JP2019015707A - Cell treatment reagent and method for preparing microscope specimen - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は臨床細胞検査等の分野に用いられる細胞処理試薬及び細胞固定液、並びに顕微鏡標本を作製する方法に関する。 The present invention relates to a cell treatment reagent and a cell fixing solution used in the field of clinical cell examination and the like, and a method for producing a microscope specimen.
臨床細胞検査学等においては、細胞の形態や構造を観察するため、或いは細胞の数やその種類を検査するために、顕微鏡を用いた細胞の観察が広く行われている。
特に臨床細胞診検査は、病理組織検査に比べ検体の採取に制約が少なく、広範な対象に適用できる。更に患者に対する負荷が軽く、標本作製が簡便・安価であること等の理由から集団検診、日常検査、精密検査等の広範囲において各種疾患の鑑別や疾患の程度の判定、治療効果の判定、経過観察等のために行われる。
In clinical cytology and the like, observation of cells using a microscope is widely performed to observe the morphology and structure of cells, or to examine the number and types of cells.
In particular, clinical cytological examinations are applicable to a wide range of subjects with fewer restrictions on sample collection than pathological tissue examinations. Furthermore, because of the light load on the patient, the preparation of specimens is simple and inexpensive, etc., it is possible to distinguish various diseases, determine the degree of disease, determine the effect of treatment, and follow up in a wide range such as group screening, daily inspection, and detailed inspection. Done for etc.
また、近年子宮頚部癌等の発癌機構の一部が明らかになり、早期発見のため臨床細胞学的検査（細胞診検査）と分子生物学的検査（ＨＰＶ−ＤＮＡ検査）が併用されるようになってきた。そのため子宮頚部の細胞を採取後、液状細胞固定液中に保存し、細胞診検査とＨＰＶ−ＤＮＡ検査の両方が測定可能なＬＢＣ法（ｌｉｑｕｉｄ−ｂａｓｅｄ−ｃｙｔｏｌｏｇｙ、液状処理細胞診法）が広まってきた。ＬＢＣ法によれば細胞診標本を作製する際の塗抹不良や乾燥等の技術的エラーを減少させる事ができるとされている。 In recent years, a part of carcinogenic mechanisms such as cervical cancer has been clarified, and clinical cytological examination (cytodiagnosis examination) and molecular biological examination (HPV-DNA examination) are used in combination for early detection. It has become. Therefore, after collecting cervical cells, they are stored in liquid cell fixatives, and the LBC method (liquid-based-cytology), which can measure both cytology and HPV-DNA tests, has become widespread. It was. According to the LBC method, it is said that technical errors such as poor smearing and drying when preparing a cytological specimen can be reduced.
従来の直接塗抹の方法では、尿、体腔液等の液状検体の場合、遠心後沈渣をスライドガラスに塗り広げるか、ストリッヒ標本にするか、機器によりオートスメアにするか、フィルターを用いて貼り付ける等にて標本を作製し、その後、乾燥しないうちに濡れたままで９５％アルコールに浸すか、又は滴下固定液、スプレー固定等を用いて湿固定することにより行われる（非特許文献１及び２）。しかし、スライドガラス等からの細胞剥離が強いため、細胞が完全に剥がれ落ちてしまうこともある。細胞の剥離防止のため、コーティングスライドを用いたり、直接塗抹スライドグラスをアルコール等で固定後ポリエチレングリコールを含むスプレー固定液をさらにかけて一旦乾燥させる等が必要となることが多い（特許文献１及び２）。しかし、それでもなお、染色過程でのガラス面からの細胞剥離が問題となる。
In the conventional direct smearing method, in the case of liquid specimens such as urine and body cavity fluids, the sediment after centrifugation is spread on a slide glass, made into a Strich specimen, auto-smeared with an instrument, or pasted using a filter, etc. Then, the sample is prepared by immersing it in 95% alcohol while it is still wet before it is dried, or by wet fixing using a dripping fixing solution, spray fixing or the like (Non-patent
また、子宮頚部擦過や穿刺物等の様に材料が粘稠で細胞が多量に得られる場合や、反対に病変が乾燥気味であったり、硬かったりして細胞が少数しか得られない場合でも同様に、直接塗抹法が選択される。しかし、細胞の塗抹が厚すぎる又は薄すぎる場合、均一でない場合、細胞が初めから乾燥している場合、ガラス面に付着せず、既に剥離している場合には、濡れたままで固定する湿固定が出来ず、剥離してしまったり、均一な固定が得られないために固定不良標本になったり、安定した均一な染色性が得られない等の問題が生じる。 The same applies when the material is viscous and cells are obtained in large quantities, such as cervical scratches or punctures, or when the lesion is dry or hard and only a few cells are obtained. The direct smearing method is selected. However, if the cells are smeared too thick or too thin, if not uniform, if the cells are dry from the beginning, do not adhere to the glass surface, and if already detached, moist fixation to fix while still wet Cannot be fixed and peeled off, uniform fixation cannot be obtained, resulting in a poorly fixed specimen, and stable and uniform staining properties cannot be obtained.
一方、ＬＢＣ法は、検体採取後採取具から細胞を液状の固定液中に直接保存し、その固定済み細胞を使ってスライドガラスに塗抹する。そのため、ＬＢＣ法では乾燥がなく、比較的均一に集細胞して塗抹でき、不適正標本の割合が減少するとされている。 On the other hand, in the LBC method, after collecting a sample, cells are directly stored in a liquid fixing solution from a collection tool, and the fixed cells are smeared on a slide glass. Therefore, in the LBC method, there is no drying, cells can be collected and smeared relatively uniformly, and the proportion of improper specimens is reduced.
