JP2019138914A

JP2019138914A - 唾液測定方法

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Publication number: JP2019138914A
Application number: JP2019049730A
Authority: JP
Inventors: 平松　光夫; Mitsuo Hiramatsu; 光夫平松; 内田　哲也; Tetsuya Uchida; 内田　　哲也; 土屋　広司; Koji Tsuchiya; 広司土屋
Original assignee: Hamamatsu Photonics KK
Current assignee: Hamamatsu Photonics KK
Priority date: 2019-03-18
Filing date: 2019-03-18
Publication date: 2019-08-22

Abstract

【課題】より簡便かつ短時間で唾液サンプル中のチオシアン酸イオンの濃度を測定することができる方法を提供する。【解決手段】唾液測定方法は、生体の唾液を採取して唾液サンプルとする唾液採取工程と、唾液サンプルを水で希釈した後に濾過して唾液サンプルから気泡を除去する気泡除去工程と、気泡除去工程後に紫外域における唾液サンプルの吸光度を測定する吸光度測定工程と、吸光度に基づいて唾液サンプル中のチオシアン酸イオンの濃度を求める濃度算出工程と、濃度算出工程において求められたチオシアン酸イオンの濃度に基づいて生体の状態または状態変化を評価する状態評価工程と、を有する。【選択図】図１

Description

本発明は、生体から採取した唾液サンプルに含まれるチオシアン酸イオンの濃度を測定する方法に関するものである。

特許文献１には、生体から採取した唾液サンプルに試薬を加えて化学発光を生じさせ、その化学発光強度に基づいて唾液サンプル中のチオシアン酸イオン（ＳＣＮ⁻）の濃度を測定する発明が開示されている。また、特許文献１には、生体から採取した唾液サンプルに試薬を加えて発色させ、その発色した唾液サンプルの波長４５０ｎｍでの吸光度に基づいて唾液サンプル中のチオシアン酸イオンの濃度を測定する発明も開示されている。さらに、特許文献１には、唾液サンプル中のチオシアン酸イオンの濃度に基づいて生体のストレス状態を評価できることが記載されている。

特許第４７５８３２８号公報

Aune, T. M. and Thomas, E. L. (1977)Accumulation of hypothiocyanate ion during peroxidase-catalyzed oxidation ofthiocyanate ion. Eur. J. Biochem., 80, 209-214.

特許文献１に開示された発明は、唾液サンプル中のチオシアン酸イオンの濃度を測定する為に唾液サンプルに試薬を加える工程等が必要であり、その為の時間を要する。

本発明は、上記問題点を解消する為になされたものであり、より簡便かつ短時間で唾液サンプル中のチオシアン酸イオンの濃度を測定することができる方法を提供することを目的とする。

本発明の唾液測定方法は、生体の唾液を採取して唾液サンプルとする唾液採取工程と、紫外域における唾液サンプルの吸光度を測定する吸光度測定工程と、吸光度に基づいて唾液サンプル中のチオシアン酸イオンの濃度を求める濃度算出工程と、を有する。本発明の唾液測定方法は、唾液サンプルを水で希釈した後に濾過して唾液サンプルから気泡を除去する気泡除去工程を更に備えるのが好適である。

本発明の唾液測定方法は、濃度算出工程において求められたチオシアン酸イオンの濃度に基づいて生体の状態または状態変化を評価する状態評価工程を更に有するのが好適である。このとき、状態評価工程において生体のストレス状態もしくはリラックス状態またはこれらの状態の変化を評価するのが好適である。

本発明の唾液測定方法は、生体に刺激を与える刺激付与工程を更に有し、刺激付与工程において生体に与えられた刺激と当該刺激付与後の生体の状態または状態変化との間の相関を状態評価工程において評価するのが好適である。このとき、刺激付与工程において刺激として痛みを生体に与えてもよい。

