動物に、ＧＦＲＡＬ受容体を作動する有効量の化合物を投与することを含む、方法を含む。本発明はまた、哺乳動物における悪液質の治療方法であって、それを必要とする哺乳動物に、ＧＦＲＡＬ受容体を拮抗し、阻害し、中和し、またはブロックする有効量の化合物を投与することを含む、方法も含む。 The present invention includes a method of treating diabetes in a mammal comprising administering to a mammal in need thereof an effective amount of a compound that agonizes the GFRAL receptor. The present invention includes a method of treating obesity in a mammal comprising administering to a mammal in need thereof an effective amount of a compound that agonizes the GFRAL receptor. The present invention is also a method of treating cachexia in a mammal comprising administering to the mammal in need thereof an effective amount of a compound which antagonizes, inhibits, neutralizes or blocks the GFRAL receptor. Also includes methods, including:

本発明は、（ａ）不溶性ヒトＧＦＲＡＬ受容体のＧＤＦ１５結合可溶性断片であって、不溶性ヒトＧＦＲＡＬ受容体が、ヒトＧＤＦ１５に特異的に結合する、ＧＤＦ１５結合可溶性断片と、（ｂ）ヒト免疫グロブリンＩｇＧ重鎖の定常領域の該定常領域の第１のドメイン以外のドメインの全てと、を含むタンパク質を含み、該タンパク質は、ヒトＧＤＦ１５に特異的に結合する。本発明は、不溶性ヒトＧＦＲＡＬ受容体が、配列番号４を含むところの前述のタンパク質を更に含む。本発明はまた、タンパク質が、不溶性ヒトＧＦＲＡＬ受容体の細胞外領域と、ヒトＩｇＧ１免疫グロブリン重鎖の定常領域の、定常領域の第１のドメイン以外の全てのドメインとから本質的になるところの、前述のタンパク質も含む。 The present invention relates to (a) a GDF15 binding soluble fragment of insoluble human GFRAL receptor, wherein the insoluble human GFRAL receptor specifically binds to human GDF15, and (b) human immunoglobulin IgG Including a protein comprising all of the domains other than the first domain of said constant region of the heavy chain constant region, said protein specifically binding to human GDF15. The invention further includes the above-mentioned protein, wherein the insoluble human GFRAL receptor comprises SEQ ID NO: 4. The present invention also provides that the protein consists essentially of the extracellular domain of the insoluble human GFRAL receptor and all domains of the constant domain of human IgG1 immunoglobulin heavy chain other than the first domain of the constant domain. And the aforementioned proteins.

本発明の場合には、「抗体」とは、インタクトな抗体（完全または完全長Ｆｃ領域を含む）、実質的にインタクトな抗体、抗原結合領域、例えば、動物、ヒト化もしくはヒト抗体のＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片もしくはＦ（ａｂ’）_２断片を含む抗体の一部もしくは断片を指す。本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体の集団に由来する抗体を指し、すなわち、一般には少量で存在する変異体などのモノクローナル抗体の産生中に生じ得る可能な変異体を除いて、この集団を構成する個々の抗体が同一であり、及び／または同じエピトープ（複数可）に結合することを指す。そのようなモノクローナル抗体は、通常、標的に結合するポリペプチド配列を含む抗体を含み、この標的結合ポリペプチド配列は、単一の標的結合ポリペプチド配列の複数のポリペプチド配列からの選択を含むプロセスによって得られたものである。例えば、選択プロセスは、ハイブリドーマクローン、ファージクローン、または組換えＤＮＡクローンのプールなどの複数のクローンからの特有のクローンの選択であり得る。選択された標的結合配列は、例えば、標的に対する親和性を改善するために、標的結合配列をヒト化するために、細胞培養中のその産物を改善するために、インビボでその免疫原性を低減させるために、多特異性抗体を作り出すためになど、更に変更することができること、そして、変更された標的結合配列を含む抗体もまた、本発明のモノクローナル抗体であることを理解すべきである。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に向けられる。これらの特異性に加えて、モノクローナル抗体調製物は、これらが典型的に他の免疫グロブリンによって汚染されない点でも有利である。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に均質の抗体の集団から得られるという抗体の特徴を示すものであり、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されないものとする。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、及びファージディスプレイ技術のうちの１つ以上が含まれる、当該技術分野において既知の様々な技法によって作製され得る。 In the case of the present invention, an "antibody" refers to an intact antibody (including a full or full-length Fc region), a substantially intact antibody, an antigen binding region, such as a Fab fragment of an animal, humanized or human antibody. Or a portion or fragment of an antibody comprising a Fab 'or F (ab') ₂ fragment. As used herein, the term "monoclonal antibody" refers to an antibody derived from a substantially homogeneous population of antibodies, ie, generally during the production of monoclonal antibodies such as variants present in small amounts. Except for possible variants that occur, it is meant that the individual antibodies that make up this population are identical and / or bind to the same epitope (s). Such monoclonal antibodies usually comprise an antibody comprising a polypeptide sequence that binds to a target, the target binding polypeptide sequence comprising a process comprising selection from a plurality of polypeptide sequences of a single target binding polypeptide sequence Obtained by For example, the selection process may be the selection of unique clones from multiple clones such as hybridoma clones, phage clones, or a pool of recombinant DNA clones. The selected target binding sequence reduces its immunogenicity in vivo to improve its product in cell culture, for example, to humanize the target binding sequence to improve affinity to the target. It should be understood that antibodies can be further modified, such as to generate multispecific antibodies, and antibodies that contain altered target binding sequences are also monoclonal antibodies of the invention. In contrast to polyclonal antibody preparations which typically include different antibodies to different determinants (epitopes), each monoclonal antibody of the monoclonal antibody preparation is directed to a single determinant on the antigen. In addition to their specificity, monoclonal antibody preparations are also advantageous in that they are typically not contaminated by other immunoglobulins. The modifier "monoclonal" indicates the character of the antibody as being obtained from a substantially homogeneous population of antibodies and is not to be construed as requiring production of the antibody by any particular method. For example, the monoclonal antibodies used in accordance with the present invention can be made by various techniques known in the art, including one or more of hybridoma method, recombinant DNA method, and phage display technology.

本明細書のモノクローナル抗体は、具体的には、「キメラ」抗体（免疫グロブリン）を含み、キメラ抗体では、重鎖及び／または軽鎖の一部は、特定の種に由来するか、または特定の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるか、または相同であり、一方、鎖（複数可）の残りの部分は、別の種に由来するか、または別の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体中の、ならびにそれらが所望の生物活性を呈する限りにおいて、そのような抗体の断片中の対応する配列と同一であるか、または相同である。キメラ抗体を作製する方法は、当該技術分野において既知である。 The monoclonal antibodies herein specifically include "chimeric" antibodies (immunoglobulins), in which a portion of the heavy and / or light chain is derived from or identified by a particular species. Is identical or homologous to the corresponding sequence in the antibody belonging to the antibody class or subclass, while the remaining part of the chain (s) originates from another species or is another antibody In antibodies belonging to the classes or subclasses of and, as long as they exhibit the desired biological activity, they are identical or homologous to the corresponding sequences in fragments of such antibodies. Methods for making chimeric antibodies are known in the art.

糖尿病及び／または肥満症の治療のための薬剤が、糖尿病及び／または肥満症の治療のために他の薬剤と組み合わされてもよいことは、当該技術分野において周知である。本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、ＧＬＰ−１、インスリン、インスリン類似体、ＤＰＰ−４阻害剤、ＳＧＬＴ２阻害剤、及びグルカゴンが挙げられるが、これらに限定されない、糖尿病または肥満症のための他の有効な治療処置（複数可）と同時にまたは逐次的に共投与されてもよい。本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、単独で、または他の有効な治療処理（複数可）と組み合わせて、同時にまたは逐次的に投与され、その後、肥満症手術、例えば、胃バイパス手術または調節可能な胃バンド処置などの承認された医療処置が続くことができる。 It is well known in the art that agents for the treatment of diabetes and / or obesity may be combined with other agents for the treatment of diabetes and / or obesity. The compounds of the invention, or pharmaceutically acceptable salts thereof, include, but are not limited to, GLP-1, insulin, insulin analogues, DPP-4 inhibitors, SGLT2 inhibitors, and glucagon, but are not limited to, diabetes or It may be co-administered simultaneously or sequentially with other effective therapeutic treatment (s) for obesity. The compounds of the invention, or pharmaceutically acceptable salts thereof, are administered simultaneously or sequentially either alone or in combination with other effective therapeutic treatment (s), and then after bariatric surgery, eg, Approved medical procedures such as gastric bypass surgery or adjustable gastric band procedures may follow.

ＧＤＦ１５と一群のＧＦＲα受容体関連タンパク質との相互作用は、共免疫沈降アッセイを通して試験される。３つの受容体、ＧＦＲα４、ＧＦＲＡＬ（配列番号４）及びＧａｓ１は、ＦＬＡＧ（商標）タグが付けられ、ＨＥＫ２９３細胞中で一時的に過剰発現される。Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈの登録商標であるＦＬＡＧ（商標）は、配列モチーフＡｓｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｌｙｓを有する、タンパク質に付加され得るタグである。細胞溶解物を採取し、抗ＦＬＡＧ（商標）抗体による免疫沈降の前に、ＧＤＦ１５−タンデムＦｃ融合組換えタンパク質とインキュベートする。３つ全てのタンパク質が発現及び免疫沈殿されるが、ＧＤＦ１５（配列番号２）−タンデムＦｃは、ＧＦＲＡＬの存在下でのみ免疫共沈降しており（図１）、ＧＦＲＡＬとＧＤＦ１５との間の直接相互作用を実証している。 The interaction of GDF15 with a panel of GFRα receptor related proteins is tested through co-immunoprecipitation assays. Three receptors, GFRα4, GFRAL (SEQ ID NO: 4) and Gas1, are FLAGTM tagged and transiently overexpressed in HEK 293 cells. FLAGTM, a registered trademark of Sigma-Aldrich, is a tag that can be added to proteins with the sequence motif Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys. Cell lysates are harvested and incubated with GDF15-tandem Fc fusion recombinant protein prior to immunoprecipitation with anti-FLAGTM antibody. Although all three proteins are expressed and immunoprecipitated, GDF15 (SEQ ID NO: 2) -tandem Fc is co-immunoprecipitated only in the presence of GFRAL (FIG. 1) and directly between GFRAL and GDF15. It demonstrates the interaction.