本発明は、細胞の乾燥がなく、塗抹が均一でしかも細胞剥離がほとんどなく、染色性も均一で鮮明であるため、細胞診スクリーニングが正確で迅速に行える標本を作成するための試薬であって、標本作製が専用の自動化機器を使用しなくても用手法にて、どこでも簡便迅速にしかも安価で行える細胞処理試薬又は細胞固定剤を提供することを目的とする。また、上記標本を作製するための、顕微鏡標本の作製方法を提供することを目的とする。 The present invention is a reagent for preparing a specimen capable of accurate and rapid cytodiagnosis screening because the cells are not dried, the smear is uniform, there is almost no cell detachment, and the staining property is uniform and clear. It is an object of the present invention to provide a cell treatment reagent or a cell fixing agent that enables preparation of a specimen to be carried out simply and quickly anywhere at a low cost without using a dedicated automation device. It is another object of the present invention to provide a method for producing a microscope specimen for producing the specimen.
上記目的を達成するために、本発明は、増粘多糖類を含む細胞処理試薬、並びに、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及び増粘多糖類を含む細胞処理試薬が提供される。増粘多糖類は細胞がガラス上から剥離することを防ぐ効果があり、ポリエチレングリコールは標本を乾燥させる際に保湿状態を保つ効果が有ると考えられる。ＰＥＧは、検体の種類、状態及び染色法等により、必要に応じて細胞処理試薬中に含ませることができる。
増粘多糖類としては、ヒドロキシプロピルセルロースが好ましく、ヒドロキシプロピルセルロース濃度は、０．０１ｗ／ｖ％〜１．０／ｖ％が好ましい。
上記細胞処理試薬には、グアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリドをさらに含んでもよい。グアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリド濃度は、０．００２ｗ／ｖ％〜０．１ｗ／ｖ％が好ましい。本発明の細胞処理試薬は、既固定細胞を含む検体を処理することにより、細胞の剥離、乾燥がほとんどなく、固定、塗抹、染色性が均一な優れた標本を作製することができる。なお、上記ヒドロキシプロピルセルロース濃度及びグアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリド濃度を、当業者は、検体の種類や状態、染色方法等に応じて任意に変更可能である。例えば、血液や細胞塊を含む検体の場合には、高い濃度のヒドロキシプロピルセルロースやグアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリドを使用することにより、剥離等なく標本を作製することができる。
In order to achieve the above object, the present invention provides a cell treatment reagent containing a thickening polysaccharide and a cell treatment reagent containing polyethylene glycol (PEG) and a thickening polysaccharide. The thickening polysaccharide has an effect of preventing cells from peeling off from the glass, and the polyethylene glycol is considered to have an effect of maintaining a moisturized state when the specimen is dried. PEG can be included in the cell treatment reagent as necessary depending on the type, state, staining method, and the like of the specimen.
As the thickening polysaccharide, hydroxypropylcellulose is preferable, and the hydroxypropylcellulose concentration is preferably 0.01 w / v% to 1.0 / v%.
The cell treatment reagent may further contain guar hydroxypropyltrimonium chloride. The concentration of guar hydroxypropyltrimonium chloride is preferably 0.002 w / v% to 0.1 w / v%. The cell treatment reagent of the present invention can produce an excellent specimen with almost no separation and drying of cells and uniform fixation, smearing, and staining properties by treating a specimen containing already fixed cells. In addition, those skilled in the art can arbitrarily change the hydroxypropylcellulose concentration and the guar hydroxypropyltrimonium chloride concentration according to the type and state of the specimen, the staining method, and the like. For example, in the case of a specimen containing blood or a cell mass, a specimen can be prepared without peeling by using a high concentration of hydroxypropylcellulose or guar hydroxypropyltrimonium chloride.
上記細胞処理試薬は、細胞固定のためのアルコールをさらに含んでもよく、使用されるアルコールは、エタノールが好ましい。エタノール濃度は、検体と混ぜ合わせた後の濃度として１０〜７０ｖ／ｖ％となるよう調整することが好ましい。対象となる検体の種類や固定の程度に併せて、細胞処理試薬中のアルコール濃度を適宜変更することができる。例えば、固定済みの検体の場合には、低濃度のアルコールを含む細胞処理試薬を使用し、未固定又は固定の程度が低い検体の場合には、高濃度のアルコールを含む細胞処理試薬を使用することができる。アルコールを含む本発明の細胞処理試薬は、未固定検体を固定するのみならず、細胞の剥離、乾燥がほとんどなく、固定、塗抹、染色性が均一な優れた標本を作製することができる。
上記細胞処理試薬に含まれるポリエチレングリコールは、重量平均分子量４００〜４０００のものが好ましい。
The cell treatment reagent may further contain an alcohol for cell fixation, and the alcohol used is preferably ethanol. The ethanol concentration is preferably adjusted to 10 to 70 v / v% as the concentration after mixing with the specimen. The alcohol concentration in the cell treatment reagent can be changed as appropriate in accordance with the type of target specimen and the degree of fixation. For example, in the case of a fixed sample, a cell treatment reagent containing a low concentration of alcohol is used, and in the case of a sample that is not fixed or fixed to a low degree, a cell treatment reagent containing a high concentration of alcohol is used. be able to. The cell treatment reagent of the present invention containing alcohol not only immobilizes unfixed specimens, but also can produce excellent specimens with little fixation and smearing and staining properties with little peeling and drying of cells.