本発明によれば、より簡便かつ短時間で唾液サンプル中のチオシアン酸イオンの濃度を測定することができる。

図１は、本実施形態の唾液測定方法のフローチャートである。図２は、ＫＳＣＮ標準液の吸光度スペクトルを示す図である。図３は、化学法の場合のＫＳＣＮ標準液の吸光度スペクトルを示す図である。図４は、ＵＶ法の場合のＫＳＣＮ標準液の吸光度スペクトルを示す図である。図５は、化学法の場合のＫＳＣＮ濃度と波長４５０ｎｍ吸光度との関係を示すグラフである。図６は、ＵＶ法の場合のＫＳＣＮ濃度と波長２２７ｎｍ吸光度との関係を示すグラフである。図７は、被験者Ａのサンプルについて化学法による４５０ｎｍ吸光度とＵＶ法による２２７ｎｍ吸光度との関係を示すグラフである。図８は、被験者Ｂのサンプルについて化学法による４５０ｎｍ吸光度とＵＶ法による２２７ｎｍ吸光度との関係を示すグラフである。図９は、被験者Ｃのサンプルについて化学法による４５０ｎｍ吸光度とＵＶ法による２２７ｎｍ吸光度との関係を示すグラフである。図１０は、被験者Ｄのサンプルについて化学法による４５０ｎｍ吸光度とＵＶ法による２２７ｎｍ吸光度との関係を示すグラフである。図１１は、被験者Ａ〜Ｄそれぞれのサンプルについて得られたチオシアン酸イオン推量濃度等を纏めた表である。図１２は、被験者Ａのサンプルについて推定他成分割合平均値Ｒ_ｍを用いて補正した場合のＵＶ法計算ＳＣＮ⁻濃度Ｎ_３の時間的変化を示すグラフである。図１３は、被験者Ｂのサンプルについて推定他成分割合平均値Ｒ_ｍを用いて補正した場合のＵＶ法計算ＳＣＮ⁻濃度Ｎ_３の時間的変化を示すグラフである。図１４は、被験者Ｃのサンプルについて推定他成分割合平均値Ｒ_ｍを用いて補正した場合のＵＶ法計算ＳＣＮ⁻濃度Ｎ_３の時間的変化を示すグラフである。図１５は、被験者Ｄのサンプルについて推定他成分割合平均値Ｒ_ｍを用いて補正した場合のＵＶ法計算ＳＣＮ⁻濃度Ｎ_３の時間的変化を示すグラフである。図１６は、被験者Ａのサンプルについて他成分割合を８０％として補正した場合のＵＶ法計算ＳＣＮ⁻濃度Ｎ_４の時間的変化を示すグラフである。図１７は、被験者Ｂのサンプルについて他成分割合を８０％として補正した場合のＵＶ法計算ＳＣＮ⁻濃度Ｎ_４の時間的変化を示すグラフである。図１８は、被験者Ｃのサンプルについて他成分割合を８０％として補正した場合のＵＶ法計算ＳＣＮ⁻濃度Ｎ_４の時間的変化を示すグラフである。図１９は、被験者Ｄのサンプルについて他成分割合を８０％として補正した場合のＵＶ法計算ＳＣＮ⁻濃度Ｎ_４の時間的変化を示すグラフである。図２０は、ＵＶ法の場合のＫＳＣＮ濃度と波長２６０ｎｍ吸光度との関係を示すグラフである。図２１は、ＵＶ法の場合のＫＳＣＮ濃度と波長２５０ｎｍ吸光度との関係を示すグラフである。図２２は、ＵＶ法の場合のＫＳＣＮ濃度と波長２４０ｎｍ吸光度との関係を示すグラフである。図２３は、ＵＶ法の場合のＫＳＣＮ濃度と波長２３０ｎｍ吸光度との関係を示すグラフである。図２４は、ＵＶ法の場合のＫＳＣＮ濃度と波長２２０ｎｍ吸光度との関係を示すグラフである。図２５は、ＵＶ法の場合のＫＳＣＮ濃度と波長２１０ｎｍ吸光度との関係を示すグラフである。図２６は、ＵＶ法の場合のＫＳＣＮ濃度と波長２００ｎｍ吸光度との関係を示すグラフである。図２７は、ＵＶ法の場合のＫＳＣＮ濃度と波長１９０ｎｍ吸光度との関係を示すグラフである。図２８は、被験者Ａの４サンプルそれぞれの吸光度スペクトルを示す図である。図２９は、被験者Ａのサンプルの２２７ｎｍ吸光度と２２０〜２４０ｎｍ吸光度積算値との関係を示すグラフである。図３０は、被験者Ａのサンプルの２２７ｎｍ吸光度と２１７〜２３７ｎｍ吸光度積算値との関係を示すグラフである。図３１は、被験者Ａのサンプルの２２７ｎｍ吸光度と２２２ｎｍ吸光度との関係を示すグラフである。図３２は、被験者Ａのサンプルの２２７ｎｍ吸光度と２３２ｎｍ吸光度との関係を示すグラフである。図３３は、被験者Ｅのサンプルについて推定他成分割合平均値Ｒ_ｍを用いて補正した場合のＵＶ法計算ＳＣＮ⁻濃度Ｎ_３の時間的変化を示すグラフである。図３４は、被験者Ｅのサンプルについて他成分割合を８０％として補正した場合のＵＶ法計算ＳＣＮ⁻濃度Ｎ_４の時間的変化を示すグラフである。図３５は、痛みが付与された被験者のサンプルについて化学法による４５０ｎｍ吸光度とＵＶ法による２２７ｎｍ吸光度との関係を示すグラフである。図３６は、痛みが付与された被験者のサンプルについて得られたチオシアン酸イオン推量濃度等を纏めた表である。図３７は、痛みが付与された被験者のサンプルについて当該個人の推定他成分割合平均値Ｒ_ｍを用いて補正した場合のＵＶ法計算ＳＣＮ⁻濃度Ｎ_３の時間的変化を示すグラフである。図３８は、痛みが付与された被験者のサンプルについて他成分割合を８０％として補正した場合のＵＶ法計算ＳＣＮ⁻濃度Ｎ_４の時間的変化を示すグラフである。図３９は、痛みが付与された被験者の４サンプルそれぞれの吸光度スペクトルを示す図である。図４０は、痛みが付与された被験者のサンプルの２２７ｎｍ吸光度と２２０〜２４０ｎｍ吸光度積算値との関係を示すグラフである。図４１は、痛みが付与された被験者のサンプルの２２７ｎｍ吸光度と２１７〜２３７ｎｍ吸光度積算値との関係を示すグラフである。図４２は、痛みが付与された被験者のサンプルの２２７ｎｍ吸光度と２２２ｎｍ吸光度との関係を示すグラフである。図４３は、痛みが付与された被験者のサンプルの２２７ｎｍ吸光度と２３２ｎｍ吸光度との関係を示すグラフである。