ＧＦＲＡＬとＧＤＦ１５との間の相互作用のためのより多くの証拠を提供するために、そして相互作用の特異性のより良好な理解を得るために、ＧＦＲＡＬ（配列番号４）の細胞外ドメイン（「ＥＣＤ」）の組換えタンパク質を発現させて、精製して、固相アッセイを展開し、相対結合親和性のより定量的な測定値を生成する。このアッセイでは、組換え未変性ＧＤＮＦタンパク質を、本アッセイにおいて陽性対照として利用しており、これは、ＧＦＲα１との最も強い相互作用を伴って、ＧＦＲα受容体に結合する（図２Ａ）。ＧＤＮＦとＧＦＲＡＬとの間のまたはＧａｓ１との間の相互作用は認められない。逆に、未変性ＧＤＦ１５（配列番号２）は、ＧＦＲＡＬのＥＣＤに強力に結合するが、その他の受容体のいずれも認識しない（図２Ｂ）。これらの結果は、ＧＦＲＡＬとＧＤＦ１５との間の相互作用が、選択的かつ特異的であることを実証している。 In order to provide more evidence for the interaction between GFRAL and GDF15, and to gain a better understanding of the specificity of the interaction, the extracellular domain of GFRAL (SEQ ID NO: 4) ("" ECD ") recombinant protein is expressed and purified to develop a solid phase assay to produce more quantitative measures of relative binding affinity. In this assay, recombinant native GDNF protein is used as a positive control in this assay, which binds to the GFRα receptor with the strongest interaction with GFRα1 (FIG. 2A). No interaction between GDNF and GFRAL or with Gas1 is observed. Conversely, native GDF15 (SEQ ID NO: 2) binds strongly to the GFRAL ECD, but does not recognize any of the other receptors (FIG. 2B). These results demonstrate that the interaction between GFRAL and GDF15 is selective and specific.

ＳＰＲ分光法を使用して、ＧＦＲＡＬ（配列番号４）とＧＤＦ１５（配列番号２）との間の親和性を評価する。ＧＦＲＡＬの精製された組換えＥＣＤを、アミンカップリングを介して、ＧＥＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓＣＭ５チップ上に固定化する。様々な濃度の組換えＧＤＦ１５タンパク質を移動相内に供給する（図３）。６つのデータセットが二価分析モデルに適合され、タンパク質の親和性（ＫＤ）を算出する。未変性組換えＧＤＦ１５とＧＦＲＡＬのＥＣＤとの間の親和性は、およそ０．７ｎＭである。 SPR spectroscopy is used to assess the affinity between GFRAL (SEQ ID NO: 4) and GDF15 (SEQ ID NO: 2). The purified recombinant ECD of GFRAL is immobilized on a GE Life Sciences CM5 chip via amine coupling. Various concentrations of recombinant GDF15 protein are delivered into the mobile phase (Figure 3). Six data sets are fitted to a bivalent analysis model to calculate protein affinity (KD). The affinity between native recombinant GDF15 and the ECD of GFRAL is approximately 0.7 nM.

動物モデルを使用して、ＧＤＦ１５の生物学的機能がＧＦＲＡＬを必要とすることを確認する。ＧＦＲＡＬの全本体欠失を有するマウスを、この試験用に、ＴａｃｏｎｉｃＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．から取得する。ホモ接合ＧＦＲＡＬノックアウトマウスは生存可能であり、肉眼的異常を有さない。雄のホモ接合ノックアウトマウスは、野生型の性が一致する同腹子よりも体重が軽いが、雌のＫＯと野生型同腹子との間には体重の有意差は認められていない。 Animal models are used to confirm that the biological function of GDF15 requires GFRAL. Mice with a full body deletion of GFRAL may be treated with Taconic Biosciences, Inc. for this test. Get from Homozygous GFRAL knockout mice are viable and have no gross abnormalities. Male homozygous knockout mice weigh less than their wild-type, sex-matched littermates, but no significant difference in body weight is observed between female KO and wild-type littermates.

ＧＤＦ１５によるマウスの処置は、グルコースパラメータの改善を伴って、飼料摂取及び体重増加を抑制する。ＧＦＲＡＬがこれらの効果に必要とされるかどうかを決定するために、我々は、野生型及びホモ接合ノックアウトマウスの両方に、組換えタンデムＦｃＧＤＦ１５（配列番号２）タンパク質を、２日毎に、０．１ｍｇ／ｋｇの用量で、１３日間注入する。野生型（「ＷＴ」）動物は、持続的な体重減少及び大幅に減退した飼料摂取を示した（図４）。我々はまた、グルコース恒常性におけるＧＤＦ１５の役割も検討する。ＧＤＦ１５は、ＷＴマウスにおいて、ベースライングルコースレベルの大幅な減少をもたらした（図４）。経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）中には、試験の終了時に、ＧＤＦ１５で処置したＷＴ動物は、ビヒクル処置群と比較して、減少したグルコース可動域を有した（図４）。 Treatment of mice with GDF15 suppresses feed intake and weight gain, with the improvement of glucose parameters. To determine whether GFRAL is required for these effects, we performed recombinant tandem Fc GDF15 (SEQ ID NO: 2) protein, every two days, in both wild-type and homozygous knockout mice. Infuse for 13 days at a dose of 1 mg / kg. Wild-type ("WT") animals showed sustained weight loss and significantly reduced feed intake (Figure 4). We also examine the role of GDF15 in glucose homeostasis. GDF15 resulted in a significant reduction of baseline glucose levels in WT mice (Figure 4). During the oral glucose tolerance test (OGTT), at the end of the study, GDF15-treated WT animals had reduced glucose excursions as compared to the vehicle treated group (Figure 4).

しかしながら、ＧＤＦ１５の体重、飼料摂取及びグルコースパラメータに及ぼす効果は、ＧＦＲＡＬノックアウトコホートには存在しない（図４）。ＧＤＦ１５の処置が、ＧＦＲＡＬノックアウトマウスに及ぼす効果を有さないことは、ＧＦＲＡＬがＧＤＦ１５の生物活性を媒介する内因性のＧＤＦ１５受容体であるという我々の仮説を裏付けた。このアプローチはまた、飼料摂取、体重増加及びグルコースに及ぼす効果を、ＧＦＲＡＬ受容体を有するＷＴ動物をＧＤＦ１５で処置した同じ種類の動物と比較して測定することによって、潜在的に治療効果のあるＧＦＲＡＬアゴニスト抗体またはタンパク質を特定するために使用されてもよい。 However, the effects of GDF15 on body weight, feed intake and glucose parameters are absent in the GFRAL knockout cohort (Figure 4). The fact that GDF15 treatment has no effect on GFRAL knockout mice supports our hypothesis that GFRAL is an endogenous GDF15 receptor that mediates the biological activity of GDF15. This approach is also potentially curative GFRAL by measuring the effects on feed intake, weight gain and glucose, compared to the same type of animals treated with GFR15, WT animals with GFRAL receptors. It may be used to identify agonist antibodies or proteins.

ＧＦＲＡＬ抗体を生成する。マウスＧＦＲＡＬに対する６つのマウスモノクローナル抗体を、配列番号１１の組換えタンパク質抗原に曝露されたマウスから形成されたマウスハイブリドーマを用いて生成する。結果として生じる６つの抗体を選択して、それらのＧＤＦ１５の結合を妨害する能力を試験する。２つの抗体、８Ａ２及び８Ｇ２は、ＧＤＦ１５とＧＦＲＡＬとの間の結合を用量依存的に阻害する（図５）。これら２つの抗体は、ヒト及びマウスのＧＦＲＡＬ受容体の両方に結合する。他の４つの抗体、７Ｆ１０、５Ｅ１、６Ｆ１０及び２Ｈ８は、マウスＧＦＲＡＬ受容体のみに結合する。 Generate GFRAL antibodies. Six mouse monoclonal antibodies to mouse GFRAL are generated using mouse hybridomas formed from mice exposed to the recombinant protein antigen of SEQ ID NO: 11. The resulting six antibodies are selected to test their ability to interfere with GDF15 binding. Two antibodies, 8A2 and 8G2, dose dependently inhibit the binding between GDF15 and GFRAL (FIG. 5). These two antibodies bind to both human and mouse GFRAL receptors. The other four antibodies, 7F10, 5E1, 6F10 and 2H8, bind only to the mouse GFRAL receptor.

ヒト及びマウスＧＤＦ１５のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１及び６として以下に提示されている。これらの配列のプロドメインは、活性ＧＤＦ１５分子を生成するために、完全長タンパク質から切断されなければならない。活性ＧＤＦ１５分子のアミノ酸配列は、ヒトＧＤＦ１５については配列番号２として、マウスＧＤＦ１５については配列番号７として以下に提供されている。 The amino acid sequences of human and mouse GDF15 are presented below as SEQ ID NOS: 1 and 6, respectively. The prodomains of these sequences must be cleaved from the full length protein to generate an active GDF15 molecule. The amino acid sequence of the active GDF15 molecule is provided below as SEQ ID NO: 2 for human GDF15 and as SEQ ID NO: 7 for mouse GDF15.

