JP2018516879A - Constructs targeting the HPV16-E7 peptide / MHC complex and uses thereof - Google Patents
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Abstract
本出願は、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含む構築物を提供する。これらの構築物を作製および使用する方法もまた提供される。本発明は、例えばヒトパピローマウイルスサブタイプ16(HPV16)E7ペプチドおよび主要組織適合複合体(MHC)クラスIタンパク質を含む複合体(HPV16−E7/MHCクラスI複合体、またはE7MC)に特異的に結合する抗体部分を含む、単離された抗E7MC構築物を提供する。【選択図】図8AThe application provides a construct comprising an antibody moiety that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein. Methods for making and using these constructs are also provided. The present invention specifically binds to a complex comprising, for example, human papillomavirus subtype 16 (HPV16) E7 peptide and a major histocompatibility complex (MHC) class I protein (HPV16-E7 / MHC class I complex, or E7MC). An isolated anti-E7MC construct comprising an antibody moiety is provided. [Selection] Figure 8A
Description
関連出願の相互参照
本願は、2015年5月8日に出願された米国仮出願第62/158,735号および2015年7月27日に出願された米国仮出願第62/197,480号の優先権を主張し、これら全ては、全体において本明細書に参照によって組み込まれる。
This application is related to US Provisional Application No. 62 / 158,735 filed May 8, 2015 and US Provisional Application No. 62 / 197,480 filed July 27, 2015. All of which are hereby incorporated by reference in their entirety.
発明の分野
本発明は、HPV16−E7ペプチドと複合体形成したMHC分子を特異的に結合する抗体構築物、ならびに疾患を処置および診断することを含むその使用に関する。
FIELD OF THE INVENTION The present invention relates to antibody constructs that specifically bind MHC molecules complexed with HPV16-E7 peptides, and their uses including treating and diagnosing diseases.
ASCIIテキストファイルでの配列表の提出
ASCIIテキストファイルでの以下の提出の内容は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる:コンピューター可読形態(CRF)の配列表(ファイル名:750042000240SEQLIST.txt、データ記録:2016年5月6日、サイズ:125KB)。
Submitting Sequence Listings in ASCII Text Files The contents of the following submissions in ASCII text files are hereby incorporated by reference in their entirety: Sequence Listing in computer readable form (CRF) (file name: 750042000240SEQLIST.txt, Data recording: May 6, 2016, size: 125 KB).
ヒトパピローマウイルス(HPV)は、上皮細胞に感染すると疣贅または良性パピローマを引き起こす、小さい非エンベロープ型のDNAウイルスである。高リスクHPV型による持続感染は、より重篤な細胞学的異常または病変をもたらす可能性があり、それは処置しないとがんに進行し得る。HPV関連がんの年間発生数は、米国では26,000を超え(CDCによる)、世界中では600,000を超える(Forman D.ら、Vaccine、30巻:補遺5:F12〜23頁、2012年)。様々な型のHPVが、世界中の女性におけるがん関連死の3番目に多い原因である子宮頸がんのほぼ全ての症例を引き起こす原因となっている(Doorbar J.、Clin.Sci.、110巻:525〜541頁、2006年)。HPVは、子宮頸がんに加えて、肛門生殖器がん(肛門、陰茎、膣および外陰部)および頭頸部がん(中咽頭:舌の基部および扁桃を含む、喉の背部)とも関連する。60の研究からの5,046の頭頸部扁平上皮細胞癌(HNSCC)がん標本のメタ分析では、HPV全罹患率は25.9%であることが見出された。HPV陽性HNSCCのうち、HPV−16は、HPV陽性中咽頭SCCの86.7%、口腔SCCの68.2%、および喉頭SCCの69.2%において見出された(Kreimer A.R.ら、Cancer Epidemiol Biomarkers Prev.14巻:467〜475頁、2005年)。HPV E6およびE7タンパク質の1,000を超えるマッピングされたRNA配列決定(RNA−Seq)読み取りの存在によってHPV状態を分類したより最近の研究(The Cancer Genome Atlas Network、Nature、517巻:576〜582頁、2015年)において、279のうち36(12.9%)がHPV陽性であることが見出された。 Human papillomavirus (HPV) is a small non-enveloped DNA virus that causes warts or benign papillomas when infected with epithelial cells. Persistent infection with high-risk HPV types can result in more severe cytological abnormalities or lesions that can progress to cancer if not treated. The annual incidence of HPV-related cancer exceeds 26,000 in the United States (by CDC) and over 600,000 worldwide (Forman D. et al., Vaccine, 30: Addendum 5: pages 12-23, 2012) Year). Various types of HPV are responsible for causing almost all cases of cervical cancer, the third most common cause of cancer-related deaths in women worldwide (Doorbar J., Clin. Sci., 110: 525-541, 2006). In addition to cervical cancer, HPV is also associated with anogenital cancer (anus, penis, vagina and vulva) and head and neck cancer (oropharynx: the base of the tongue and the back of the throat, including the tonsils). In a meta-analysis of 5,046 head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) cancer specimens from 60 studies, the overall prevalence of HPV was found to be 25.9%. Of the HPV positive HNSCCs, HPV-16 was found in 86.7% of HPV positive oropharyngeal SCC, 68.2% of oral SCC, and 69.2% of laryngeal SCC (Kreimer AR et al. , Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 14: 467-475, 2005). A more recent study categorizing HPV status by the presence of more than 1,000 mapped RNA sequencing (RNA-Seq) readings of HPV E6 and E7 proteins (The Cancer Genome Atlas Network, Nature 517: 576-582 Page (2015), 36 (12.9%) of 279 were found to be HPV positive.
高リスクHPVサブタイプによる持続性感染の際のがん発生は、プロテアソームに依存してp53およびRbを分解することによってゲノム不安定性および細胞形質転換を促進することが報告された2つの潜在的癌遺伝子E6およびE7の発現に主に起因する(Doorbar、上記)。HPV E6およびE7癌タンパク質は、病巣において継続的に発現されるが、腫瘍は、最初の細胞不死化事象の数年後にのみ生じる。実際、E6およびE7の継続的発現は、形質転換された表現型の維持、ならびに細胞成長停止および/またはアポトーシスの防止のために必要とされる(McLaughlin−Drubin M.E.およびMuenger K.、Virology、384巻:335〜344頁、2009年)。確立された病巣はL1を発現しないので、HPV−6、11、16および18サブタイプのL1タンパク質に対する承認された予防用ワクチンが利用できるにもかかわらず、HPV+がんの処置の必要性は満たされていない。 Cancer development during persistent infection with high-risk HPV subtypes has been reported to promote genomic instability and cellular transformation by degrading p53 and Rb in a proteasome-dependent manner It is mainly due to the expression of genes E6 and E7 (Doorbar, supra). HPV E6 and E7 oncoproteins are continuously expressed in lesions, but tumors occur only years after the first cell immortalization event. Indeed, continued expression of E6 and E7 is required for maintenance of the transformed phenotype and for prevention of cell growth arrest and / or apoptosis (McLaughlin-Drubin ME and Muenger K., Virology, 384: 335-344, 2009). Since established lesions do not express L1, there is a need for treatment of HPV + cancer despite the availability of approved prophylactic vaccines for HPV-6, 11, 16, and 18 subtypes of L1 protein. Not satisfied.
HPVなどの発癌性ウイルスによって発現されるタンパク質は、正常細胞では発現されないことから免疫療法の優れた標的となる。E6およびE7は、低分子量化合物を使用する従来の薬物開発の試みによっても細胞表面タンパク質に対する抗体アプローチによっても標的とされてこなかった細胞内タンパク質である。HPV16陽性高悪性度外陰部上皮内新生物における最近の研究により、E6/E7ペプチドを利用するワクチン接種アプローチで処置した患者の50%におけるT細胞応答および臨床応答が実証されている(Kenter G.G.ら、N.Engl.J.Med.361巻:1838〜1847頁、2009年;Welters M.J.ら、N.Engl.J.Med.361巻:1838〜1847頁、2010年;Daayana S.ら、Br.J.Cancer 102巻:1129〜1136頁、2010年)。13の別個の予測されたHLA−A*02:01結合性E7ペプチドのうち、E711−19(YMLDLQPET)だけが、in vitroで天然にプロセシングされ、HPV−16形質転換されたHLA−A*02:01発現細胞株上でディスプレイされることが見出された(Riemer A.B.ら、J.Biol.Chem.285巻(38号):29608〜29622頁、2010年)。このペプチドは、HPVデータベース中の17のHPV−16バリアントのうち16において保存されている(Zhang G.L.ら、Database、1〜12頁、2014年)。
Proteins expressed by oncogenic viruses such as HPV are excellent targets for immunotherapy because they are not expressed in normal cells. E6 and E7 are intracellular proteins that have not been targeted by conventional drug development attempts using low molecular weight compounds or antibody approaches to cell surface proteins. Recent studies on HPV16 positive high-grade vulvar intraepithelial neoplasia have demonstrated T cell responses and clinical responses in 50% of patients treated with vaccination approaches utilizing E6 / E7 peptides (Kenter G. et al. G. et al., N. Engl. J. Med. 361: 1838-1847, 2009; Welters M. J. et al., N. Engl. J. Med. S. et al., Br. J. Cancer 102: 1129-1136, 2010). Of the 13 distinct predicted HLA-
mAbを生成するためにファージディスプレイを使用することにおける最近の進歩により、規定されたエピトープに対する優れた特異性を有する薬剤を、大きい抗体レパートリーから選択することが可能になっている。固形腫瘍抗原に特異的ないくつかのかかるmAbが、HLA−A01およびHLA−A02との関連で、ファージディスプレイライブラリーから首尾よく選択されている(Noyら、Expert Rev.Anticancer Ther.5巻(3号):523〜536頁、2005年;Chamesら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97巻:7969〜7974頁、2000年;Heldら、Eur.J.Immunol.34巻:2919〜2929頁、2004年;Levら、Cancer Res.62巻:3184〜3194頁、2002年;Klechevskyら、Cancer Res.68巻(15号):6360〜6367頁、2008年)。より最近、十分に記載されたT細胞エピトープ、ヒトWT1/HLA−A02複合体に特異的なヒトmAbが、細胞アッセイおよびin vivoモデルにおいて、Fc媒介性エフェクター細胞機能を介して、複数のがん細胞株および原発性がん細胞を阻害することが示された(Daoら、Sci.Transl.Med.5巻:176ra33頁、2013年;Veomettら、Clin.Cancer Res.doi:10.1158/1078−0432、2014年)。
本明細書で参照される全ての刊行物、特許、特許出願および公開された特許出願の開示は、それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
Recent advances in using phage display to generate mAbs have made it possible to select drugs from the large antibody repertoire with superior specificity for defined epitopes. Several such mAbs specific for solid tumor antigens have been successfully selected from phage display libraries in the context of HLA-A01 and HLA-A02 (Noy et al., Expert Rev. Anticancer Ther. 5 ( 3): 523-536, 2005; Chames et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97: 7969-7974, 2000; Held et al., Eur. J. Immunol.34: 2919-2929. Lev et al., Cancer Res. 62: 3184-3194, 2002; Klechsky et al., Cancer Res. 68 (15): 6360-6367, 2008). More recently, a well-described T cell epitope, a human mAb specific for the human WT1 / HLA-A02 complex, has been shown to induce multiple cancers via Fc-mediated effector cell function in cellular assays and in vivo models. It has been shown to inhibit cell lines and primary cancer cells (Dao et al., Sci. Transl. Med. 5: 176ra33, 2013; Veomett et al., Clin. Cancer Res. Doi: 10.15158 / 1078 -0432, 2014).
The disclosures of all publications, patents, patent applications and published patent applications referred to herein are hereby incorporated by reference in their entirety.
本出願は、一態様では、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体(本明細書で「HPV16−E7/MHCクラスI複合体」または「E7MC」と呼ぶ)に結合する構築物(例えば、単離された構築物)を提供する。一部の実施形態では、構築物(「抗E7MC構築物」)は、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分(本明細書で「抗E7MC抗体部分」と呼ぶ)を含む。 The application, in one aspect, comprises a construct that binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein (referred to herein as an “HPV16-E7 / MHC class I complex” or “E7MC”) (eg, Isolated constructs). In some embodiments, the construct (“anti-E7MC construct”) comprises an antibody moiety that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein (referred to herein as an “anti-E7MC antibody moiety”). Call).
したがって、一部の実施形態では、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含む抗E7MC構築物(例えば、単離された抗E7MC構築物)が提供される。一部の実施形態では、HPV16−E7/MHCクラスI複合体は、細胞表面上に存在する。一部の実施形態では、HPV16−E7/MHCクラスI複合体は、がん細胞の表面上に存在する。 Accordingly, in some embodiments, an anti-E7MC construct (eg, an isolated anti-E7MC construct) comprising an antibody moiety that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein is provided. . In some embodiments, the HPV16-E7 / MHC class I complex is present on the cell surface. In some embodiments, the HPV16-E7 / MHC class I complex is present on the surface of a cancer cell.
一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含み、このMHCクラスIタンパク質は、HLA−Aである。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A02である。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A02対立遺伝子のHLA−A*02:01サブタイプである。
In some embodiments, the anti-E7MC construct comprises an antibody moiety that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, wherein the MHC class I protein is HLA-A. In some embodiments, the MHC class I protein is HLA-A02. In some embodiments, the MHC class I protein is the HLA-
一部の実施形態では、上記抗E7MC構築物(例えば、単離された抗E7MC構築物)のいずれかによれば、抗E7MC構築物は、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含み、この抗体部分は、HPV16−E7ペプチド、およびMHCクラスIタンパク質とは異なるHLA対立遺伝子を有する第2のMHCクラスIタンパク質を含む複合体と交差反応する。一部の実施形態では、抗体部分は、1つのアミノ酸置換(例えば、保存的アミノ酸置換)を含むHPV16−E7ペプチドのバリアントおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体と交差反応する。 In some embodiments, according to any of the anti-E7MC constructs (eg, isolated anti-E7MC constructs), the anti-E7MC construct is specific for a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein. This antibody portion cross-reacts with a complex comprising an HPV16-E7 peptide and a second MHC class I protein having an HLA allele different from the MHC class I protein. In some embodiments, the antibody portion cross-reacts with a complex comprising a variant of HPV16-E7 peptide comprising one amino acid substitution (eg, a conservative amino acid substitution) and an MHC class I protein.
一部の実施形態では、上記抗E7MC構築物(例えば、単離された抗E7MC構築物)のいずれかによれば、抗E7MC構築物は、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含み、このHPV16−E7ペプチドは、約8〜約12(例えば、約8、9、10、11または12のいずれか)アミノ酸長である。一部の実施形態では、HPV16−E7ペプチドは、配列番号3〜14からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、HPV16−E7ペプチドは、アミノ酸配列YMLDLQPET(配列番号4)を有する。 In some embodiments, according to any of the anti-E7MC constructs (eg, isolated anti-E7MC constructs), the anti-E7MC construct is specific for a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein. The HPV16-E7 peptide is from about 8 to about 12 (eg, any of about 8, 9, 10, 11 or 12) amino acids in length. In some embodiments, the HPV16-E7 peptide has an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 3-14. In some embodiments, the HPV16-E7 peptide has the amino acid sequence YMLDLQPET (SEQ ID NO: 4).
一部の実施形態では、上記抗E7MC構築物(例えば、単離された抗E7MC構築物)のいずれかによれば、抗E7MC構築物は、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含み、この抗体部分は、全長抗体、Fab、Fab’、(Fab’)2、Fvまたは単鎖Fv(scFv)である。一部の実施形態では、抗体部分は、完全にヒト、ヒト抗体フレームワーク領域を伴って半合成、またはヒト化である。 In some embodiments, according to any of the anti-E7MC constructs (eg, isolated anti-E7MC constructs), the anti-E7MC construct is specific for a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein. The antibody portion is a full length antibody, Fab, Fab ′, (Fab ′) 2, Fv or single chain Fv (scFv). In some embodiments, the antibody portion is fully human, semi-synthetic with a human antibody framework region, or humanized.
一部の実施形態では、上記抗E7MC構築物(例えば、単離された抗E7MC構築物)のいずれかによれば、抗E7MC構築物は、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含み、この抗体部分は、約0.1pM〜約500nMの間(例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約0.1pM、1.0pM、10pM、50pM、100pM、500pM、1nM、10nM、50nM、100nMまたは500nMのいずれか)の平衡解離定数(Kd)で、HPV16−E7/MHCクラスI複合体に結合する。一部の実施形態では、単離された抗E7MC構築物は、約0.1pM〜約500nMの間(例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約0.1pM、1.0pM、10pM、50pM、100pM、500pM、1nM、10nM、50nM、100nMまたは500nMのいずれか)のKdで、HPV16−E7/MHCクラスI複合体に結合する。 In some embodiments, according to any of the anti-E7MC constructs (eg, isolated anti-E7MC constructs), the anti-E7MC construct is specific for a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein. Wherein the antibody moiety is between about 0.1 pM and about 500 nM (eg, including any range between these values, including about 0.1 pM, 1.0 pM, 10 pM, 50 pM Bind to the HPV16-E7 / MHC class I complex with an equilibrium dissociation constant (K d ) of 100 pM, 500 pM, 1 nM, 10 nM, 50 nM, 100 nM or 500 nM). In some embodiments, the isolated anti-E7MC construct is between about 0.1 pM and about 500 nM (eg, including any range between these values, including about 0.1 pM, 1.0 pM, It binds to the HPV16-E7 / MHC class I complex with a Kd of 10 pM, 50 pM, 100 pM, 500 pM, 1 nM, 10 nM, 50 nM, 100 nM or 500 nM).
一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含み、この抗体部分は、i)G−F/G/Y−S/T−F−S/T−S−Y−A/G(配列番号183)のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域(HC−CDR)1、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、I−N/I−P−X−X−G−G/T/I−T/A/PもしくはI−S−X−S/D−G/N−G/S−N−T/I/K(配列番号184もしくは185)のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびA−R−S/R−Y/S/G−Y/V−Y/W−G−X−Y−D、A−R−G−X−X−X−Y−Y/G/SもしくはA−R−G−X−X−Y−Q/W−W−S−X−D−D(配列番号186〜188)のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびにii)N−I−G−S−N/KもしくはL−R−S/N−X−Y(配列番号189もしくは190)のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域(LC−CDR)1、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびA/Q/N−S/A/V−W/Y/R−D−S/D−S−L/S/G−X−X−X−V(配列番号191)のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含み、ここで、Xは任意のアミノ酸であり得る。 In some embodiments, the anti-E7MC construct comprises an antibody portion that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, the antibody portion comprising i) GF / G / Y A heavy chain complementarity determining region (HC-CDR) 1 comprising the amino acid sequence of S / TFS / TSYA / G (SEQ ID NO: 183), or up to about 3 (eg, about Any of 1, 2 or 3) variants thereof comprising amino acid substitutions, I / N / I-X-X-G-G / T / IT-A / P or I-S-X-S HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of / DG / NG / SNT / I / K (SEQ ID NO: 184 or 185), or up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) Or) variants thereof containing amino acid substitutions, and ARS / RY S / G-Y / V-Y / W-G-X-Y-D, A-R-G-X-X-X-Y-Y / G / S or A-R-G-X-X- HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of YQ / WWSXDD (SEQ ID NO: 186-188), or up to about 3 (eg, about 1, 2 or 3 Any) a heavy chain variable domain comprising a variant thereof containing amino acid substitutions; and ii) NIGGSN / K or LRS / NXY (SEQ ID NO: 189 or 190) A light chain complementarity determining region (LC-CDR) 1 comprising the amino acid sequence of or a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids, and A / Q / N -S / A / VW / Y / RDS / DSSL / S / GXXXXV (SEQ ID NO: 91) or a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids, wherein X is It can be any amino acid.
一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含み、この抗体部分は、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)HC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)HC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)HC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)LC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)LC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)LC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC construct comprises an antibody portion that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, the antibody portion comprising i) any of SEQ ID NOs: 57-77. HC-CDR1 comprising one amino acid sequence (or consisting thereof) or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids HC-CDR2 comprising (consisting of in some embodiments) any one of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 78-98, or up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) ) Its variants, including amino acid substitutions, and the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 99-119, 244, and 245 (in some embodiments, HC-CDR3, or a heavy chain variable domain comprising a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and ii) SEQ ID NOs 120-140 LC-CDR1 comprising (and in some embodiments consisting of) any one amino acid sequence, or up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions LC-CDR2 comprising (consisting in some embodiments) an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 141-161, or up to about 3 (eg, any of about 1, 2, or 3) ) Including variants thereof including amino acid substitutions, and amino acid sequences of any one of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250 (some embodiments) In consists) LC-CDR3 or at most about 5, (e.g., a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising substitution of one) amino acids from about 1, 2, 3, 4 or 5.
一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含み、この抗体部分は、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)HC−CDR2、および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)HC−CDR3を含む(一部の実施形態ではそれらからなる)重鎖可変ドメイン;またはHC−CDR領域中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)LC−CDR1、配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)LC−CDR2、および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)LC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン;またはLC−CDR領域中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC construct comprises an antibody portion that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, the antibody portion comprising i) any of SEQ ID NOs: 57-77. HC-CDR1 comprising any one amino acid sequence, HC-CDR2 comprising (in some embodiments consisting of) any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98, and SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245 A heavy chain variable domain comprising (in some embodiments consisting of) HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence; or up to about 5 in the HC-CDR region; (Eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) variants thereof comprising amino acid substitutions; and ii) SEQ ID NOs 120- LC-CDR1 comprising any one amino acid sequence of 40 and 246 (consisting in some embodiments), comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 141-161 (consisting in some embodiments) A light chain variable domain comprising LC-CDR2, and LC-CDR3 comprising (consisting of in some embodiments) any one of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250; or in the LC-CDR region It includes variants thereof containing up to about 5 (eg, about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含み、この抗体部分は、a)配列番号15〜35および233〜237のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)重鎖可変ドメインまたは配列番号15〜35および233〜237のいずれか1つに対して少なくとも約95%(例えば、少なくとも約95%、96%、97%、98%または99%のいずれか)の配列同一性を有するそのバリアント;およびb)配列番号36〜56および238〜243のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)軽鎖可変ドメインまたは配列番号36〜56および238〜243のいずれか1つに対して少なくとも約95%(例えば、少なくとも約95%、96%、97%、98%または99%のいずれか)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗体部分は、配列番号15〜35および233〜237のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)重鎖可変ドメインおよび配列番号36〜56および238〜243のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC construct comprises an antibody portion that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein, the antibody portion comprising a) SEQ ID NOs: 15-35 and 233. A heavy chain variable domain comprising any one of the amino acid sequences of ~ 237 or consisting of any one of SEQ ID NOs: 15-35 and 233-237 (e.g., Including variants thereof having at least about 95%, 96%, 97%, 98% or 99% sequence identity; and b) any one of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 36-56 and 238-243 A light chain variable domain (consisting of in some embodiments) or any one of SEQ ID NOs: 36-56 and 238-243 At least about 95% (e.g., at least about 95%, 96%, 97%, 98% or 99% or) a variant thereof having a sequence identity. In some embodiments, the antibody portion comprises a heavy chain variable domain (consisting in some embodiments) of any one of SEQ ID NOs: 15-35 and 233-237 and SEQ ID NOs: 36-56 and A light chain variable domain comprising (consisting of in some embodiments) an amino acid sequence of any one of 238-243.
一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、標的HPV16−E7/MHCクラスI複合体への結合について、上記抗体部分のいずれかに従い第2の抗体部分と競合する第1の抗体部分を含む。一部の実施形態では、第1の抗体部分は、第2の抗体部分と同じ、または実質的に同じエピトープに結合する。一部の実施形態では、標的HPV16−E7/MHCクラスI複合体への第1の抗体部分の結合は、標的HPV16−E7/MHCクラスI複合体への第2の抗体部分の結合を、少なくとも約70%(例えば、少なくとも約75%、80%、85%、90%、95%、98%または99%のいずれか)阻害し、または逆もまた同様である。一部の実施形態では、第1の抗体部分および第2の抗体部分は、標的HPV16−E7/MHCクラスI複合体への結合について交差競合する、即ち、第1および第2の抗体部分の各々は、標的HPV16−E7/MHCクラスI複合体への結合について他方と競合する。 In some embodiments, the anti-E7MC construct comprises a first antibody portion that competes with a second antibody portion according to any of the above antibody portions for binding to a target HPV16-E7 / MHC class I complex. In some embodiments, the first antibody portion binds to the same or substantially the same epitope as the second antibody portion. In some embodiments, binding of the first antibody moiety to the target HPV16-E7 / MHC class I complex comprises at least binding of the second antibody moiety to the target HPV16-E7 / MHC class I complex. Inhibits about 70% (eg, at least about 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% or 99%), or vice versa. In some embodiments, the first antibody portion and the second antibody portion cross-compete for binding to the target HPV16-E7 / MHC class I complex, ie, each of the first and second antibody portions. Competes with the other for binding to the target HPV16-E7 / MHC class I complex.
一部の実施形態では、上記抗E7MC構築物(例えば、単離された抗E7MC構築物)のいずれかによれば、単離された抗E7MC構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、単離された抗E7MC構築物は、単一特異的である。一部の実施形態では、単離された抗E7MC構築物は、多特異的である。一部の実施形態では、単離された抗E7MC構築物は、二重特異的である。一部の実施形態では、単離された抗E7MC分子は、タンデムscFv、ダイアボディ(diabody)(Db)、単鎖ダイアボディ(scDb)、二重親和性再標的化(dual−affinity retargeting)(DART)抗体、二重可変ドメイン(DVD)抗体、ノブ−イントゥ−ホール(knob−into−hole)(KiH)抗体、ドックアンドロック(dock and lock)(DNL)抗体、化学架橋抗体、ヘテロマルチマー抗体またはヘテロコンジュゲート抗体である。一部の実施形態では、単離された抗E7MC構築物は、ペプチドリンカーによって連結された2つのscFvを含むタンデムscFvである。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列GGGGSを含む(一部の実施形態ではそれからなる)。 In some embodiments, according to any of the anti-E7MC constructs (eg, isolated anti-E7MC construct), the isolated anti-E7MC construct is a full-length antibody. In some embodiments, the isolated anti-E7MC construct is monospecific. In some embodiments, the isolated anti-E7MC construct is multispecific. In some embodiments, the isolated anti-E7MC construct is bispecific. In some embodiments, the isolated anti-E7MC molecule is a tandem scFv, diabody (Db), single chain diabody (scDb), dual-affinity retargeting ( DART) antibody, double variable domain (DVD) antibody, knob-into-hole (KiH) antibody, dock and lock (DNL) antibody, chemically cross-linked antibody, heteromultimeric antibody Or a heteroconjugate antibody. In some embodiments, the isolated anti-E7MC construct is a tandem scFv comprising two scFvs linked by a peptide linker. In some embodiments, the peptide linker comprises (consists of in some embodiments) the amino acid sequence GGGGS.
一部の実施形態では、上記抗E7MC構築物(例えば、単離された抗E7MC構築物)のいずれかによれば、抗E7MC構築物は、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含み、この単離された抗E7MC構築物は、第2の抗原に特異的に結合する第2の抗原結合部分(antigen−binding moiety)をさらに含む。一部の実施形態では、第2の抗原結合部分は、抗体部分である。一部の実施形態では、第2の抗原は、T細胞の表面上の抗原である。一部の実施形態では、T細胞は、細胞傷害性T細胞、ヘルパーT細胞およびナチュラルキラーT細胞からなる群から選択される。一部の実施形態では、第2の抗原は、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ、CD28、OX40、GITR、CD137、CD27、CD40LおよびHVEMからなる群から選択される。一部の実施形態では、第2の抗原はCD3εであり、単離された抗E7MC構築物は、HPV16−E7/MHCクラスI複合体に特異的なN末端scFvおよびCD3εに特異的なC末端scFvを含むタンデムscFvである。一部の実施形態では、第2の抗原は、ナチュラルキラー細胞、好中球、単球、マクロファージまたは樹状細胞の表面上の抗原である。 In some embodiments, according to any of the anti-E7MC constructs (eg, isolated anti-E7MC constructs), the anti-E7MC construct is specific for a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein. The isolated anti-E7MC construct further comprises a second antigen-binding moiety that specifically binds to a second antigen. In some embodiments, the second antigen binding portion is an antibody portion. In some embodiments, the second antigen is an antigen on the surface of a T cell. In some embodiments, the T cells are selected from the group consisting of cytotoxic T cells, helper T cells, and natural killer T cells. In some embodiments, the second antigen is selected from the group consisting of CD3γ, CD3δ, CD3ε, CD3ζ, CD28, OX40, GITR, CD137, CD27, CD40L and HVEM. In some embodiments, the second antigen is CD3ε and the isolated anti-E7MC construct is an N-terminal scFv specific for HPV16-E7 / MHC class I complex and a C-terminal scFv specific for CD3ε. Is a tandem scFv. In some embodiments, the second antigen is an antigen on the surface of natural killer cells, neutrophils, monocytes, macrophages or dendritic cells.
一部の実施形態では、上記抗E7MC構築物(例えば、単離された抗E7MC構築物)のいずれかによれば、抗E7MC構築物は、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含み、この単離された抗E7MC構築物は、キメラ抗原受容体(CAR)である。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体は、抗体部分を含む細胞外ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、CD3ζ細胞内シグナル伝達配列および共刺激シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達配列は、CD28細胞内シグナル伝達配列である。 In some embodiments, according to any of the anti-E7MC constructs (eg, isolated anti-E7MC constructs), the anti-E7MC construct is specific for a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein. This isolated anti-E7MC construct comprising an antibody moiety that binds to is a chimeric antigen receptor (CAR). In some embodiments, the chimeric antigen receptor comprises an extracellular domain comprising an antibody portion, a transmembrane domain, and an intracellular signaling domain. In some embodiments, the intracellular signaling domain comprises a CD3ζ intracellular signaling sequence and a costimulatory signaling sequence. In some embodiments, the costimulatory signaling sequence is a CD28 intracellular signaling sequence.
一部の実施形態では、上記抗E7MC構築物(例えば、単離された抗E7MC構築物)のいずれかによれば、抗E7MC構築物は、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含み、この単離された抗E7MC構築物は、抗体部分およびエフェクター分子を含むイムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、エフェクター分子は、薬物、毒素、放射性同位体、タンパク質、ペプチドおよび核酸からなる群から選択される治療剤である。一部の実施形態では、治療剤は、薬物または毒素である。一部の実施形態では、エフェクター分子は、標識である。 In some embodiments, according to any of the anti-E7MC constructs (eg, isolated anti-E7MC constructs), the anti-E7MC construct is specific for a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein. The isolated anti-E7MC construct is an immunoconjugate comprising an antibody moiety and an effector molecule. In some embodiments, the effector molecule is a therapeutic agent selected from the group consisting of drugs, toxins, radioisotopes, proteins, peptides and nucleic acids. In some embodiments, the therapeutic agent is a drug or toxin. In some embodiments, the effector molecule is a label.
さらに他の実施形態では、上記実施形態のいずれかに従う抗E7MC構築物(例えば、単離された抗E7MC構築物)を含む医薬組成物が提供される。一部の実施形態では、医薬組成物は、抗E7MC構築物と会合した細胞(例えば、エフェクター細胞)をさらに含む。一部の実施形態では、抗E7MC構築物またはそのポリペプチド成分を発現するまたはそれと会合した宿主細胞が提供される。一部の実施形態では、抗E7MC構築物またはそのポリペプチド成分をコードする核酸が提供される。一部の実施形態では、この核酸を含むベクターが提供される。一部の実施形態では、抗E7MC構築物を発現するまたはそれと会合したエフェクター細胞が提供される。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、T細胞である。 In still other embodiments, pharmaceutical compositions comprising an anti-E7MC construct (eg, an isolated anti-E7MC construct) according to any of the above embodiments are provided. In some embodiments, the pharmaceutical composition further comprises cells (eg, effector cells) associated with the anti-E7MC construct. In some embodiments, host cells that express or are associated with an anti-E7MC construct or polypeptide component thereof are provided. In some embodiments, a nucleic acid encoding an anti-E7MC construct or a polypeptide component thereof is provided. In some embodiments, a vector comprising the nucleic acid is provided. In some embodiments, effector cells that express or are associated with an anti-E7MC construct are provided. In some embodiments, the effector cell is a T cell.
一部の実施形態では、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体をその表面上に提示する細胞を検出する方法であって、細胞を、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分ならびにb)標識を含む、上記実施形態のいずれかに従う抗E7MC構築物(例えば、単離された抗E7MC構築物)と接触させるステップ、ならびに細胞上の標識の存在を検出するステップを含む方法が提供される。 In some embodiments, a method of detecting a cell presenting on its surface a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein comprising the steps of: a) HPV16-E7 peptide and MHC class I protein Contacting an anti-E7MC construct (eg, an isolated anti-E7MC construct) according to any of the above embodiments comprising an antibody moiety that specifically binds to a complex comprising: b) a label, and a label on the cell A method is provided that includes detecting the presence of.
一部の実施形態では、HPV16−E7陽性疾患を有する個体を処置する方法であって、個体に、有効量の、上記実施形態のいずれかに従う抗E7MC構築物(例えば、単離された抗E7MC構築物)を含む医薬組成物を投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、医薬組成物は、単離された抗E7MC構築物と会合した細胞(例えば、エフェクター細胞)をさらに含む。一部の実施形態では、HPV16−E7陽性疾患を有する個体を処置する方法であって、個体に、有効量の、上記抗E7MC CARのいずれかを発現するエフェクター細胞を投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、T細胞である。一部の実施形態では、HPV16−E7陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、扁平上皮細胞癌、子宮頸がん、肛門がん、膣がん、外陰部がん、陰茎がん、頭頸部がんまたは中咽頭がんである。一部の実施形態では、がんは、HPV16−E7陽性扁平上皮細胞癌(SCC)である。 In some embodiments, a method of treating an individual having an HPV16-E7 positive disease, wherein the individual is treated with an effective amount of an anti-E7MC construct according to any of the above embodiments (eg, an isolated anti-E7MC construct). A method comprising administering a pharmaceutical composition comprising In some embodiments, the pharmaceutical composition further comprises cells (eg, effector cells) associated with the isolated anti-E7MC construct. In some embodiments, a method of treating an individual having an HPV16-E7 positive disease, comprising administering to the individual an effective amount of an effector cell expressing any of the anti-E7MC CARs. Provided. In some embodiments, the effector cell is a T cell. In some embodiments, the HPV 16-E7 positive disease is cancer. In some embodiments, the cancer is squamous cell carcinoma, cervical cancer, anal cancer, vaginal cancer, vulvar cancer, penile cancer, head and neck cancer or oropharyngeal cancer. In some embodiments, the cancer is HPV16-E7 positive squamous cell carcinoma (SCC).
一部の実施形態では、HPV16−E7陽性疾患を有する個体を診断する方法であって、a)有効量の上記実施形態のいずれかに従う標識を含む単離された抗E7MC構築物を個体に投与するステップ;およびb)個体における標識のレベルを決定するステップであって、閾値レベルを上回る標識のレベルは、個体がHPV16−E7陽性疾患を有することを示す、ステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、HPV16−E7陽性疾患を有する個体を診断する方法であって、a)個体に由来する試料を、上記実施形態のいずれかに従う標識を含む単離された抗E7MC構築物と接触させるステップ;およびb)試料中の、単離された抗E7MC構築物と結合した細胞の数を決定するステップであって、閾値レベルを上回る、単離された抗E7MC構築物と結合した細胞の数の値は、個体がHPV16−E7陽性疾患を有することを示す、ステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、HPV16−E7陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、扁平上皮細胞癌、子宮頸がん、肛門がん、膣がん、外陰部がん、陰茎がん、頭頸部がんまたは中咽頭がんである。一部の実施形態では、がんは、HPV16−E7陽性扁平上皮細胞癌(SCC)である。 In some embodiments, a method of diagnosing an individual having an HPV16-E7 positive disease, wherein a) an isolated amount of an isolated anti-E7MC construct comprising a label according to any of the above embodiments is administered to the individual. And b) determining the level of labeling in the individual, wherein a level of labeling above the threshold level indicates that the individual has an HPV16-E7 positive disease. In some embodiments, a method of diagnosing an individual having an HPV16-E7 positive disease, wherein a) a sample from the individual is isolated with an isolated anti-E7MC construct comprising a label according to any of the above embodiments And b) determining the number of cells bound to the isolated anti-E7MC construct in the sample, the number of cells bound to the isolated anti-E7MC construct above a threshold level. A value of is provided that includes the step of indicating that the individual has an HPV16-E7 positive disease. In some embodiments, the HPV 16-E7 positive disease is cancer. In some embodiments, the cancer is squamous cell carcinoma, cervical cancer, anal cancer, vaginal cancer, vulvar cancer, penile cancer, head and neck cancer or oropharyngeal cancer. In some embodiments, the cancer is HPV16-E7 positive squamous cell carcinoma (SCC).
本明細書に記載される構築物のいずれかを作製する方法、本明細書に記載される方法に適切な製造物品およびキットもまた提供される。 Also provided are methods of making any of the constructs described herein, articles of manufacture and kits suitable for the methods described herein.
本出願は、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体(本明細書で「HPV16−E7/MHCクラスI複合体」または「E7MC」と呼ぶ)に特異的に結合する抗体部分(本明細書で「抗E7MC抗体部分」と呼ぶ)を含む単離された構築物(本明細書で「抗E7MC構築物」と呼ぶ)を提供する。抗E7MC構築物は、HPV16−E7を発現する細胞の表面上のHPV16−E7/MHCクラスI複合体、例えば、MHC−提示HPV16−E7ペプチドを特異的に認識する。抗E7MC構築物は、複合体中のHPV16−E7ペプチドのN末端部分、C末端部分もしくは中央部分に特異的に結合し得、ならびに/またはHPV16−E7ペプチドおよび異なるサブタイプのMHCクラスIタンパク質を含む少なくとも1つの複合体と交差反応し得る(例えば、抗E7MC構築物は、HPV16−E7ペプチド/HLA−A*02:01複合体およびHPV16−E7ペプチド/HLA−A*02:02複合体の両方に結合する)。抗E7MC構築物は、E7MC提示細胞(即ち、MHC分子に結合したHPV16−E7ペプチドをその表面上に提示している細胞)、例えば、HPV16−E7を発現する疾患細胞の特異的標的化を可能にする。この戦略は、E7MC提示細胞を特異的に標的化できない、HPV16−E7タンパク質に対する抗体の使用に勝る、重要な技術的利点を提供する。さらに、抗E7MC抗体部分は、検出可能な部分に融合させた場合、循環HPV16−E7レベルよりも潜在的により関連する疾患進行の尺度である、E7MC提示細胞の数および分布の変化に対する高い感受性を有する、HPV16−E7陽性疾患または障害の診断および予後判定を可能にする。 The present application relates to an antibody moiety that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein (referred to herein as an “HPV16-E7 / MHC class I complex” or “E7MC”). Provided is an isolated construct (referred to herein as an “anti-E7MC construct”) comprising an “anti-E7MC antibody portion”). The anti-E7MC construct specifically recognizes an HPV16-E7 / MHC class I complex, eg, an MHC-presenting HPV16-E7 peptide, on the surface of a cell expressing HPV16-E7. The anti-E7MC construct can specifically bind to the N-terminal part, C-terminal part or central part of the HPV16-E7 peptide in the complex and / or comprises HPV16-E7 peptide and different subtypes of MHC class I proteins Can cross-react with at least one complex (eg, the anti-E7MC construct is HPV16-E7 peptide / HLA-A * 02:01 complex and HPV16-E7 peptide / HLA-A * Binds both to the 02:02 complex). Anti-E7MC constructs allow specific targeting of E7MC-presenting cells (ie, cells presenting HPV16-E7 peptides bound to MHC molecules on their surface), eg, disease cells expressing HPV16-E7 To do. This strategy offers significant technical advantages over the use of antibodies against HPV16-E7 protein that cannot specifically target E7MC presenting cells. Furthermore, the anti-E7MC antibody portion, when fused to a detectable moiety, is more sensitive to changes in the number and distribution of E7MC presenting cells, a measure of disease progression that is potentially more relevant than circulating HPV16-E7 levels. Allows diagnosis and prognosis of HPV16-E7 positive disease or disorder.
ファージディスプレイテクノロジーを使用して、本発明者らは、HPV16−E7 11−19ペプチド/HLA−A*02:01複合体に対して特異的で高い親和性の複数のモノクローナル抗体を生成した。フローサイトメトリーおよびT細胞媒介性細胞傷害性アッセイにより、抗体が、HPV16−E7およびHLA−A*02:01拘束された様式で、HPV16−E7ペプチドパルスしたT2細胞を認識することが実証された。抗体は、抗CD3二重特異的抗体として強化される場合、HPV16−E7陽性およびHLA−A*02:01陽性の標的細胞を死滅させるように、ヒトT細胞を再指向させた。本明細書に示されるデータは、HLA複合体との関連でのHPV16−E7ペプチドに対する抗体が、固形腫瘍適応症などのがん適応症に対する有効な治療剤であり得ることを実証している。
Using phage display technology, we generated multiple monoclonal antibodies that were specific and high affinity for the HPV16-E7 11-19 peptide / HLA-
したがって、本出願は、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含む構築物(例えば、単離された構築物)を提供する。構築物は、例えば、全長抗E7MC抗体、多特異的抗E7MC分子(例えば、二重特異的抗E7MC抗体)、抗E7MCキメラ抗原受容体(「CAR」)または抗E7MCイムノコンジュゲートであり得る。 Accordingly, the application provides a construct (eg, an isolated construct) that includes an antibody portion that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein. The construct can be, for example, a full-length anti-E7MC antibody, a multispecific anti-E7MC molecule (eg, a bispecific anti-E7MC antibody), an anti-E7MC chimeric antigen receptor (“CAR”) or an anti-E7MC immunoconjugate.
別の態様では、抗E7MC構築物、またはこれらの構築物の抗E7MC抗体部分の一部分をコードする核酸が提供される。 In another aspect, nucleic acids encoding anti-E7MC constructs or portions of the anti-E7MC antibody portion of these constructs are provided.
別の態様では、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗体部分を含む抗E7MC構築物を含む組成物が提供される。組成物は、抗E7MC構築物または抗E7MC構築物を発現するもしくはそれと会合したエフェクター細胞(例えば、抗E7MC CARを発現するT細胞)を含む医薬組成物であり得る。 In another aspect, a composition comprising an anti-E7MC construct comprising an antibody moiety that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein is provided. The composition can be a pharmaceutical composition comprising an anti-E7MC construct or an effector cell that expresses or is associated with an anti-E7MC construct (eg, a T cell that expresses an anti-E7MC CAR).
処置または診断目的のための抗E7MC構築物(または抗E7MC構築物を発現するもしくはそれと会合した細胞)を作製および使用する方法、ならびにかかる方法に有用なキットおよび製造物品もまた提供される。 Also provided are methods of making and using anti-E7MC constructs (or cells expressing or associated with anti-E7MC constructs) for treatment or diagnostic purposes, and kits and articles of manufacture useful for such methods.
定義
本明細書で使用する場合、「処置」または「処置する」は、臨床結果を含む有益なまたは所望の結果を得るためのアプローチである。本発明の目的のために、有益なまたは所望の臨床結果には、以下のうち1または複数が含まれるがこれらに限定されない:疾患から生じる1もしくは複数の症状を軽減すること、疾患の程度を弱めること、疾患を安定化すること(例えば、疾患の悪化を防止もしくは遅延させること)、疾患の拡散(例えば、転移)を防止もしくは遅延させること、疾患の再発を防止もしくは遅延させること、疾患の進行を遅延もしくは減速させること、疾患状態を緩和すること、疾患の寛解(部分的もしくは全体的)を提供すること、疾患を処置するために必要とされる1もしくは複数の他の薬物療法の用量を減少させること、疾患の進行を遅延させること、生活の質を増加もしくは改善すること、体重増加を増加させること、および/または生存期間を延長させること。がんの病理学的結果(例えば、腫瘍体積など)の低減もまた、「処置」によって包含される。本発明の方法は、処置のこれらの態様のうちいずれか1または複数を企図する。
Definitions As used herein, “treatment” or “treating” is an approach for obtaining beneficial or desired results, including clinical results. For the purposes of the present invention, beneficial or desired clinical results include, but are not limited to, one or more of the following: reducing one or more symptoms resulting from a disease, the extent of the disease Weakening, stabilizing the disease (eg preventing or delaying the worsening of the disease), preventing or delaying the spread of the disease (eg metastasis), preventing or delaying the recurrence of the disease, Delay or slow down progression, alleviate disease state, provide disease remission (partial or total), dose of one or more other drug therapies needed to treat the disease Reducing disease, delaying disease progression, increasing or improving quality of life, increasing weight gain, and / or extending survival Be. Reduction of cancer pathological consequences (eg, tumor volume, etc.) is also encompassed by “treatment”. The methods of the invention contemplate any one or more of these aspects of treatment.
用語「再発」、「再燃する」または「再燃した」とは、疾患の消失の臨床評価後のがんまたは疾患の復帰を指す。遠隔転移または局所的再発の診断は、再燃とみなされ得る。 The terms “recurrence”, “relapse” or “relapse” refer to the return of cancer or disease after clinical assessment of disease disappearance. Diagnosis of distant metastasis or local recurrence can be considered relapse.
用語「難治性」または「抵抗性」とは、処置に応答していないがんまたは疾患を指す。 The term “refractory” or “resistant” refers to a cancer or disease that has not responded to treatment.
「活性化」とは、T細胞に関連して本明細書で使用する場合、検出可能な細胞増殖を誘導するように十分に刺激されたT細胞の状態を指す。活性化は、誘導されたサイトカイン産生、および検出可能なエフェクター機能とも関連し得る。 “Activation” as used herein in reference to T cells refers to a state of a T cell that is sufficiently stimulated to induce detectable cell proliferation. Activation can also be associated with induced cytokine production and detectable effector function.
用語「抗体部分」は、全長抗体およびその抗原結合断片を含む。全長抗体は、2つの重鎖および2つの軽鎖を含む。軽鎖および重鎖の可変領域は、抗原結合を担う。両方の鎖中の可変領域は、一般に、相補性決定領域(CDR)と呼ばれる3つの高度に可変性のループを含む(LC−CDR1、LC−CDR2およびLC−CDR3を含む軽鎖(LC)CDR、HC−CDR1、HC−CDR2およびHC−CDR3を含む重鎖(HC)CDR)。本明細書に開示される抗体および抗原結合断片についてのCDR境界は、Kabat、ChothiaまたはAl−Lazikaniの慣習によって定義または同定され得る(Al−Lazikani 1997年;Chothia 1985年;Chothia 1987年;Chothia 1989年;Kabat 1987年;Kabat 1991年)。重鎖または軽鎖の3つのCDRは、CDRよりも高度に保存され、超可変ループを支持するための足場を形成する、フレームワーク領域(FR)として公知の隣接ストレッチ間に挟まれている。重鎖および軽鎖の定常領域は、抗原結合に関与しないが、種々のエフェクター機能を示す。抗体は、それらの重鎖の定常領域のアミノ酸配列に基づいてクラスに割り当てられる。抗体の5つの主要なクラスまたはアイソタイプは、それぞれ、α、δ、ε、γおよびμ重鎖の存在を特徴とする、IgA、IgD、IgE、IgGおよびIgMである。いくつかの主要な抗体クラスは、IgG1(γ1重鎖)、IgG2(γ2重鎖)、IgG3(γ3重鎖)、IgG4(γ4重鎖)、IgA1(α1重鎖)またはIgA2(α2重鎖)などのサブクラスへと分割される。 The term “antibody portion” includes full length antibodies and antigen binding fragments thereof. A full-length antibody comprises two heavy chains and two light chains. The variable regions of the light and heavy chains are responsible for antigen binding. The variable regions in both chains generally comprise three highly variable loops called complementarity determining regions (CDRs) (light chain (LC) CDRs comprising LC-CDR1, LC-CDR2 and LC-CDR3). , Heavy chain (HC) CDRs, including HC-CDR1, HC-CDR2 and HC-CDR3). CDR boundaries for the antibodies and antigen-binding fragments disclosed herein can be defined or identified by Kabat, Chothia or Al-Lazikani conventions (Al-Lazikani 1997; Chothia 1985; Chothia 1987; Chothia 1989). Year; Kabat 1987; Kabat 1991). The three CDRs of the heavy or light chain are sandwiched between adjacent stretches known as framework regions (FR), which are more highly conserved than CDRs and form a scaffold to support hypervariable loops. The heavy and light chain constant regions are not involved in antigen binding but exhibit various effector functions. Antibodies are assigned to classes based on the amino acid sequence of the constant region of their heavy chains. The five major classes or isotypes of antibodies are IgA, IgD, IgE, IgG and IgM, respectively, characterized by the presence of α, δ, ε, γ and μ heavy chains. Some major antibody classes are IgG1 (γ1 heavy chain), IgG2 (γ2 heavy chain), IgG3 (γ3 heavy chain), IgG4 (γ4 heavy chain), IgA1 (α1 heavy chain) or IgA2 (α2 heavy chain). And so on.
本明細書で使用する用語「抗原結合断片」とは、例えば、ダイアボディ、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv断片、ジスルフィド安定化Fv断片(dsFv)、(dsFv)2、二重特異的dsFv(dsFv−dsFv’)、ジスルフィド安定化ダイアボディ(dsダイアボディ)、単鎖抗体分子(scFv)、scFvダイマー(二価ダイアボディ)、1もしくは複数のCDRを含む抗体の一部分から形成された多特異的抗体、ラクダ化(camelized)単一ドメイン抗体、ナノボディ(nanobody)、ドメイン抗体、二価ドメイン抗体、または抗原に結合するが完全な抗体構造を含まない任意の他の抗体断片を含む抗体断片を指す。抗原結合断片は、親抗体または親抗体断片(例えば、親scFv)が結合する同じ抗原に結合することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合断片は、1または複数の異なるヒト抗体由来のフレームワーク領域にグラフトされた、特定のヒト抗体由来の1または複数のCDRを含み得る。 As used herein, the term “antigen-binding fragment” includes, for example, diabody, Fab, Fab ′, F (ab ′) 2, Fv fragment, disulfide stabilized Fv fragment (dsFv), (dsFv) 2, two From a portion of an antibody comprising a bispecific dsFv (dsFv-dsFv ′), a disulfide stabilized diabody (ds diabody), a single chain antibody molecule (scFv), an scFv dimer (bivalent diabody), one or more CDRs Multispecific antibody formed, camelized single domain antibody, nanobody, domain antibody, bivalent domain antibody, or any other antibody fragment that binds antigen but does not contain complete antibody structure An antibody fragment comprising The antigen-binding fragment can bind to the same antigen to which the parent antibody or parent antibody fragment (eg, parent scFv) binds. In some embodiments, the antigen-binding fragment can comprise one or more CDRs from a particular human antibody grafted to a framework region from one or more different human antibodies.
本明細書で使用する用語「エピトープ」とは、抗体または抗体部分が結合する抗原上の原子またはアミノ酸の特定の群を指す。2つの抗体または抗体部分は、それらが抗原について競合的な結合を示す場合、その抗原内の同じエピトープを結合し得る。 The term “epitope” as used herein refers to a particular group of atoms or amino acids on an antigen to which an antibody or antibody portion binds. Two antibodies or antibody portions can bind the same epitope within an antigen if they exhibit competitive binding for the antigen.
本明細書で使用する場合、第1の抗体部分が、等モル濃度の第1の抗体部分の存在下で、第2の抗体部分の標的E7MC結合を、少なくとも約50%(例えば、少なくとも約55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%または99%のいずれか)阻害する場合、第1の抗体部分は、標的E7MCへの結合について第2の抗体部分と「競合する」、または逆もまた同様である。それらの交差競合に基づいて抗体を「ビニングする」ためのハイスループットプロセスは、PCT公開番号WO03/48731に記載されている。 As used herein, the first antibody moiety has at least about 50% (eg, at least about 55%) target E7MC binding of the second antibody moiety in the presence of an equimolar concentration of the first antibody moiety. %, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% or 99%) if any, the first antibody moiety is directed against the target E7MC. “Compete” with the second antibody moiety for binding, or vice versa. A high-throughput process for “binning” antibodies based on their cross-competition is described in PCT Publication No. WO 03/48731.
本明細書で使用する場合、用語「特異的に結合する」または「〜に特異的である」とは、生物学的分子を含む分子の不均一な集団の存在下で標的の存在を決定する、測定可能で再現性のある相互作用、例えば、標的と抗体または抗体部分との間の結合を指す。例えば、標的(これは、エピトープであり得る)に特異的に結合する抗体または抗体部分は、より高い親和性、アビディティで、より容易に、および/または他の標的へのその結合よりも長い持続時間で、この標的を結合する抗体または抗体部分である。一部の実施形態では、抗原に特異的に結合する抗体または抗体部分は、他の標的に対するその結合親和性の少なくとも約10倍である結合親和性で、抗原(例えば、HPV16−E7ペプチド/MHCクラスIタンパク質複合体)の1または複数の抗原決定基と反応する。 As used herein, the term “specifically binds” or “specific for” determines the presence of a target in the presence of a heterogeneous population of molecules, including biological molecules. , Refers to measurable and reproducible interactions, such as binding between a target and an antibody or antibody portion. For example, an antibody or antibody portion that specifically binds to a target (which may be an epitope) has a higher affinity, avidity, easier and / or longer persistence than its binding to other targets The antibody or antibody portion that binds this target in time. In some embodiments, an antibody or antibody portion that specifically binds an antigen has an antigen (eg, HPV16-E7 peptide / MHC) with a binding affinity that is at least about 10 times its binding affinity for other targets. Reacts with one or more antigenic determinants of a class I protein complex).
本明細書で使用する「単離された」抗E7MC構築物とは、(1)天然に見出されるタンパク質と関連しない、(2)同じ供給源由来の他のタンパク質を含まない、(3)異なる種由来の細胞によって発現される、または(4)天然に存在しない、抗E7MC構築物を指す。 As used herein, an “isolated” anti-E7MC construct is (1) not associated with a protein found in nature, (2) free of other proteins from the same source, (3) different species Refers to an anti-E7MC construct that is expressed by the cell from which it is derived, or (4) is not naturally occurring.
本明細書で使用する用語「単離された核酸」は、「単離された核酸」が、その起源によって、(1)「単離された核酸」が天然に見出されるポリヌクレオチドの全てもしくは一部分と関連しない、(2)天然では関連しないポリヌクレオチドに作動可能に連結した、または(3)より大きい配列の一部として天然では生じない、ゲノム、cDNAもしくは合成起源またはそれらのある組合せの核酸を意味することを意図する。 As used herein, the term “isolated nucleic acid” refers to an “isolated nucleic acid”, depending on its origin, (1) all or part of a polynucleotide in which the “isolated nucleic acid” is found in nature. (2) a nucleic acid of genomic, cDNA or synthetic origin or some combination thereof that is (2) operably linked to a non-naturally relevant polynucleotide, or (3) does not naturally occur as part of a larger sequence. Intended to mean.
本明細書で使用する場合、用語「CDR」または「相補性決定領域」は、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内に見出される非連続的な抗原結合部位(antigen combining site)を意味することを意図する。これらの特定の領域は、Kabatら、J. Biol. Chem. 252巻:6609〜6616頁(1977年);Kabatら、U.S. Dept. of Health and Human Services、「Sequences of proteins of immunological interest」(1991年);Chothiaら、J. Mol. Biol. 196巻:901〜917頁(1987年);およびMacCallumら、J. Mol. Biol. 262巻:732〜745頁(1996年)によって記載されており、ここで、定義は、互いに対して比較した場合の、アミノ酸残基の重複またはサブセットを含む。それにもかかわらず、抗体もしくはグラフト化抗体のCDRまたはそのバリアントを指すためのいずれかの定義の適用は、本明細書で定義および使用される用語の範囲内であることが意図される。上で引用した参考文献の各々によって定義されるCDRを包含するアミノ酸残基は、比較として以下の表1に示される。
用語「キメラ抗体」とは、それらが本発明の生物学的活性を示す限り、重鎖および/または軽鎖の一部分が、特定の種に由来するまたは特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一または相同であるが、鎖(複数可)の残部が、別の種に由来するまたは別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体ならびにかかる抗体の断片中の対応する配列と同一または相同である抗体を指す(米国特許第4,816,567号;およびMorrisonら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、81巻:6851〜6855頁(1984年)を参照のこと)。 The term “chimeric antibody” refers to an antibody in which a portion of the heavy and / or light chain is from a particular species or belongs to a particular antibody class or subclass as long as they exhibit the biological activity of the invention. Same or homologous to the corresponding sequence, but the remainder of the chain (s) is identical or homologous to the corresponding sequence in an antibody from another species or belonging to another antibody class or subclass and fragments of such an antibody (See US Pat. No. 4,816,567; and Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 6851-6855 (1984)).
抗体または抗体部分に関して、用語「半合成」とは、抗体または抗体部分が、1または複数の天然に存在する配列および1または複数の天然に存在しない(即ち、合成)配列を有することを意味する。 With respect to an antibody or antibody portion, the term “semi-synthetic” means that the antibody or antibody portion has one or more naturally occurring sequences and one or more non-naturally occurring (ie, synthetic) sequences. .