以下、添付図面を参照して、本発明を実施するための形態を詳細に説明する。なお、図面の説明において同一の要素には同一の符号を付し、重複する説明を省略する。本発明は、これらの例示に限定されるものではなく、特許請求の範囲によって示され、特許請求の範囲と均等の意味および範囲内でのすべての変更が含まれることが意図される。

図１は、本実施形態の唾液測定方法のフローチャートである。本実施形態の唾液測定方法は、唾液採取工程Ｓ１、気泡除去工程Ｓ２、吸光度測定工程Ｓ３および濃度算出工程Ｓ４を順に行って、生体から採取した唾液サンプルに含まれるチオシアン酸イオンの濃度を測定する。また、本実施形態の唾液測定方法は、濃度算出工程Ｓ４の後に状態評価工程Ｓ５を行って、生体の状態または状態変化を評価する。

唾液採取工程Ｓ１では、生体の唾液を採取して唾液サンプルとする。唾液の採取に際しては、スポイトを用いて必要量の唾液を採取するのが好ましい。気泡除去工程Ｓ２では、唾液サンプルを水で希釈した後に濾過して唾液サンプルから気泡を除去する。例えば、０.９ｍＬの水が入れられたフィルター付き注射筒を予め準備しておき、この注射筒内に０.１ｍＬの唾液を入れることで、希釈および濾過を簡便に行うことができる。このような容量法ではなく、唾液および水それぞれを天秤で秤量して重量法によって正確に希釈してもよい。

このように唾液を水で希釈することで、唾液の粘性を低減することができ、その後の唾液の濾過を短時間に行うことができる。また、濾過により唾液から気泡を除去することで、吸光度測定工程Ｓ３の際の光の散乱に因る測定精度低下を抑制することができる。なお、濾過により気泡たけでなく他の光散乱要因物質をも除去することができる。

吸光度測定工程Ｓ３では、気泡除去工程Ｓ２において気泡が除去された後の唾液サンプルの紫外域における吸光度を測定する。例えば、石英ガラス製の測定用セルに入れた唾液サンプルに対して紫外光を入射させ、唾液サンプルを透過した紫外光の強度を検出する。例えばセル内の光通過距離は１ｃｍである。紫外光の入射光強度と透過光強度との比から唾液サンプルの吸光度を測定することができる。吸光度の測定には、既存の吸光度測定装置を用いることができる。