共免疫沈降アッセイは、ＧＦＲＡＬがＧＤＦ１５と相互作用することを示す。ＨＥＫ２９３細胞から調製した細胞溶解物を、ＦＬＡＧ（商標）タグ付けＧＦＲα４、ＧＦＲＡＬ、またはＧＡＳ１で一時的にトランスフェクトして、組換えタンデムＦｃ−ＧＤＦ１５タンパク質とインキュベートする。免疫沈降を抗ＦＬＡＧ（商標）抗体を用いて実施し、続いて、抗ＦＬＡＧ（商標）及び抗Ｆｃ抗体で免疫ブロッティングする。Co-immunoprecipitation assays show that GFRAL interacts with GDF15. Cell lysates prepared from HEK 293 cells are transiently transfected with FLAGTM-tagged GFRα4, GFRAL or GAS1 and incubated with recombinant tandem Fc-GDF15 protein. Immunoprecipitation is performed with anti-FLAGTM antibody followed by immunoblotting with anti-FLAGTM and anti-Fc antibodies. 固相結合アッセイは、（Ａ）組換えＧＤＮＦタンパク質が、ＧＦＲα１に最も強力に結合することと、（Ｂ）組換えＧＤＦ１５が、ＧＦＲＡＬのＥＣＤと特異的に相互作用することとを示す。Solid phase binding assays show that (A) recombinant GDNF protein binds most strongly to GFRα1 and (B) recombinant GDF15 specifically interacts with GFRAL's ECD. 表面プラズモン共鳴（「ＳＰＲ」）センサグラムは、ＧＤＦ１５（配列番号２）とＧＦＲＡＬのＥＣＤ（配列番号４）との間の結合を示す。ＧＦＲＡＬの組換えＥＣＤと、（Ａ）未変性ＧＤＦ１５及び（Ｂ）タンデムＦｃ−ＧＤＦ１５との間の結合は、２５℃で試験する。バイオセンサーチップの応答を、時間の関数としてプロットする。Surface Plasmon Resonance ("SPR") sensorgrams show binding between GDF15 (SEQ ID NO: 2) and GFRAL's ECD (SEQ ID NO: 4). The binding between GFRAL recombinant ECD and (A) native GDF15 and (B) tandem Fc-GDF15 is tested at 25 ° C. The response of the biosensor chip is plotted as a function of time. ＧＤＦ１５（配列番号７）のＧＦＲＡＬ受容体（配列番号９）を有するマウス及びそれを有さないマウスにおける効果を示す。効果は、１０週齢の野生型またはＧｆｒａｌ−／−（ＫＯ）マウス（野生型ではｎ＝９；ＫＯではｎ＝８）をＧＤＦ１５で通常の給餌方法での処置中の（Ａ）体重、（Ｂ）飼料摂取、及び（Ｃ）給餌時血中グルコース値で示し、（Ｄ）ＧＤＦ１５による処置から１３日後に雄マウスで行った経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）であり、（Ｅ〜Ｈ）は、同じそれぞれの試験を雌マウスで行った結果である。Figure 7 shows the effect in mice with and without the GFRAL receptor (SEQ ID NO: 9) of GDF 15 (SEQ ID NO: 7). The effect is as follows: (A) body weight during treatment of 10-week-old wild type or Gfral − / − (KO) mice (n = 9 for wild type; n = 8 for KO) with GDF 15 in the usual feeding method B) Oral glucose tolerance test (OGTT) performed on male mice after 13 days of treatment with GDF15 (B) feed intake, and (C) blood glucose level at feeding (D), (EH): It is the result of performing the same each test with a female mouse. 抗体を、これらがＧＤＦ１５とＧＦＲＡＬとの間の相互作用をブロックするかどうかを決定するために試験する。ＧＤＦ１５（配列番号２）とＧＦＲＡＬ（配列番号９）との間の相互作用を、生成される異なるＧＦＲＡＬの存在下で、固相結合アッセイによって評価する。８Ａ２及び８Ｇ２は、用量依存的様式で結合を阻害することができる。The antibodies are tested to determine if they block the interaction between GDF15 and GFRAL. The interaction between GDF15 (SEQ ID NO: 2) and GFRAL (SEQ ID NO: 9) is assessed by solid phase binding assay in the presence of the different GFRAL generated. 8A2 and 8G2 can inhibit binding in a dose dependent manner.

方法：
組換え未変性ＧＤＦ１５、ＧＤＮＦ、ＧＦＲα１、ＧＦＲα２、ＧＦＲα３、Ｇａｓ１タンパク質、抗ＧＤＦ１５及び抗ＧＤＮＦは、Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓから購入する。タンデムＦｃＧＤＦ１５は、Ｃ末端に、第１のＦｃ領域ならびに第２のＦｃ領域及び未変性のＧＤＦ１５（配列番号２）を含む。第１及び第２のＦｃ領域は、フレキシブルリンカーを通して連結され、隣接したポリペプチドを形成して、二量体化してＦｃダイマーを形成する。組換えタンデムＦｃ及びＧＦＲＡＬのＥＣＤは、Ｎｏｖｏｐｒｏｔｅｉｎによって発現かつ精製される。ＧＦＲＡＬノックアウトマウスは、Ｔａｃｏｎｉｃから取得され、ＧＦＲＡＬ遺伝子からのエクソン２及び３が、相同組換えを通して、ＬａｃＺ／Ｎｅｏカセットで置き換えられる。 Method:
Recombinant native GDF15, GDNF, GFRα1, GFRα2, GFRα3, Gas1 protein, anti-GDF15 and anti-GDNF are purchased from R & D Systems. Tandem Fc GDF15 contains at the C-terminus, a first Fc region and a second Fc region and native GDF15 (SEQ ID NO: 2). The first and second Fc regions are linked through a flexible linker to form contiguous polypeptides and dimerize to form an Fc dimer. Recombinant tandem Fc and GFRAL ECD are expressed and purified by Novoprotein. GFRAL knockout mice are obtained from Taconic, and exons 2 and 3 from the GFRAL gene are replaced with the LacZ / Neo cassette through homologous recombination.

免疫沈降及び免疫ブロット分析。ＨＥＫ２９３細胞を、１０％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを補充したダルベッコ修飾イーグル培地中に維持する。細胞を、リポフェクタミン２０００トランスフェクション試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、発現ベクターでトランスフェクトする。細胞溶解物を、プロテアーゼ阻害剤カクテルを加えたＰＢＳ及び１％ＮＰ４０中に採取する。免疫沈降は、１μｇ／ｍｌのタンデムＦｃＧＤＦ１５組換えタンパク質の存在下で、抗ＦＬＡＧ（商標）抗体結合ビーズを用いて行う。免疫ブロット法は、抗ＦＬＡＧ（商標）及び抗ヒトＦｃ抗体を用いて行う。 Immunoprecipitation and immunoblot analysis. HEK 293 cells are maintained in Dulbecco's modified Eagle's medium supplemented with 10% fetal bovine serum and penicillin / streptomycin. Cells are transfected with the expression vector using Lipofectamine 2000 transfection reagent (Invitrogen). Cell lysates are harvested in PBS plus 1% NP40 with a protease inhibitor cocktail. Immunoprecipitation is performed with anti-FLAGTM antibody coupled beads in the presence of 1 μg / ml tandem Fc GDF15 recombinant protein. Immunoblotting is performed using anti-FLAGTM and anti-human Fc antibodies.

固相結合アッセイ。Ｎｕｎｃ９６−ウェルプレートを、０．２μｇ／ｍｌの組換えＧＦＲα受容体５０μｌで４℃にて一晩コーティングする。０．０５％のＴｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳで洗浄後、１μｇ／ｍｌの組換えＧＤＮＦまたはＧＤＦ１５（配列番号２）タンパク質５０μｌを、室温で各ウェルに添加する。２時間後、抗ＧＤＮＦまたは抗ＧＤＦ１５抗体を添加し、プレートを更に１時間、室温でインキュベートする。プレートを洗浄し、ＨＲＰ結合二次抗体を検出用に使用する。 Solid phase binding assay. Nunc 96-well plates are coated overnight at 4 ° C. with 50 μl of 0.2 μg / ml recombinant GFRα receptor. After washing with PBS containing 0.05% Tween 20, 50 μl of 1 μg / ml recombinant GDNF or GDF15 (SEQ ID NO: 2) protein is added to each well at room temperature. After 2 hours, add anti-GDNF or anti-GDF15 antibody and incubate the plate for an additional hour at room temperature. The plate is washed and HRP conjugated secondary antibody is used for detection.

ＳＰＲ分光法。Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）３０００機器を使用して、ＧＤＦ１５（配列番号２）のＧＦＲＡＬ（配列番号４）受容体への結合反応速度を測定する。測定値は２５℃で実施する。試料は、ＰＢＳ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ２０、ｐＨ７．４中に溶解させる。ＧＦＲＡＬタンパク質を、アミンカップリングケミストリーを用いて、２４３反応単位（ＲＵ）のレベルでＣＭ５センサーチップのフローセル上に固定化する。複数サイクルを使用して結合を評価する。各サイクルは、以下の、１）約４５μｌのＧＤＦ１５を３０μｌ／分の流速で注入し、続いて５分間解離させるステップと、２）約１５μｌの１０ｍＭグリシン塩酸塩、ｐＨ１．５を用いて再生するステップと、からなる。各サイクルの会合及び解離速度を、ＢＩＡ評価ソフトウェアを使用して評価する。 SPR spectroscopy. The binding kinetics of GDF15 (SEQ ID NO: 2) to the GFRAL (SEQ ID NO: 4) receptor is measured using a Biacore® 3000 instrument. The measurements are carried out at 25 ° C. The samples are dissolved in PBS + 0.05% Tween 20, pH 7.4. The GFRAL protein is immobilized on the flow cell of a CM5 sensor chip at a level of 243 reaction units (RU) using amine coupling chemistry. Evaluate binding using multiple cycles. Each cycle consists of 1) injecting about 45 μl of GDF 15 at a flow rate of 30 μl / min, followed by dissociating for 5 minutes, and 2) regenerating with about 15 μl of 10 mM glycine hydrochloride, pH 1.5 It consists of steps. Association and dissociation rates of each cycle are assessed using BIA evaluation software.