「Fv」は、完全な抗原認識部位および抗原結合部位を含む最小抗体断片である。この断片は、緊密に非共有結合的に会合した、1つの重鎖可変領域ドメインおよび1つの軽鎖可変領域ドメインのダイマーからなる。これら2つのドメインの折り畳みから、抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与し、抗体に抗原結合特異性を付与する6つの超可変ループ(各々重鎖および軽鎖由来の3つのループ)が生じる。しかし、単一の可変ドメイン(または抗原に特異的な3つのCDRのみを含むFvの半分)でさえも、結合部位全体よりも低い親和性でではあるが、抗原を認識し結合する能力を有する。 “Fv” is the minimum antibody fragment that contains a complete antigen recognition and binding site. This fragment consists of a dimer of one heavy chain variable region domain and one light chain variable region domain in tight, non-covalent association. The folding of these two domains results in six hypervariable loops (three loops each from heavy and light chains) that contribute to amino acid residues for antigen binding and confer antigen binding specificity to the antibody. However, even a single variable domain (or half of an Fv that contains only three CDRs specific for the antigen) has the ability to recognize and bind to the antigen, albeit with a lower affinity than the entire binding site. .
「sFv」または「scFv」とも略される「単鎖Fv」は、単一のポリペプチド鎖に結合されたVHおよびVL抗体ドメインを含む抗体断片である。一部の実施形態では、scFvポリペプチドは、抗原結合のための所望の構造をscFvが形成できるようにする、VHドメインとVLドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含む。scFvの総説については、Pluckthun、The Pharmacology of Monoclonal Antibodies、113巻、RosenburgおよびMoore編、Springer−Verlag、New York、269〜315頁(1994年)を参照のこと。 “Single-chain Fv”, also abbreviated as “sFv” or “scFv”, is an antibody fragment comprising V H and V L antibody domains linked to a single polypeptide chain. In some embodiments, scFv polypeptides, the desired structure for antigen binding so that scFv can be formed, further comprises a polypeptide linker between the V H and V L domains. For reviews of scFv, see Pluckthun, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Volume 113, edited by Rosenburg and Moore, Springer-Verlag, New York, 269-315 (1994).
用語「ダイアボディ」とは、Vドメインの鎖内対形成ではなく鎖間対形成が達成されて、二価断片、即ち、2つの抗原結合部位を有する断片を生じるように、VHドメインとVLドメインとの間に短いリンカー(例えば、約5〜約10残基)を典型的に有するscFv断片(前の段落を参照のこと)を構築することによって調製される小さい抗体断片を指す。二重特異的ダイアボディは、2つの抗体のVHドメインおよびVLドメインが異なるポリペプチド鎖上に存在する2つの「クロスオーバー」scFv断片のヘテロダイマーである。ダイアボディは、例えば、EP404,097;WO93/11161;およびHollingerら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、90巻:6444〜6448頁(1993年)中により完全に記載されている。 The term “diabody” refers to a V H domain and a V V domain such that interchain pairing is achieved rather than intrachain pairing of the V domain, resulting in a bivalent fragment, ie, a fragment having two antigen binding sites. Refers to small antibody fragments prepared by constructing scFv fragments (see previous paragraph) that typically have a short linker (eg, about 5 to about 10 residues) between the L domain. A bispecific diabody is a heterodimer of two “crossover” scFv fragments in which the V H and VL domains of the two antibodies reside on different polypeptide chains. Diabodies are described, for example, in EP 404,097; WO 93/11161; and Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993), which is more fully described.
非ヒト(例えば、げっ歯類)抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト抗体に由来する最小配列を含むキメラ抗体である。大部分は、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域(HVR)由来の残基が、所望の抗体特異性、親和性および能力を有する、マウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類などの非ヒト種(ドナー抗体)の超可変領域由来の残基によって置き換えられた、ヒト免疫グロブリン(レシピエント抗体)である。一部の例では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域(FR)残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体中にもドナー抗体中にも見出されない残基を含み得る。これらの改変は、抗体性能をさらに洗練するために行われる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも1つの、典型的には2つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここで、超可変ループの全てまたは実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンのものと対応し、FRの全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体は、任意選択で、免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分(Fc)、典型的にはヒト免疫グロブリンのFcもまた含む。さらなる詳細については、Jonesら、Nature 321巻:522〜525頁(1986年);Riechmannら、Nature 332巻:323〜329頁(1988年);およびPresta、Curr.
Op. Struct. Biol. 2巻:593〜596頁(1992年)を参照のこと。
“Humanized” forms of non-human (eg, rodent) antibodies are chimeric antibodies that contain minimal sequence derived from the non-human antibody. For the most part, humanized antibodies are non-residues such as mice, rats, rabbits or non-human primates whose residues from the recipient's hypervariable region (HVR) have the desired antibody specificity, affinity and ability. Human immunoglobulin (recipient antibody) replaced by residues from the hypervariable region of a human species (donor antibody). In some examples, framework region (FR) residues of the human immunoglobulin are replaced by corresponding non-human residues. Furthermore, humanized antibodies may comprise residues that are not found in the recipient antibody or in the donor antibody. These modifications are made to further refine antibody performance. In general, a humanized antibody comprises substantially all of at least one, typically two variable domains, wherein all or substantially all of the hypervariable loops correspond to those of a non-human immunoglobulin. However, all or substantially all of the FR is of human immunoglobulin sequence. The humanized antibody optionally also comprises at least a portion of an immunoglobulin constant region (Fc), typically a human immunoglobulin Fc. For further details, see Jones et al., Nature 321: 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332: 323-329 (1988); and Presta, Curr.
Op. Struct. Biol. 2: 593-596 (1992).
本明細書で同定されたポリペプチド配列および抗体配列に関して、「パーセント(%)アミノ酸配列同一性」または「相同性」は、配列同一性の一部として任意の保存的置換を考慮して配列をアラインさせた後、比較されているポリペプチド中のアミノ酸残基と同一である、候補配列中のアミノ酸残基の百分率として定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定することを目的としたアラインメントは、例えば、BLAST、BLAST−2、ALIGN、Megalign(DNASTAR)またはMUSCLEソフトウェアなどの公に入手可能なコンピューターソフトウェアを使用して、当該分野の技術範囲内の種々の方法で達成され得る。当業者は、比較されている配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメーターを決定できる。しかし、本明細書の目的のために、%アミノ酸配列同一性の値は、配列比較コンピュータープログラムMUSCLEを使用して生成される(Edgar, R.C.、Nucleic Acids Research 32巻(5号):1792〜1797頁、2004年;Edgar, R.C.、BMC Bioinformatics 5巻(1号):113頁、2004年)。 With respect to polypeptide and antibody sequences identified herein, “percent (%) amino acid sequence identity” or “homology” refers to a sequence that considers any conservative substitutions as part of the sequence identity. After alignment, it is defined as the percentage of amino acid residues in the candidate sequence that are identical to the amino acid residues in the polypeptides being compared. Alignments aimed at determining percent amino acid sequence identity can be performed using publicly available computer software such as, for example, BLAST, BLAST-2, ALIGN, Megalign (DNASTAR) or MUSCLE software. It can be achieved in various ways within the technical scope. One skilled in the art can determine appropriate parameters for measuring alignment, including any algorithms needed to achieve maximal alignment over the full length of the sequences being compared. However, for purposes herein,% amino acid sequence identity values are generated using the sequence comparison computer program MUSCLE (Edgar, RC, Nucleic Acids Research Volume 32 (No. 5): 1792-1797, 2004; Edgar, RC, BMC Bioinformatics 5 (1): 113, 2004).
用語「Fc受容体」または「FcR」は、抗体のFc領域に結合する受容体を記述するために使用される。一部の実施形態では、本発明のFcRは、IgG抗体を結合するもの(γ受容体)であり、これらの受容体の対立遺伝子バリアントおよび選択的スプライシングされた形態を含む、FcγRI、FcγRIIおよびFcγRIIIサブクラスの受容体を含む。FcγRII受容体は、その細胞質ドメインが主に異なる類似のアミノ酸配列を有するFcγRIIA(「活性化受容体」)およびFcγRIIB(「阻害受容体」)を含む。活性化受容体FcγRIIAは、その細胞質ドメイン中に免疫受容体チロシン活性化モチーフ(ITAM)を含む。阻害受容体FcγRIIBは、その細胞質ドメイン中に免疫受容体チロシン阻害モチーフ(immunoreceptor tyrosine−based inhibition motif)(ITIM)を含む(総説M. in Daeron、Annu. Rev. Immunol. 15巻:203〜234頁(1997年)を参照のこと)。この用語は、アロタイプ、例えば、FcγRIIIAアロタイプ:FcγRIIIA−Phe158、FcγRIIIA−Val158、FcγRIIA−R131および/またはFcγRIIA−H131を含む。FcRは、RavetchおよびKinet、Annu. Rev. Immunol 9巻:457〜92頁(1991年);Capelら、Immunomethods 4巻:25〜34頁(1994年);ならびにde Haasら、J. Lab. Clin. Med. 126巻:330〜41頁(1995年)で概説されている。将来同定されるものを含む他のFcRは、本明細書で用語「FcR」によって包含される。この用語は、胎児への母系IgGの移行を担う新生児受容体FcRnもまた含む(Guyerら、J. Immunol. 117巻:587頁(1976年)およびKimら、J. Immunol. 24巻:249頁(1994年))。 The terms “Fc receptor” or “FcR” are used to describe a receptor that binds to the Fc region of an antibody. In some embodiments, the FcRs of the present invention are those that bind IgG antibodies (γ receptors), including allelic variants and alternatively spliced forms of these receptors, FcγRI, FcγRII and FcγRIII Contains subclass receptors. FcγRII receptors include FcγRIIA (“activated receptor”) and FcγRIIB (“inhibitory receptor”), which have similar amino acid sequences that differ primarily in their cytoplasmic domains. Activating receptor FcγRIIA contains an immunoreceptor tyrosine activation motif (ITAM) in its cytoplasmic domain. The inhibitory receptor FcγRIIB contains an immunoreceptor tyrosine-based inhibition motif (ITIM) in its cytoplasmic domain (reviewed M. in Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15: 203-2: 203-2. (See 1997)). The term includes allotypes, such as FcγRIIIA allotypes: FcγRIIIA-Phe158, FcγRIIIA-Val158, FcγRIIA-R131 and / or FcγRIIA-H131. FcR is described in Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9: 457-92 (1991); Capel et al., Immunomethods 4: 25-34 (1994); and de Haas et al., J. Biol. Lab. Clin. Med. 126: 330-41 (1995). Other FcRs, including those identified in the future, are encompassed by the term “FcR” herein. This term also includes the neonatal receptor FcRn responsible for the transfer of maternal IgG to the fetus (Guyer et al., J. Immunol. 117: 587 (1976)) and Kim et al., J. Immunol. 24: 249. (1994)).
用語「FcRn」とは、新生児Fc受容体(FcRn)を指す。FcRnは、主要組織適合複合体(MHC)と構造的に類似しており、β2−ミクログロブリンに非共有結合したα鎖からなる。新生児Fc受容体FcRnの複数の機能は、GhetieおよびWard(2000年)Annu. Rev. Immunol. 18巻、739〜766頁において概説されている。FcRnは、母親から若年への免疫グロブリンIgGの受動的送達、および血清IgGレベルの調節において役割を果たす。FcRnは、ピノサイトーシスされたIgGを結合し、細胞内でおよび細胞を横切っての両方でインタクトな形態でそれを輸送し、デフォルト分解経路からそれらをレスキューする、サルベージ受容体として作用し得る。 The term “FcRn” refers to the neonatal Fc receptor (FcRn). FcRn is structurally similar to the major histocompatibility complex (MHC) and consists of an α chain non-covalently bound to β2-microglobulin. Multiple functions of the neonatal Fc receptor FcRn are described in Ghetie and Ward (2000) Annu. Rev. Immunol. 18 pages 739-766. FcRn plays a role in the passive delivery of immunoglobulin IgGs from mother to young and in the regulation of serum IgG levels. FcRn can act as a salvage receptor that binds pinocytosed IgG, transports it in an intact form both intracellularly and across the cell, and rescues them from the default degradation pathway.
ヒトIgG Fc領域の「CH1ドメイン」(「H1」ドメインの「C1」とも呼ぶ)は通常、約アミノ酸118から約アミノ酸215までにわたる(EU番号付け系)。 The “CH1 domain” (also referred to as “C1” of the “H1” domain) of a human IgG Fc region usually extends from about amino acid 118 to about amino acid 215 (EU numbering system).
「ヒンジ領域」は一般に、ヒトIgG1のGlu216からPro230までのストレッチと定義される(Burton、Molec. Immunol. 22巻:161〜206頁(1985年))。他のIgGアイソタイプのヒンジ領域は、重鎖間S−S結合を形成する最初のおよび最後のシステイン残基を同じ位置に配置することによって、IgG1配列とアラインされ得る。 The “hinge region” is generally defined as a stretch of human IgG1 from Glu216 to Pro230 (Burton, Molec. Immunol. 22: 161-206 (1985)). The hinge region of other IgG isotypes can be aligned with the IgG1 sequence by placing the first and last cysteine residues that form an interheavy chain SS bond at the same position.
ヒトIgG Fc領域の「CH2ドメイン」(「H2」ドメインの「C2」とも呼ぶ)は通常、約アミノ酸231から約アミノ酸340までにわたる。CH2ドメインは、別のドメインとは密接に対形成しないという点で独自である。むしろ、2つのN結合型分岐鎖炭水化物鎖(N−linked branched carbohydrate chain)が、インタクトなネイティブIgG分子の2つのCH2ドメイン間に挟まれている。炭水化物は、ドメイン−ドメイン対形成の代わりを提供し得、CH2ドメインの安定化を助け得ると推測されている。Burton、Molec Immunol. 22巻:161〜206頁(1985年)。 The “CH2 domain” of a human IgG Fc region (also referred to as “C2” of the “H2” domain) typically extends from about amino acid 231 to about amino acid 340. The CH2 domain is unique in that it does not pair closely with another domain. Rather, two N-linked branched carbohydrate chains are sandwiched between the two CH2 domains of an intact native IgG molecule. It has been speculated that carbohydrates may provide an alternative to domain-domain pairing and may help stabilize the CH2 domain. Burton, Molec Immunol. 22: 161-206 (1985).
「CH3ドメイン」(「H3」ドメインの(or)「C2」とも呼ぶ)は、Fc領域中のCH2ドメインに対してC末端側の残基のストレッチ(即ち、抗体配列の約アミノ酸残基341から、典型的には、IgGのアミノ酸残基446または447におけるC末端まで)を含む。 The “CH3 domain” (also referred to as the “H3” domain (or) “C2”) is a stretch of residues C-terminal to the CH2 domain in the Fc region (ie, from about amino acid residue 341 of the antibody sequence). , Typically up to the C-terminus at amino acid residue 446 or 447 of IgG).
「機能的Fc断片」は、ネイティブ配列Fc領域の「エフェクター機能」を有する。例示的な「エフェクター機能」には、C1q結合;補体依存性細胞傷害(CDC);Fc受容体結合;抗体依存性細胞媒介性細胞傷害(ADCC);ファゴサイトーシス;細胞表面受容体(例えば、B細胞受容体;BCR)の下方調節などが含まれる。かかるエフェクター機能は一般に、結合ドメイン(例えば、抗体可変ドメイン)と組み合わせるためにFc領域を必要とし、当該分野で公知の種々のアッセイを使用して評価され得る。 A “functional Fc fragment” has an “effector function” of a native sequence Fc region. Exemplary “effector functions” include C1q binding; complement dependent cytotoxicity (CDC); Fc receptor binding; antibody dependent cell mediated cytotoxicity (ADCC); phagocytosis; cell surface receptors (eg, , B cell receptor; downregulation of BCR) and the like. Such effector functions generally require an Fc region to combine with a binding domain (eg, an antibody variable domain) and can be assessed using various assays known in the art.
「変更された」FcR結合親和性またはADCC活性を有するバリアントIgG Fcを有する抗体は、親ポリペプチド、またはネイティブ配列Fc領域を含むポリペプチドと比較して、増強されたかまたは弱められたかのいずれかのFcR結合活性(例えば、FcγRまたはFcRn)および/またはADCC活性を有する抗体である。FcRへの「増加した結合を示す」バリアントFcは、親ポリペプチドまたはネイティブ配列IgG Fcよりも高い親和性(例えば、より低い見かけのKdまたはIC50値)で、少なくとも1つのFcRを結合する。一部の実施形態によれば、親ポリペプチドと比較した結合における改善は、結合における、約3倍、例えば、約5、10、25、50、60、100、150、200もしくは最大で500倍のいずれか、または約25%〜1000%の改善である。FcRへの「減少した結合を示す」ポリペプチドバリアントは、親ポリペプチドよりも低い親和性(例えば、より高い見かけのKdまたはより高いIC50値)で、少なくとも1つのFcRを結合する。親ポリペプチドと比較した結合における減少は、結合における約40%またはそれ超の減少であり得る。 An antibody having a variant IgG Fc with “altered” FcR binding affinity or ADCC activity is either enhanced or attenuated compared to a parent polypeptide or a polypeptide comprising a native sequence Fc region. An antibody having FcR binding activity (eg, FcγR or FcRn) and / or ADCC activity. A variant Fc that “increases binding” to an FcR binds at least one FcR with a higher affinity (eg, a lower apparent K d or IC 50 value) than the parent polypeptide or native sequence IgG Fc. . According to some embodiments, the improvement in binding compared to the parent polypeptide is about 3-fold, eg, about 5, 10, 25, 50, 60, 100, 150, 200 or up to 500-fold in binding. Or an improvement of about 25% to 1000%. A polypeptide variant that “shows reduced binding” to FcR binds at least one FcR with a lower affinity (eg, higher apparent K d or higher IC 50 value) than the parent polypeptide. The reduction in binding compared to the parent polypeptide can be about 40% or more reduction in binding.
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」または「ADCC」とは、ある特定の細胞傷害性細胞(例えば、ナチュラルキラー(NK)細胞、好中球およびマクロファージ)上に存在するFc受容体(FcR)に結合した分泌型Igが、これらの細胞傷害性エフェクター細胞に、抗原保有標的細胞に特異的に結合し、引き続いて細胞毒を用いて標的細胞を死滅させることができるようにさせる、細胞傷害の形態を指す。抗体は、細胞傷害性細胞を「強化し(arm)」、かかる殺滅に絶対に必要とされる。ADCCを媒介するための主な細胞であるNK細胞は、FcγRIIIのみを発現するが、単球は、FcγRI、FcγRIIおよびFcγRIIIを発現する。造血細胞上でのFcR発現は、RavetchおよびKinet、Annu. Rev. Immunol 9巻:457〜92頁(1991年)の第464頁の表3にまとめられている。目的の分子のADCC活性を評価するために、米国特許第5,500,362号または第5,821,337号に記載されるものなどのin vitro ADCCアッセイが実施され得る。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核球(PBMC)およびナチュラルキラー(NK)細胞が含まれる。あるいは、またはさらに、目的の分子のADCC活性は、例えば、Clynesら PNAS (USA) 95巻:652〜656頁(1998年)に開示されるものなどの動物モデルにおいて、in vivoで評価され得る。 “Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity” or “ADCC” refers to Fc receptors (FcR) present on certain cytotoxic cells, such as natural killer (NK) cells, neutrophils and macrophages. Of the cytotoxic effector cells that specifically bind to antigen-bearing target cells and subsequently allow the target cells to be killed using a cytotoxin. Refers to the form. The antibody “arms” the cytotoxic cells and is absolutely required for such killing. NK cells, the main cell for mediating ADCC, express FcγRIII only, whereas monocytes express FcγRI, FcγRII and FcγRIII. FcR expression on hematopoietic cells is described by Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9: 457-92 (1991), summarized in Table 3 on page 464. In vitro ADCC assays such as those described in US Pat. Nos. 5,500,362 or 5,821,337 can be performed to assess ADCC activity of the molecule of interest. Effector cells useful for such assays include peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and natural killer (NK) cells. Alternatively or in addition, the ADCC activity of the molecule of interest can be assessed in vivo in animal models such as those disclosed, for example, in Clynes et al. PNAS (USA) 95: 652-656 (1998).
野生型IgG Fcを有するポリペプチドまたは親ポリペプチドよりも有効に、ヒトエフェクター細胞の存在下で、「増加したADCCを示す」または抗体依存性細胞媒介性細胞傷害(ADCC)を媒介するバリアントFc領域を含むポリペプチドは、アッセイにおけるバリアントFc領域を有するポリペプチドの量および野生型Fc領域を有するポリペプチド(または親ポリペプチド)の量が本質的に同じ場合、in vitroまたはin
vivoで、ADCCを媒介するにあたって実質的により有効であるポリペプチドである。一般に、かかるバリアントは、例えば、動物モデルなどにおいて、当該分野で公知の任意のin vitro ADCCアッセイ、例えば、ADCC活性を決定するためのアッセイまたは方法を使用して同定される。一部の実施形態では、バリアントは、野生型Fc(または親ポリペプチド)よりも、ADCCを媒介するにあたって、約5倍〜約100倍、例えば、約25〜約50倍有効である。
Variant Fc regions that exhibit “increased ADCC” or mediate antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) in the presence of human effector cells more effectively than a polypeptide having a wild-type IgG Fc or a parent polypeptide A polypeptide comprising a variant Fc region in the assay and in vitro or in if the amount of polypeptide (or parent polypeptide) having a wild-type Fc region is essentially the same.
A polypeptide that is substantially more effective in mediating ADCC in vivo. In general, such variants are identified using any in vitro ADCC assay known in the art, such as in an animal model, for example, an assay or method for determining ADCC activity. In some embodiments, the variant is about 5-fold to about 100-fold, eg, about 25-about 50-fold more effective in mediating ADCC than the wild-type Fc (or parent polypeptide).
「補体依存性細胞傷害」または「CDC」とは、補体の存在下での標的細胞の溶解を指す。古典的補体経路の活性化は、それらの同系抗原に結合した(適切なサブクラスの)抗体への、補体系の最初の成分(C1q)の結合によって開始される。補体活性化を評価するために、例えば、Gazzano−Santoroら、J. Immunol. Methods 202巻:163頁(1996年)に記載されるCDCアッセイが実施され得る。変更されたFc領域アミノ酸配列および増加または減少したC1q結合能力を有するポリペプチドバリアントは、米国特許第6,194,551B1号およびWO99/51642に記載されている。これらの特許公開の内容は、参照によって本明細書に具体的に組み込まれる。Idusogieら J. Immunol. 164巻:4178〜4184頁(2000年)もまた参照のこと。 “Complement dependent cytotoxicity” or “CDC” refers to the lysis of a target cell in the presence of complement. Activation of the classical complement pathway is initiated by binding of the first component of the complement system (C1q) to antibodies (of the appropriate subclass) bound to their cognate antigens. To assess complement activation, see, for example, Gazzano-Santoro et al. Immunol. Methods 202: 163 (1996) can be performed. Polypeptide variants with altered Fc region amino acid sequences and increased or decreased C1q binding ability are described in US Pat. No. 6,194,551B1 and WO99 / 51642. The contents of these patent publications are specifically incorporated herein by reference. Idusogie et al. Immunol. 164: 4178-4184 (2000).
特記しない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いの縮重バージョンであり、同じアミノ酸配列をコードする、全てのヌクレオチド配列を含む。タンパク質またはRNAをコードする、語句ヌクレオチド配列は、タンパク質をコードするヌクレオチド配列が一部のバージョンにおいてイントロン(複数可)を含み得る限りにおいて、イントロンもまた含み得る。 Unless otherwise specified, a “nucleotide sequence encoding an amino acid sequence” includes all nucleotide sequences that are degenerate versions of each other and that encode the same amino acid sequence. The phrase nucleotide sequence encoding a protein or RNA can also include introns, as long as the nucleotide sequence encoding the protein can include intron (s) in some versions.
用語「作動可能に連結した」とは、後者の発現を生じる、調節配列と異種核酸配列との間の機能的連結を指す。例えば、第1の核酸配列が、第2の核酸配列と機能的に関連して配置される場合、第1の核酸配列は、第2の核酸配列と作動可能に連結している。例えば、プロモーターが、コード配列の転写または発現に影響を与える場合、そのプロモーターは、コード配列に作動可能に連結している。一般に、作動可能に連結したDNA配列は、連続的であり、必要に応じて、同じリーディングフレームで2つのタンパク質コード領域を結合させる(join)。 The term “operably linked” refers to a functional linkage between a regulatory sequence and a heterologous nucleic acid sequence that results in the latter expression. For example, a first nucleic acid sequence is operably linked to a second nucleic acid sequence when the first nucleic acid sequence is placed in functional association with the second nucleic acid sequence. For example, a promoter is operably linked to a coding sequence if the promoter affects the transcription or expression of the coding sequence. In general, operably linked DNA sequences are contiguous and, if necessary, join two protein coding regions in the same reading frame.
「相同」とは、2つのポリペプチド間または2つの核酸分子間の配列類似性または配列同一性を指す。2つの比較される配列の両方中のある位置が、同じ塩基またはアミノ酸モノマーサブユニットによって占められる場合、例えば、2つのDNA分子の各々中のある位置がアデニンによって占められる場合、これらの分子は、その位置において相同である。2つの配列間の相同性のパーセントは、比較される位置の数によって除算された、2つの配列によって共有される一致するまたは相同の位置の数に、100を乗じた関数である。例えば、2つの配列中の10個の位置のうち6つが一致しているまたは相同である場合、これら2つの配列は、60%相同である。例として、DNA配列ATTGCCおよびTATGGCは、50%の相同性を共有する。一般に、2つの配列が最大の相同性を与えるようにアラインされるとき、比較が行われる。 “Homology” refers to sequence similarity or sequence identity between two polypeptides or between two nucleic acid molecules. If a position in both of the two compared sequences is occupied by the same base or amino acid monomer subunit, for example, if a position in each of the two DNA molecules is occupied by adenine, these molecules are Homologous at that position. The percent homology between two sequences is a function of the number of matching or homologous positions shared by the two sequences divided by 100 divided by the number of positions compared. For example, if 6 out of 10 positions in two sequences are identical or homologous, the two sequences are 60% homologous. As an example, the DNA sequences ATTGCC and TATGGC share 50% homology. In general, a comparison is made when two sequences are aligned to give maximum homology.
本明細書に開示される抗E7MC構築物または組成物の「有効量」は、具体的に述べられた目的を成し遂げるのに十分な量である。「有効量」は、実験的に、および述べられた目的に関連する公知の方法によって、決定され得る。 An “effective amount” of an anti-E7MC construct or composition disclosed herein is an amount sufficient to achieve a specifically stated purpose. An “effective amount” can be determined experimentally and by known methods relating to the stated purpose.
用語「治療有効量」とは、個体における疾患または障害を「処置する」のに有効な、本明細書に開示される抗E7MC構築物または組成物の量を指す。がんの場合、本明細書に開示される抗E7MC構築物または組成物の治療有効量は、がん細胞の数を低減させ得;腫瘍のサイズもしくは重量を低減させ得;末梢臓器中へのがん細胞浸潤を阻害し得(即ち、ある程度まで減速させる、好ましくは停止させる);腫瘍転移を阻害し得(即ち、ある程度まで減速させる、好ましくは停止させる);腫瘍成長をある程度まで阻害し得;および/またはがんと関連する症状のうち1もしくは複数をある程度まで軽減し得る。本明細書に開示される抗E7MC構築物または組成物は、成長を防止し得および/または既存のがん細胞を死滅させ得る限りにおいて、細胞増殖抑制性および/または細胞傷害性であり得る。一部の実施形態では、治療有効量は、成長阻害量である。一部の実施形態では、治療有効量は、患者の生存期間を延長させる量である。一部の実施形態では、治療有効量は、患者の無増悪生存期間を改善する量である。 The term “therapeutically effective amount” refers to an amount of an anti-E7MC construct or composition disclosed herein that is effective to “treat” a disease or disorder in an individual. In the case of cancer, a therapeutically effective amount of an anti-E7MC construct or composition disclosed herein can reduce the number of cancer cells; it can reduce the size or weight of the tumor; Can inhibit tumor cell invasion (ie slow down to some extent, preferably stop); inhibit tumor metastasis (ie slow down to some extent, preferably stop); inhibit tumor growth to some extent; And / or one or more of the symptoms associated with cancer may be reduced to some extent. The anti-E7MC constructs or compositions disclosed herein can be cytostatic and / or cytotoxic as long as they can prevent growth and / or kill existing cancer cells. In some embodiments, the therapeutically effective amount is a growth inhibiting amount. In some embodiments, a therapeutically effective amount is an amount that prolongs patient survival. In some embodiments, the therapeutically effective amount is an amount that improves progression free survival of the patient.
本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される」または「薬理学的に適合する」とは、生物学的にも他の点でも望ましくないことのない材料を意味し、例えば、材料は、任意の顕著な望ましくない生物学的影響を引き起こすことも、それが含まれる組成物の他の成分のいずれかと有害な様式で相互作用することもなしに、患者に投与される医薬組成物中に組み入れることができる。薬学的に許容されるキャリアまたは賦形剤は、好ましくは、毒性学的試験および製造試験の必要な標準を満たし、ならびに/または米国食品医薬品局が作成したInactive Ingredient Guide上に含まれる。 As used herein, “pharmaceutically acceptable” or “pharmacologically compatible” means a material that is not biologically or otherwise undesirable, for example, a material Is a pharmaceutical composition that is administered to a patient without causing any significant undesirable biological effects or interacting in a deleterious manner with any of the other components of the composition in which it is contained. Can be incorporated into. A pharmaceutically acceptable carrier or excipient is preferably included on the Inactive Ingredient Guide that meets the required standards for toxicological and manufacturing testing and / or created by the US Food and Drug Administration.
用語「標識」とは、本明細書で使用する場合、抗E7MC抗体部分に直接的または間接的に結合体化され得る検出可能な化合物または組成物を指す。標識は、それ自体で検出可能であり得(例えば、放射性同位体標識または蛍光標識)、または酵素標識の場合、検出可能な基質化合物または組成物の化学的変更を触媒し得る。 The term “label” as used herein refers to a detectable compound or composition that can be conjugated directly or indirectly to an anti-E7MC antibody moiety. The label can be detectable by itself (eg, a radioisotope label or a fluorescent label) or, in the case of an enzyme label, can catalyze a chemical alteration of the detectable substrate compound or composition.
本明細書に記載される発明の実施形態は、実施形態「からなる」および/または実施形態「から本質的になる」を含むことが理解される。 It is understood that the embodiments of the invention described herein include embodiment “consisting of” and / or embodiment “consisting essentially of”.
本明細書の「約」値またはパラメーターに対する言及は、その値またはパラメーター自体に対する変動を含む(および記載する)。例えば、「約X」に言及する記載は、「X」の記載を含む。 Reference to “about” a value or parameter herein includes (and describes) variations to that value or parameter itself. For example, description referring to “about X” includes description of “X”.
本明細書で使用する場合、値またはパラメーター「ではない」に対する言及は、値またはパラメーター「以外」を一般に意味し記載する。例えば、方法が、X型のがんを処置するために使用されないとは、この方法が、X以外の型のがんを処置するために使用されることを意味する。 As used herein, reference to a value or parameter “not” generally means and describes the value or parameter “other than”. For example, a method not being used to treat a type X cancer means that the method is used to treat a type of cancer other than X.
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用する場合、単数形「1つの、ある(a)」、「もしくは、または、あるいは(or)」および「この、その、前記、該(the)」は、文脈が明らかに他を指定しない限り、複数の指示対象を含む。 As used herein and in the appended claims, the singular forms “a, a,” or “or,” and “the, the, the,” the. Includes multiple referents unless the context clearly specifies otherwise.
抗E7MC構築物
一態様では、本発明は、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体(「HPV16−E7/MHCクラスI複合体」または「E7MC」)に特異的に結合する抗体部分を含むHPV16−E7/MHCクラスI複合体特異的構築物(抗E7MC構築物)を提供する。抗E7MC構築物の特異性は、E7MCに特異的に結合する抗E7MC抗体部分、例えば、全長抗体またはその抗原結合断片に由来する。一部の実施形態では、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する部分(例えば、抗体部分)に対する言及は、a)全長HPV16−E7、遊離HPV16−E7ペプチド、ペプチドに結合していないMHCクラスIタンパク質および非HPV16−E7ペプチドに結合したMHCクラスIタンパク質の各々についてのその結合親和性の少なくとも約10(例えば、少なくとも約10、20、30、40、50、75、100、200、300、400、500、750、1000またはそれ超のいずれかを含む)倍である親和性;またはb)全長HPV16−E7、遊離HPV16−E7ペプチド、ペプチドに結合していないMHCクラスIタンパク質および非HPV16−E7ペプチドに結合したMHCクラスIタンパク質の各々への結合についてのそのKdの約1/10倍以下(例えば、約1/10、1/20、1/30、1/40、1/50、1/75、1/100、1/200、1/300、1/400、1/500、1/750、1/1000またはそれ未満のいずれか以下)のKdで、その部分がE7MCに結合することを意味する。結合親和性は、当該分野で公知の方法、例えば、ELISA、蛍光活性化細胞分取(FACS)分析または放射性免疫沈降アッセイ(RIA)によって決定され得る。Kdは、当該分野で公知の方法、例えば、Biacore機器を利用する表面プラズモン共鳴(SPR)アッセイまたは、例えば、Sapidyne機器を利用する動的排除(kinetic exclusion)アッセイ(KinExA)などによって決定され得る。
Anti-E7MC Constructs In one aspect, the invention provides an antibody moiety that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein (“HPV16-E7 / MHC class I complex” or “E7MC”). An HPV16-E7 / MHC class I complex specific construct (anti-E7MC construct) is provided. The specificity of the anti-E7MC construct is derived from the anti-E7MC antibody portion that specifically binds to E7MC, eg, a full-length antibody or antigen-binding fragment thereof. In some embodiments, reference to a moiety that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein (eg, an antibody moiety) includes: a) full-length HPV16-E7, free HPV16-E7 peptide, At least about 10 of its binding affinity for each of MHC class I protein not bound to peptide and MHC class I protein bound to non-HPV16-E7 peptide (eg, at least about 10, 20, 30, 40, 50, 75, 100, 200, 300, 400, 500, 750, 1000 or more of affinity); or b) full length HPV16-E7, free HPV16-E7 peptide, not bound to peptide For MHC class I proteins and non-HPV16-E7 peptides Combined about 1/10 or less of its K d for the binding to each of the MHC class I protein (e.g., about 1 / 10,1 / 20,1 / 30,1 / 40,1 / 50,1 / 75 1/100, 1/200, 1/300, 1/400, 1/500, 1/750, 1/1000 or less), with a K d that the portion binds to E7MC means. Binding affinity can be determined by methods known in the art, for example, ELISA, fluorescence activated cell sorting (FACS) analysis or radioimmunoprecipitation assay (RIA). K d can be determined by methods known in the art, such as a surface plasmon resonance (SPR) assay utilizing a Biacore instrument or a kinetic exclusion assay (KinExA) utilizing, for example, a Sapidyne instrument. .
企図された抗E7MC構築物には、例えば、全長抗E7MC抗体、多特異的(例えば、二重特異的)抗E7MC分子、抗E7MCキメラ抗原受容体(CAR)および抗E7MCイムノコンジュゲートが含まれる。 Contemplated anti-E7MC constructs include, for example, full-length anti-E7MC antibodies, multispecific (eg, bispecific) anti-E7MC molecules, anti-E7MC chimeric antigen receptor (CAR) and anti-E7MC immunoconjugates.
例えば、一部の実施形態では、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分を含む抗E7MC構築物(例えば、単離された抗E7MC構築物)が提供される。一部の実施形態では、HPV16−E7ペプチドは、HPV16−E7 11−19(配列番号4)である。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A02である。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A*02:01(GenBank受託番号:AAO20853)である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、多特異的(例えば、二重特異的)分子である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、約0.1pM〜約500nMの間(例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約0.1pM、1.0pM、10pM、50pM、100pM、500pM、1nM、10nM、50nM、100nMまたは500nMのいずれか)のKdで、E7MCを結合する。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、MHCクラスIタンパク質および1つのアミノ酸置換(例えば、保存的アミノ酸置換)を有するHPV16−E7ペプチドのバリアントを含む少なくとも1つ(例えば、少なくとも2、3、4、5または6のいずれか)の複合体と交差反応する。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、HPV16−E7ペプチドおよび異なるサブタイプのMHCクラスIタンパク質を含む少なくとも1つ(例えば、少なくとも2、3、4または5のいずれか)の複合体と交差反応する。 For example, in some embodiments, an anti-E7MC construct (eg, an isolated anti-E7MC construct) comprising an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein is provided. Is done. In some embodiments, the HPV16-E7 peptide is HPV16-E7 11-19 (SEQ ID NO: 4). In some embodiments, the MHC class I protein is HLA-A02. In some embodiments, the MHC class I protein is HLA-A * 02: 01 (GenBank accession number: AAO20853). In some embodiments, the anti-E7MC construct is not naturally occurring. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a full length antibody. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a multispecific (eg, bispecific) molecule. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a chimeric antigen receptor. In some embodiments, the anti-E7MC construct is an immunoconjugate. In some embodiments, the anti-E7MC construct is between about 0.1 pM and about 500 nM (eg, including any range between these values, including about 0.1 pM, 1.0 pM, 10 pM, 50 pM, 100pM, 500pM, 1nM, 10nM, 50nM, with a K d of any) of 100nM or 500 nM, couples E7MC. In some embodiments, the anti-E7MC construct comprises at least one (eg, at least 2, 3, or 2) variant of HPV16-E7 peptide having an MHC class I protein and one amino acid substitution (eg, a conservative amino acid substitution). Cross-react with any of 4, 5, or 6) complexes. In some embodiments, the anti-E7MC construct crosses at least one (eg, at least 2, 3, 4 or 5) complex comprising an HPV16-E7 peptide and a different subtype of MHC class I protein. react.
一部の実施形態では、HPV16−E7 11−19ペプチド(配列番号4)およびHLA−A*02:01を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分を含む抗E7MC構築物が提供される。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、多特異的(例えば、二重特異的)分子である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、約0.1pM〜約500nMの間(例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約0.1pM、1.0pM、10pM、50pM、100pM、500pM、1nM、10nM、50nM、100nMまたは500nMのいずれか)のKdで、E7MCを結合する。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、MHCクラスIタンパク質および1つのアミノ酸置換(例えば、保存的アミノ酸置換)を有するHPV16−E7ペプチドのバリアントを含む少なくとも1つ(例えば、少なくとも2、3、4、5または6のいずれか)の複合体と交差反応する。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、HPV16−E7ペプチドおよび異なるサブタイプのMHCクラスIタンパク質を含む少なくとも1つ(例えば、少なくとも2、3、4または5のいずれか)の複合体と交差反応する。
In some embodiments, an anti-E7MC construct comprising an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 11-19 peptide (SEQ ID NO: 4) and HLA-
一部の実施形態では、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号183のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号184または185のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号186〜188のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3;または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号189または190のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号191のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む、抗E7MC抗体部分を含む抗E7MC構築物が提供される。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、多特異的(例えば、二重特異的)分子である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、約0.1pM〜約500nMの間(例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約0.1pM、1.0pM、10pM、50pM、100pM、500pM、1nM、10nM、50nM、100nMまたは500nMのいずれか)のKdで、E7MCを結合する。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、MHCクラスIタンパク質および1つのアミノ酸置換(例えば、保存的アミノ酸置換)を有するHPV16−E7ペプチドのバリアントを含む少なくとも1つ(例えば、少なくとも2、3、4、5または6のいずれか)の複合体と交差反応する。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、HPV16−E7ペプチドおよび異なるサブタイプのMHCクラスIタンパク質を含む少なくとも1つ(例えば、少なくとも2、3、4または5のいずれか)の複合体と交差反応する。 In some embodiments, an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, i) an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 183, or a maximum And variants thereof containing substitutions of about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 184 or 185, or up to about 3 (eg, about 1, 2, Or any of 3) variants thereof comprising amino acid substitutions, and HC-CDR3 comprising any one of the amino acid sequences of SEQ ID NOS: 186-188; or up to about 3 (eg, any of about 1, 2, or 3) A) a heavy chain variable domain sequence comprising a variant thereof containing amino acid substitutions; and ii) an sequence of SEQ ID NO: 189 or 190 LC-CDR1 comprising a non-acid sequence, or variants thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 191 or up to An anti-E7MC construct comprising an anti-E7MC antibody portion comprising a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising a substitution of about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids is provided. In some embodiments, the anti-E7MC construct is not naturally occurring. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a full length antibody. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a multispecific (eg, bispecific) molecule. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a chimeric antigen receptor. In some embodiments, the anti-E7MC construct is an immunoconjugate. In some embodiments, the anti-E7MC construct is between about 0.1 pM and about 500 nM (eg, including any range between these values, including about 0.1 pM, 1.0 pM, 10 pM, 50 pM, 100pM, 500pM, 1nM, 10nM, 50nM, with a K d of any) of 100nM or 500 nM, couples E7MC. In some embodiments, the anti-E7MC construct comprises at least one (eg, at least 2, 3, or 2) variant of HPV16-E7 peptide having an MHC class I protein and one amino acid substitution (eg, a conservative amino acid substitution). Cross-react with any of 4, 5, or 6) complexes. In some embodiments, the anti-E7MC construct crosses at least one (eg, at least 2, 3, 4 or 5) complex comprising an HPV16-E7 peptide and a different subtype of MHC class I protein. react.
一部の実施形態では、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)HC−CDR1;または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)HC−CDR2;または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)HC−CDR3;または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)LC−CDR1;または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)LC−CDR2;または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)LC−CDR3;または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメイン配列を含む抗E7MC抗体部分を含む抗E7MC構築物が提供される。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、多特異的(例えば、二重特異的)分子である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、約0.1pM〜約500nMの間(例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約0.1pM、1.0pM、10pM、50pM、100pM、500pM、1nM、10nM、50nM、100nMまたは500nMのいずれか)のKdで、E7MCを結合する。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、MHCクラスIタンパク質および1つのアミノ酸置換(例えば、保存的アミノ酸置換)を有するHPV16−E7ペプチドのバリアントを含む少なくとも1つ(例えば、少なくとも2、3、4、5または6のいずれか)の複合体と交差反応する。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、HPV16−E7ペプチドおよび異なるサブタイプのMHCクラスIタンパク質を含む少なくとも1つ(例えば、少なくとも2、3、4または5のいずれか)の複合体と交差反応する。 In some embodiments, an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, comprising i) an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 57-77 HC-CDR1 (consisting of in some embodiments); or variants thereof comprising substitutions of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; SEQ ID NOs: 78-98 HC-CDR2 comprising (consisting of in some embodiments) any one amino acid sequence; or that comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids A HC-CDR3 comprising (consisting of in some embodiments) the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245; Or a heavy chain variable domain sequence comprising a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and ii) any of SEQ ID NOs: 120-140 and 246 LC-CDR1 comprising (in some embodiments) comprising one amino acid sequence; or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids LC-CDR2 comprising (consisting of in some embodiments) any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 141-161; or substitution of up to about 3 (eg, about 1, 2 or 3) amino acids And any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250 (consisting of it in some embodiments) C-CDR3; or an anti-E7MC comprising an anti-E7MC antibody portion comprising a light chain variable domain sequence comprising a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids A construct is provided. In some embodiments, the anti-E7MC construct is not naturally occurring. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a full length antibody. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a multispecific (eg, bispecific) molecule. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a chimeric antigen receptor. In some embodiments, the anti-E7MC construct is an immunoconjugate. In some embodiments, the anti-E7MC construct is between about 0.1 pM and about 500 nM (eg, including any range between these values, including about 0.1 pM, 1.0 pM, 10 pM, 50 pM, E7MC is bound with a Kd of 100 pM, 500 pM, 1 nM, 10 nM, 50 nM, 100 nM or 500 nM). In some embodiments, the anti-E7MC construct comprises at least one (eg, at least 2, 3, Cross-react with any of 4, 5, or 6) complexes. In some embodiments, the anti-E7MC construct crosses at least one (eg, at least 2, 3, 4 or 5) complex comprising an HPV16-E7 peptide and a different subtype of MHC class I protein. react.
一部の実施形態では、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)HC−CDR1;配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)HC−CDR2;および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)HC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)LC−CDR1;配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)LC−CDR2;および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)LC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン配列;またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む抗E7MC抗体部分を含む抗E7MC構築物が提供される。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、多特異的(例えば、二重特異的)分子である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、約0.1pM〜約500nMの間(例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約0.1pM、1.0pM、10pM、50pM、100pM、500pM、1nM、10nM、50nM、100nMまたは500nMのいずれか)のKdで、E7MCを結合する。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、MHCクラスIタンパク質および1つのアミノ酸置換(例えば、保存的アミノ酸置換)を有するHPV16−E7ペプチドのバリアントを含む少なくとも1つ(例えば、少なくとも2、3、4、5または6のいずれか)の複合体と交差反応する。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、HPV16−E7ペプチドおよび異なるサブタイプのMHCクラスIタンパク質を含む少なくとも1つ(例えば、少なくとも2、3、4または5のいずれか)の複合体と交差反応する。 In some embodiments, an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, comprising i) an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 57-77 HC-CDR1 (consisting of in some embodiments); HC-CDR2 (consisting of in some embodiments) comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98; and SEQ ID NOs: 99-119, 244 And a heavy chain variable domain sequence comprising HC-CDR3 comprising (in some embodiments consisting of) any one amino acid sequence; or HC-CDR sequences up to about 5 (eg, about 1, 2 Any of 3, 4, or 5) variants thereof containing amino acid substitutions; and ii) SEQ ID NOs: 120-140 and 246 LC-CDR1 comprising any one amino acid sequence (consisting of it in some embodiments); LC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 141-161 (consisting in some embodiments); And a light chain variable domain sequence comprising LC-CDR3 comprising (consisting of in some embodiments) comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250; or at most about in the LC-CDR sequence An anti-E7MC construct comprising an anti-E7MC antibody portion comprising a variant thereof comprising substitution of 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids is provided. In some embodiments, the anti-E7MC construct is not naturally occurring. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a full length antibody. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a multispecific (eg, bispecific) molecule. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a chimeric antigen receptor. In some embodiments, the anti-E7MC construct is an immunoconjugate. In some embodiments, the anti-E7MC construct is between about 0.1 pM and about 500 nM (eg, including any range between these values, including about 0.1 pM, 1.0 pM, 10 pM, 50 pM, E7MC is bound with a Kd of 100 pM, 500 pM, 1 nM, 10 nM, 50 nM, 100 nM or 500 nM). In some embodiments, the anti-E7MC construct comprises at least one (eg, at least 2, 3, Cross-react with any of 4, 5, or 6) complexes. In some embodiments, the anti-E7MC construct crosses at least one (eg, at least 2, 3, 4 or 5) complex comprising an HPV16-E7 peptide and a different subtype of MHC class I protein. react.
一部の実施形態では、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、配列番号15〜35および233〜237のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれか)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号36〜56および238〜243のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれか)の配列同一性を有するそのバリアントを含む抗E7MC抗体部分を含む抗E7MC構築物が提供される。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、多特異的(例えば、二重特異的)分子である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、約0.1pM〜約500nMの間(例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約0.1pM、1.0pM、10pM、50pM、100pM、500pM、1nM、10nM、50nM、100nMまたは500nMのいずれか)のKdで、E7MCを結合する。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、MHCクラスIタンパク質および1つのアミノ酸置換(例えば、保存的アミノ酸置換)を有するHPV16−E7ペプチドのバリアントを含む少なくとも1つ(例えば、少なくとも2、3、4、5または6のいずれか)の複合体と交差反応する。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、HPV16−E7ペプチドおよび異なるサブタイプのMHCクラスIタンパク質を含む少なくとも1つ(例えば、少なくとも2、3、4または5のいずれか)の複合体と交差反応する。 In some embodiments, an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 15-35 and 233-237 Or a variant thereof having at least about 95% (e.g., at least about 96%, 97%, 98% or 99%) sequence identity A light chain variable domain comprising, or consisting of, in some embodiments) any one of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 36-56 and 238-243, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97% , 98% or 99%) of the anti-E7MC antibody portion comprising a variant thereof with sequence identity No anti E7MC construct. In some embodiments, the anti-E7MC construct is not naturally occurring. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a full length antibody. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a multispecific (eg, bispecific) molecule. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a chimeric antigen receptor. In some embodiments, the anti-E7MC construct is an immunoconjugate. In some embodiments, the anti-E7MC construct is between about 0.1 pM and about 500 nM (eg, including any range between these values, including about 0.1 pM, 1.0 pM, 10 pM, 50 pM, E7MC is bound with a Kd of 100 pM, 500 pM, 1 nM, 10 nM, 50 nM, 100 nM or 500 nM). In some embodiments, the anti-E7MC construct comprises at least one (eg, at least 2, 3, Cross-react with any of 4, 5, or 6) complexes. In some embodiments, the anti-E7MC construct crosses at least one (eg, at least 2, 3, 4 or 5) complex comprising an HPV16-E7 peptide and a different subtype of MHC class I protein. react.
一部の実施形態では、標的HPV16−E7/MHCクラスI複合体への結合について、本明細書に記載される抗E7MC抗体部分のいずれかに従う第2の抗E7MC抗体部分と競合する第1の抗E7MC抗体部分を含む抗E7MC構築物が提供される。一部の実施形態では、第1の抗E7MC抗体部分は、第2の抗E7MC抗体部分と同じまたは実質的に同じエピトープに結合する。一部の実施形態では、標的HPV16−E7/MHCクラスI複合体への第1の抗E7MC抗体部分の結合は、標的HPV16−E7/MHCクラスI複合体への第2の抗E7MC抗体部分の結合を、少なくとも約70%(例えば、少なくとも約75%、80%、85%、90%、95%、98%または99%のいずれか)阻害し、または逆もまた同様である。一部の実施形態では、第1の抗E7MC抗体部分および第2の抗E7MC抗体部分は、標的HPV16−E7/MHCクラスI複合体への結合について交差競合する、即ち、第1および第2の抗体部分の各々は、標的HPV16−E7/MHCクラスI複合体への結合について他方と競合する。 In some embodiments, a first competing with a second anti-E7MC antibody portion according to any of the anti-E7MC antibody portions described herein for binding to a target HPV16-E7 / MHC class I complex. An anti-E7MC construct comprising an anti-E7MC antibody portion is provided. In some embodiments, the first anti-E7MC antibody portion binds to the same or substantially the same epitope as the second anti-E7MC antibody portion. In some embodiments, the binding of the first anti-E7MC antibody moiety to the target HPV16-E7 / MHC class I complex comprises the second anti-E7MC antibody moiety to the target HPV16-E7 / MHC class I complex. Inhibition of binding is at least about 70% (eg, at least about 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% or 99%), or vice versa. In some embodiments, the first anti-E7MC antibody portion and the second anti-E7MC antibody portion cross-compete for binding to the target HPV16-E7 / MHC class I complex, ie, the first and second Each of the antibody moieties competes with the other for binding to the target HPV16-E7 / MHC class I complex.
例えば、一部の実施形態では、標的HPV16−E7/MHCクラスI複合体への結合について、i)配列番号183のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号184もしくは185のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号186〜188のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3;または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号189もしくは190のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号191のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む抗体部分と競合する抗E7MC抗体部分を含む抗E7MC構築物が提供される。 For example, in some embodiments, for binding to a target HPV16-E7 / MHC class I complex, i) HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 183, or up to about 3 (eg, about 1, 2 Or any of 3) variants thereof comprising amino acid substitutions, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 184 or 185, or substitutions of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids Including variants thereof, and HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NO: 186-188; or variants thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2, or 3) amino acids A heavy chain variable domain sequence; and ii) an LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 189 or 190, or And variants thereof comprising substitution of about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 191, or up to about 3 (eg, about 1, 2, or 3) An anti-E7MC construct comprising an anti-E7MC antibody portion that competes with an antibody portion comprising a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising amino acid substitutions is provided.
一部の実施形態では、標的HPV16−E7/MHCクラスI複合体への結合について、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)HC−CDR1;または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)HC−CDR2;または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)HC−CDR3;または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)LC−CDR1;または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)LC−CDR2;または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)LC−CDR3;または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメイン配列を含む抗体部分と競合する抗E7MC抗体部分を含む抗E7MC構築物が提供される。 In some embodiments, for binding to the target HPV16-E7 / MHC class I complex, i) an HC- comprising (in some embodiments consisting of) an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 57-77. CDR1; or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98 (some HC-CDR2 comprising: in embodiments); or variants thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions; and SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245 HC-CDR3 comprising (in some embodiments) any one of the amino acid sequences; or up to about 5 (eg, about 1, 2, 3, 4 or 5 Any) a heavy chain variable domain sequence comprising a variant thereof comprising amino acid substitutions; and ii) an LC-CDR1 comprising (in some embodiments consisting of) an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 120-140 and 246 Or variants thereof containing substitutions of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 141-161 (some implementations) LC-CDR2 comprising thereof in the form; or a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids; and any one of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250 LC-CDR3 comprising (consisting of in some embodiments) an amino acid sequence; or up to about 5 (eg, about 1, , Anti E7MC constructs comprising anti E7MC antibody portion that competes with the antibody portion that comprises a light chain variable domain sequence comprising the variant comprises substitution of one) amino acids of the 3, 4 or 5 is provided.
一部の実施形態では、標的HPV16−E7/MHCクラスI複合体への結合について、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)HC−CDR1;配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)HC−CDR2;ならびに配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)HC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)LC−CDR1;配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)LC−CDR2;ならびに配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)LC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン配列;またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む抗体部分と競合する抗E7MC抗体部分を含む抗E7MC構築物が提供される。 In some embodiments, for binding to the target HPV16-E7 / MHC class I complex, i) an HC- comprising (in some embodiments consisting of) an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 57-77. CDR1; HC-CDR2 comprising (consisting of in some embodiments) any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98; and any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 99-119, 244, and 245 ( A heavy chain variable domain sequence comprising HC-CDR3 (in some embodiments); or up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids in the HC-CDR sequence; Variants thereof comprising substitutions; and ii) comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 120-140 and 246 (in some embodiments) LC-CDR1 comprising: an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 141-161 (consisting in some embodiments); and any one of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250 A light chain variable domain sequence comprising LC-CDR3 comprising (consisting of in some embodiments) one amino acid sequence; or up to about 5 (eg, about 1, 2, 3, 4 or 5 in the LC-CDR sequence) Any) An anti-E7MC construct is provided that comprises an anti-E7MC antibody portion that competes with an antibody portion comprising that variant containing amino acid substitutions.
一部の実施形態では、標的HPV16−E7/MHCクラスI複合体への結合について、配列番号15〜35および233〜237のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれか)の配列同一性を有するそのバリアント、ならびに配列番号36〜56および238〜243のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれか)の配列同一性を有するそのバリアントを含む抗体部分と競合する抗E7MC抗体部分を含む抗E7MC構築物が提供される。 In some embodiments, the binding to a target HPV16-E7 / MHC class I complex comprises the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 15-35 and 233-237 (in some embodiments, consists thereof). A heavy chain variable domain, or variant thereof having at least about 95% (e.g., at least about 96%, 97%, 98%, or 99%) sequence identity, and SEQ ID NOs: 36-56 and 238-243, respectively. A light chain variable domain comprising any one amino acid sequence (consisting of it in some embodiments), or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% of any) sequence Provided is an anti-E7MC construct comprising an anti-E7MC antibody portion that competes with an antibody portion comprising that variant having identity.
異なる態様は、以下の種々のセクションにおいてさらに詳細に議論される。 Different aspects are discussed in further detail in the various sections below.
抗E7MC抗体部分
抗E7MC構築物は、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分を含む。
Anti-E7MC antibody portion The anti-E7MC construct comprises an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、細胞の表面上に存在するE7MCに特異的に結合する。一部の実施形態では、細胞は、がん細胞である。一部の実施形態では、がん細胞は、固形腫瘍中にある。一部の実施形態では、がん細胞は、転移性がん細胞である。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion specifically binds to E7MC present on the surface of the cell. In some embodiments, the cell is a cancer cell. In some embodiments, the cancer cell is in a solid tumor. In some embodiments, the cancer cell is a metastatic cancer cell.
一部の実施形態では、HPV16−E7ペプチドは、MHCクラスI拘束されたペプチドである。一部の実施形態では、HPV16−E7ペプチドは、約8〜約12(例えば、約8、9、10、11または12のいずれか)アミノ酸長である。 In some embodiments, the HPV16-E7 peptide is an MHC class I restricted peptide. In some embodiments, the HPV16-E7 peptide is about 8 to about 12 (eg, any of about 8, 9, 10, 11 or 12) amino acids in length.
一部の実施形態では、HPV16−E7ペプチドは、HPV16−E7のアミノ酸7〜15(TLHEYMLDL、配列番号3)、HPV16−E7のアミノ酸11〜19(YMLDLQPET、配列番号4、本明細書で「HPV16−E7 11−19」とも呼ぶ)、HPV16−E7のアミノ酸16〜25(QPETTDLYCY、配列番号5)、HPV16−E7のアミノ酸44〜52(QAEPDRAHY、配列番号6)、HPV16−E7のアミノ酸46〜55(EPDRAHYNIV、配列番号7)、HPV16−E7のアミノ酸49〜57(RAHYNIVTF、配列番号8)、HPV16−E7のアミノ酸82〜90(LLMGTLGIV、配列番号9)、またはHPV16−E7のアミノ酸86〜93(TLGIVCPI、配列番号10)の配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)。 In some embodiments, the HPV16-E7 peptide comprises amino acids 7-15 of HPV16-E7 (TLHEYMLDL, SEQ ID NO: 3), amino acids 11-19 of HPV16-E7 (YMLDLQPET, SEQ ID NO: 4, herein referred to as “HPV16 -E7 11-19 "), amino acids 16-25 of HPV16-E7 (QPETTDLYCY, SEQ ID NO: 5), amino acids 44-52 of HPV16-E7 (QAEPDRAHY, SEQ ID NO: 6), amino acids 46-55 of HPV16-E7 (EPDRAHYNIV, SEQ ID NO: 7), amino acids 49-57 of HPV16-E7 (RAHYNIVTF, SEQ ID NO: 8), amino acids 82-90 of HPV16-E7 (LLMGTLGIV, SEQ ID NO: 9), or amino acids 86-93 of HPV16-E7 ( TLGIVCPI It comprises the sequence of SEQ ID NO: 10) (made of it in some embodiments).