なお、一般に、生体内のイオン類は、紫外域や可視域には電子遷移の吸収帯を持たない場合が多いので、吸光度法で測定することは考え難い。しかし、例外的にチオシアン酸イオンは、特殊な分子構造を持っているので、特異的な電子遷移の吸収帯が紫外域に存在する。本実施形態では、チオシアン酸イオンの紫外域の吸収帯を利用する。なお、チオシアン酸イオンとチオシアン酸塩とで紫外域における吸光度スペクトルは互いに同じである。つまり、カウンターカチオンの相違による吸光度スペクトルの変化はほとんどない。

ここで吸光度測定に用いる光は、３１０ｎｍ以下の波長の紫外光であればよく、波長範囲２１０〜２４０ｎｍ内の波長の紫外光であるのが好ましく、また、波長範囲２２２〜２３２ｎｍ内の波長の紫外光であるのが更に好ましい。測定に用いる紫外光は、狭帯域のものであってもよいし、或る帯域（例えば２１０〜２４０ｎｍまたは２１７〜２３７ｎｍ）を有するものであってもよい。光源から出力される広帯域光を分光して、所望の波長の光を用いればよい。或いは、光源から出力される広帯域光のうちバンドパスフィルタにより選択した或る帯域の光を用いてもよい。なお、帯域を有する紫外光を用いる場合、得られる吸光度は、その帯域での入射光強度積算値と透過光強度積算値との比から求められる。

濃度算出工程Ｓ４では、吸光度測定工程Ｓ３において測定された吸光度に基づいて、唾液サンプル中のチオシアン酸イオンの濃度を求める。このとき、チオシアン酸イオン濃度と吸光度との間の関係を表す検量線を予め用意しておき、この検量線を用いて、測定で得られた吸光度から唾液サンプル中のチオシアン酸イオンの濃度を求める。また、吸光度測定工程Ｓ３で用いられる紫外光がチオシアン酸イオンだけでなく唾液中の他成分（例えばアミノ酸やタンパク質）によっても吸収されるので、他成分による光吸収の影響を低減する為の補正処理を行って、より正確なチオシアン酸イオンの濃度を求めるのが好適である。

状態評価工程Ｓ５では、濃度算出工程Ｓ４において求められたチオシアン酸イオンの濃度に基づいて、唾液を採取した生体の状態または状態変化を評価する。ここで評価する生体の状態としてストレス状態またはリラックス状態が挙げられる。また、本実施形態の唾液測定方法は、生体に刺激を与える刺激付与工程を更に有するのが好適であり、この刺激付与工程において生体に与えられた刺激と当該刺激付与後の生体の状態または状態変化との間の相関を状態評価工程Ｓ５において評価するのも好適である。

刺激付与工程において生体に与える刺激としては、生体のストレス状態またはリラックス状態に影響を与える刺激、このような影響を与える可能性がある刺激、または、このような影響を調査したい刺激、等が挙げられる。具体的には、このような刺激として、触覚刺激（温度や痛み等）、聴覚刺激（音楽等）、嗅覚刺激（芳香や臭気等）、味覚刺激（調味料等）、視覚刺激（絵画等）が挙げられる。

次に、比較例と対比しつつ実施例の唾液測定方法について更に詳細に説明する。チオシアン酸イオンは、塩化鉄（III）（ＦｅＣｌ_３）と反応することで赤色を呈し、赤色域の波長４５０ｎｍの吸光度測定による定量が可能であることが知られている（非特許文献１参照）。以下では、このように酸化鉄を試薬として用いて波長４５０ｎｍの吸光度測定を行う方法を化学法といい、これを比較例とする。一方、実施例は、紫外域の波長２２７ｎｍの吸光度測定を行い、以下では、これをＵＶ法という。

チオシアン酸カリウム（ＫＳＣＮ）の濃度を０.５ｍＭ，１.０ｍＭ，２.０ｍＭおよび５.０ｍＭそれぞれに調整したＫＳＣＮ標準液を作製した。図２は、ＫＳＣＮ標準液の吸光度スペクトルを示す図である。化学法（比較例）およびＵＶ法（実施例）それぞれで、これらのＫＳＣＮ標準液を用いて吸光度を測定して、定量性を確認するとともに、検量線を作成した。

図３は、化学法の場合のＫＳＣＮ標準液の吸光度スペクトルを示す図である。図４は、ＵＶ法の場合のＫＳＣＮ標準液の吸光度スペクトルを示す図である。図５は、化学法の場合のＫＳＣＮ濃度と波長４５０ｎｍ吸光度との関係を示すグラフである。図６は、ＵＶ法の場合のＫＳＣＮ濃度と波長２２７ｎｍ吸光度との関係を示すグラフである。