動物及び治療。野生型及びＧＦＲＡＬホモ接合性ノックアウト同腹子を試験に使用する。組換えタンデムＦｃＧＤＦ１５タンパク質またはビヒクル（ＰＢＳ）を０．１ｍｇ／ｋｇで２日毎に１回腹腔内（「ｉ．ｐ」）に注射する。指示された時間後、体重及び飼料摂取を測定する。尾静脈血液を収集し、血中グルコースをグルコース計で測定する。 Animals and treatments. Wild type and GFRAL homozygous knockout littermates are used in the study. Recombinant tandem Fc GDF15 protein or vehicle (PBS) is injected intraperitoneally ("ip") once every two days at 0.1 mg / kg. Body weight and feed intake are measured after the indicated time. Tail vein blood is collected and blood glucose is measured with a glucose meter.

経口グルコース負荷試験。マウスを、６時間絶食させた後にグルコース（２ｇ／ｋｇ）を経口投与し、グルコース値は、投与直前、グルコース負荷後１５、３０、６０及び１２０分に測定されるであろう。
配列 Oral glucose tolerance test. The mice are fasted for 6 hours followed by oral administration of glucose (2 g / kg) and glucose levels will be measured at 15, 30, 60 and 120 minutes after glucose loading just prior to dosing.
Array

ヒトＧＤＦ１５ＡＡ配列（配列番号１）
ＭＰＧＱＥＬＲＴＶＮＧＳＱＭＬＬＶＬＬＶＬＳＷＬＰＨＧＧＡＬＳＬＡＥＡＳＲＡＳＦＰＧＰＳＥＬＨＳＥＤＳＲＦＲＥＬＲＫＲＹＥＤＬＬＴＲＬＲＡＮＱＳＷＥＤＳＮＴＤＬＶＰＡＰＡＶＲＩＬＴＰＥＶＲＬＧＳＧＧＨＬＨＬＲＩＳＲＡＡＬＰＥＧＬＰＥＡＳＲＬＨＲＡＬＦＲＬＳＰＴＡＳＲＳＷＤＶＴＲＰＬＲＲＱＬＳＬＡＲＰＱＡＰＡＬＨＬＲＬＳＰＰＰＳＱＳＤＱＬＬＡＥＳＳＳＡＲＰＱＬＥＬＨＬＲＰＱＡＡＲＧＲＲＲＡＲＡＲＮＧＤＨＣＰＬＧＰＧＲＣＣＲＬＨＴＶＲＡＳＬＥＤＬＧＷＡＤＷＶＬＳＰＲＥＶＱＶＴＭＣＩＧＡＣＰＳＱＦＲＡＡＮＭＨＡＱＩＫＴＳＬＨＲＬＫＰＤＴＶＰＡＰＣＣＶＰＡＳＹＮＰＭＶＬＩＱＫＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＬＡＫＤＣＨＣＩ Human GDF15 AA sequence (SEQ ID NO: 1)
(If not limited to the above, the slogue, UT. This is not limited to a high-pass (E) A part of the UT. A UT.

ヒト活性ＧＤＦ１５ＡＡ配列（配列番号２）
ＡＲＮＧＤＨＣＰＬＧＰＧＲＣＣＲＬＨＴＶＲＡＳＬＥＤＬＧＷＡＤＷＶＬＳＰＲＥＶＱＶＴＭＣＩＧＡＣＰＳＱＦＲＡＡＮＭＨＡＱＩＫＴＳＬＨＲＬＫＰＤＴＶＰＡＰＣＣＶＰＡＳＹＮＰＭＶＬＩＱＫＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＬＡＫＤＣＨＣＩ Human active GDF15 AA sequence (SEQ ID NO: 2)
ARNGDHCPLGGPGRCCRLHTVRASLED LGWADWVLSPREVQVTMCIGACPRCSFRAANMHAQIKTSLHRKPDPVPPCCPPASYPMLIQKTDTGSVSLQTYDLLAKDCHCI

ヒトＧＤＦ１５ＤＮＡ配列（配列番号３）
ＡＴＧＣＣＣＧＧＧＣＡＡＧＡＡＣＴＣＡＧＧＡＣＧＧＴＧＡＡＴＧＧＣＴＣＴＣＡＧＡＴＧＣＴＣＣＴＧＧＴＧＴＴＧＣＴＧＧＴＧＣＴＣＴＣＧＴＧＧＣＴＧＣＣＧＣＡＴＧＧＧＧＧＣＧＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＣＣＧＡＧＧＣＧＡＧＣＣＧＣＧＣＡＡＧＴＴＴＣＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＣＡＧＡＧＴＴＧＣＡＣＴＣＣＧＡＡＧＡＣＴＣＣＡＧＡＴＴＣＣＧＡＧＡＧＴＴＧＣＧＧＡＡＡＣＧＣＴＡＣＧＡＧＧＡＣＣＴＧＣＴＡＡＣＣＡＧＧＣＴＧＣＧＧＧＣＣＡＡＣＣＡＧＡＧＣＴＧＧＧＡＡＧＡＴＴＣＧＡＡＣＡＣＣＧＡＣＣＴＣＧＴＣＣＣＧＧＣＣＣＣＴＧＣＡＧＴＣＣＧＧＡＴＡＣＴＣＡＣＧＣＣＡＧＡＡＧＴＧＣＧＧＣＴＧＧＧＡＴＣＣＧＧＣＧＧＣＣＡＣＣＴＧＣＡＣＣＴＧＣＧＴＡＴＣＴＣＴＣＧＧＧＣＣＧＣＣＣＴＴＣＣＣＧＡＧＧＧＧＣＴＣＣＣＣＧＡＧＧＣＣＴＣＣＣＧＣＣＴＴＣＡＣＣＧＧＧＣＴＣＴＧＴＴＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＣＣＧＡＣＧＧＣＧＴＣＡＡＧＧＴＣＧＴＧＧＧＡＣＧＴＧＡＣＡＣＧＡＣＣＧＣＴＧＣＧＧＣＧＴＣＡＧＣＴＣＡＧＣＣＴＴＧＣＡＡＧＡＣＣＣＣＡＧＧＣＧＣＣＣＧＣＧＣＴＧＣＡＣＣＴＧＣＧＡＣＴＧＴＣＧＣＣＧＣＣＧＣＣＧＴＣＧＣＡＧＴＣＧＧＡＣＣＡＡＣＴＧＣＴＧＧＣＡＧＡＡＴＣＴＴＣＧＴＣＣＧＣＡＣＧＧＣＣＣＣＡＧＣＴＧＧＡＧＴＴＧＣＡＣＴＴＧＣＧＧＣＣＧＣＡＡＧＣＣＧＣＣＡＧＧＧＧＧＣＧＣＣＧＣＡＧＡＧＣＧＣＧＴＧＣＧＣＧＣＡＡＣＧＧＧＧＡＣＣＡＣＴＧＴＣＣＧＣＴＣＧＧＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴＴＧＣＴＧＣＣＧＴＣＴＧＣＡＣＡＣＧＧＴＣＣＧＣＧＣＧＴＣＧＣＴＧＧＡＡＧＡＣＣＴＧＧＧＣＴＧＧＧＣＣＧＡＴＴＧＧＧＴＧＣＴＧＴＣＧＣＣＡＣＧＧＧＡＧＧＴＧＣＡＡＧＴＧＡＣＣＡＴＧＴＧＣＡＴＣＧＧＣＧＣＧＴＧＣＣＣＧＡＧＣＣＡＧＴＴＣＣＧＧＧＣＧＧＣＡＡＡＣＡＴＧＣＡＣＧＣＧＣＡＧＡＴＣＡＡＧＡＣＧＡＧＣＣＴＧＣＡＣＣＧＣＣＴＧＡＡＧＣＣＣＧＡＣＡＣＧＧＴＧＣＣＡＧＣＧＣＣＣＴＧＣＴＧＣＧＴＧＣＣＣＧＣＣＡＧＣＴＡＣＡＡＴＣＣＣＡＴＧＧＴＧＣＴＣＡＴＴＣＡＡＡＡＧＡＣＣＧＡＣＡＣＣＧＧＧＧＴＧＴＣＧＣＴＣＣＡＧＡＣＣＴＡＴＧＡＴＧＡＣＴＴＧＴＴＡＧＣＣＡＡＡＧＡＣＴＧＣＣＡＣＴＧＣＡＴＡＴＧＡ Human GDF15 DNA sequence (SEQ ID NO: 3)
ATGCCCGGGCAAGAACTCAGGACGGTGAATGGCTCTCAGATGCTCCTGGTGTTGCTGGTGCTCTCGTGGCTGCCGCATGGGGGCGCCCTGTCTCTGGCCGAGGCGAGCCGCGCAAGTTTCCCGGGACCCTCAGAGTTGCACTCCGAAGACTCCAGATTCCGAGAGTTGCGGAAACGCTACGAGGACCTGCTAACCAGGCTGCGGGCCAACCAGAGCTGGGAAGATTCGAACACCGACCTCGTCCCGGCCCCTGCAGTCCGGATACTCACGCCAGAAGTGCGGCTGGGATCCGGCGGCCACCTGCACCTGCGTATCTCTCGGGCCGCCCTTCCC AGGGGCTCCCCGAGGCCTCCCGCCTTCACCGGGCTCTGTTCCGGCTGTCCCCGACGGCGTCAAGGTCGTGGGACGTGACACGACCGCTGCGGCGTCAGCTCAGCCTTGCAAGACCCCAGGCGCCCGCGCTGCACCTGCGACTGTCGCCGCCGCCGTCGCAGTCGGACCAACTGCTGGCAGAATCTTCGTCCGCACGGCCCCAGCTGGAGTTGCACTTGCGGCCGCAAGCCGCCAGGGGGCGCCGCAGAGCGCGTGCGCGCAACGGGGACCACTGTCCGCTCGGGCCCGGGCGTTGCTGCCGTCTGCACACGGTCCGCGCGTCGCTGGAAGAC TGGGCTGGGCCGATTGGGTGCTGTCGCCACGGGAGGTGCAAGTGACCATGTGCATCGGCGCGTGCCCGAGCCAGTTCCGGGCGGCAAACATGCACGCGCAGATCAAGACGAGCCTGCACCGCCTGAAGCCCGACACGGTGCCAGCGCCCTGCTGCGTGCCCGCCAGCTACAATCCCATGGTGCTCATTCAAAAGACCGACACCGGGGTGTCGCTCCAGACCTATGATGACTTGTTAGCCAAAGACTGCCACTGCATATGA