一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A、HLA−B、HLA−C、HLA−E、HLA−FまたはHLA−Gである。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−Aである。一部の実施形態では、HLA−Aは、HLA−A02である。一部の実施形態では、HLA−A02は、HLA−A*02:01である。
In some embodiments, the MHC class I protein is HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-E, HLA-F or HLA-G. In some embodiments, the MHC class I protein is HLA-A. In some embodiments, HLA-A is HLA-A02. In some embodiments, HLA-A02 is HLA-
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、抗原結合断片、例えば、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv断片、ジスルフィド安定化Fv断片(dsFv)および単鎖抗体分子(scFv)からなる群から選択される抗原結合断片である。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、scFvである。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、ヒト、ヒト化または半合成である。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion is a full length antibody. In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises antigen binding fragments, such as Fab, Fab ′, F (ab ′) 2, Fv fragments, disulfide stabilized Fv fragments (dsFv) and single chain antibody molecules (scFv). An antigen-binding fragment selected from the group consisting of In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion is an scFv. In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion is human, humanized or semi-synthetic.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、複合体中のHPV16−E7ペプチドのN末端部分に特異的に結合する。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、複合体中のHPV16−E7ペプチドのC末端部分に特異的に結合する。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、複合体中のHPV16−E7ペプチドの中央部分に特異的に結合する。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion specifically binds to the N-terminal portion of the HPV16-E7 peptide in the complex. In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion specifically binds to the C-terminal portion of the HPV16-E7 peptide in the complex. In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion specifically binds to the central portion of the HPV16-E7 peptide in the complex.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分(または抗E7MC抗体部分を含む抗E7MC構築物)は、全長HPV16−E7、遊離HPV16−E7ペプチド、ペプチドに結合していないMHCクラスIタンパク質および非HPV16−E7ペプチドに結合したMHCクラスIタンパク質の各々に対するその結合親和性の少なくとも約10(例えば、少なくとも約10、20、30、40、50、75、100、200、300、400、500、750、1000またはそれ超のいずれかを含む)倍である親和性で、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に結合する。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分(または抗E7MC抗体部分を含む抗E7MC構築物)は、全長HPV16−E7、遊離HPV16−E7ペプチド、ペプチドに結合していないMHCクラスIタンパク質および非HPV16−E7ペプチドに結合したMHCクラスIタンパク質の各々への結合についてのそのKdの約1/10倍以下(例えば、約1/10、1/20、1/30、1/40、1/50、1/75、1/100、1/200、1/300、1/400、1/500、1/750、1/1000またはそれ未満のいずれか以下)のKdで、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に結合する。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion (or an anti-E7MC construct comprising an anti-E7MC antibody portion) comprises full length HPV16-E7, free HPV16-E7 peptide, MHC class I protein not bound to peptide and non-HPV16- At least about 10 of its binding affinity for each of the MHC class I proteins bound to the E7 peptide (eg, at least about 10, 20, 30, 40, 50, 75, 100, 200, 300, 400, 500, 750, 1000 It binds to complexes containing HPV16-E7 peptides and MHC class I proteins with a double affinity (including any). In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion (or an anti-E7MC construct comprising an anti-E7MC antibody portion) comprises full length HPV16-E7, free HPV16-E7 peptide, MHC class I protein not bound to peptide and non-HPV16- About 1/10 or less of its K d for binding to each of the MHC class I proteins bound to the E7 peptide (eg, about 1/10, 1/20, 1/30, 1/40, 1/50, HPV16-E7 peptide and MHC with a Kd of 1/75, 1/100, 1/200, 1/300, 1/400, 1/500, 1/750, 1/1000 or less) Binds to complexes containing class I proteins.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分(または抗E7MC抗体部分を含む抗E7MC構築物)は、約0.1pM〜約500nMの間(例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約0.1pM、1.0pM、10pM、50pM、100pM、500pM、1nM、10nM、50nM、100nMまたは500nMのいずれか)のKdで、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に結合する。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分(または抗E7MC抗体部分を含む抗E7MC構築物)は、約1pM〜約250pMの間(例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約1、10、25、50、75、100、150、200または250pMのいずれか)のKdで、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に結合する。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分(または抗E7MC抗体部分を含む抗E7MC構築物)は、約1nM〜約500nMの間(例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約1、10、25、50、75、100、150、200、250、300、350、400、450または500nMのいずれか)のKdで、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に結合する。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion (or an anti-E7MC construct comprising an anti-E7MC antibody portion) is between about 0.1 pM and about 500 nM (eg, including any range between these values; Binds to complexes comprising HPV16-E7 peptides and MHC class I proteins with a Kd of about 0.1 pM, 1.0 pM, 10 pM, 50 pM, 100 pM, 500 pM, 1 nM, 10 nM, 50 nM, 100 nM or 500 nM) To do. In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion (or an anti-E7MC construct comprising an anti-E7MC antibody portion) is between about 1 pM and about 250 pM (eg, including any range between these values, about 1 , with a K d of any) of 10,25,50,75,100,150,200 or 250 pM, it binds to a complex containing HPV16-E7 peptides and MHC class I proteins. In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion (or an anti-E7MC construct comprising an anti-E7MC antibody portion) is between about 1 nM and about 500 nM (eg, including any range between these values, about 1 Binds to complexes comprising HPV16-E7 peptides and MHC class I proteins with a Kd of 10, 25, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450 or 500 nM) To do.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合し、この抗E7MC抗体部分は、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質の対立遺伝子バリアントを含む少なくとも1つの複合体と交差反応する。一部の実施形態では、対立遺伝子バリアントは、MHCクラスIタンパク質と比較した場合、最大で約10(例えば、約1、2、3、4、5、6、7、8、9または10のいずれか)アミノ酸の置換を有する。一部の実施形態では、対立遺伝子バリアントは、MHCクラスIタンパク質と同じ血清型である。一部の実施形態では、対立遺伝子バリアントは、MHCクラスIタンパク質とは異なる血清型である。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質の対立遺伝子バリアントを含むいずれの複合体とも交差反応しない。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、HPV16−E7ペプチドおよび異なるサブタイプのMHCクラスIタンパク質を含む少なくとも1つ(例えば、少なくとも2、3、4または5のいずれか)の複合体と交差反応する。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein, the anti-E7MC antibody portion comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein. Cross-reacts with at least one complex containing an allelic variant. In some embodiments, the allelic variant has a maximum of about 10 (eg, any of about 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 when compared to MHC class I protein). Or) have amino acid substitutions. In some embodiments, the allelic variant is the same serotype as the MHC class I protein. In some embodiments, the allelic variant is a serotype that is different from the MHC class I protein. In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion does not cross-react with any complex comprising HPV16-E7 peptides and allelic variants of MHC class I proteins. In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises at least one complex (eg, any of at least 2, 3, 4 or 5) comprising an HPV16-E7 peptide and a different subtype of MHC class I protein. Cross react.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合し、この抗E7MC抗体部分は、MHCクラスIタンパク質および1つのアミノ酸置換(例えば、保存的アミノ酸置換)を有するHPV16−E7ペプチドのバリアントを含む少なくとも1つの複合体と交差反応する。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、MHCクラスIタンパク質およびHPV16−E7ペプチドのバリアントを含む任意の複合体と交差反応しない。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, the anti-E7MC antibody portion comprising an MHC class I protein and one amino acid substitution ( For example, it cross-reacts with at least one complex comprising a variant of the HPV16-E7 peptide having conservative amino acid substitutions). In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion does not cross-react with any complex comprising MHC class I protein and HPV16-E7 peptide variants.
例えば、一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、HPV16−E7 11−19(配列番号4)およびMHCクラスIタンパク質(例えば、HLA−A02、例えば、HLA−A*02:01)を含む複合体に特異的に結合する。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号12のアラニン置換されたHPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質(例えば、HLA−A02、例えば、HLA−A*02:01)を含む複合体;配列番号13のアラニン置換されたHPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質(例えば、HLA−A02、例えば、HLA−A*02:01)を含む複合体;ならびに配列番号14のアラニン置換されたHPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質(例えば、HLA−A02、例えば、HLA−A*02:01)を含む複合体のうち少なくとも1つ(少なくとも約2または3のいずれかを含む)にさらに結合する。
For example, in some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HPV16-E7 11-19 (SEQ ID NO: 4) and an MHC class I protein (eg, HLA-A02, eg, HLA-
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号4のHPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質(例えば、HLA−A02、例えば、HLA−A*02:01)を含む複合体;配列番号12のアラニン置換されたHPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質(例えば、HLA−A02、例えば、HLA−A*02:01)を含む複合体;ならびに配列番号13のアラニン置換されたHPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質(例えば、HLA−A02、例えば、HLA−A*02:01)を含む複合体、に特異的に結合する。
In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a complex comprising the HPV16-E7 peptide of SEQ ID NO: 4 and an MHC class I protein (eg, HLA-A02, eg, HLA-
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号4のHPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質(例えば、HLA−A02、例えば、HLA−A*02:01)を含む複合体;配列番号12のアラニン置換されたHPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質(例えば、HLA−A02、例えば、HLA−A*02:01)を含む複合体;ならびに配列番号14のアラニン置換されたHPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質(例えば、HLA−A02、例えば、HLA−A*02:01)を含む複合体、に特異的に結合する。
In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a complex comprising the HPV16-E7 peptide of SEQ ID NO: 4 and an MHC class I protein (eg, HLA-A02, eg, HLA-
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号4のHPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質(例えば、HLA−A02、例えば、HLA−A*02:01)を含む複合体;ならびに配列番号12のアラニン置換されたHPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質(例えば、HLA−A02、例えば、HLA−A*02:01)を含む複合体、に特異的に結合する。
In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a complex comprising the HPV16-E7 peptide of SEQ ID NO: 4 and an MHC class I protein (eg, HLA-A02, eg, HLA-
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号4のHPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質(例えば、HLA−A02、例えば、HLA−A*02:01)を含む複合体;ならびに配列番号14のアラニン置換されたHPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質(例えば、HLA−A02、例えば、HLA−A*02:01)を含む複合体、に特異的に結合する。
In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a complex comprising the HPV16-E7 peptide of SEQ ID NO: 4 and an MHC class I protein (eg, HLA-A02, eg, HLA-
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、HPV16−E7 11−19(配列番号4)およびHLA−A*02:01を含む複合体に特異的に結合する。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、HPV16−E7 11−19(配列番号4)およびHLA−A*02:02(GenBank受託番号:AFL91480)を含む複合体、HPV16−E7 11−19(配列番号4)およびHLA−A*02:03(GenBank受託番号:AAA03604)を含む複合体、HPV16−E7 11−19(配列番号4)およびHLA−A*02:05(GenBank受託番号:AAA03603)を含む複合体、HPV16−E7 11−19(配列番号4)およびHLA−A*02:06(GenBank受託番号:CCB78868)を含む複合体、HPV16−E7 11−19(配列番号4)およびHLA−A*02:07(GenBank受託番号:ACR55712)を含む複合体、およびHPV16−E7 11−19(配列番号4)およびHLA−A*02:11(GenBank受託番号:CAB56609)を含む複合体のうち少なくとも1つ(少なくとも約2、3、4、5または6のいずれかを含む)と交差反応する。
In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 11-19 (SEQ ID NO: 4) and HLA-
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、HPV16−E7 11−19(配列番号4)およびMHCクラスIタンパク質(例えば、HLA−A02、例えば、HLA−A*02:01)を含む複合体;ならびにYMLDVQPET(配列番号11)のアミノ酸配列を有するHPV16−E7 11−19バリアントおよびMHCクラスIタンパク質(例えば、HLA−A02、例えば、HLA−A*02:01)を含む複合体、に特異的に結合する。
In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a complex comprising HPV16-E7 11-19 (SEQ ID NO: 4) and an MHC class I protein (eg, HLA-A02, eg, HLA-
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、完全にヒトの配列および1または複数の合成領域を含む半合成抗体部分である。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、完全にヒトの軽鎖可変ドメイン、ならびに完全にヒトのFR1、HC−CDR1、FR2、HC−CDR2、FR3およびFR4領域ならびに合成HC−CDR3を含む半合成重鎖可変ドメインを含む半合成抗体部分である。一部の実施形態では、半合成重鎖可変ドメインは、約5〜約25(例えば、約5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24または25のいずれか)アミノ酸長の配列を有する完全に合成のHC−CDR3を含む。一部の実施形態では、半合成重鎖可変ドメインまたは合成HC−CDR3は、約5〜約25(例えば、約5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24または25のいずれか)アミノ酸長の配列を有する完全に合成のHC−CDR3を含む半合成ライブラリー(例えば、半合成ヒトライブラリー)から取得され、この配列中の各アミノ酸は、標準的なヒトアミノ酸マイナスシステインからランダムに選択される。一部の実施形態では、合成HC−CDR3は、約7〜約15(例えば、約7、8、9、10、11、12、13、14または15のいずれか)アミノ酸長である。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion is a semi-synthetic antibody portion comprising a fully human sequence and one or more synthetic regions. In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a fully human light chain variable domain, and fully human FR1, HC-CDR1, FR2, HC-CDR2, FR3 and FR4 regions and a synthetic HC-CDR3. A semi-synthetic antibody portion comprising a semi-synthetic heavy chain variable domain. In some embodiments, the semi-synthetic heavy chain variable domain is about 5 to about 25 (eg, about 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, Any of 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 or 25) comprising a fully synthetic HC-CDR3 having an amino acid long sequence. In some embodiments, the semi-synthetic heavy chain variable domain or synthetic HC-CDR3 is about 5 to about 25 (eg, about 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 , 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, or 25) a semi-synthetic library comprising a fully synthetic HC-CDR3 having a sequence of amino acid length (eg, semi-synthetic human live Each amino acid in this sequence is randomly selected from the standard human amino acids minus cysteine. In some embodiments, the synthetic HC-CDR3 is about 7 to about 15 (eg, any of about 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 or 15) amino acids in length.
抗E7MC抗体部分は、一部の実施形態では、特異的配列またはかかる配列のある特定のバリアントを含む。一部の実施形態では、バリアント配列中のアミノ酸置換は、E7MCに結合する抗E7MC抗体部分の能力を実質的に低減させない。例えば、E7MC結合親和性を実質的に低減させない変更がなされ得る。E7MC結合親和性を実質的に改善する、またはある他の特性、例えば、特異性および/もしくはE7MCの関連のバリアントとの交差反応性に影響を与える変更もまた、企図される。 The anti-E7MC antibody portion comprises, in some embodiments, a specific sequence or certain variants of such sequence. In some embodiments, the amino acid substitution in the variant sequence does not substantially reduce the ability of the anti-E7MC antibody portion to bind to E7MC. For example, changes can be made that do not substantially reduce E7MC binding affinity. Changes that substantially improve E7MC binding affinity or affect certain other properties such as specificity and / or cross-reactivity with related variants of E7MC are also contemplated.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、i)配列番号186〜188のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびにii)配列番号191のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion is i) HC-CDR3 comprising an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOS: 186-188, or up to about 3 (eg, any of about 1, 2, or 3). A) a heavy chain variable domain comprising a variant thereof comprising amino acid substitutions; and ii) an LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 191, or up to about 3 (eg, any of about 1, 2, or 3) amino acids It includes a light chain variable domain containing that variant containing substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、i)配列番号186〜188のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;およびii)配列番号191のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises i) a heavy chain variable domain comprising HC-CDR3 comprising an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 186-188; and ii) an amino acid sequence of SEQ ID NO: 191 It contains a light chain variable domain comprising LC-CDR3.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、i)配列番号183のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号184もしくは185のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号186〜188のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびにii)配列番号189もしくは190のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号191のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises i) an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 183, or a substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2, or 3) amino acids. A variant thereof, an HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 184 or 185, or a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids, and of SEQ ID NOs: 186-188 A heavy chain variable domain comprising HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence, or a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids; and ii) SEQ ID NO: 189 Or LC-CDR1 comprising 190 amino acid sequences, or up to about 3 (eg, any of about 1, 2, or 3) amino acids A variant thereof comprising an acid substitution, and a light chain comprising an LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 191, or a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids Contains variable domains.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、i)配列番号183のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号184もしくは185のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号186〜188のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびにii)配列番号189もしくは190のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号191のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises i) an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 183, or a substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2, or 3) amino acids. A variant thereof, an HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 184 or 185, or a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids, and of SEQ ID NOs: 186-188 A heavy chain variable domain comprising HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence; and ii) LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 189 or 190, or up to about 3 (eg, about 1, 2 or 3 Any) including variants thereof containing amino acid substitutions, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 191 It comprises a light chain variable domain.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、i)配列番号183のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号184または185のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号186〜188のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;またはHC−CDR配列中に最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびにii)配列番号189または190のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、および配列番号191のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン;またはLC−CDR配列中に最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises i) HC-CDR1, comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 183, HC-CDR2, comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 184 or 185, and any of SEQ ID NOs: 186-188 A heavy chain variable domain comprising HC-CDR3 comprising one amino acid sequence; or variants thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids in the HC-CDR sequence; and ii ) A light chain variable domain comprising LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 189 or 190, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 191; or up to about 3 (eg, about 1 in the LC-CDR sequence) 2 or 3) including variants thereof containing amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、i)配列番号183のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号184または185のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号186〜188のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびにii)配列番号189または190のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、および配列番号191のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。本明細書で言及されるCDRの配列は、以下の表2に提供される。
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、i)配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびにii)配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises i) HC-CDR3 comprising an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245, or up to about 5 (eg, about 1, 2, Either 3, 4 or 5) a heavy chain variable domain comprising a variant thereof comprising amino acid substitutions; and ii) an LC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs 162-182 and 247-250, or a maximum A light chain variable domain comprising a variant thereof comprising substitution of about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、i)配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびにii)配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises i) a heavy chain variable domain comprising HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 99-119, 244, and 245; and ii) SEQ ID NOs: 162- A light chain variable domain comprising LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of any one of 182 and 247-250.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion is i) HC-CDR1 comprising an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 57-77, or up to about 5 (eg, about 1, 2, 3, 4, or 5) variants thereof containing amino acid substitutions, HC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98, or up to about 5 (eg, about 1, 2, 3, 4 or 5) Any) HC-CDR3 comprising a variant thereof comprising amino acid substitutions and an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245, or up to about 5 (eg, about 1, 2, 3, 4 Or any of 5) a heavy chain variable domain comprising a variant thereof comprising amino acid substitutions; and ii) any one amino acid of SEQ ID NOs: 120-140 and 246 An amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 141-161, comprising LC-CDR1 comprising a column, or variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids Including LC-CDR2, or a variant thereof containing substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids, and any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250 It includes a light chain variable domain comprising LC-CDR3, or variants thereof containing up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion is i) HC-CDR1 comprising an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 57-77, or up to about 5 (eg, about 1, 2, 3, 4, or 5) variants thereof containing amino acid substitutions, HC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98, or up to about 5 (eg, about 1, 2, 3, 4 or 5) Any) a heavy chain variable domain comprising a variant thereof comprising amino acid substitutions, and HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245; and ii) SEQ ID NOs: 120-140 and 246 LC-CDR1 comprising any one of the amino acid sequences, or up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids Variants thereof comprising a substitution, LC-CDR2 comprising an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 141-161, or variants thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids, And a light chain variable domain comprising LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1;配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2;および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1;配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2;および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン配列;またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises i) HC-CDR1 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 57-77; HC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98. And a heavy chain variable domain sequence comprising HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245; or up to about 5 (eg, about 1, 2, Any of 3, 4, or 5) variants thereof comprising amino acid substitutions; and ii) LC-CDR1 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 120-140 and 246; any one of SEQ ID NOs: 141-161 LC-CDR2 containing the amino acid sequence; and any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250 A light chain variable domain sequence comprising LC-CDR3 comprising: or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids in the LC-CDR sequence .
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1;配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2;ならびに配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントであって、これらのアミノ酸置換は、HC−CDR1またはHC−CDR2中にある、重鎖可変ドメイン配列またはそのバリアント;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1;配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2;ならびに配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン配列;または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントであって、これらのアミノ酸置換は、HC−CDR1またはHC−CDR2中にある、軽鎖可変ドメイン配列またはそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises i) HC-CDR1 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 57-77; HC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98. And a heavy chain variable domain sequence comprising HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245; or up to about 5 (eg, about 1, 2, 3, 4 or 5 Any) a variant thereof comprising amino acid substitutions, wherein these amino acid substitutions are in the HC-CDR1 or HC-CDR2, heavy chain variable domain sequences or variants thereof; and ii) SEQ ID NOs 120-140 and 246 LC-CDR1 containing any one amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 141 to 161 A light chain variable domain sequence comprising LC-CDR2 comprising a column; and LC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs 162-182 and 247-250; or at most about 5 (eg, about 1, 2, Any of 3, 4 or 5) variants thereof comprising amino acid substitutions, wherein these amino acid substitutions comprise a light chain variable domain sequence or variant thereof in HC-CDR1 or HC-CDR2.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1;配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2;ならびに配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1;配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2;ならびに配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン配列を含む。本明細書で言及されるHC−CDRの配列は、以下の表3に提供され、本明細書で言及されるLC−CDRの配列は、以下の表4に提供される。
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号15〜35および233〜237のいずれか1つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアント、ならびに配列番号36〜56および238〜243のいずれか1つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 15-35 and 233-237, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97 A light chain variable domain comprising any one of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 36-56 and 238-243, or at least about 95 % Thereof (eg, including at least 96%, 97%, 98% or 99%) sequence identity thereof.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号15〜35および233〜237のいずれか1つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインならびに配列番号36〜56および238〜243のいずれか1つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 15-35 and 233-237 and any one of SEQ ID NOs: 36-56 and 238-243. Contains a light chain variable domain comprising an amino acid sequence.
重鎖および軽鎖可変ドメインは、いくつかの抗E7MC抗体部分を生成するために、種々のペアワイズの組合せで組み合わされ得る。 The heavy and light chain variable domains can be combined in various pairwise combinations to produce several anti-E7MC antibody portions.
例えば、一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号57のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号78のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号99のアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号120のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号141のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号162のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。
For example, in some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 57, or up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids. Variants thereof comprising the substitution of: HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 78, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and A heavy chain variable domain comprising an HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 99, or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号57のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号78のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号99のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン、またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号120のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号141のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号162のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン、またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 57, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 78, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 99. A heavy chain variable domain comprising, or a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions in the HC-CDR sequence; and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 120 A light chain variable domain comprising LC-CDR1, comprising LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 141, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 162, or up to about 5 in the LC-CDR sequence (eg, About 1, 2, 3, 4 or 5) including variants thereof containing amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号57のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号78のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号99のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号120のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号141のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号162のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 57, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 78, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 99. A light chain variable domain comprising: a heavy chain variable domain comprising: an LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 120, an LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 141, and an LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 162 Including.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号58のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号79のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号100のアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号121のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号142のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号163のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 58, or a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids. A HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 79, or a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions; and SEQ ID NO: A heavy chain variable domain comprising a HC-CDR3 comprising 100 amino acid sequences, or variants thereof containing substitutions of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: 121 LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of column no. 142, or variants thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids; and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 163 Or a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号58のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号79のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号100のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン、またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号121のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号142のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号163のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン、またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 58, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 79, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 100. A heavy chain variable domain comprising, or a variant thereof comprising a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids in the HC-CDR sequence; and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 121 A light chain variable domain comprising LC-CDR1, comprising LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 142, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 163, or up to about 5 in the LC-CDR sequence (eg, About 1, 2, 3, 4 or 5) including variants thereof containing amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号58のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号79のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号100のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号121のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号142のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号163のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 58, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 79, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 100. A light chain variable domain comprising: a heavy chain variable domain comprising: an LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 121, an LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 142, and an LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 163 Including.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号59のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号80のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号101のアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号122のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号143のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号164のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 59, or a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids. HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: HC-CDR3 comprising 101 amino acid sequences, or a heavy chain variable domain comprising a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: 122 LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of column no. 143, or variants thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids; and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 164 Or a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号59のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号80のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号101のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン、またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号122のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号143のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号164のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン、またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 59, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 101. A heavy chain variable domain comprising, or a variant thereof comprising a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids in the HC-CDR sequence; and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 122 A light chain variable domain comprising LC-CDR1, comprising LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 143, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 164, or up to about 5 in the LC-CDR sequence (eg, About 1, 2, 3, 4 or 5) including variants thereof containing amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号59のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号80のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号101のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号122のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号143のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号164のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 59, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 80, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 101. A light chain variable domain comprising a heavy chain variable domain comprising: an LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 122, an LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 143, and an LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 164 Including.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号60のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号81のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号102のアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号123のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号144のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号165のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 60, or a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids. A HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: A heavy chain variable domain comprising a HC-CDR3 comprising 102 amino acid sequences, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: 123 LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of column no. 144, or variants thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids; and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 165 Or a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号60のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号81のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号102のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン、またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号123のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号144のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号165のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン、またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 60, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 102. A heavy chain variable domain comprising, or a variant thereof comprising a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids in the HC-CDR sequence; and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 123 A light chain variable domain comprising LC-CDR1, comprising LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 144, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 165, or up to about 5 in the LC-CDR sequence (eg, About 1, 2, 3, 4 or 5) including variants thereof containing amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号60のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号81のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号102のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号123のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号144のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号165のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 60, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 81, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 102. A light chain variable domain comprising: a heavy chain variable domain comprising: an LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 123, an LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 144, and an LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 165 Including.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号61のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号82のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号103のアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号124のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号145のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号166のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 61, or a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids. HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: A heavy chain variable domain comprising HC-CDR3 comprising 103 amino acid sequences, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: 124 LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of column no. 145, or variants thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids; and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 166 Or a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号61のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号82のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号103のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン、またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号124のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号145のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号166のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン、またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 61, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 103. A heavy chain variable domain comprising, or a variant thereof comprising a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids in the HC-CDR sequence; and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 124 A light chain variable domain comprising LC-CDR1, comprising LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 145, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 166, or up to about 5 in the LC-CDR sequence (eg, About 1, 2, 3, 4 or 5) including variants thereof containing amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号61のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号82のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号103のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号124のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号145のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号166のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 61, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 82, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 103. A light chain variable domain comprising: a heavy chain variable domain comprising: an LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 124, an LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 145, and an LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 166. Including.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号62のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号83のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号104のアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号125のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号146のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号167のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 62, or a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids. A HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 83, or a variant thereof comprising a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: A heavy chain variable domain comprising HC-CDR3 comprising 104 amino acid sequences, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: 125 LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of column no. 146, or variants thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids; and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 167 Or a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号62のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号83のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号104のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン、またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号125のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号146のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号167のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン、またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 62, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 83, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 104. A heavy chain variable domain comprising, or a variant thereof comprising a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids in the HC-CDR sequence; and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 125 A light chain variable domain comprising LC-CDR1, comprising LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 146, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 167, or up to about 5 in the LC-CDR sequence (eg, About 1, 2, 3, 4 or 5) including variants thereof containing amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号62のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号83のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号104のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号125のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号146のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号167のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 62, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 83, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 104. A light chain variable domain comprising a heavy chain variable domain comprising: an LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 125, an LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 146, and an LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 167 Including.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号63のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号84のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号105のアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号126のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号147のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号168のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 63, or a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids. HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 84, or variants thereof containing substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: A heavy chain variable domain comprising HC-CDR3 comprising 105 amino acid sequences, or variants thereof comprising substitutions of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: 126 LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of column no. 147, or variants thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids; and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 168 Or a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号63のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号84のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号105のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン、またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号126のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号147のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号168のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン、またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 63, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 84, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 105. A heavy chain variable domain comprising, or a variant thereof comprising a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids in the HC-CDR sequence; and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 126 A light chain variable domain comprising LC-CDR1, comprising LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 147, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 168, or up to about 5 in the LC-CDR sequence (eg, About 1, 2, 3, 4 or 5) including variants thereof containing amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号63のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号84のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号105のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号126のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号147のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号168のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 63, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 84, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 105. A light chain variable domain comprising: a heavy chain variable domain comprising: an LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 126; an LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 147; and an LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 168. Including.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号64のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号85のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号106のアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号127のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号148のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号169のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 64, or a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids. A HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 85, or a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions; and SEQ ID NO: A heavy chain variable domain comprising HC-CDR3 comprising 106 amino acid sequences, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: 127 LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of column no. 148, or variants thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids; and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 169 Or a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号64のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号85のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号106のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン、またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号127のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号148のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号169のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン、またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 64, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 85, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 106. A heavy chain variable domain comprising, or a variant thereof comprising a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids in the HC-CDR sequence; and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 127 A light chain variable domain comprising LC-CDR1, comprising LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 148, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 169, or up to about 5 in the LC-CDR sequence (eg, About 1, 2, 3, 4 or 5) including variants thereof containing amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号64のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号85のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号106のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号127のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号148のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号169のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises: A light chain variable domain comprising: a heavy chain variable domain comprising: an LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 127; an LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 148; Including.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号65のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号86のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号107のアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号128のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号149のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号170のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 65, or a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids. A HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 86, or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: A heavy chain variable domain comprising a HC-CDR3 comprising 107 amino acid sequences, or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: 128 LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of column number 149, or a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids; and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 170 Or a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号65のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号86のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号107のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン、またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号128のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号149のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号170のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン、またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 65, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 86, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 107. A heavy chain variable domain comprising, or a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions in the HC-CDR sequence; and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 128 A light chain variable domain comprising LC-CDR1, comprising LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 149, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 170, or up to about 5 in the LC-CDR sequence (eg, About 1, 2, 3, 4 or 5) including variants thereof containing amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号65アミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号86のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号107のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号128のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号149のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号170のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 65, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 86, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 107. A heavy chain variable domain; and a light chain variable domain comprising LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 128, LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 149, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 170 .
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号66のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号87のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号108のアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号129のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号150のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号171のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 66, or a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids. HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 87, or variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: A heavy chain variable domain comprising HC-CDR3 comprising 108 amino acid sequences, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: 129 LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of column no. 150, or variants thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids; and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 171 Or a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号66のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号87のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号108のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン、またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号129のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号150のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号171のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン、またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 66, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 87, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 108. A heavy chain variable domain comprising, or a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions in the HC-CDR sequence; and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 129 A light chain variable domain comprising LC-CDR1, comprising LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 150, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 171, or up to about 5 in the LC-CDR sequence (eg, About 1, 2, 3, 4 or 5) including variants thereof containing amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号66のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号87のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号108のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号129のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号150のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号171のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 66, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 87, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 108. A light chain variable domain comprising: a heavy chain variable domain comprising: an LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 129, an LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 150, and an LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 171 Including.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号67のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号88のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号109のアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号130のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号151のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号172のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 67, or a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids. HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 88, or variants thereof containing substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: A heavy chain variable domain comprising HC-CDR3 comprising 109 amino acid sequences, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: 130 LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of column number 151, or variants thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2, or 3) amino acids; and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 172 Or a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号67のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号88のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号109のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン、またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号130のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号151のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号172のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン、またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 67, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 88, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 109. A heavy chain variable domain comprising, or a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions in the HC-CDR sequence; and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 130 A light chain variable domain comprising LC-CDR1, comprising LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 151, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 172, or up to about 5 in the LC-CDR sequence (eg, About 1, 2, 3, 4 or 5) including variants thereof containing amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号67のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号88のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号109のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号130のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号151のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号172のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 67, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 88, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 109 A light chain variable domain comprising a heavy chain variable domain comprising: Including.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号68のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号89のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号110のアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号131のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号152のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号173のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 68, or a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids. A HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 89, or a variant thereof comprising a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: A heavy chain variable domain comprising HC-CDR3 comprising 110 amino acid sequences, or variants thereof comprising substitutions of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: 131 LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of column no. 152, or variants thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids; and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 173 Or a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号68のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号89のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号110のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン、またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号131のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号152のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号173のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン、またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 68, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 89, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 110. A heavy chain variable domain comprising, or a variant thereof comprising a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids in the HC-CDR sequence; and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 131 A light chain variable domain comprising LC-CDR1, comprising LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 152, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 173, or up to about 5 in the LC-CDR sequence (eg, About 1, 2, 3, 4 or 5) including variants thereof containing amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号68のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号89のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号110のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号131のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号152のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号173のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 68, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 89, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 110. A light chain variable domain comprising: a heavy chain variable domain comprising; and LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 131, LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 152, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 173 Including.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号69のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号90のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号111のアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号132のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号153のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号174のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 69, or a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids. HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 90, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: A heavy chain variable domain comprising a HC-CDR3 comprising 111 amino acid sequences, or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: 132 LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of column number 153, or variants thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2, or 3) amino acids; and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 174 Or a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号69のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号90のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号111のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン、またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号132のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号153のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号174のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン、またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 69, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 90, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 111. A heavy chain variable domain comprising, or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids in the HC-CDR sequence; and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 132 A light chain variable domain comprising LC-CDR1, comprising LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 153, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 174, or up to about 5 in the LC-CDR sequence (eg, About 1, 2, 3, 4 or 5) including variants thereof containing amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号69のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号90のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号111のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号132のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号153のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号174のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 69, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 90, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 111. A light chain variable domain comprising: a heavy chain variable domain comprising: an LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 132, an LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 153, and an LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 174 Including.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号70のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号91のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号112のアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号133のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号154のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号175のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 70, or a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids. HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 91, or variants thereof containing substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: A heavy chain variable domain comprising HC-CDR3 comprising 112 amino acid sequences, or variants thereof comprising substitutions of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: 133 LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of column number 154, or variants thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2, or 3) amino acids; and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 175 Or a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号70のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号91のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号112のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン、またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号133のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号154のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号175のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン、またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 70, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 91, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 112. A heavy chain variable domain comprising, or a variant thereof comprising a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids in the HC-CDR sequence; and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 133 A light chain variable domain comprising LC-CDR1, comprising LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 154, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 175, or up to about 5 in the LC-CDR sequence (eg, About 1, 2, 3, 4 or 5) including variants thereof containing amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号70のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号91のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号112のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号133のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号154のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号175のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 70, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 91, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 112. A light chain variable domain comprising: an LC-CDR1 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 133; an LC-CDR2 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 154; and an LC-CDR3 comprising an amino acid sequence of SEQ ID NO: 175; Including.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号71のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号92のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号113のアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号134のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号155のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号176のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 71, or a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids. HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 92, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: An HC-CDR3 comprising 113 amino acid sequences, or a heavy chain variable domain comprising a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: 134 LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of column no. 155, or variants thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids; and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 176 Or a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号71のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号92のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号113のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン、またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号134のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号155のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号176のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン、またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 71, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 92, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 113. A heavy chain variable domain comprising, or a variant thereof comprising a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids in the HC-CDR sequence; and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 134 A light chain variable domain comprising LC-CDR1, comprising LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 155, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 176, or up to about 5 in the LC-CDR sequence (eg, About 1, 2, 3, 4 or 5) including variants thereof containing amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号71のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号92のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号113のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号134のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号155のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号176のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises: A light chain variable domain comprising: a heavy chain variable domain comprising: an LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 134; an LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 155; Including.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号72のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号93のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号114のアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号135のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号156のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号177のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 72, or a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids. HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 93, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: A heavy chain variable domain comprising HC-CDR3 comprising 114 amino acid sequences, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: 135 LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of column number 156, or a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2, or 3) amino acids; and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 177 Or a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号72のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号93のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号114のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン、またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号135のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号156のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号177のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン、またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 72, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 93, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 114. A heavy chain variable domain comprising, or a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions in the HC-CDR sequence; and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 135 A light chain variable domain comprising LC-CDR1, comprising LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 156, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 177, or up to about 5 in the LC-CDR sequence (eg, About 1, 2, 3, 4 or 5) including variants thereof containing amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号72のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号93のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号114のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号135のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号156のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号177のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 72, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 93, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 114. A light chain variable domain comprising: a heavy chain variable domain comprising: an LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 135, an LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 156, and an LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 177 Including.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号73のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号94のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号115のアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号136のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号157のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号178のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 73, or a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids. HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 94, or variants thereof containing substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: A heavy chain variable domain comprising HC-CDR3 comprising 115 amino acid sequences, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: 136 LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of column number 157, or variants thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2, or 3) amino acids; and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 178 Or a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号73のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号94のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号115のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン、またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号136のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号157のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号178のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン、またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 73, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 94, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 115. A heavy chain variable domain comprising, or a variant thereof comprising a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids in the HC-CDR sequence; and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 136 A light chain variable domain comprising LC-CDR1, comprising LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 157, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 178, or up to about 5 in the LC-CDR sequence (eg, About 1, 2, 3, 4 or 5) including variants thereof containing amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号73のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号94のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号115のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号136のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号157のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号178のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 73, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 94, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 115. A light chain variable domain comprising: a heavy chain variable domain comprising: an LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 136; an LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 157; and an LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 178. Including.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号74のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号95のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号116のアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号137のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号158のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号179のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 74, or a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids. HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 95, or variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: A heavy chain variable domain comprising HC-CDR3 comprising 116 amino acid sequences, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: 137 LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of column number 158, or variants thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids; and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 179 Or a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号74のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号95のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号116のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン、またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号137のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号158のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号179のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン、またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 74, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 95, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 116. A heavy chain variable domain comprising, or a variant thereof comprising a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids in the HC-CDR sequence; and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 137 A light chain variable domain comprising LC-CDR1, comprising LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 158, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 179, or up to about 5 in the LC-CDR sequence (eg, About 1, 2, 3, 4 or 5) including variants thereof containing amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号74のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号95のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号116のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号137のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号158のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号179のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 74, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 95, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 116. A light chain variable domain comprising: a heavy chain variable domain comprising: an LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 137, an LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 158, and an LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 179. Including.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号75のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号96のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号117のアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号138のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号159のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号180のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 75, or a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids. HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 96, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: A heavy chain variable domain comprising HC-CDR3 comprising 117 amino acid sequences, or variants thereof comprising substitutions of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: 138 LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of column number 159, or variants thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2, or 3) amino acids; and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 180 Or a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号75のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号96のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号117のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン、またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号138のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号159のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号180のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン、またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 75, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 96, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 117. A heavy chain variable domain comprising, or a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions in the HC-CDR sequence; and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 138 A light chain variable domain comprising LC-CDR1, comprising LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 159, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 180, or up to about 5 in the LC-CDR sequence (eg, About 1, 2, 3, 4 or 5) including variants thereof containing amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号75のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号96のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号117のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号138のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号159のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号180のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 75, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 96, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 117. A light chain variable domain comprising a heavy chain variable domain comprising: an LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 138, an LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 159, and an LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 180 Including.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号76のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号97のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号118のアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号139のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号160のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号181のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 76, or a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids. A HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 97, or a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions; and SEQ ID NO: A heavy chain variable domain comprising HC-CDR3 comprising 118 amino acid sequences, or variants thereof comprising substitutions of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: 139 LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of column no. 160, or variants thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids; and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 181 Or a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号76のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号97のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号118のアミノ酸配列を含むHC−CDR3含む重鎖可変ドメイン、またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号139のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号160のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号181のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン、またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 76, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 97, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 118. A heavy chain variable domain, or variant thereof comprising a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids in the HC-CDR sequence; and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 139 LC-CDR1, a light chain variable domain comprising LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 160, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 181 or up to about 5 in the LC-CDR sequence (eg, about 1, 2, 3, 4 or 5) including variants thereof containing amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号76のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号97のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号118のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号139のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号160のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号181のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises: A light chain variable domain comprising a heavy chain variable domain comprising: Including.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号77のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号98のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号119のアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号140のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号161のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号182のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77, or a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids. HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 98, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: A heavy chain variable domain comprising HC-CDR3 comprising 119 amino acid sequences, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: 140 LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of column number 161, or a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2, or 3) amino acids; and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 182 Or a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号77のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号98のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号119のアミノ酸配列を含むHC−CDR3含む重鎖可変ドメイン、またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号140のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号161のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号182のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン、またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 98, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 119. A heavy chain variable domain, or variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids in the HC-CDR sequence; as well as the amino acid sequence of SEQ ID NO: 140 LC-CDR1, a light chain variable domain comprising LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 161, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 182, or up to about 5 in the LC-CDR sequence (eg, about 1, 2, 3, 4 or 5) including variants thereof containing amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号77のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号98のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号119のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号140のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号161のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号182のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 98, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 119. A light chain variable domain comprising a heavy chain variable domain comprising: an LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 140, an LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 161, and an LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 182 Including.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号77のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号98のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号244のアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号140のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号161のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号182のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77, or a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids. HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 98, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: A heavy chain variable domain comprising HC-CDR3 comprising 244 amino acid sequences, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: 140 LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of column number 161, or a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2, or 3) amino acids; and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 182 Or a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号77のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号98のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号244のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン、またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号140のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号161のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号182のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン、またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 98, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 244. A heavy chain variable domain comprising, or a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions in the HC-CDR sequence; and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 140 A light chain variable domain comprising LC-CDR1, comprising LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 161, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 182, or up to about 5 in the LC-CDR sequence (eg, About 1, 2, 3, 4 or 5) including variants thereof containing amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号77のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号98のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号244のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号140のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号161のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号182のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 98, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 244. A light chain variable domain comprising a heavy chain variable domain comprising: an LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 140, an LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 161, and an LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 182 Including.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号77のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号98のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号245のアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号140のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号161のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号182のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77, or a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids. HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 98, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: A heavy chain variable domain comprising HC-CDR3 comprising 245 amino acid sequences, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: 140 LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of column number 161, or a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2, or 3) amino acids; and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 182 Or a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号77のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号98のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号245のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン、またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号140のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号161のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号182のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン、またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 98, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 245. A heavy chain variable domain comprising, or a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions in the HC-CDR sequence; and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 140 A light chain variable domain comprising LC-CDR1, comprising LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 161, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 182, or up to about 5 in the LC-CDR sequence (eg, About 1, 2, 3, 4 or 5) including variants thereof containing amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号77のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号98のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号245のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号140のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号161のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号182のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 98, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 245. A light chain variable domain comprising a heavy chain variable domain comprising: an LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 140, an LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 161, and an LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 182 Including.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号77のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号98のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号119のアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号140のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号161のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号247のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77, or a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids. HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 98, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: A heavy chain variable domain comprising HC-CDR3 comprising 119 amino acid sequences, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: 140 LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of column number 161, or a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids; and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 247 Or a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号77のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号98のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号119のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン、またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号140のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号161のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号247のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン、またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 98, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 119. A heavy chain variable domain comprising, or a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions in the HC-CDR sequence; and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 140 A light chain variable domain comprising LC-CDR1, comprising LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 161, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 247, or up to about 5 in the LC-CDR sequence (eg, About 1, 2, 3, 4 or 5) including variants thereof containing amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号77のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号98のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号119のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号140のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号161のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号247のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 98, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 119. A light chain variable domain comprising: a heavy chain variable domain comprising: an LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 140, an LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 161, and an LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 247 Including.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号77のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号98のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号119のアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号140のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号161のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号248のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77, or a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids. HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 98, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: A heavy chain variable domain comprising HC-CDR3 comprising 119 amino acid sequences, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: 140 LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of column number 161, or a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2, or 3) amino acids; and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 248 Or a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号77のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号98のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号119のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン、またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号140のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号161のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号248のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン、またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 98, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 119. A heavy chain variable domain comprising, or a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions in the HC-CDR sequence; and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 140 A light chain variable domain comprising LC-CDR1, comprising LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 161, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 248, or up to about 5 in the LC-CDR sequence (eg, About 1, 2, 3, 4 or 5) including variants thereof containing amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号77のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号98のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号119のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号140のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号161のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号248のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 98, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 119. A light chain variable domain comprising a heavy chain variable domain comprising: an LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 140, an LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 161, and an LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 248 Including.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号77のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号98のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号119のアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号246のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号161のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号182のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77, or a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids. HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 98, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: A heavy chain variable domain comprising HC-CDR3 comprising 119 amino acid sequences, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: 246 LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of column number 161, or a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2, or 3) amino acids; and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 182 Or a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号77のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号98のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号119のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン、またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号246のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号161のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号182のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン、またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 98, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 119. A heavy chain variable domain comprising, or a variant thereof comprising a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids in the HC-CDR sequence; and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 246 A light chain variable domain comprising LC-CDR1, comprising LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 161, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 182, or up to about 5 in the LC-CDR sequence (eg, About 1, 2, 3, 4 or 5) including variants thereof containing amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号77のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号98のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号119のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号246のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号161のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号182のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 98, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 119 A light chain variable domain comprising: a heavy chain variable domain comprising: an LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 246; an LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 161; Including.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号77のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号98のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号119のアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号140のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号161のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号249のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77, or a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids. HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 98, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: A heavy chain variable domain comprising HC-CDR3 comprising 119 amino acid sequences, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: 140 LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of column number 161, or a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2, or 3) amino acids; and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 249 Or a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号77のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号98のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号119のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン、またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号140のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号161のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号249のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン、またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 98, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 119. A heavy chain variable domain comprising, or a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions in the HC-CDR sequence; and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 140 A light chain variable domain comprising LC-CDR1, comprising LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 161, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 249, or up to about 5 in the LC-CDR sequence (eg, About 1, 2, 3, 4 or 5) including variants thereof containing amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号77のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号98のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号119のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号140のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号161のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号249のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 98, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 119. A light chain variable domain comprising a heavy chain variable domain comprising: an LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 140, an LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 161, and an LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 249 Including.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号77のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号98のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号119のアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号140のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号161のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号250のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77, or a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids. HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 98, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: A heavy chain variable domain comprising HC-CDR3 comprising 119 amino acid sequences, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: 140 LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of column number 161, or a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2, or 3) amino acids; and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 250 Or a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号77のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号98のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号119のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン、またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号140のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号161のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号250のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン、またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 98, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 119. A heavy chain variable domain comprising, or a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions in the HC-CDR sequence; and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 140 A light chain variable domain comprising LC-CDR1, comprising LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 161, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 250, or up to about 5 in the LC-CDR sequence (eg, About 1, 2, 3, 4 or 5) including variants thereof containing amino acid substitutions.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号77のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号98のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号119のアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン;ならびに配列番号140のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号161のアミノ酸配列を含むLC−CDR2、および配列番号250のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 98, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 119. A light chain variable domain comprising: a heavy chain variable domain comprising: an LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 140, an LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 161, and an LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 250 Including.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号15に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれか)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号36に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号15に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号36に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 15, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% A variant thereof having any sequence identity, and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 36, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% Including variants thereof having sequence identity. In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 15 and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 36.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号16に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号37に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号16に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号37に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 16, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% Variants thereof having a sequence identity of and any light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 37, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99) And variants thereof having sequence identity). In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 16 and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 37.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号17に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれか)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号38に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号17に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号38に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 17, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% A variant thereof having any sequence identity, and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 38, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% Including variants thereof having sequence identity. In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 17 and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 38.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号18に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれか)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号39に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号18に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号39に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 18, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% A variant thereof having any sequence identity, and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 39, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% Including variants thereof having sequence identity. In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 18 and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 39.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号19に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれか)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号40に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号19に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号40に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 19, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% A variant thereof having any sequence identity, and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 40, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% Including variants thereof having sequence identity. In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 19 and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 40.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号20に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれか)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号41に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号20に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号41に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 20, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% A variant thereof having any sequence identity, and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 41, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% Including variants thereof having sequence identity. In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 20 and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 41.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号21に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれか)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号42に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号21に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号42に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 21, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% A variant thereof having any sequence identity, and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 42, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% Including variants thereof having sequence identity. In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 21 and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 42.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号22に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号43に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号22に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号43に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 22, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% Variants thereof having a sequence identity of and any light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 43, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99) And variants thereof having sequence identity). In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 22 and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 43.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号23に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれか)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号44に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号23に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号44に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 23, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% A variant thereof having any sequence identity, and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 44, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% Including variants thereof having sequence identity. In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 23 and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 44.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号24に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号45に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号24に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号45に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 24, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% Variants thereof having a sequence identity of and any light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 45, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99) And variants thereof having a sequence identity of (including any of In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 24 and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 45.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号25に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号46に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号25に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号46に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 25, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% A variant thereof having a sequence identity of and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 46, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99) And variants thereof having sequence identity). In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 25 and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 46.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号26に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号47に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号26に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号47に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 26, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% A variant thereof having a sequence identity of and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 47, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99) And variants thereof having sequence identity). In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 26 and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 47.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号27に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号48に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号27に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号48に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 27, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% A variant thereof having a sequence identity of and any light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 48, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99) And variants thereof having sequence identity). In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 27 and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 48.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号28に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号49に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号28に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号49に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 28, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% Variants thereof having a sequence identity of and any light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 49, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99) And variants thereof having sequence identity). In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 28 and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 49.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号29に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号50に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号29に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号50に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 29, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% A variant thereof having a sequence identity of and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 50, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99) And variants thereof having sequence identity). In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 29 and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 50.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号30に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号51に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号30に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号51に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 30, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% Variants thereof having a sequence identity of and any light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 51, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99) And variants thereof having a sequence identity of (including any of In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 30 and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 51.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号31に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号52に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号31に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号52に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 31, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% A variant thereof having a sequence identity of and any light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 52, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99) And variants thereof having sequence identity). In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 31 and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 52.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号32に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号53に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号32に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号53に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 32, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% Variants thereof having a sequence identity of and any light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 53, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99) And variants thereof having sequence identity). In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 32 and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 53.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号33に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号54に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号33に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号54に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 33, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% Variants thereof having a sequence identity of and any light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 54, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99) And variants thereof having sequence identity). In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 33 and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 54.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号34に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号55に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号34に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号55に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 34, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% Variants thereof having a sequence identity of and any light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 55, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99) And variants thereof having a sequence identity of (including any of In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 34 and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 55.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号35に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号56に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号35に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号56に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 35, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% Variants thereof having a sequence identity of and any light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 56, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99) And variants thereof having sequence identity). In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 35 and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 56.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号233に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号56に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号233に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号56に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 233, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% Variants thereof having a sequence identity of and any light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 56, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99) And variants thereof having a sequence identity of (including any of In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 233 and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 56.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号234に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号56に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号234に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号56に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 234, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% Variants thereof having a sequence identity of and any light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 56, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99) And variants thereof having sequence identity). In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 234 and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 56.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号235に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号56に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号235に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号56に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 235, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% Variants thereof having a sequence identity of and any light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 56, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99) And variants thereof having sequence identity). In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 235 and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 56.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号35に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号238に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号35に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号238に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 35, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% Variants thereof having a sequence identity of and any light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 238, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99) And variants thereof having sequence identity). In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 35 and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 238.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号35に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号239に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号35に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号239に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 35, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% A variant thereof having a sequence identity of and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 239, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99) And variants thereof having sequence identity). In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 35 and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 239.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号35に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号240に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号35に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号240に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 35, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% Variants thereof having a sequence identity of and any light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 240, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99) And variants thereof having sequence identity). In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 35 and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 240.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号35に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号241に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号35に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号241に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 35, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% Variants thereof having a sequence identity of and any light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 241, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99) And variants thereof having a sequence identity of (including any of In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 35 and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 241.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号35に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号242に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号35に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号242に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 35, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% A variant thereof having a sequence identity of and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 242, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99) And variants thereof having sequence identity). In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 35 and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 242.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号236に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号243に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号236に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号243に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 236, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% A variant thereof having a sequence identity of and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 243, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99) And variants thereof having sequence identity). In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 236 and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 243.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号237に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号56に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、配列番号237に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号56に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 237, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% Variants thereof having a sequence identity of and any light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 56, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99) And variants thereof having sequence identity). In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 237 and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 56.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、標的HPV16−E7/MHCクラスI複合体への結合について、本明細書に記載される抗E7MC抗体部分のいずれかに従う第2の抗E7MC抗体部分と競合する。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、第2の抗E7MC抗体部分と同じまたは実質的に同じエピトープに結合する。一部の実施形態では、標的HPV16−E7/MHCクラスI複合体への抗E7MC抗体部分の結合は、標的HPV16−E7/MHCクラスI複合体への第2の抗E7MC抗体部分の結合を、少なくとも約70%(例えば、少なくとも約75%、80%、85%、90%、95%、98%または99%のいずれか)阻害し、または逆もまた同様である。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分および第2の抗E7MC抗体部分は、標的HPV16−E7/MHCクラスI複合体への結合について交差競合する、即ち、これらの抗体部分の各々は、標的HPV16−E7/MHCクラスI複合体への結合について他方と競合する。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion is a second anti-E7MC antibody portion according to any of the anti-E7MC antibody portions described herein for binding to the target HPV16-E7 / MHC class I complex. Conflict with. In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion binds to the same or substantially the same epitope as the second anti-E7MC antibody portion. In some embodiments, binding of the anti-E7MC antibody moiety to the target HPV16-E7 / MHC class I complex comprises binding of the second anti-E7MC antibody moiety to the target HPV16-E7 / MHC class I complex, Inhibits at least about 70% (eg, at least about 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% or 99%), or vice versa. In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion and the second anti-E7MC antibody portion cross-compete for binding to the target HPV16-E7 / MHC class I complex, ie, each of these antibody portions is a target Competes with the other for binding to HPV16-E7 / MHC class I complexes.
例えば、一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、標的HPV16−E7/MHCクラスI複合体への結合について、i)配列番号183のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号184もしくは185のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号186〜188のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3;または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号189もしくは190のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号191のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む抗体部分と競合する。 For example, in some embodiments, the anti-E7MC antibody moiety is i) for binding to a target HPV16-E7 / MHC class I complex, i) an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 183, or up to about 3 ( For example, a variant thereof comprising an amino acid substitution, either about 1, 2 or 3), an HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 184 or 185, or up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) Or) an HC-CDR3 comprising a variant thereof comprising amino acid substitutions, and an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOS: 186-188; or substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids A heavy chain variable domain sequence comprising a variant thereof comprising: ii) an L comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 189 or 190 -CDR1, or a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 191 or up to about 3 (eg, Compete with an antibody portion comprising a light chain variable domain comprising a variant thereof containing amino acid substitutions (either approximately 1, 2 or 3).
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、標的HPV16−E7/MHCクラスI複合体への結合について、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)HC−CDR1;または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)HC−CDR2;または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)HC−CDR3;または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)LC−CDR1;または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)LC−CDR2;または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)LC−CDR3;または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメイン配列を含む抗体部分と競合する。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises i) an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 57-77 for binding to a target HPV16-E7 / MHC class I complex (some embodiments). HC-CDR1 comprising: or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98 HC-CDR2 comprising (consisting of in some embodiments); or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; and SEQ ID NO: 99 HC-CDR3 comprising (consisting of in some embodiments) any one of the amino acid sequences of ˜119, 244, and 245; or up to about 5 (eg, about Any of 2, 3, 4 or 5) a heavy chain variable domain sequence comprising a variant thereof comprising amino acid substitutions; and ii) comprising an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 120-140 and 246 (some LC-CDR1 comprising: in embodiments); or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids; any one of SEQ ID NOs: 141-161 LC-CDR2 comprising (consisting of in some embodiments) an amino acid sequence; or variants thereof containing up to about 3 (eg, any of about 1, 2, or 3) amino acid substitutions; and SEQ ID NOs 162-182 And LC-CDR3 (consisting of in some embodiments) comprising any one amino acid sequence of and 247-250; About 5 (e.g., about any of 1, 2, 3, 4 or 5) that competes with antibody portion comprising a light chain variable domain sequence comprising the variant comprising a substitution of an amino acid.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、標的HPV16−E7/MHCクラスI複合体への結合について、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)HC−CDR1;配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)HC−CDR2;ならびに配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)HC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)LC−CDR1;配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)LC−CDR2;ならびに配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)LC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン配列;またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む抗体部分と競合する。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises i) an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 57-77 for binding to a target HPV16-E7 / MHC class I complex (some embodiments). HC-CDR1 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98 (consisting of in some embodiments); and any one of SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245 A heavy chain variable domain sequence comprising HC-CDR3 comprising (consisting of in some embodiments) one amino acid sequence; or up to about 5 (eg, about 1, 2, 3, 4 or 5 in the HC-CDR sequence) Any of) variants thereof comprising amino acid substitutions; and ii) comprising any one of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 120-140 and 246 LC-CDR1 (consisting of some embodiments); LC-CDR2 (consisting of in some embodiments) comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 141-161; and SEQ ID NOs: 162-182 and 247 A light chain variable domain sequence comprising LC-CDR3 comprising (consisting of in some embodiments) comprising any one amino acid sequence of ˜250; or up to about 5 (eg, about 1, 2 in the LC-CDR sequence) Compete with the antibody portion containing the variant, including amino acid substitutions (either 3, 4, or 5).