The polyethylene glycol contained in the cell treatment reagent preferably has a weight average molecular weight of 400 to 4000.
本発明のさらに別の態様としては、細胞浮遊液と上記細胞処理試薬とを混合するステップと、生じた沈渣をスライドガラスに塗抹乾燥するステップとを含む、顕微鏡標本を作製する方法が提供される。 As yet another aspect of the present invention, there is provided a method for preparing a microscope specimen, which comprises the steps of mixing a cell suspension and the cell treatment reagent, and smearing and drying the resulting sediment on a slide glass. .
本発明の方法によれば、含まれる細胞が少数でも、細胞の剥離、乾燥がほとんどなく、固定、塗抹、染色性が均一な優れた標本を、短時間に通常のスライドガラス上に低コストで作製できる。また、その方法は単純であり、廃棄物も少ない。そのため、例えば、婦人科子宮頚部癌のリスク判定のためのＨＰＶ−ＤＮＡテスト用と共通の検体を利用して顕微鏡標本を作成できる。
また、未固定の体液サンプル、例えば、尿を簡便に固定処理して、低コストで短時間に細胞の剥離、乾燥がほとんどない、固定、塗抹、染色性が均一な優れた標本を作製できる。
According to the method of the present invention, even if a small number of cells are contained, an excellent specimen with almost no separation and drying of cells, uniform fixation, smearing and staining properties can be obtained on a normal slide glass in a short time at low cost. Can be made. Also, the method is simple and there is little waste. Therefore, for example, a microscope specimen can be created using a specimen common to that for HPV-DNA testing for gynecological cervical cancer risk determination.
In addition, an unfixed body fluid sample, for example, urine can be simply fixed, and an excellent specimen with uniform fixation, smearing, and staining can be produced at a low cost in a short time with almost no cell peeling or drying.
本発明の細胞処理試薬は、検体と混合した後の濃度が１０〜７０％程度のアルコール水溶液となるような細胞固定液としても使用することが可能である。本発明の細胞処理試薬及び処理液以外に必要となるのは、汎用されているスライドガラス（例えば、未処理のスライドガラス）、スピッツ、ピペット又はスポイト等であり、専用の器具を必要としない点で、例えば、尿などの液状検体などでは、従来のＬＢＣ標本の作製と比べて経済的である。 The cell treatment reagent of the present invention can also be used as a cell fixing solution that becomes an alcohol aqueous solution having a concentration of about 10 to 70% after mixing with a specimen. What is required in addition to the cell treatment reagent and treatment solution of the present invention is a commonly used slide glass (for example, an untreated slide glass), Spitz, pipette or dropper, and does not require a dedicated instrument. Thus, for example, liquid specimens such as urine are more economical than the conventional preparation of LBC specimens.
従来の婦人科ＬＢＣ標本でも、バックグラウンドの細菌、壊死物質、白血球が幾分除かれ細胞が観察し易くなっているが、本発明の方法では、細胞の壊死、白血球、細菌、結晶又は細胞集塊等を調節して塗抹することができ、組織の構築情報、バックグラウンド等についても詳細に観察することができる。そのため、例えば、従来の婦人科ＬＢＣ標本と比べて、より多くの情報が得られる。 Even in conventional gynecological LBC specimens, background bacteria, necrotic substances, and leukocytes are somewhat removed and the cells can be easily observed. However, in the method of the present invention, cell necrosis, leukocytes, bacteria, crystals, or cell collections are obtained. A lump or the like can be adjusted and smeared, and tissue construction information, background, and the like can be observed in detail. Therefore, for example, more information can be obtained as compared with a conventional gynecological LBC sample.
本発明は、増粘多糖類を含む細胞処理試薬、並びに、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及び増粘多糖類を含む細胞処理試薬に関する。また、本発明の細胞処理試薬は、細胞固定のためにアルコールをさらに含むことができる。アルコールをさらに含む細胞処理試薬は、特に、未固定検体又は固定の程度が低い検体に用いることができる。 The present invention relates to a cell treatment reagent containing a thickening polysaccharide and a cell treatment reagent containing polyethylene glycol (PEG) and a thickening polysaccharide. In addition, the cell treatment reagent of the present invention can further contain alcohol for cell fixation. The cell treatment reagent further containing alcohol can be used particularly for an unfixed sample or a sample with a low degree of fixation.
本発明の細胞処理試薬に含まれるアルコールとしては、エタノール、メタノール、プロパノール、ブタノール等を使用することができる。これらのうち、エタノール及びメタノールが特に好ましい。
細胞処理試薬に含まれるアルコール濃度は、検体の種類、形状、検体に含まれる細胞の量によって、任意に変更可能である。例えば、検体と混合後の濃度として、約１０〜７０ｖ／ｖ％、好ましくは約２０〜５０ｖ／ｖ％とすることができる。
As the alcohol contained in the cell treatment reagent of the present invention, ethanol, methanol, propanol, butanol and the like can be used. Of these, ethanol and methanol are particularly preferred.
The alcohol concentration contained in the cell treatment reagent can be arbitrarily changed depending on the type and shape of the specimen and the amount of cells contained in the specimen. For example, the concentration after mixing with the specimen can be about 10 to 70 v / v%, preferably about 20 to 50 v / v%.
水は、ＰＥＧ、多糖類及びアルコールを所定の濃度とするための希釈に必要な分だけ、細胞処理試薬に添加する。希釈するための水として、蒸留水等を使用することができる。 Water is added to the cell treatment reagent in an amount necessary for dilution to obtain a predetermined concentration of PEG, polysaccharide and alcohol. Distilled water or the like can be used as water for dilution.