これらの図から、化学法およびＵＶ法の何れにおいても、ＫＳＣＮ濃度と吸光度との間には良好な比例関係があり、吸光度に基づいてＫＳＣＮ濃度を定量性よく求めることができることが分かる。ＫＳＣＮ濃度をｘとし、吸光度をｙとすると、化学法の場合の検量線は下記（１）式で表され、ＵＶ法の場合の検量線は下記（２）式で表される。
ｙ＝０.２３６ｘ …（１）
ｙ＝０.１８２ｘ …（２）

４名の被験者Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄについて、３０分間のクレペリン検査によるストレス付加の前後の唾液中のチオシアン酸イオン濃度の変動測定を、化学法およびＵＶ法それぞれで行った。クレペリン検査は、単純な計算の繰り返しを一定時間に亘って被験者に課すものであり、被験者にストレスを与えることができる。クレペリン検査開始３０分前、クレペリン検査終了直後、クレペリン検査終了３０分後およびクレペリン検査終了６０分後それぞれで、被験者の唾液を採取し、化学法およびＵＶ法それぞれで吸光度を測定した。図７〜図１０は、被験者Ａ〜Ｄそれぞれのサンプルについて化学法による４５０ｎｍ吸光度とＵＶ法による２２７ｎｍ吸光度との関係を示すグラフである。これらの図から、化学法による４５０ｎｍ吸光度とＵＶ法による２２７ｎｍ吸光度との間に高い相関関係が認められる。

被験者Ａ〜Ｄそれぞれのサンプルについて、先に作成した検量線を用いて吸光度からチオシアン酸イオンの濃度を求めた。図１１は、被験者Ａ〜Ｄそれぞれのサンプルについて得られたチオシアン酸イオン推量濃度等を纏めた表である。この表に示されるように、ＵＶ法により得られたチオシアン酸イオンの推量濃度は、化学法により得られたチオシアン酸イオンの推量濃度と比較して大きな値となった。これは、唾液中の他成分（例えばアミノ酸やタンパク質）も紫外域に吸光特性を有していることが原因である。

ＵＶ法では、例えば以下のようにして、他成分による光吸収の影響を低減する為の補正処理を行って、より正確なチオシアン酸イオンの濃度を求める。各サンプルについて、化学法により得られたチオシアン酸イオンの推量濃度をＮ_１とし、これを真の値とする。また、ＵＶ法により得られたチオシアン酸イオンの推量濃度（補正前の濃度）をＮ_２とする。これらの濃度Ｎ_１，Ｎ_２に基づいて、下記（３）式により、各サンプル中の推定他成分寄与割合Ｒを求める。さらに、各被験者の４サンプルの推定他成分寄与割合Ｒの平均値Ｒ_ｍを求める。そして、ＵＶ法により得られたチオシアン酸イオンの推量濃度Ｎ_２および推定他成分寄与割合平均値Ｒ_ｍに基づいて、下記（４）式により補正をして、ＵＶ法によるチオシアン酸イオンの補正後推量濃度Ｎ_３を求める。
Ｒ＝100×(１−Ｎ_１／Ｎ_２) …（３）
Ｎ_３＝Ｎ_２×(１−Ｒ_ｍ／100) …（４）

図１１は、各被験者について、ＵＶ法検量線推量濃度Ｎ_２、化学法検量線推量濃度Ｎ_１、推定他成分割合Ｒ、推定他成分割合平均値Ｒ_ｍおよびＵＶ法計算ＳＣＮ⁻濃度Ｎ_３を示す。同図に示されるように、推定他成分割合平均値Ｒ_ｍは、１０％程度の個人差があるものの、凡そ８０％である。また、各被験者の４サンプルの間での推定他成分割合Ｒの大きな変動は認められない。そこで、以上の知見に基づいて、他成分割合を一律に８０％として、ＵＶ法により得られたチオシアン酸イオンの推量濃度Ｎ_２に対し、下記（５）式により補正をして、ＵＶ法計算ＳＣＮ⁻濃度Ｎ_４を求めてもよい。
Ｎ_４＝０.２×Ｎ_２ …（５）