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、標的HPV16−E7/MHCクラスI複合体への結合について、配列番号15〜35および233〜237のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれか)の配列同一性を有するそのバリアント、ならびに配列番号36〜56および238〜243のいずれか1つのアミノ酸配列を含む(一部の実施形態ではそれからなる)軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれか)の配列同一性を有するそのバリアントを含む抗体部分と競合する。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion comprises an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 15-35 and 233-237 for binding to a target HPV16-E7 / MHC class I complex (some Or a variant thereof having a sequence identity of at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99%, respectively), and SEQ ID NOs: 36- A light chain variable domain comprising, or consisting of, in some embodiments, any one of amino acids 56 and 238-243, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99% Compete with the antibody portion comprising that variant with sequence identity of
全長抗E7MC抗体
抗E7MC構築物は、一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分を含む全長抗体(本明細書で「全長抗E7MC抗体」とも呼ぶ)である。一部の実施形態では、全長抗体は、モノクローナル抗体である。
Full length anti-E7MC antibody The anti-E7MC construct is, in some embodiments, a full length antibody comprising an anti-E7MC antibody portion (also referred to herein as a “full length anti-E7MC antibody”). In some embodiments, the full length antibody is a monoclonal antibody.
一部の実施形態では、全長抗E7MC抗体は、IgA、IgD、IgE、IgGおよびIgMなどの免疫グロブリン由来のFc配列を含む。一部の実施形態では、全長抗E7MC抗体は、IgG1、IgG2、IgG3またはIgG4のいずれかなどのIgGのFc配列を含む。一部の実施形態では、全長抗E7MC抗体は、ヒト免疫グロブリンのFc配列を含む。一部の実施形態では、全長抗E7MC抗体は、マウス免疫グロブリンのFc配列を含む。一部の実施形態では、全長抗E7MC抗体は、増強された抗体依存性細胞性細胞傷害(ADCC)または補体依存性細胞傷害(CDC)エフェクター機能を有するように、変更されたまたは他の方法で変化されたFc配列を含む。 In some embodiments, the full-length anti-E7MC antibody comprises Fc sequences from immunoglobulins such as IgA, IgD, IgE, IgG and IgM. In some embodiments, the full length anti-E7MC antibody comprises an Fc sequence of IgG, such as any of IgG1, IgG2, IgG3 or IgG4. In some embodiments, the full length anti-E7MC antibody comprises a human immunoglobulin Fc sequence. In some embodiments, the full-length anti-E7MC antibody comprises a mouse immunoglobulin Fc sequence. In some embodiments, the full-length anti-E7MC antibody has been altered or otherwise modified to have enhanced antibody dependent cellular cytotoxicity (ADCC) or complement dependent cytotoxicity (CDC) effector function. In which the Fc sequence is altered.
したがって、例えば、一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分、ならびにb)Fc領域を含む全長抗E7MC抗体が提供される。一部の実施形態では、HPV16−E7ペプチドは、HPV16−E7 11−19(配列番号4)である。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A02である。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A*02:01である。一部の実施形態では、a)HPV16−E7 11−19ペプチド(配列番号4)およびHLA−A*02:01を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分、ならびにb)Fc領域を含む全長抗E7MC抗体が提供される。一部の実施形態では、Fc領域は、IgG1 Fc配列を含む。一部の実施形態では、Fc領域は、ヒトIgG1 Fc配列を含む。一部の実施形態では、Fc領域は、マウスIgG1 Fc配列を含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、MHCクラスIタンパク質および1つのアミノ酸置換(例えば、保存的アミノ酸置換)を有するHPV16−E7ペプチドのバリアントを含む少なくとも1つ(例えば、少なくとも2、3、4、5または6のいずれか)の複合体と交差反応する。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、HPV16−E7ペプチドおよび異なるサブタイプのMHCクラスIタンパク質を含む少なくとも1つ(例えば、少なくとも2、3、4または5のいずれか)の複合体と交差反応する。
Thus, for example, in some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, and b) a full-length anti-E7MC antibody comprising an Fc region is provided. Is done. In some embodiments, the HPV16-E7 peptide is HPV16-E7 11-19 (SEQ ID NO: 4). In some embodiments, the MHC class I protein is HLA-A02. In some embodiments, the MHC class I protein is HLA-
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号183のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号184または185のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号186〜188のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3;または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号189または190のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号191のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む、抗E7MC抗体部分、ならびにb)Fc領域を含む全長抗E7MC抗体が提供される。一部の実施形態では、Fc領域は、IgG1 Fc配列を含む。一部の実施形態では、Fc領域は、ヒトIgG1 Fc配列を含む。一部の実施形態では、Fc領域は、マウスIgG1 Fc配列を含む。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein, i) HC-CDR1, comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 183, Or a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 184 or 185, or up to about 3 (eg, about 1 HC-CDR3 comprising any of its variants, including amino acid substitutions, and any one amino acid sequence of SEQ ID NOS: 186-188; or up to about 3 (eg, about 1, 2, or 3) Any) a heavy chain variable domain sequence comprising a variant thereof containing amino acid substitutions; and ii) SEQ ID NO: 189 or 190 LC-CDR1 comprising the amino acid sequence, or variants thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 191 or up to Provided is an anti-E7MC antibody portion comprising a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising substitution of about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids, and b) a full-length anti-E7MC antibody comprising an Fc region. The In some embodiments, the Fc region comprises an IgG1 Fc sequence. In some embodiments, the Fc region comprises a human IgG1 Fc sequence. In some embodiments, the Fc region comprises a mouse IgG1 Fc sequence.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号183のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号184または185のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号186〜188のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号189または190のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、および配列番号191)のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む、抗E7MC抗体部分、ならびにb)Fc領域を含む全長抗E7MC抗体が提供される。一部の実施形態では、Fc領域は、IgG1 Fc配列を含む。一部の実施形態では、Fc領域は、ヒトIgG1 Fc配列を含む。一部の実施形態では、Fc領域は、マウスIgG1 Fc配列を含む。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein, i) HC-CDR1, comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 183, A heavy chain variable domain sequence comprising HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 184 or 185 and HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 186 to 188; and ii) amino acids of SEQ ID NO: 189 or 190 An anti-E7MC antibody portion comprising an LC-CDR1 comprising a sequence and a light chain variable domain comprising LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 191), and b) a full length anti-E7MC antibody comprising an Fc region are provided. In some embodiments, the Fc region comprises an IgG1 Fc sequence. In some embodiments, the Fc region comprises a human IgG1 Fc sequence. In some embodiments, the Fc region comprises a mouse IgG1 Fc sequence.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む抗E7MC抗体部分を含む全長抗E7MC抗体が提供される。一部の実施形態では、Fc領域は、IgG1 Fc配列を含む。一部の実施形態では、Fc領域は、ヒトIgG1 Fc配列を含む。一部の実施形態では、Fc領域は、マウスIgG1 Fc配列を含む。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein, i) the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 57-77 HC-CDR1, comprising any of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 78-98, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids HC-CDR2, or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids, and any one amino acid of SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245 An HC-CDR3 comprising a sequence, or a variant thereof comprising substitutions of up to about 5 (eg any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids A heavy chain variable domain; and ii) LC-CDR1 comprising an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 120-140 and 246, or up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) ) Variants thereof containing amino acid substitutions, LC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 141-161, or substitutions of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids LC-CDR3 comprising the variant and any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250, or up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids A full-length anti-E7MC antibody comprising an anti-E7MC antibody portion comprising a light chain variable domain comprising a variant thereof including a substitution is provided. In some embodiments, the Fc region comprises an IgG1 Fc sequence. In some embodiments, the Fc region comprises a human IgG1 Fc sequence. In some embodiments, the Fc region comprises a mouse IgG1 Fc sequence.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1;配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2;および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1;配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2;および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン配列;またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む抗E7MC抗体部分;ならびにb)Fc領域を含む全長抗E7MC抗体が提供される。一部の実施形態では、Fc領域は、IgG1 Fc配列を含む。一部の実施形態では、Fc領域は、ヒトIgG1 Fc配列を含む。一部の実施形態では、Fc領域は、マウスIgG1 Fc配列を含む。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein, i) the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 57-77 HC-CDR1 comprising: an HC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98; and a heavy chain comprising HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245 A variable domain sequence; or variant thereof comprising substitutions of up to about 5 (eg, about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids in the HC-CDR sequence; and ii) SEQ ID NOs: 120-140 and 246 LC-CDR1 comprising any one amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 141 to 161 LC-CDR2; and a light chain variable domain sequence comprising LC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250; or up to about 5 in the LC-CDR sequence (eg, about Any of 1, 2, 3, 4 or 5) an anti-E7MC antibody portion comprising a variant thereof containing an amino acid substitution; and b) a full length anti-E7MC antibody comprising an Fc region is provided. In some embodiments, the Fc region comprises an IgG1 Fc sequence. In some embodiments, the Fc region comprises a human IgG1 Fc sequence. In some embodiments, the Fc region comprises a mouse IgG1 Fc sequence.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1;配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2;および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1;配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2;および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン配列を含む抗E7MC抗体部分;ならびにb)Fc領域を含む全長抗E7MC抗体が提供される。一部の実施形態では、Fc領域は、IgG1 Fc配列を含む。一部の実施形態では、Fc領域は、ヒトIgG1 Fc配列を含む。一部の実施形態では、Fc領域は、マウスIgG1 Fc配列を含む。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein, i) the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 57-77 HC-CDR1 comprising: an HC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98; and a heavy chain comprising HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245 A variable domain sequence; and ii) LC-CDR1 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 120-140 and 246; LC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 141-161; and SEQ ID NO: 162- LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of any one of 182 and 247-250 Anti E7MC antibody portion containing no light chain variable domain sequences; full length anti E7MC antibody comprising and b) Fc region is provided. In some embodiments, the Fc region comprises an IgG1 Fc sequence. In some embodiments, the Fc region comprises a human IgG1 Fc sequence. In some embodiments, the Fc region comprises a mouse IgG1 Fc sequence.
一部の実施形態では、a)配列番号15〜35および233〜237のいずれか1つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれか)の配列同一性を有するそのバリアント、ならびに配列番号36〜56および238〜243のいずれか1つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分;ならびにb)Fc領域を含む全長抗E7MC抗体が提供される。一部の実施形態では、Fc領域は、IgG1 Fc配列を含む。一部の実施形態では、Fc領域は、ヒトIgG1 Fc配列を含む。一部の実施形態では、Fc領域は、マウスIgG1 Fc配列を含む。 In some embodiments, a) a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 15-35 and 233-237, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% Or a variant thereof having a sequence identity of any one) and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 36-56 and 238-243, or at least about 95% (eg, at least about An anti-E7MC antibody that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein comprising a variant thereof having sequence identity of 96%, 97%, 98% or 99%) And b) a full length anti-E7MC antibody comprising an Fc region. In some embodiments, the Fc region comprises an IgG1 Fc sequence. In some embodiments, the Fc region comprises a human IgG1 Fc sequence. In some embodiments, the Fc region comprises a mouse IgG1 Fc sequence.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、配列番号15〜35および233〜237のいずれか1つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号36〜56および238〜243のいずれか1つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む抗E7MC抗体部分;ならびにb)Fc領域を含む全長抗E7MC抗体が提供される。一部の実施形態では、Fc領域は、IgG1 Fc配列を含む。一部の実施形態では、Fc領域は、ヒトIgG1 Fc配列を含む。一部の実施形態では、Fc領域は、マウスIgG1 Fc配列を含む。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, comprising any one of SEQ ID NOs: 15-35 and 233-237 An anti-E7MC antibody portion comprising a heavy chain variable domain comprising an amino acid sequence and a light chain variable domain comprising any one of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 36-56 and 238-243; and b) a full-length anti-E7MC antibody comprising an Fc region Provided. In some embodiments, the Fc region comprises an IgG1 Fc sequence. In some embodiments, the Fc region comprises a human IgG1 Fc sequence. In some embodiments, the Fc region comprises a mouse IgG1 Fc sequence.
一部の実施形態では、全長抗E7MC抗体は、約0.1pM〜約500nMの間(例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約0.1pM、1.0pM、10pM、50pM、100pM、500pM、1nM、10nM、50nM、100nMまたは500nMのいずれか)のKdで、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に結合する。一部の実施形態では、全長抗E7MC抗体は、約1pM〜約250pMの間(例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約1、10、25、50、75、100、150、200または250pMのいずれか)のKdで、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に結合する。 In some embodiments, the full length anti-E7MC antibody is between about 0.1 pM and about 500 nM (eg, including any range between these values, including about 0.1 pM, 1.0 pM, 10 pM, 50 pM). , 100 pM, 500 pM, 1 nM, 10 nM, 50 nM, 100 nM, or 500 nM) with a K d of binding to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein. In some embodiments, the full length anti-E7MC antibody is between about 1 pM and about 250 pM (eg, including any range between these values, including about 1, 10, 25, 50, 75, 100, 150 , with a K d of 200 or any 250 pM), binds to a complex containing HPV16-E7 peptides and MHC class I proteins.
多特異的抗E7MC分子
抗E7MC構築物は、一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分および第2の結合部分(例えば、第2の抗原結合部分)を含む多特異的抗E7MC分子を含む。一部の実施形態では、多特異的抗E7MC分子は、抗E7MC抗体部分および第2の抗原結合部分を含む。
Multispecific anti-E7MC molecule The anti-E7MC construct comprises, in some embodiments, a multispecific anti-E7MC molecule comprising an anti-E7MC antibody portion and a second binding portion (eg, a second antigen-binding portion). In some embodiments, the multispecific anti-E7MC molecule comprises an anti-E7MC antibody portion and a second antigen binding portion.
多特異的分子は、少なくとも2つの異なる抗原またはエピトープに対する結合特異性を有する分子である(例えば、二重特異的抗体は、2つの抗原またはエピトープに対する結合特異性を有する)。2よりも多い結合価および/または特異性を有する多特異的分子もまた企図される。例えば、三重特異的抗体が調製され得る。Tuttら J. Immunol. 147巻:60頁(1991年)。当業者が、互いに組み合わせて本発明の多特異的抗E7MC分子を形成するために、本明細書に記載される個々の多特異的分子の適切な特徴を選択できることを理解すべきである。 A multispecific molecule is a molecule that has binding specificities for at least two different antigens or epitopes (eg, a bispecific antibody has binding specificities for two antigens or epitopes). Multispecific molecules having more than two valencies and / or specificities are also contemplated. For example, trispecific antibodies can be prepared. Tutt et al. Immunol. 147: 60 (1991). It should be understood that one skilled in the art can select appropriate characteristics of the individual multispecific molecules described herein to combine with each other to form the multispecific anti-E7MC molecules of the present invention.
したがって、例えば、一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分、ならびにb)第2の結合部分(例えば、抗原結合部分)を含む多特異的(例えば、二重特異的)抗E7MC分子が提供される。一部の実施形態では、第2の結合部分は、MHCクラスIタンパク質に結合した異なるHPV16−E7ペプチドを含む複合体に特異的に結合する。一部の実施形態では、第2のscFvは、異なるMHCクラスIタンパク質に結合したHPV16−E7ペプチドを含む複合体に特異的に結合する。一部の実施形態では、第2の結合部分は、MHCクラスIタンパク質およびHPV16−E7ペプチドを含む複合体上の異なるエピトープに特異的に結合する。一部の実施形態では、第2の結合部分は、異なる抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第2の結合部分は、細胞傷害性細胞などの細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第2の結合部分は、リンパ球、例えば、T細胞、NK細胞、好中球、単球、マクロファージまたは樹状細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第2の結合部分は、エフェクターT細胞、例えば、細胞傷害性T細胞(細胞傷害性Tリンパ球(CTL)またはTキラー細胞としても公知)に特異的に結合する。 Thus, for example, in some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, and b) a second binding portion (eg, antigen binding) Multispecific (eg, bispecific) anti-E7MC molecules are provided. In some embodiments, the second binding moiety specifically binds to a complex comprising a different HPV16-E7 peptide bound to an MHC class I protein. In some embodiments, the second scFv specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide bound to a different MHC class I protein. In some embodiments, the second binding moiety specifically binds to a different epitope on a complex comprising an MHC class I protein and an HPV16-E7 peptide. In some embodiments, the second binding moiety specifically binds to a different antigen. In some embodiments, the second binding moiety specifically binds to an antigen on the surface of a cell, such as a cytotoxic cell. In some embodiments, the second binding moiety specifically binds to an antigen on the surface of lymphocytes, eg, T cells, NK cells, neutrophils, monocytes, macrophages or dendritic cells. In some embodiments, the second binding moiety specifically binds to an effector T cell, eg, a cytotoxic T cell (also known as a cytotoxic T lymphocyte (CTL) or T killer cell).
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分、ならびにb)CD3に特異的に結合する第2の抗原結合部分を含む多特異的抗E7MC分子が提供される。一部の実施形態では、第2の抗原結合部分は、CD3εに特異的に結合する。一部の実施形態では、第2の抗原結合部分は、CD3εのアゴニストエピトープに特異的に結合する。用語「アゴニストエピトープ」とは、本明細書で使用する場合、(a)多特異的分子の結合の際に、任意選択で、同じ細胞上でのいくつかの多特異的分子の結合の際に、前記多特異的分子にTCRシグナル伝達を活性化させ、T細胞活性化を誘導させるエピトープ、および/または(b)CD3のイプシロン鎖のアミノ酸残基のみから構成され、T細胞上のその天然の環境(即ち、TCR、CD3γ鎖などによって取り囲まれる)において提示される場合、多特異的分子による結合のためにアクセス可能であるエピトープ、および/または(c)多特異的分子の結合の際に、CD3γと比較して、CD3εの空間的位置の安定化をもたらさないエピトープを意味する。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein, and b) a second antigen-binding portion that specifically binds CD3. A multispecific anti-E7MC molecule comprising is provided. In some embodiments, the second antigen binding moiety specifically binds to CD3ε. In some embodiments, the second antigen binding portion specifically binds to an agonist epitope of CD3ε. The term “agonist epitope” as used herein (a) upon binding of multispecific molecules, optionally upon binding of several multispecific molecules on the same cell. Consisting of an epitope that activates TCR signaling and induces T cell activation in the multispecific molecule, and / or (b) the amino acid residue of the epsilon chain of CD3, and its natural on T cells Epitopes that are accessible for binding by multispecific molecules when presented in the environment (ie, surrounded by TCR, CD3γ chain, etc.), and / or (c) upon binding of multispecific molecules, It means an epitope that does not result in stabilization of the spatial position of CD3ε as compared to CD3γ.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分、ならびにb)例えば、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ、CD28、CD16a、CD56、CD68およびGDS2Dを含む、エフェクター細胞の表面上の抗原に特異的に結合する第2の抗原結合部分を含む多特異的抗E7MC分子が提供される。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein, and b) for example, CD3γ, CD3δ, CD3ε, CD3ζ, CD28, CD16a, Multispecific anti-E7MC molecules comprising a second antigen binding moiety that specifically binds to an antigen on the surface of effector cells, including CD56, CD68 and GDS2D are provided.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分、ならびにb)C1qなどの補体系の成分に特異的に結合する第2の抗原結合部分を含む多特異的抗E7MC分子が提供される。C1qは、血清補体系を活性化するC1酵素複合体のサブユニットである。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, and b) a specific binding to a component of the complement system such as C1q. A multispecific anti-E7MC molecule comprising two antigen binding moieties is provided. C1q is a subunit of the C1 enzyme complex that activates the serum complement system.
一部の実施形態では、第2の抗原結合部分は、Fc受容体に特異的に結合する。一部の実施形態では、第2の抗原結合部分は、Fcγ受容体(FcγR)に特異的に結合する。FcγRは、ナチュラルキラー(NK)細胞の表面上に存在するFcγRIII、またはマクロファージ、単球、好中球および/もしくは樹状細胞の表面上に存在するFcγRI、FcγRIIA、FcγRIIBI、FcγRIIB2およびFcγRIIIBのうち1つであり得る。一部の実施形態では、第2の抗原結合部分は、Fc領域またはその機能的断片である。この文脈で使用する「機能的断片」とは、FcγR保有エフェクター細胞、特に、マクロファージ、単球、好中球および/または樹状細胞が、細胞傷害性溶解またはファゴサイトーシスによって標的細胞を死滅させるのを可能にするのに十分な特異性および親和性で、FcR、特にFcγRに結合することがなおも可能な抗体Fc領域の断片を指す。機能的Fc断片は、活性化FcγRIなどのFcRへの元の全長Fcの一部分の結合を競合的に阻害することが可能である。一部の実施形態では、機能的Fc断片は、活性化FcγRに対するその親和性の少なくとも30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%または95%を保持する。一部の実施形態では、Fc領域またはその機能的断片は、増強されたFc領域またはその機能的断片である。用語「増強されたFc領域」とは、本明細書で使用する場合、Fc受容体媒介性エフェクター機能、特に、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害(ADCC)、補体依存性細胞傷害(CDC)および抗体媒介性ファゴサイトーシスを増強するように改変されたFc領域を指す。これは、当該分野で公知のように、例えば、活性化受容体(例えば、ナチュラルキラー(NK)細胞上で発現されるFcγRIIIA(CD16A))に対する増加した親和性および/または阻害性受容体(例えば、FcγRIIB1/B2(CD32B))への減少した結合をもたらす方法でFc領域を変更することによって、達成され得る。さらに他の実施形態では、第2の抗原結合部分は、FcγR保有エフェクター細胞、特に、マクロファージ、単球、好中球および/または樹状細胞が、細胞傷害性溶解またはファゴサイトーシスによって標的細胞を死滅させるのを可能にするのに十分な特異性および親和性で、FcR、特にFcγRに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である。 In some embodiments, the second antigen binding moiety specifically binds to an Fc receptor. In some embodiments, the second antigen binding moiety specifically binds to an Fcγ receptor (FcγR). FcγR is one of FcγRIII present on the surface of natural killer (NK) cells or FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB1, FcγRIIB2 and FcγRIIIB present on the surface of macrophages, monocytes, neutrophils and / or dendritic cells. Can be one. In some embodiments, the second antigen binding portion is an Fc region or a functional fragment thereof. “Functional fragment” as used in this context means that FcγR-bearing effector cells, in particular macrophages, monocytes, neutrophils and / or dendritic cells, kill target cells by cytotoxic lysis or phagocytosis. Refers to a fragment of an antibody Fc region that is still capable of binding to FcR, in particular FcγR, with sufficient specificity and affinity to allow. A functional Fc fragment can competitively inhibit binding of a portion of the original full-length Fc to an FcR, such as activated FcγRI. In some embodiments, the functional Fc fragment retains at least 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% or 95% of its affinity for activated FcγR. In some embodiments, the Fc region or functional fragment thereof is an enhanced Fc region or functional fragment thereof. The term “enhanced Fc region” as used herein refers to Fc receptor-mediated effector functions, particularly antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC), complement-dependent cytotoxicity (CDC). And refers to Fc regions that have been modified to enhance antibody-mediated phagocytosis. This can be achieved, as known in the art, for example, increased affinity and / or inhibitory receptors (eg, FcγRIIIA (CD16A) expressed on natural killer (NK) cells) (eg, , FcγRIIB1 / B2 (CD32B)) can be achieved by altering the Fc region in a way that results in decreased binding. In yet other embodiments, the second antigen-binding moiety is an FcγR-bearing effector cell, particularly a macrophage, monocyte, neutrophil and / or dendritic cell, that targets the target cell by cytotoxic lysis or phagocytosis. An antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to FcR, in particular FcγR, with sufficient specificity and affinity to allow killing.
一部の実施形態では、多特異的抗E7MC分子は、E7MC提示標的細胞の殺滅を可能にし、および/またはE7MC提示標的細胞を溶解するようにCTLを有効に再指向させ得る。一部の実施形態では、本発明の多特異的(例えば、二重特異的)抗E7MC分子は、10〜500ng/mlの範囲のin vitro EC50を示し、約1:1〜約50:1(例えば、約1:1〜約15:1または約2:1〜約10:1)のCTL対標的細胞の比率で、CTLを介した標的細胞の約50%の再指向された溶解(redirected lysis)を誘導することができる。 In some embodiments, the multispecific anti-E7MC molecule may allow killing of E7MC presenting target cells and / or effectively redirect CTL to lyse E7MC presenting target cells. In some embodiments, a multispecific (eg, bispecific) anti-E7MC molecule of the invention exhibits an in vitro EC 50 in the range of 10-500 ng / ml, with about 1: 1 to about 50: 1. About 50% redirected lysis of target cells via CTL at a ratio of CTL to target cells (eg, about 1: 1 to about 15: 1 or about 2: 1 to about 10: 1) lysis) can be induced.
一部の実施形態では、多特異的(例えば、二重特異的)抗E7MC分子は、標的細胞が溶解されるような方法で、刺激されたまたは未刺激のCTLと標的細胞とを架橋することが可能である。これは、標的特異的T細胞クローンの生成または樹状細胞による共通の抗原提示が、多特異的抗E7MC分子がその所望の活性を発揮するために必要とされないという利点を提供する。一部の実施形態では、本発明の多特異的抗E7MC分子は、他の活性化シグナルの非存在下で、標的細胞を溶解するようにCTLを再指向させることが可能である。一部の実施形態では、多特異的抗E7MC分子の第2の抗原結合部分は、CD3に特異的に結合し(例えば、CD3εに特異的に結合し)、CD28および/またはIL−2を介したシグナル伝達は、標的細胞を溶解するようにCTLを再指向させるために必要とされない。 In some embodiments, the multispecific (eg, bispecific) anti-E7MC molecule crosslinks stimulated or unstimulated CTL and target cells in such a way that the target cells are lysed. Is possible. This provides the advantage that generation of target-specific T cell clones or common antigen presentation by dendritic cells is not required for the multispecific anti-E7MC molecule to exert its desired activity. In some embodiments, the multispecific anti-E7MC molecules of the invention can redirect CTLs to lyse target cells in the absence of other activation signals. In some embodiments, the second antigen-binding portion of the multispecific anti-E7MC molecule specifically binds to CD3 (eg, specifically binds to CD3ε) and is mediated by CD28 and / or IL-2. No signaling is required to redirect the CTL to lyse the target cells.
2つの抗原(例えば、2つの異なる細胞上の抗原)に同時に結合する多特異的抗E7MC分子の選好性を測定するための方法は、当業者の通常の能力の範囲内である。例えば、第2の結合部分がCD3に特異的に結合する場合、多特異的抗E7MC分子は、CD3+/HPV16−E7−細胞およびCD3−/HPV16−E7+細胞の混合物と接触させられ得る。次いで、多特異的抗E7MC分子陽性単一細胞の数および多特異的抗E7MC分子によって架橋された細胞の数が、当該分野で公知のように、顕微鏡法または蛍光活性化細胞分取(FACS)によって評価され得る。 Methods for measuring the preference of multispecific anti-E7MC molecules that bind simultaneously to two antigens (eg, antigens on two different cells) are within the normal ability of one skilled in the art. For example, if the second binding moiety specifically binds to CD3, the multispecific anti-E7MC molecule can be contacted with a mixture of CD3 + / HPV16-E7 − cells and CD3 − / HPV16-E7 + cells. The number of multispecific anti-E7MC molecule positive single cells and the number of cells cross-linked by the multispecific anti-E7MC molecule are then determined by microscopy or fluorescence activated cell sorting (FACS), as is known in the art. Can be evaluated by
例えば、一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分、ならびにb)第2の抗原結合性部分を含む多特異的抗E7MC分子が提供される。一部の実施形態では、HPV16−E7ペプチドは、HPV16−E7 11−19(配列番号4)である。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A02である。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A*02:01である。一部の実施形態では、第2の抗原結合性部分は、MHCクラスIタンパク質に結合した異なるHPV16−E7ペプチドを含む複合体に特異的に結合する。一部の実施形態では、第2の抗原結合性部分は、異なるMHCクラスIタンパク質に結合したHPV16−E7ペプチドを含む複合体に特異的に結合する。一部の実施形態では、第2の抗原結合性部分は、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体上の異なるエピトープに特異的に結合する。一部の実施形態では、第2の抗原結合性部分は、別の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第2の抗原結合性部分は、E7MC提示細胞などの細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第2の抗原結合性部分は、HPV16−E7を発現しない細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第2の抗原結合性部分は、細胞傷害性細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第2の抗原結合性部分は、リンパ球、例えば、T細胞、NK細胞、好中球、単球、マクロファージまたは樹状細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第2の抗原結合性部分は、エフェクターT細胞、例えば、細胞傷害性T細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第2の抗原結合性部分は、例えば、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ、CD28、CD16a、CD56、CD68およびGDS2Dを含む、エフェクター細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第2の抗原結合性部分は、抗体部分である。一部の実施形態では、第2の抗原結合性部分は、ヒト、ヒト化または半合成の抗体部分である。一部の実施形態では、多特異的抗E7MC分子は、少なくとも1つ(例えば、少なくとも約2、3、4、5またはそれ超のいずれか)のさらなる抗原結合性部分をさらに含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、MHCクラスIタンパク質および1つのアミノ酸置換(例えば、保存的アミノ酸置換)を有するHPV16−E7ペプチドのバリアントを含む少なくとも1つ(例えば、少なくとも2、3、4、5または6のいずれか)の複合体と交差反応する。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、HPV16−E7ペプチドおよび異なるサブタイプのMHCクラスIタンパク質を含む少なくとも1つ(例えば、少なくとも2、3、4または5のいずれか)の複合体と交差反応する。
For example, in some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, and b) a multispecific comprising a second antigen binding portion. Anti-E7MC molecules are provided. In some embodiments, the HPV16-E7 peptide is HPV16-E7 11-19 (SEQ ID NO: 4). In some embodiments, the MHC class I protein is HLA-A02. In some embodiments, the MHC class I protein is HLA-
一部の実施形態では、a)HPV16−E7 11−19ペプチド(配列番号4)およびHLA−A*02:01を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分、およびb)第2の抗原結合部分を含む多特異的抗E7MC分子が提供される。
In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 11-19 peptide (SEQ ID NO: 4) and HLA-
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号183のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号184または185のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号186〜188のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号189または190のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号191のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む、抗E7MC抗体部分、ならびにb)第2の抗原結合部分を含む多特異的抗E7MC分子が提供される。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein, i) HC-CDR1, comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 183, Or a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 184 or 185, or up to about 3 (eg, about 1 HC-CDR3 comprising any of the amino acid sequences of SEQ ID NOS: 186-188, or up to about 3 (eg, about 1, 2 or 3) Any) a heavy chain variable domain sequence comprising a variant thereof containing amino acid substitutions; and ii) SEQ ID NO: 189 or 190 LC-CDR1 comprising the amino acid sequence, or variants thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 191 or up to An anti-E7MC antibody portion comprising a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising substitution of about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids, and b) a multispecific comprising a second antigen binding portion Anti-E7MC molecules are provided.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号183のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号184または185のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号186〜188のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号189または190のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、および配列番号191のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む、抗E7MC抗体部分、ならびにb)第2の抗原結合部分を含む多特異的抗E7MC分子が提供される。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein, i) HC-CDR1, comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 183, A heavy chain variable domain sequence comprising HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 184 or 185, and HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 186 to 188; and ii) amino acids of SEQ ID NO: 189 or 190 An anti-E7MC antibody portion comprising an LC-CDR1 comprising a sequence and a light chain variable domain comprising LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 191; and b) a multispecific anti-E7MC molecule comprising a second antigen binding portion. Is provided.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む抗E7MC抗体部分;ならびにb)第2の抗原結合部分を含む多特異的抗E7MC分子が提供される。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein, i) the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 57-77 HC-CDR1, comprising any of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 78-98, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids HC-CDR2, or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids, and any one amino acid of SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245 An HC-CDR3 comprising a sequence, or a variant thereof comprising substitutions of up to about 5 (eg any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids A heavy chain variable domain; and ii) LC-CDR1 comprising an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 120-140 and 246, or up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) ) Variants thereof containing amino acid substitutions, LC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 141-161, or substitutions of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids LC-CDR3 comprising the variant and any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250, or up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids An anti-E7MC antibody portion comprising a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising a substitution; and b) a multispecific comprising a second antigen binding portion E7MC molecule is provided.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1;配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2;および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1;配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2;および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン配列;またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む抗E7MC抗体部分;ならびにb)第2の抗原結合部分を含む多特異的抗E7MC分子が提供される。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein, i) the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 57-77 HC-CDR1 comprising: an HC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98; and a heavy chain comprising HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245 A variable domain sequence; or variant thereof comprising substitutions of up to about 5 (eg, about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids in the HC-CDR sequence; and ii) SEQ ID NOs: 120-140 and 246 LC-CDR1 comprising any one amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 141 to 161 LC-CDR2; and a light chain variable domain sequence comprising LC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250; or up to about 5 (eg, about Any of 1, 2, 3, 4 or 5) an anti-E7MC antibody portion comprising a variant thereof containing an amino acid substitution; and b) a multispecific anti-E7MC molecule comprising a second antigen binding portion is provided.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1;配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2;および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1;配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2;および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン配列を含む抗E7MC抗体部分;ならびにb)第2の抗原結合部分を含む多特異的抗E7MC分子が提供される。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein, i) the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 57-77 HC-CDR1 comprising: an HC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98; and a heavy chain comprising HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245 A variable domain sequence; and ii) LC-CDR1 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 120-140 and 246; LC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 141-161; and SEQ ID NO: 162- LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of any one of 182 and 247-250 Anti E7MC antibody portion containing no light chain variable domain sequence; and b) a multi-specific anti E7MC molecule comprising a second antigen binding portions are provided.
一部の実施形態では、a)配列番号15〜35および233〜237のいずれか1つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれか)の配列同一性を有するそのバリアント、ならびに配列番号36〜56および238〜243のいずれか1つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む抗E7MC抗体部分;ならびにb)第2のscFvを含む多特異的抗E7MC分子が提供される。 In some embodiments, a) a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 15-35 and 233-237, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% Or a variant thereof having a sequence identity of any one) and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 36-56 and 238-243, or at least about 95% (eg, at least about An anti-E7MC antibody portion comprising a variant thereof having sequence identity of 96%, 97%, 98% or 99%); and b) a multispecific anti-E7MC molecule comprising a second scFv is provided. The
一部の実施形態では、a)配列番号15〜35および233〜237のいずれか1つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号36〜56および238〜243のいずれか1つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む抗E7MC抗体部分;ならびにb)第2の抗原結合部分を含む多特異的抗E7MC分子が提供される。 In some embodiments, a) a heavy chain variable domain comprising an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 15-35 and 233-237 and an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 36-56 and 238-243 An anti-E7MC antibody portion comprising a light chain variable domain; and b) a multispecific anti-E7MC molecule comprising a second antigen binding portion is provided.
一部の実施形態では、多特異的抗E7MC分子は、例えば、ダイアボディ(Db)、単鎖ダイアボディ(scDb)、タンデムscDb(Tandab)、線状ダイマーscDb(LD−scDb)、環状ダイマーscDb(CD−scDb)、ジ−ダイアボディ、タンデムscFv、タンデムジ−scFv(例えば、二重特異的T細胞エンゲージャー)、タンデムトリ−scFv、トリ(ア)ボディ(tri(a)body)、二重特異的Fab2、ジ−ミニ抗体(miniantibody)、テトラボディ(tetrabody)、scFv−Fc−scFv融合物、二重親和性再標的化(DART)抗体、二重可変ドメイン(DVD)抗体、IgG−scFab、scFab−ds−scFv、Fv2−Fc、IgG−scFv融合物、ドックアンドロック(DNL)抗体、ノブ−イントゥ−ホール(KiH)抗体(KiHテクノロジーによって調製された二重特異的IgG)、DuoBody(Duobodyテクノロジーによって調製された二重特異的IgG)、ヘテロマルチマー抗体またはヘテロコンジュゲート抗体である。一部の実施形態では、多特異的抗E7MC分子は、タンデムscFv(例えば、タンデムジ−scFv、例えば、二重特異的T細胞エンゲージャー)である。 In some embodiments, the multispecific anti-E7MC molecule is, for example, a diabody (Db), a single chain diabody (scDb), a tandem scDb (Tandab), a linear dimer scDb (LD-scDb), a cyclic dimer scDb. (CD-scDb), di-diabody, tandem scFv, tandem di-scFv (eg, bispecific T cell engager), tandem tri-scFv, avian (a) body (tri (a) body), dual Specific Fab2, di-antibody, tetrabody, scFv-Fc-scFv fusion, dual affinity retargeting (DART) antibody, dual variable domain (DVD) antibody, IgG-scFab , ScFab-ds-scFv, Fv2-Fc, IgG-scFv fusion , Dock and lock (DNL) antibody, knob-into-hole (KiH) antibody (bispecific IgG prepared by KiH technology), DuoBody (bispecific IgG prepared by Duobody technology), heteromultimeric antibody Or a heteroconjugate antibody. In some embodiments, the multispecific anti-E7MC molecule is a tandem scFv (eg, tandem di-scFv, eg, a bispecific T cell engager).
タンデムscFv
多特異的抗E7MC分子は、一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分を含む第1のscFvおよび第2のscFvを含むタンデムscFv(本明細書で「タンデムscFv多特異的抗E7MC抗体」とも呼ぶ)である。一部の実施形態では、タンデムscFv多特異的抗E7MC抗体は、少なくとも1つ(例えば、少なくとも約2、3、4、5またはそれ超のいずれか)のさらなるscFvをさらに含む。
Tandem scFv
A multispecific anti-E7MC molecule, in some embodiments, is a tandem scFv comprising an anti-E7MC antibody portion and a second scFv (also referred to herein as a “tandem scFv multispecific anti-E7MC antibody”). Call). In some embodiments, the tandem scFv multispecific anti-E7MC antibody further comprises at least one (eg, any of at least about 2, 3, 4, 5 or more) additional scFv.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第1のscFv、ならびにb)第2のscFvを含むタンデムscFv多特異的(例えば、二重特異的)抗E7MC抗体が提供される。一部の実施形態では、HPV16−E7ペプチドは、HPV16−E7 11−19(配列番号4)である。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A02である。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A*02:01である。一部の実施形態では、第2のscFvは、MHCクラスIタンパク質に結合した異なるHPV16−E7ペプチドを含む複合体に特異的に結合する。一部の実施形態では、第2のscFvは、異なるHPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する。一部の実施形態では、第2のscFvは、MHCクラスIタンパク質に結合したHPV16−E7ペプチドを含む複合体上の異なるエピトープに特異的に結合する。一部の実施形態では、第2のscFvは、別の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第2のscFvは、E7MC提示細胞などの細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第2のscFvは、HPV16−E7を発現しない細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第2のscFvは、細胞傷害性細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第2のscFvは、リンパ球、例えば、T細胞、NK細胞、好中球、単球、マクロファージまたは樹状細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第2のscFvは、エフェクターT細胞、例えば、細胞傷害性T細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第2のscFvは、例えば、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ、CD28、CD16a、CD56、CD68およびGDS2Dを含む、エフェクター細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第1のscFvは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第2のscFvは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第1のscFvおよび第2のscFvは共に、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、タンデムscFv多特異的抗E7MC抗体は、少なくとも1つ(例えば、少なくとも約2、3、4、5またはそれ超のいずれか)のさらなるscFvをさらに含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、MHCクラスIタンパク質および1つのアミノ酸置換(例えば、保存的アミノ酸置換)を有するHPV16−E7ペプチドのバリアントを含む少なくとも1つ(例えば、少なくとも2、3、4、5または6のいずれか)の複合体と交差反応する。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、HPV16−E7ペプチドおよび異なるサブタイプのMHCクラスIタンパク質を含む少なくとも1つ(例えば、少なくとも2、3、4または5のいずれか)の複合体と交差反応する。
In some embodiments, a) a first scFv that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, and b) a tandem scFv multispecific comprising a second scFv (eg, Bispecific) anti-E7MC antibodies are provided. In some embodiments, the HPV16-E7 peptide is HPV16-E7 11-19 (SEQ ID NO: 4). In some embodiments, the MHC class I protein is HLA-A02. In some embodiments, the MHC class I protein is HLA-
一部の実施形態では、a)HPV16−E7 11−19ペプチド(配列番号4)およびHLA−A*02:01を含む複合体に特異的に結合する第1のscFv、ならびにb)第2のscFvを含むタンデムscFv多特異的(例えば、二重特異的)抗E7MC抗体が提供される。
In some embodiments, a) a first scFv that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 11-19 peptide (SEQ ID NO: 4) and HLA-
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第1のscFvであって、i)配列番号183のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号184または185のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号186〜188のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号189または190のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号191のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む、第1のscFv、ならびにb)第2のscFvを含むタンデムscFv多特異的(例えば、二重特異的)抗E7MC抗体が提供される。 In some embodiments, a) a first scFv that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, i) HC-CDR1, comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 183, Or a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 184 or 185, or up to about 3 (eg, about 1 HC-CDR3 comprising any of the amino acid sequences of SEQ ID NOS: 186-188, or up to about 3 (eg, about 1, 2 or 3) Any) a heavy chain variable domain sequence comprising a variant thereof containing amino acid substitutions; and ii) a of SEQ ID NO: 189 or 190 LC-CDR1 comprising a non-acid sequence, or variants thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 191 or up to A first scFv comprising a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising a substitution of about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids, and b) a tandem scFv multispecific comprising a second scFv (Eg, bispecific) anti-E7MC antibodies are provided.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第1のscFvであって、i)配列番号183のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号184または185のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号186〜188のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号189または190のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、および配列番号191のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む、第1のscFv、ならびにb)第2のscFvを含むタンデムscFv多特異的(例えば、二重特異的)抗E7MC抗体が提供される。 In some embodiments, a) a first scFv that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, i) HC-CDR1, comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 183, A heavy chain variable domain sequence comprising HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 184 or 185 and HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 186 to 188; and ii) amino acids of SEQ ID NO: 189 or 190 A first scFv comprising an LC-CDR1 comprising a sequence, and a light chain variable domain comprising an LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 191; and b) a tandem scFv comprising a second scFv multispecific (eg, Bispecific) anti-E7MC antibodies are provided.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第1のscFvであって、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む第1のscFv;ならびにb)第2のscFvを含むタンデムscFv多特異的(例えば、二重特異的)抗E7MC抗体が提供される。 In some embodiments, a) a first scFv that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, i) an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 57-77 HC-CDR1, comprising any of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 78-98, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids HC-CDR2, or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids, and any one amino acid of SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245 HC-CDR3 containing sequences, or variants thereof containing substitutions of up to about 5 (eg, about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids A chain variable domain; and ii) LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 120-140 and 246, or up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids Or a variant thereof comprising a substitution of up to about 3 (e.g., about 1, 2 or 3) amino acids, including an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 141-161, or a variant thereof And LC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250, or substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids A first scFv comprising a light chain variable domain comprising the variant comprising; and b) a tandem scFv comprising a second scFv (E.g., bispecific) anti E7MC antibodies are provided.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第1のscFvであって、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1;配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2;および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1;配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2;および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン配列;またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む第1のscFv;ならびにb)第2のscFvを含むタンデムscFv多特異的(例えば、二重特異的)抗E7MC抗体が提供される。 In some embodiments, a) a first scFv that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, i) an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 57-77 HC-CDR1 comprising: an HC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98; and a heavy chain comprising HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245 A variable domain sequence; or variant thereof comprising substitutions of up to about 5 (eg, about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids in the HC-CDR sequence; and ii) SEQ ID NOs: 120-140 and 246 LC-CDR1 comprising any one of the amino acid sequences; comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 141 to 161 C-CDR2; and a light chain variable domain sequence comprising LC-CDR3 comprising any one of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250; or up to about 5 in the LC-CDR sequence (eg, about 1 Any of 2, 3, 4 or 5) a first scFv comprising a variant thereof containing amino acid substitutions; and b) a tandem scFv comprising a second scFv multispecific (eg, bispecific) anti-E7MC An antibody is provided.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第1のscFvであって、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1;配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2;および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1;配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2;および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン配列を含む第1のscFv;ならびにb)第2のscFvを含むタンデムscFv多特異的(例えば、二重特異的)抗E7MC抗体が提供される。 In some embodiments, a) a first scFv that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, i) an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 57-77 HC-CDR1 comprising: an HC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98; and a heavy chain comprising HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245 A variable domain sequence; and ii) LC-CDR1 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 120-140 and 246; LC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 141-161; and SEQ ID NO: 162- Including LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of any one of 182 and 247-250 First scFv containing chain variable domain sequence; and b) a tandem scFv Multispecific includes a second scFv (e.g., bispecific) anti E7MC antibodies are provided.
一部の実施形態では、a)配列番号15〜35および233〜237のいずれか1つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれか)の配列同一性を有するそのバリアント、ならびに配列番号36〜56および238〜243のいずれか1つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む第1のscFv;ならびにb)第2のscFvを含むタンデムscFv多特異的(例えば、二重特異的)抗E7MC抗体が提供される。 In some embodiments, a) a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 15-35 and 233-237, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% Or a variant thereof having a sequence identity of any one) and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 36-56 and 238-243, or at least about 95% (eg, at least about A first scFv comprising a variant thereof having a sequence identity of (including 96%, 97%, 98% or 99%); and b) a tandem scFv multispecific comprising a second scFv (eg, two Bispecific) anti-E7MC antibodies are provided.
一部の実施形態では、a)配列番号15〜35および233〜237のいずれか1つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号36〜56および238〜243のいずれか1つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む第1のscFv;ならびにb)第2のscFvを含むタンデムscFv多特異的(例えば、二重特異的)抗E7MC抗体が提供される。 In some embodiments, a) a heavy chain variable domain comprising an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 15-35 and 233-237 and an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 36-56 and 238-243 A tandem scFv multispecific (eg, bispecific) anti-E7MC antibody comprising a first scFv comprising a light chain variable domain; and b) a second scFv is provided.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第1のscFv、ならびにb)第2のscFvを含むタンデムscFv多特異的(例えば、二重特異的)抗E7MC抗体が提供され、このタンデムscFv多特異的抗E7MC抗体は、タンデムジ−scFvまたはタンデムトリ−scFvである。一部の実施形態では、タンデムscFv多特異的抗E7MC抗体は、タンデムジ−scFvである。一部の実施形態では、タンデムscFv多特異的抗E7MC抗体は、二重特異的T細胞エンゲージャーである。 In some embodiments, a) a first scFv that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, and b) a tandem scFv multispecific comprising a second scFv (eg, A bispecific) anti-E7MC antibody is provided, the tandem scFv multispecific anti-E7MC antibody being tandem di-scFv or tandem tri-scFv. In some embodiments, the tandem scFv multispecific anti-E7MC antibody is tandem di-scFv. In some embodiments, the tandem scFv multispecific anti-E7MC antibody is a bispecific T cell engager.
例えば、一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第1のscFv、ならびにb)T細胞の表面上の抗原に特異的に結合する第2のscFvを含むタンデムジ−scFv二重特異的抗E7MC抗体が提供される。一部の実施形態では、HPV16−E7ペプチドは、HPV16−E7 11−19(配列番号4)である。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A02である。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A*02:01である。一部の実施形態では、第2のscFvは、エフェクターT細胞、例えば、細胞傷害性T細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第2のscFvは、例えば、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ、CD28、OX40、GITR、CD137、CD27、CD40LおよびHVEMからなる群から選択される抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第2のscFvは、T細胞の表面上の抗原上のアゴニストエピトープに特異的に結合し、抗原への第2のscFvの結合は、T細胞活性化を増強する。一部の実施形態では、第1のscFvは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第2のscFvは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第1のscFvおよび第2のscFvは共に、ヒト、ヒト化または半合成である。
For example, in some embodiments, a) a first scFv that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein, and b) specifically binds an antigen on the surface of a T cell. A tandem-scFv bispecific anti-E7MC antibody comprising a second scFv is provided. In some embodiments, the HPV16-E7 peptide is HPV16-E7 11-19 (SEQ ID NO: 4). In some embodiments, the MHC class I protein is HLA-A02. In some embodiments, the MHC class I protein is HLA-
一部の実施形態では、a)HPV16−E7 11−19ペプチド(配列番号4)およびHLA−A*02:01を含む複合体に特異的に結合する第1のscFv、ならびにb)T細胞の表面上の抗原に特異的に結合する第2のscFvを含むタンデムジ−scFv二重特異的抗E7MC抗体が提供される。
In some embodiments, a) a first scFv that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 11-19 peptide (SEQ ID NO: 4) and HLA-
一部の実施形態では、a)i)配列番号183のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号184または185のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号186〜188のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号189または190のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号191のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第1のscFv、ならびにb)T細胞の表面上の抗原に特異的に結合する第2のscFvを含むタンデムジ−scFv二重特異的抗E7MC抗体が提供される。 In some embodiments, a) i) HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 183, or variants, sequences comprising up to about 3 (eg, any of about 1, 2, or 3) amino acid substitutions HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of number 184 or 185, or a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids, and any one of SEQ ID NOs: 186-188 An HC-CDR3 comprising an amino acid sequence, or a heavy chain variable domain sequence comprising a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids; and ii) of SEQ ID NO: 189 or 190 LC-CDR1 containing the amino acid sequence, or containing up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acid substitutions. HPV16 comprising a variant and a light chain variable domain comprising LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 191 or a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids A tandem di-scFv duplex comprising a first scFv that specifically binds to a complex comprising an E7 peptide and an MHC class I protein, and b) a second scFv that specifically binds an antigen on the surface of a T cell. Specific anti-E7MC antibodies are provided.
一部の実施形態では、a)i)配列番号183のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号184または185のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号186〜188のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号189または190のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、および配列番号191のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第1のscFv、ならびにb)T細胞の表面上の抗原に特異的に結合する第2のscFvを含むタンデムジ−scFv二重特異的抗E7MC抗体が提供される。 In some embodiments, a) i) an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 183, an HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 184 or 185, and an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 186-188 A heavy chain variable domain sequence comprising HC-CDR3 comprising: and ii) comprising a light chain variable domain comprising LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 189 or 190 and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 191 A tandem di-scFv comprising a first scFv that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein, and b) a second scFv that specifically binds an antigen on the surface of a T cell. Bispecific anti-E7MC antibodies are provided.
一部の実施形態では、a)i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第1のscFv;ならびにb)T細胞の表面上の抗原に特異的に結合する第2のscFvを含むタンデムジ−scFv二重特異的抗E7MC抗体が提供される。 In some embodiments, a) i) HC-CDR1 comprising an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 57-77, or up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) ) Variants thereof comprising amino acid substitutions, HC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98, or up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids HC-CDR3 comprising the variant thereof, and the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245, or up to about 5 (eg any of about 1, 2, 3, 4 or 5) Or) a heavy chain variable domain comprising a variant thereof containing amino acid substitutions; and ii) an LC-C comprising an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 120-140 and 246 R1, or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids, LC-CDR2, comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 141-161, Or a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids, and LC-CDR3 comprising any one of the amino acid sequences of SEQ ID NOS 162-182 and 247-250, or A complex comprising a HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein comprising a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions A first scFv that specifically binds to b; and b) a second scFv that specifically binds to an antigen on the surface of the T cell Muzi -scFv bispecific anti E7MC antibodies are provided.
一部の実施形態では、a)i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1;配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2;および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1;配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2;および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン配列;またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第1のscFv、ならびにb)T細胞の表面上の抗原に特異的に結合する第2のscFvを含むタンデムジ−scFv二重特異的抗E7MC抗体が提供される。 In some embodiments, a) i) HC-CDR1 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 57-77; HC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98; and SEQ ID NO: A heavy chain variable domain sequence comprising HC-CDR3 comprising an amino acid sequence of any one of 99-119, 244 and 245; or up to about 5 (eg, about 1, 2, 3, 4 or Any of 5) variants thereof comprising amino acid substitutions; and ii) LC-CDR1 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 120-140 and 246; comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 141-161 LC-CDR2; and LC-CD comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250 A light chain variable domain sequence comprising 3; or an HPV16-E7 comprising variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids in the LC-CDR sequence A tandem di-scFv bispecific comprising a first scFv that specifically binds to a complex comprising a peptide and an MHC class I protein, and b) a second scFv that specifically binds an antigen on the surface of a T cell. An anti-E7MC antibody is provided.
一部の実施形態では、a)i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1;配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2;および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1;配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2;および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン配列を含む、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第1のscFv;ならびにb)T細胞の表面上の抗原に特異的に結合する第2のscFvを含むタンデムジ−scFv二重特異的抗E7MC抗体が提供される。 In some embodiments, a) i) HC-CDR1 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 57-77; HC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98; and SEQ ID NO: A heavy chain variable domain sequence comprising HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of 99-119, 244 and 245; and ii) LC-CDR1 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 120-140 and 246; A light chain variable domain sequence comprising LC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 141-161; and LC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250, Specific binding to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein The first scFv that; and b) Tandemuji -scFv bispecific anti E7MC antibody comprising a second scFv that specifically bind to an antigen on the surface of T cells.
一部の実施形態では、a)配列番号15〜35および233〜237のいずれか1つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれか)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号36〜56および238〜243のいずれか1つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれか)の配列同一性を有するそのバリアントを含む第1のscFv、ならびにb)T細胞の表面上の抗原に特異的に結合する第2のscFvを含むタンデムジ−scFv二重特異的抗E7MC抗体が提供される。 In some embodiments, a) a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 15-35 and 233-237, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% Or a variant thereof having sequence identity of 99%) and a light chain variable domain comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 36-56 and 238-243, or at least about 95% (eg, at least about A first scFv comprising a variant thereof having a sequence identity of either 96%, 97%, 98% or 99%) and b) a second scFv that specifically binds to an antigen on the surface of a T cell. A tandem-scFv bispecific anti-E7MC antibody comprising is provided.
一部の実施形態では、a)配列番号15〜35および233〜237のいずれか1つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号36〜56および238〜243のいずれか1つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む第1のscFv、ならびにb)T細胞の表面上の抗原に特異的に結合する第2のscFvを含むタンデムジ−scFv二重特異的抗E7MC抗体が提供される。 In some embodiments, a) a heavy chain variable domain comprising an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 15-35 and 233-237 and an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 36-56 and 238-243 Provided is a tandem di-scFv bispecific anti-E7MC antibody comprising a first scFv comprising a light chain variable domain and b) a second scFv that specifically binds an antigen on the surface of a T cell.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第1のscFv、ならびにb)CD3εに特異的に結合する第2のscFvを含むタンデムジ−scFv二重特異的抗E7MC抗体が提供される。一部の実施形態では、HPV16−E7ペプチドは、HPV16−E7 11−19(配列番号4)である。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A02である。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A*02:01である。一部の実施形態では、第1のscFvは、ペプチドリンカーによる連結を介して第2のscFvに融合される。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、約5〜約20の間(例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約5、10、15または20のいずれか)のアミノ酸長である。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列GGGGSを含む(一部の実施形態ではそれからなる)。一部の実施形態では、第1のscFvは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第2のscFvは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第1のscFvおよび第2のscFvは共に、ヒト、ヒト化または半合成である。
In some embodiments, a) a tandem comprising a first scFv that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein, and b) a second scFv that specifically binds CD3ε. -ScFv bispecific anti-E7MC antibodies are provided. In some embodiments, the HPV16-E7 peptide is HPV16-E7 11-19 (SEQ ID NO: 4). In some embodiments, the MHC class I protein is HLA-A02. In some embodiments, the MHC class I protein is HLA-
一部の実施形態では、a)HPV16−E7 11−19ペプチド(配列番号4)およびHLA−A*02:01を含む複合体に特異的に結合する第1のscFv、ならびにb)CD3εに特異的に結合する第2のscFvを含むタンデムジ−scFv二重特異的抗E7MC抗体が提供される。一部の実施形態では、第1のscFvは、ペプチドリンカーによる連結を介して第2のscFvに融合される。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、約5〜約20の間(例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約5、10、15または20のいずれか)のアミノ酸長である。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列GGGGSを含む(一部の実施形態ではそれからなる)。一部の実施形態では、第1のscFvは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第2のscFvは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第1のscFvおよび第2のscFvは共に、ヒト、ヒト化または半合成である。
In some embodiments, a) a first scFv that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 11-19 peptide (SEQ ID NO: 4) and HLA-
一部の実施形態では、a)i)配列番号183のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、列番号184または185のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号186〜188のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号189または190のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号191のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第1のscFv、ならびにb)CD3εに特異的に結合する第2のscFvを含むタンデムジ−scFv二重特異的抗E7MC抗体が提供される。一部の実施形態では、第1のscFvは、ペプチドリンカーによる連結を介して第2のscFvに融合される。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、約5〜約20の間(例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約5、10、15または20のいずれか)のアミノ酸長である。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列GGGGSを含む(一部の実施形態ではそれからなる)。一部の実施形態では、第1のscFvは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第2のscFvは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第1のscFvおよび第2のscFvは共に、ヒト、ヒト化または半合成である。 In some embodiments, a) i) HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 183, or variants thereof comprising substitutions of up to about 3 (eg, any of about 1, 2, or 3) amino acids HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of number 184 or 185, or a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids, and any one of SEQ ID NOs: 186-188 An HC-CDR3 comprising an amino acid sequence, or a heavy chain variable domain sequence comprising a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids; and ii) of SEQ ID NO: 189 or 190 LC-CDR1 comprising an amino acid sequence, or that comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids HPV16 comprising a light chain variable domain comprising Liant and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 191, or variants thereof comprising up to about 3 (eg, any of about 1, 2, or 3) amino acid substitutions A tandem di-scFv bispecific anti-E7MC antibody comprising a first scFv that specifically binds to a complex comprising an E7 peptide and an MHC class I protein, and b) a second scFv that specifically binds to CD3ε. Provided. In some embodiments, the first scFv is fused to the second scFv via linkage by a peptide linker. In some embodiments, the peptide linker is between about 5 and about 20 amino acids in length (eg, any range between these values, including any of about 5, 10, 15 or 20). is there. In some embodiments, the peptide linker comprises (consists of in some embodiments) the amino acid sequence GGGGS. In some embodiments, the first scFv is human, humanized or semi-synthetic. In some embodiments, the second scFv is human, humanized or semi-synthetic. In some embodiments, both the first scFv and the second scFv are human, humanized or semi-synthetic.
