JP2019066291A - Method for identifying plant species of licorice - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、マメ科カンゾウ属に属する植物の種を同定する方法に関する。 The present invention relates to a method for identifying the species of plants belonging to the leguminous lichen genus.
マメ科カンゾウ属には、多数の植物種が属する。カンゾウ属に属する代表的な植物として、グリチルリーザ・グラブラ（Glycyrrhiza glabra）、グリチルリーザ・インフラータ（Glycyrrhiza inflata）、グリチルリーザ・ウラレンシス（Glycyrrhiza uralensis）等が知られている。カンゾウ属に属する植物の抽出物は、抗炎症作用、抗酸化作用、抗菌作用等の生理活性を有するとともに、甘味を呈することから、医薬品、化粧品、食品等に添加される添加材料として広く用いられている。 Many plant species belong to the genus Leguminosae. As representative plants belonging to the licorice genus, Glycyrrhiza glabra, Glycyrrhiza inflata, Glycyrrhiza uralensis, etc. are known. Extracts of plants belonging to the genus licorice have physiological activities such as anti-inflammatory action, anti-oxidative action and antibacterial action and exhibit sweet taste, so they are widely used as additive materials to be added to pharmaceuticals, cosmetics, food etc. ing.
カンゾウ属に属する植物からの抽出物が有する生理活性は、例えば植物種に応じて異なる場合がある。また、複数の植物種からの抽出物が同一の生理活性を示すとしても、その生理活性の強さが植物種に応じて異なる場合もある。そのため、目的とする生理活性が効果的に奏されるカンゾウ抽出物を得るために、当該生理活性を効果的に奏し得る特定の植物種を抽出原料として用いて抽出物を取得するのが望ましい。しかしながら、抽出原料としてのカンゾウの根茎部等の外観から植物種を同定することは極めて困難であるため、カンゾウ属に属する植物種を正確に同定する方法が求められている。 The physiological activity possessed by the extract from a plant belonging to the genus licorice may differ depending on, for example, the plant species. In addition, even if extracts from a plurality of plant species show the same physiological activity, the strength of the physiological activity may differ depending on the plant species. Therefore, in order to obtain a licorice extract in which the target physiological activity is exhibited effectively, it is desirable to obtain an extract using a specific plant species that can effectively exhibit the physiological activity as an extraction raw material. However, since it is extremely difficult to identify a plant species from the appearance of the rhizome and the like of licorice as a raw material for extraction, a method for accurately identifying a plant species belonging to licorice is required.
従来、植物種を同定する方法として、代謝酸物を含む抽出物を同定対象の植物種から取得し、当該抽出物に含まれる代謝産物と植物種を同定するための同定マーカーとを比較し、その比較結果に基づいて植物種を同定する方法等が知られている（特許文献１参照）。 Conventionally, as a method for identifying a plant species, an extract containing a metabolic acid is obtained from the plant species to be identified, and the metabolite contained in the extract is compared with an identification marker for identifying the plant species, A method etc. which identify a plant species based on the comparison result are known (refer to patent documents 1).
上記特許文献１に記載の方法においては、２種以上の植物種の混合物の抽出物が、同定マーカーと合致する代謝産物を含むか否かを検索し、その代謝産物を質量分析法等により定量する。そして、同定マーカーと合致する代謝産物の蓄積量が統計学的に有意に多い場合、その植物種が同定マーカーに対応する種であると同定することができる。
In the method described in
しかしながら、マメ科カンゾウ属に属する植物種においては、抽出物中に含まれる植物種に特有の成分に基づき質量分析法等を用いてその含有量を定量したり、それにより種を同定したりすることは、抽出物中に含まれる夾雑物の影響が大きいため、非常に困難である。 However, in the plant species belonging to the leguminous licorice genus, the content is quantified using mass spectrometry etc. based on the components specific to the plant species contained in the extract, and the species is identified thereby. That is very difficult because of the large influence of the contaminants contained in the extract.
上記課題に鑑みて、本発明は、マメ科カンゾウ属に属する植物種を簡便に、かつ正確に同定する方法を提供することを目的とする。 In view of the above problems, the present invention aims to provide a method for easily and accurately identifying a plant species belonging to the leguminous lichen genus.
上記課題を解決するため、本発明は、マメ科カンゾウ属に属する植物の抽出物を得る抽出物取得工程と、前記抽出物を精製して精製物を得る精製物取得工程と、前記精製物のＮＭＲ測定を行い、ＮＭＲデータを取得するＮＭＲ測定工程と、前記ＮＭＲデータに基づいて多変量解析処理を行う解析工程と、前記解析結果に基づいて前記植物の種を同定する同定工程とを含み、前記精製物取得工程において、前記抽出物に固相抽出処理を施し、所定濃度の低級アルコール水溶液にて溶出させた画分を前記精製物として得ることを特徴とするカンゾウの植物種の同定方法を提供する。 In order to solve the above problems, the present invention provides an extract obtaining step of obtaining an extract of a plant belonging to the leguminous licorice genus, a purified product obtaining step of purifying the extract to obtain a purified product, and the purified product NMR measurement process of performing NMR measurement and acquiring NMR data, an analysis process of performing multivariate analysis processing based on the NMR data, and an identification process of identifying the species of the plant based on the analysis result, In the purified product acquisition step, the extract is subjected to solid-phase extraction treatment, and a fraction eluted with a lower alcohol aqueous solution of a predetermined concentration is obtained as the purified product, thereby obtaining a plant species identification of licorice provide.
前記低級アルコール水溶液の濃度が、３０〜９９容量％であるのが好ましく、５０〜８０容量％であることがより好ましい。前記カンゾウ属に属する植物が、グリチルリーザ・グラブラ（Glycyrrhiza glabra）、グリチルリーザ・インフラータ（Glycyrrhiza inflata）又はグリチルリーザ・ウラレンシス（Glycyrrhiza uralensis）であることが好ましい。 The concentration of the lower alcohol aqueous solution is preferably 30 to 99% by volume, and more preferably 50 to 80% by volume. It is preferable that the plant belonging to the licorice genus is Glycyrrhiza glabra, Glycyrrhiza inflata, or Glycyrrhiza uralensis.
前記解析工程において、前記ＮＭＲデータに主成分分析処理を施して、主成分スコアを算出するのが好ましく、前記同定工程において、前記主成分スコアに基づいて、前記植物の種を同定するのが好ましい。 In the analysis step, the NMR data is preferably subjected to principal component analysis to calculate a principal component score, and in the identification step, it is preferable to identify the species of the plant based on the principal component score. .
本発明によれば、マメ科カンゾウ属に属する植物種を簡便に、かつ正確に同定する方法を提供することができる。 According to the present invention, it is possible to provide a method for easily and accurately identifying plant species belonging to the leguminous lichen genus.