本発明の細胞処理試薬に含まれるＰＥＧとしては、重量平均分子量４００〜４０００程度のＰＥＧを使用することができる。例えば、ＰＥＧ１５４０を使用することができる。
細胞処理試薬に含まれるＰＥＧ濃度は、最終濃度として、約１〜１０ｗ／ｖ％とすることができ、例えば、２〜３ｗ／ｖ％とすることができる。
As PEG contained in the cell treatment reagent of the present invention, PEG having a weight average molecular weight of about 400 to 4000 can be used. For example, PEG 1540 can be used.
The PEG concentration contained in the cell treatment reagent can be about 1 to 10 w / v% as the final concentration, for example, 2 to 3 w / v%.
本発明の細胞処理試薬に含まれる増粘多糖類としては、公知の任意の増粘多糖類を使用することができ、例えば、グアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリド、ヒドロキシプロピルセルロース、キサンタンガム、カラギーナン、グァーガム、ジェランガム、ローカストビーンガム、ダイユータンガム、ペクチン、ヒプロメロース及び又はこれらの誘導体を使用することができる。増粘多糖類は、複数種の増粘多糖類を混合して使用することができる。特に、ヒドロキシプロピルセルロースが好ましい。また、ヒドロキシプロピルセルロースと組み合わせて、グアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリドを使用することができる。 As the thickening polysaccharide contained in the cell treatment reagent of the present invention, any known thickening polysaccharide can be used. For example, guar hydroxypropyltrimonium chloride, hydroxypropylcellulose, xanthan gum, carrageenan, guar gum, Gellan gum, locust bean gum, diet tan gum, pectin, hypromellose and / or their derivatives can be used. The thickening polysaccharide can be used by mixing plural kinds of thickening polysaccharides. In particular, hydroxypropyl cellulose is preferable. In addition, guar hydroxypropyltrimonium chloride can be used in combination with hydroxypropylcellulose.
本発明の細胞処理試薬に含まれる増粘多糖類の濃度は、検体の種類、形状、検体に含まれる細胞の量によって、任意に変更可能であるが、最終濃度として合計で、約０．００１〜５．０ｗ／ｖ％とすることができる。細胞処理試薬は、例えば、ヒドロキシプロピルセルロースを最終濃度として、約０．０１ｗ／ｖ％〜１．０ｗ／ｖ％含む。また、細胞処理試薬は、例えば、グアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリドを最終濃度として、約０．００２ｗ／ｖ％〜０．１ｗ／ｖ％さらに含む。当業者は、検体の種類や状態、染色法等に応じて、これらの濃度を任意に変更可能である。 The concentration of the thickening polysaccharide contained in the cell treatment reagent of the present invention can be arbitrarily changed depending on the type, shape, and amount of cells contained in the sample, but the final concentration is about 0.001 in total. It can be set to -5.0 w / v%. The cell treatment reagent contains, for example, about 0.01 w / v% to 1.0 w / v% with hydroxypropylcellulose as the final concentration. The cell treatment reagent further includes, for example, about 0.002 w / v% to 0.1 w / v% with guar hydroxypropyltrimonium chloride as a final concentration. Those skilled in the art can arbitrarily change these concentrations according to the type and state of the specimen, the staining method, and the like.
使用可能な細胞診検体の採取方法は特に限定されず、任意の方法にて得られた材料が可能である。例えば、排出、分泌、洗浄、穿刺、吸引、擦過などの方法により、検体を採取することができる。 The method for collecting cytological specimens that can be used is not particularly limited, and materials obtained by any method are possible. For example, the specimen can be collected by a method such as discharge, secretion, washing, puncture, suction, or abrasion.
未固定の液状の検体の場合には、本発明のアルコールを含有する細胞処理試薬を、遠心後の沈渣に混和して固定処理を行うことができる。擦過物や穿刺吸引液等により得られる検体の場合には、本発明のアルコールを含有する細胞処理試薬に検体を直接混和して３０分以上固定する方法が挙げられる。細胞を固定するためには、ＨＰＶ−ＤＮＡテストと共用のＬＢＣ用固定液、市販の細胞固定液、１０〜７０％程度のアルコール液及び本発明のアルコールを含有する細胞処理試薬等、任意の細胞固定液が使用でき、特に限定されない。本発明のアルコールを含有する細胞処理試薬を使用した場合には、検体を固定できると同時に、スライドガラスからの検体をはがれ難くする効果をも付与できるため、特に好ましい。 In the case of an unfixed liquid specimen, the cell treatment reagent containing the alcohol of the present invention can be mixed with the sediment after centrifugation and fixed. In the case of a specimen obtained from a scraped material or a puncture aspirate, a method of directly mixing the specimen with the cell treatment reagent containing the alcohol of the present invention and fixing it for 30 minutes or more can be mentioned. In order to fix cells, any cell such as LBC fixing solution shared with HPV-DNA test, commercially available cell fixing solution, about 10-70% alcohol solution and cell treatment reagent containing alcohol of the present invention, etc. A fixative can be used and is not particularly limited. When the cell treatment reagent containing the alcohol of the present invention is used, it is particularly preferable because the sample can be fixed and at the same time, the effect of making it difficult to remove the sample from the slide glass can be imparted.
液状の検体には、体腔液、尿、消化液、Ｃｙｓｔ液、洗浄液（例えば、気管支洗浄液、気管支肺胞洗浄など）を例示することができる。 Examples of liquid specimens include body cavity fluid, urine, digestive fluid, Cyst fluid, and lavage fluid (for example, bronchial lavage fluid, bronchoalveolar lavage, etc.).