一部の実施形態では、a)i)配列番号183のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号184または185のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号186〜188のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号189または190のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、および配列番号191のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第1のscFv、ならびにb)CD3εに特異的に結合する第2のscFvを含むタンデムジ−scFv二重特異的抗E7MC抗体が提供される。一部の実施形態では、第1のscFvは、ペプチドリンカーによる連結を介して第2のscFvに融合される。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、約5〜約20の間(例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約5、10、15または20のいずれか)のアミノ酸長である。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列GGGGSを含む(一部の実施形態ではそれからなる)。一部の実施形態では、第1のscFvは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第2のscFvは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第1のscFvおよび第2のscFvは共に、ヒト、ヒト化または半合成である。 In some embodiments, a) i) an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 183, an HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 184 or 185, and an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 186-188 A heavy chain variable domain sequence comprising HC-CDR3 comprising: and ii) comprising a light chain variable domain comprising LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 189 or 190 and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 191 A tandem di-scFv bispecific anti-E7MC comprising: a first scFv that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein; and b) a second scFv that specifically binds to CD3ε. An antibody is provided. In some embodiments, the first scFv is fused to the second scFv via linkage by a peptide linker. In some embodiments, the peptide linker is between about 5 and about 20 amino acids in length (eg, any range between these values, including any of about 5, 10, 15 or 20). is there. In some embodiments, the peptide linker comprises (consists of in some embodiments) the amino acid sequence GGGGS. In some embodiments, the first scFv is human, humanized or semi-synthetic. In some embodiments, the second scFv is human, humanized or semi-synthetic. In some embodiments, both the first scFv and the second scFv are human, humanized or semi-synthetic.
一部の実施形態では、a)i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、ならびに配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、ならびに配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第1のscFv、ならびにb)CD3εに特異的に結合する第2のscFvを含むタンデムジ−scFv二重特異的抗E7MC抗体が提供される。一部の実施形態では、第1のscFvは、ペプチドリンカーによる連結を介して第2のscFvに融合される。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、約5〜約20の間(例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約5、10、15または20のいずれか)のアミノ酸長である。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列GGGGSを含む(一部の実施形態ではそれからなる)。一部の実施形態では、第1のscFvは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第2のscFvは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第1のscFvおよび第2のscFvは共に、ヒト、ヒト化または半合成である。 In some embodiments, a) i) HC-CDR1 comprising an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 57-77, or up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) ) Variants thereof comprising amino acid substitutions, HC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98, or up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids HC-CDR3 comprising a variant thereof, and an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245, or up to about 5 (e.g., any of about 1, 2, 3, 4 or 5) Or) a heavy chain variable domain comprising a variant thereof comprising amino acid substitutions; and ii) an LC- comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 120-140 and 246 DR1, or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids, LC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 141-161, Or a variant thereof comprising up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acid substitutions, and LC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250, or A complex comprising a HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein comprising a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acid substitutions A tandem di-s comprising a first scFv that specifically binds to b, and b) a second scFv that specifically binds to CD3ε A cFv bispecific anti-E7MC antibody is provided. In some embodiments, the first scFv is fused to the second scFv via linkage by a peptide linker. In some embodiments, the peptide linker is between about 5 and about 20 amino acids in length (eg, any range between these values, including any of about 5, 10, 15 or 20). is there. In some embodiments, the peptide linker comprises (consists of in some embodiments) the amino acid sequence GGGGS. In some embodiments, the first scFv is human, humanized or semi-synthetic. In some embodiments, the second scFv is human, humanized or semi-synthetic. In some embodiments, both the first scFv and the second scFv are human, humanized or semi-synthetic.
一部の実施形態では、a)i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1;配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2;ならびに配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1;配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2;ならびに配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン配列;またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第1のscFv、ならびにb)CD3εに特異的に結合する第2のscFvを含むタンデムジ−scFv二重特異的抗E7MC抗体が提供される。一部の実施形態では、第1のscFvは、ペプチドリンカーによる連結を介して第2のscFvに融合される。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、約5〜約20の間(例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約5、10、15または20のいずれか)のアミノ酸長である。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列GGGGSを含む(一部の実施形態ではそれからなる)。一部の実施形態では、第1のscFvは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第2のscFvは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第1のscFvおよび第2のscFvは共に、ヒト、ヒト化または半合成である。 In some embodiments, a) i) HC-CDR1 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 57-77; HC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98; A heavy chain variable domain sequence comprising HC-CDR3 comprising an amino acid sequence of any one of 99-119, 244 and 245; or up to about 5 (eg, about 1, 2, 3, 4 or Any of 5) variants thereof comprising amino acid substitutions; and ii) LC-CDR1 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 120-140 and 246; comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 141-161 LC-CDR2; and LC- comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250 A light chain variable domain sequence comprising DR3; or an HPV16-E7 comprising variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids in the LC-CDR sequence Provided is a tandem di-scFv bispecific anti-E7MC antibody comprising a first scFv that specifically binds to a complex comprising a peptide and an MHC class I protein, and b) a second scFv that specifically binds to CD3ε. The In some embodiments, the first scFv is fused to the second scFv via linkage by a peptide linker. In some embodiments, the peptide linker is between about 5 and about 20 amino acids in length (eg, any range between these values, including any of about 5, 10, 15 or 20). is there. In some embodiments, the peptide linker comprises (consists of in some embodiments) the amino acid sequence GGGGS. In some embodiments, the first scFv is human, humanized or semi-synthetic. In some embodiments, the second scFv is human, humanized or semi-synthetic. In some embodiments, both the first scFv and the second scFv are human, humanized or semi-synthetic.
一部の実施形態では、a)i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1;配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2;ならびに配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1;配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2;ならびに配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン配列を含む、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する第1のscFv、ならびにb)CD3εに特異的に結合する第2のscFvを含むタンデムジ−scFv二重特異的抗E7MC抗体が提供される。一部の実施形態では、第1のscFvは、ペプチドリンカーによる連結を介して第2のscFvに融合される。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、約5〜約20の間(例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約5、10、15または20のいずれか)のアミノ酸長である。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列GGGGSを含む(一部の実施形態ではそれからなる)。一部の実施形態では、第1のscFvは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第2のscFvは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第1のscFvおよび第2のscFvは共に、ヒト、ヒト化または半合成である。 In some embodiments, a) i) HC-CDR1 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 57-77; HC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98; A heavy chain variable domain sequence comprising HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of 99-119, 244 and 245; and ii) LC-CDR1 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 120-140 and 246; A light chain variable domain sequence comprising LC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 141-161; and LC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250, Specifically for complexes comprising HPV16-E7 peptides and MHC class I proteins First scFv that case, and b) Tandemuji -scFv bispecific anti E7MC antibody comprising a second scFv that specifically bind to CD3ε is provided. In some embodiments, the first scFv is fused to the second scFv via linkage by a peptide linker. In some embodiments, the peptide linker is between about 5 and about 20 amino acids in length (eg, any range between these values, including any of about 5, 10, 15 or 20). is there. In some embodiments, the peptide linker comprises (consists of in some embodiments) the amino acid sequence GGGGS. In some embodiments, the first scFv is human, humanized or semi-synthetic. In some embodiments, the second scFv is human, humanized or semi-synthetic. In some embodiments, both the first scFv and the second scFv are human, humanized or semi-synthetic.
一部の実施形態では、a)配列番号15〜35および233〜237のいずれか1つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれか)の配列同一性を有するそのバリアント、ならびに配列番号36〜56および238〜243のいずれか1つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれか)の配列同一性を有するそのバリアントを含む第1のscFv、ならびにb)CD3εに特異的に結合する第2のscFvを含むタンデムジ−scFv二重特異的抗E7MC抗体が提供される。一部の実施形態では、第1のscFvは、ペプチドリンカーによる連結を介して第2のscFvに融合される。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、約5〜約20の間(例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約5、10、15または20のいずれか)のアミノ酸長である。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列GGGGSを含む(一部の実施形態ではそれからなる)。一部の実施形態では、第1のscFvは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第2のscFvは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第1のscFvおよび第2のscFvは共に、ヒト、ヒト化または半合成である。 In some embodiments, a) a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 15-35 and 233-237, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% Or a variant thereof having a sequence identity of any one) and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 36-56 and 238-243, or at least about 95% (eg, at least about Tandem di-scFv containing a first scFv comprising a variant thereof having a sequence identity of either 96%, 97%, 98% or 99%) and b) a second scFv that specifically binds to CD3ε. Bispecific anti-E7MC antibodies are provided. In some embodiments, the first scFv is fused to the second scFv via linkage by a peptide linker. In some embodiments, the peptide linker is between about 5 and about 20 amino acids in length (eg, any range between these values, including any of about 5, 10, 15 or 20). is there. In some embodiments, the peptide linker comprises (consists of in some embodiments) the amino acid sequence GGGGS. In some embodiments, the first scFv is human, humanized or semi-synthetic. In some embodiments, the second scFv is human, humanized or semi-synthetic. In some embodiments, both the first scFv and the second scFv are human, humanized or semi-synthetic.
一部の実施形態では、a)配列番号15〜35および233〜237のいずれか1つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、ならびに配列番号36〜56および238〜243のいずれか1つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む第1のscFv、ならびにb)CD3εに特異的に結合する第2のscFvを含むタンデムジ−scFv二重特異的抗E7MC抗体が提供される。一部の実施形態では、第1のscFvは、ペプチドリンカーによる連結を介して第2のscFvに融合される。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、約5〜約20の間(例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約5、10、15または20のいずれか)のアミノ酸長である。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列GGGGSを含む(一部の実施形態ではそれからなる)。一部の実施形態では、第1のscFvは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第2のscFvは、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、第1のscFvおよび第2のscFvは共に、ヒト、ヒト化または半合成である。 In some embodiments, a) a heavy chain variable domain comprising an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 15-35 and 233-237, and an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 36-56 and 238-243, A tandem di-scFv bispecific anti-E7MC antibody comprising a first scFv comprising a light chain variable domain comprising, and b) a second scFv that specifically binds CD3ε is provided. In some embodiments, the first scFv is fused to the second scFv via linkage by a peptide linker. In some embodiments, the peptide linker is between about 5 and about 20 amino acids in length (eg, any range between these values, including any of about 5, 10, 15 or 20). is there. In some embodiments, the peptide linker comprises (consists of in some embodiments) the amino acid sequence GGGGS. In some embodiments, the first scFv is human, humanized or semi-synthetic. In some embodiments, the second scFv is human, humanized or semi-synthetic. In some embodiments, both the first scFv and the second scFv are human, humanized or semi-synthetic.
一部の実施形態では、タンデムジ−scFv二重特異的抗E7MC抗体は、約0.1pM〜約500nMの間(例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約0.1pM、1.0pM、10pM、50pM、100pM、500pM、1nM、10nM、50nM、100nMまたは500nMのいずれか)のKdで、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に結合する。一部の実施形態では、タンデムジ−scFv二重特異的抗E7MC抗体は、約1nM〜約500nMの間(例えば、これらの値の間の任意の範囲を含んで、約1、10、25、50、75、100、150、200、250、300、350、400、450または500nMのいずれか)のKdで、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に結合する。 In some embodiments, the tandem-scFv bispecific anti-E7MC antibody is between about 0.1 pM and about 500 nM (eg, including any range between these values, about 0.1 pM, 1 Binds to complexes comprising HPV16-E7 peptides and MHC class I proteins with a K d of 0 pM, 10 pM, 50 pM, 100 pM, 500 pM, 1 nM, 10 nM, 50 nM, 100 nM or 500 nM). In some embodiments, the tandem di-scFv bispecific anti-E7MC antibody is between about 1 nM and about 500 nM (eg, including any range between these values, including about 1, 10, 25, 50 , with a K d of any) of 75,100,150,200,250,300,350,400,450 or 500 nM, it binds to a complex containing HPV16-E7 peptides and MHC class I proteins.
キメラ抗原受容体(CAR)およびCARエフェクター細胞
抗E7MC構築物は、一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分を含むキメラ抗原受容体(CAR)(本明細書で「抗E7MC CAR」とも呼ぶ)である。抗E7MC抗体部分を含むCARを含むCARエフェクター細胞(例えば、T細胞)(本明細書で「抗E7MC CARエフェクター細胞」、例えば、「抗E7MC CAR T細胞」とも呼ぶ)もまた提供される。
Chimeric antigen receptor (CAR) and CAR effector cells In some embodiments, an anti-E7MC construct is a chimeric antigen receptor (CAR) comprising an anti-E7MC antibody portion (also referred to herein as “anti-E7MC CAR”). is there. Also provided are CAR effector cells (eg, T cells) comprising a CAR comprising an anti-E7MC antibody portion (also referred to herein as “anti-E7MC CAR effector cells”, eg, “anti-E7MC CAR T cells”).
抗E7MC CARは、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分を含む細胞外ドメイン、ならびにb)細胞内シグナル伝達ドメインを含む。膜貫通ドメインは、細胞外ドメインと細胞内ドメインとの間に存在し得る。 The anti-E7MC CAR comprises a) an extracellular domain comprising an anti-E7MC antibody moiety that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein, and b) an intracellular signaling domain. The transmembrane domain can be between the extracellular domain and the intracellular domain.
抗E7MC CARの細胞外ドメインと膜貫通ドメインとの間、または抗E7MC CARの細胞内ドメインと膜貫通ドメインとの間には、スペーサードメインが存在し得る。スペーサードメインは、膜貫通ドメインをポリペプチド鎖中の細胞外ドメインまたは細胞内ドメインに連結するように機能する任意のオリゴペプチドまたはポリペプチドであり得る。スペーサードメインは、例えば、約10〜約100または約25〜約50アミノ酸を含む、最大で約300アミノ酸を含み得る。 There may be a spacer domain between the extracellular domain of the anti-E7MC CAR and the transmembrane domain, or between the intracellular domain and the transmembrane domain of the anti-E7MC CAR. The spacer domain can be any oligopeptide or polypeptide that functions to link the transmembrane domain to the extracellular or intracellular domain in the polypeptide chain. The spacer domain can comprise up to about 300 amino acids, including for example from about 10 to about 100 or from about 25 to about 50 amino acids.
膜貫通ドメインは、天然供給源由来または合成供給源由来のいずれかであり得る。供給源が天然である場合、ドメインは、任意の膜結合型タンパク質または膜貫通タンパク質に由来し得る。本発明において特に使用される膜貫通領域は、T細胞受容体のα、β、δもしくはγ鎖、CD28、CD3ε、CD3ζ、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137またはCD154に由来し得る(即ち、少なくともそれらの膜貫通領域(複数可)を含み得る)。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは合成であり得、この場合、膜貫通ドメインは、ロイシンおよびバリンなどの、主に疎水性の残基を含み得る。一部の実施形態では、フェニルアラニン、トリプトファンおよびバリンの三つ組が、合成膜貫通ドメインの各末端において見出され得る。一部の実施形態では、例えば、約2と約10との間(例えば、約2、3、4、5、6、7、8、9または10のいずれか)のアミノ酸長の長さを有する短いオリゴペプチドリンカーまたはポリペプチドリンカーが、抗E7MC CARの膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとの間に連結を形成し得る。一部の実施形態では、リンカーは、グリシン−セリン二つ組である。 The transmembrane domain can be from either a natural source or a synthetic source. If the source is natural, the domain can be derived from any membrane-bound or transmembrane protein. The transmembrane regions particularly used in the present invention are α, β, δ or γ chains of T cell receptors, CD28, CD3ε, CD3ζ, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, It can be derived from CD64, CD80, CD86, CD134, CD137 or CD154 (ie, can include at least their transmembrane region (s)). In some embodiments, the transmembrane domain can be synthetic, in which case the transmembrane domain can comprise predominantly hydrophobic residues, such as leucine and valine. In some embodiments, a phenylalanine, tryptophan and valine triad can be found at each end of the synthetic transmembrane domain. In some embodiments, for example, having an amino acid length of between about 2 and about 10 (eg, any of about 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10) A short oligopeptide linker or polypeptide linker can form a link between the transmembrane domain of the anti-E7MC CAR and the intracellular signaling domain. In some embodiments, the linker is a glycine-serine bipartite.
一部の実施形態では、抗E7MC CARの細胞内ドメイン中の配列のうち1つと天然に結合する膜貫通ドメインが使用される(例えば、抗E7MC CAR細胞内ドメインがCD28共刺激配列を含む場合、抗E7MC CARの膜貫通ドメインは、CD28膜貫通ドメインに由来する)。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、同じまたは異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインへのかかるドメインの結合を回避して、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小化するために、選択され得、またはアミノ酸置換によって改変され得る。 In some embodiments, a transmembrane domain that naturally binds to one of the sequences in the intracellular domain of the anti-E7MC CAR is used (eg, if the anti-E7MC CAR intracellular domain comprises a CD28 costimulatory sequence, The transmembrane domain of anti-E7MC CAR is derived from the CD28 transmembrane domain). In some embodiments, the transmembrane domain avoids binding of such a domain to the transmembrane domain of the same or different surface membrane protein to minimize interaction with other members of the receptor complex. Can be selected or modified by amino acid substitution.
抗E7MC CARの細胞内シグナル伝達ドメインは、抗E7MC CARが配置された免疫細胞の通常のエフェクター機能のうち少なくとも1つの活性化を担う。例えば、T細胞のエフェクター機能は、サイトカインの分泌を含む細胞溶解活性またはヘルパー活性であり得る。したがって、用語「細胞内シグナル伝達ドメイン」とは、エフェクター機能シグナルを伝達し、特殊化した機能を実施するように細胞に指示する、タンパク質の一部分を指す。通常は細胞内シグナル伝達ドメイン全体が使用され得るが、多くの場合、鎖全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインのトランケートされた一部分が使用される限りにおいて、かかるトランケートされた一部分は、それがエフェクター機能シグナルを伝達する限り、インタクトな鎖の代わりに使用され得る。したがって、用語「細胞内シグナル伝達配列」は、エフェクター機能シグナルを伝達するのに十分な、細胞内シグナル伝達ドメインの任意のトランケートされた一部分を含むことを意味する。 The intracellular signaling domain of anti-E7MC CAR is responsible for the activation of at least one of the normal effector functions of immune cells in which anti-E7MC CAR is placed. For example, the effector function of a T cell can be cytolytic activity or helper activity, including cytokine secretion. Thus, the term “intracellular signaling domain” refers to the portion of a protein that transmits effector function signals and directs the cell to perform specialized functions. Usually the entire intracellular signaling domain can be used, but in many cases it is not necessary to use the entire chain. As long as a truncated portion of the intracellular signaling domain is used, such a truncated portion can be used in place of an intact chain as long as it transmits effector function signals. Thus, the term “intracellular signaling sequence” is meant to include any truncated portion of the intracellular signaling domain sufficient to transduce effector function signals.
本発明の抗E7MC CARにおける使用のための細胞内シグナル伝達ドメインの例には、抗原受容体会合後にシグナル伝達を開始させるように協力して作用するT細胞受容体(TCR)および共受容体の細胞質配列、ならびにこれらの配列の任意の誘導体またはバリアントおよび同じ機能的能力を有する任意の合成配列が含まれる。 Examples of intracellular signaling domains for use in the anti-E7MC CAR of the present invention include T cell receptors (TCRs) and co-receptors that act in concert to initiate signal transduction following antigen receptor association. Cytoplasmic sequences, as well as any derivatives or variants of these sequences and any synthetic sequences with the same functional capacity are included.
TCR単独を介して生成されるシグナルは、T細胞の完全な活性化には不十分であること、および二次または共刺激シグナルもまた必要とされることが公知である。したがって、T細胞活性化は、2つの別個のクラスの細胞内シグナル伝達配列:TCRを介した抗原依存的一次活性化を開始させる配列(一次シグナル伝達配列)、および二次または共刺激シグナルを提供するように、抗原非依存的様式で作用する配列(共刺激シグナル伝達配列)、によって媒介されると言うことができる。 It is known that signals generated via TCR alone are insufficient for full activation of T cells, and secondary or costimulatory signals are also required. Thus, T cell activation provides two distinct classes of intracellular signaling sequences: sequences that initiate antigen-dependent primary activation via the TCR (primary signaling sequences), and secondary or costimulatory signals As such, it can be said to be mediated by sequences that act in an antigen-independent manner (costimulatory signaling sequences).
一次シグナル伝達配列は、刺激的方法または阻害的方法のいずれかで、TCR複合体の一次活性化を調節する。刺激的様式で作用する一次シグナル伝達配列は、免疫受容体チロシン活性化モチーフまたはITAMとして公知のシグナル伝達モチーフを含み得る。抗E7MC CAR構築物は、一部の実施形態では、1または複数のITAMを含む。 The primary signaling sequence regulates the primary activation of the TCR complex in either a stimulatory or inhibitory manner. Primary signaling sequences that act in a stimulatory manner may include a signaling motif known as an immunoreceptor tyrosine activation motif or ITAM. The anti-E7MC CAR construct comprises one or more ITAMs in some embodiments.
本発明において特に使用されるITAM含有一次シグナル伝達配列の例には、TCRζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79bおよびCD66dに由来するものが含まれる。 Examples of ITAM-containing primary signaling sequences particularly used in the present invention include those derived from TCRζ, FcRγ, FcRβ, CD3γ, CD3δ, CD3ε, CD5, CD22, CD79a, CD79b and CD66d.
一部の実施形態では、抗E7MC CARは、CD3ζに由来する一次シグナル伝達配列を含む。例えば、CARの細胞内シグナル伝達ドメインは、CD3ζ細胞内シグナル伝達配列自体を含み得、または本発明の抗E7MC CARとの関連において有用な任意の他の所望の細胞内シグナル伝達配列(複数可)と組み合わされ得る。例えば、抗E7MC CARの細胞内ドメインは、CD3ζ細胞内シグナル伝達配列および共刺激シグナル伝達配列を含み得る。共刺激シグナル伝達配列は、例えば、CD27、CD28、4−1BB(CD137)、OX40、CD30、CD40、PD−1、ICOS、リンパ球機能関連抗原−1(LFA−1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7−H3、CD83と特異的に結合するリガンドなどを含む共刺激分子の細胞内ドメインの一部分であり得る。 In some embodiments, the anti-E7MC CAR comprises a primary signaling sequence derived from CD3ζ. For example, the intracellular signaling domain of CAR may comprise the CD3ζ intracellular signaling sequence itself, or any other desired intracellular signaling sequence (s) useful in the context of the anti-E7MC CAR of the invention. Can be combined. For example, the intracellular domain of an anti-E7MC CAR can include a CD3ζ intracellular signaling sequence and a costimulatory signaling sequence. Costimulatory signaling sequences include, for example, CD27, CD28, 4-1BB (CD137), OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, lymphocyte function associated antigen-1 (LFA-1), CD2, CD7, LIGHT , NKG2C, B7-H3, a part of the intracellular domain of costimulatory molecules including ligands that specifically bind to CD83, and the like.
一部の実施形態では、抗E7MC CARの細胞内シグナル伝達ドメインは、CD3ζの細胞内シグナル伝達配列およびCD28の細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、抗E7MC CARの細胞内シグナル伝達ドメインは、CD3ζの細胞内シグナル伝達配列および4−1BBの細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、抗E7MC CARの細胞内シグナル伝達ドメインは、CD3ζの細胞内シグナル伝達配列ならびにCD28および4−1BBの細胞内シグナル伝達配列を含む。 In some embodiments, the intracellular signaling domain of anti-E7MC CAR comprises an intracellular signaling sequence of CD3ζ and an intracellular signaling sequence of CD28. In some embodiments, the intracellular signaling domain of anti-E7MC CAR comprises a CD3ζ intracellular signaling sequence and a 4-1BB intracellular signaling sequence. In some embodiments, the intracellular signaling domain of anti-E7MC CAR comprises an intracellular signaling sequence of CD3ζ and an intracellular signaling sequence of CD28 and 4-1BB.
したがって、例えば、一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分を含む細胞外ドメイン、b)膜貫通ドメイン、ならびにc)細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗E7MC CARが提供される。一部の実施形態では、HPV16−E7ペプチドは、HPV16−E7 11−19(配列番号4)である。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A02である。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A*02:01である。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞を活性化することが可能である。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達配列および共刺激シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、一次シグナル伝達配列は、CD3ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達配列は、CD28細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、CD3ζ細胞内シグナル伝達配列およびCD28細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、MHCクラスIタンパク質および1つのアミノ酸置換(例えば、保存的アミノ酸置換)を有するHPV16−E7ペプチドのバリアントを含む少なくとも1つ(例えば、少なくとも2、3、4、5または6のいずれか)の複合体と交差反応する。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、HPV16−E7ペプチドおよび異なるサブタイプのMHCクラスIタンパク質を含む少なくとも1つ(例えば、少なくとも2、3、4または5のいずれか)の複合体と交差反応する。
Thus, for example, in some embodiments, a) an extracellular domain comprising an anti-E7MC antibody moiety that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, b) a transmembrane domain, and c ) An anti-E7MC CAR comprising an intracellular signaling domain is provided. In some embodiments, the HPV16-E7 peptide is HPV16-E7 11-19 (SEQ ID NO: 4). In some embodiments, the MHC class I protein is HLA-A02. In some embodiments, the MHC class I protein is HLA-
一部の実施形態では、a)HPV16−E7 11−19ペプチド(配列番号4)およびHLA−A*02:01を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分を含む細胞外ドメイン、b)膜貫通ドメイン、ならびにc)細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗E7MC CARが提供される。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞を活性化することが可能である。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達配列および共刺激シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、一次シグナル伝達配列は、CD3ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達配列は、CD28細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、CD3ζ細胞内シグナル伝達配列およびCD28細胞内シグナル伝達配列を含む。
In some embodiments, a) an extracellular domain comprising an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 11-19 peptide (SEQ ID NO: 4) and HLA-
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号183のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号184または185のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号186〜188のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号189または190のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号191のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む、抗E7MC抗体部分を含む細胞外ドメイン、b)膜貫通ドメイン、ならびにc)細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗E7MC CARが提供される。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞を活性化することが可能である。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達配列および共刺激シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、一次シグナル伝達配列は、CD3ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達配列は、CD28細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、CD3ζ細胞内シグナル伝達配列およびCD28細胞内シグナル伝達配列を含む。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein, i) HC-CDR1, comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 183, Or a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 184 or 185, or up to about 3 (eg, about 1 HC-CDR3 comprising any of the amino acid sequences of SEQ ID NOS: 186-188, or up to about 3 (eg, about 1, 2 or 3) Any) a heavy chain variable domain sequence comprising a variant thereof containing amino acid substitutions; and ii) SEQ ID NO: 189 or 190 LC-CDR1 comprising the amino acid sequence, or variants thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 191 or up to An extracellular domain comprising an anti-E7MC antibody portion comprising a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising substitution of about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids, b) a transmembrane domain, and c) An anti-E7MC CAR comprising an intracellular signaling domain is provided. In some embodiments, the intracellular signaling domain can activate immune cells. In some embodiments, the intracellular signaling domain comprises a primary signaling sequence and a costimulatory signaling sequence. In some embodiments, the primary signaling sequence comprises a CD3ζ intracellular signaling sequence. In some embodiments, the costimulatory signaling sequence comprises a CD28 intracellular signaling sequence. In some embodiments, the intracellular domain comprises a CD3ζ intracellular signaling sequence and a CD28 intracellular signaling sequence.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号183のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号184または185のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号186〜188のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号189または190のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、および配列番号191のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む抗E7MC抗体部分を含む細胞外ドメイン;b)細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗E7MC CARが提供される。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞を活性化することが可能である。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達配列および共刺激シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、一次シグナル伝達配列は、CD3ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達配列は、CD28細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、CD3ζ細胞内シグナル伝達配列およびCD28細胞内シグナル伝達配列を含む。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein, i) HC-CDR1, comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 183, A heavy chain variable domain sequence comprising HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 184 or 185 and HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 186 to 188; and ii) amino acids of SEQ ID NO: 189 or 190 An extracellular domain comprising an anti-E7MC antibody portion comprising a light chain variable domain comprising LC-CDR1 comprising the sequence and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 191; b) an anti-E7MC CAR comprising an intracellular signaling domain; Provided. In some embodiments, the intracellular signaling domain can activate immune cells. In some embodiments, the intracellular signaling domain comprises a primary signaling sequence and a costimulatory signaling sequence. In some embodiments, the primary signaling sequence comprises a CD3ζ intracellular signaling sequence. In some embodiments, the costimulatory signaling sequence comprises a CD28 intracellular signaling sequence. In some embodiments, the intracellular domain comprises a CD3ζ intracellular signaling sequence and a CD28 intracellular signaling sequence.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む抗E7MC抗体部分を含む細胞外ドメイン;b)膜貫通ドメイン、ならびにc)細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗E7MC CARが提供される。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞を活性化することが可能である。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達配列および共刺激シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、一次シグナル伝達配列は、CD3ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達配列は、CD28細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、CD3ζ細胞内シグナル伝達配列およびCD28細胞内シグナル伝達配列を含む。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein, i) the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 57-77 HC-CDR1, comprising any of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 78-98, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids HC-CDR2, or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids, and any one amino acid of SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245 An HC-CDR3 comprising a sequence, or a variant thereof comprising substitutions of up to about 5 (eg any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids A heavy chain variable domain; and ii) LC-CDR1 comprising an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 120-140 and 246, or up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) ) Variants thereof containing amino acid substitutions, LC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 141-161, or substitutions of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids LC-CDR3 comprising the variant and any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250, or up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids An extracellular domain comprising an anti-E7MC antibody portion comprising a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising a substitution; b) a transmembrane domain; Anti E7MC CAR is provided comprising c) intracellular signaling domain. In some embodiments, the intracellular signaling domain can activate immune cells. In some embodiments, the intracellular signaling domain comprises a primary signaling sequence and a costimulatory signaling sequence. In some embodiments, the primary signaling sequence comprises a CD3ζ intracellular signaling sequence. In some embodiments, the costimulatory signaling sequence comprises a CD28 intracellular signaling sequence. In some embodiments, the intracellular domain comprises a CD3ζ intracellular signaling sequence and a CD28 intracellular signaling sequence.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1;配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2;および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1;配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2;および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン配列;またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む抗E7MC抗体部分を含む細胞外ドメイン;b)膜貫通ドメイン、ならびにc)細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗E7MC CARが提供される。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞を活性化することが可能である。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達配列および共刺激シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、一次シグナル伝達配列は、CD3ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達配列は、CD28細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、CD3ζ細胞内シグナル伝達配列およびCD28細胞内シグナル伝達配列を含む。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein, i) the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 57-77 HC-CDR1 comprising: an HC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98; and a heavy chain comprising HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245 A variable domain sequence; or variant thereof comprising substitutions of up to about 5 (eg, about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids in the HC-CDR sequence; and ii) SEQ ID NOs: 120-140 and 246 LC-CDR1 comprising any one amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 141 to 161 LC-CDR2; and a light chain variable domain sequence comprising LC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250; or up to about 5 in the LC-CDR sequence (eg, about Either 1, 2, 3, 4 or 5) an extracellular domain comprising an anti-E7MC antibody portion comprising a variant thereof containing amino acid substitutions; b) a transmembrane domain, and c) an anti-E7MC comprising an intracellular signaling domain CAR is provided. In some embodiments, the intracellular signaling domain can activate immune cells. In some embodiments, the intracellular signaling domain comprises a primary signaling sequence and a costimulatory signaling sequence. In some embodiments, the primary signaling sequence comprises a CD3ζ intracellular signaling sequence. In some embodiments, the costimulatory signaling sequence comprises a CD28 intracellular signaling sequence. In some embodiments, the intracellular domain comprises a CD3ζ intracellular signaling sequence and a CD28 intracellular signaling sequence.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1;配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2;および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1;配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2;および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン配列を含む抗E7MC抗体部分を含む細胞外ドメイン;b)細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗E7MC CARが提供される。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞を活性化することが可能である。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達配列および共刺激シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、一次シグナル伝達配列は、CD3ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達配列は、CD28細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、CD3ζ細胞内シグナル伝達配列およびCD28細胞内シグナル伝達配列を含む。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein, i) the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 57-77 HC-CDR1 comprising: an HC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98; and a heavy chain comprising HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245 A variable domain sequence; and ii) LC-CDR1 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 120-140 and 246; LC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 141-161; and SEQ ID NO: 162- LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of any one of 182 and 247-250 Anti E7MC CAR is provided comprising b) an intracellular signaling domain; extracellular domain containing anti E7MC antibody portion containing no light chain variable domain sequences. In some embodiments, the intracellular signaling domain can activate immune cells. In some embodiments, the intracellular signaling domain comprises a primary signaling sequence and a costimulatory signaling sequence. In some embodiments, the primary signaling sequence comprises a CD3ζ intracellular signaling sequence. In some embodiments, the costimulatory signaling sequence comprises a CD28 intracellular signaling sequence. In some embodiments, the intracellular domain comprises a CD3ζ intracellular signaling sequence and a CD28 intracellular signaling sequence.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、配列番号15〜35および233〜237のいずれか1つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれか)の配列同一性を有するそのバリアント、ならびに配列番号36〜56および238〜243のいずれか1つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む抗E7MC抗体部分を含む細胞外ドメイン;b)膜貫通ドメイン、ならびにc)細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗E7MC CARが提供される。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞を活性化することが可能である。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達配列および共刺激シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、一次シグナル伝達配列は、CD3ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達配列は、CD28細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、CD3ζ細胞内シグナル伝達配列およびCD28細胞内シグナル伝達配列を含む。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, comprising any one of SEQ ID NOs: 15-35 and 233-237 A heavy chain variable domain comprising an amino acid sequence, or variant thereof having at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99%) sequence identity, and SEQ ID NOs: 36-56 and A light chain variable domain comprising the amino acid sequence of any one of 238 to 243, or at least about 95% (eg, comprising at least about 96%, 97%, 98% or 99%) sequence identity An extracellular domain comprising an anti-E7MC antibody portion comprising the variant; b) a transmembrane domain, and c) a cell Anti E7MC CAR including signal transduction domain is provided. In some embodiments, the intracellular signaling domain can activate immune cells. In some embodiments, the intracellular signaling domain comprises a primary signaling sequence and a costimulatory signaling sequence. In some embodiments, the primary signaling sequence comprises a CD3ζ intracellular signaling sequence. In some embodiments, the costimulatory signaling sequence comprises a CD28 intracellular signaling sequence. In some embodiments, the intracellular domain comprises a CD3ζ intracellular signaling sequence and a CD28 intracellular signaling sequence.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、配列番号15〜35および233〜237のいずれか1つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号36〜56および238〜243のいずれか1つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む抗E7MC抗体部分を含む細胞外ドメイン;b)細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗E7MC CARが提供される。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞を活性化することが可能である。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達配列および共刺激シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、一次シグナル伝達配列は、CD3ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達配列は、CD28細胞内シグナル伝達配列を含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、CD3ζ細胞内シグナル伝達配列およびCD28細胞内シグナル伝達配列を含む。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, comprising any one of SEQ ID NOs: 15-35 and 233-237 An extracellular domain comprising an anti-E7MC antibody portion comprising a heavy chain variable domain comprising an amino acid sequence and a light chain variable domain comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 36-56 and 238-243; b) an intracellular signaling domain An anti-E7MC CAR is provided. In some embodiments, the intracellular signaling domain can activate immune cells. In some embodiments, the intracellular signaling domain comprises a primary signaling sequence and a costimulatory signaling sequence. In some embodiments, the primary signaling sequence comprises a CD3ζ intracellular signaling sequence. In some embodiments, the costimulatory signaling sequence comprises a CD28 intracellular signaling sequence. In some embodiments, the intracellular domain comprises a CD3ζ intracellular signaling sequence and a CD28 intracellular signaling sequence.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分を含む細胞外ドメイン、b)膜貫通ドメイン、ならびにc)CD3ζ細胞内シグナル伝達配列およびCD28細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗E7MC CARが提供される。一部の実施形態では、HPV16−E7ペプチドは、HPV16−E7 11−19(配列番号4)である。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A02である。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A*02:01である。
In some embodiments, a) an extracellular domain comprising an anti-E7MC antibody moiety that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, b) a transmembrane domain, and c) a CD3ζ intracellular An anti-E7MC CAR comprising an intracellular signaling domain comprising a signaling sequence and a CD28 intracellular signaling sequence is provided. In some embodiments, the HPV16-E7 peptide is HPV16-E7 11-19 (SEQ ID NO: 4). In some embodiments, the MHC class I protein is HLA-A02. In some embodiments, the MHC class I protein is HLA-
一部の実施形態では、a)HPV16−E7 11−19ペプチド(配列番号4)およびHLA−A*02:01を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分を含む細胞外ドメイン、b)膜貫通ドメイン、ならびにc)CD3ζ細胞内シグナル伝達配列およびCD28細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗E7MC CARが提供される。
In some embodiments, a) an extracellular domain comprising an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 11-19 peptide (SEQ ID NO: 4) and HLA-
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号183のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号184または185のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号186〜188のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号189または190のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号191のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む、抗E7MC抗体部分を含む細胞外ドメイン、b)膜貫通ドメイン、ならびにc)CD3ζ細胞内シグナル伝達配列およびCD28細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗E7MC CARが提供される。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein, i) HC-CDR1, comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 183, Or a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 184 or 185, or up to about 3 (eg, about 1 HC-CDR3 comprising any of the amino acid sequences of SEQ ID NOS: 186-188, or up to about 3 (eg, about 1, 2 or 3) Any) a heavy chain variable domain sequence comprising a variant thereof containing amino acid substitutions; and ii) SEQ ID NO: 189 or 190 LC-CDR1 comprising the amino acid sequence, or variants thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 191 or up to An extracellular domain comprising an anti-E7MC antibody portion comprising a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising substitution of about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids, b) a transmembrane domain, and c) An anti-E7MC CAR comprising an intracellular signaling domain comprising a CD3ζ intracellular signaling sequence and a CD28 intracellular signaling sequence is provided.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号183のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号184または185のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号186〜188のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号189または190のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、および配列番号191のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む、抗E7MC抗体部分を含む細胞外ドメイン、b)膜貫通ドメイン、ならびにc)CD3ζ細胞内シグナル伝達配列およびCD28細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗E7MC CARが提供される。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein, i) HC-CDR1, comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 183, A heavy chain variable domain sequence comprising HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 184 or 185 and HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 186 to 188; and ii) amino acids of SEQ ID NO: 189 or 190 An extracellular domain comprising an anti-E7MC antibody portion, comprising LC-CDR1 comprising a sequence and a light chain variable domain comprising LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 191, b) a transmembrane domain, and c) in a CD3ζ cell Intracellular containing a signaling sequence and a CD28 intracellular signaling sequence Anti E7MC CAR is provided comprising a signal transduction domain.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む抗E7MC抗体部分を含む細胞外ドメイン;b)膜貫通ドメイン、ならびにc)CD3ζ細胞内シグナル伝達配列およびCD28細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗E7MC CARが提供される。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein, i) the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 57-77 HC-CDR1, comprising any of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 78-98, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids HC-CDR2, or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids, and any one amino acid of SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245 An HC-CDR3 comprising a sequence, or a variant thereof comprising substitutions of up to about 5 (eg any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids A heavy chain variable domain; and ii) LC-CDR1 comprising an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 120-140 and 246, or up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) ) Variants thereof containing amino acid substitutions, LC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 141-161, or substitutions of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids LC-CDR3 comprising the variant and any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250, or up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids An extracellular domain comprising an anti-E7MC antibody portion comprising a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising a substitution; b) a transmembrane domain; Anti E7MC CAR is provided comprising the intracellular signaling domain comprising c) CD3 zeta intracellular signaling sequences and CD28 intracellular signaling sequence.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1;配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2;および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1;配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2;および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン配列;またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む抗E7MC抗体部分を含む細胞外ドメイン;b)膜貫通ドメイン、ならびにc)CD3ζ細胞内シグナル伝達配列およびCD28細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗E7MC CARが提供される。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein, i) the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 57-77 HC-CDR1 comprising: an HC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98; and a heavy chain comprising HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245 A variable domain sequence; or variant thereof comprising substitutions of up to about 5 (eg, about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids in the HC-CDR sequence; and ii) SEQ ID NOs: 120-140 and 246 LC-CDR1 comprising any one amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 141 to 161 LC-CDR2; and a light chain variable domain sequence comprising LC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250; or up to about 5 (eg, about Either 1, 2, 3, 4 or 5) an extracellular domain comprising an anti-E7MC antibody portion comprising a variant thereof containing amino acid substitutions; b) a transmembrane domain, and c) a CD3ζ intracellular signaling sequence and CD28 cells An anti-E7MC CAR comprising an intracellular signaling domain comprising an internal signaling sequence is provided.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1;配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2;および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1;配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2;および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン配列を含む抗E7MC抗体部分を含む細胞外ドメイン;b)膜貫通ドメイン、ならびにc)CD3ζ細胞内シグナル伝達配列およびCD28細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗E7MC CARが提供される。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein, i) the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 57-77 HC-CDR1 comprising: an HC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98; and a heavy chain comprising HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245 A variable domain sequence; and ii) LC-CDR1 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 120-140 and 246; LC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 141-161; and SEQ ID NO: 162- LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of any one of 182 and 247-250 An extracellular domain comprising an anti-E7MC antibody portion comprising a light chain variable domain sequence; b) a transmembrane domain, and c) an intracellular signaling domain comprising a CD3ζ intracellular signaling sequence and a CD28 intracellular signaling sequence. E7MC CAR is provided.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号15〜35および233〜237のいずれか1つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれか)の配列同一性を有するそのバリアント、ならびに配列番号36〜56および238〜243のいずれか1つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む抗E7MC抗体部分を含む細胞外ドメイン;b)膜貫通ドメイン、ならびにc)CD3ζ細胞内シグナル伝達配列およびCD28細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗E7MC CARが提供される。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody moiety that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein comprising: i) any of SEQ ID NOs: 15-35 and 233-237 A heavy chain variable domain comprising one amino acid sequence, or variant thereof having at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98%, or 99%) sequence identity, and SEQ ID NOs: 36- A light chain variable domain comprising the amino acid sequence of any one of 56 and 238-243, or at least about 95% (eg including at least about 96%, 97%, 98% or 99%) sequence identity An extracellular domain comprising an anti-E7MC antibody portion comprising the variant thereof; b) a transmembrane domain, and c) Anti E7MC CAR is provided comprising the intracellular signaling domain containing D3ζ intracellular signaling sequences and CD28 intracellular signaling sequence.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、配列番号15〜35および233〜237のいずれか1つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号36〜56および238〜243のいずれか1つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む抗E7MC抗体部分を含む細胞外ドメイン;b)膜貫通ドメイン、ならびにc)CD3ζ細胞内シグナル伝達配列およびCD28細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗E7MC CARが提供される。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, comprising any one of SEQ ID NOs: 15-35 and 233-237 An extracellular domain comprising an anti-E7MC antibody portion comprising a heavy chain variable domain comprising an amino acid sequence and a light chain variable domain comprising any one of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 36-56 and 238-243; b) a transmembrane domain; c) An anti-E7MC CAR comprising an intracellular signaling domain comprising a CD3ζ intracellular signaling sequence and a CD28 intracellular signaling sequence is provided.
抗E7MC CARを発現するエフェクター細胞(例えば、リンパ球、例えば、T細胞)もまた、本明細書で提供される。 Effector cells (eg, lymphocytes, eg, T cells) that express anti-E7MC CAR are also provided herein.
抗E7MC CARを発現するエフェクター細胞を産生する方法であって、抗E7MC CARをコードする核酸を含むベクターをエフェクター細胞中に導入するステップを含む方法もまた提供される。一部の実施形態では、ベクターをエフェクター細胞中に導入するステップは、エフェクター細胞にベクターを形質導入するステップを含む。一部の実施形態では、ベクターをエフェクター細胞中に導入するステップは、エフェクター細胞にベクターをトランスフェクトするステップを含む。エフェクター細胞中へのベクターの形質導入またはトランスフェクションは、当該分野で公知の任意の方法を使用して実施され(carried about)得る。 Also provided is a method of producing an effector cell that expresses an anti-E7MC CAR, the method comprising introducing into the effector cell a vector comprising a nucleic acid encoding the anti-E7MC CAR. In some embodiments, introducing the vector into the effector cell comprises transducing the effector cell with the vector. In some embodiments, introducing the vector into the effector cell comprises transfecting the effector cell with the vector. Transduction or transfection of the vector into effector cells can be carried out using any method known in the art.
イムノコンジュゲート
抗E7MC構築物は、一部の実施形態では、エフェクター分子に結合された抗E7MC抗体部分を含むイムノコンジュゲート(本明細書で「抗E7MCイムノコンジュゲート」とも呼ぶ)を含む。一部の実施形態では、エフェクター分子は、細胞傷害性である、細胞増殖抑制性である、または他の方法でいくらかの治療利益を提供する、治療剤、例えば、がん治療剤である。一部の実施形態では、エフェクター分子は、直接的または間接的のいずれかで検出可能なシグナルを生成し得る標識である。
Immunoconjugates Anti-E7MC constructs, in some embodiments, include immunoconjugates (also referred to herein as “anti-E7MC immunoconjugates”) that comprise an anti-E7MC antibody portion attached to an effector molecule. In some embodiments, the effector molecule is a therapeutic agent, eg, a cancer therapeutic agent that is cytotoxic, cytostatic, or otherwise provides some therapeutic benefit. In some embodiments, the effector molecule is a label that can produce a detectable signal either directly or indirectly.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分および治療剤を含む抗E7MCイムノコンジュゲート(本明細書で「抗体−薬物コンジュゲート」または「ADC」とも呼ぶ)が提供される。一部の実施形態では、治療剤は、細胞傷害性である、細胞増殖抑制性である、または標的細胞が分裂する能力を他の方法で防止もしくは低減させる、毒素である。細胞傷害剤または細胞増殖抑制剤、即ち、がんの処置において腫瘍細胞を死滅させるまたは阻害する薬物の局所的送達のためのADCの使用(SyrigosおよびEpenetos、Anticancer Research 19巻:605〜614頁(1999年);Niculescu−DuvazおよびSpringer、Adv. Drg. Del. Rev. 26巻:151〜172頁(1997年);米国特許第4,975,278号)は、標的細胞への薬物部分の標的化送達、および標的細胞中での細胞内蓄積を可能にするが、このとき、これらの結合体化されていない治療剤の全身投与は、正常細胞ならびに排除が求められる標的細胞に対する、許容できないレベルの毒性を生じ得る(Baldwinら、Lancet(1986年3月15日):603〜605頁(1986年);Thorpe(1985年)、「Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review」、Monoclonal Antibodies ’84: Biological And Clinical Applications、A. Pincheraら(編)、475〜506頁)。その結果、最小の毒性を伴う最大効力が求められる。重要なことに、ほとんどの正常細胞は、それらの表面上にE7MCを提示しないので、それらは抗E7MCイムノコンジュゲートを結合できず、毒素または他の治療剤の殺滅効果から保護される。 In some embodiments, an anti-E7MC immunoconjugate (also referred to herein as an “antibody-drug conjugate” or “ADC”) comprising an anti-E7MC antibody moiety and a therapeutic agent is provided. In some embodiments, the therapeutic agent is a toxin that is cytotoxic, cytostatic, or otherwise prevents or reduces the ability of the target cell to divide. Use of ADCs for local delivery of cytotoxic or cytostatic agents, ie drugs that kill or inhibit tumor cells in the treatment of cancer (Syrigos and Epenetos, Anticancer Research 19: 605-614 ( 1999); Niculescu-Dubaz and Springer, Adv. Dr. Del. Rev. 26: 151-172 (1997); U.S. Pat. Delivery, and intracellular accumulation in target cells, where systemic administration of these unconjugated therapeutic agents is at an unacceptable level for normal cells as well as target cells that need to be eliminated (Baldwin et al., Lancet (March 15, 1986): 603-605 (1986); Thorpe (1985), "Antibody Carriers of Cytotoxic Agents in Cancer Therapies: A Review", Monoclonal Antibio A'84. (Ed.), Pages 475-506). As a result, maximum efficacy with minimal toxicity is sought. Importantly, since most normal cells do not present E7MC on their surface, they cannot bind anti-E7MC immunoconjugates and are protected from the killing effects of toxins or other therapeutic agents.
抗E7MCイムノコンジュゲートにおいて使用される治療剤には、例えば、ダウノマイシン、ドキソルビシン、メトトレキセートおよびビンデシンが含まれる(Rowlandら、Cancer Immunol. Immunother. 21巻:183〜187頁(1986年))。抗E7MCイムノコンジュゲートにおいて使用される毒素には、細菌毒素、例えばジフテリア毒素、植物毒素、例えばリシン、小分子毒素、例えばゲルダナマイシン(Mandlerら、J.Nat. Cancer Inst. 92巻(19号):1573〜1581頁(2000年);Mandlerら、Bioorganic & Med. Chem. Letters 10巻:1025〜1028頁(2000年);Mandlerら、Bioconjugate Chem. 13巻:786〜791頁(2002年))、メイタンシノイド(EP1391213;Liuら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93巻:8618〜8623頁(1996年))、およびカリケアマイシン(Lodeら、Cancer Res. 58巻:2928頁(1998年);Hinmanら、Cancer Res. 53巻:3336〜3342頁(1993年))が含まれる。毒素は、チューブリン結合、DNA結合またはトポイソメラーゼ阻害を含む機構によって、それらの細胞傷害効果および細胞分裂阻害効果を発揮し得る。一部の細胞傷害薬は、大きい抗体またはタンパク質受容体リガンドに結合体化された場合、不活性であるまたはあまり活性でない傾向がある。 Therapeutic agents used in anti-E7MC immunoconjugates include, for example, daunomycin, doxorubicin, methotrexate and vindesine (Rowland et al., Cancer Immunol. Immunother. 21: 183-187 (1986)). Toxins used in anti-E7MC immunoconjugates include bacterial toxins such as diphtheria toxin, plant toxins such as ricin, small molecule toxins such as geldanamycin (Mandler et al., J. Nat. Cancer Inst. 92 (19). ): 1573-1581 (2000); Mandler et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters 10: 1025-1028 (2000); Mandler et al., Bioconjugate Chem. 13: 786-791 (2002) ), Maytansinoids (EP1391213; Liu et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93: 8618-8623 (1996)), and calicheamicin (Lode et al., Can). . Er Res 58 Volume:. 2928 (1998); Hinman et al., Cancer Res 53 Volume: 3336-3342 (1993)) are included. Toxins can exert their cytotoxic and mitogenic effects by mechanisms including tubulin binding, DNA binding or topoisomerase inhibition. Some cytotoxic drugs tend to be inactive or less active when conjugated to large antibodies or protein receptor ligands.
使用され得る酵素的に活性な毒素およびその断片には、例えば、ジフテリアA鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素A鎖(Pseudomonas aeruginosa由来)、リシンA鎖、アブリンA鎖、モデシン(modeccin)A鎖、α−サルシン(α−sarcin)、Aleurites fordiiタンパク質、ジアンチン(dianthin)タンパク質、Phytolaca americanaタンパク質(PAPI、PAPIIおよびPAP−S)、momordica charantia阻害剤、クルシン(curcin)、クロチン(crotin)、sapaonaria officinalis阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン(mitogellin)、レストリクトシン(restrictocin)、フェノマイシン(phenomycin)、エノマイシン(enomycin)およびトリコテセン(tricothecene)が含まれる。例えば、1993年10月28日公開のWO93/21232を参照のこと。 Enzymatically active toxins and fragments thereof that can be used include, for example, diphtheria A chain, non-binding active fragments of diphtheria toxin, exotoxin A chain (from Pseudomonas aeruginosa), ricin A chain, abrin A chain, modedecin ) A chain, α-sarcin (α-sarcin), Aleurites fordii protein, dianthin protein, Phytolaca americana protein (PAPI, PAPIII and PAP-S), mordicica charantia inhibitor, crucin (curcin), crocin , Sapaonaria officinalis inhibitor, gelonin, mitgellin, restrictocin (restrictin) cin), phenol mycin (phenomycin), include Enomaishin (enomycin) and trichothecenes (tricothecenes). See, for example, WO 93/21232 published October 28, 1993.
抗E7MC抗体部分と、1または複数の小分子毒素、例えば、カリケアマイシン、メイタンシノイド、ドラスタチン、アウリスタチン(aurostatin)、トリコテセンおよびCC1065、ならびに毒素活性を有するこれらの毒素の誘導体との抗E7MCイムノコンジュゲートもまた、本明細書で企図される。 Anti-E7MC antibody moieties and one or more small molecule toxins such as calicheamicin, maytansinoids, dolastatin, auristatin, trichothecene and CC1065, and derivatives of these toxins having toxic activity Immunoconjugates are also contemplated herein.
一部の実施形態では、細胞内活性を有する治療剤を含む抗E7MCイムノコンジュゲートが提供される。一部の実施形態では、抗E7MCイムノコンジュゲートは、内部移行され、治療剤は、細胞のタンパク質合成を遮断し、そこで細胞死をもたらす細胞毒である。一部の実施形態では、治療剤は、例えば、ゲロニン、ボウガニン(bouganin)、サポリン、リシン、リシンA鎖、ブリオジン(bryodin)、ジフテリア毒素、レストリクトシン、Pseudomonas外毒素Aおよびそれらのバリアントを含む、リボソーム不活性化活性を有するポリペプチドを含む細胞毒である。一部の実施形態では、治療剤が、リボソーム不活性化活性を有するポリペプチドを含む細胞毒である場合、抗E7MCイムノコンジュゲートは、タンパク質が細胞にとって細胞傷害性であるように、標的細胞への結合の際に内部移行されなければならない。 In some embodiments, an anti-E7MC immunoconjugate comprising a therapeutic agent having intracellular activity is provided. In some embodiments, the anti-E7MC immunoconjugate is internalized and the therapeutic agent is a cytotoxin that blocks cellular protein synthesis where it results in cell death. In some embodiments, the therapeutic agent comprises, for example, gelonin, bouganin, saporin, ricin, ricin A chain, bryodin, diphtheria toxin, restrictocin, Pseudomonas exotoxin A and variants thereof. A cytotoxin comprising a polypeptide having ribosome inactivating activity. In some embodiments, when the therapeutic agent is a cytotoxin comprising a polypeptide having ribosome inactivating activity, the anti-E7MC immunoconjugate is directed to the target cell such that the protein is cytotoxic to the cell. Must be internalized when joining.
一部の実施形態では、DNAを破壊するように作用する治療剤を含む抗E7MCイムノコンジュゲートが提供される。一部の実施形態では、DNAを破壊するように作用する治療剤は、例えば、エンジイン(例えば、カリケアマイシンおよびエスペラミシン)および非エンジイン小分子薬剤(例えば、ブレオマイシン、メチジウムプロピル(methidiumpropyl)−EDTA−Fe(II))からなる群から選択される。本出願に従って有用な他のがん治療剤には、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ディスタマイシンA、シスプラチン、マイトマイシンC、エクチナサイジン、デュオカルマイシン/CC−1065およびブレオマイシン/ペプレオマイシン(pepleomycin)が限定なしに含まれる。 In some embodiments, an anti-E7MC immunoconjugate comprising a therapeutic agent that acts to disrupt DNA is provided. In some embodiments, therapeutic agents that act to disrupt DNA include, for example, enediyne (eg, calicheamicin and esperamicin) and non-enediyne small molecule drugs (eg, bleomycin, methidiumpropyl-EDTA). -Fe (II)). Other cancer therapeutics useful in accordance with this application include, without limitation, daunorubicin, doxorubicin, distamycin A, cisplatin, mitomycin C, echinasaidin, duocarmycin / CC-1065 and bleomycin / pepleomycin. It is.
本発明は、抗E7MC抗体部分と核酸分解活性を有する化合物(例えば、リボヌクレアーゼまたはDNAエンドヌクレアーゼ、例えば、デオキシリボヌクレアーゼ;DNase)との間で形成された抗E7MCイムノコンジュゲートをさらに企図する。 The present invention further contemplates anti-E7MC immunoconjugates formed between an anti-E7MC antibody moiety and a compound having nucleolytic activity (eg, a ribonuclease or DNA endonuclease such as deoxyribonuclease; DNase).