本発明の実施の形態について詳細に説明する。
本実施形態に係るカンゾウ種を同定する方法は、マメ科カンゾウ属に属する植物の抽出物を得る抽出物取得工程と、当該抽出物を精製して精製物を得る精製物取得工程と、当該精製物のＮＭＲ測定を行い、ＮＭＲデータを取得するＮＭＲ測定工程と、ＮＭＲデータに基づいて多変量解析処理を行う解析工程と、多変量解析処理の解析結果に基づいて植物の種を同定する同定工程とを含む。
なお、本明細書において「種」とは、生物分類学上の種を意味するものとし、種の下位概念である亜種、品種等も含むものである。
An embodiment of the present invention will be described in detail.
The method for identifying a lichen species according to the present embodiment includes an extract obtaining step of obtaining an extract of a plant belonging to the leguminous lichen genus, a purified product obtaining step of purifying the extract to obtain a purified product, and the purification NMR measurement of the product, NMR measurement process for acquiring NMR data, analysis process for multivariate analysis processing based on NMR data, identification process for identifying plant species based on analysis result of multivariate analysis process And.
In the present specification, the term "species" is intended to mean taxonomically classified species, and includes subspecies, varieties and the like which are subordinate concepts of species.
〔抽出物取得工程（Ｓ１）〕
同定対象であるマメ科カンゾウ属に属する植物を準備し、その抽出物を取得する。本実施形態における「抽出物」には、植物を抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はそれらの粗精製物等が含まれる。
[Extract Acquisition Step (S1)]
Prepare a plant belonging to the leguminous licorice genus to be identified and obtain its extract. In the “extract” in the present embodiment, an extract obtained by using a plant as an extraction raw material, a diluted solution or a concentrate of the extract, a dried product obtained by drying the extract, or a crudely purified product thereof Is included.
マメ科カンゾウ属に属する植物は、多年生草本であり、当該植物としては、例えば、グリチルリーザ・グラブラ（Glychyrrhiza glabra）、グリチルリーザ・インフラータ（Glychyrrhiza inflata）、グリチルリーザ・ウラレンシス（Glychyrrhiza uralensis）、グリチルリーザ・アスペラ（Glychyrrhiza aspera）、グリチルリーザ・ユーリカルパ（Glychyrrhiza eurycarpa）、グリチルリーザ・パリディフロラ（Glychyrrhiza pallidiflora）、グリチルリーザ・ユンナネンシス（Glychyrrhiza yunnanensis）、グリチルリーザ・レピドタ（Glychyrrhiza lepidota）、グリチルリーザ・エキナタ（Glychyrrhiza echinata）、グリチルリーザ・アカンソカルパ（Glychyrrhiza acanthocarpa）等の種が存在する。これらのうち、グリチルリーザ・グラブラ（Glychyrrhiza glabra）、グリチルリーザ・インフラータ（Glychyrrhiza inflata）及びグリチルリーザ・ウラレンシス（Glychyrrhiza uralensis）は、それらの植物種に含まれる代表的な成分が既知であり、また化粧品、食品等の添加材料や生薬として広く用いられているため、同定対象の植物として好適である。同定対象の植物は、上記各種の植物のうちから選択される１種であってもよいし、２種以上の混合物であってもよい。好ましくは、同定対象の植物は、グリチルリーザ・グラブラ（Glychyrrhiza glabra）、グリチルリーザ・インフラータ（Glychyrrhiza inflata）及びグリチルリーザ・ウラレンシス（Glychyrrhiza uralensis）のうちの１種である。 The plant belonging to the genus Leguminosae is a perennial herb, and examples of such plants include Glychyrrhiza glabra, Glychyrrhiza inflata, Glychyrrhiza uralensis, and Glychilla aspera (Glychyrrhiza). Aspera), Glychyrrhiza eurycarpa, Glychyrrhiza pallidiflora, Glychyrrhiza yunnanensis, Glychyrrhiza lepidatum citilite, Gilichilatichilatio, Gilichaluchichi, Dilachi, Giltechilatum, Glitchi There are species such as Among these, Glycyrrhiza glabra, Glycyrrhiza inflata, and Glycyrrhiza uralensis are known representative components contained in their plant species, and also cosmetics, foods, etc. Because they are widely used as additive materials and herbal medicines, they are suitable as plants to be identified. The plant to be identified may be one selected from the above-mentioned various plants, or a mixture of two or more. Preferably, the plant to be identified is one of Glychyrrhiza glabra, Glychyrrhiza inflata and Glychyrrhiza uralensis.
本実施形態において、抽出原料として使用されるカンゾウの構成部位としては、例えば、葉部、茎部等の地上部；根茎部等が使用され得る。好ましくは、当該構成部位として、根茎部が使用され得る。 In the present embodiment, as a component part of licorice used as an extraction raw material, for example, an above-ground part such as a leaf part or a stem part; a rhizome part or the like may be used. Preferably, a rhizome can be used as the said structure part.
マメ科カンゾウ属に属する植物の抽出物は、天然物の抽出に一般に使用されている抽出方法によって取得され得る。例えば、抽出原料を乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより、上記抽出物が取得される。抽出原料の乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒を用いて脱脂等の前処理が施されたものを抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理が行われた抽出原料が使用されることで、上記植物の抽出処理を効率的に行うことができる。 Extracts of plants belonging to the leguminous licorice genus can be obtained by extraction methods generally used for extraction of natural products. For example, after the extraction raw material is dried, it is crushed as it is or using a crusher, and the extract is obtained by extraction using an extraction solvent. Drying of the raw material for extraction may be performed in the sun or may be performed using a commonly used dryer. Moreover, you may use what was pre-processed by degreasing etc. using nonpolar solvents, such as hexane, as an extraction raw material. The extraction process of the said plant can be performed efficiently by using the extraction raw material to which pre-processing, such as defatting, was performed.
抽出溶媒としては、例えば、水、親水性有機溶媒等の極性溶媒を使用するのが好ましく、特に親水性有機溶媒を使用するのが好ましい。これらの抽出溶媒は、単独で又は２種以上を組み合わせて使用されてもよく、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用され得る。 As the extraction solvent, for example, polar solvents such as water and hydrophilic organic solvents are preferably used, and in particular, hydrophilic organic solvents are preferably used. These extraction solvents may be used alone or in combination of two or more, and may be used at room temperature or at a temperature below the boiling point of the solvent.
抽出溶媒として使用され得る水には、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理が施されたものが含まれる。水に施される処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が挙げられる。したがって、本実施形態において抽出溶媒として使用され得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等が含まれ得る。 Examples of water that can be used as an extraction solvent include pure water, tap water, well water, mineral water, mineral water, hot spring water, spring water, fresh water and the like, as well as those subjected to various treatments. Examples of treatments applied to water include purification, heating, sterilization, filtration, ion exchange, adjustment of osmotic pressure, buffering and the like. Therefore, water that can be used as an extraction solvent in the present embodiment may include purified water, hot water, ion-exchanged water, saline, phosphate buffer, phosphate buffered saline and the like.
抽出溶媒として使用され得る親水性有機溶媒には、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が含まれ得る。 Examples of hydrophilic organic solvents that can be used as extraction solvents include lower aliphatic alcohols having 1 to 5 carbon atoms such as methanol, ethanol, propyl alcohol and isopropyl alcohol; lower aliphatic ketones such as acetone and methyl ethyl ketone; 1,3-butylene It may include C2-C5 polyhydric alcohol such as glycol, propylene glycol and glycerin.