ヒトＧＦＲＡＬ受容体ＡＡ配列（配列番号４）
ＭＩＶＦＩＦＬＡＭＧＬＳＬＥＮＥＹＴＳＱＴＮＮＣＴＹＬＲＥＱＣＬＲＤＡＮＧＣＫＨＡＷＲＶＭＥＤＡＣＮＤＳＤＰＧＤＰＣＫＭＲＮＳＳＹＣＮＬＳＩＱＹＬＶＥＳＮＦＱＦＫＥＣＬＣＴＤＤＦＹＣＴＶＮＫＬＬＧＫＫＣＩＮＫＳＤＮＶＫＥＤＫＦＫＷＮＬＴＴＲＳＨＨＧＦＫＧＭＷＳＣＬＥＶＡＥＡＣＶＧＤＶＶＣＮＡＱＬＡＳＹＬＫＡＣＳＡＮＧＮＰＣＤＬＫＱＣＱＡＡＩＲＦＦＹＱＮＩＰＦＮＩＡＱＭＬＡＦＣＤＣＡＱＳＤＩＰＣＱＱＳＫＥＡＬＨＳＫＴＣＡＶＮＭＶＰＰＰＴＣＬＳＶＩＲＳＣＱＮＤＥＬＣＲＲＨＹＲＴＦＱＳＫＣＷＱＲＶＴＲＫＣＨＥＤＥＮＣＩＳＴＬＳＫＱＤＬＴＣＳＧＳＤＤＣＫＡＡＹＩＤＩＬＧＴＶＬＱＶＱＣＴＣＲＴＩＴＱＳＥＥＳＬＣＫＩＦＱＨＭＬＨＲＫＳＣＦＮＹＰＴＬＳＮＶＫＧＭＡＬＹＴＲＫＨＡＮＫＩＴＬＴＧＦＨＳＰＦＮＧＥＶＩＹＡＡＭＣＭＴＶＴＣＧＩＬＬＬＶＭＶＫＬＲＴＳＲＩＳＳＫＡＲＤＰＳＳＩＱＩＰＧＥＬ Human GFRAL Receptor AA Sequence (SEQ ID NO: 4)
MIVFIFLAMGLSLENEYTSQTNNCTYLREQCLRDANGCKHAWRVMEDACNDSDPGDPCKMRNSSYCNLSIQYLVESNFQFKECLCTDDFYCTVNKLLGKKCINKSDNVKEDKFKWNLTTRSHHGFKGMWSCLEVAEACVGDVVCNAQLASYLKACSANGNPCDLKQCQAAIRFFYQNIPFNIAQMLAFCDCAQSDIPCQQSKEALHSKTCAVNMVPPPTCLSVIRSCQNDELCRRHYRTFQSKCWQRVTRKCHEDENCISTLSKQDLTCSGSDDCKAAYIDILGTVLQVQCTCRTITQSEESLCKIFQHMLHRKSCFNYPTLSNVKGMALYTR HANKITLTGFHSPFNGEVIYAAMCMTVTCGILLLVMVKLRTSRISSKARDPSSIQIPGEL

ヒトＧＦＲＡＬ受容体ＤＮＡ配列（配列番号５）
ＡＴＧＡＴＡＧＴＧＴＴＴＡＴＴＴＴＣＴＴＧＧＣＴＡＴＧＧＧＧＴＴＡＡＧＣＴＴＧＧＡＡＡＡＴＧＡＡＴＡＣＡＣＴＴＣＣＣＡＡＡＣＣＡＡＴＡＡＴＴＧＣＡＣＡＴＡＴＴＴＡＡＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＣＴＴＡＣＧＴＧＡＴＧＣＡＡＡＴＧＧＡＴＧＴＡＡＡＣＡＴＧＣＴＴＧＧＡＧＡＧＴＡＡＴＧＧＡＡＧＡＴＧＣＣＴＧＣＡＡＴＧＡＴＴＣＡＧＡＴＣＣＡＧＧＴＧＡＣＣＣＣＴＧＣＡＡＧＡＴＧＡＧＧＡＡＴＴＣＡＴＣＡＴＡＣＴＧＴＡＡＣＣＴＧＡＧＴＡＴＣＣＡＧＴＡＣＴＴＡＧＴＧＧＡＡＡＧＣＡＡＴＴＴＣＣＡＡＴＴＴＡＡＡＧＡＧＴＧＴＣＴＴＴＧＣＡＣＴＧＡＴＧＡＣＴＴＣＴＡＴＴＧＴＡＣＴＧＴＧＡＡＣＡＡＡＣＴＧＣＴＴＧＧＡＡＡＡＡＡＡＴＧＴＡＴＣＡＡＴＡＡＡＴＣＡＧＡＴＡＡＣＧＴＧＡＡＡＧＡＧＧＡＴＡＡＡＴＴＣＡＡＡＴＧＧＡＡＴＣＴＡＡＣＴＡＣＡＣＧＴＴＣＣＣＡＴＣＡＴＧＧＡＴＴＣＡＡＡＧＧＧＡＴＧＴＧＧＴＣＣＴＧＴＴＴＧＧＡＡＧＴＧＧＣＡＧＡＧＧＣＡＴＧＴＧＴＡＧＧＧＧＡＴＧＴＧＧＴＣＴＧＴＡＡＴＧＣＡＣＡＧＴＴＧＧＣＣＴＣＴＴＡＣＣＴＴＡＡＡＧＣＴＴＧＣＴＣＡＧＣＡＡＡＴＧＧＡＡＡＴＣＣＧＴＧＴＧＡＴＣＴＧＡＡＡＣＡＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＧＣＣＡＴＡＣＧＧＴＴＣＴＴＣＴＡＴＣＡＡＡＡＴＡＴＡＣＣＴＴＴＴＡＡＣＡＴＴＧＣＣＣＡＧＡＴＧＴＴＧＧＣＴＴＴＴＴＧＴＧＡＣＴＧＴＧＣＴＣＡＡＴＣＴＧＡＴＡＴＡＣＣＴＴＧＴＣＡＧＣＡＧＴＣＣＡＡＡＧＡＡＧＣＴＣＴＴＣＡＣＡＧＣＡＡＧＡＣＡＴＧＴＧＣＡＧＴＧＡＡＣＡＴＧＧＴＴＣＣＡＣＣＣＣＣＴＡＣＴＴＧＣＣＴＣＡＧＴＧＴＡＡＴＴＣＧＣＡＧＣＴＧＣＣＡＡＡＡＴＧＡＴＧＡＡＴＴＡＴＧＣＡＧＧＡＧＧＣＡＣＴＡＴＡＧＡＡＣＡＴＴＴＣＡＧＴＣＡＡＡＡＴＧＣＴＧＧＣＡＧＣＧＴＧＴＧＡＣＴＡＧＡＡＡＧＴＧＣＣＡＴＧＡＡＧＡＴＧＡＧＡＡＴＴＧＣＡＴＴＡＧＣＡＣＣＴＴＡＡＧＣＡＡＡＣＡＧＧＡＣＣＴＣＡＣＴＴＧＴＴＣＡＧＧＡＡＧＴＧＡＴＧＡＣＴＧＣＡＡＡＧＣＴＧＣＴＴＡＣＡＴＡＧＡＴＡＴＣＣＴＴＧＧＧＡＣＧＧＴＣＣＴＴＣＡＡＧＴＧＣＡＡＴＧＴＡＣＣＴＧＴＡＧＧＡＣＣＡＴＴＡＣＡＣＡＡＡＧＴＧＡＧＧＡＡＴＣＴＴＴＧＴＧＴＡＡＧＡＴＴＴＴＣＣＡＧＣＡＣＡＴＧＣＴＴＣＡＴＡＧＡＡＡＡＴＣＡＴＧＴＴＴＣＡＡＴＴＡＴＣＣＡＡＣＣＣＴＧＴＣＴＡＡＴＧＴＣＡＡＡＧＧＣＡＴＧＧＣＡＴＴＧＴＡＴＡＣＡＡＧＡＡＡＡＣＡＴＧＣＡＡＡＣＡＡＡＡＴＣＡＣＴＴＴＡＡＣＴＧＧＡＴＴＴＣＡＴＴＣＣＣＣＣＴＴＣＡＡＴＧＧＡＧＡＡＧＴＡＡＴＣＴＡＴＧＣＴＧＣＣＡＴＧＴＧＣＡＴＧＡＣＡＧＴＣＡＣＣＴＧＴＧＧＡＡＴＣＣＴＴＣＴＧＴＴＧＧＴＴＡＴＧＧＴＣＡＡＧＣＴＴＡＧＡＡＣＴＴＣＣＡＧＡＡＴＡＴＣＡＡＧＴＡＡＡＧＣＡＡＧＡＧＡＴＣＣＴＴＣＡＴＣＧＡＴＣＣＡＡＡＴＡＣＣＴＧＧＡＧＡＡＣＴＣＴＧＡ Human GFRAL Receptor DNA Sequence (SEQ ID NO: 5)
ATGATAGTGTTTATTTTCTTGGCTATGGGGTTAAGCTTGGAAAATGAATACACTTCCCAAACCAATAATTGCACATATTTAAGAGAGCAATGCTTACGTGATGCAAATGGATGTAAACATGCTTGGAGAGTAATGGAAGATGCCTGCAATGATTCAGATCCAGGTGACCCCTGCAAGATGAGGAATTCATCATACTGTAACCTGAGTATCCAGTACTTAGTGGAAAGCAATTTCCAATTTAAAGAGTGTCTTTGCACTGATGACTTCTATTGTACTGTGAACAAACTGCTTGGAAAAAAATGTATCAATAAATCAGATAACGTGAAAGAGGAT AATTCAAATGGAATCTAACTACACGTTCCCATCATGGATTCAAAGGGATGTGGTCCTGTTTGGAAGTGGCAGAGGCATGTGTAGGGGATGTGGTCTGTAATGCACAGTTGGCCTCTTACCTTAAAGCTTGCTCAGCAAATGGAAATCCGTGTGATCTGAAACAGTGCCAAGCAGCCATACGGTTCTTCTATCAAAATATACCTTTTAACATTGCCCAGATGTTGGCTTTTTGTGACTGTGCTCAATCTGATATACCTTGTCAGCAGTCCAAAGAAGCTCTTCACAGCAAGACATGTGCAGTGAACATGGTTCCACCCCCTACTTGCCTCAGT TAATTCGCAGCTGCCAAAATGATGAATTATGCAGGAGGCACTATAGAACATTTCAGTCAAAATGCTGGCAGCGTGTGACTAGAAAGTGCCATGAAGATGAGAATTGCATTAGCACCTTAAGCAAACAGGACCTCACTTGTTCAGGAAGTGATGACTGCAAAGCTGCTTACATAGATATCCTTGGGACGGTCCTTCAAGTGCAATGTACCTGTAGGACCATTACACAAAGTGAGGAATCTTTGTGTAAGATTTTCCAGCACATGCTTCATAGAAAATCATGTTTCAATTATCCAACCCTGTCTAATGTCAAAGGCATGGCATTGTATACAAGAA AACATGCAAACAAAATCACTTTA ACTGGATTTCATTCCCCCCTTCAATGGAGAAGTAATCGTGTCTGCCATGTGCATGACAGTCACCTGTGAATCCTTCTGTGTTGTGTGATGGTCAAGCTTAGAACTTCCAAGAATATCAAGTACAAGAGATCCTTCATCGATCCAATACTCGGAGAACTCTGA