一部の実施形態では、抗E7MCイムノコンジュゲートは、チューブリンを破壊するように作用する薬剤を含む。かかる薬剤には、例えば、リゾキシン(rhizoxin)/メイタンシン、パクリタキセル、ビンクリスチンおよびビンブラスチン、コルヒチン、アウリスタチン ドラスタチン10 MMAEおよびペロルシド(peloruside)Aが含まれ得る。
In some embodiments, the anti-E7MC immunoconjugate comprises an agent that acts to disrupt tubulin. Such agents may include, for example, rhizoxin / maytansine, paclitaxel, vincristine and vinblastine, colchicine,
一部の実施形態では、抗E7MCイムノコンジュゲートは、例えば、Asaley NSC 167780、AZQ NSC 182986、BCNU NSC 409962、ブスルファン NSC 750、カルボキシフタラトプラチナ(carboxyphthalatoplatinum)NSC 271674、CBDCA NSC 241240、CCNU NSC 79037、CHIP NSC 256927、クロラムブシル NSC 3088、クロロゾトシン NSC 178248、シス−プラチナム(cis−platinum)NSC 119875、クロメゾン(clomesone)NSC 338947、シアノモルホリノドキソルビシン NSC 357704、シクロジソン(cyclodisone)NSC 348948、ジアンヒドロガラクチトール NSC 132313、フルオロドパン(fluorodopan)NSC 73754、ヘプスルファム(hepsulfam)NSC 329680、ヒカントン NSC 142982、メルファラン NSC 8806、メチルCCNU NSC 95441、マイトマイシンC NSC 26980、ミトゾラミド(mitozolamide)NSC 353451、ナイトロジェンマスタード NSC 762、PCNU NSC 95466、ピペラジン NSC 344007、ピペラジンジオン NSC 135758、ピポブロマン NSC 25154、ポルフィロマイシン NSC 56410、スピロヒダントインマスタード(spirohydantoin mustard)NSC 172112、テロキシロン(teroxirone)NSC 296934、テトラプラチン(tetraplatin)NSC 363812、チオテパ NSC 6396、トリエチレンメラミン NSC 9706、ウラシルナイトロジェンマスタード NSC 34462およびYoshi−864 NSC 102627が含まれるアルキル化剤を含む。 In some embodiments, the anti-E7MC immunoconjugate is, for example, Asaley NSC 167780, AZQ NSC 182986, BCNU NSC 409926, busulfan NSC 750, carboxyphthalatoplatinum NSC 271740, SC24N CHIP NSC 256927, chlorambucil NSC 3088, chlorozotocin NSC 178248, cis-platinum NSC 11875, clomezone NSC 338947, cyanomorpholinodoxorubicin NSC 357704, cyclodison (cyc) 948, dianhydrogalactitol NSC 132313, fluorodopan NSC 73754, hepsulfam NSC 329680, hicanton NSC 142982, melphalan NSC 8806, methyl CCNU NSC 9441 mitomyc C , Nitrogen mustard NSC 762, PCNU NSC 95466, piperazine NSC 344007, piperazinedione NSC 135758, piperoman NSC 25154, porphyromycin NSC 56410, spirohydantoin mustard 72,112, including teroxirone (teroxirone) NSC 296934, tetraplatin (tetraplatin) NSC 363812, thiotepa NSC 6396, triethylenemelamine NSC 9706, alkylating agents include uracil nitrogen mustard NSC 34462, and Yoshi-864 NSC 102627.
一部の実施形態では、本出願の抗E7MCイムノコンジュゲートのがん治療剤の一部分は、アロコルヒチン(allocolchicine)NSC 406042、ハリコンドリンB NSC 609395、コルヒチン NSC 757、コルヒチン誘導体 NSC 33410、ドラスタチン10 NSC 376128(NG−アウリスタチン由来)、メイタンシン NSC 153858、リゾキシン NSC 332598、タキソール NSC 125973、タキソール誘導体 NSC 608832、チオコルヒチン(thiocolchicine)NSC 361792、トリチルシステイン NSC 83265、ビンブラスチン硫酸塩 NSC 49842およびビンクリスチン硫酸塩 NSC 67574が限定なしに含まれる有糸分裂阻害剤を含み得る。
In some embodiments, a portion of the anti-E7MC immunoconjugate cancer therapeutic agent of the present application includes allocolchicine NSC 406042, halichondrin B NSC 609395, colchicine NSC 757, colchicine derivative NSC 33410,
一部の実施形態では、抗E7MCイムノコンジュゲートは、カンプトテシン NSC 94600、カンプトテシンNa塩 NSC 100880、アミノカンプトテシン NSC 603071、カンプトテシン誘導体 NSC 95382、カンプトテシン誘導体 NSC 107124、カンプトテシン誘導体 NSC 643833、カンプトテシン誘導体 NSC 629971、カンプトテシン誘導体 NSC 295500、カンプトテシン誘導体 NSC 249910、カンプトテシン誘導体 NSC 606985、カンプトテシン誘導体 NSC 374028、カンプトテシン誘導体 NSC 176323、カンプトテシン誘導体 NSC 295501、カンプトテシン誘導体 NSC 606172、カンプトテシン誘導体 NSC 606173、カンプトテシン誘導体 NSC 610458、カンプトテシン誘導体 NSC 618939、カンプトテシン誘導体 NSC 610457、カンプトテシン誘導体 NSC 610459、カンプトテシン誘導体 NSC 606499、カンプトテシン誘導体 NSC 610456、カンプトテシン誘導体 NSC 364830、カンプトテシン誘導体 NSC 606497およびモルホリノドキソルビシン NSC 354646が限定なしに含まれるトポイソメラーゼI阻害剤を含む。 In some embodiments, the anti-E7MC immunoconjugate comprises camptothecin NSC 94600, camptothecin Na salt NSC 100880, aminocamptothecin NSC 603071, camptothecin derivative NSC 95382, camptothecin derivative NSC 107124, camptothecin derivative NSC 642833, camptothecin derivative SC Derivatives NSC 295500, camptothecin derivatives NSC 249910, camptothecin derivatives NSC 606985, camptothecin derivatives NSC 374028, camptothecin derivatives NSC 176323, camptothecin derivatives NSC 295501, camptothecin derivatives NSC 606172, camptothecin derivatives NS C 606173, camptothecin derivative NSC 610458, camptothecin derivative NSC 618939, camptothecin derivative NSC 610457, camptothecin derivative NSC 610457, camptothecin derivative NSC 606499, camptothecin derivative NSC 61046, camptothecin derivative NSC 3604 830 A topoisomerase I inhibitor.
一部の実施形態では、抗E7MCイムノコンジュゲートは、ドキソルビシン NSC 123127、アモナフィド(amonafide)NSC 308847、m−AMSA NSC 249992、アントラピラゾール(anthrapyrazole)誘導体 NSC 355644、ピラゾロアクリジン(pyrazoloacridine)NSC 366140、ビサントレン(bisantrene)HCL NSC 337766、ダウノルビシン NSC 82151、デオキシドキソルビシン NSC 267469、ミトキサントロン NSC 301739、メノガリル NSC 269148、N,N−ジベンジルダウノマイシン NSC 268242、オキサントラゾール(oxanthrazole)NSC 349174、ルビダゾン(rubidazone)NSC 164011、VM−26 NSC 122819およびVP−16 NSC 141540が限定なしに含まれるトポイソメラーゼII阻害剤を含む。 In some embodiments, the anti-E7MC immunoconjugate comprises doxorubicin NSC 123127, amonafide NSC 308847, m-AMSA NSC 2499992, anthrapyrazole derivative NSC 355644, pyrazoloacridine 6r SC (Bisantrene) HCL NSC 337766, Daunorubicin NSC 82151, Dexoxorubicin NSC 267469, Mitoxantrone NSC 301739, Menogalyl NSC 269148, N, N-dibenzyldaunomycin NSC 268242, Oxanthrazol 91 (oxanthrazol 91) 4, including topoisomerase II inhibitors Rubidazon (rubidazone) NSC 164011, VM-26 NSC 122819, and VP-16 NSC 141540 are included without limitation.
一部の実施形態では、抗E7MCイムノコンジュゲートは、L−アラノシン NSC 153353、5−アザシチジン NSC 102816、5−フルオロウラシル NSC 19893、アシビシン NSC 163501、アミノプテリン誘導体 NSC 132483、アミノプテリン誘導体 NSC 184692、アミノプテリン誘導体 NSC 134033、アンチフォール(antifol)NSC 633713、アンチフォール NSC 623017、ベーカーズ可溶性アンチフォール(Baker’s soluble antifol) NSC 139105、ジクロロアリルローソン(dichlorallyl lawsone)NSC 126771、ブレキナル NSC 368390、フトラフール(ftorafur)(プロドラッグ)NSC 148958、5,6−ジヒドロ−5−アザシチジン NSC 264880、メトトレキセート NSC 740、メトトレキセート誘導体 NSC 174121、N−(ホスホノアセチル)−L−アスパルテート(PALA)NSC 224131、ピラゾフリン(pyrazofurin)NSC 143095、トリメトレキセート NSC 352122、3−HP NSC 95678、2’−デオキシ−5−フルオロウリジン NSC 27640、5−HP NSC 107392、α−TGDR NSC 71851、グリシン酸アフィディコリン(aphidicolin glycinate)NSC 303812、ara−C NSC 63878、5−アザ−2’−デオキシシチジン NSC 127716、β−TGDR NSC 71261、シクロシチジン NSC 145668、グアナゾール NSC 1895、ヒドロキシウレア NSC 32065、イノシングリコジアルデヒド(inosine glycodialdehyde)NSC 118994、マクベシン(macbecin)Il NSC 330500、ピラゾロイミダゾール(pyrazoloimidazole)NSC 51143、チオグアニン NSC 752およびチオプリン NSC 755が限定なしに含まれる、RNAまたはDNA代謝拮抗薬を含む。
In some embodiments, the anti-E7MC immunoconjugate comprises L-alanosin NSC 153353, 5-azacytidine NSC 102816, 5-fluorouracil NSC 19893, acivicin NSC 163501, aminopterin derivative NSC 132483, aminopterin derivative NSC 184692, aminopterin Derivatives NSC 134033, antifol NSC 633713, antifall NSC 623017, Baker's soluble antifol NSC 139105, dichloroallyl Lawson NSC 134771 SC, 9083 NSC 126771 SC ur) (prodrug)
一部の実施形態では、抗E7MCイムノコンジュゲートは、高度に放射活性の原子を含む。種々の放射活性同位体が、放射結合体化(radioconjugated)抗体の産生のために利用可能である。例には、211At、131I、125I、90Y、186Re、188Re、153Sm、212Bi、32P、212Pb、およびLuの放射活性同位体が含まれる。 In some embodiments, the anti-E7MC immunoconjugate comprises a highly radioactive atom. A variety of radioactive isotopes are available for the production of radioconjugated antibodies. Examples include radioactive isotopes of 211 At, 131 I, 125 I, 90 Y, 186 Re, 188 Re, 153 Sm, 212 Bi, 32 P, 212 Pb, and Lu.
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、腫瘍プレ標的化における利用のために「受容体」(例えば、ストレプトアビジン)に結合体化され得、この抗体−受容体コンジュゲートは、患者に投与され、その後、除去剤を使用して循環から未結合のコンジュゲートが除去され、次いで、細胞傷害剤(例えば、放射性核種)に結合体化された「リガンド」(例えば、アビジン)が投与される。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody moiety can be conjugated to a “receptor” (eg, streptavidin) for use in tumor pretargeting, wherein the antibody-receptor conjugate is Followed by removal of unbound conjugate from the circulation using a scavenger and then administration of a “ligand” (eg, avidin) conjugated to a cytotoxic agent (eg, radionuclide). The
一部の実施形態では、抗E7MCイムノコンジュゲートは、プロドラッグ活性化酵素に結合体化された抗E7MC抗体部分を含み得る。一部のかかる実施形態では、プロドラッグ活性化酵素は、プロドラッグ(例えば、ペプチジル化学療法剤、WO81/01145を参照のこと)を、抗がん薬物などの活性薬物に変換する。かかる抗E7MCイムノコンジュゲートは、一部の実施形態では、抗体依存的酵素媒介性プロドラッグ治療(antibody−dependent enzyme−mediated prodrug therapy)(「ADEPT」)において有用である。抗体に結合体化され得る酵素には、ホスフェート含有プロドラッグを遊離薬物に変換するために有用なアルカリホスファターゼ;サルフェート含有プロドラッグを遊離薬物に変換するために有用なアリールスルファターゼ;非毒性5−フルオロシトシンを抗がん薬物5−フルオロウラシルに変換するために有用なシトシンデアミナーゼ;ペプチド含有プロドラッグを遊離薬物に変換するために有用なプロテアーゼ、例えば、セラチアプロテアーゼ、サーモリシン、スブチリシン、カルボキシペプチダーゼおよびカテプシン(例えば、カテプシンBおよびL);D−アミノ酸置換基を含むプロドラッグを変換するために有用なD−アラニルカルボキシペプチダーゼ;グリコシル化プロドラッグを遊離薬物に変換するために有用な炭水化物切断酵素、例えば、β−ガラクトシダーゼおよびノイラミニダーゼ;β−ラクタムで誘導体化された薬物を遊離薬物に変換するために有用なβ−ラクタマーゼ;ならびにペニシリンアミダーゼ、例えば、それらのアミン窒素においてそれぞれフェノキシアセチル基またはフェニルアセチル基で誘導体化された薬物を遊離薬物に変換するために有用なペニシリンVアミダーゼおよびペニシリンGアミダーゼが含まれるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、酵素は、当該分野で周知の組換えDNA技術によって、抗体部分に共有結合され得る。例えば、Neubergerら、Nature 312巻:604〜608頁(1984年)を参照のこと。 In some embodiments, the anti-E7MC immunoconjugate can comprise an anti-E7MC antibody moiety conjugated to a prodrug activating enzyme. In some such embodiments, the prodrug activating enzyme converts a prodrug (eg, a peptidyl chemotherapeutic agent, see WO81 / 01145) into an active drug such as an anticancer drug. Such anti-E7MC immunoconjugates are useful in some embodiments in antibody-dependent enzyme-mediated prodrug therapy (“ADEPT”). Enzymes that can be conjugated to antibodies include alkaline phosphatases useful for converting phosphate-containing prodrugs to free drugs; aryl sulfatases useful for converting sulfate-containing prodrugs to free drugs; non-toxic 5-fluoro Cytosine deaminase useful for converting cytosine to the anticancer drug 5-fluorouracil; proteases useful for converting peptide-containing prodrugs to free drugs, such as serratia protease, thermolysin, subtilisin, carboxypeptidase and cathepsins (e.g. , Cathepsins B and L); D-alanyl carboxypeptidases useful for converting prodrugs containing D-amino acid substituents; carbohydrate-cleaving fermentations useful for converting glycosylated prodrugs to free drugs Β-galactosidase and neuraminidase; β-lactamases useful for converting drugs derivatized with β-lactams to free drugs; and penicillin amidases such as phenoxyacetyl groups or phenylacetyl at their amine nitrogens, respectively. Penicillin V amidase and penicillin G amidase useful for converting a group derivatized drug to a free drug include, but are not limited to. In some embodiments, the enzyme can be covalently linked to the antibody moiety by recombinant DNA techniques well known in the art. See, for example, Neuberger et al., Nature 312: 604-608 (1984).
一部の実施形態では、抗E7MCイムノコンジュゲートの治療的一部分は、核酸であり得る。使用され得る核酸には、アンチセンスRNA、遺伝子、または核酸アナログ、例えば、チオグアニンおよびチオプリンを含む他のポリヌクレオチドが含まれるがこれらに限定されない。 In some embodiments, the therapeutic portion of the anti-E7MC immunoconjugate can be a nucleic acid. Nucleic acids that can be used include, but are not limited to, antisense RNA, genes, or nucleic acid analogs, such as other polynucleotides including thioguanine and thiopurine.
本出願は、エフェクター分子に結合した抗E7MC抗体部分を含む抗E7MCイムノコンジュゲートをさらに提供し、このエフェクター分子は、間接的または直接的に検出可能なシグナルを生成し得る標識である。これらの抗E7MCイムノコンジュゲートは、研究適用または診断適用のために、例えば、がんのin vivo検出のために使用され得る。標識は、好ましくは、検出可能なシグナルを、直接的または間接的のいずれかで生成することが可能である。例えば、標識は、放射線不透過性であり得るかまたは放射性同位体、例えば、3H、14C、32P、35S、123I、125I、131I;蛍光(フルオロフォア)もしくは化学発光(クロモフォア)化合物、例えば、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミンもしくはルシフェリン;酵素、例えば、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼもしくは西洋ワサビペルオキシダーゼ;イメージング剤;または金属イオンであり得る。一部の実施形態では、標識は、シンチグラフィー研究のための放射活性原子、例えば、99Tcもしくは123I、または核磁気共鳴(NMR)画像法(磁気共鳴画像法、MRIとしても公知)のためのスピン標識、例えば、ジルコニウム−89、ヨウ素−123、ヨウ素−131、インジウム−111、フッ素−19、炭素−13、窒素−15、酸素−17、ガドリニウム、マンガンもしくは鉄である。ジルコニウム−89は、種々の金属キレート剤に錯体化され得、例えば、PET画像法(WO2011/056983)のために、抗体に結合体化され得る。 The application further provides an anti-E7MC immunoconjugate comprising an anti-E7MC antibody moiety conjugated to an effector molecule, wherein the effector molecule is a label that can produce a signal that can be detected indirectly or directly. These anti-E7MC immunoconjugates can be used for research or diagnostic applications, eg, for in vivo detection of cancer. The label is preferably capable of producing a detectable signal either directly or indirectly. For example, the label can be radiopaque or can be a radioisotope, such as 3 H, 14 C, 32 P, 35 S, 123 I, 125 I, 131 I; fluorescence (fluorophore) or chemiluminescence ( Chromophor) compounds such as fluorescein isothiocyanate, rhodamine or luciferin; enzymes such as alkaline phosphatase, β-galactosidase or horseradish peroxidase; imaging agents; or metal ions. In some embodiments, the label is for a radioactive atom for scintigraphic studies, such as 99 Tc or 123 I, or nuclear magnetic resonance (NMR) imaging (also known as magnetic resonance imaging, MRI). For example, zirconium-89, iodine-123, iodine-131, indium-111, fluorine-19, carbon-13, nitrogen-15, oxygen-17, gadolinium, manganese or iron. Zirconium-89 can be complexed to various metal chelators, for example, conjugated to antibodies for PET imaging (WO2011 / 056983).
一部の実施形態では、抗E7MCイムノコンジュゲートは、間接的に検出可能である。例えば、抗E7MCイムノコンジュゲートに特異的であり、検出可能な標識を含む二次抗体が、抗E7MCイムノコンジュゲートを検出するために使用され得る。 In some embodiments, the anti-E7MC immunoconjugate is indirectly detectable. For example, a secondary antibody that is specific for an anti-E7MC immunoconjugate and contains a detectable label can be used to detect the anti-E7MC immunoconjugate.
したがって、例えば、一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分、ならびにb)エフェクター分子を含む抗E7MCイムノコンジュゲートが提供される。一部の実施形態では、HPV16−E7ペプチドは、HPV16−E7 11−19(配列番号4)である。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A02である。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A*02:01である。一部の実施形態では、エフェクター分子は、抗E7MC抗体部分に共有結合される。一部の実施形態では、エフェクター分子は、例えば、薬物、毒素、放射性同位体、タンパク質、ペプチドおよび核酸からなる群から選択される治療剤である。一部の実施形態では、エフェクター分子(effector molecular)は、がん治療剤である。一部の実施形態では、がん治療剤は、化学療法薬である。一部の実施形態では、がん治療剤は、例えば、211At、131I、125I、90Y、186Re、188Re、153Sm、212Bi、32Pおよび212Pbからなる群から選択される、高度に放射活性の原子である。一部の実施形態では、エフェクター分子は、直接的または間接的のいずれかで検出可能なシグナルを生成し得る標識である。一部の実施形態では、標識は、例えば、3H、14C、32P、35S、123I、125Iおよび131Iからなる群から選択される放射性同位体である。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、scFvである。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、ヒト、ヒト化または半合成である。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、MHCクラスIタンパク質および1つのアミノ酸置換(例えば、保存的アミノ酸置換)を有するHPV16−E7ペプチドのバリアントを含む少なくとも1つ(例えば、少なくとも2、3、4、5または6のいずれか)の複合体と交差反応する。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、HPV16−E7ペプチドおよび異なるサブタイプのMHCクラスIタンパク質を含む少なくとも1つ(例えば、少なくとも2、3、4または5のいずれか)の複合体と交差反応する。
Thus, for example, in some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, and b) an anti-E7MC immunoconjugate comprising an effector molecule. Provided. In some embodiments, the HPV16-E7 peptide is HPV16-E7 11-19 (SEQ ID NO: 4). In some embodiments, the MHC class I protein is HLA-A02. In some embodiments, the MHC class I protein is HLA-
一部の実施形態では、a)HPV16−E7 11−19ペプチド(配列番号4)およびHLA−A*02:01を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分、ならびにb)エフェクター分子を含む抗E7MCイムノコンジュゲートが提供される。一部の実施形態では、エフェクター分子は、抗E7MC抗体部分に共有結合される。一部の実施形態では、エフェクター分子は、例えば、薬物、毒素、放射性同位体、タンパク質、ペプチドおよび核酸からなる群から選択される治療剤である。一部の実施形態では、エフェクター分子は、がん治療剤である。一部の実施形態では、がん治療剤は、化学療法薬である。一部の実施形態では、がん治療剤は、例えば、211At、131I、125I、90Y、186Re、188Re、153Sm、212Bi、32Pおよび212Pbからなる群から選択される、高度に放射活性の原子である。一部の実施形態では、エフェクター分子は、直接的または間接的のいずれかで検出可能なシグナルを生成し得る標識である。一部の実施形態では、標識は、例えば、3H、14C、32P、35S、123I、125Iおよび131Iからなる群から選択される放射性同位体である。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、scFvである。一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、ヒト、ヒト化または半合成である。
In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 11-19 peptide (SEQ ID NO: 4) and HLA-
一部の実施形態では、a)i)配列番号183のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号184もしくは185のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、ならびに配列番号186〜188のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号189もしくは190のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号191のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分、ならびにb)エフェクター分子を含む抗E7MCイムノコンジュゲートが提供される。 In some embodiments, a) i) HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 183, or variants, sequences comprising up to about 3 (eg, any of about 1, 2, or 3) amino acid substitutions HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of number 184 or 185, or variants thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids, and any one of SEQ ID NOs: 186-188 An HC-CDR3 comprising an amino acid sequence, or a heavy chain variable domain sequence comprising a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids; and ii) of SEQ ID NO: 189 or 190 LC-CDR1 containing the amino acid sequence, or substitution of up to about 3 (eg, about 1, 2 or 3) amino acids And a light chain variable domain comprising an LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 191, or a variant thereof comprising up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acid substitutions. An anti-E7MC immunoconjugate comprising an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, and b) an effector molecule is provided.
一部の実施形態では、a)i)配列番号183のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号184または185のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号186〜188のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号189または190のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、および配列番号191のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分、ならびにb)エフェクター分子を含む抗E7MCイムノコンジュゲートが提供される。 In some embodiments, a) i) an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 183, an HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 184 or 185, and an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 186-188 A heavy chain variable domain sequence comprising HC-CDR3 comprising: and ii) comprising a light chain variable domain comprising LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 189 or 190 and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 191 An anti-E7MC immunoconjugate comprising an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, and b) an effector molecule is provided.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む抗E7MC抗体部分、ならびにb)エフェクター分子を含む抗E7MCイムノコンジュゲートが提供される。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein, i) the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 57-77 HC-CDR1, comprising any of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 78-98, or variants thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids HC-CDR2, or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids, and any one amino acid of SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245 An HC-CDR3 comprising a sequence, or a variant thereof comprising substitutions of up to about 5 (eg any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids A heavy chain variable domain; and ii) LC-CDR1 comprising an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 120-140 and 246, or up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) ) Variants thereof containing amino acid substitutions, LC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 141-161, or substitutions of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids LC-CDR3 comprising the variant and any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250, or up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids An anti-E7MC antibody portion comprising a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising a substitution, and b) an anti-E7MC comprising an effector molecule Takeno conjugates are provided.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1;配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2;および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;またはHC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1;配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2;および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン配列;またはLC−CDR配列中に最大で約5(例えば、約1、2、3、4または5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む抗E7MC抗体部分、ならびにb)エフェクター分子を含む抗E7MCイムノコンジュゲートが提供される。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein, i) the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 57-77 HC-CDR1 comprising: an HC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98; and a heavy chain comprising HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245 A variable domain sequence; or variant thereof comprising substitutions of up to about 5 (eg, about 1, 2, 3, 4 or 5) amino acids in the HC-CDR sequence; and ii) SEQ ID NOs: 120-140 and 246 LC-CDR1 comprising any one amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 141 to 161 LC-CDR2; and a light chain variable domain sequence comprising LC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250; or up to about 5 (eg, about An anti-E7MC immunoconjugate comprising either 1, 2, 3, 4 or 5) an anti-E7MC antibody portion comprising a variant thereof containing an amino acid substitution, and b) an effector molecule is provided.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1;配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2;および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1;配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2;および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン配列を含む抗E7MC抗体部分、ならびにb)エフェクター分子を含む抗E7MCイムノコンジュゲートが提供される。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein, i) the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 57-77 HC-CDR1 comprising: an HC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98; and a heavy chain comprising HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245 A variable domain sequence; and ii) LC-CDR1 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 120-140 and 246; LC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 141-161; and SEQ ID NO: 162- LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of any one of 182 and 247-250 Anti E7MC antibody portion containing no light chain variable domain sequence, and b) anti E7MC immunoconjugate comprising an effector molecule is provided.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、配列番号15〜35および233〜237のいずれか1つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれか)の配列同一性を有するそのバリアント、および配列番号36〜56および238〜243のいずれか1つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれか)の配列同一性を有するそのバリアントを含む抗E7MC抗体部分、ならびにb)エフェクター分子を含む抗E7MCイムノコンジュゲートが提供される。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, comprising any one of SEQ ID NOs: 15-35 and 233-237 A heavy chain variable domain comprising an amino acid sequence, or variant thereof having at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98%, or 99%) sequence identity, and SEQ ID NOs: 36-56 and A light chain variable domain comprising the amino acid sequence of any one of 238 to 243, or variant thereof having at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98% or 99%) sequence identity And an anti-E7MC immunoconjugate comprising an effector molecule It is provided.
一部の実施形態では、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、配列番号15〜35および233〜237のいずれか1つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号36〜56および238〜243のいずれか1つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む抗E7MC抗体部分、b)エフェクター分子を含む抗E7MCイムノコンジュゲートが提供される。 In some embodiments, a) an anti-E7MC antibody portion that specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, comprising any one of SEQ ID NOs: 15-35 and 233-237 An anti-E7MC immunoconjugate comprising an heavy chain variable domain comprising an amino acid sequence and a light chain variable domain comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 36-56 and 238-243, b) an effector molecule Provided.
核酸
抗E7MC構築物または抗E7MC抗体部分をコードする核酸分子もまた企図される。一部の実施形態では、全長抗E7MC抗体をコードする核酸(または核酸のセット)が提供される。一部の実施形態では、多特異的抗E7MC分子(例えば、多特異的抗E7MC抗体、二重特異的抗E7MC抗体または二重特異的T細胞エンゲージャー抗E7MC抗体)またはそのポリペプチドの一部分(polypeptide portion)をコードする核酸(または核酸のセット)が提供される。一部の実施形態では、抗E7MC CARをコードする核酸(または核酸のセット)が提供される。一部の実施形態では、抗E7MCイムノコンジュゲートまたはそのポリペプチドの一部分をコードする核酸(または核酸のセット)が提供される。
Nucleic acid molecules encoding nucleic acid anti-E7MC constructs or anti-E7MC antibody portions are also contemplated. In some embodiments, a nucleic acid (or set of nucleic acids) encoding a full length anti-E7MC antibody is provided. In some embodiments, a multispecific anti-E7MC molecule (eg, multispecific anti-E7MC antibody, bispecific anti-E7MC antibody or bispecific T cell engager anti-E7MC antibody) or a portion of a polypeptide thereof ( A nucleic acid (or set of nucleic acids) encoding a polypeptide portion is provided. In some embodiments, a nucleic acid (or set of nucleic acids) encoding an anti-E7MC CAR is provided. In some embodiments, a nucleic acid (or set of nucleic acids) encoding a portion of an anti-E7MC immunoconjugate or polypeptide thereof is provided.
本出願は、これらの核酸配列に対するバリアントもまた含む。例えば、バリアントには、少なくとも中程度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で本出願の抗E7MC構築物または抗E7MC抗体部分をコードする核酸配列にハイブリダイズするヌクレオチド配列が含まれる。 The application also includes variants to these nucleic acid sequences. For example, a variant includes a nucleotide sequence that hybridizes to a nucleic acid sequence encoding an anti-E7MC construct or anti-E7MC antibody portion of the present application under at least moderately stringent hybridization conditions.
本発明は、本発明の核酸が挿入されたベクターもまた提供する。 The present invention also provides a vector into which the nucleic acid of the present invention has been inserted.
簡潔にまとめると、抗E7MC構築物またはそのポリペプチドの一部分をコードする天然または合成の核酸による抗E7MC構築物(例えば、抗E7MC CAR)またはそのポリペプチドの一部分の発現は、その核酸が、例えば、プロモーター(例えば、リンパ球特異的プロモーター)および3’非翻訳領域(UTR)を含む5’および3’調節エレメントに作動可能に連結するように、適切な発現ベクター中に核酸を挿入することによって達成され得る。ベクターは、真核生物宿主細胞における複製および組込みに適切であり得る。典型的なクローニングベクターおよび発現ベクターは、転写ターミネーターおよび翻訳ターミネーター、開始配列、ならびに所望の核酸配列の発現の調節に有用なプロモーターを含む。 Briefly summarized, expression of an anti-E7MC construct (eg, anti-E7MC CAR) or a portion of a polypeptide thereof with a natural or synthetic nucleic acid encoding a portion of the anti-E7MC construct or a polypeptide thereof is expressed by, for example, a promoter Achieved by inserting the nucleic acid into an appropriate expression vector so as to be operably linked to 5 ′ and 3 ′ regulatory elements (eg, a lymphocyte-specific promoter) and a 3 ′ untranslated region (UTR). obtain. The vector may be suitable for replication and integration in eukaryotic host cells. Typical cloning and expression vectors contain transcription and translation terminators, initiation sequences, and promoters useful for the regulation of expression of the desired nucleic acid sequence.
本発明の核酸はまた、標準的な遺伝子送達プロトコールを使用して、核酸免疫および遺伝子治療のために使用され得る。遺伝子送達のための方法は、当該分野で公知である。例えば、それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第5,399,346号、同第5,580,859号、同第5,589,466号を参照のこと。一部の実施形態では、本発明は、遺伝子治療ベクターを提供する。 The nucleic acids of the invention can also be used for nucleic acid immunization and gene therapy using standard gene delivery protocols. Methods for gene delivery are known in the art. See, for example, US Pat. Nos. 5,399,346, 5,580,859, 5,589,466, which are incorporated herein by reference in their entirety. In some embodiments, the present invention provides gene therapy vectors.
核酸は、いくつかの型のベクター中にクローニングされ得る。例えば、核酸は、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体、動物ウイルスおよびコスミドが含まれるがこれらに限定されないベクター中にクローニングされ得る。特に目的とするベクターには、発現ベクター、複製ベクター、プローブ生成ベクターおよび配列決定ベクターが含まれる。 Nucleic acids can be cloned into several types of vectors. For example, nucleic acids can be cloned into vectors including but not limited to plasmids, phagemids, phage derivatives, animal viruses and cosmids. Particularly targeted vectors include expression vectors, replication vectors, probe generation vectors and sequencing vectors.
さらに、発現ベクターは、ウイルスベクターの形態で細胞に提供され得る。ウイルスベクターテクノロジーは、当該分野で周知であり、例えば、Sambrookら(2001年、Molecular Cloning: A Laboratory Manual、Cold Spring Harbor Laboratory、New York)中、ならびに他のウイルス学および分子生物学のマニュアル中に記載されている。ベクターとして有用なウイルスには、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルスおよびレンチウイルスが含まれるがこれらに限定されない。一般に、適切なベクターは、少なくとも1種の生物において機能的な複製起点、プロモーター配列、簡便な制限エンドヌクレアーゼ部位、および1または複数の選択可能なマーカーを含む(例えば、WO01/96584;WO01/29058;および米国特許第6,326,193号を参照のこと)。 Furthermore, the expression vector can be provided to the cell in the form of a viral vector. Viral vector technology is well known in the art, for example, in Sambrook et al. (2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York), and in other virology and molecular biology manuals. Have been described. Viruses useful as vectors include, but are not limited to, retroviruses, adenoviruses, adeno-associated viruses, herpes viruses, and lentiviruses. In general, suitable vectors include an origin of replication functional in at least one organism, a promoter sequence, a convenient restriction endonuclease site, and one or more selectable markers (eg, WO01 / 96584; WO01 / 29058). And U.S. Patent No. 6,326,193).
いくつかのウイルスベースの系が、哺乳動物細胞中への遺伝子移入のために開発されている。例えば、レトロウイルスは、遺伝子送達系のための簡便なプラットフォームを提供する。選択された遺伝子は、当該分野で公知の技術を使用して、ベクター中に挿入され得、レトロウイルス粒子中にパッケージングされ得る。次いで、組換えウイルスは、単離され得、in vivoまたはex vivoのいずれかで、対象の細胞に送達され得る。いくつかのレトロウイルス系が、当該分野で公知である。一部の実施形態では、アデノウイルスベクターが使用される。いくつかのアデノウイルスベクターが、当該分野で公知である。一部の実施形態では、レンチウイルスベクターが使用される。レンチウイルスなどのレトロウイルスに由来するベクターは、導入遺伝子の長期の安定な組込みおよび娘細胞におけるその伝播を可能にするので、長期遺伝子移入を達成するのに適切なツールである。レンチウイルスベクターは、肝細胞などの非増殖性細胞を形質導入できるという点で、マウス白血病ウイルスなどのオンコ−レトロウイルス(onco−retrovirus)に由来するベクターを越えるさらなる利点を有する。これらは、低い免疫原性のさらなる利点もまた有する。 Several virus-based systems have been developed for gene transfer into mammalian cells. For example, retroviruses provide a convenient platform for gene delivery systems. The selected gene can be inserted into a vector and packaged in retroviral particles using techniques known in the art. The recombinant virus can then be isolated and delivered to the cells of interest either in vivo or ex vivo. Several retroviral systems are known in the art. In some embodiments, adenoviral vectors are used. Several adenoviral vectors are known in the art. In some embodiments, a lentiviral vector is used. Vectors derived from retroviruses such as lentiviruses are suitable tools for achieving long-term gene transfer because they allow long-term stable integration of the transgene and its transmission in daughter cells. Lentiviral vectors have an additional advantage over vectors derived from onco-retrovirus such as murine leukemia virus in that they can transduce non-proliferating cells such as hepatocytes. They also have the additional advantage of low immunogenicity.
さらなるプロモーターエレメント、例えば、エンハンサーは、転写開始の頻度を調節する。典型的には、これらは、開始部位の30〜110bp上流の領域中に位置するが、いくつかのプロモーターは、開始部位の下流にも機能的エレメントを含むことが最近示されている。プロモーターエレメント間のスペーシングは、エレメントが互いに対して反転されるまたは移動される場合にプロモーター機能が保存されるように、しばしば柔軟である。チミジンキナーゼ(tk)プロモーターでは、プロモーターエレメント間のスペーシングは、活性が減退し始める前に、50bp離れて増加され得る。 Additional promoter elements, such as enhancers, regulate the frequency of transcription initiation. Typically these are located in a region 30-110 bp upstream of the start site, but some promoters have recently been shown to contain functional elements also downstream of the start site. The spacing between promoter elements is often flexible so that promoter function is preserved when the elements are inverted or moved relative to each other. In the thymidine kinase (tk) promoter, the spacing between promoter elements can be increased by 50 bp before activity begins to decline.
適切なプロモーターの一例は、最初期サイトメガロウイルス(CMV)プロモーター配列である。このプロモーター配列は、それに作用的にに連結した任意のポリヌクレオチド配列の高いレベルの発現を駆動することが可能な強い構成的プロモーター配列である。適切なプロモーターの別の例は、伸長成長因子(Elongation Growth Factor)−1α(EF−1α)である。しかし、サルウイルス40(SV40)初期プロモーター、マウス乳癌ウイルス(MMTV)、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)の長い末端反復(LTR)プロモーター、MoMuLVプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタイン・バーウイルス最初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、ならびに、これらに限定されないが、アクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、ヘモグロビンプロモーターおよびクレアチンキナーゼプロモーターなどのヒト遺伝子プロモーターが含まれるがこれらに限定されない、他の構成的プロモーター配列もまた使用され得る。さらに、本発明は、構成的プロモーターの使用に限定されるべきではない。誘導性プロモーターもまた、本発明の一部として企図される。誘導性プロモーターの使用は、かかる発現が所望される場合には作用的に連結したポリヌクレオチド配列の発現のスイッチをオンにし、または発現が所望されない場合には発現のスイッチをオフにすることが可能な分子スイッチを提供する。誘導性プロモーターの例には、メタロチオネイン(metallothionine)プロモーター、グルココルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーターおよびテトラサイクリンプロモーターが含まれるがこれらに限定されない。 An example of a suitable promoter is the early cytomegalovirus (CMV) promoter sequence. This promoter sequence is a strong constitutive promoter sequence capable of driving high level expression of any polynucleotide sequence operatively linked thereto. Another example of a suitable promoter is Elongation Growth Factor-1α (EF-1α). However, simian virus 40 (SV40) early promoter, mouse mammary tumor virus (MMTV), human immunodeficiency virus (HIV) long terminal repeat (LTR) promoter, MoMuLV promoter, avian leukemia virus promoter, Epstein-Barr virus early promoter, Rous sarcoma virus promoters and other constitutive promoter sequences can also be used, including but not limited to human gene promoters such as, but not limited to, actin promoter, myosin promoter, hemoglobin promoter and creatine kinase promoter . Furthermore, the present invention should not be limited to the use of constitutive promoters. Inducible promoters are also contemplated as part of the present invention. The use of inducible promoters can turn on expression of operably linked polynucleotide sequences if such expression is desired, or turn off expression if expression is not desired. A simple molecular switch. Examples of inducible promoters include, but are not limited to, metallothionein promoters, glucocorticoid promoters, progesterone promoters and tetracycline promoters.
ポリペプチドまたはその一部分の発現を評価するために、細胞中に導入される発現ベクターは、ウイルスベクターを介してトランスフェクトまたは感染されることが求められる細胞の集団からの発現細胞の同定および選択を促進するために、選択可能なマーカー遺伝子もしくはレポーター遺伝子のいずれかまたはそれら両方もまた含み得る。他の態様では、選択可能なマーカーは、DNAの別々の小片上に保有され得、共トランスフェクション手順において使用され得る。選択可能なマーカーおよびレポーター遺伝子の両方には、宿主細胞における発現を可能にする適切な調節配列が隣接し得る。有用な選択可能なマーカーには、例えば、抗生物質耐性遺伝子、例えばneoなどが含まれる。 In order to assess the expression of a polypeptide or a portion thereof, the expression vector introduced into the cell is used to identify and select the expressing cell from a population of cells that are required to be transfected or infected via a viral vector. To facilitate, either a selectable marker gene or reporter gene or both may also be included. In other embodiments, the selectable marker can be carried on separate pieces of DNA and used in a co-transfection procedure. Both the selectable marker and the reporter gene can be flanked by appropriate regulatory sequences that allow expression in the host cell. Useful selectable markers include, for example, antibiotic resistance genes such as neo.
レポーター遺伝子は、潜在的にトランスフェクトされた細胞を同定するため、および調節配列の機能性を評価するために使用される。一般に、レポーター遺伝子は、レシピエント生物または組織中に存在することもそれらによって発現されることもなく、ある容易に検出可能な特性、例えば、酵素活性によってその発現が明らかにされるポリペプチドをコードする、遺伝子である。レポーター遺伝子の発現は、DNAがレシピエント細胞中に導入された後の適切な時点でアッセイされる。適切なレポーター遺伝子には、ルシフェラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌型アルカリホスファターゼまたは緑色蛍光タンパク質遺伝子をコードする遺伝子が含まれ得る(例えば、Ui−Telら、2000年 FEBS Letters 479巻:79〜82頁)。適切な発現系は、周知であり、公知の技術を使用して調製され得るまたは商業的に取得され得る。一般に、レポーター遺伝子の最も高いレベルの発現を示す最小の5’隣接領域を有する構築物が、プロモーターとして同定される。かかるプロモーター領域は、レポーター遺伝子に連結され得、プロモーター駆動性の転写をモジュレートする能力について薬剤を評価するために使用され得る。 Reporter genes are used to identify potentially transfected cells and to assess the functionality of regulatory sequences. In general, a reporter gene encodes a polypeptide that is not present in or expressed by the recipient organism or tissue and whose expression is revealed by certain easily detectable properties, such as enzymatic activity. It is a gene. Reporter gene expression is assayed at an appropriate time after the DNA has been introduced into the recipient cell. Suitable reporter genes may include genes encoding luciferase, β-galactosidase, chloramphenicol acetyltransferase, secreted alkaline phosphatase or green fluorescent protein gene (eg, Ui-Tel et al., 2000 FEBS Letters 479 Volume: 79-82). Suitable expression systems are well known and can be prepared using known techniques or obtained commercially. In general, the construct with the smallest 5 'flanking region showing the highest level of expression of the reporter gene is identified as the promoter. Such promoter regions can be linked to a reporter gene and used to evaluate agents for their ability to modulate promoter-driven transcription.
遺伝子を細胞中に導入し発現させる方法は、当該分野で公知である。発現ベクターに関して、ベクターは、当該分野の任意の方法によって、宿主細胞、例えば、哺乳動物、細菌、酵母または昆虫の細胞中に容易に導入され得る。例えば、発現ベクターは、物理的、化学的または生物学的手段によって、宿主細胞中に移入され得る。 Methods for introducing and expressing genes in cells are known in the art. With respect to expression vectors, the vectors can be readily introduced into host cells, eg, mammalian, bacterial, yeast or insect cells, by any method in the art. For example, an expression vector can be transferred into a host cell by physical, chemical or biological means.
ポリヌクレオチドを宿主細胞中に導入するための物理的方法には、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、微粒子銃、マイクロインジェクション、エレクトロポレーションなどが含まれる。ベクターおよび/または外因性核酸を含む細胞を産生するための方法は、当該分野で周知である。例えば、Sambrookら(2001年、Molecular Cloning: A Laboratory Manual、Cold Spring Harbor Laboratory、New York)を参照のこと。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドの宿主細胞中への導入は、リン酸カルシウムトランスフェクションによって実施される。 Physical methods for introducing the polynucleotide into the host cell include calcium phosphate precipitation, lipofection, particle bombardment, microinjection, electroporation and the like. Methods for producing cells containing vectors and / or exogenous nucleic acids are well known in the art. See, for example, Sambrook et al. (2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York). In some embodiments, introduction of the polynucleotide into the host cell is performed by calcium phosphate transfection.
目的のポリヌクレオチドを宿主細胞中に導入するための生物学的方法には、DNAベクターおよびRNAベクターの使用が含まれる。ウイルスベクター、特にレトロウイルスベクターは、哺乳動物、例えば、ヒト細胞中に遺伝子を挿入する、最も広く使用される方法になっている。他のウイルスベクターは、レンチウイルス、ポックスウイルス、単純ヘルペスウイルス1、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルスなどに由来し得る。例えば、米国特許第5,350,674号および同第5,585,362号を参照のこと。
Biological methods for introducing a polynucleotide of interest into a host cell include the use of DNA and RNA vectors. Viral vectors, particularly retroviral vectors, have become the most widely used method for inserting genes into mammalian, eg, human cells. Other viral vectors can be derived from lentivirus, poxvirus,
ポリヌクレオチドを宿主細胞中に導入するための化学的手段には、コロイド分散系、例えば、高分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、ならびに水中油エマルジョン、ミセル、混合ミセルおよびリポソームを含む脂質ベースの系が含まれる。in vitroおよびin vivoで送達ビヒクルとして使用するための例示的なコロイド系は、リポソーム(例えば、人工膜小胞)である。 Chemical means for introducing polynucleotides into host cells include colloidal dispersions, such as polymer complexes, nanocapsules, microspheres, beads, and lipids including oil-in-water emulsions, micelles, mixed micelles and liposomes. A base system is included. An exemplary colloidal system for use as a delivery vehicle in vitro and in vivo is a liposome (eg, an artificial membrane vesicle).
非ウイルス送達系が利用される場合、例示的な送達ビヒクルは、リポソームである。脂質製剤の使用が、核酸の宿主細胞中への導入(in vitro、ex vivoまたはin vivo)のために企図される。別の態様では、核酸は、脂質と会合し得る。脂質と会合した核酸は、リポソームの水性内部中に封入され得、リポソームの脂質二重層内に散在され得、リポソームおよびオリゴヌクレオチドの両方と結合する連結分子を介してリポソームに結合され得、リポソーム中に捕捉され得、リポソームと複合体形成され得、脂質を含む溶液中に分散され得、脂質と混合され得、脂質と組み合わされ得、脂質中に懸濁物として含まれ得、ミセルと共に含まれもしくはミセルと複合体形成され得、または脂質と他の方法で会合し得る。脂質、脂質/DNAまたは脂質/発現ベクター会合組成物は、溶液中の任意の特定の構造に限定されない。例えば、これら組成物は、二重層構造中に、ミセルとして、または「崩壊した」構造で、存在し得る。これらはまた、溶液中に単に散在して、サイズまたは形状が均一ではない凝集体をおそらくは形成し得る。脂質は、天然に存在する脂質または合成脂質であり得る脂肪性物質である。例えば、脂質には、細胞質中に天然に存在する脂肪滴、ならびに長鎖脂肪族炭化水素ならびにその誘導体、例えば、脂肪酸、アルコール、アミン、アミノアルコールおよびアルデヒドを含む化合物のクラスが含まれる。 When a non-viral delivery system is utilized, an exemplary delivery vehicle is a liposome. The use of lipid formulations is contemplated for the introduction of nucleic acids into host cells (in vitro, ex vivo or in vivo). In another aspect, the nucleic acid can be associated with a lipid. Nucleic acids associated with lipids can be encapsulated in the aqueous interior of the liposome, can be interspersed within the lipid bilayer of the liposome, can be bound to the liposome via a linking molecule that binds both the liposome and the oligonucleotide, Can be trapped in, complexed with liposomes, dispersed in a solution containing lipids, mixed with lipids, combined with lipids, included as a suspension in lipids, included with micelles Alternatively, it can be complexed with micelles or otherwise associated with lipids. The lipid, lipid / DNA or lipid / expression vector association composition is not limited to any particular structure in solution. For example, these compositions may exist in a bilayer structure, as micelles, or in a “collapsed” structure. They can also simply be scattered throughout the solution, possibly forming aggregates that are not uniform in size or shape. Lipids are fatty substances that can be naturally occurring lipids or synthetic lipids. For example, lipids include lipid droplets that occur naturally in the cytoplasm, as well as a class of compounds that include long chain aliphatic hydrocarbons and derivatives thereof such as fatty acids, alcohols, amines, amino alcohols and aldehydes.
外因性核酸を宿主細胞中に導入するためまたは細胞を本発明の阻害剤に他の方法で曝露させるために使用される方法に関わらず、宿主細胞中の組換えDNA配列の存在を確認するために、種々のアッセイが実施され得る。かかるアッセイには、例えば、サザンおよびノーザンブロッティング、RT−PCRおよびPCRなどの、当業者に周知の「分子生物学的」アッセイ;例えば、免疫学的手段(ELISAおよびウエスタンブロット)によるまたは本発明の範囲内に入る薬剤を同定するための本明細書に記載されるアッセイによる、特定のペプチドの存在または非存在を検出するなどの「生化学的」アッセイが含まれる。 Regardless of the method used to introduce exogenous nucleic acid into the host cell or otherwise expose the cell to the inhibitors of the present invention, to confirm the presence of the recombinant DNA sequence in the host cell. In addition, various assays can be performed. Such assays include, for example, “molecular biological” assays well known to those skilled in the art, such as Southern and Northern blotting, RT-PCR and PCR; for example by immunological means (ELISA and Western blot) or of the invention Included are “biochemical” assays such as detecting the presence or absence of a particular peptide, according to the assays described herein for identifying agents that fall within the scope.
MHCクラスIタンパク質
MHCクラスIタンパク質は、主要組織適合複合体(MHC)分子の2つの主要なクラスのうちの1つであり(他方は、MHCクラスIIである)、身体のほぼ全ての有核細胞に見出される。それらの機能は、細胞内由来のタンパク質の断片をT細胞にディスプレイすることである;健康な細胞は無視されるが、外来タンパク質を含む細胞は、免疫系によって攻撃される。MHCクラスIタンパク質は、細胞質ゾルタンパク質に由来するペプチドを提示するので、MHCクラスI提示の経路は、細胞質ゾル経路または内因性経路と呼ばれる場合が多い。クラスI MHC分子は、プロテアソームによる細胞質ゾルタンパク質の分解から主に生成されるペプチドを結合する。次いで、MHC I:ペプチド複合体は、細胞の原形質膜中に挿入される。ペプチドは、クラスI MHC分子の細胞外部分に結合される。したがって、クラスI MHCの機能は、細胞内タンパク質を細胞傷害性T細胞(CTL)にディスプレイすることである。しかし、クラスI MHCは、交差提示として公知のプロセスにおいて、外因性タンパク質から生成されたペプチドもまた提示し得る。
MHC class I proteins MHC class I proteins are one of the two major classes of major histocompatibility complex (MHC) molecules (the other is MHC class II) and are almost all nucleated in the body. Found in cells. Their function is to display intracellularly derived protein fragments on T cells; healthy cells are ignored, but cells containing foreign proteins are attacked by the immune system. Since MHC class I proteins present peptides derived from cytosolic proteins, the pathway of MHC class I presentation is often referred to as the cytosolic pathway or the intrinsic pathway. Class I MHC molecules bind peptides generated primarily from the degradation of cytosolic proteins by the proteasome. The MHC I: peptide complex is then inserted into the plasma membrane of the cell. The peptide is bound to the extracellular portion of class I MHC molecules. Thus, the function of class I MHC is to display intracellular proteins on cytotoxic T cells (CTL). However, Class I MHC can also present peptides generated from exogenous proteins in a process known as cross-presentation.
MHCクラスIタンパク質は、2つのポリペプチド鎖、αおよびβ2−ミクログロブリン(β2M)からなる。これら2つの鎖は、b2mとα3ドメインとの相互作用を介して非共有結合的に連結される。α鎖だけが多型性であり、HLA遺伝子によってコードされるが、b2mサブユニットは多型性ではなく、β−2ミクログロブリン遺伝子によってコードされる。α3ドメインは、原形質膜に及んでおり、T細胞のCD8共受容体と相互作用する。α3−CD8相互作用は、MHC I分子を適所に保持し、細胞傷害性T細胞の表面上のT細胞受容体(TCR)は、そのα1−α2ヘテロダイマーリガンドを結合し、カップリングされたペプチドを抗原性についてチェックする。α1およびα2ドメインは、ペプチドが結合するための溝を形成するように折り畳まる。MHCクラスIタンパク質は、8〜10アミノ酸長であるペプチドを結合する。 MHC class I proteins consist of two polypeptide chains, α and β2-microglobulin (β2M). These two chains are non-covalently linked through the interaction of b2m and the α3 domain. Only the α chain is polymorphic and is encoded by the HLA gene, whereas the b2m subunit is not polymorphic and is encoded by the β-2 microglobulin gene. The α3 domain extends to the plasma membrane and interacts with the CD8 co-receptor of T cells. The α3-CD8 interaction holds the MHC I molecule in place and the T cell receptor (TCR) on the surface of the cytotoxic T cell binds its α1-α2 heterodimeric ligand and is coupled to the peptide Are checked for antigenicity. The α1 and α2 domains fold to form a groove for the peptide to bind. MHC class I proteins bind peptides that are 8-10 amino acids long.
ヒト白血球抗原(HLA)遺伝子は、MHC遺伝子のヒトバージョンである。ヒトにおける3つの主要なMHCクラスIタンパク質は、HLA−A、HLA−BおよびHLA−Cであり、3つの非主要なMHCクラスIタンパク質は、HLA−E、HLA−FおよびHLA−Gである。HLA−Aは、ヒトにおける遺伝子の中で、最も速く進化するコード配列にランク付けされている。2013年12月現在、1740の活性タンパク質および117のヌルタンパク質をコードする、2432の公知のHLA−A対立遺伝子が存在した。HLA−A遺伝子は、第6染色体の短腕上に位置し、HLA−Aのより大きいα鎖構成要素(constituent)をコードする。HLA−A α鎖のバリエーションは、HLA機能にとって重要である。このバリエーションは、集団中の遺伝子多様性を促進する。各HLAは、ある特定の構造のペプチドに対して異なる親和性を有するので、より多様なHLAは、細胞表面上に「提示」されるより多様な抗原を意味し、集団のサブセットが任意の所与の外来侵入者に対して抵抗性である可能性(likelihood)を高める。これは、単一の病原体がヒト集団全体を一掃する能力を有する可能性を減少させる。各個体は、彼らの親の各々に由来する、最大で2つの型のHLA−Aを発現し得る。一部の個体は、両親から同じHLA−Aを受け継ぎ、それらの個々のHLA多様性を減少させる;しかし、個体の大部分は、HLA−Aの2つの異なるコピーを受け取る。この同じパターンは、全てのHLA群に当てはまる。言い換えると、ヒトは、2432の公知のHLA−A対立遺伝子のうち1つまたは2つのいずれかのみを発現し得る。
The human leukocyte antigen (HLA) gene is a human version of the MHC gene. The three major MHC class I proteins in humans are HLA-A, HLA-B and HLA-C, and the three major MHC class I proteins are HLA-E, HLA-F and HLA-G . HLA-A is ranked the fastest evolving coding sequence among genes in humans. As of December 2013, there were 2432 known HLA-A alleles encoding 1740 active proteins and 117 null proteins. The HLA-A gene is located on the short arm of
全ての対立遺伝子は、少なくとも4桁の分類、例えば、HLA−A*02:12を受ける。Aは、対立遺伝子が属するHLA遺伝子を示す。多くのHLA−A対立遺伝子が存在し、その結果、血清型による分類は、カテゴリー化を単純化する。桁の次の対は、この割り当てを示す。例えば、HLA−A*02:02、HLA−A*02:04およびHLA−A*02:324は全て、A2血清型(*02接頭辞によって指定される)のメンバーである。この群は、HLA適合性を担う主要な因子である。これの後の全ての数字は、血清型決定によっては決定できず、遺伝子配列決定を介して指定される。桁の第2のセットは、どのHLAタンパク質が産生されるかを示す。これらは、発見の順に割り当てられ、2013年12月現在、456の異なるHLA−A02タンパク質が公知である(HLA−A*02:01〜HLA−A*02:456の名称が割り当てられている)。最も短い可能なHLA名は、これらの詳細の両方を含む。それを超えた各拡張は、タンパク質を変化させてもさせなくてもよいヌクレオチド変化を示す。
All alleles receive a classification of at least 4 digits, for example HLA-
一部の実施形態では、抗E7MC抗体部分は、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体と特異的に結合し、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A、HLA−B、HLA−C、HLA−E、HLA−FまたはHLA−Gである。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A、HLA−BまたはHLA−Cである。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−Aである。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−Bである。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−Cである。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A01、HLA−A02、HLA−A03、HLA−A09、HLA−A10、HLA−A11、HLA−A19、HLA−A23、HLA−A24、HLA−A25、HLA−A26、HLA−A28、HLA−A29、HLA−A30、HLA−A31、HLA−A32、HLA−A33、HLA−A34、HLA−A36、HLA−A43、HLA−A66、HLA−A68、HLA−A69、HLA−A74またはHLA−A80である。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A02である。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A*02:01〜555のいずれか1つ、例えば、HLA−A*02:01、HLA−A*02:02、HLA−A*02:03、HLA−A*02:04、HLA−A*02:05、HLA−A*02:06、HLA−A*02:07、HLA−A*02:08、HLA−A*02:09、HLA−A*02:10、HLA−A*02:11、HLA−A*02:12、HLA−A*02:13、HLA−A*02:14、HLA−A*02:15、HLA−A*02:16、HLA−A*02:17、HLA−A*02:18、HLA−A*02:19、HLA−A*02:20、HLA−A*02:21、HLA−A*02:22またはHLA−A*02:24である。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A*02:01である。HLA−A*02:01は、全ての白色人種の39〜46%において発現され、したがって、本発明における使用のためのMHCクラスIタンパク質の適切な選択を示す。
In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion specifically binds to a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein, wherein the MHC class I protein is HLA-A, HLA-B, HLA-C , HLA-E, HLA-F or HLA-G. In some embodiments, the MHC class I protein is HLA-A, HLA-B or HLA-C. In some embodiments, the MHC class I protein is HLA-A. In some embodiments, the MHC class I protein is HLA-B. In some embodiments, the MHC class I protein is HLA-C. In some embodiments, the MHC class I protein is HLA-A01, HLA-A02, HLA-A03, HLA-A09, HLA-A10, HLA-A11, HLA-A19, HLA-A23, HLA-A24, HLA -A25, HLA-A26, HLA-A28, HLA-A29, HLA-A30, HLA-A31, HLA-A32, HLA-A33, HLA-A34, HLA-A36, HLA-A43, HLA-A66, HLA-A68 HLA-A69, HLA-A74 or HLA-A80. In some embodiments, the MHC class I protein is HLA-A02. In some embodiments, the MHC class I protein is any one of HLA-A * 02: 01-555, eg, HLA-A * 02: 01, HLA-A * 02: 02, HLA-A *. 02:03, HLA-A * 02: 04, HLA-A * 02: 05, HLA-A * 02: 06, HLA-A * 02: 07, HLA-A * 02: 08, HLA-A * 02: 09, HLA-A * 02: 10, HLA-A * 02: 11, HLA-A * 02: 12, HLA-A * 02: 13, HLA-A * 02: 14, HLA-A * 02: 15, HLA-A * 02: 16, HLA-A * 02: 17, HLA-A * 02: 18, HLA-A * 02: 19, HLA-A * 02: 20, HLA-A * 02: 21, HLA-
抗E7MC抗体部分を生成することにおける使用に適切なHPV16−E7ペプチドは、例えば、当業者に公知のコンピューター予測モデルを使用して、HLA−A*02:01結合モチーフならびにプロテアソームおよび免疫−プロテアソーム(immune−proteasome)のための切断部位の存在に基づいて、決定され得る。MHC結合部位を予測するために、かかるモデルには、IEDB(Vitaら、The immune epitope database (IEDB) 3.0. Nucleic Acids Res. 2014年10月9日. pii: gku938)、ProPred1(SinghおよびRaghava、ProPred: prediction of HLA−DR binding sites. BIOINFORMATICS 17巻(12号):1236〜1237頁、2001年中に、より詳細に記載されている)およびSYFPEITHI(Schulerら SYFPEITHI, Database for Searching and T−Cell Epitope Prediction.、Immunoinformatics Methods in Molecular Biology、409巻(1号):75〜93頁、2007年を参照のこと)が含まれるがこれらに限定されない。
HPV16-E7 peptides suitable for use in generating anti-E7MC antibody moieties are, for example, using HLA-
適切なペプチドが一旦同定されると、ペプチド合成が、当業者に周知のプロトコールに従って実施され得る。それらの比較的小さいサイズに起因して、本発明のペプチドは、従来のペプチド合成技術に従って、溶液中または固体支持体上で直接合成され得る。種々の自動合成機が市販されており、公知のプロトコールに従って使用され得る。溶液相中でのペプチドの合成は、合成ペプチドの大規模産生のための十分に確立された手順になっており、したがって、本発明のペプチドを調製する適切な代替法である(例えば、John Morrow StewartおよびMartinら Application of Almez−mediated Amidation Reactions to Solution Phase Peptide Synthesis、Tetrahedron Letters 39巻、1517〜1520頁、1998年によるSolid Phase Peptide Synthesisを参照のこと)。
Once a suitable peptide is identified, peptide synthesis can be performed according to protocols well known to those skilled in the art. Due to their relatively small size, the peptides of the invention can be synthesized directly in solution or on a solid support according to conventional peptide synthesis techniques. Various automatic synthesizers are commercially available and can be used according to known protocols. Synthesis of peptides in solution phase has become a well-established procedure for large-scale production of synthetic peptides and is therefore a suitable alternative for preparing the peptides of the present invention (eg, John Morrow). See Stewart and Martin et al. Application of Almez-mediated Aidation Reactions to Solution Phase Peptide Synthesis,
候補HPV16−E7ペプチドの結合活性は、抗原提示溝中のペプチドによって安定化される場合にHLA−Aの発現を増加させる抗原プロセシング欠損T2細胞株を使用して試験され得る。T2細胞を、細胞表面上のHLA−A発現を安定化するのに十分な時間にわたって候補ペプチドでパルスし、当該分野で公知の任意の方法を使用して、例えば、HLA−Aに特異的な蛍光標識されたモノクローナル抗体(例えば、BB7.2)による免疫染色とその後の蛍光活性化細胞分取(FACS)分析とによって、測定し得る。 The binding activity of candidate HPV 16-E7 peptides can be tested using an antigen processing-deficient T2 cell line that increases HLA-A expression when stabilized by a peptide in the antigen presenting groove. T2 cells are pulsed with the candidate peptide for a time sufficient to stabilize HLA-A expression on the cell surface and used, for example, specific for HLA-A, using any method known in the art. It can be measured by immunostaining with a fluorescently labeled monoclonal antibody (eg, BB7.2) followed by fluorescence activated cell sorting (FACS) analysis.