２種以上の極性溶媒の混合液が抽出溶媒として使用される場合、その混合比は適宜調整され得る。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液が抽出溶媒として使用される場合には、水と低級脂肪族アルコールとの混合比（容量基準）を９：１〜１：９とすればよく、７：３〜１：９とするのが好ましく、５：５〜１：９とするのが特に好ましい。また、水と低級脂肪族ケトンとの混合液が抽出溶媒として使用される場合には、水と低級脂肪族ケトンとの混合比（容量基準）を９：１〜２：８とするのが好ましい。さらに、水と多価アルコールとの混合液が抽出溶媒として使用される場合には、水と多価アルコールとの混合比（容量基準）を５：５〜１：９とするのが好ましい。 When a mixture of two or more polar solvents is used as an extraction solvent, the mixing ratio may be appropriately adjusted. For example, when a mixture of water and lower aliphatic alcohol is used as an extraction solvent, the mixing ratio (by volume) of water to lower aliphatic alcohol may be 9: 1 to 1: 9, It is preferable to set it as 7: 3 to 1: 9, and it is especially preferable to set it as 5: 5 to 1: 9. When a mixture of water and lower aliphatic ketone is used as an extraction solvent, it is preferable to set the mixing ratio (based on volume) of water and lower aliphatic ketone to 9: 1 to 2: 8. . Furthermore, when the liquid mixture of water and polyhydric alcohol is used as an extraction solvent, it is preferable to set the mixing ratio (volume basis) of water and polyhydric alcohol to 5: 5 to 1: 9.
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限りにおいて特に制限されるものではなく、常法に従って行われ得る。例えば、抽出原料の５〜１５倍量（質量基準）の抽出溶媒に抽出原料を浸漬させ、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液から溶媒を留去するとペースト状の濃縮物が得られ、この濃縮物をさらに乾燥すると乾燥物が得られる。 The extraction process is not particularly limited as long as soluble components contained in the extraction material can be eluted into the extraction solvent, and may be performed according to a conventional method. For example, the extraction raw material is immersed in an extraction solvent of 5 to 15 times the amount (based on mass) of the extraction raw material, and after extracting soluble components under normal temperature or reflux heating, the extract is filtered to remove the extraction residue. You can get The solvent is distilled off from the obtained extract to obtain a paste-like concentrate, and the concentrate is further dried to obtain a dried product.
〔精製物取得工程（Ｓ２）〕
上記のようにして取得された抽出物に固相抽出処理を施して精製することで、精製物を取得する。後述するように、本実施形態に係る同定方法においては、ＮＭＲスペクトルデータを多変量解析処理に供することで算出されたＰＣＡスコアに基づいて、カンゾウの植物種を同定する。上記のようにして取得された抽出物には、カンゾウの植物種に代表的な成分が含まれるものの、当該抽出物をＮＭＲ測定に付すると、当該代表的な成分以外の成分（夾雑物）を示すＮＭＲスペクトルの影響により、カンゾウの植物種を正確に同定することが困難となるおそれがある。しかしながら、本実施形態のように、上記抽出物に固相抽出処理を施して取得した精製物についてＮＭＲ測定を行うことで、上記代表的な成分以外の成分（夾雑物）を示すＮＭＲスペクトルの影響を最小限にすることができるため、カンゾウの植物種を正確に同定することができる。
[Purified product acquisition process (S2)]
The extract obtained as described above is subjected to solid phase extraction treatment and purified to obtain a purified product. As described later, in the identification method according to the present embodiment, the plant species of licorice is identified based on the PCA score calculated by subjecting the NMR spectrum data to multivariate analysis processing. Although the extract obtained as described above contains components representative of plant species of licorice, when the extract is subjected to NMR measurement, components other than the representative components (contaminants) Due to the influence of the NMR spectrum shown, it may be difficult to accurately identify plant species of licorice. However, as in the present embodiment, by performing NMR measurement on the purified product obtained by subjecting the extract to the solid phase extraction treatment, the influence of the NMR spectrum showing components (contaminants) other than the above representative components The plant species of licorice can be identified accurately because
固相抽出処理としては、例えば、予め固定相が充填されたカラムを用いて当該カラムに抽出物を通液させるカラム法、抽出物を含む溶液に固定相を添加するバッチ法等が挙げられるが、いずれの方法が使用されてもよい。上記固相抽出処理に使用され得るカラムとしては、例えば、Ｓｅｐ−Ｐａｋシリーズ（Ｗａｔｅｒｓ社製）、ＯＡＳＩＳシリーズ（Ｗａｔｅｒｓ社製）、ＩｎｅｒｔＳｅｐシリーズ（ジーエルサイエンス社製）、Ｓｔｒａｔａシリーズ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ社製）、ＢｏｎｄＥｌｕｔシリーズ（アジレント・テクノロジー社製）等が挙げられる。 Examples of the solid phase extraction treatment include a column method in which the extract is passed through the column using a column filled with a stationary phase in advance, and a batch method in which the stationary phase is added to a solution containing the extract. Any method may be used. Examples of columns that can be used for the above solid phase extraction process include Sep-Pak series (manufactured by Waters), OASIS series (manufactured by Waters), InertSep series (manufactured by GL Sciences), Strata series (manufactured by Phenomenex), Examples include BondElut series (manufactured by Agilent Technologies).