図１２〜図１５は、被験者Ａ〜Ｄそれぞれのサンプルについて個人毎の推定他成分割合平均値Ｒ_ｍを用いて補正した場合のＵＶ法計算ＳＣＮ⁻濃度Ｎ_３の時間的変化を示すグラフである。図１６〜図１９は、被験者Ａ〜Ｄそれぞれのサンプルについて他成分割合を一律に８０％として補正した場合のＵＶ法計算ＳＣＮ⁻濃度Ｎ_４の時間的変化を示すグラフである。これらの図において、実線はＵＶ法計算ＳＣＮ⁻濃度Ｎ_３，Ｎ_４の時間的変化を示し、点線は化学法検量線推量濃度Ｎ_１の時間的変化を示す。これらの図に示されるように、個人毎の推定他成分割合平均値Ｒ_ｍを用いて補正した場合、および、他成分割合を一律に８０％として補正した場合の何れにおいても、ＵＶ法計算ＳＣＮ⁻濃度は化学法検量線推量濃度Ｎ_１と良く一致している。

上述したＵＶ法（実施例）では波長２２７ｎｍの紫外光を用いて唾液サンプルの吸光度を測定したが、本実施形態の唾液測定方法は、紫外域の他の波長の光を用いて吸光度を測定してもよい。図２０〜図２７は、ＵＶ法の場合のＫＳＣＮ濃度と各波長での吸光度との関係を示すグラフである。図２０は波長２６０ｎｍの場合を示す。図２１は波長２５０ｎｍの場合を示す。図２２は波長２４０ｎｍの場合を示す。図２３は波長２３０ｎｍの場合を示す。図２４は波長２２０ｎｍの場合を示す。図２５は波長２１０ｎｍの場合を示す。図２６は波長２００ｎｍの場合を示す。図２７は波長１９０ｎｍの場合を示す。なお、ＫＳＣＮ標準液の吸光度スペクトルは、図２に示したとおりである。ＵＶ法の場合のＫＳＣＮ濃度と波長２２７ｎｍ吸光度との関係を示すグラフは、図６に示したとおりである。これらの図から、波長範囲２１０〜２４０ｎｍにおいて吸光度に基づいてＫＳＣＮ濃度を定量性よく求めることができることが分かる。

図２８は、被験者Ａの４サンプルそれぞれの吸光度スペクトルを示す図である。図２９は、被験者Ａのサンプルの２２７ｎｍ吸光度と２２０〜２４０ｎｍ吸光度積算値との関係を示すグラフである。図３０は、被験者Ａのサンプルの２２７ｎｍ吸光度と２１７〜２３７ｎｍ吸光度積算値との関係を示すグラフである。図３１は、被験者Ａのサンプルの２２７ｎｍ吸光度と２２２ｎｍ吸光度との関係を示すグラフである。図３２は、被験者Ａのサンプルの２２７ｎｍ吸光度と２３２ｎｍ吸光度との関係を示すグラフである。これらの図から、本実施形態の唾液測定方法は、波長２２７ｎｍの吸光度でなく、例えば波長２２２ｎｍや波長２３２ｎｍの吸光度を測定してもよく、また、単一波長での吸光度でなく、例えば２２０〜２４０ｎｍや２１７〜２３７ｎｍの帯域での吸光度積算値を測定してもよいことが分かる。

これまで説明してきた実施例は、紫外域における生体の唾液サンプルの吸光度を測定し、この吸光度に基づいて唾液サンプル中のチオシアン酸イオンの濃度を求め、そして、このチオシアン酸イオン濃度に基づいて生体のストレス状態を評価するものであった。しかし、本実施形態の唾液測定方法は、チオシアン酸イオン濃度に基づいて生体のリラックス状態を評価することもできる。

生体のリラックス状態を評価する実施例では、クレペリン検査に替えて、被験者Ｅが好む芳香を１５分間に亘って該被験者Ｅに嗅がせた。芳香付与開始３０分前、芳香付与終了直後、芳香付与終了３０分後および芳香付与終了６０分後それぞれで、被験者Ｅの唾液を採取し、化学法およびＵＶ法それぞれで吸光度を測定して、検量線を用いて化学法検量線推量濃度Ｎ_１およびＵＶ法検量線推量濃度Ｎ_２を求めた。そして、上記（４）式，（５）式により、ＵＶ法計算ＳＣＮ⁻濃度Ｎ_３，Ｎ_４を求めた。