抗E7MC抗体および抗E7MC抗体部分の調製
一部の実施形態では、抗E7MC抗体または抗E7MC抗体部分は、モノクローナル抗体である。モノクローナル抗体は、例えば、KohlerおよびMilstein、Nature、256巻:495頁(1975年)ならびにSergeevaら、Blood、117巻(16号):4262〜4272頁によって記載されるものなどのハイブリドーマ法を使用して、本明細書および以下の実施例に記載されるファージディスプレイ法を使用して、または組換えDNA法(例えば、米国特許第4,816,567号を参照のこと)を使用して、調製され得る。
Preparation of anti-E7MC antibody and anti-E7MC antibody portion In some embodiments, the anti-E7MC antibody or anti-E7MC antibody portion is a monoclonal antibody. Monoclonal antibodies use hybridoma methods such as those described, for example, by Kohler and Milstein, Nature, 256: 495 (1975) and Sergeeva et al., Blood, 117 (16): 4262-4272. Prepared using the phage display methods described herein and in the examples below, or using recombinant DNA methods (see, eg, US Pat. No. 4,816,567). Can be done.
ハイブリドーマ法では、ハムスター、マウスまたは他の適切な宿主動物が、典型的には、免疫剤に特異的に結合する抗体を産生するまたは産生することが可能なリンパ球を惹起するために、免疫剤で免疫される。あるいは、リンパ球は、in vitroで免疫され得る。免疫剤には、目的のタンパク質のポリペプチドもしくは融合タンパク質、または少なくとも2つの分子を含む複合体、例えば、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体が含まれ得る。一般に、ヒト起源の細胞が所望される場合、末梢血リンパ球(「PBL」)が使用され、または非ヒト哺乳動物供給源が所望される場合、脾臓細胞もしくはリンパ節細胞が使用される。次いで、リンパ球は、ハイブリドーマ細胞を形成するために、ポリエチレングリコールなどの適切な融合剤を使用して、不死化細胞株と融合される。例えば、Goding、Monoclonal Antibodies: Principles and Practice(New York: Academic Press、1986年)、59〜103頁を参照のこと。不死化細胞株は通常、形質転換された哺乳動物細胞、特に、げっ歯類、ウシおよびヒト起源の骨髄腫細胞である。通常、ラットまたはマウス骨髄腫細胞株が使用される。ハイブリドーマ細胞は、未融合の不死化細胞の成長または生存を阻害する1または複数の物質を好ましくは含む、適切な培養培地中で培養され得る。例えば、親細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ(HGPRTまたはHPRT)を欠く場合、ハイブリドーマ用の培養培地は、典型的には、HGPRT欠損細胞の成長を防止する、ヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジンを含む(「HAT培地」)。 In hybridoma methods, a hamster, mouse or other suitable host animal typically produces an immunizing agent to raise lymphocytes that produce or are capable of producing antibodies that specifically bind to the immunizing agent. Immunized with. Alternatively, lymphocytes can be immunized in vitro. The immunizing agent can include a polypeptide or fusion protein of the protein of interest, or a complex comprising at least two molecules, such as a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein. In general, peripheral blood lymphocytes ("PBL") are used when cells of human origin are desired, or spleen cells or lymph node cells are used when a non-human mammalian source is desired. The lymphocytes are then fused with an immortalized cell line using a suitable fusing agent such as polyethylene glycol to form hybridoma cells. See, for example, Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice (New York: Academic Press, 1986), pages 59-103. Immortal cell lines are usually transformed mammalian cells, particularly myeloma cells of rodent, bovine and human origin. Usually, rat or mouse myeloma cell lines are used. The hybridoma cells can be cultured in a suitable culture medium that preferably contains one or more substances that inhibit the growth or survival of unfused, immortalized cells. For example, if the parent cell lacks the enzyme hypoxanthine guanine phosphoribosyltransferase (HGPRT or HPRT), the culture medium for hybridomas typically contains hypoxanthine, aminopterin and thymidine, which prevents the growth of HGPRT-deficient cells. Contains (“HAT medium”).
一部の実施形態では、不死化細胞株は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定な高レベル発現を支持し、HAT培地などの培地に対して感受性である。一部の実施形態では、不死化細胞株は、例えば、Salk Institute Cell Distribution Center、San Diego、CaliforniaおよびAmerican Type Culture Collection、Manassas、Virginiaから取得され得る、マウス骨髄腫株である。ヒト骨髄腫およびマウス−ヒトヘテロ骨髄腫(heteromyeloma)細胞株もまた、ヒトモノクローナル抗体の産生について記載されている。Kozbor、J. Immunol.、133巻:3001頁(1984年);Brodeurら Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications(Marcel Dekker, Inc.: New York、1987年)51〜63頁。 In some embodiments, the immortalized cell line is efficiently fused, supports stable high level expression of the antibody by the selected antibody-producing cells, and is sensitive to a medium such as HAT medium. In some embodiments, the immortal cell line can be obtained from, for example, a mouse bone marrow, which is a mouse bone marrow, which can be obtained from the Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, California, and American Type Culture Collection, Manassas, Virginia. Human myeloma and mouse-human heteromyeloma cell lines have also been described for the production of human monoclonal antibodies. Kozbor, J. et al. Immunol. 133: 3001 (1984); Brodeur et al. Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications (Marcel Dekker, Inc .: New York, 1987) 51-63.
次いで、ハイブリドーマ細胞が培養される培養培地は、ポリペプチドに対するモノクローナル抗体の存在についてアッセイされ得る。ハイブリドーマ細胞によって産生されたモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降によって、またはin vitro結合アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ(RIA)もしくは酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)によって決定され得る。かかる技術およびアッセイは、当該分野で公知である。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、MunsonおよびPollard、Anal. Biochem.、107巻:220頁(1980年)のスキャッチャード分析によって決定され得る。 The culture medium in which the hybridoma cells are cultured can then be assayed for the presence of monoclonal antibodies against the polypeptide. The binding specificity of monoclonal antibodies produced by hybridoma cells can be determined by immunoprecipitation or by in vitro binding assays, such as radioimmunoassay (RIA) or enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Such techniques and assays are known in the art. The binding affinity of monoclonal antibodies is described, for example, in Munson and Pollard, Anal. Biochem. 107: 220 (1980).
所望のハイブリドーマ細胞が同定された後、それらのクローンは、限界希釈手順によってサブクローニングされ得、標準的な方法によって成長され得る。Goding、上記。この目的のために適切な培養培地には、例えば、ダルベッコ改変イーグル培地およびRPMI−1640培地が含まれる。あるいは、ハイブリドーマ細胞は、哺乳動物において腹水としてin vivoで成長され得る。 After the desired hybridoma cells are identified, the clones can be subcloned by limiting dilution procedures and grown by standard methods. Godding, above. Suitable culture media for this purpose include, for example, Dulbecco's Modified Eagle's Medium and RPMI-1640 medium. Alternatively, the hybridoma cells can be grown in vivo as ascites in a mammal.
サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、従来の免疫グロブリン精製手順、例えば、プロテインA−Sepharose、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析またはアフィニティクロマトグラフィーなどによって、培養培地または腹水から単離または精製され得る。 Monoclonal antibodies secreted by subclones are isolated or purified from culture medium or ascites by conventional immunoglobulin purification procedures such as protein A-Sepharose, hydroxylapatite chromatography, gel electrophoresis, dialysis or affinity chromatography. Can be done.
抗E7MC抗体または抗体部分は、所望の活性(単数または複数)を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによっても同定され得る。例えば、ファージディスプレイライブラリーを生成し、所望の結合特徴を有する抗体についてかかるライブラリーをスクリーニングするための種々の方法が、当該分野で公知である。かかる方法は、例えば、Hoogenboomら、Methods in Molecular Biology 178巻:1〜37頁(O’Brienら編、Human Press、Totowa、N.J.、2001年)において概説され、例えば、McCaffertyら、Nature 348巻:552〜554頁;Clacksonら、Nature 352巻:624〜628頁(1991年);Marksら、J. Mol. Biol. 222巻:581〜597頁(1992年);MarksおよびBradbury、Methods in Molecular Biology 248巻:161〜175頁(Lo編、Human Press、Totowa、N.J.、2003年);Sidhuら、J. Mol. Biol. 338巻(2号):299〜310頁(2004年);Leeら、J. Mol. Biol. 340巻(5号):1073〜1093頁(2004年);Fellouse、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101巻(34号):12467〜12472頁(2004年);ならびにLeeら、J. Immunol. Methods 284巻(1〜2号):119〜132頁(2004年)においてさらに記載されている。 Anti-E7MC antibodies or antibody portions can also be identified by screening combinatorial libraries for antibodies having the desired activity (s). For example, various methods are known in the art for generating phage display libraries and screening such libraries for antibodies having the desired binding characteristics. Such methods are reviewed, for example, in Hoogenboom et al., Methods in Molecular Biology 178: 1-37 (O'Brien et al., Human Press, Totowa, NJ, 2001), for example, McCafferty et al., Nature. 348: 552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, Methods in Molecular Biology 248: 161-175 (Lo, Human Press, Towota, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Biol. Mol. Biol. 338 (2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Biol. Mol. Biol. 340 (5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101 (34): 12467-12472 (2004); and Lee et al., J. Biol. Immunol. Methods 284 (1-2): 119-132 (2004).
ある特定のファージディスプレイ法では、Winterら、Ann. Rev. Immunol.、12巻:433〜455頁(1994年)に記載されるように、VH遺伝子およびVL遺伝子のレパートリーが、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)によって別々にクローニングされ、ファージライブラリー中にランダムに組み換えられ、これは次いで、抗原結合ファージについてスクリーニングされ得る。ファージは、典型的には、単鎖Fv(scFv)断片またはFab断片のいずれかとして、抗体断片をディスプレイする。免疫された供給源由来のライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要なしに、免疫原に対する高親和性抗体を提供する。あるいは、Griffithsら、EMBO J、12巻:725〜734頁(1993年)によって記載されるように、いずれの免疫もなしに、広範な非自己抗原およびまた自己抗原に対する抗体の単一の供給源を提供するために、ナイーブレパートリーが、(例えば、ヒトから)クローニングされ得る。最後に、ナイーブライブラリーは、HoogenboomおよびWinter、J. Mol. Biol.、227巻:381〜388頁(1992年)に記載されるように、高度に可変性のCDR3領域をコードし、in vitroで再構成を達成するために、再構成されていないV遺伝子セグメントを幹細胞からクローニングし、ランダム配列を含むPCRプライマーを使用することによって、合成によっても作製され得る。ヒト抗体ファージライブラリーを記載している特許公報には、例えば、米国特許第5,750,373号、ならびに米国特許公開第2005/0079574号、同第2005/0119455号、同第2005/0266000号、同第2007/0117126号、同第2007/0160598号、同第2007/0237764号、同第2007/0292936号および同第2009/0002360号が含まれる。 In one particular phage display method, Winter et al., Ann. Rev. Immunol. 12: 433-455 (1994), repertoires of VH and VL genes are cloned separately by polymerase chain reaction (PCR) and randomly recombined into a phage library, This can then be screened for antigen-binding phage. Phages typically display antibody fragments as either single chain Fv (scFv) fragments or Fab fragments. Libraries from immunized sources provide high affinity antibodies to the immunogen without the need to construct hybridomas. Alternatively, as described by Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993), a single source of a broad range of non-self antigens and also antibodies to self antigens, without any immunity The naïve repertoire can be cloned (eg, from a human). Finally, the naive library is described in Hoogenboom and Winter, J.A. Mol. Biol. 227: 381-388 (1992), which encodes a highly variable CDR3 region and uses an unrearranged V gene segment to achieve rearrangement in vitro. It can also be made synthetically by cloning from stem cells and using PCR primers containing random sequences. Patent publications describing human antibody phage libraries include, for example, US Pat. No. 5,750,373 and US Patent Publication Nos. 2005/0079574, 2005/0119455, and 2005/0266000. No. 2007/0117126, No. 2007/0160598, No. 2007/0237764, No. 2007/0292936 and No. 2009/0002360.
抗体またはその抗原結合断片は、ファージディスプレイを使用してHPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的な抗体についてライブラリーをスクリーニングして調製され得る。ライブラリーは、少なくとも1×109(例えば、少なくとも約1×109、2.5×109、5×109、7.5×109、1×1010、2.5×1010、5×1010、7.5×1010または1×1011のいずれか)の独自のヒト抗体断片の多様性を有するヒトscFvファージディスプレイライブラリーであり得る。一部の実施形態では、ライブラリーは、全てのヒト重鎖および軽鎖サブファミリーを包含する、健康なドナー由来のヒトPMBCおよび脾臓から抽出されたDNAから構築されたナイーブヒトライブラリーである。一部の実施形態では、ライブラリーは、種々の疾患を有する患者、例えば、自己免疫疾患を有する患者、がん患者および感染性疾患を有する患者から単離されたPBMCから抽出されたDNAから構築されたナイーブヒトライブラリーである。一部の実施形態では、ライブラリーは、半合成ヒトライブラリーであり、ここで、重鎖CDR3は、完全にランダム化され、全てのアミノ酸(システインを除く)は、任意の所与の位置において等しく存在する可能性がある(例えば、Hoet, R.M.ら、Nat. Biotechnol. 23巻(3号):344〜348頁、2005年を参照のこと)。一部の実施形態では、半合成ヒトライブラリーの重鎖CDR3は、約5〜約24(例えば、約5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23または24のいずれか)アミノ酸の長さを有する。一部の実施形態では、ライブラリーは、非ヒトファージディスプレイライブラリーである。 Antibodies or antigen-binding fragments thereof can be prepared by screening the library for antibodies specific for complexes comprising HPV16-E7 peptides and MHC class I proteins using phage display. The library is at least 1 × 10 9 (eg, at least about 1 × 10 9 , 2.5 × 10 9 , 5 × 10 9 , 7.5 × 10 9 , 1 × 10 10 , 2.5 × 10 10 , It can be a human scFv phage display library with a diversity of unique human antibody fragments (either 5 × 10 10 , 7.5 × 10 10 or 1 × 10 11 ). In some embodiments, the library is a naive human library constructed from DNA extracted from human PMBC and spleen from healthy donors, including all human heavy and light chain subfamilies. In some embodiments, the library is constructed from DNA extracted from PBMCs isolated from patients with various diseases, such as patients with autoimmune diseases, cancer patients and patients with infectious diseases. A naive human library. In some embodiments, the library is a semi-synthetic human library, wherein the heavy chain CDR3 is fully randomized and all amino acids (except cysteine) are in any given position. (See, for example, Hoet, RM, et al., Nat. Biotechnol. 23 (3): 344-348, 2005). In some embodiments, the heavy chain CDR3 of the semi-synthetic human library is about 5 to about 24 (eg, about 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 , 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 or 24) having an amino acid length. In some embodiments, the library is a non-human phage display library.
高い親和性でE7MCに結合するファージクローンは、固体支持体(例えば、溶液パニングについてはビーズまたは細胞パニングについては哺乳動物細胞など)に結合するE7MCへのファージの反復性の結合と、その後の非結合ファージの除去および特異的に結合したファージの溶出とによって、選択され得る。溶液パニングの一例では、E7MCは、固体支持体への固定のためにビオチン化され得る。ビオチン化されたE7MCは、ファージライブラリーおよび固体支持体、例えば、ストレプトアビジン−結合体化Dynabeads M−280と混合され、次いで、E7MC−ファージ−ビーズ複合体が単離される。次いで、結合したファージクローンが溶出され、発現および精製のために、適切な宿主細胞、例えば、E.coli XL1−Blueを感染させるために使用される。細胞パニングの一例では、E7MCのHPV16−E7ペプチドが負荷されたT2細胞(TAP欠損、HLA−A*02:01+リンパ芽球細胞株)が、ファージライブラリーと混合され、その後、細胞が収集され、結合したクローンが溶出され、発現および精製のために、適切な宿主細胞を感染させるために使用される。パニングは、E7MCに特異的に結合するファージクローンについて富化するために、溶液パニング、細胞パニングまたはそれら両方の組合せのいずれかを用いて、複数(例えば、約2、3、4、5、6またはそれ超のいずれか)ラウンド実施され得る。富化されたファージクローンは、例えばELISAおよびFACSを含む当該分野で公知の任意の方法によって、E7MCへの特異的結合について試験され得る。
Phage clones that bind E7MC with high affinity can be obtained by repetitive binding of phage to E7MC that binds to a solid support (eg, beads for solution panning or mammalian cells for cell panning) followed by non-binding. Selection can be by removal of bound phage and elution of specifically bound phage. In one example of solution panning, E7MC can be biotinylated for immobilization to a solid support. Biotinylated E7MC is mixed with a phage library and a solid support, such as streptavidin-conjugated Dynabeads M-280, and then the E7MC-phage-bead complex is isolated. The bound phage clones are then eluted and are expressed in a suitable host cell, eg, E. coli, for expression and purification. used to infect E. coli XL1-Blue. In one example of cell panning, T2 cells (TAP-deficient, HLA-
モノクローナル抗体は、米国特許第4,816,567号に記載されるものなどの組換えDNA法によっても作製され得る。本発明のモノクローナル抗体をコードするDNAは、従来の手順を使用して(例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することが可能なオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって)、容易に単離および配列決定され得る。上記ハイブリドーマ細胞または本発明のE7MC特異的ファージクローンは、かかるDNAの供給源として機能し得る。一旦単離されると、DNAは、発現ベクター中に配置され得、これは次いで、組換え宿主細胞におけるモノクローナル抗体の合成を得るために、宿主細胞、例えば、別段免疫グロブリンタンパク質を産生しない、サルCOS細胞、チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞または骨髄腫細胞中にトランスフェクトされる。DNAは、例えば、相同な非ヒト配列の代わりに、ヒト重鎖および軽鎖定常ドメインならびに/もしくはフレームワーク領域のコード配列を用いることによって(米国特許第4,816,567号;Morrisonら、上記)、または免疫グロブリンコード配列に非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全てもしくは一部を共有結合で繋げることによっても、改変され得る。かかる非免疫グロブリンポリペプチドは、本発明の抗体の定常ドメインの代わりに使用でき、またはキメラ二価抗体を作り出すために、本発明の抗体の1つの抗原結合部位の可変ドメインの代わりに使用できる。 Monoclonal antibodies can also be made by recombinant DNA methods such as those described in US Pat. No. 4,816,567. The DNA encoding the monoclonal antibody of the present invention may be prepared using conventional procedures (eg, using an oligonucleotide probe capable of specifically binding to the gene encoding the heavy and light chains of the mouse antibody). Can be easily isolated and sequenced. The hybridoma cells or the E7MC-specific phage clones of the present invention can function as a source of such DNA. Once isolated, the DNA can be placed in an expression vector, which then produces a monkey COS that does not produce a host cell, eg, another immunoglobulin protein, in order to obtain synthesis of monoclonal antibodies in the recombinant host cell. Transfected into cells, Chinese hamster ovary (CHO) cells or myeloma cells. DNA may be obtained, for example, by using human heavy and light chain constant domains and / or framework region coding sequences in place of homologous non-human sequences (US Pat. No. 4,816,567; Morrison et al., Supra). Or by covalently linking all or part of the coding sequence of the non-immunoglobulin polypeptide to the immunoglobulin coding sequence. Such non-immunoglobulin polypeptides can be used in place of the constant domains of the antibodies of the invention, or can be used in place of the variable domains of one antigen binding site of the antibodies of the invention to create chimeric bivalent antibodies.
抗体は、一価抗体であり得る。一価抗体を調製するための方法は、当該分野で公知である。例えば、1つの方法には、免疫グロブリン軽鎖および改変重鎖の組換え発現が関与する。重鎖は、重鎖架橋を防止するために、一般にFc領域中の任意の点において、トランケートされる。あるいは、架橋を防止するために、関連のシステイン残基が、別のアミノ酸残基で置換され、または欠失される。 The antibody can be a monovalent antibody. Methods for preparing monovalent antibodies are known in the art. For example, one method involves recombinant expression of immunoglobulin light chains and modified heavy chains. The heavy chain is truncated at any point in the Fc region, generally to prevent heavy chain crosslinking. Alternatively, the relevant cysteine residues are substituted with another amino acid residue or deleted to prevent crosslinking.
in vitroの方法もまた、一価抗体を調製するために適切である。その断片、特にFab断片を産生するための抗体の消化は、当該分野で公知の任意の方法を使用して達成され得る。 In vitro methods are also suitable for preparing monovalent antibodies. Digestion of the antibody to produce its fragments, particularly Fab fragments, can be accomplished using any method known in the art.
所望の結合特異性を有する抗体可変ドメイン(抗体−抗原結合部位)は、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合され得る。融合物は、好ましくは、ヒンジ領域、CH2領域およびCH3領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとの融合物である。一部の実施形態では、軽鎖結合に必要な部位を含む第1の重鎖定常領域(CH1)が、融合物の少なくとも1つ中に存在する。免疫グロブリン重鎖融合物、および所望の場合には免疫グロブリン軽鎖をコードするDNAは、別々の発現ベクター中に挿入され、適切な宿主生物中に共トランスフェクトされる。二重特異的抗体を生成することのさらなる詳細については、例えば、Sureshら、Methods in Enzymology、121巻:210頁(1986年)を参照のこと。 Antibody variable domains with the desired binding specificities (antibody-antigen combining sites) can be fused to immunoglobulin constant domain sequences. The fusion is preferably a fusion with an immunoglobulin heavy chain constant domain comprising at least part of the hinge, CH2 and CH3 regions. In some embodiments, a first heavy chain constant region (CH1) containing the site necessary for light chain binding is present in at least one of the fusions. The immunoglobulin heavy chain fusion and, if desired, the DNA encoding the immunoglobulin light chain are inserted into separate expression vectors and cotransfected into a suitable host organism. For further details of generating bispecific antibodies see, for example, Suresh et al., Methods in Enzymology, 121: 210 (1986).
ヒト抗体およびヒト化抗体
抗E7MC抗体または抗体部分は、ヒト化抗体またはヒト抗体であり得る。非ヒト(例えば、マウス)抗体のヒト化形態は、典型的には非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含む、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはそれらの断片(例えば、Fv、Fab、Fab’、F(ab’)2、scFvまたは抗体の他の抗原結合サブ配列)である。ヒト化抗体は、レシピエントのCDR由来の残基が、所望の特異性、親和性および能力を有する非ヒト種(ドナー抗体)、例えば、マウス、ラットまたはウサギのCDR由来の残基によって置き換えられた、ヒト免疫グロブリン(レシピエント抗体)を含む。一部の例では、ヒト免疫グロブリンのFvフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。ヒト化抗体は、レシピエント抗体中またはインポートされたCDRもしくはフレームワーク配列中のいずれにも見出されない残基もまた含み得る。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも1つ、典型的には2つの可変ドメインの実質的に全てを含み得、ここで、CDR領域の全てまたは実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンのものと対応し、FR領域の全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分(Fc)、典型的にはヒト免疫グロブリンのものを含む。例えば、Jonesら、Nature、321巻:522〜525頁(1986年);Riechmannら、Nature、332巻:323〜329頁(1988年);Presta、Curr. Op. Struct. Biol.、2巻:593〜596頁(1992年)を参照のこと。
Human antibodies and humanized antibodies The anti-E7MC antibody or antibody portion can be a humanized antibody or a human antibody. Humanized forms of non-human (eg, murine) antibodies typically comprise chimeric immunoglobulins, immunoglobulin chains, or fragments thereof (eg, Fv, Fab, Fab) that contain minimal sequence derived from non-human immunoglobulin. ', F (ab') 2 , scFv or other antigen-binding subsequence of the antibody). Humanized antibodies are those in which residues from the recipient CDR are replaced by residues from the CDRs of a non-human species (donor antibody), eg, mouse, rat or rabbit, having the desired specificity, affinity and ability. Human immunoglobulin (recipient antibody). In some examples, Fv framework residues of the human immunoglobulin are replaced by corresponding non-human residues. Humanized antibodies may also comprise residues that are found neither in the recipient antibody nor in the imported CDR or framework sequences. In general, a humanized antibody can comprise at least one, typically substantially all of the two variable domains, wherein all or substantially all of the CDR regions correspond to those of a non-human immunoglobulin. However, all or substantially all of the FR region is of human immunoglobulin consensus sequence. In some embodiments, a humanized antibody comprises at least a portion of an immunoglobulin constant region (Fc), typically that of a human immunoglobulin. See, for example, Jones et al., Nature, 321: 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332: 323-329 (1988); Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2: 593-596 (1992).
一般に、ヒト化抗体は、非ヒトである供給源からその中に導入された1または複数のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、典型的には「インポート」可変ドメインから取られた「インポート」残基と呼ばれる場合が多い。一部の実施形態によれば、ヒト化は、げっ歯類のCDRまたはCDR配列を、ヒト抗体の対応する配列の代わりに用いることによる、Winterおよび共同研究者(Jonesら、Nature、321巻:522〜525頁(1986年);Riechmannら、Nature、332巻:323〜327頁(1988年);Verhoeyenら、Science、239巻:1534〜1536頁(1988年))の方法に従って本質的に実施され得る。したがって、かかる「ヒト化」抗体は、インタクトなヒト可変ドメインに実質的に満たないものが、非ヒト種由来の対応する配列によって置換された抗体である(米国特許第4,816,567号)。実際には、ヒト化抗体は、典型的には、いくつかのCDR残基およびおそらくはいくつかのFR残基が、げっ歯類抗体中の類似の部位由来の残基によって置換されたヒト抗体である。 Generally, a humanized antibody has one or more amino acid residues introduced into it from a source that is non-human. These non-human amino acid residues are often referred to as “import” residues, typically taken from an “import” variable domain. According to some embodiments, humanization is performed by Winter and co-workers (Jones et al., Nature, 321: by using rodent CDRs or CDR sequences instead of the corresponding sequences of human antibodies 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332: 323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science, 239: 1534-1536 (1988)). Can be done. Accordingly, such “humanized” antibodies are those in which substantially less than an intact human variable domain has been substituted by the corresponding sequence from a non-human species (US Pat. No. 4,816,567). . In practice, humanized antibodies are typically human antibodies in which some CDR residues and possibly some FR residues are replaced by residues from similar sites in rodent antibodies. is there.
ヒト化の代替法として、ヒト抗体が生成され得る。例えば、免疫の際に、内因性免疫グロブリン産生の非存在下でヒト抗体の完全レパートリーを産生することが可能なトランスジェニック動物(例えば、マウス)を産生することが現在可能である。例えば、キメラおよび生殖系列変異体マウスにおける抗体重鎖連結領域(JH)遺伝子のホモ接合性欠失が、内因性抗体産生の完全な阻害を生じることが記載されている。かかる生殖系列変異体マウス中へのヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの移入は、抗原チャレンジの際にヒト抗体の産生を生じる。例えば、Jakobovitsら、PNAS USA、90巻:2551頁(1993年);Jakobovitsら、Nature、362巻:255〜258頁(1993年);Bruggemannら、Year in Immunol.、7巻:33頁(1993年);米国特許第5,545,806号、第5,569,825号、第5,591,669号;第5,545,807号;およびWO97/17852を参照のこと。あるいは、ヒト抗体は、内因性免疫グロブリン遺伝子が部分的または完全に不活性化されたトランスジェニック動物、例えば、マウス中にヒト免疫グロブリン遺伝子座を導入することによって作製され得る。チャレンジの際に、遺伝子再構成、アセンブリおよび抗体レパートリーを含むあらゆる点において、ヒトにおいて見られたものと密接に類似したヒト抗体産生が観察される。このアプローチは、例えば、米国特許第5,545,807号;同第5,545,806号;同第5,569,825号;同第5,625,126号;同第5,633,425号;および同第5,661,016号、ならびにMarksら、Bio/Technology、10巻:779〜783頁(1992年);Lonbergら、Nature、368巻:856〜859頁(1994年);Morrison、Nature、368巻:812〜813頁(1994年);Fishwildら、Nature Biotechnology、14巻:845〜851頁(1996年);Neuberger、Nature Biotechnology、14巻:826頁(1996年);LonbergおよびHuszar、Intern. Rev. Immunol.、13巻:65〜93頁(1995年)中に記載されている。 As an alternative to humanization, human antibodies can be generated. For example, upon immunization, it is now possible to produce transgenic animals (eg, mice) that are capable of producing a complete repertoire of human antibodies in the absence of endogenous immunoglobulin production. For example, it has been described that homozygous deletion of the antibody heavy chain joining region (JH) gene in chimeric and germ-line mutant mice results in complete inhibition of endogenous antibody production. Transfer of the human germline immunoglobulin gene array into such germline mutant mice results in the production of human antibodies upon antigen challenge. See, for example, Jakobovits et al., PNAS USA, 90: 2551 (1993); Jakobovits et al., Nature, 362: 255-258 (1993); Bruggemann et al., Year in Immunol. 7:33 (1993); U.S. Pat. Nos. 5,545,806, 5,569,825, 5,591,669; 5,545,807; and WO 97/17852. See Alternatively, human antibodies can be made by introducing human immunoglobulin loci into transgenic animals, eg, mice, in which the endogenous immunoglobulin genes are partially or completely inactivated. Upon challenge, human antibody production is observed that closely resembles that seen in humans in all respects, including gene rearrangement, assembly and antibody repertoire. This approach is described, for example, in U.S. Patent Nos. 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425. No .; and 5,661,016 and Marks et al., Bio / Technology, 10: 779-783 (1992); Lonberg et al., Nature, 368: 856-859 (1994); Morrison Nature, 368: 812-813 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnology, 14: 845-851 (1996); Neuberger, Nature Biotechnology, 14: 826 (1996); Lonberg and Huszar, In tern. Rev. Immunol. 13: 65-93 (1995).
ヒト抗体はまた、in vitroで活性化されたB細胞(米国特許第5,567,610号および同第5,229,275号を参照のこと)によって、またはファージディスプレイライブラリーを含む当該分野で公知の種々の技術を使用することによって、生成され得る。HoogenboomおよびWinter、J. Mol. Biol.、227巻:381頁(1991年);Marksら、J. Mol. Biol.、222巻:581頁(1991年)。ColeらおよびBoernerらの技術は、ヒトモノクローナル抗体の調製のためにも利用可能である。Coleら、Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy、Alan R. Liss、77頁(1985年)およびBoernerら、J. Immunol.、147巻(1号):86〜95頁(1991年)。 Human antibodies can also be obtained by in vitro activated B cells (see US Pat. Nos. 5,567,610 and 5,229,275) or in the art including phage display libraries. It can be generated by using various known techniques. Hoogenboom and Winter, J.A. Mol. Biol. 227: 381 (1991); Marks et al., J. Biol. Mol. Biol. 222: 581 (1991). The techniques of Cole et al. And Boerner et al. Are also available for the preparation of human monoclonal antibodies. Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R., et al. Liss, 77 (1985) and Boerner et al. Immunol. 147 (1): 86-95 (1991).
多特異的抗体
一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、多特異的抗体である。多特異的(例えば、二重特異的)抗体を作製するための適切な方法は、当該分野で周知である。例えば、二重特異的抗体の産生は、2つの免疫グロブリン重鎖/軽鎖対の共発現に基づき得、このとき、これら2つの対は各々、異なる特異性を有し、会合によりヘテロダイマー抗体を生じる(例えば、MilsteinおよびCuello、Nature、305巻:537〜539頁(1983年);WO93/08829、ならびにTrauneckerら、EMBO J. 10巻:3655頁(1991年)を参照のこと)。免疫グロブリン重鎖および軽鎖のランダムな仕分けに起因して、これらのハイブリドーマ(クアドローマ)は、10種の異なる抗体分子の潜在的な混合物を産生するが、そのうち1つだけが正しい二重特異的構造を有する。正しい分子の精製は、アフィニティクロマトグラフィーステップによって通常達成される。類似の手順は、WO93/08829およびTrauneckerら、EMBO、10巻:3655〜3659頁(1991年)中に開示されている。あるいは、重鎖および軽鎖の組み合わせは、種限定的な対形成を利用することによって方向づけされ得(can be directed)(例えば、Lindhoferら、J. Immunol.、155巻:219〜225頁(1995年)を参照のこと)、重鎖の対形成は、CH3ドメインの「ノブ−イントゥ−ホール」操作の使用によって方向づけされ得る(例えば、米国特許第5,731,168号;Ridgwayら、Protein Eng.、9巻(7号):617〜621頁(1996年)を参照のこと)。多特異的抗体は、抗体Fcヘテロダイマー分子を作製するために静電ステアリング効果(electrostatic steering effect)を操作することによっても作製され得る(例えば、WO2009/089004A1を参照のこと)。さらに別の方法では、安定な二重特異的抗体は、制御されたFab腕交換によって生成され得、このとき、別個の抗原特異性およびCH3ドメイン中の一致した点変異を有する2つの親抗体が、還元条件において混合され、高度に純粋な二重特異的抗体を形成するための、分離、再アセンブリおよび再酸化が可能となる。Labriginら、Proc. Natl. Acad. Sci.、110巻(13号):5145〜5150頁(2013年)。重鎖/軽鎖対の混合物を含むかかる抗体は、本明細書で「ヘテロマルチマー抗体」とも呼ばれる。
Multispecific antibodies In some embodiments, the anti-E7MC construct is a multispecific antibody. Suitable methods for making multispecific (eg, bispecific) antibodies are well known in the art. For example, the production of bispecific antibodies can be based on the co-expression of two immunoglobulin heavy / light chain pairs, where each of the two pairs has a different specificity and due to the association is a heterodimeric antibody (See, eg, Milstein and Cuello, Nature, 305: 537-539 (1983); WO 93/088829, and Traunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991)). Due to the random sorting of immunoglobulin heavy and light chains, these hybridomas (quadromas) produce a potential mixture of 10 different antibody molecules, only one of which is the correct bispecific It has a structure. Purification of the correct molecule is usually achieved by an affinity chromatography step. Similar procedures are disclosed in WO 93/08829 and Traunecker et al., EMBO, 10: 3655-3659 (1991). Alternatively, heavy and light chain combinations can be directed by utilizing species-restricted pairing (eg, Lindhofer et al., J. Immunol. 155: 219-225 (1995). ), Heavy chain pairing can be directed through the use of “knob-in-hole” manipulation of the CH3 domain (eg, US Pat. No. 5,731,168; Ridgway et al., Protein Eng). 9 (7): 617-621 (1996)). Multispecific antibodies can also be made by manipulating the electrostatic steering effect to create antibody Fc heterodimeric molecules (see, eg, WO2009 / 089004A1). In yet another method, a stable bispecific antibody can be generated by controlled Fab arm exchange, in which two parent antibodies with distinct antigen specificities and matched point mutations in the CH3 domain are generated. , Allowing for separation, reassembly and reoxidation to form highly pure bispecific antibodies, mixed in reducing conditions. Labrigin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 110 (13): 5145-5150 (2013). Such antibodies comprising a mixture of heavy / light chain pairs are also referred to herein as “heteromultimeric antibodies”.
異なる特異性を有する抗体またはその抗原結合断片はまた、多特異的ヘテロコンジュゲート抗体を生成するために化学的に架橋され得る。例えば、異なる抗原に対する特異性を各々が有する2つのF(ab’)2分子が、化学的に連結され得る。Pullarkatら、Trends Biotechnol.、48巻:9〜21頁(1999年)。かかる抗体は、例えば、望ましくない細胞に免疫系細胞を標的化するため(米国特許第4,676,980号)およびHIV感染の処置のために提案されてきた。WO91/00360;WO92/200373;EP03089。これらの抗体は、架橋剤が関与するものを含む、合成タンパク質化学における公知の方法を使用して、in vitroで調製され得ることが企図される。例えば、免疫毒素は、ジスルフィド交換反応を使用して、またはチオエーテル結合を形成することによって、構築され得る。この目的に適切な試薬の例には、イミノチオレートおよびメチル−4−メルカプトブチルイミデート(methyl−4−mercaptobutyrimidate)ならびに例えば、米国特許第4,676,980号に開示されるものが含まれる。 Antibodies with different specificities or antigen-binding fragments thereof can also be chemically cross-linked to produce multispecific heteroconjugate antibodies. For example, two F (ab ') 2 molecules, each with specificity for a different antigen, can be chemically linked. Pulllarkat et al., Trends Biotechnol. 48: 9-21 (1999). Such antibodies have been proposed, for example, to target immune system cells to unwanted cells (US Pat. No. 4,676,980) and for the treatment of HIV infection. WO91 / 00360; WO92 / 003733; EP03089. It is contemplated that these antibodies can be prepared in vitro using known methods in synthetic protein chemistry, including those involving cross-linking agents. For example, immunotoxins can be constructed using a disulfide exchange reaction or by forming a thioether bond. Examples of suitable reagents for this purpose include iminothiolate and methyl-4-mercaptobutyrimidate and those disclosed, for example, in US Pat. No. 4,676,980. .
一部の実施形態では、多特異的抗体は、組換えDNA技術を使用して調製され得る。例えば、二重特異的抗体は、2つのscFvを融合させることによって、例えば、ペプチドリンカーを介して2つのscFvを融合させて、タンデムscFvを生じさせることによって、操作され得る。タンデムscFvの一例は、二重特異的T細胞エンゲージャーである。二重特異的T細胞エンゲージャーは、抗CD3 scFvを、標的細胞の表面抗原、例えば腫瘍関連抗原(TAA)に特異的なscFvに連結させて、標的細胞へのT細胞の再指向を生じさせることによって、作製される。Mackら、Proc. Natl. Acad. Sci.、92巻:7021〜7025頁(1995年);Brischweinら、Mol. Immunol.、43巻(8号):1129〜1143頁(2006年)。2つの可変ドメイン間のペプチドリンカーの長さを短縮させることによって、これらは自己アセンブルを妨げられ得、第2のポリペプチド上のドメインと対形成するように強制され得、ダイアボディ(Db)と呼ばれるコンパクトな二重特異的抗体を生じる。Holligerら、Proc. Natl. Acad. Sci.、90巻:6444〜6448頁(1993年)。Dbの2つのポリペプチドは各々、同じ鎖上の2つのドメイン間の対形成を可能にするには短すぎるリンカーによってVLに結合されたVHを含む。したがって、1つのポリペプチドのVHドメインおよびVLドメインは、別のポリペプチドの相補的なVLドメインおよびVHドメインと対形成するように強制され、それによって、2つの抗原結合部位(antigen−binding site)を形成する。この形式の改変では、2つのポリペプチドは、別のペプチドリンカーによって連結されて、単鎖ダイアボディ(scDb)を生じる。Db形式のさらに別の改変では、二重親和性再標的化(DART)二重特異的抗体は、C末端システイン残基の前に、所望のヘテロダイマー構造のアセンブリを駆動するドメインを任意選択で含め、各ポリペプチドのC末端におけるシステイン残基間にジスルフィド結合を導入することによって生成され得る。Veriら、Arthritis Rheum.、62巻(7号):1933〜1943頁(2010年)。2つのモノクローナル抗体の標的結合可変ドメインが、四価の二重特異的抗体を得るために天然に存在するリンカーを介して組み合わされた二重可変ドメイン免疫グロブリン(DVD−Ig(商標))もまた、当該分野で公知である。GuおよびGhayur、Methods Enzymol.、502巻:25〜41頁(2012年)。さらに別の形式では、ドックアンドロック(DNL)二重特異的抗体は、ヒトAキナーゼアンカータンパク質(AKAP)のアンカリングドメインに由来するペプチド(AD2)との、ヒトcAMP依存的タンパク質キナーゼ(PKA)の調節サブユニットに由来するペプチド(DDD2)のダイマー化を利用することによって調製される。Rossiら、Proc. Natl. Acad. Sci.、103巻:6841〜6846頁(2006年)。 In some embodiments, multispecific antibodies can be prepared using recombinant DNA technology. For example, bispecific antibodies can be engineered by fusing two scFvs, for example by fusing two scFvs via a peptide linker to give a tandem scFv. An example of a tandem scFv is a bispecific T cell engager. A bispecific T cell engager links anti-CD3 scFv to a target cell surface antigen, eg, a scFv specific for a tumor associated antigen (TAA), resulting in T cell redirection to the target cell Is produced. Mack et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 92: 7021-7025 (1995); Brischwein et al., Mol. Immunol. 43 (8): 1129-1143 (2006). By shortening the length of the peptide linker between the two variable domains, they can be prevented from self-assembling, forced to pair with a domain on the second polypeptide, diabody (Db) and This results in a compact bispecific antibody called. Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 90: 6444-6448 (1993). Each of the two polypeptides of Db contains VH linked to VL by a linker that is too short to allow pairing between two domains on the same chain. Thus, the VH and VL domains of one polypeptide are forced to pair with the complementary VL and VH domains of another polypeptide, thereby providing two antigen-binding sites. Form. In this form of modification, two polypeptides are joined by another peptide linker to yield a single chain diabody (scDb). In yet another modification of the Db format, the dual affinity retargeting (DART) bispecific antibody optionally precedes the C-terminal cysteine residue with an optional domain that drives assembly of the desired heterodimeric structure. And can be generated by introducing a disulfide bond between the cysteine residues at the C-terminus of each polypeptide. Veri et al., Arthritis Rheum. 62 (7): 1933-1943 (2010). A dual variable domain immunoglobulin (DVD-Ig ™) in which the target binding variable domains of two monoclonal antibodies are combined via a naturally occurring linker to obtain a tetravalent bispecific antibody is also Are known in the art. Gu and Ghayur, Methods Enzymol. 502: 25-41 (2012). In yet another format, the dock-and-lock (DNL) bispecific antibody is human cAMP-dependent protein kinase (PKA) with a peptide (AD2) derived from the anchoring domain of human A kinase anchor protein (AKAP). It is prepared by utilizing dimerization of a peptide derived from the regulatory subunit of (DDD2). Rossi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 103: 6841-6846 (2006).
組換え細胞培養物から二重特異的抗体断片を直接作製および単離するための種々の技術もまた記載されている。例えば、二重特異的抗体は、ロイシンジッパーを使用して産生されてきた。Kostelnyら、J. Immunol.、148巻(5号):1547〜1553頁(1992年)。この方法は、抗体ホモダイマーの産生のためにも利用され得る。 Various techniques for making and isolating bispecific antibody fragments directly from recombinant cell culture have also been described. For example, bispecific antibodies have been produced using leucine zippers. Koselny et al. Immunol. 148 (5): 1547-1553 (1992). This method can also be utilized for the production of antibody homodimers.
抗E7MCバリアント
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体のアミノ酸配列バリアントが企図される。例えば、抗体の結合親和性および/または他の生物学的特性を改善することが望まれ得る。抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列中に適切な改変を導入することによって、またはペプチド合成によって調製され得る。かかる改変には、例えば、抗体のアミノ酸配列からの欠失、および/またはかかるアミノ酸配列中への挿入、および/またはかかるアミノ酸配列内の残基の置換が含まれる。最終構築物が所望の特徴、例えば、抗原結合性を有することを条件として、欠失、挿入および置換の任意の組合せが、最終構築物に到達するために作製され得る。
Anti-E7MC Variants In some embodiments, amino acid sequence variants of the antibodies provided herein are contemplated. For example, it may be desirable to improve the binding affinity and / or other biological properties of the antibody. Amino acid sequence variants of the antibody can be prepared by introducing appropriate modifications in the nucleotide sequence encoding the antibody, or by peptide synthesis. Such modifications include, for example, deletion from the amino acid sequence of the antibody and / or insertion into such amino acid sequence and / or substitution of residues within such amino acid sequence. Any combination of deletions, insertions and substitutions can be made to arrive at the final construct, provided that the final construct has the desired characteristics, eg, antigen binding.
一部の実施形態では、1または複数のアミノ酸置換を有する抗体バリアントが提供される。置換変異誘発のための目的の部位には、HVRおよびFRが含まれる。アミノ酸置換は、目的の抗体中に導入され得、産物は、所望の活性、例えば、保持/改善された抗原結合、減少した免疫原性または改善されたADCCもしくはCDCについて、スクリーニングされ得る。 In some embodiments, antibody variants having one or more amino acid substitutions are provided. Target sites for substitution mutagenesis include HVR and FR. Amino acid substitutions can be introduced into the antibody of interest and the product can be screened for the desired activity, eg, retained / improved antigen binding, decreased immunogenicity or improved ADCC or CDC.
保存的置換は以下の表5に示される。
アミノ酸は、共通する側鎖特性に従って異なるクラスへとグループ分けされ得る:
a.疎水性:ノルロイシン、Met、Ala、Val、Leu、Ile;
b.中性親水性:Cys、Ser、Thr、Asn、Gln;
c.酸性:Asp、Glu;
d.塩基性:His、Lys、Arg;
e.鎖配向に影響を与える残基:Gly、Pro;
f.芳香族:Trp、Tyr、Phe。
Amino acids can be grouped into different classes according to common side chain properties:
a. Hydrophobic: norleucine, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
b. Neutral hydrophilicity: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
c. Acidity: Asp, Glu;
d. Basic: His, Lys, Arg;
e. Residues that affect chain orientation: Gly, Pro;
f. Aromatic: Trp, Tyr, Phe.
非保存的置換は、これらのクラスのうち1つのメンバーを別のクラスに交換することを伴う。 Non-conservative substitutions involve exchanging one member of these classes for another class.
例示的な置換バリアントは、例えば、ファージディスプレイベースの親和性成熟技術を使用して簡便に生成され得る親和性成熟抗体部分である。簡潔に述べると、1または複数のCDR残基が変異され、バリアント抗体部分がファージ上にディスプレイされ、特定の生物学的活性(例えば、結合親和性)についてスクリーニングされる。変更(例えば、置換)は、例えば、抗体部分の親和性を改善するために、HVR中に作製され得る。かかる変更は、HVR「ホットスポット」、即ち、体細胞成熟プロセスの間に高頻度で変異を受けるコドンによってコードされる残基(例えば、Chowdhury、Methods Mol. Biol. 207巻:179〜196頁(2008年)を参照のこと)および/または特異性決定残基(SDR)中に作製され得、得られたバリアントVHまたはVLは、結合親和性について試験される。二次ライブラリーから構築および再選択することによる親和性成熟は、例えば、Hoogenboomら、Methods in Molecular Biology 178巻:1〜37頁(O’Brienら編、Human Press、Totowa、NJ(2001年))に記載されている。 Exemplary substitution variants are affinity matured antibody moieties that can be conveniently generated using, for example, phage display-based affinity maturation techniques. Briefly, one or more CDR residues are mutated and variant antibody portions are displayed on phage and screened for specific biological activities (eg, binding affinity). Changes (eg, substitutions) can be made in HVRs, for example, to improve the affinity of the antibody portion. Such changes include HVR “hot spots”, ie, residues encoded by codons that are frequently mutated during the somatic maturation process (see, for example, Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207: 179-196). 2008)) and / or in specificity-determining residues (SDR) and the resulting variant VH or VL is tested for binding affinity. Affinity maturation by construction and reselection from secondary libraries is described, for example, by Hoogenboom et al., Methods in Molecular Biology 178: 1-37 (Edited by O'Brien et al., Human Press, Totowa, NJ (2001)). )It is described in.
親和性成熟の一部の実施形態では、多様性が、種々の方法(例えば、エラープローンPCR、鎖シャッフリングまたはオリゴヌクレオチド指向性変異誘発(oligonucleotide−directed mutagenesis))のいずれかによる成熟のために選択された可変遺伝子中に導入される。次いで、二次ライブラリーが作り出される。次いで、ライブラリーは、所望の親和性を有する任意の抗体部分のバリアントを同定するためにスクリーニングされる。多様性を導入するための別の方法には、いくつかのHVR残基(例えば、一度に4〜6残基)がランダム化されるHVR指向性アプローチが関与する。抗原結合に関与するHVR残基は、例えば、アラニンスキャニング変異誘発またはモデル化を使用して、特異的に同定され得る。特に、CDR−H3およびCDR−L3が標的化される場合が多い。 In some embodiments of affinity maturation, diversity is selected for maturation by any of a variety of methods (eg, error-prone PCR, strand shuffling, or oligonucleotide-directed mutagenesis). Introduced into the generated variable gene. A secondary library is then created. The library is then screened to identify variants of any antibody portion that have the desired affinity. Another method for introducing diversity involves an HVR-oriented approach in which several HVR residues (eg, 4-6 residues at a time) are randomized. HVR residues involved in antigen binding can be specifically identified using, for example, alanine scanning mutagenesis or modeling. In particular, CDR-H3 and CDR-L3 are often targeted.
一部の実施形態では、置換、挿入または欠失が、かかる変更が抗原に結合する抗体部分の能力を実質的に低減させない限り、1または複数のHVR内に存在し得る。例えば、結合親和性を実質的に低減させない保存的変更(例えば、本明細書で提供される保存的置換)が、HVR中に作製され得る。かかる変更は、HVR「ホットスポット」またはSDRの外側にあり得る。上で提供されたバリアントVH配列およびVL配列の一部の実施形態では、各HVRのいずれかが変更されていない、または1、2もしくは3つ以下のアミノ酸置換を含む。 In some embodiments, substitutions, insertions or deletions may be present in one or more HVRs as long as such changes do not substantially reduce the ability of the antibody moiety to bind to the antigen. For example, conservative changes (eg, conservative substitutions provided herein) that do not substantially reduce binding affinity can be made in HVRs. Such changes may be outside the HVR “hot spot” or SDR. In some embodiments of the variant VH and VL sequences provided above, any of each HVR is unaltered or includes 1, 2, or 3 amino acid substitutions.
変異誘発のために標的化され得る抗体部分の残基または領域の同定のために有用な方法は、CunninghamおよびWells(1989年)Science、244巻:1081〜1085頁によって記載されるように、「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法では、標的残基(例えば、荷電残基、例えば、arg、asp、his、lysおよびglu)の1つの残基または群が同定され、抗体部分と抗原との相互作用が影響を受けるかどうかを決定するために、中性または負に荷電したアミノ酸(例えば、アラニンまたはポリアラニン)によって置き換えられる。さらなる置換が、初期の置換に対する機能的感受性を明らかに示すアミノ酸位置において導入され得る。あるいは、またはさらに、抗原−抗体部分複合体の結晶構造が、抗体部分と抗原との間の接触点を同定するために決定され得る。かかる接触残基および隣接残基は、置換のための候補として標的化または排除され得る。バリアントは、それらが所望の特性を含むかどうかを決定するためにスクリーニングされ得る。 Useful methods for the identification of residues or regions of antibody moieties that can be targeted for mutagenesis are described by Cunningham and Wells (1989) Science 244: 1081-1085, as “ Called “Alanine Scanning Mutagenesis”. In this method, one residue or group of target residues (eg, charged residues, eg, arg, asp, his, lys and glu) is identified and whether the interaction between the antibody moiety and the antigen is affected. To determine whether it is replaced by a neutral or negatively charged amino acid (eg alanine or polyalanine). Additional substitutions can be introduced at amino acid positions that clearly show functional sensitivity to the initial substitution. Alternatively or additionally, the crystal structure of the antigen-antibody subcomplex can be determined to identify contact points between the antibody moiety and the antigen. Such contact residues and neighboring residues can be targeted or excluded as candidates for substitution. Variants can be screened to determine if they contain the desired property.
アミノ酸配列挿入には、1残基から100またはそれ超の残基を含むポリペプチドまでの長さの範囲のアミノ末端および/またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例には、N末端メチオニル残基を有する抗体部分が含まれる。抗体部分の他の挿入バリアントには、酵素(例えば、ADEPTのため)または抗体部分の血清半減期を増加させるポリペプチドへの、抗体部分のNまたはC末端への融合が含まれる。 Amino acid sequence insertions include amino and / or carboxyl terminal fusions ranging in length from 1 residue to a polypeptide containing 100 or more residues, and intra-sequence insertion of single or multiple amino acid residues Is included. Examples of terminal insertions include antibody moieties having an N-terminal methionyl residue. Other insertional variants of the antibody portion include fusions to the N- or C-terminus of the antibody portion to an enzyme (eg, for ADEPT) or to a polypeptide that increases the serum half-life of the antibody portion.
Fc領域バリアント
一部の実施形態では、1または複数のアミノ酸改変が、本明細書で提供される全長抗E7MC抗体のFc領域中に導入され得、それによってFc領域バリアントを生成する。一部の実施形態では、Fc領域バリアントは、Fc受容体(FcR)への結合と関連する場合が多い、増強された抗体依存性細胞性細胞傷害(ADCC)エフェクター機能を有する。一部の実施形態では、Fc領域バリアントは、減少したADCCエフェクター機能を有する。エフェクター機能を変更し得る、Fc配列に対する変化または変異の多くの例が存在する。例えば、WO00/42072およびShieldsら J Biol. Chem. 9巻(2号):6591〜6604頁(2001年)は、FcRへの改善されたまたは弱められた結合を有する抗体バリアントを記載している。これらの刊行物の内容は、参照によって本明細書に具体的に組み込まれる。
Fc region variants In some embodiments, one or more amino acid modifications can be introduced into the Fc region of a full-length anti-E7MC antibody provided herein, thereby generating an Fc region variant. In some embodiments, the Fc region variant has enhanced antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC) effector function that is often associated with binding to an Fc receptor (FcR). In some embodiments, the Fc region variant has reduced ADCC effector function. There are many examples of changes or mutations to the Fc sequence that can alter effector function. See, for example, WO 00/42072 and Shields et al. J Biol. Chem. 9 (2): 6591-6604 (2001) describes antibody variants with improved or weakened binding to FcR. The contents of these publications are specifically incorporated herein by reference.