上記固相抽出処理において抽出物を固定相に接触させることで、抽出物に含まれる各種成分を固定相に保持させ、当該固定相に保持されている各種成分を所定の溶出液にて溶出させ、上記精製物としての溶出画分を得る。目的とする精製物（溶出画分）を得るための溶出液としては、例えば、所定濃度の低級アルコール水溶液が使用され得る。低級アルコールとしては、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール等が挙げられる。低級アルコール水溶液の濃度は、３０容量％以上であるのが好ましく、５０〜８０容量％であるのがより好ましい。低級アルコール水溶液の濃度が３０容量％以上、特に５０容量％以上であることで、溶出画分に含まれる所定の成分を指標として、カンゾウの植物種を容易に同定することができる。後述する実施例等から明らかなように、例えば、メタノール抽出物の５０容量％メタノール水溶液により溶出された溶出画分には、カンゾウの植物種に代表的な水溶性フラボノイド類が含まれる。また、メタノール抽出物の８０容量％メタノール水溶液により溶出された溶出画分には、グリチルリーザ・グラブラ（Glychyrrhiza glabra）の代表的成分としてのグラブリジン（Glabridin）、グリチルリーザ・インフラータ（Glychyrrhiza inflata）の代表的成分としてのリコカルコンＡ（licochalcone A）、グリチルリーザ・ウラレンシス（Glychyrrhiza uralensis）の代表的成分としてのグリシクマリン（glycycoumarin）等の脂溶性フラボノイド類、グリチルリーザ・グラブラ（Glychyrrhiza glabra）の代表的成分としてのグリチルリチン酸（Glycyrrhizin）、グリチルリーザ・インフラータ（Glychyrrhiza inflata）の代表的成分としてのリコリスサポニンＨ２（Licorice-saponin H2）、グリチルリーザ・ウラレンシス（Glychyrrhiza uralensis）の代表的成分としてのリコリスサポニンＧ２（Licorice-saponin G2）等サポニン類等が含まれ得る。なお、本実施形態においてカンゾウの植物種を正確に同定するためには、上記のようにして得られる精製物（溶出画分）に、カンゾウの植物種を同定するための指標となる代表的成分が主に含まれ、その他の成分（交雑物）が可能な限り含まれていないのが望ましい。したがって、所定濃度（例えば５０〜８０容量％）の低級アルコール水溶液の溶出画分を取得するのに先立ち、それよりも低濃度（例えば０〜３０容量％）の低級アルコール水溶液を溶出液として用い、その他の成分（交雑物）を溶出させておくのが好ましい。 By bringing the extract into contact with the stationary phase in the solid phase extraction treatment, the various components contained in the extract are retained on the stationary phase, and the various components retained on the stationary phase are eluted with a predetermined elution solution. , The eluted fraction as the above-mentioned purified product is obtained. For example, a lower alcohol aqueous solution having a predetermined concentration may be used as an elution solution for obtaining a target purified product (elution fraction). Examples of the lower alcohol include lower aliphatic alcohols having 1 to 5 carbon atoms such as methanol, ethanol, propyl alcohol and isopropyl alcohol. The concentration of the lower alcohol aqueous solution is preferably 30% by volume or more, and more preferably 50 to 80% by volume. When the concentration of the lower alcohol aqueous solution is 30% by volume or more, particularly 50% by volume or more, the plant species of licorice can be easily identified using the predetermined component contained in the eluted fraction as an index. As is clear from the examples and the like described later, for example, the elution fraction eluted with a 50% by volume aqueous methanol solution of a methanol extract contains water-soluble flavonoids representative of plant species of licorice. In addition, in the eluted fraction eluted with 80% by volume aqueous methanol solution of methanol extract, glabridin as a typical component of glycyrrhiza glabra (Glychyrrhiza glabra), a typical component of glycyrrhiza inflata (glychyrrhiza inflata) Fat-soluble flavonoids such as glycycomarin as representative components of lycochalcone A and glycyrrhiza uralensis as glycyrrhizin as a representative component of glycyrrhiza glabra glycyrrhizin as a typical component ), Licorice saponin H2 (Licorice-saponin H2) as a representative component of Glycyrrhiza inflata, Licolys saponin G2 (Licoric as a representative component of Glycyrrhiza uralensis) e-saponin G2) saponins etc. may be included. In the present embodiment, in order to accurately identify the plant species of licorice, the purified product (eluted fraction) obtained as described above is a representative component serving as an index for identifying the plant species of licorice Is mainly contained, and it is desirable not to contain other components (crosses) as much as possible. Therefore, prior to obtaining the elution fraction of the lower alcohol aqueous solution having a predetermined concentration (for example, 50 to 80% by volume), a lower alcohol aqueous solution having a lower concentration (for example, 0 to 30% by volume) is used as an eluent. It is preferable to elute other components (hybrids).
〔ＮＭＲ測定工程（Ｓ３）〕
上記精製物取得工程により取得された溶出画分（例えば、５０〜８０容量％の低級アルコール水溶液により溶出された溶出画分）を重溶媒（ＤＭＳＯ−ｄ6、メタノール−ｄ4、ピリジン−ｄ5、アセトン−ｄ6、重水−ｄ2等）に溶解させて、ＮＭＲ測定用のサンプル溶液を調製する。そして、当該サンプル溶液を1Ｈ−ＮＭＲ測定に供し、ＮＭＲスペクトルデータを取得する。本実施形態においては、上記精製物（溶出画分）をＮＭＲ測定に供し、得られたＮＭＲスペクトルデータを後述する解析工程（Ｓ４）に供し、多変量解析を行う。一般に、植物抽出物に含まれる各種成分を同定する方法として、液体クロマトグラフィー質量分析法（ＬＣ／ＭＳ）が用いられるが、本発明者らが鋭意検討した結果、ＬＣ／ＭＳを用いたとしても、カンゾウの植物種を同定するのが困難であった。しかしながら、本実施形態のように、上記精製物のＮＭＲ測定により得られたＮＭＲスペクトルデータを用いて多変量解析を行うことで、後述する実施例からも明らかなように、カンゾウの植物種を正確に同定することができる。
[NMR measurement step (S3)]
The eluted fraction (for example, the eluted fraction eluted with 50 to 80% by volume of a lower alcohol aqueous solution) obtained by the above-mentioned purified product obtaining step is used as a heavy solvent (DMSO-d 6 , methanol-d 4 , pyridine-d 5) , Acetone-d 6 , heavy water-d 2 etc.) to prepare a sample solution for NMR measurement. Then, the sample solution is subjected to 1 H-NMR measurement to acquire NMR spectrum data. In the present embodiment, the purified product (eluted fraction) is subjected to NMR measurement, and the obtained NMR spectrum data is subjected to an analysis step (S4) described later to perform multivariate analysis. In general, liquid chromatography-mass spectrometry (LC / MS) is used as a method for identifying various components contained in plant extracts, but as a result of intensive studies by the present inventors, even if LC / MS is used. , It was difficult to identify plant species of licorice. However, as in the present embodiment, by performing multivariate analysis using NMR spectrum data obtained by NMR measurement of the above-mentioned purified product, plant species of licorice can be accurately determined as is apparent from the examples described later. Can be identified.
ＮＭＲの測定条件（測定パラメータ等）は、特に限定されるものではなく、例えば、所定濃度（３０容量％以上）の低級アルコール水溶液による溶出画分に含まれるカンゾウ種の代表的な成分を有意に検出可能な範囲で適宜設定されればよい。 The measurement conditions (measurement parameters and the like) of NMR are not particularly limited, and, for example, the representative components of licorice species contained in the elution fraction of a lower alcohol aqueous solution of a predetermined concentration (30% by volume or more) It may be appropriately set within the detectable range.
〔解析工程（Ｓ４）〕
上記ＮＭＲ測定工程により取得されたＮＭＲスペクトルデータを、バケット積分により、データ量のより小さいＮＭＲのヒストグラムデータに縮約する。バケット積分は、ＮＭＲスペクトルデータのケミカルシフト軸（周波数軸）に沿った観測範囲を一定幅（典型的には０．０４ｐｐｍ）の刻みで多数のバケット（ケミカルシフトの小区間）に分割して、各パケットのＮＭＲスペクトルの強度の積分を行う処理である。その結果として、多数のバケットの積分値のセットからなるヒストグラムが、ＮＭＲスペクトルデータの縮約として得られる。バケット積分は、例えば、ＮＭＲ処理ソフト（例えば、ＡＬＩＣＥ２ ｆｏｒ Ｍｅｔａｂｏｌｏｍｅ，日本電子社製等）等を用いて行われ得る。
[Analysis process (S4)]
The NMR spectrum data acquired by the above-mentioned NMR measurement step is reduced to smaller histogram data of NMR by bucket integration. The bucket integration divides the observation range along the chemical shift axis (frequency axis) of NMR spectrum data into a large number of buckets (small sections of chemical shift) in steps of a constant width (typically 0.04 ppm). It is a process which integrates the intensity of the NMR spectrum of each packet. As a result, a histogram consisting of a set of integral values of multiple buckets is obtained as a contraction of the NMR spectral data. The bucket integration can be performed using, for example, NMR processing software (for example, ALICE2 for Metabolome, manufactured by Nippon Denshi Co., Ltd., etc.).