マウスＧＤＦ１５ＡＡ配列（配列番号６）
ＭＡＰＰＡＬＱＡＱＰＰＧＧＳＱＬＲＦＬＬＦＬＬＬＬＬＬＬＬＳＷＰＳＱＧＤＡＬＡＭＰＥＱＲＰＳＧＰＥＳＱＬＮＡＤＥＬＲＧＲＦＱＤＬＬＳＲＬＨＡＮＱＳＲＥＤＳＮＳＥＰＳＰＤＰＡＶＲＩＬＳＰＥＶＲＬＧＳＨＧＱＬＬＬＲＶＮＲＡＳＬＳＱＧＬＰＥＡＹＲＶＨＲＡＬＬＬＬＴＰＴＡＲＰＷＤＩＴＲＰＬＫＲＡＬＳＬＲＧＰＲＡＰＡＬＲＬＲＬＴＰＰＰＤＬＡＭＬＰＳＧＧＴＱＬＥＬＲＬＲＶＡＡＧＲＧＲＲＳＡＨＡＨＰＲＤＳＣＰＬＧＰＧＲＣＣＨＬＥＴＶＱＡＴＬＥＤＬＧＷＳＤＷＶＬＳＰＲＱＬＱＬＳＭＣＶＧＥＣＰＨＬＹＲＳＡＮＴＨＡＱＩＫＡＲＬＨＧＬＱＰＤＫＶＰＡＰＣＣＶＰＳＳＹＴＰＶＶＬＭＨＲＴＤＳＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＶＡＲＧＣＨＣＡ Mouse GDF15 AA sequence (SEQ ID NO: 6)
The event is not limited to the following but not limited to the following but not limited to the above.

マウス活性ＧＤＦ１５ＡＡ配列（配列番号７）
ＡＨＰＲＤＳＣＰＬＧＰＧＲＣＣＨＬＥＴＶＱＡＴＬＥＤＬＧＷＳＤＷＶＬＳＰＲＱＬＱＬＳＭＣＶＧＥＣＰＨＬＹＲＳＡＮＴＨＡＱＩＫＡＲＬＨＧＬＱＰＤＫＶＰＡＰＣＣＶＰＳＳＹＴＰＶＶＬＭＨＲＴＤＳＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＶＡＲＧＣＨＣＡ Mouse active GDF15 AA sequence (SEQ ID NO: 7)
AHPRDSCPLGPGRCCHLETVQATLED LGWSDWVLSPRQLQLSMCVGECPHLYRSANTHAQ IKARLHGLQPDKPAPCCPCPSSYTPVVLMHRTDSGVSLQDDIDLVARGCHCA

マウスＧＤＦ１５ＤＮＡ配列（配列番号８）
ＡＴＧＧＣＣＣＣＧＣＣＣＧＣＧＣＴＣＣＡＧＧＣＣＣＡＧＣＣＴＣＣＡＧＧＣＧＧＣＴＣＴＣＡＡＣＴＧＡＧＧＴＴＣＣＴＧＣＴＧＴＴＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＣＡＴＧＧＣＣＡＴＣＧＣＡＧＧＧＧＧＡＣＧＣＣＣＴＧＧＣＡＡＴＧＣＣＴＧＡＡＣＡＧＣＧＡＣＣＣＴＣＣＧＧＣＣＣＴＧＡＧＴＣＣＣＡＡＣＴＣＡＡＣＧＣＣＧＡＣＧＡＧＣＴＡＣＧＧＧＧＴＣＧＣＴＴＣＣＡＧＧＡＣＣＴＧＣＴＧＡＧＣＣＧＧＣＴＧＣＡＴＧＣＣＡＡＣＣＡＧＡＧＣＣＧＡＧＡＧＧＡＣＴＣＧＡＡＣＴＣＡＧＡＡＣＣＡＡＧＴＣＣＴＧＡＣＣＣＡＧＣＴＧＴＣＣＧＧＡＴＡＣＴＣＡＧＴＣＣＡＧＡＧＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＣＧＧＣＣＡＧＣＴＧＣＴＡＣＴＣＣＧＣＧＴＣＡＡＣＣＧＧＧＣＧＴＣＧＣＴＧＡＧＴＣＡＧＧＧＴＣＴＣＣＣＣＧＡＡＧＣＣＴＡＣＣＧＣＧＴＧＣＡＣＣＧＡＧＣＧＣＴＧＣＴＣＣＴＧＣＴＧＡＣＧＣＣＧＡＣＧＧＣＣＣＧＣＣＣＣＴＧＧＧＡＣＡＴＣＡＣＴＡＧＧＣＣＣＣＴＧＡＡＧＣＧＴＧＣＧＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＧＧＧＧＡＣＣＣＣＧＴＧＣＴＣＣＣＧＣＡＴＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＣＣＴＧＡＣＧＣＣＧＣＣＴＣＣＧＧＡＣＣＴＧＧＣＴＡＴＧＣＴＧＣＣＣＴＣＴＧＧＣＧＧＣＡＣＧＣＡＧＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＧＣＴＴＡＣＧＧＧＴＡＧＣＣＧＣＣＧＧＣＡＧＧＧＧＧＣＧＣＣＧＡＡＧＣＧＣＧＣＡＴＧＣＧＣＡＣＣＣＡＡＧＡＧＡＣＴＣＧＴＧＣＣＣＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＧＧＧＣＧＣＴＧＣＴＧＴＣＡＣＴＴＧＧＡＧＡＣＴＧＴＧＣＡＧＧＣＡＡＣＴＣＴＴＧＡＡＧＡＣＴＴＧＧＧＣＴＧＧＡＧＣＧＡＣＴＧＧＧＴＧＣＴＧＴＣＣＣＣＧＣＧＣＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＴＧＡＧＣＡＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＣＧＡＧＴＧＴＣＣＣＣＡＣＣＴＧＴＡＴＣＧＣＴＣＣＧＣＧＡＡＣＡＣＧＣＡＴＧＣＧＣＡＧＡＴＣＡＡＡＧＣＡＣＧＣＣＴＧＣＡＴＧＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＡＧＧＴＧＣＣＴＧＣＣＣＣＧＴＧＣＴＧＴＧＴＣＣＣＣＴＣＣＡＧＣＴＡＣＡＣＣＣＣＧＧＴＧＧＴＴＣＴＴＡＴＧＣＡＣＡＧＧＡＣＡＧＡＣＡＧＴＧＧＴＧＴＧＴＣＡＣＴＧＣＡＧＡＣＴＴＡＴＧＡＴＧＡＣＣＴＧＧＴＧＧＣＣＣＧＧＧＧＣＴＧＣＣＡＣＴＧＣＧＣＴＴＧＡ Mouse GDF15 DNA sequence (SEQ ID NO: 8)
ATGGCCCCGCCCGCGCTCCAGGCCCAGCCTCCAGGCGGCTCTCAACTGAGGTTCCTGCTGTTCCTGCTGCTGTTGCTGCTGCTGCTGTCATGGCCATCGCAGGGGGACGCCCTGGCAATGCCTGAACAGCGACCCTCCGGCCCTGAGTCCCAACTCAACGCCGACGAGCTACGGGGTCGCTTCCAGGACCTGCTGAGCCGGCTGCATGCCAACCAGAGCCGAGAGGACTCGAACTCAGAACCAAGTCCTGACCCAGCTGTCCGGATACTCAGTCCAGAGGTGAGATTGGGGTCCCACGGCCAGCTGCTACTCCGCGTCAACCGGGCGTCGCTG GTCAGGGTCTCCCCGAAGCCTACCGCGTGCACCGAGCGCTGCTCCTGCTGACGCCGACGGCCCGCCCCTGGGACATCACTAGGCCCCTGAAGCGTGCGCTCAGCCTCCGGGGACCCCGTGCTCCCGCATTACGCCTGCGCCTGACGCCGCCTCCGGACCTGGCTATGCTGCCCTCTGGCGGCACGCAGCTGGAACTGCGCTTACGGGTAGCCGCCGGCAGGGGGCGCCGAAGCGCGCATGCGCACCCAAGAGACTCGTGCCCACTGGGTCCGGGGCGCTGCTGTCACTTGGAGACTGTGCAGGCAACTCTTGAAGACTTGGGCTGGAGCGAC GGGTGCTGTCCCCGCGCCAGCTGCAGCTGAGCATGTGCGTGGGCGAGTGTCCCCACCTGTATCGCTCCGCGAACACGCATGCGCAGATCAAAGCACGCCTGCATGGCCTGCAGCCTGACAAGGTGCCTGCCCCGTGCTGTGTCCCCTCCAGCTACACCCCGGTGGTTCTTATGCACAGGACAGACAGTGGTGTGTCACTGCAGACTTATGATGACCTGGTGGCCCGGGGCTGCCACTGCGCTTGA