図３３は、被験者Ｅのサンプルについて推定他成分割合平均値Ｒ_ｍを用いて補正した場合のＵＶ法計算ＳＣＮ⁻濃度Ｎ_３の時間的変化を示すグラフである。図３４は、被験者Ｅのサンプルについて他成分割合を８０％として補正した場合のＵＶ法計算ＳＣＮ⁻濃度Ｎ_４の時間的変化を示すグラフである。これらの図において、実線はＵＶ法計算ＳＣＮ⁻濃度Ｎ_３，Ｎ_４の時間的変化を示し、点線は化学法検量線推量濃度Ｎ_１の時間的変化を示す。

これらの図に示されるように、個人毎の推定他成分割合平均値Ｒ_ｍを用いて補正した場合、および、他成分割合を一律に８０％として補正した場合の何れにおいても、ＵＶ法計算ＳＣＮ⁻濃度は化学法検量線推量濃度Ｎ_１と良く一致している。また、図１２〜図１９に示されるように、クレペリン検査によるストレス付加の後に被験者のＵＶ法計算ＳＣＮ⁻濃度が上昇したのに対し、図３３，図３４に示されるように、芳香付与により被験者をリラックスさせた後に被験者のＵＶ法計算ＳＣＮ⁻濃度が下降した。

このように、本実施形態の唾液測定方法は、紫外域における生体の唾液サンプルの吸光度を測定し、この吸光度に基づいて唾液サンプル中のチオシアン酸イオンの濃度を求めることで、このチオシアン酸イオン濃度に基づいて生体のストレス状態またはリラックス状態を評価することができる。

また、本実施形態の唾液測定方法は、生体に与えられた刺激と該生体の状態（ストレス状態、リラックス状態）または状態変化との間の相関を評価することもできる。以下では、被験者に刺激として痛みを与えたときの該被験者のストレス状態の変化を確認した実施例について説明する。

被験者への痛み付与の前後の唾液中のチオシアン酸イオン濃度の変動測定を、化学法およびＵＶ法それぞれで行った。被験者への痛み付与は、被験者の腕の一部を自分自身の指先で３０秒間に亘って強くつまむことにより行った。痛み付与３０分前、痛み付与直後、痛み付与３０分後および痛み付与６０分後それぞれで、被験者の唾液を採取し、化学法およびＵＶ法それぞれで吸光度を測定した。図３５は、痛みが付与された被験者のサンプルについて化学法による４５０ｎｍ吸光度とＵＶ法による２２７ｎｍ吸光度との関係を示すグラフである。この図から、被験者に刺激として痛みを与えた実施例においても、化学法による４５０ｎｍ吸光度とＵＶ法による２２７ｎｍ吸光度との間に高い相関関係が認められる。

この被験者のサンプルについて、先に作成した検量線を用いて吸光度からチオシアン酸イオンの濃度を求めた。図３６は、痛みが付与された被験者のサンプルについて得られたチオシアン酸イオン推量濃度等を纏めた表である。同図は、ＵＶ法による２２７ｎｍ吸光度に基づいて検量線により得られたＵＶ法検量線推量濃度Ｎ_２、化学法による４５０ｎｍ吸光度に基づいて検量線により得られた化学法検量線推量濃度Ｎ_１、上記（３）式により得られた各サンプル中の推定他成分割合Ｒ、４サンプルの推定他成分割合Ｒの平均値である推定他成分割合平均値Ｒ_ｍ、および、上記（４）式により得られたＵＶ法計算ＳＣＮ⁻濃度Ｎ_３を示す。

同図にも示されるように、被験者に刺激として痛みを与えた実施例においても、推定他成分割合平均値Ｒ_ｍは凡そ８０％であり、被験者の４サンプルの間での推定他成分割合Ｒの大きな変動は認められない。したがって、この実施例においても、他成分割合を一律に８０％として、ＵＶ法により得られたチオシアン酸イオンの推量濃度Ｎ_２に対し、上記（５）式により補正をして、ＵＶ法計算ＳＣＮ⁻濃度Ｎ_４を求めてもよい。