このようにして得られたヒストグラムデータが多変量解析処理に供せられる。多変量解析の具体的手法としては、例えば、主成分（ＰＣＡ）分析、ＳＩＭＣＡ（Soft Independent Modeling of Class Analogy）分析等が挙げられ、特に主成分（ＰＣＡ）分析が好ましい。主成分（ＰＣＡ）分析においては、サンプルの成分である多数の変数の座標軸からなる多次元空間中で、サンプル間の相違（分散）が最も顕著に現われる少数本（例えば３本程度）の新しい座標軸が定義され、新しい座標軸上での各サンプルの座標値が計算される。新しい座標軸は「主成分軸」と称され、各主成分軸に沿った変数は「主成分」と称され、各サンプルの各主成分軸上の座標値は「スコア」と称される。本実施形態において、上記溶出画分のＮＭＲ測定により取得されたＮＭＲスペクトルデータをバケット積分し、得られたヒストグラムデータを主成分分析に供することで、カンゾウの植物種に含まれる代表的成分のＰＣＡスコアを算出する。なお、多変量解析処理もまた、例えば、ＮＭＲ処理ソフト（例えば、ＡＬＩＣＥ２ ｆｏｒ Ｍｅｔａｂｏｌｏｍｅ，日本電子社製等）等を用いて行われ得る。 The histogram data obtained in this manner is subjected to multivariate analysis processing. Specific methods of multivariate analysis include, for example, principal component (PCA) analysis, SIMCA (Soft Independent Modeling of Class Analogy) analysis and the like, and principal component (PCA) analysis is particularly preferable. In principal component (PCA) analysis, in a multi-dimensional space consisting of coordinate axes of multiple variables that are components of samples, a small number (for example, three or so) of new coordinate axes in which differences between samples are most noticeable Are defined and coordinate values of each sample on the new coordinate axes are calculated. The new coordinate axes are called "principal component axes", the variables along each principal component axis are called "principal components", and the coordinate values on each principal component axis of each sample are called "scores". In the present embodiment, bucket integration of NMR spectrum data obtained by NMR measurement of the eluted fraction is performed, and the obtained histogram data is subjected to principal component analysis to obtain PCA of a representative component contained in licorice plant species. Calculate the score. The multivariate analysis processing may also be performed using, for example, NMR processing software (for example, ALICE2 for Metabolism, manufactured by Nippon Denshi Co., Ltd., etc.).
〔同定工程（Ｓ５）〕
上記のようにして算出されたＰＣＡスコアに基づいて、カンゾウの植物種を同定する。カンゾウの植物種に含まれる代表的成分のＰＣＡスコアは、各植物種において異なる。したがって、予め、カンゾウの各植物種に含まれる代表的成分のＰＣＡスコアを求めておき、上記解析工程（Ｓ４）にて算出されたＰＣＡスコアと、予め求めておいたカンゾウの各植物種のＰＣＡスコアとを対比することで、カンゾウの植物種を正確に同定することができる。
[Identification step (S5)]
The plant species of licorice is identified based on the PCA score calculated as described above. The PCA scores of representative components contained in licorice plant species differ in each plant species. Therefore, the PCA score of representative components contained in each plant species of licorice is obtained in advance, and the PCA score calculated in the analysis step (S4) and the PCA of each plant species of licorice previously determined. By contrasting with the score, plant species of licorice can be identified accurately.
例えば、後述する実施例からも明らかであるが、精製物取得工程（Ｓ２）において５０〜８０容量％低級アルコール水溶液を溶出液として用い、水抽出物又はメタノール抽出物から得られた溶出画分に主成分分析を実施すると、ローディングプロット上において、各植物種の代表的成分である水溶性フラボノイド類、脂溶性フラボノイド類、サポニン類等がＮＭＲチャートのケミカルシフト値に対応してプロットされる。そして、ＰＣＡスコアプロットを確認することで、各々の植物種を分類することができる。したがって、植物種が未知であるマメ科カンゾウ属に属する植物について、上記のようにしてＰＣＡスコアを求めることで、その植物種を簡便に、かつ正確に同定することができる。 For example, as apparent from the examples described later, in the purified product acquisition step (S2), using a 50 to 80% by volume lower alcohol aqueous solution as an eluent, the elution fraction obtained from the water extract or methanol extract is used. When the principal component analysis is carried out, water-soluble flavonoids, fat-soluble flavonoids, saponins and the like which are typical components of each plant species are plotted on the loading plot in correspondence with the chemical shift values of the NMR chart. And each plant species can be classified by confirming a PCA score plot. Therefore, the plant species can be identified simply and accurately by obtaining the PCA score as described above for a plant belonging to the leguminous genus Lembe with unknown plant species.
上述したように、本実施形態によれば、同定対象であるカンゾウの抽出物を固相抽出処理により精製した精製物をＮＭＲ測定に供し、得られたＮＭＲスペクトルデータを多変量解析処理に供することで、カンゾウの植物種を簡便に、かつ正確に同定することができる。 As described above, according to the present embodiment, the purified product obtained by purifying the extract of licorice to be identified by the solid phase extraction process is subjected to NMR measurement, and the obtained NMR spectrum data is subjected to the multivariate analysis process. Thus, the plant species of licorice can be identified simply and accurately.
以上説明した実施形態は、本発明の理解を容易にするために記載されたものであって、本発明を限定するために記載されたものではない。したがって、上記実施形態に開示された各要素は、本発明の技術的範囲に属する全ての設計変更や均等物をも含む趣旨である。 The embodiments described above are described to facilitate the understanding of the present invention, and are not described to limit the present invention. Therefore, each element disclosed in the above embodiment is intended to include all design changes and equivalents that fall within the technical scope of the present invention.
以下、試験例等を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は下記の試験例等に何ら限定されるものではない。 Hereinafter, the present invention will be described in more detail by way of test examples and the like, but the present invention is not limited to the following test examples and the like.
〔試験例１〕
カンゾウの植物種として、グリチルリーザ・グラブラ（Glychyrrhiza glabra）の根茎部（１０ｇ）、グリチルリーザ・インフラータ（Glychyrrhiza inflata）の根茎部（１０ｇ）及びグリチルリーザ・ウラレンシス（Glychyrrhiza uralensis）の根茎部（１０ｇ）を準備し、各根茎部を抽出溶媒としてのメタノールで還流抽出し、エバポレータで溶媒を留去して３種のカンゾウの抽出物を得た。
[Test Example 1]
As a plant species of licorice, prepare a rhizome (10 g) of Glycyrrhiza glabra, a rhizome (10 g) of Glycyrrhiza inflata (Glychyrrhiza inflata), and a rhizome (10 g) of Glycyrrhiza uralensis Then, each rhizome was subjected to reflux extraction with methanol as an extraction solvent, and the solvent was distilled off with an evaporator to obtain extracts of three kinds of licorice.