以下に、固定後の細胞をスライドガラス標本とする一般的な方法の例を説明するが、当業者は、対象となる検体などに応じて、標本作成法を変更可能である。５ｍｌ用の突底スピッツに本発明の細胞処理試薬を１ｍｌ程度分注しておき、固定済み細胞浮遊液を４ｍｌ程度加える。含まれる細胞量に応じて液量を適宜調節することができる。別法として、細胞浮遊液に、細胞処理試薬を滴下することにより細胞を処理することができる。 In the following, an example of a general method of using a fixed glass cell as a slide glass specimen will be described. However, a person skilled in the art can change the specimen preparation method according to the target specimen or the like. About 1 ml of the cell treatment reagent of the present invention is dispensed into a 5 ml-protruding spitz, and about 4 ml of the fixed cell suspension is added. The liquid volume can be appropriately adjusted according to the amount of cells contained. Alternatively, the cells can be treated by dropping a cell treatment reagent into the cell suspension.
次に、遠心し沈渣を得る。子宮頚部のＬＢＣ標本の様に細菌、白血球を幾分除いて標本にしたい場合は、２０００ｒｐｍにセットし電源をＯＮにして２〜５秒程度、尿などの液状検体の細胞の少ない検体の場合や、細菌、結晶、壊死物質、白血球等を観察する場合、必要に応じて１〜３分程度遠心し、上清を除き沈渣を得る。 Next, it is centrifuged to obtain a sediment. If you want to remove some bacteria and white blood cells, like a cervical LBC sample, set it to 2000 rpm and turn on the power for about 2 to 5 seconds. When observing bacteria, crystals, necrotic substances, leukocytes, etc., if necessary, centrifuge for 1 to 3 minutes, and remove the supernatant to obtain a sediment.
試薬処理後の固定細胞沈渣をピペットにて混和後、コーティングしていない通常のスライドガラスに短軸に帯状に塗沫し、冷風等で完全に乾燥させる。短軸に塗抹するのは、通常染色機等は長軸に上下動して染色するため横短軸帯状に塗抹する事により均一な染色性が得られる。 After the reagent-treated fixed cell sediment is mixed with a pipette, it is smeared on a normal uncoated glass slide with a short axis and dried completely with cold air or the like. The short axis is smeared because a normal dyeing machine or the like moves up and down along the long axis for dyeing, so that uniform staining can be obtained by smearing in the form of a horizontal short axis.
乾燥した標本は９５％アルコールで２０分程再固定し、必要に応じ、パパニコロウ染色、粘液染色等の特殊染色をする。 The dried specimen is fixed again with 95% alcohol for about 20 minutes, and if necessary, special staining such as Papanicolaou staining or mucus staining is performed.
以下に実施例に基づいて本発明を説明するが、下記の実施例は本発明を説明するためのものであり、本発明を限定するためのものではない。 EXAMPLES The present invention will be described below based on examples. However, the following examples are for explaining the present invention and are not intended to limit the present invention.
＜実施例１：子宮頚部の擦過（ブラシ検体）の固定サンプル＞
子宮頚部の擦過ブラシ検体を市販の固定液（ＬＢＣ固定液、ＴｈｉｎＰｒｅｐ（登録商標）、ホロジックジャパン株式会社製）に入れて懸濁し、そのうち約２ｍｌをサンプル液とした。このサンプル液に、ＰＥＧ１５００、Ｋｌｕｃｅｌ（商標）ヒドロキシプロピルセルロース（アシュランド スペシャルティ イングリーディエンツ（ＡＳＩ）社製）及びグアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリド（三晶株式会社製、製品名ＪＡＧＵＡＲ Ｃ−１６２）、エタノール（武藤化学株式会社製、病理染色用エタノール１００）を含む試薬２ｍｌを加えて遠心操作した。ピペットを用いて、得られた沈渣をスライドガラスに塗りつけ、乾燥後、パパニコロウ染色をした。
混合液の組成は、以下の通りである。ＰＥＧ１５００、ヒドロキシプロピルセルロース及びグアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリドは、最終濃度がそれぞれ、３ｗ／ｖ％、０．１ｗ／ｖ％、０．０１ｗ／ｖ％となるように蒸留水で希釈した。エタノールは、最終濃度が０ｖ／ｖ％、１０ｖ／ｖ％、２０ｖ／ｖ％、３０ｖ／ｖ％、４０ｖ／ｖ％又は５０ｖ／ｖ％となるように添加した。
作成したスライドの写真を図１に示す。図１中、左から、エタノールの最終濃度が０ｖ／ｖ％、１０ｖ／ｖ％、２０ｖ／ｖ％、３０ｖ／ｖ％、４０ｖ／ｖ％又は５０ｖ／ｖ％である。
サンプルのスライドガラスからのはがれ難さ、顕微鏡下における見易さ（顕鏡容易性、染色性、細胞の散在性、細胞の鮮明さ）、総合評価を表１にまとめた。
<Example 1: Fixed sample of cervical rub (brush specimen)>
The cervical rubbing brush specimen was suspended in a commercially available fixative (LBC fixative, ThinPrep (registered trademark), manufactured by Hologic Japan Co., Ltd.), about 2 ml of which was used as a sample solution. PEG 1500, Klucel (trademark) hydroxypropyl cellulose (manufactured by Ashland Specialty Ingredients (ASI)) and guar hydroxypropyltrimonium chloride (manufactured by Sanki Co., Ltd., product name JAGUAR C-162),
The composition of the mixed solution is as follows. PEG 1500, hydroxypropyl cellulose and guar hydroxypropyltrimonium chloride were diluted with distilled water so that the final concentrations were 3 w / v%, 0.1 w / v% and 0.01 w / v%, respectively. Ethanol was added so that the final concentration was 0 v / v%, 10 v / v%, 20 v / v%, 30 v / v%, 40 v / v%, or 50 v / v%.