マウスＧＦＲＡＬ受容体ＡＡ配列（配列番号９）
ＭＬＶＦＩＦＬＡＶＴＬＳＳＥＮＥＳＳＳＱＴＮＤＣＡＨＬＩＱＫＣＬＩＤＡＮＧＣＥＱＳＷＲＳＭＥＤＴＣＬＴＰＧＤＳＣＫＩＮＮＳＬＨＣＮＬＳＩＱＡＬＶＥＫＮＦＱＦＫＥＣＬＣＭＤＤＬＨＣＴＶＮＫＬＦＧＫＫＣＴＮＫＴＤＮＭＥＫＤＮＫＤＫＷＮＬＴＴＴＰＦＹＨＧＦＫＱＭＱＳＣＬＥＶＴＥＡＣＶＧＤＶＶＣＮＡＱＬＡＬＹＬＫＡＣＳＡＮＧＮＬＣＤＶＫＨＣＱＡＡＩＲＦＦＹＱＮＭＰＦＮＴＡＱＭＬＡＦＣＤＣＡＱＳＤＩＰＣＱＱＳＫＥＴＬＨＳＫＰＣＡＬＮＩＶＰＰＰＴＣＬＳＶＩＨＴＣＲＮＤＥＬＣＲＴＨＹＲＴＦＱＴＥＣＷＰＨＩＴＧＫＣＨＥＤＥＴＣＩＳＭＬＧＫＱＤＬＴＣＳＧＳＥＳＣＲＡＡＦＬＧＴＦＧＴＶＬＱＶＰＣＡＣＲＧＶＴＱＡＥＥＨＶＣＭＩＦＱＨＭＬＨＳＫＳＣＦＮＹＰＴＰＮＶＫＤＩＳＳＹＥＫＫＮＳＫＥＩＴＬＴＧＦＮＳＦＦＮＧＥＬＬＹＶＶＶＣＭＡＶＴＣＧＩＬＦＬＶＭＬＫＬＲＩＱＳＥＫＲＤＰＳＳＩＥＩＡＧＧＶＩＩＱ Mouse GFRAL Receptor AA Sequence (SEQ ID NO: 9)
MLVFIFLAVTLSSENESSSQTNDCAHLIQKCLIDANGCEQSWRSMEDTCLTPGDSCKINNSLHCNLSIQALVEKNFQFKECLCMDDLHCTVNKLFGKKCTNKTDNMEKDNKDKWNLTTTPFYHGFKQMQSCLEVTEACVGDVVCNAQLALYLKACSANGNLCDVKHCQAAIRFFYQNMPFNTAQMLAFCDCAQSDIPCQQSKETLHSKPCALNIVPPPTCLSVIHTCRNDELCRTHYRTFQTECWPHITGKCHEDETCISMLGKQDLTCSGSESCRAAFLGTFGTVLQVPCACRGVTQAEEHVCMIFQHMLHSKSCFNYPTPNVKDISSYEKK SKEITLTGFNSFFNGELLYVVVCMAVTCGILFLVMLKLRIQSEKRDPSSIEIAGGVIIQ

マウスＧＦＲＡＬ受容体ＤＮＡ配列（配列番号１０）
ＡＴＧＣＴＡＧＴＧＴＴＣＡＴＴＴＴＣＣＴＧＧＣＴＧＴＴＡＣＧＴＴＡＡＧＣＴＣＡＧＡＡＡＡＴＧＡＡＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＡＡＡＣＡＡＡＴＧＡＴＴＧＴＧＣＡＣＡＴＴＴＡＡＴＡＣＡＧＡＡＡＴＧＣＴＴＧＡＴＴＧＡＴＧＣＡＡＡＴＧＧＣＴＧＴＧＡＧＣＡＧＴＣＡＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＴＧＧＡＡＧＡＣＡＣＣＴＧＣＣＴＴＡＣＴＣＣＡＧＧＴＧＡＣＴＣＣＴＧＣＡＡＧＡＴＡＡＡＴＡＡＴＴＣＡＣＴＡＣＡＴＴＧＴＡＡＣＣＴＧＡＧＴＡＴＣＣＡＧＧＣＴＴＴＧＧＴＧＧＡＡＡＡＡＡＡＴＴＴＣＣＡＡＴＴＴＡＡＡＧＡＧＴＧＴＣＴＴＴＧＴＡＴＧＧＡＴＧＡＣＣＴＣＣＡＣＴＧＴＡＣＡＧＴＡＡＡＣＡＡＡＣＴＴＴＴＴＧＧＡＡＡＡＡＡＧＴＧＣＡＣＣＡＡＴＡＡＧＡＣＡＧＡＴＡＡＣＡＴＧＧＡＡＡＡＧＧＡＣＡＡＴＡＡＡＧＡＴＡＡＡＴＧＧＡＡＴＣＴＡＡＣＴＡＣＴＡＣＴＣＣＴＴＴＣＴＡＴＣＡＴＧＧＡＴＴＣＡＡＡＣＡＧＡＴＧＣＡＧＴＣＴＴＧＴＴＴＧＧＡＧＧＴＧＡＣＡＧＡＧＧＣＧＴＧＴＧＴＡＧＧＧＧＡＴＧＴＧＧＴＴＴＧＴＡＡＴＧＣＡＣＡＧＴＴＧＧＣＣＣＴＴＴＡＣＣＴＴＡＡＡＧＣＡＴＧＣＴＣＡＧＣＡＡＡＴＧＧＡＡＡＴＣＴＧＴＧＴＧＡＴＧＴＧＡＡＡＣＡＣＴＧＣＣＡＡＧＣＡＧＣＣＡＴＡＣＧＧＴＴＣＴＴＣＴＡＴＣＡＡＡＡＴＡＴＧＣＣＴＴＴＴＡＡＣＡＣＴＧＣＣＣＡＧＡＴＧＴＴＧＧＣＴＴＴＴＴＧＴＧＡＣＴＧＴＧＣＴＣＡＡＴＣＴＧＡＴＡＴＡＣＣＣＴＧＴＣＡＧＣＡＡＴＣＣＡＡＡＧＡＡＡＣＴＣＴＴＣＡＣＡＧＣＡＡＧＣＣＡＴＧＴＧＣＡＣＴＧＡＡＴＡＴＡＧＴＴＣＣＡＣＣＣＣＣＣＡＣＴＴＧＣＣＴＣＡＧＴＧＴＡＡＴＴＣＡＣＡＣＴＴＧＣＣＧＡＡＡＴＧＡＴＧＡＡＴＴＡＴＧＣＡＧＧＡＣＡＣＡＣＴＡＣＣＧＡＡＣＡＴＴＣＣＡＧＡＣＡＧＡＡＴＧＣＴＧＧＣＣＣＣＡＣＡＴＡＡＣＴＧＧＧＡＡＧＴＧＣＣＡＴＧＡＡＧＡＴＧＡＧＡＣＣＴＧＣＡＴＴＡＧＣＡＴＧＴＴＡＧＧＣＡＡＧＣＡＡＧＡＣＣＴＴＡＣＴＴＧＴＴＣＴＧＧＧＡＧＴＧＡＧＡＧＣＴＧＣＡＧＧＧＣＴＧＣＣＴＴＣＣＴＡＧＧＡＡＣＣＴＴＴＧＧＧＡＣＡＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＴＡＣＣＣＴＧＴＧＣＴＴＧＣＡＧＧＧＧＣＧＴＴＡＣＡＣＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＡＣＡＣＧＴＧＴＧＣＡＴＧＡＴＴＴＴＣＣＡＧＣＡＣＡＴＧＣＴＴＣＡＴＡＧＣＡＡＡＴＣＧＴＧＴＴＴＣＡＡＴＴＡＣＣＣＡＡＣＴＣＣＴＡＡＴＧＴＣＡＡＡＧＡＣＡＴＴＴＣＣＴＣＡＴＡＴＧＡＡＡＡＡＡＡＧＡＡＴＴＣＡＡＡＡＧＡＡＡＴＴＡＣＴＣＴＧＡＣＴＧＧＡＴＴＣＡＡＴＴＣＴＴＴＣＴＴＣＡＡＴＧＧＡＧＡＡＣＴＡＣＴＣＴＡＴＧＴＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＡＴＧＧＣＡＧＴＴＡＣＣＴＧＴＧＧＡＡＴＴＣＴＴＴＴＣＴＴＧＧＴＧＡＴＧＣＴＣＡＡＧＴＴＡＡＧＧＡＴＡＣＡＡＡＧＴＧＡＡＡＡＡＡＧＡＧＡＴＣＣＣＴＣＡＴＣＣＡＴＣＧＡＡＡＴＡＧＣＴＧＧＡＧＧＴＧＴＣＡＴＣＡＴＴＣＡＧＴＧＡ Mouse GFRAL receptor DNA sequence (SEQ ID NO: 10)
ATGCTAGTGTTCATTTTCCTGGCTGTTACGTTAAGCTCAGAAAATGAATCCTCTTCCCAAACAAATGATTGTGCACATTTAATACAGAAATGCTTGATTGATGCAAATGGCTGTGAGCAGTCATGGAGATCAATGGAAGACACCTGCCTTACTCCAGGTGACTCCTGCAAGATAAATAATTCACTACATTGTAACCTGAGTATCCAGGCTTTGGTGGAAAAAAATTTCCAATTTAAAGAGTGTCTTTGTATGGATGACCTCCACTGTACAGTAAACAAACTTTTTGGAAAAAAGTGCACCAATAAGACAGATAACATGGAAAAGGACAATAAA ATAAATGGAATCTAACTACTACTCCTTTCTATCATGGATTCAAACAGATGCAGTCTTGTTTGGAGGTGACAGAGGCGTGTGTAGGGGATGTGGTTTGTAATGCACAGTTGGCCCTTTACCTTAAAGCATGCTCAGCAAATGGAAATCTGTGTGATGTGAAACACTGCCAAGCAGCCATACGGTTCTTCTATCAAAATATGCCTTTTAACACTGCCCAGATGTTGGCTTTTTGTGACTGTGCTCAATCTGATATACCCTGTCAGCAATCCAAAGAAACTCTTCACAGCAAGCCATGTGCACTGAATATAGTTCCACCCCCCACTTGCCTCAGT TAATTCACACTTGCCGAAATGATGAATTATGCAGGACACACTACCGAACATTCCAGACAGAATGCTGGCCCCACATAACTGGGAAGTGCCATGAAGATGAGACCTGCATTAGCATGTTAGGCAAGCAAGACCTTACTTGTTCTGGGAGTGAGAGCTGCAGGGCTGCCTTCCTAGGAACCTTTGGGACAGTCCTGCAAGTACCCTGTGCTTGCAGGGGCGTTACACAGGCTGAAGAACACGTGTGCATGATTTTCCAGCACATGCTTCATAGCAAATCGTGTTTCAATTACCCAACTCCTAATGTCAAAGACATTTCCTCATATGAAAAAAAGA ATTCAAAAGA ATTACTCTGACTGGATTCAATTCTTTCTCTCTAATGGAGA ACTACTC TATGTTGTTTGTGCATGGCAGTTACTCTGTGAATTCTT TCTTGTGATGATGCTCAAGTTAAGGATACAAAGTGAGCCATCCATCGAAATAGCTGGAGGTGTCATCATTCAGTGAA