超純水（４ｍＬ）に溶解させた各抽出物（１５０ｍｇ）を固相抽出処理に供した。具体的には、各抽出物の溶液をＳｅｐ−Ｐａｋ Ｃ１８ ２０ｃｃ Ｖａｃ Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ（５ｇ，Ｗａｔｅｒｓ社製）に通液させた後、溶出液としての水、３０容量％メタノール、５０容量％メタノール、８０容量％メタノール及びメタノールを用いてその順で溶出させ、各溶出液を分取し、溶媒を留去することで精製物としての各溶出画分を得た。 Each extract (150 mg) dissolved in ultrapure water (4 mL) was subjected to solid phase extraction treatment. Specifically, after passing a solution of each extract through Sep-Pak C18 20 cc Vac Cartridge (5 g, manufactured by Waters), water as an eluate, 30% by volume of methanol, 50% by volume of methanol, 80% by volume Elution was carried out in that order using% methanol and methanol, each eluate was separated, and the solvent was distilled off to obtain each eluted fraction as a purified product.
得られた各溶出画分のうち、５０容量％メタノール溶出画分と８０容量％メタノール溶出画分とのそれぞれを、濃度１０ｍｇ／ｍＬとなるように重溶媒（ＤＭＳＯ−ｄ6）に溶解させ、ＮＭＲ測定用サンプル溶液を調製し、1Ｈ−ＮＭＲ測定を行った。ＮＭＲの測定条件は、下記の通りとした。 Among the resulting eluted fractions, each of the 50% by volume methanol eluted fraction and the 80% by volume methanol eluted fraction is dissolved in a heavy solvent (DMSO-d 6 ) so as to have a concentration of 10 mg / mL, A sample solution for NMR measurement was prepared, and 1 H-NMR measurement was performed. The measurement conditions of NMR were as follows.
＜ＮＭＲ測定条件＞
測定装置：Ａｇｉｌｅｎｔ ４００ＭＲ ＶＮＭＲＳ４００（アジレント・テクノロジー社製）
サンプル濃度：１０ｍｇ／ｍＬ
重溶媒：ＤＭＳＯ−ｄ6
測定温度：２０℃
遅延時間：１．５ｓｅｃ
パルス幅：４５．０ｄｅｇｒｅｅ
観測時間：３．５ｓｅｃ
積算回数：１６回
<NMR measurement conditions>
Measuring device: Agilent 400MR VNMRS400 (manufactured by Agilent Technologies)
Sample concentration: 10 mg / mL
Heavy solvent: DMSO-d 6
Measurement temperature: 20 ° C
Delay time: 1.5 seconds
Pulse width: 45.0 degree
Observation time: 3.5 sec
Accumulated number of times: 16 times
上記ＮＭＲ測定により得られたＮＭＲスペクトルデータをバケット積分処理に付し、データ量のより小さいＮＭＲのヒストグラムデータに縮約した。バケット積分処理において、バケット積分幅を０．０４ｐｐｍとし、Ｈ2Ｏ及びＤＭＳＯの信号近傍を主成分（ＰＣＡ）分析の対象としない領域とするために削除した。また、1Ｈスペクトルの０〜１０ｐｐｍ幅でバケット積分した全積分値を「１００」と設定した。 The NMR spectrum data obtained by the above-mentioned NMR measurement was subjected to bucket integration processing and reduced to NMR histogram data of a smaller data amount. In the bucket integration process, the bucket integration width was set to 0.04 ppm, and the vicinity of the H 2 O and DMSO signals was deleted in order not to be a target area of principal component (PCA) analysis. In addition, the total integral value obtained by bucket-integrating the 0 to 10 ppm width of the 1 H spectrum was set to “100”.
得られたヒストグラムデータを主成分（ＰＣＡ）分析に供してＰＣＡスコアを算出した。なお、ＮＭＲスペクトルデータのバケット積分処理及びヒストグラムデータの主成分（ＰＣＡ）分析処理は、ＮＭＲ処理ソフト（ＡＬＩＣＥ２ ｆｏｒ Ｍｅｔａｂｏｌｏｍｅ，日本電子社製）を用いて行われた。３種のカンゾウについての５０容量％メタノール溶出画分のＰＣＡスコアプロットを図２に、８０容量％メタノール溶出画分のＰＣＡスコアプロットを図３に示す。図２及び図３に示すＰＣＡスコアプロットにおいて、「○」はグリチルリーザ・グラブラ（Glychyrrhiza glabra）のＰＣＡスコアを示し、「×」はグリチルリーザ・インフラータ（Glychyrrhiza inflata）のＰＣＡスコアを示し、「△」はグリチルリーザ・ウラレンシス（Glychyrrhiza uralensis）のＰＣＡスコアを示す。 The obtained histogram data was subjected to principal component (PCA) analysis to calculate a PCA score. In addition, the bucket integral process of NMR spectrum data and the main component (PCA) analysis process of histogram data were performed using NMR process software (ALICE2 for Metabolism, manufactured by Nippon Denshi Co., Ltd.). The PCA score plot of the 50% by volume methanol elution fraction for three licorice varieties is shown in FIG. 2, and the PCA score plot of the 80% by volume methanol elution fraction is shown in FIG. In the PCA score plots shown in FIG. 2 and FIG. 3, “o” indicates the PCA score of Glycyrrhiza glabra, “x” indicates the PCA score of Glycyrrhiza inflata, and “Δ” indicates The PCA score of Glycyrrhiza uralensis (Glychyrrhiza uralensis) is shown.
図２に示す結果から明らかなように、３種のカンゾウの５０容量％メタノール溶出画分に含まれる各代表的成分（水溶性フラボノイド類）が、ＰＣＡスコアプロットにおいて判別可能であることが確認された。具体的には、グリチルリーザ・グラブラ（Glychyrrhiza glabra）の代表的成分は、ローディングプロット上において、ＮＭＲチャートのケミカルシフト値６．７４ｐｐｍ、７．３０ｐｐｍに対応してプロットされることが確認された。また、グリチルリーザ・インフラータ（Glychyrrhiza inflata）の代表的成分は、ローディングプロット上において、ＮＭＲチャートのケミカルシフト値５．３０ｐｐｍに対応してプロットされることが確認された。さらに、グリチルリーザ・ウラレンシス（Glychyrrhiza uralensis）の代表的成分は、ローディングプロット上において、ＮＭＲチャートのケミカルシフト値７．０２ｐｐｍに対応してプロットされることが確認された。そして、これらのケミカルシフト値から、各植物種の代表的成分が水溶性フラボノイド類であると同定された。 As is clear from the results shown in FIG. 2, it was confirmed that the respective representative components (water-soluble flavonoids) contained in the 50% by volume methanol-eluted fraction of the three licorice varieties are distinguishable in the PCA score plot. The Specifically, it was confirmed that a typical component of Glycyrrhiza glabra is plotted on the loading plot in correspondence with the chemical shift value of 6.74 ppm and 7.30 ppm of the NMR chart. Moreover, it was confirmed that a typical component of Glycyrrhiza inflata (Glychyrrhiza inflata) is plotted corresponding to the chemical shift value 5.30 ppm of the NMR chart on the loading plot. Furthermore, it was confirmed that a representative component of Glycyrrhiza uralensis is plotted on the loading plot in correspondence with the chemical shift value of 7.02 ppm of the NMR chart. And, from these chemical shift values, representative components of each plant species were identified as water-soluble flavonoids.