A photograph of the created slide is shown in FIG. In FIG. 1, from the left, the final concentration of ethanol is 0 v / v%, 10 v / v%, 20 v / v%, 30 v / v%, 40 v / v%, or 50 v / v%.
Table 1 summarizes the difficulty of peeling of the sample from the glass slide, ease of viewing under a microscope (microscopic ease, staining, cell dispersibility, cell clarity), and overall evaluation.
上記の表において、サンプルのスライドからのはがれ難さを、○：はがれ難い、△：ややはがれ難い、×：はがれ易いにより示した。また、顕微鏡下による見易さ（顕鏡容易性）は、○：見易い、△：やや見易い、×：見辛いとして示し、はがれ難さと見易さを総合した評価として、○：優れている、△：良好、×：劣る、とした。以下の表でも、同様とする。 In the above table, the difficulty of peeling from the slide of the sample is indicated by ○: difficult to peel, Δ: somewhat difficult to peel, and x: easy to peel. In addition, the visibility under a microscope (easiness of microscope) is: ○: easy to see, Δ: somewhat easy to see, x: difficult to see, and as an evaluation that combines the difficulty of peeling and ease of viewing, ○: excellent, Δ: Good, ×: Inferior. The same applies to the following tables.
＜実施例２：尿（扁平上皮、尿路上皮）の未固定サンプル＞
尿を遠心操作して得られた沈渣１滴と、２ｍｌの下記の試薬を混ぜ合わせ、３０分静置して固定した。その後さらに遠心操作し、得られた沈殿物をスライドガラスに塗沫し、パパニコロウ染色をした。
試薬の組成は、以下の通りである。ＰＥＧ１５００、ヒドロキシプロピルセルロース及びグアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリドは、最終濃度がそれぞれ、３ｗ／ｖ％、０．１ｗ／ｖ％、０．０１ｗ／ｖ％となるように蒸留水で希釈した。エタノールは、最終濃度が０ｖ／ｖ％、１０ｖ／ｖ％、２０ｖ／ｖ％、３０ｖ／ｖ％、４０ｖ／ｖ％又は５０ｖ／ｖ％となるように添加した。
作成したスライドの写真を図２に示す。図２中、左から、エタノールの最終濃度が０ｖ／ｖ％、１０ｖ／ｖ％、２０ｖ／ｖ％、３０ｖ／ｖ％、４０ｖ／ｖ％又は５０ｖ／ｖ％である。
サンプルのスライドガラスからのはがれ難さ、顕微鏡下における見易さ（顕鏡容易性）、総合評価を表２にまとめた。
<Example 2: Unfixed sample of urine (squamous epithelium, urothelium)>
One drop of sediment obtained by centrifuging urine and 2 ml of the following reagents were mixed and allowed to stand for 30 minutes for fixation. Thereafter, the mixture was further centrifuged, and the resulting precipitate was smeared on a slide glass and stained with Papanicolaou.
The composition of the reagent is as follows. PEG 1500, hydroxypropyl cellulose and guar hydroxypropyltrimonium chloride were diluted with distilled water so that the final concentrations were 3 w / v%, 0.1 w / v% and 0.01 w / v%, respectively. Ethanol was added so that the final concentration was 0 v / v%, 10 v / v%, 20 v / v%, 30 v / v%, 40 v / v%, or 50 v / v%.
A photograph of the created slide is shown in FIG. From the left in FIG. 2, the final concentration of ethanol is 0 v / v%, 10 v / v%, 20 v / v%, 30 v / v%, 40 v / v%, or 50 v / v%.
Table 2 summarizes the difficulty of peeling of the sample from the slide glass, the ease of viewing under a microscope (ease of microscope), and the overall evaluation.
＜実施例３：子宮頚部の擦過（ブラシ検体）の固定サンプル＞
実施例１同様に作成した約２ｍｌのサンプル液に、試薬２ｍｌを加え混合液として遠心操作した。ピペットを用いて、得られた沈渣をスライドガラスに塗りつけ、パパニコロウ染色をした。
サンプルと試薬の混合液の組成は、以下の通りである。エタノール、ＰＥＧ１５００及びヒドロキシプロピルセルロースは、最終濃度がそれぞれ、５０ｖ／ｖ％、２ｗ／ｖ％、０．０５ｗ／ｖ％となるように蒸留水で希釈した。グアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリドは、最終濃度が０ｗ／ｖ％、０．００５ｗ／ｖ％、０．０１ｗ／ｖ％、０．０１５ｗ／ｖ％又は０．０２ｗ／ｖ％となるように添加した。
作成したスライドの写真を図３に示す。図３中、左から、グアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリドの最終濃度が、０ｗ／ｖ％、０．００５ｗ／ｖ％、０．０１ｗ／ｖ％、０．０１５ｗ／ｖ％又は０．０２ｗ／ｖ％である。
サンプルのスライドガラスからのはがれ難さ、顕微鏡下における見易さ（顕鏡容易性）、総合評価を表３にまとめた。
<Example 3: Fixed sample of cervical rub (brush specimen)>
2 ml of a reagent was added to about 2 ml of the sample solution prepared in the same manner as in Example 1, and the mixture was centrifuged. Using a pipette, the obtained sediment was applied to a slide glass and stained with Papanicolaou.