ＧＦＲＡＬに対するマウス抗体を生成するための組換えタンパク質抗原（配列番号１１）
ＤＨＨＨＨＨＨＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＫＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＶＰＶＬＤＳＤＧＳＦＲＬＡＳＹＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＧＧＧＧＳＧＲＡＱＴＮＤＣＡＨＬＩＱＫＣＬＩＤＡＮＧＣＥＱＳＷＲＳＭＥＤＴＣＬＴＰＧＤＳＣＫＩＮＮＳＬＨＣＮＬＳＩＱＡＬＶＥＫＮＦＱＦＫＥＣＬＣＭＤＤＬＨＣＴＶＮＫＬＦＧＫＫＣＴＮＫＴＤＮＭＥＫＤＮＫＤＫＷＮＬＴＴＴＰＦＹＨＧＦＫＱＭＱＳＣＬＥＶＴＥＡＣＶＧＤＶＶＣＮＡＱＬＡＬＹＬＫＡＣＳＡＮＧＮＬＣＤＶＫＨＣＱＡＡＩＲＦＦＹＱＮＭＰＦＮＴＡＱＭＬＡＦＣＤＣＡＱＳＤＩＰＣＱＱＳＫＥＴＬＨＳＫＰＣＡＬＮＩＶＰＰＰＴＣＬＳＶＩＨＴＣＲＮＤＥＬＣＲＴＨＹＲＴＦＱＴＥＣＷＰＨＩＴＧＫＣＨＥＤＥＴＣＩＳＭＬＧＫＱＤＬＴＣＳＧＳＥＳＣＲＡＡＦＬＧＴＦＧＴＶＬＱＶＰＣＡＣＲＧＶＴＱＡＥＥＨＶＣＭＩＦＱＨＭＬＨＳＫＳＣＦＮＹＰＴＰＮＶＫＤＩＳＳＹＥＫＫＮＳＫＥ Recombinant Protein Antigen for Generating Mouse Antibody to GFRAL (SEQ ID NO: 11)
DHHHHHHAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTKPPSRDELTKNQVSLSCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTVPVLDSDGSFRLASYLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGRAQTNDCAHLIQKCLIDANGCEQSWRSMEDTCLTPGDSCKINNSLHCNLSIQALVEKNFQFKECLCMDDLHCTVNKLFGKKCTNKTDNMEKDNKDKWNLTTTP YHGFKQMQSCLEVTEACVGDVVCNAQLALYLKACSANGNLCDVKHCQAAIRFFYQNMPFNTAQMLAFCDCAQSDIPCQQSKETLHSKPCALNIVPPPTCLSVIHTCRNDELCRTHYRTFQTECWPHITGKCHEDETCISMLGKQDLTCSGSESCRAAFLGTFGTVLQVPCACRGVTQAEEHVCMIFQHMLHSKSCFNYPTPNVKDISSYEKKNSKE

Claims

A method of lowering blood glucose in a mammal comprising administering to a mammal in need thereof an effective amount of a compound that agonizes the GFRAL receptor.

A method of increasing blood glucose in a mammal comprising administering to a mammal in need thereof an effective amount of a compound that antagonizes, inhibits, neutralizes or blocks the GFRAL receptor. ,Method.

A method of reducing body weight in a mammal comprising administering to a mammal in need thereof an effective amount of a compound that agonizes the GFRAL receptor.

A method of gaining weight in a mammal comprising administering to the mammal in need thereof an effective amount of a compound that antagonizes, inhibits, neutralizes or blocks the GFRAL receptor. .

5. The method according to any one of claims 2 or 4, wherein the compound blocks the GFRAL receptor by inhibiting the binding of GDF15.

6. The method of any one of claims 1 to 5, wherein the compound comprises an antibody or a fragment thereof.

The method according to any one of claims 1 to 6, wherein the mammal is a human.

8. The method of claim 7, wherein the GFRAL receptor has the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4 and the GDF 15 has the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2.

The method according to any one of claims 1 to 6, wherein the mammal is a mouse.

10. The method of claim 9, wherein the GFRAL receptor has the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9 and the GDF 15 has the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7.

11. The method of any one of claims 1 to 10, wherein the compound is administered with one or more pharmaceutically acceptable excipients.

12. The compound of any one of claims 1-11, wherein said compound is administered with one or more of GLP-1, insulin, insulin analogues, DPP-4 inhibitors, SGLT2 inhibitors, and glucagon. Method.

A pharmaceutical composition comprising a compound that actuates a GFRAL receptor and one or more pharmaceutically acceptable excipients.

A pharmaceutical composition comprising a compound that antagonizes, inhibits, neutralizes or blocks the GFRAL receptor and one or more pharmaceutically acceptable excipients.

15. The composition of claim 13 or 14, further comprising one or more of GLP-1, insulin, insulin analogues, DPP-4 inhibitors, SGLT2 inhibitors, and glucagon.

16. The composition of claim 15, wherein the compound is fused with one or more of GLP-1, insulin, an insulin analogue, a DPP-4 inhibitor, a SGLT2 inhibitor, and glucagon.

An isolated compound which agonizes the GFRAL receptor.

An isolated compound that antagonizes, inhibits, neutralizes or blocks the GFRAL receptor.

The compound according to claim 16 or 17, wherein the compound is an antibody or a fragment thereof.

20. The compound according to claim 19, wherein said antibody or fragment thereof binds to the same epitope or amino acid region as GDF15 on GFRAL.

19. The compound according to claim 17 or 18, wherein said compound is a peptide or protein that binds to the same epitope or amino acid region as GDF15 on GFRAL.

A method of treating diabetes in a mammal comprising administering to a mammal in need thereof an effective amount of a compound that agonizes the GFRAL receptor.

A method of treating obesity in a mammal comprising administering to a mammal in need thereof an effective amount of a compound that agonizes the GFRAL receptor.

A method of treating cachexia in a mammal comprising administering to the mammal in need thereof an effective amount of a compound which antagonizes, inhibits, neutralizes or blocks the GFRAL receptor. Method.

(A) A GDF15-binding soluble fragment of insoluble human GFRAL receptor, wherein said insoluble human GFRAL receptor specifically binds to human GDF15, and (b) a human immunoglobulin IgG heavy chain A protein comprising a constant region of all domains other than the first domain of the constant region, wherein the protein specifically binds to human GDF15.

26. The protein of claim 25, wherein the insoluble human GFRAL receptor comprises SEQ ID NO: 4.

26. The protein according to claim 25, which consists essentially of the extracellular domain of said insoluble human GFRAL receptor and all domains of the constant domain of human IgG1 immunoglobulin heavy chain other than the first domain of said constant domain. The protein described in.