また、図３に示す結果から明らかなように、３種のカンゾウの８０容量％メタノール溶出画分に含まれる各代表的な脂溶性成分（グラブリジン（Glabridin）、リコカルコンＡ（licochalcone A）、グリシクマリン（glycycoumarin）等）が、ＰＣＡスコアプロットにおいて判別可能であることが確認された。具体的には、グリチルリーザ・グラブラ（Glychyrrhiza glabra）の代表的成分は、ローディングプロット上において、ＮＭＲチャートのケミカルシフト値７．７４ｐｐｍに対応してプロットされることが確認された。また、グリチルリーザ・インフラータ（Glychyrrhiza inflata）の代表的成分は、ローディングプロット上において、ＮＭＲチャートのケミカルシフト値７．８２ｐｐｍに対応してプロットされることが確認された。さらに、グリチルリーザ・ウラレンシス（Glychyrrhiza uralensis）の代表的成分は、ローディングプロット上において、ＮＭＲチャートのケミカルシフト値６．７４ｐｐｍ、１．６６ｐｐｍ、１．５８ｐｐｍに対応してプロットされることが確認された。そして、これらのケミカルシフト値から、各植物種の代表的成分がグラブリジン（Glabridin）、リコカルコンＡ（licochalcone A）、グリシクマリン（glycycoumarin）などの脂溶性成分であると同定された。 Moreover, as is clear from the results shown in FIG. 3, representative fat-soluble components (Glabridin, Lichochalcone A), Glycicumarin (Glybricin A), Glycyc (Glycycoumarin) etc.) were confirmed to be distinguishable in the PCA score plot. Specifically, it was confirmed that a representative component of Glycyrrhiza glabra is plotted on the loading plot in correspondence with the chemical shift value of 7.74 ppm of the NMR chart. Moreover, it was confirmed that a typical component of Glycyrrhiza inflata (Glychyrrhiza inflata) is plotted on the loading plot in correspondence with the chemical shift value of 7.82 ppm of the NMR chart. Furthermore, it was confirmed that representative components of Glycyrrhiza uralensis are plotted on the loading plot in correspondence to the chemical shift values of 6.74 ppm, 1.66 ppm and 1.58 ppm of the NMR chart. And from these chemical shift values, representative components of each plant species were identified as fat-soluble components such as glabridin, licochalcone A, and glycocycoumarin.
〔試験例２〕
抽出溶媒を超純水に変更した以外は、試験例１と同様にして、３種のカンゾウについての５０容量％メタノール溶出画分及び８０容量％メタノール溶出画分のＰＣＡスコアを算出した。５０容量％メタノール溶出画分のＰＣＡスコアプロットを図４に、８０容量％メタノール溶出画分のＰＣＡスコアプロットを図５に示す。図４及び図５に示すＰＣＡスコアプロットにおいて、「○」はグリチルリーザ・グラブラ（Glychyrrhiza glabra）のＰＣＡスコアを示し、「×」はグリチルリーザ・インフラータ（Glychyrrhiza inflata）のＰＣＡスコアを示し、「△」はグリチルリーザ・ウラレンシス（Glychyrrhiza uralensis）のＰＣＡスコアを示す。
[Test Example 2]
Except for changing the extraction solvent to ultrapure water, PCA scores of 50% by volume methanol eluted fractions and 80% by volume methanol eluted fractions of three licorices were calculated in the same manner as in Test Example 1. The PCA score plot of the 50% by volume methanol elution fraction is shown in FIG. 4, and the PCA score plot of the 80% by volume methanol elution fraction is shown in FIG. In the PCA score plots shown in FIG. 4 and FIG. 5, “o” indicates the PCA score of Glycyrrhiza glabra, “x” indicates the PCA score of Glycyrrhiza inflata, and “Δ” indicates The PCA score of Glycyrrhiza uralensis (Glychyrrhiza uralensis) is shown.
図４に示す結果から明らかなように、３種のカンゾウの５０容量％メタノール溶出画分に含まれる各代表的成分（水溶性フラボノイド類）が、ＰＣＡスコアプロットにおいて判別可能であることが確認された。具体的には、グリチルリーザ・グラブラ（Glychyrrhiza glabra）の代表的成分は、ローディングプロット上において、ＮＭＲチャートのケミカルシフト値７．３０ｐｐｍ、６．７４ｐｐｍに対応してプロットされることが確認された。また、グリチルリーザ・インフラータ（Glychyrrhiza inflata）の代表的成分は、ローディングプロット上において、ＮＭＲチャートのケミカルシフト値７．０２ｐｐｍに対応してプロットされることが確認された。さらに、グリチルリーザ・ウラレンシス（Glychyrrhiza uralensis）の代表的成分は、ローディングプロット上において、ＮＭＲチャートのケミカルシフト値１．８６ｐｐｍにプロットされることが確認された。そして、これらのケミカルシフト値から、各植物種の代表的成分が水溶性フラボノイド類であると同定された。 As is clear from the results shown in FIG. 4, it was confirmed that each representative component (water-soluble flavonoids) contained in the 50% by volume methanol-eluted fraction of three licorices can be discriminated in the PCA score plot. The Specifically, it was confirmed that representative components of Glycyrrhiza glabra are plotted on the loading plot in correspondence with the chemical shift values 7.30 ppm and 6.74 ppm of the NMR chart. Moreover, it was confirmed that a typical component of Glycyrrhiza inflata (Glychyrrhiza inflata) is plotted corresponding to the chemical shift value of 7.02 ppm of the NMR chart on the loading plot. Furthermore, it was confirmed that a typical component of Glycyrrhiza uralensis (Glychyrrhiza uralensis) is plotted on a loading plot at a chemical shift value of 1.86 ppm of an NMR chart. And, from these chemical shift values, representative components of each plant species were identified as water-soluble flavonoids.