The composition of the sample and reagent mixture is as follows. Ethanol, PEG 1500, and hydroxypropyl cellulose were diluted with distilled water so that the final concentrations were 50 v / v%, 2 w / v%, and 0.05 w / v%, respectively. Guar hydroxypropyltrimonium chloride was added to a final concentration of 0 w / v%, 0.005 w / v%, 0.01 w / v%, 0.015 w / v% or 0.02 w / v%.
A photograph of the created slide is shown in FIG. In FIG. 3, from the left, the final concentration of guar hydroxypropyltrimonium chloride is 0 w / v%, 0.005 w / v%, 0.01 w / v%, 0.015 w / v%, or 0.02 w / v%. It is.
Table 3 summarizes the difficulty of peeling of the sample from the slide glass, ease of viewing under the microscope (ease of microscope), and overall evaluation.
＜実施例４：尿（扁平上皮、尿路上皮）の未固定サンプル＞
実施例２同様に尿を遠心操作して得られた沈渣１滴と、２ｍｌの下記の試薬を混ぜ合わせ、３０分静置して固定した。その後さらに遠心操作し、得られた沈殿物をスライドガラスに塗沫し、パパニコロウ染色をした。
試薬の組成は、以下の通りである。エタノール、ＰＥＧ１５００及びヒドロキシプロピルセルロースは、最終濃度がそれぞれ、５０ｖ／ｖ％、２ｗ／ｖ％、０．０５ｗ／ｖ％となるように蒸留水で希釈した。グアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリドは、最終濃度が０ｗ／ｖ％、０．００５ｗ／ｖ％、０．０１ｗ／ｖ％、０．０１５ｗ／ｖ％又は０．０２ｗ／ｖ％となるように添加した。
作成したスライドの写真を図４に示す。図４中、左から、グアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリドの最終濃度が、０ｗ／ｖ％、０．００５ｗ／ｖ％、０．０１ｗ／ｖ％、０．０１５ｗ／ｖ％又は０．０２ｗ／ｖ％である。
サンプルのスライドガラスからのはがれ難さ、顕微鏡下における見易さ（顕鏡容易性）、総合評価を表４にまとめた。
<Example 4: Unfixed sample of urine (squamous epithelium, urothelium)>
In the same manner as in Example 2, 1 drop of sediment obtained by centrifuging urine and 2 ml of the following reagents were mixed and allowed to stand for 30 minutes for fixation. Thereafter, the mixture was further centrifuged, and the resulting precipitate was smeared on a slide glass and stained with Papanicolaou.
The composition of the reagent is as follows. Ethanol, PEG 1500, and hydroxypropyl cellulose were diluted with distilled water so that the final concentrations were 50 v / v%, 2 w / v%, and 0.05 w / v%, respectively. Guar hydroxypropyltrimonium chloride was added to a final concentration of 0 w / v%, 0.005 w / v%, 0.01 w / v%, 0.015 w / v% or 0.02 w / v%.
A photograph of the created slide is shown in FIG. In FIG. 4, from the left, the final concentration of guar hydroxypropyltrimonium chloride is 0 w / v%, 0.005 w / v%, 0.01 w / v%, 0.015 w / v%, or 0.02 w / v%. It is.
Table 4 summarizes the difficulty of peeling of the sample from the glass slide, ease of viewing under a microscope (ease of microscope), and overall evaluation.
＜実施例５：尿（扁平上皮、尿路上皮）の未固定サンプル＞
実施例２同様に尿を遠心操作して得られた沈渣１滴と、２ｍｌの下記の試薬を混ぜ合わせ、３０分静置して固定した。その後さらに遠心操作し、得られた沈殿物をスライドガラスに塗沫し、パパニコロウ染色をした。
試薬の組成は、以下の通りである。エタノール、ＰＥＧ１５００及びグアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリドは、最終濃度がそれぞれ、５０ｖ／ｖ％、２ｗ／ｖ％、０．０１５ｗ／ｖ％となるように蒸留水で希釈した。ヒドロキシプロピルセルロースは、最終濃度が０ｗ／ｖ％、０．００５ｗ／ｖ％、０．０１ｗ／ｖ％、０．０５ｗ／ｖ％又は０．１ｗ／ｖ％となるように添加した。
作成したスライドの写真を図５に示す。図５中、左から、ヒドロキシプロピルセルロースの最終濃度が、０ｗ／ｖ％、０．００５ｗ／ｖ％、０．０１ｗ／ｖ％、０．０５ｗ／ｖ％又は０．１ｗ／ｖ％である。
サンプルのスライドガラスからのはがれ難さ、顕微鏡下における見易さ（顕鏡容易性）、総合評価を表５にまとめた。
<Example 5: Unfixed sample of urine (squamous epithelium, urothelium)>
As in Example 2, 1 drop of sediment obtained by centrifuging urine and 2 ml of the following reagents were mixed and allowed to stand for 30 minutes for fixation. Thereafter, the mixture was further centrifuged, and the resulting precipitate was smeared on a slide glass and stained with Pap test.
The composition of the reagent is as follows. Ethanol, PEG 1500 and guar hydroxypropyltrimonium chloride were diluted with distilled water so that the final concentrations were 50 v / v%, 2 w / v% and 0.015 w / v%, respectively. Hydroxypropylcellulose was added so that the final concentration was 0 w / v%, 0.005 w / v%, 0.01 w / v%, 0.05 w / v%, or 0.1 w / v%.