図３７は、痛みが付与された被験者のサンプルについて当該個人の推定他成分割合平均値Ｒ_ｍを用いて補正した場合のＵＶ法計算ＳＣＮ⁻濃度Ｎ_３の時間的変化を示すグラフである。図３８は、痛みが付与された被験者のサンプルについて他成分割合を８０％として補正した場合のＵＶ法計算ＳＣＮ⁻濃度Ｎ_４の時間的変化を示すグラフである。これらの図において、実線はＵＶ法計算ＳＣＮ⁻濃度Ｎ_３，Ｎ_４の時間的変化を示し、点線は化学法検量線推量濃度Ｎ_１の時間的変化を示す。これらの図に示されるように、被験者に刺激として痛みを与えた実施例においても、個人毎の推定他成分割合平均値Ｒ_ｍを用いて補正した場合、および、他成分割合を一律に８０％として補正した場合の何れにおいても、ＵＶ法計算ＳＣＮ⁻濃度は化学法検量線推量濃度Ｎ_１と良く一致している。

図３９は、痛みが付与された被験者の４サンプルそれぞれの吸光度スペクトルを示す図である。図４０は、痛みが付与された被験者のサンプルの２２７ｎｍ吸光度と２２０〜２４０ｎｍ吸光度積算値との関係を示すグラフである。図４１は、痛みが付与された被験者のサンプルの２２７ｎｍ吸光度と２１７〜２３７ｎｍ吸光度積算値との関係を示すグラフである。図４２は、痛みが付与された被験者のサンプルの２２７ｎｍ吸光度と２２２ｎｍ吸光度との関係を示すグラフである。図４３は、痛みが付与された被験者のサンプルの２２７ｎｍ吸光度と２３２ｎｍ吸光度との関係を示すグラフである。これらの図から、本実施形態の唾液測定方法は、生体に与えられた痛みと該生体のストレス状態との間の相関を評価する際にも、波長２２７ｎｍの吸光度でなく、例えば波長２２２ｎｍや波長２３２ｎｍの吸光度を測定してもよく、また、単一波長での吸光度でなく、例えば２２０〜２４０ｎｍや２１７〜２３７ｎｍの帯域での吸光度積算値を測定してもよいことが分かる。

以上のように、化学法（比較例）では唾液サンプルに試薬を加えて発色するまで一定時間（例えば１分間）に亘り待機する必要があるのに対して、本実施形態の唾液測定方法では、生体の唾液サンプルに試薬を加える必要がなく、より簡便かつ短時間で唾液サンプル中のチオシアン酸イオンの濃度を定量性よく測定することができる。本実施形態の唾液測定方法は、ベッドサイドのように生体の状態を評価したい時および場所で、何ら試薬を用いることなく、また、生体の負担が殆どなく、迅速かつ簡便に安価に生体の状態を評価することができる。本実施形態の唾液測定方法は、乳幼児や障害者などの自己の状態を的確に表現することができない者を対象とする場合や、動物を対象とする場合にも、適用可能である。

また、本実施形態の唾液測定方法は、得られたチオシアン酸イオンの濃度に基づいて、生体の状態（ストレス状態、リラックス状態）または状態変化を評価することができ、更には、生体に与えられた刺激と当該刺激付与後の該生体の状態または状態変化との間の相関を評価することもできる。本実施形態の唾液測定方法は、生体をストレス状態とする刺激の低減に貢献することができ、生体をリラックス状態とする刺激（または、ストレス状態を緩和する刺激）の向上に貢献することもできる。本実施形態の唾液測定方法は、例えば、生体の痛みの程度の評価、生体の痛みを低減する鎮痛剤の適切な選択や開発、及び薬効評価に貢献することが期待され、また、生体のストレス状態を緩和させる又はリラックス状態とする機器，音楽および香粧品など幅広い分野の癒し商品の開発に貢献することも期待される。

Claims

生体の唾液を採取して唾液サンプルとする唾液採取工程と、
紫外域における前記唾液サンプルの吸光度を測定する吸光度測定工程と、
前記吸光度に基づいて前記唾液サンプル中のチオシアン酸イオンの濃度を求める濃度算出工程と、
を有する唾液測定方法。
前記濃度算出工程において求められたチオシアン酸イオンの濃度に基づいて前記生体の状態または状態変化を評価する状態評価工程を更に有する、請求項１に記載の唾液測定方法。
前記状態評価工程において、前記生体のストレス状態もしくはリラックス状態またはこれらの状態の変化を評価する、請求項２に記載の唾液測定方法。
前記生体に刺激を与える刺激付与工程を更に有し、
前記刺激付与工程において前記生体に与えられた刺激と当該刺激付与後の前記生体の状態または状態変化との間の相関を前記状態評価工程において評価する、
請求項２または３に記載の唾液測定方法。
前記刺激付与工程において前記刺激として痛みを前記生体に与える、請求項４に記載の唾液測定方法。