また、図５に示す結果から明らかなように、３種のカンゾウの８０容量％メタノール溶出画分に含まれる代表的なサポニン成分（グリチルリチン酸（Glycyrrhizin）、リコリスサポニンＨ２（Licorice-saponin H2）、リコリスサポニンＧ２（Licorice-saponin G2）等）が、ＰＣＡスコアプロットにおいて判別可能であることが確認された。具体的には、グリチルリーザ・グラブラ（Glychyrrhiza glabra）の代表的成分は、ローディングプロット上において、ＮＭＲチャートのケミカルシフト値０．９８ｐｐｍに対応してプロットされることが確認された。また、グリチルリーザ・インフラータ（Glychyrrhiza inflata）の代表的は、ローディングプロット上において、ＮＭＲチャートのケミカルシフト値３．４６ｐｐｍ、１．８６ｐｐｍに対応してプロットされることが確認された。さらに、グリチルリーザ・ウラレンシス（Glychyrrhiza uralensis）の代表的成分は、ローディングプロット上において、ＮＭＲチャートのケミカルシフト値３．７４ｐｐｍに対応してプロットされることが確認された。そして、これらのケミカルシフト値から、各植物種の代表的成分がグリチルリチン酸（Glycyrrhizin）、リコリスサポニンＨ２（Licorice-saponin H2）、リコリスサポニンＧ２（Licorice-saponin G2）等のサポニン類であると同定された。 Further, as is apparent from the results shown in FIG. 5, representative saponin components (Glycyrrhizin), licorice saponin H2 (Licorice-saponin H2), which are contained in the 80% by volume methanol-eluted fraction of three types of licorice, It was confirmed that licorice saponin G2 (Licorice-saponin G2 etc.) is distinguishable in the PCA score plot. Specifically, it was confirmed that a representative component of Glycyrrhiza glabra is plotted on the loading plot in correspondence with the chemical shift value of 0.98 ppm of the NMR chart. In addition, it was confirmed that a representative of Glycyrrhiza inflata is plotted on the loading plot in correspondence with the chemical shift values of 3.46 ppm and 1.86 ppm of the NMR chart. Furthermore, it was confirmed that the typical component of Glycyrrhiza uralensis (Glychyrrhiza uralensis) is plotted corresponding to the chemical shift value 3.74 ppm of the NMR chart on the loading plot. And from these chemical shift values, it is identified that saponins such as glycyrrhizin (Glycyrrhizin), licorice saponin H2 (Licorice-saponin H2), licorice saponin G2 (Licorice-saponin G2), etc. It was done.
試験例１及び試験例２の結果から、マメ科カンゾウ属に属する植物であるが、種が不明なものについて、その抽出物の固相抽出処理により得られる精製物をＮＭＲ測定に付し、そのスペクトルデータを主成分分析処理に付して算出されるＰＣＡスコアに基づいて、当該植物の種を容易に、かつ正確に同定可能であることが判明した。 From the results of Test Example 1 and Test Example 2, for the plant belonging to the leguminous licorice genus but the species is unknown, the purified product obtained by the solid phase extraction treatment of the extract is subjected to NMR measurement, Based on the PCA score calculated by subjecting the spectral data to the principal component analysis process, it was found that the species of the plant can be identified easily and accurately.
本発明は、医薬品、化粧品、食品等に添加される添加材料や生薬として使用可能なマメ科カンゾウ属に属する植物の種を簡便に同定する方法として有用である。 INDUSTRIAL APPLICABILITY The present invention is useful as a method for easily identifying species of plants belonging to the leguminous licorice genus that can be used as additive materials added to pharmaceuticals, cosmetics, foods and the like and as crude drugs.
Claims (6)
前記抽出物を精製して精製物を得る精製物取得工程と、
前記精製物のＮＭＲ測定を行い、ＮＭＲデータを取得するＮＭＲ測定工程と、
前記ＮＭＲデータに基づいて多変量解析処理を行う解析工程と、
前記解析結果に基づいて前記植物の種を同定する同定工程と
を含み、
前記精製物取得工程において、前記抽出物に固相抽出処理を施し、所定濃度の低級アルコール水溶液にて溶出させた画分を前記精製物として得ることを特徴とするカンゾウの植物種の同定方法。 An extract obtaining step of obtaining an extract of a plant belonging to the leguminous lichen genus;
A purified product obtaining step of purifying the extract to obtain a purified product;
An NMR measurement step of performing NMR measurement of the purified product to obtain NMR data;
An analysis step of performing multivariate analysis processing based on the NMR data;
And d) identifying the species of the plant based on the analysis result.
In the purified product acquisition step, the extract is subjected to solid phase extraction treatment, and a fraction eluted with a lower alcohol aqueous solution of a predetermined concentration is obtained as the purified product, thereby obtaining a plant species of licorice plant species.
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2022030443A1 (en) * | 2020-08-07 | 2022-02-10 | キッコーマン株式会社 | Food/beverage article |
| WO2022249952A1 (en) * | 2021-05-25 | 2022-12-01 | 学校法人鈴鹿医療科学大学 | Antiviral agent |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002536664A (en) * | 1999-02-10 | 2002-10-29 | オックスフォード ナチュラル プロダクツ ピーエルシー | Processes for quality control and standardization of medicinal plant products |
| JP2007524835A (en) * | 2003-07-03 | 2007-08-30 | ザ・レジェンツ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・カリフォルニア | Method for comparing the relative flow rates of two or more biomolecules in a single protocol in vivo |
| US20110123976A1 (en) * | 2009-10-13 | 2011-05-26 | Purdue Research Foundation | Biomarkers and identification methods for the early detection and recurrence prediction of breast cancer using NMR |
| JP2012062261A (en) * | 2010-09-15 | 2012-03-29 | Maruzen Pharmaceut Co Ltd | Composition for improving mood disorders |
| JP2017503185A (en) * | 2013-12-19 | 2017-01-26 | ユニベルシテイト ゲントＵｎｉｖｅｒｓｉｔｅｉｔ Ｇｅｎｔ | Quantification of glucocorticoids in fish scales as biomarkers of chronic stress |
-
2017
- 2017-09-29 JP JP2017191306A patent/JP7038992B2/en active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002536664A (en) * | 1999-02-10 | 2002-10-29 | オックスフォード ナチュラル プロダクツ ピーエルシー | Processes for quality control and standardization of medicinal plant products |
| JP2007524835A (en) * | 2003-07-03 | 2007-08-30 | ザ・レジェンツ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・カリフォルニア | Method for comparing the relative flow rates of two or more biomolecules in a single protocol in vivo |
| US20110123976A1 (en) * | 2009-10-13 | 2011-05-26 | Purdue Research Foundation | Biomarkers and identification methods for the early detection and recurrence prediction of breast cancer using NMR |
| JP2012062261A (en) * | 2010-09-15 | 2012-03-29 | Maruzen Pharmaceut Co Ltd | Composition for improving mood disorders |
| JP2017503185A (en) * | 2013-12-19 | 2017-01-26 | ユニベルシテイト ゲントＵｎｉｖｅｒｓｉｔｅｉｔ Ｇｅｎｔ | Quantification of glucocorticoids in fish scales as biomarkers of chronic stress |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2022030443A1 (en) * | 2020-08-07 | 2022-02-10 | キッコーマン株式会社 | Food/beverage article |
| WO2022249952A1 (en) * | 2021-05-25 | 2022-12-01 | 学校法人鈴鹿医療科学大学 | Antiviral agent |
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| Publication number | Publication date |
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