A photograph of the created slide is shown in FIG. In FIG. 5, from the left, the final concentration of hydroxypropylcellulose is 0 w / v%, 0.005 w / v%, 0.01 w / v%, 0.05 w / v%, or 0.1 w / v%.
Table 5 summarizes the difficulty of peeling of the sample from the slide glass, ease of viewing under the microscope (ease of microscope), and overall evaluation.
＜実施例６：尿（扁平上皮、尿路上皮）の未固定サンプル＞
実施例２同様に尿を遠心操作して得られた沈渣１滴と、２ｍｌの下記の試薬を混ぜ合わせ、３０分静置して固定した。その後さらに遠心操作し、得られた沈殿物をスライドガラスに塗沫し、パパニコロウ染色をした。
試薬の組成は、以下の通りである。エタノール及びＰＥＧ１５００は、最終濃度がそれぞれ、５０ｖ／ｖ％、２ｗ／ｖ％となるように蒸留水で希釈した。ヒドロキシプロピルセルロースは、最終濃度が０ｗ／ｖ％、０．００５ｗ／ｖ％、０．０１ｗ／ｖ％、０．０５ｗ／ｖ％又は０．１ｗ／ｖ％となるように添加した。
作成したスライドの写真を図６に示す。図６中、左から、ヒドロキシプロピルセルロースの最終濃度が、０ｗ／ｖ％、０．００５ｗ／ｖ％、０．０１ｗ／ｖ％、０．０５ｗ／ｖ％又は０．１ｗ／ｖ％である。
サンプルのスライドガラスからのはがれ難さ、顕微鏡下における見易さ（顕鏡容易性）、総合評価を表６にまとめた。
<Example 6: Unfixed sample of urine (squamous epithelium, urothelium)>
In the same manner as in Example 2, 1 drop of sediment obtained by centrifuging urine and 2 ml of the following reagents were mixed and allowed to stand for 30 minutes for fixation. Thereafter, the mixture was further centrifuged, and the resulting precipitate was smeared on a slide glass and stained with Papanicolaou.
The composition of the reagent is as follows. Ethanol and PEG 1500 were diluted with distilled water so that the final concentrations were 50 v / v% and 2 w / v%, respectively. Hydroxypropylcellulose was added so that the final concentration was 0 w / v%, 0.005 w / v%, 0.01 w / v%, 0.05 w / v%, or 0.1 w / v%.
A photograph of the created slide is shown in FIG. In FIG. 6, from the left, the final concentration of hydroxypropylcellulose is 0 w / v%, 0.005 w / v%, 0.01 w / v%, 0.05 w / v%, or 0.1 w / v%.
Table 6 summarizes the difficulty of peeling of the sample from the glass slide, ease of viewing under a microscope (ease of microscope), and overall evaluation.
＜実施例７：尿（扁平上皮、尿路上皮）の未固定サンプル＞
実施例２同様に尿を遠心操作して得られた沈渣１滴と、２ｍｌの下記の試薬を混ぜ合わせ、３０分静置して固定した。その後さらに遠心操作し、得られた沈殿物をスライドガラスに塗沫し、パパニコロウ染色をした。
試薬の組成は、以下の通りである。エタノールは、最終濃度が５０ｖ／ｖ％となるように蒸留水で希釈した。ヒドロキシプロピルセルロースは、最終濃度が０ｗ／ｖ％、０．００５ｗ／ｖ％、０．０１ｗ／ｖ％、０．０５ｗ／ｖ％又は０．１ｗ／ｖ％となるように添加した。なお、この試薬には、ＰＥＧは含まれない。
作成したスライドの写真を図７に示す。図７中、左から、ヒドロキシプロピルセルロースの最終濃度が、０ｗ／ｖ％、０．００５ｗ／ｖ％、０．０１ｗ／ｖ％、０．０５ｗ／ｖ％又は０．１ｗ／ｖ％である。
サンプルのスライドガラスからのはがれ難さ、顕微鏡下における見易さ（顕鏡容易性）、総合評価を表７にまとめた。
<Example 7: Unfixed sample of urine (squamous epithelium, urothelium)>
In the same manner as in Example 2, 1 drop of sediment obtained by centrifuging urine and 2 ml of the following reagents were mixed and allowed to stand for 30 minutes for fixation. Thereafter, the mixture was further centrifuged, and the resulting precipitate was smeared on a slide glass and stained with Papanicolaou.
The composition of the reagent is as follows. Ethanol was diluted with distilled water to a final concentration of 50 v / v%. Hydroxypropylcellulose was added so that the final concentration was 0 w / v%, 0.005 w / v%, 0.01 w / v%, 0.05 w / v%, or 0.1 w / v%. This reagent does not contain PEG.
A photograph of the created slide is shown in FIG. In FIG. 7, from the left, the final concentration of hydroxypropylcellulose is 0 w / v%, 0.005 w / v%, 0.01 w / v%, 0.05 w / v%, or 0.1 w / v%.
Table 7 summarizes the difficulty of peeling of the sample from the slide glass, the ease of viewing under a microscope (ease of microscope), and the overall evaluation.
Claims (9)
生じた沈渣をスライドガラスに塗抹乾燥するステップと
を含む、顕微鏡標本を作製する方法。 Mixing the cell suspension and the cell treatment reagent according to any one of claims 1 to 5;
And a step of smearing and drying the generated sediment on a slide glass.
Applications Claiming Priority (2)
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