抗体依存性細胞媒介性細胞傷害(ADCC)は、腫瘍細胞に対する治療用抗体の作用機構である。ADCCは、免疫系のエフェクター細胞が、その膜表面抗原が特異的抗体(例えば、抗E7MC抗体)によって結合された標的細胞(例えば、がん細胞)を能動的に溶解する、細胞媒介性免疫防御である。典型的なADCCには、抗体によるNK細胞の活性化が関与する。NK細胞は、Fc受容体であるCD16を発現する。この受容体は、標的細胞の表面に結合した抗体のFcの一部分を認識しそれに結合する。NK細胞の表面上の最も一般的なFc受容体は、CD16またはFcγRIIIと呼ばれる。抗体のFc領域へのFc受容体の結合は、NK細胞活性化、細胞溶解性顆粒の放出および引き続く標的細胞のアポトーシスを生じさせる。腫瘍細胞殺滅へのADCCの寄与は、高親和性FcRをトランスフェクトされたNK−92細胞を使用する特異的試験を用いて測定され得る。結果は、FcRを発現しない野生型NK−92細胞と比較される。 Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) is the mechanism of action of therapeutic antibodies against tumor cells. ADCC is a cell-mediated immune defense in which effector cells of the immune system actively lyse target cells (eg, cancer cells) whose membrane surface antigens are bound by specific antibodies (eg, anti-E7MC antibodies). It is. Typical ADCC involves the activation of NK cells by antibodies. NK cells express CD16, an Fc receptor. This receptor recognizes and binds to a portion of the antibody Fc bound to the surface of the target cell. The most common Fc receptor on the surface of NK cells is called CD16 or FcγRIII. Binding of the Fc receptor to the Fc region of the antibody results in NK cell activation, release of cytolytic granules and subsequent apoptosis of the target cells. The ADCC contribution to tumor cell killing can be measured using a specific test using NK-92 cells transfected with high affinity FcR. Results are compared to wild type NK-92 cells that do not express FcR.
一部の実施形態では、本発明は、一部ではあるが全てではないエフェクター機能を保有するFC領域を含む抗E7MC構築物バリアントを企図し、これにより、かかるバリアントは、抗E7MC構築物のin vivo半減期が重要であるが、ある特定のエフェクター機能(例えば、CDCおよびADCC)が不要または有害である適用のための、望ましい候補になっている。in vitroおよび/またはin vivo細胞傷害性アッセイが、CDCおよび/またはADCC活性の低減/枯渇を確認するために実施され得る。例えば、Fc受容体(FcR)結合アッセイは、抗体がFcγR結合を欠く(したがって、ADCC活性を欠いている可能性がある)がFcRn結合能は保持していることを確実にするために実施され得る。ADCCを媒介するための主要な細胞であるNK細胞は、FcγRIIIのみを発現するが、単球は、FcγRI、FcγRIIおよびFcγRIIIを発現する。造血細胞上のFcR発現は、RavetchおよびKinet、Annu. Rev. Immunol. 9巻:457〜492頁(1991年)の第464頁の表3にまとめられている。目的の分子のADCC活性を評価するためのin vitroアッセイの非限定的な例は、米国特許第5,500,362号(例えば、Hellstrom, I.ら Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 83巻:7059〜7063頁(1986年)を参照のこと)およびHellstrom, Iら、Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 82巻:1499〜1502頁(1985年);米国特許第5,821,337号(Bruggemann, M.ら、J. Exp. Med. 166巻:1351〜1361頁(1987年)を参照のこと)に記載されている。あるいは、非放射活性アッセイ方法が使用され得る(例えば、フローサイトメトリーのためのACTI(商標)非放射活性細胞傷害性アッセイ(CellTechnology,Inc.Mountain View、Calif.);およびCytoTox 96(商標)非放射活性細胞傷害性アッセイ(Promega、Madison、Wis.)を参照のこと)。かかるアッセイのための有用なエフェクター細胞には、末梢血単核球(PBMC)およびナチュラルキラー(NK)細胞が含まれる。あるいは、またはさらに、目的の分子のADCC活性は、in vivoで、例えば、Clynesら Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 95巻:652〜656頁(1998年)に開示されたものなどの動物モデルにおいて、評価され得る。C1q結合アッセイもまた、抗体がC1qに結合できず、したがってCDC活性を欠くことを確認するために実施され得る。例えば、WO2006/029879およびWO2005/100402中の、C1qおよびC3c結合ELISAを参照のこと。補体活性化を評価するために、CDCアッセイが実施され得る(例えば、Gazzano−Santoroら、J. Immunol. Methods 202巻:163頁(1996年);Cragg, M. S.ら、Blood 101巻:1045〜1052頁(2003年);ならびにCragg, M. S.およびM. J. Glennie、Blood 103巻:2738〜2743頁(2004年)を参照のこと)。FcRn結合およびin vivoクリアランス/半減期の決定は、当該分野で公知の方法を使用しても実施され得る(例えば、Petkova, S. B.ら、Int’l. Immunol. 18巻(12号):1759〜1769頁(2006年)を参照のこと)。 In some embodiments, the present invention contemplates anti-E7MC construct variants comprising an FC region that possesses some but not all effector functions, whereby such variants are in vivo halved of the anti-E7MC construct. Although phase is important, certain effector functions (eg, CDC and ADCC) have become desirable candidates for applications where unnecessary or harmful effects are present. In vitro and / or in vivo cytotoxicity assays can be performed to confirm reduction / depletion of CDC and / or ADCC activity. For example, an Fc receptor (FcR) binding assay is performed to ensure that the antibody lacks FcγR binding (and thus may lack ADCC activity) but retains FcRn binding ability. obtain. NK cells, the primary cell for mediating ADCC, express FcγRIII only, whereas monocytes express FcγRI, FcγRII and FcγRIII. FcR expression on hematopoietic cells is described by Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-492 (1991), summarized in Table 3 on page 464. A non-limiting example of an in vitro assay for assessing ADCC activity of a molecule of interest is US Pat. No. 5,500,362 (eg, Hellstrom, I. et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83). Volume: 7059-7063 (1986)) and Hellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82: 1499-1502 (1985); see US Pat. No. 5,821,337 (Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166: 1351-1361 (1987). )It is described in. Alternatively, non-radioactive assay methods can be used (eg, ACTI ™ non-radioactive cytotoxicity assay for flow cytometry (CellTechnology, Inc. Mountain View, Calif.); And CytoTox 96 ™ non- Radioactive cytotoxicity assay (see Promega, Madison, Wis.). Useful effector cells for such assays include peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and natural killer (NK) cells. Alternatively, or in addition, the ADCC activity of the molecule of interest can be determined in vivo, eg, Clynes et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95: 652-656 (1998) and can be evaluated in animal models such as those disclosed. A C1q binding assay can also be performed to confirm that the antibody cannot bind to C1q and thus lacks CDC activity. See, for example, the C1q and C3c binding ELISA in WO2006 / 0298779 and WO2005 / 100402. CDC assays can be performed to assess complement activation (eg, Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202: 163 (1996); Cragg, MS et al., Blood 101). : 1045-1052 (2003); and Cragg, MS and MJ Glennie, Blood 103: 2738-2743 (2004)). Determination of FcRn binding and in vivo clearance / half-life can also be performed using methods known in the art (eg, Petkova, SB, et al., Int'l. Immunol. 18 (12)). : 1759-1769 (2006)).
低減されたエフェクター機能を有する抗体には、Fc領域残基238、265、269、270、297、327および329のうち1または複数の置換を有するものが含まれる(米国特許第6,737,056号)。かかるFc変異体には、残基265および297のアラニンへの置換を有するいわゆる「DANA」Fc変異体(米国特許第7,332,581号)を含む、アミノ酸位置265、269、270、297および327のうち2またはそれ超において置換を有するFc変異体が含まれる。 Antibodies with reduced effector function include those with one or more substitutions of Fc region residues 238, 265, 269, 270, 297, 327 and 329 (US Pat. No. 6,737,056). issue). Such Fc variants include amino acid positions 265, 269, 270, 297, and so-called “DANA” Fc variants (US Pat. No. 7,332,581) with substitutions of residues 265 and 297 to alanine. Fc variants having substitutions at 2 or more of 327 are included.
FcRへの改善されたまたは弱められた結合を有するある特定の抗体バリアントが記載されている(例えば、米国特許第6,737,056号;WO2004/056312およびShieldsら、J. Biol. Chem. 9巻(2号):6591〜6604頁(2001年)を参照のこと)。 Certain antibody variants have been described that have improved or weakened binding to FcR (eg, US Pat. No. 6,737,056; WO 2004/056312 and Shields et al., J. Biol. Chem. 9). Volume (2): 6591-6604 (2001)).
一部の実施形態では、ADCCを改善する1または複数のアミノ酸置換を含むバリアントFc領域を含む抗E7MC構築物(例えば、全長抗E7MC抗体)バリアントが提供される。一部の実施形態では、バリアントFc領域は、ADCCを改善する1または複数のアミノ酸置換を含み、これらの置換は、バリアントFc領域の298位、333位および/または334位にある(残基のEU番号付け)。一部の実施形態では、抗E7MC構築物(例えば、全長抗E7MC抗体)バリアントは、そのバリアントFc領域中に以下のアミノ酸置換を含む:S298A、E333AおよびK334A。 In some embodiments, an anti-E7MC construct (eg, full length anti-E7MC antibody) variant comprising a variant Fc region comprising one or more amino acid substitutions that improve ADCC is provided. In some embodiments, the variant Fc region comprises one or more amino acid substitutions that improve ADCC, and these substitutions are at positions 298, 333 and / or 334 of the variant Fc region (residues of residues). EU numbering). In some embodiments, an anti-E7MC construct (eg, full length anti-E7MC antibody) variant comprises the following amino acid substitutions in its variant Fc region: S298A, E333A and K334A.
一部の実施形態では、例えば、米国特許第6,194,551号、WO99/51642およびIdusogieら、J. Immunol. 164巻:4178〜4184頁(2000年)に記載されるように、変更された(即ち、改善されたまたは弱められたのいずれかの)C1q結合および/または補体依存性細胞傷害(CDC)を生じさせる変更が、Fc領域中で作製される。 In some embodiments, see, for example, US Pat. No. 6,194,551, WO 99/51642 and Idusogie et al. Immunol. 164: 4178-4184 (2000), modified (ie, either improved or attenuated) C1q binding and / or complement dependent cytotoxicity (CDC) The changes that give rise to are made in the Fc region.
一部の実施形態では、半減期を増加させるおよび/または新生児Fc受容体(FcRn)への結合を改善する1または複数のアミノ酸置換を含むバリアントFc領域を含む抗E7MC構築物(例えば、全長抗E7MC抗体)バリアントが提供される。増加した半減期およびFcRnへの改善された結合を有する抗体は、US2005/0014934A1(Hintonら)に記載されている。これらの抗体は、その中にFcRnへのFc領域の結合を改善する1または複数の置換を有するFc領域を含む。かかるFcバリアントには、Fc領域残基:238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424または434のうち1または複数における置換、例えば、Fc領域の残基434の置換(米国特許第7,371,826号)を有するものが含まれる。 In some embodiments, an anti-E7MC construct comprising a variant Fc region comprising one or more amino acid substitutions that increase half-life and / or improve binding to a neonatal Fc receptor (FcRn) (eg, full-length anti-E7MC Antibody) variants are provided. Antibodies with increased half-life and improved binding to FcRn are described in US2005 / 0014934A1 (Hinton et al.). These antibodies include an Fc region having one or more substitutions therein that improve binding of the Fc region to FcRn. Such Fc variants include Fc region residues: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413 Including substitutions at one or more of 424 or 434, eg, substitution of residue 434 of the Fc region (US Pat. No. 7,371,826).
Fc領域バリアントの他の例に関しては、DuncanおよびWinter、Nature 322巻:738〜40頁(1988年);米国特許第5,648,260号;米国特許第5,624,821号;ならびにWO94/29351もまた参照のこと。 For other examples of Fc region variants, see Duncan and Winter, Nature 322: 738-40 (1988); US Pat. No. 5,648,260; US Pat. No. 5,624,821; See also 29351.
本明細書に記載されるFcバリアントのいずれかまたはそれらの組合せを含む抗E7MC構築物(例えば、全長抗E7MC抗体)が企図される。 Anti-E7MC constructs (eg, full length anti-E7MC antibodies) comprising any of the Fc variants described herein or combinations thereof are contemplated.
グリコシル化バリアント
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗E7MC構築物は、抗E7MC構築物がグリコシル化される程度を増加または減少させるように変更される。抗E7MC構築物へのグリコシル化部位の付加または欠失は、1または複数のグリコシル化部位が作り出されるまたは除去されるように、抗E7MC構築物またはそのポリペプチドの一部分のアミノ酸配列を変更させることによって簡便に達成され得る。
Glycosylation variants In some embodiments, the anti-E7MC constructs provided herein are altered to increase or decrease the extent to which the anti-E7MC construct is glycosylated. Addition or deletion of glycosylation sites to the anti-E7MC construct is facilitated by altering the amino acid sequence of a portion of the anti-E7MC construct or a polypeptide thereof such that one or more glycosylation sites are created or removed. Can be achieved.
抗E7MC構築物がFc領域を含む場合、それに結合された炭水化物が変更され得る。哺乳動物細胞によって産生されたネイティブ抗体は、典型的には、Fc領域のCH2ドメインのAsn297にN結合によって一般に結合される分岐鎖二分岐型オリゴ糖を含む。例えば、Wrightら、TIBTECH 15巻:26〜32頁(1997年)を参照のこと。オリゴ糖には、種々の炭水化物、例えば、マンノース、N−アセチルグルコサミン(GlcNAc)、ガラクトースおよびシアル酸、ならびに二分岐型オリゴ糖構造の「幹」中のGlcNAcに結合したフコースが含まれ得る。一部の実施形態では、本発明の抗E7MC構築物におけるオリゴ糖の改変は、ある特定の改善された特性を有する抗E7MC構築物バリアントを作り出すためになされ得る。 If the anti-E7MC construct contains an Fc region, the carbohydrate attached to it can be altered. Native antibodies produced by mammalian cells typically contain branched biantennary oligosaccharides that are commonly linked by N-linkage to Asn297 in the CH2 domain of the Fc region. See, for example, Wright et al., TIBTECH 15: 26-32 (1997). Oligosaccharides can include various carbohydrates such as mannose, N-acetylglucosamine (GlcNAc), galactose and sialic acid, and fucose attached to GlcNAc in the “stem” of the biantennary oligosaccharide structure. In some embodiments, oligosaccharide modifications in the anti-E7MC constructs of the invention can be made to create anti-E7MC construct variants with certain improved properties.
一部の実施形態では、Fc領域を含む抗E7MC構築物(例えば、全長抗E7MC抗体)バリアントが提供され、このFc領域に結合した炭水化物構造は、低減されたフコースを有するまたはフコースを欠き、これがADCC機能を改善し得る。具体的には、野生型CHO細胞において産生された同じ抗E7MC構築物上のフコースの量と比較して、低減されたフコース(fusose)を有する抗E7MC構築物が本明細書で企図される。即ち、これらは、ネイティブCHO細胞(例えば、ネイティブグリコシル化パターンを生じるCHO細胞、例えば、ネイティブFUT8遺伝子を含むCHO細胞)によって産生される場合、別段それらが有するフコースの量よりも低い量のフコースを有することを特徴とする。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、その上のN結合型グリカンの約50%、40%、30%、20%、10%または5%未満がフコースを含む構築物である。例えば、かかる抗E7MC構築物中のフコースの量は、1%〜80%、1%〜65%、5%〜65%または20%〜40%であり得る。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、その上のN結合型グリカンのいずれもがフコースを含まない、即ち、抗E7MC構築物が完全にフコースなしであるか、またはフコースを有さないもしくは非フコシル化された(afucosylated)構築物である。フコースの量は、例えばWO2008/077546に記載されるように、MALDI−TOF質量分析によって測定される、Asn297に結合した全ての糖構造(glycostructure)(例えば、複合体、ハイブリッドおよび高マンノース構造物)の総和と比較した、Asn297における糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。Asn297とは、Fc領域中の約297位に位置するアスパラギン残基を指す(Fc領域残基のEu番号付け);しかし、Asn297はまた、抗体中の軽微な配列バリエーションに起因して、297位の上流または下流の約±3アミノ酸、即ち、294位と300位との間に位置し得る。かかるフコシル化バリアントは、改善されたADCC機能を有し得る。例えば、米国特許公開第US2003/0157108(Presta, L.);US2004/0093621(Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd)を参照のこと。「脱フコシル化(defucosylated)」または「フコース欠損」抗体バリアントに関する刊行物の例には、US2003/0157108;WO2000/61739;WO2001/29246;US2003/0115614;US2002/0164328;US2004/0093621;US2004/0132140;US2004/0110704;US2004/0110282;US2004/0109865;WO2003/085119;WO2003/084570;WO2005/035586;WO2005/035778;WO2005/053742;WO2002/031140;Okazakiら J. Mol. Biol. 336巻:1239〜1249頁(2004年);Yamane−Ohnukiら Biotech. Bioeng. 87巻:614頁(2004年)が含まれる。脱フコシル化抗体を産生することが可能な細胞株の例には、タンパク質フコシル化が欠損しているLec13 CHO細胞(Ripkaら Arch. Biochem. Biophys. 249巻:533〜545頁(1986年);米国特許出願第US2003/0157108 A1、Presta, L;およびWO2004/056312 A1、Adamsら、特に、実施例11)およびノックアウト細胞株、例えば、α−1,6−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子FUT8ノックアウトCHO細胞(例えば、Yamane−Ohnukiら Biotech. Bioeng. 87巻:614頁(2004年);Kanda, Y.ら、Biotechnol. Bioeng.、94巻(4号):680〜688頁(2006年);およびWO2003/085107を参照のこと)が含まれる。
In some embodiments, an anti-E7MC construct (eg, full-length anti-E7MC antibody) variant comprising an Fc region is provided, wherein the carbohydrate structure attached to the Fc region has reduced fucose or lacks fucose, which is ADCC. Can improve function. Specifically, anti-E7MC constructs having reduced fucose compared to the amount of fucose on the same anti-E7MC construct produced in wild type CHO cells are contemplated herein. That is, they are produced by native CHO cells (eg, CHO cells that produce a native glycosylation pattern, eg, CHO cells that contain a native FUT8 gene) that have a lower amount of fucose than they have. It is characterized by having. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a construct in which less than about 50%, 40%, 30%, 20%, 10% or 5% of the N-linked glycans thereon comprise fucose. For example, the amount of fucose in such an anti-E7MC construct can be 1% -80%, 1% -65%, 5% -65% or 20% -40%. In some embodiments, the anti-E7MC construct is free of fucose in any of the N-linked glycans thereon, i.e., the anti-E7MC construct is completely fucose-free or has no fucose or non-fucose. An afucosylated construct. The amount of fucose is measured by MALDI-TOF mass spectrometry as described in, for example, WO 2008/077546. All sugar structures attached to Asn297 (eg, complexes, hybrids and high mannose structures) As determined by calculating the average amount of fucose in the sugar chain at Asn297. Asn297 refers to the asparagine residue located at about position 297 in the Fc region (Eu numbering of Fc region residues); however, Asn297 is also in position 297 due to minor sequence variations in the antibody. About ± 3 amino acids upstream or downstream of, ie, between
抗E7MC構築物(例えば、全長抗E7MC抗体)バリアントは、例えば、抗E7MC構築物のFc領域に結合した二分岐型オリゴ糖がGlcNAcによって二分された、二分されたオリゴ糖をさらに備える。かかる抗E7MC構築物(例えば、全長抗E7MC抗体)バリアントは、低減されたフコシル化および/または改善されたADCC機能を有し得る。かかる抗体バリアントの例は、例えば、WO2003/011878(Jean−Mairetら);米国特許第6,602,684号(Umanaら);US2005/0123546(Umanaら)およびFerraraら、Biotechnology and Bioengineering、93巻(5号):851〜861頁(2006年)に記載されている。Fc領域に結合したオリゴ糖中に少なくとも1つのガラクトース残基を有する抗E7MC構築物(例えば、全長抗E7MC抗体)バリアントもまた提供される。かかる抗E7MC構築物バリアントは、改善されたCDC機能を有し得る。かかる抗体バリアントは、例えば、WO1997/30087(Patelら);WO1998/58964(Raju, S.);およびWO1999/22764(Raju, S.)に記載されている。 An anti-E7MC construct (eg, full length anti-E7MC antibody) variant further comprises a bisected oligosaccharide, eg, a biantennary oligosaccharide attached to the Fc region of the anti-E7MC construct is bisected by GlcNAc. Such anti-E7MC construct (eg, full length anti-E7MC antibody) variants may have reduced fucosylation and / or improved ADCC function. Examples of such antibody variants are described, for example, in WO2003 / 011878 (Jean-Mairet et al.); US Pat. No. 6,602,684 (Umana et al.); US2005 / 0123546 (Umana et al.) And Ferrara et al., Biotechnology and Bioengineering, Vol. 93. (No. 5): 851 to 861 (2006). Also provided are anti-E7MC construct (eg, full-length anti-E7MC antibody) variants having at least one galactose residue in the oligosaccharide attached to the Fc region. Such anti-E7MC construct variants may have improved CDC function. Such antibody variants are described, for example, in WO 1997/30087 (Patel et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.); and WO 1999/22764 (Raju, S.).
一部の実施形態では、Fc領域を含む抗E7MC構築物(例えば、全長抗E7MC抗体)バリアントは、FcγRIIIに結合することが可能である。一部の実施形態では、Fc領域を含む抗E7MC構築物(例えば、全長抗E7MC抗体)バリアントは、ヒトエフェクター細胞の存在下でADCC活性を有する、またはヒト野生型IgG1Fc領域を含む他の点では同じ抗E7MC構築物(例えば、全長抗E7MC抗体)と比較して、ヒトエフェクター細胞の存在下で増加したADCC活性を有する。 In some embodiments, an anti-E7MC construct (eg, full length anti-E7MC antibody) variant comprising an Fc region is capable of binding to FcγRIII. In some embodiments, an anti-E7MC construct (eg, full-length anti-E7MC antibody) variant comprising an Fc region has ADCC activity in the presence of human effector cells, or otherwise comprises a human wild-type IgG1 Fc region. Has increased ADCC activity in the presence of human effector cells compared to anti-E7MC constructs (eg, full length anti-E7MC antibodies).
システイン操作されたバリアント
一部の実施形態では、1または複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置換されたシステイン操作された抗E7MC構築物(例えば、全長抗E7MC抗体)を作り出すことが望まれ得る。一部の実施形態では、置換された残基は、抗E7MC構築物のアクセス可能な部位に存在する。これらの残基をシステインで置換することによって、反応性チオール基が、抗E7MC構築物のアクセス可能な部位に置かれ、本明細書にさらに記載される抗E7MCイムノコンジュゲートを作り出すために、抗E7MC構築物を他の部分、例えば、薬物部分またはリンカー−薬物部分に結合体化するために使用され得る。システイン操作された抗E7MC構築物(例えば、全長抗E7MC抗体)は、例えば米国特許第7,521,541号に記載されるように生成され得る。
Cysteine engineered variants In some embodiments, it may be desirable to create a cysteine engineered anti-E7MC construct (eg, a full-length anti-E7MC antibody) in which one or more amino acid residues are replaced with cysteine residues. In some embodiments, the substituted residue is present at an accessible site of the anti-E7MC construct. By substituting these residues with cysteine, a reactive thiol group is placed at an accessible site of the anti-E7MC construct to create an anti-E7MC immunoconjugate as further described herein. It can be used to conjugate the construct to other moieties, such as drug moieties or linker-drug moieties. Cysteine engineered anti-E7MC constructs (eg, full-length anti-E7MC antibodies) can be generated, for example, as described in US Pat. No. 7,521,541.
誘導体
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗E7MC構築物は、当該分野で公知であり容易に入手可能なさらなる非タンパク質性部分を含むように、さらに改変され得る。抗E7MC構築物の誘導体化に適切な部分には、水溶性ポリマーが含まれるがこれらに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例には、ポリエチレングリコール(PEG)、エチレングリコール/プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−1,3−ジオキソラン、ポリ−1,3,6−トリオキサン、エチレン/無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸(ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか)、およびデキストランまたはポリ(n−ビニルピロリドン)ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコール(propropylene glycol)ホモポリマー、ポリプロピレンオキシド(prolypropylene oxide)/エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール(例えば、グリセロール)、ポリビニルアルコール、ならびにそれらの混合物が含まれるがこれらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性に起因して、製造における利点を有し得る。ポリマーは、任意の分子量のものであり得、分岐鎖または非分岐鎖であり得る。抗E7MC構築物に結合したポリマーの数は変動し得、1よりも多いポリマーが結合される場合、それらは同じまたは異なる分子であり得る。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数および/または型は、改善すべき抗E7MC構築物の特定の特性または機能、抗E7MC構築物誘導体が規定された条件下で治療に使用されるかどうかなどが含まれるがこれらに限定されない考慮事項に基づいて決定され得る。
Derivatives In some embodiments, the anti-E7MC constructs provided herein can be further modified to include additional non-proteinaceous moieties that are known in the art and readily available. Suitable moieties for derivatization of the anti-E7MC construct include, but are not limited to, water soluble polymers. Non-limiting examples of water-soluble polymers include polyethylene glycol (PEG), ethylene glycol / propylene glycol copolymers, carboxymethyl cellulose, dextran, polyvinyl alcohol, polyvinyl pyrrolidone, poly-1,3-dioxolane, poly-1,3. , 6-trioxane, ethylene / maleic anhydride copolymer, polyamino acid (either homopolymer or random copolymer), and dextran or poly (n-vinylpyrrolidone) polyethylene glycol, propylene glycol homopolymer, polypropylene oxide (Polypropylene oxide) / ethylene oxide copolymers, polyoxyethylated polyols (eg glycero ), Polyvinyl alcohol, as well as mixtures thereof without limitation. Polyethylene glycol propionaldehyde may have advantages in manufacturing due to its stability in water. The polymer can be of any molecular weight and can be branched or unbranched. The number of polymers attached to the anti-E7MC construct can vary, and if more than one polymer is attached, they can be the same or different molecules. In general, the number and / or type of polymer used for derivatization will depend on the particular property or function of the anti-E7MC construct to be improved, whether the anti-E7MC construct derivative will be used therapeutically under defined conditions, etc. It can be determined based on considerations including but not limited to.
一部の実施形態では、抗E7MC構築物と放射線への曝露によって選択的に加熱され得る非タンパク質性部分とのコンジュゲートが提供される。一部の実施形態では、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブである(Kamら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102巻:11600〜11605頁(2005年))。放射線は、任意の波長のものであり得、これには、通常の細胞を害さないが、抗E7MC構築物−非タンパク質性部分に対して近位の細胞が殺滅される温度まで非タンパク質性部分を加熱する波長が含まれるがこれに限定されない。 In some embodiments, a conjugate of an anti-E7MC construct and a non-proteinaceous moiety that can be selectively heated by exposure to radiation is provided. In some embodiments, the non-proteinaceous moiety is a carbon nanotube (Kam et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11160-11605 (2005)). The radiation can be of any wavelength and does not harm normal cells, but the non-proteinaceous part up to a temperature at which cells proximal to the anti-E7MC construct-non-proteinaceous part are killed. This includes, but is not limited to, the wavelength of heating.
CARエフェクター細胞調製
本発明は、一態様では、抗E7MC CARを発現するエフェクター細胞(例えば、リンパ球、例えば、T細胞)を提供する。抗E7MC CARを発現するエフェクター細胞(例えば、T細胞)(抗E7MC CARエフェクター細胞、例えば、抗E7MC CAR T細胞)を調製する例示的な方法は、本明細書に提供される。
CAR Effector Cell Preparation In one aspect, the present invention provides effector cells (eg, lymphocytes, eg, T cells) that express anti-E7MC CAR. Exemplary methods for preparing effector cells (eg, T cells) that express anti-E7MC CAR (eg, anti-E7MC CAR effector cells, eg, anti-E7MC CAR T cells) are provided herein.
一部の実施形態では、抗E7MC CARエフェクター細胞(例えば、T細胞)は、抗E7MC CAR(例えば、抗E7MC抗体部分ならびにCD28およびCD3ζ細胞内シグナル伝達配列を含むCAR)を含むベクター(例えば、レンチウイルスベクターを含む)をエフェクター細胞(例えば、T細胞)中に導入することによって生成され得る。一部の実施形態では、本発明の抗E7MC CARエフェクター細胞(例えば、T細胞)は、in vivoで複製することができ、HPV16−E7陽性疾患(例えば、がん、例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がんまたは肛門がん)の持続性の制御をもたらし得る長期持続を生じる。 In some embodiments, the anti-E7MC CAR effector cells (eg, T cells) are anti-E7MC CAR (eg, CARs comprising anti-E7MC antibody portions and CD28 and CD3ζ intracellular signaling sequences) (eg, lentis). Viral vectors) can be generated by introducing into effector cells (eg, T cells). In some embodiments, the anti-E7MC CAR effector cells (eg, T cells) of the invention can replicate in vivo, and HPV16-E7 positive diseases (eg, cancer, eg, squamous cell carcinoma, Cause long-term persistence that can lead to sustained control of cervical or anal cancer).
一部の実施形態では、本発明は、リンパ球注入を使用する、HPV16−E7陽性疾患を有するまたはHPV16−E7陽性疾患を有するリスクがある患者の処置のために、抗E7MC CARを発現する遺伝子改変されたT細胞を投与することに関する。一部の実施形態では、自家リンパ球注入が、処置において使用される。自家PBMCは、処置を必要とする患者から収集され、T細胞は、本明細書に記載されており、当該分野で公知の方法を使用して活性化および拡大増殖され(expanded)、次いで、患者に注入して戻される。 In some embodiments, the invention uses genes that express anti-E7MC CAR for the treatment of patients with HPV16-E7 positive disease or at risk of having HPV16-E7 positive disease using lymphocyte infusion It relates to administering modified T cells. In some embodiments, autologous lymphocyte infusion is used in the treatment. Autologous PBMC are collected from patients in need of treatment, and T cells are activated and expanded using methods described in the art and known in the art, and then the patient It is injected back into the back.
一部の実施形態では、抗E7MC CAR T細胞は、抗E7MC抗体部分を含む抗E7MC
CARを発現する(本明細書で「抗E7MC CAR T細胞」とも呼ぶ)。一部の実施形態では、抗E7MC CAR T細胞は、抗E7MC抗体部分を含む細胞外ドメインならびにCD3ζおよびCD28の細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内ドメインを含む抗E7MC CARを発現する。本発明の抗E7MC CAR T細胞は、ロバストなin vivo T細胞拡大増殖を受け得、血液および骨髄中で長時間にわたって高レベルで持続するE7MC特異的メモリー細胞を樹立できる。一部の実施形態では、患者に注入された本発明の抗E7MC CAR T細胞は、HPV16−E7陽性疾患を有する患者においてin vivoで、E7MC提示がん細胞などのE7MC提示細胞を排除できる。一部の実施形態では、患者に注入された本発明の抗E7MC CAR T細胞は、少なくとも1つの従来の処置に対して難治性であるHPV16−E7陽性疾患を有する患者においてin vivoで、E7MC提示がん細胞などのE7MC提示細胞を排除できる。
In some embodiments, the anti-E7MC CAR T cell comprises an anti-E7MC antibody portion.
Expresses CAR (also referred to herein as “anti-E7MC CAR T cells”). In some embodiments, the anti-E7MC CAR T cells express an anti-E7MC CAR comprising an extracellular domain comprising an anti-E7MC antibody portion and an intracellular domain comprising CD3ζ and CD28 intracellular signaling sequences. The anti-E7MC CAR T cells of the present invention can undergo robust in vivo T cell expansion and can establish E7MC specific memory cells that persist at high levels for extended periods in blood and bone marrow. In some embodiments, the anti-E7MC CAR T cells of the invention injected into a patient can eliminate E7MC-presenting cells, such as E7MC-presenting cancer cells, in vivo in patients with HPV16-E7 positive disease. In some embodiments, the anti-E7MC CAR T cells of the invention injected into a patient are presented in vivo in patients with HPV16-E7 positive disease that are refractory to at least one conventional treatment. E7MC-presenting cells such as cancer cells can be excluded.
T細胞の拡大増殖および遺伝子改変の前に、T細胞の供給源が被験体から取得される。T細胞は、末梢血単核球、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染の部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織および腫瘍を含むいくつかの供給源から取得され得る。本発明の一部の実施形態では、当該分野で利用可能ないくつものT細胞株が使用され得る。本発明の一部の実施形態では、T細胞は、Ficoll(商標)分離などの当業者に公知のいくつもの技術を使用して被験体から収集された血液の単位から取得され得る。一部の実施
形態では、個体の循環血由来の細胞は、アフェレーシスによって取得される。アフェレーシス産物は、典型的には、T細胞を含むリンパ球、単球、顆粒球、B細胞、他の有核白血球、赤血球および血小板を含む。一部の実施形態では、アフェレーシスによって収集された細胞は、血漿画分を除去するため、および引き続く処理ステップに適切な緩衝液または培地中に細胞を配置するために、洗浄され得る。一部の実施形態では、細胞は、リン酸緩衝食塩水(PBS)で洗浄される。一部の実施形態では、洗浄溶液は、カルシウムを欠き、マグネシウムを欠き得る、または全てではないものの、多くの二価カチオンを欠き得る。当業者が容易に理解するように、洗浄ステップは、当業者に公知の方法によって、例えば、製造業者の指示に従って半自動化「フロースルー」遠心分離機(例えば、Cobe 2991細胞プロセッサー、Baxter CytoMateまたはHaemonetics Cell Saver 5)を使用することによって達成され得る。洗浄後、細胞は、種々の生体適合性緩衝液、例えば、無Ca2+、無Mg2+PBS、PlasmaLyte A、または緩衝剤ありもしくはなしの他の食塩水溶液中に再懸濁され得る。あるいは、アフェレーシス試料の望ましくない成分が除去され得、細胞が培養培地中に直接再懸濁され得る。
Prior to T cell expansion and genetic modification, a source of T cells is obtained from the subject. T cells can be obtained from a number of sources including peripheral blood mononuclear cells, bone marrow, lymph node tissue, umbilical cord blood, thymus tissue, tissue from the site of infection, ascites, pleural effusion, spleen tissue and tumor. In some embodiments of the invention, any number of T cell lines available in the art may be used. In some embodiments of the invention, T cells can be obtained from a unit of blood collected from a subject using any number of techniques known to those skilled in the art, such as Ficoll ™ separation. In some embodiments, cells from the individual's circulating blood are obtained by apheresis. Apheresis products typically include lymphocytes including T cells, monocytes, granulocytes, B cells, other nucleated leukocytes, erythrocytes and platelets. In some embodiments, cells collected by apheresis can be washed to remove the plasma fraction and place the cells in a buffer or medium appropriate for subsequent processing steps. In some embodiments, the cells are washed with phosphate buffered saline (PBS). In some embodiments, the wash solution may lack calcium, may lack magnesium, or may lack many, but not all, divalent cations. As one skilled in the art will readily appreciate, the washing step is performed by methods known to those skilled in the art, for example, semi-automated “flow-through” centrifuges (eg, Cobe 2991 cell processor, Baxter CytoMate or Haemonetics according to the manufacturer's instructions). It can be achieved by using Cell Saver 5). After washing, the cells can be resuspended in various biocompatible buffers such as Ca 2+ free, Mg 2+ PBS, PlasmaLyte A, or other saline solutions with or without buffer. Alternatively, undesired components of the apheresis sample can be removed and the cells can be resuspended directly in the culture medium.
一部の実施形態では、T細胞は、赤血球を溶解させ、例えば、PERCOLL(商標)勾配を介した遠心分離によって、または向流遠心分離溶出(counterflow centrifugal elutriation)によって単球を枯渇させることによって、末梢血リンパ球から単離される。T細胞の特定の下位集団、例えば、CD3+、CD28+、CD4+、CD8+、CD45RA+およびCD45RO+T細胞は、陽性または陰性選択技術によってさらに単離され得る。例えば、一部の実施形態では、T細胞は、所望のT細胞の陽性選択に十分な期間にわたる、抗CD3/抗CD28(即ち、3×28)結合体化ビーズ、例えば、DYNABEADS(登録商標)M−450 CD3/CD28 Tとのインキュベーションによって単離される。一部の実施形態では、期間は、約30分間である。一部の実施形態では、期間は、30分間から36時間またはそれ超まで、およびそれらの間の全ての整数値の範囲である。一部の実施形態では、期間は、少なくとも1、2、3、4、5または6時間である。一部の実施形態では、期間は、10〜24時間である。一部の実施形態では、インキュベーション期間は、24時間である。白血病を有する患者からのT細胞の単離のために、より長いインキュベーション時間、例えば24時間の使用が、細胞収量を増加させ得る。より長いインキュベーション時間は、他の細胞型と比較して少ないT細胞が存在する任意の状況において、例えば、腫瘍組織からまたは免疫無防備状態の個体から腫瘍浸潤リンパ球(TIL)を単離することにおいて、T細胞を単離するために使用され得る。さらに、より長いインキュベーション時間の使用は、CD8+T細胞の捕捉の効率を増加させ得る。したがって、この時間を単純に短縮もしくは延長させることによって、T細胞は、CD3/CD28ビーズに結合するようになり、および/またはビーズ対T細胞の比率を増加もしくは減少させることによって、T細胞の下位集団は、培養開始の時点で、もしくはプロセスの間の他の時点で、有利にまたは不利に優先的に選択され得る。さらに、ビーズまたは他の表面上の抗CD3および/または抗CD28抗体の比率を増加または減少させることによって、T細胞の下位集団は、培養開始の時点で、または他の所望の時点で、有利にまたは不利に優先的に選択され得る。当業者は、複数ラウンドの選択もまた本発明との関連において使用され得ることを認識している。一部の実施形態では、活性化および拡大増殖プロセスにおいて、選択手順を実施し、「選択されていない」細胞を使用することが望まれ得る。「選択されていない」細胞はまた、さらなるラウンドの選択に供され得る。 In some embodiments, T cells lyse erythrocytes and deplete monocytes, for example, by centrifugation through a PERCOLL ™ gradient or by counterflow centrifugal elution. Isolated from peripheral blood lymphocytes. Certain subpopulations of T cells, such as CD3 + , CD28 + , CD4 + , CD8 + , CD45RA + and CD45RO + T cells can be further isolated by positive or negative selection techniques. For example, in some embodiments, T cells are anti-CD3 / anti-CD28 (ie, 3 × 28) conjugated beads, eg, DYNABEADS®, for a period sufficient for positive selection of the desired T cells. Isolated by incubation with M-450 CD3 / CD28 T. In some embodiments, the period is about 30 minutes. In some embodiments, the time period ranges from 30 minutes to 36 hours or more, and all integer values therebetween. In some embodiments, the period is at least 1, 2, 3, 4, 5 or 6 hours. In some embodiments, the time period is 10-24 hours. In some embodiments, the incubation period is 24 hours. For isolation of T cells from patients with leukemia, the use of longer incubation times, eg 24 hours, can increase cell yield. Longer incubation times can be used in any situation where there are fewer T cells compared to other cell types, eg, in isolating tumor infiltrating lymphocytes (TIL) from tumor tissue or from immunocompromised individuals. Can be used to isolate T cells. In addition, the use of longer incubation times can increase the efficiency of CD8 + T cell capture. Thus, by simply shortening or extending this time, T cells become bound to CD3 / CD28 beads and / or by increasing or decreasing the bead to T cell ratio, The population can be advantageously or preferentially selected at the beginning of the culture or at other points during the process. Furthermore, by increasing or decreasing the ratio of anti-CD3 and / or anti-CD28 antibodies on beads or other surfaces, T cell subpopulations can be advantageously obtained at the start of culture or at other desired time points. Or it may be preferentially selected. One skilled in the art recognizes that multiple rounds of selection can also be used in the context of the present invention. In some embodiments, it may be desirable to perform a selection procedure and use “unselected” cells in the activation and expansion process. “Unselected” cells can also be subjected to further rounds of selection.
陰性選択によるT細胞集団の富化は、陰性選択された細胞に独自の表面マーカーに対する抗体の組合せを用いて達成され得る。1つの方法は、陰性選択される細胞上に存在する細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体のカクテルを使用する、負の磁気免疫付着(negative magnetic immunoadherence)もしくはフローサイトメトリーを介した細胞分取および/または選択である。例えば、陰性選択によってCD4+細胞を富化するために、モノクローナル抗体カクテルは、典型的には、CD14、CD20、CD11b、CD16、HLA−DRおよびCD8に対する抗体を含む。一部の実施形態では、CD4+、CD25+、CD62Lhi、GITR+およびFoxP3+を典型的には発現する調節性T細胞を富化または陽性選択することが望まれ得る。あるいは、一部の実施形態では、T調節細胞は、抗CD25結合体化ビーズまたは他の類似の選択方法によって枯渇される。 Enrichment of T cell populations by negative selection can be achieved using a combination of antibodies against surface markers unique to negatively selected cells. One method uses a cocktail of monoclonal antibodies against cell surface markers present on negatively selected cells, cell sorting and / or selection via negative magnetic immunoadherence or flow cytometry. It is. For example, to enrich CD4 + cells by negative selection, monoclonal antibody cocktails typically include antibodies to CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR and CD8. In some embodiments, it may be desirable to enrich or positively select for regulatory T cells that typically express CD4 + , CD25 + , CD62Lhi, GITR + and FoxP3 + . Alternatively, in some embodiments, T regulatory cells are depleted by anti-CD25 conjugated beads or other similar selection methods.
陽性または陰性選択による細胞の所望の集団の単離のために、細胞の濃度および表面(例えば、ビーズなどの粒子)を変えることができる。一部の実施形態では、細胞とビーズとの最大の接触を確実にするために、ビーズおよび細胞が一緒に混合される体積を顕著に減少させる(即ち、細胞の濃度を増加させる)ことが望まれ得る。例えば、一部の実施形態では、約20億細胞/mlの濃度が使用される。一部の実施形態では、約10億細胞/mlの濃度が使用される。一部の実施形態では、約100百万細胞/ml超が使用される。一部の実施形態では、約10、15、20、25、30、35、40、45または50百万細胞/mlのいずれかの細胞の濃度が使用される。一部の実施形態では、約75、80、85、90、95または100百万細胞/mlのいずれかの細胞の濃度が使用される。一部の実施形態では、約125または約150百万細胞/mlの濃度が使用される。高い濃度を使用すると、増加した細胞収量、細胞活性化および細胞拡大増殖が生じ得る。さらに、高い細胞濃度の使用は、目的の標的抗原を弱く発現し得る細胞、例えばCD28陰性T細胞の、または多くの腫瘍細胞が存在する試料(即ち、白血病血液、腫瘍組織など)からの、より効率的な捕捉を可能にする。細胞のかかる集団は、治療的価値を有し得、取得が望まれる。例えば、高濃度の細胞を使用すると、通常はより弱いCD28発現を有するCD8+T細胞のより効率的な選択が可能になる。 For isolation of the desired population of cells by positive or negative selection, the cell concentration and surface (eg, particles such as beads) can be varied. In some embodiments, it is desirable to significantly reduce the volume at which the beads and cells are mixed together (ie, increase the concentration of cells) to ensure maximum contact between the cells and the beads. It can be rare. For example, in some embodiments, a concentration of about 2 billion cells / ml is used. In some embodiments, a concentration of about 1 billion cells / ml is used. In some embodiments, greater than about 100 million cells / ml are used. In some embodiments, a concentration of cells of about 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 or 50 million cells / ml is used. In some embodiments, a cell concentration of about 75, 80, 85, 90, 95 or 100 million cells / ml is used. In some embodiments, a concentration of about 125 or about 150 million cells / ml is used. Using high concentrations can result in increased cell yield, cell activation and cell expansion. Furthermore, the use of high cell concentrations is more likely from cells that can weakly express the target antigen of interest, eg, CD28 negative T cells, or from samples in which many tumor cells are present (ie, leukemia blood, tumor tissue, etc.). Enable efficient capture. Such a population of cells can have therapeutic value and is desired to be obtained. For example, using a high concentration of cells allows for more efficient selection of CD8 + T cells that usually have weaker CD28 expression.
本発明の一部の実施形態では、T細胞は、処置後に患者から直接取得される。これに関して、ある特定のがん処置、特に、免疫系を損傷する薬物による処置の後、患者が処置から通常は回復している期間中の処置の直後に、取得されたT細胞の品質は、ex vivoで拡大増殖するそれらの能力について、最適であり得るまたは改善され得ることが観察されている。同様に、本明細書に記載された方法を使用するex vivo操作の後、これらの細胞は、増強された生着およびin vivo拡大増殖のための好ましい状態にあり得る。したがって、本発明との関連において、この回復期の間に、T細胞、樹状細胞、または造血系統の他の細胞を含む血液細胞を収集することが企図される。さらに、一部の実施形態では、動員(例えば、GM−CSFによる動員)および条件付けレジメンが、被験体において、特定の細胞型の再増殖、再循環、再生および/または拡大増殖が、特に、治療後の規定された時間ウインドウの間に好まれる状態を作り出すために使用され得る。例示的な細胞型には、T細胞、B細胞、樹状細胞、および免疫系の他の細胞が含まれる。 In some embodiments of the invention, T cells are obtained directly from the patient after treatment. In this regard, following certain cancer treatments, particularly treatment with drugs that damage the immune system, immediately after treatment during a period in which the patient is usually recovering from treatment, the quality of T cells obtained is: It has been observed that their ability to expand in vivo can be optimal or improved. Similarly, after ex vivo manipulation using the methods described herein, these cells can be in a favorable state for enhanced engraftment and in vivo expansion. Accordingly, in the context of the present invention, it is contemplated to collect blood cells, including T cells, dendritic cells, or other cells of the hematopoietic lineage during this recovery phase. Further, in some embodiments, mobilization (eg, mobilization with GM-CSF) and conditioning regimen may be used in a subject to repopulate, recirculate, regenerate and / or expand proliferation of a particular cell type, particularly treatment. It can be used to create a preferred state during a later defined time window. Exemplary cell types include T cells, B cells, dendritic cells, and other cells of the immune system.
望ましい抗E7MC CARを発現させるためのT細胞の遺伝子改変の前であれ後であれ、T細胞は、例えば、米国特許第6,352,694号;第6,534,055号;第6,905,680号;第6,692,964号;第5,858,358号;第6,887,466号;第6,905,681号;第7,144,575号;第7,067,318号;第7,172,869号;第7,232,566号;第7,175,843号;第5,883,223号;第6,905,874号;第6,797,514号;第6,867,041号;および米国特許出願公開第20060121005号に記載される方法を一般に使用して、活性化および拡大増殖され得る。 T cells, for example, before or after genetic modification of T cells to express the desired anti-E7MC CAR, are described, for example, in US Pat. Nos. 6,352,694; 6,534,055; No. 6,692,964; No. 5,858,358; No. 6,887,466; No. 6,905,681; No. 7,144,575; No. 7,067,318 No. 7,172,869; No. 7,232,566; No. 7,175,843; No. 5,883,223; No. 6,905,874; No. 6,797,514; 6,867,041; and U.S. Patent Application Publication No. 20060121005 can generally be used to activate and expand.
一般に、本発明のT細胞は、それに結合したCD3/TCR複合体関連シグナルを刺激する薬剤およびT細胞の表面上の共刺激分子を刺激するリガンドを有する表面との接触によって拡大増殖される。特に、T細胞集団は、例えば、表面上に固定された抗CD3抗体もしくはその抗原結合断片、または抗CD2抗体との接触によって、あるいはカルシウムイオノフォアと併せたタンパク質キナーゼC活性化因子(例えば、ブリオスタチン)との接触によって、刺激され得る。T細胞の表面上のアクセサリ分子の共刺激のために、アクセサリ分子を結合するリガンドが使用される。例えば、T細胞の集団は、T細胞の増殖を刺激するのに適切な条件下で、抗CD3抗体および抗CD28抗体と接触させられ得る。CD4+T細胞またはCD8+T細胞のいずれかの増殖を刺激するために、抗CD3抗体および抗CD28抗体。抗CD28抗体の例には、9.3、B−T3、XR−CD28(Diaclone、Besanson、France)が含まれ、当該分野で一般に公知である他の方法と同様に使用され得る(can be used as can other methods commonly known in the art)(Bergら、Transplant Proc. 30巻(8号):3975〜3977頁、1998年;Haanenら、J. Exp. Med. 190巻(9号):1319〜1328頁、1999年;Garlandら、J. Immunol. Meth. 227巻(1〜2号):53〜63頁、1999年)。 In general, the T cells of the present invention are expanded by contact with a surface having an agent that stimulates a CD3 / TCR complex associated signal bound to it and a ligand that stimulates a costimulatory molecule on the surface of the T cell. In particular, T cell populations can be produced, for example, by contact with an anti-CD3 antibody or antigen-binding fragment thereof immobilized on the surface, or an anti-CD2 antibody, or in combination with a calcium ionophore (eg, bryostatin). ) Can be stimulated by contact. For costimulation of accessory molecules on the surface of T cells, ligands that bind accessory molecules are used. For example, a population of T cells can be contacted with anti-CD3 and anti-CD28 antibodies under conditions suitable to stimulate T cell proliferation. Anti-CD3 and anti-CD28 antibodies to stimulate proliferation of either CD4 + T cells or CD8 + T cells. Examples of anti-CD28 antibodies include 9.3, B-T3, XR-CD28 (Diaclone, Besanson, France) and can be used in a manner similar to other methods commonly known in the art. as can other methods commonly known in the art) (Berg et al., Transplant Proc. 30 (8): 3975-3777, 1998; Haanen et al., J. Exp. Med. 190 (9): 1319). 1328, 1999; Garland et al., J. Immunol. Meth. 227 (1-2): 53-63, 1999).
イムノコンジュゲート調製
抗E7MCイムノコンジュゲートは、当該分野で公知の任意の方法を使用して調製され得る。例えば、それらの全体が本明細書に参照によって組み込まれるWO2009/067800、WO2011/133886および米国特許出願公開第2014322129号を参照のこと。
Immunoconjugate preparation Anti-E7MC immunoconjugates can be prepared using any method known in the art. See, for example, WO 2009/067800, WO 2011/133886 and US Patent Publication No. 20143222129, which are incorporated herein by reference in their entirety.
抗E7MCイムノコンジュゲートの抗E7MC抗体部分は、抗E7MC抗体部分がエフェクター分子と会合し得るまたはエフェクター分子に連結され得る任意の手段によって、エフェクター分子「に結合」され得る。例えば、抗E7MCイムノコンジュゲートの抗E7MC抗体部分は、化学的または組換え手段によって、エフェクター分子に結合され得る。融合物またはコンジュゲートを調製するための化学的手段は、当該分野で公知であり、抗E7MCイムノコンジュゲートを調製するために使用され得る。抗E7MC抗体部分およびエフェクター分子を結合体化するために使用される方法は、標的細胞上の抗原に結合する結合タンパク質の能力を妨害することなしに、結合タンパク質をエフェクター分子と結合させること(joining)が可能でなければならない。 The anti-E7MC antibody portion of the anti-E7MC immunoconjugate can be “coupled” to the effector molecule by any means by which the anti-E7MC antibody portion can be associated with or linked to the effector molecule. For example, the anti-E7MC antibody portion of the anti-E7MC immunoconjugate can be coupled to the effector molecule by chemical or recombinant means. Chemical means for preparing fusions or conjugates are known in the art and can be used to prepare anti-E7MC immunoconjugates. The method used to conjugate the anti-E7MC antibody moiety and the effector molecule allows the binding protein to bind to the effector molecule without interfering with the ability of the binding protein to bind the antigen on the target cell. ) Must be possible.
抗E7MCイムノコンジュゲートの抗E7MC抗体部分は、エフェクター分子に間接的に連結され得る。例えば、抗E7MCイムノコンジュゲートの抗E7MC抗体部分は、いくつかの型のうち1つのエフェクター分子を含むリポソームに直接連結され得る。エフェクター分子(複数可)および/または抗E7MC抗体部分はまた、固体表面に結合され得る。 The anti-E7MC antibody portion of the anti-E7MC immunoconjugate can be indirectly linked to the effector molecule. For example, the anti-E7MC antibody portion of an anti-E7MC immunoconjugate can be directly linked to a liposome containing one of several types of effector molecules. The effector molecule (s) and / or anti-E7MC antibody moiety can also be bound to a solid surface.
一部の実施形態では、抗E7MCイムノコンジュゲートの抗E7MC抗体部分とエフェクター分子とは、共にタンパク質であり、当該分野で周知の技術を使用して結合体化され得る。2つのタンパク質を結合体化できる数百のクロスリンカーが利用可能である(例えば、「Chemistry of Protein Conjugation and Crosslinking」.1991年、Shans Wong、CRC Press、Ann Arborを参照のこと)。クロスリンカーは、一般に、抗E7MC抗体部分および/またはエフェクター分子上で利用可能なまたはその上に挿入された反応性官能基に基づいて選択される。さらに、反応性基が存在しない場合、光活性化可能なクロスリンカーが使用され得る。ある特定の例では、抗E7MC抗体部分とエフェクター分子との間にスペーサーを含むことが望まれ得る。当該分野で公知の架橋剤には、ホモ二官能性剤:グルタルアルデヒド、アジプイミド酸ジメチルおよびビス(ジアゾベンジジン)ならびにヘテロ二官能性剤:m マレイミドベンゾイル−N−ヒドロキシスクシンイミドおよびスルホ−m マレイミドベンゾイル−N−ヒドロキシスクシンイミドが含まれる。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion of the anti-E7MC immunoconjugate and the effector molecule are both proteins and can be conjugated using techniques well known in the art. Hundreds of crosslinkers are available that can conjugate two proteins (see, for example, “Chemistry of Protein Conjugation and Crosslinking”, 1991, Shans Wong, CRC Press, Ann Arbor). The crosslinker is generally selected based on reactive functional groups available on or inserted on the anti-E7MC antibody moiety and / or effector molecule. In addition, in the absence of reactive groups, photoactivatable crosslinkers can be used. In certain instances, it may be desirable to include a spacer between the anti-E7MC antibody portion and the effector molecule. Cross-linking agents known in the art include homobifunctional agents: glutaraldehyde, dimethyl adipimidate and bis (diazobenzidine) and heterobifunctional agents: m maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide and sulfo-m maleimidobenzoyl- N-hydroxysuccinimide is included.
一部の実施形態では、抗E7MCイムノコンジュゲートの抗E7MC抗体部分は、エフェクター分子の化学的結合のための特定の残基で操作され得る。当該分野で公知の、分子の化学的結合に使用される特定の残基には、リシンおよびシステインが含まれる。クロスリンカーは、抗E7MC抗体部分上に挿入されたおよびエフェクター分子上で利用可能な反応性官能基に基づいて選択される。 In some embodiments, the anti-E7MC antibody portion of the anti-E7MC immunoconjugate can be engineered with specific residues for chemical attachment of effector molecules. Specific residues used in the chemical coupling of molecules known in the art include lysine and cysteine. The crosslinker is selected based on the reactive functional group inserted on the anti-E7MC antibody moiety and available on the effector molecule.
抗E7MCイムノコンジュゲートは、組換えDNA技術を使用しても調製され得る。かかる場合には、抗E7MC抗体部分をコードするDNA配列が、エフェクター分子をコードするDNA配列に融合されて、キメラDNA分子を生じる。キメラDNA配列は、融合タンパク質を発現する宿主細胞中にトランスフェクトされる。融合タンパク質は、当該分野で公知の技術を使用して、細胞培養物から回収され得、精製され得る。 Anti-E7MC immunoconjugates can also be prepared using recombinant DNA technology. In such a case, the DNA sequence encoding the anti-E7MC antibody portion is fused to the DNA sequence encoding the effector molecule, resulting in a chimeric DNA molecule. The chimeric DNA sequence is transfected into a host cell that expresses the fusion protein. The fusion protein can be recovered from the cell culture and purified using techniques known in the art.
標識であるエフェクター分子を結合タンパク質に結合させる例には、Hunterら、Nature 144巻:945頁(1962年);Davidら、Biochemistry 13巻:1014頁(1974年);Painら、J. Immunol. Meth. 40巻:219頁(1981年);Nygren、J. Histochem. and Cytochem. 30巻:407頁(1982年);WenselおよびMeares、Radioimmunoimaging And Radioimmunotherapy、Elsevier、N.Y.(1983年);ならびにColcherら、「Use Of Monoclonal Antibodies As Radiopharmaceuticals For The Localization Of Human Carcinoma Xenografts In Athymic Mice」、Meth. Enzymol.、121巻:802〜16頁(1986年)に記載される方法が含まれる。 Examples of binding effector molecules that are labels to binding proteins include Hunter et al., Nature 144: 945 (1962); David et al., Biochemistry 13: 1014 (1974); Pain et al., J. Biol. Immunol. Meth. 40: 219 (1981); Nygren, J. et al. Histochem. and Cytochem. 30: 407 (1982); Wensel and Meares, Radioimmunoimaging And Radioimmunotherapy, Elsevier, N .; Y. (1983); and Colcher et al., “Use Of Monoclonal Antibodies As Radiopharmaceuticals For The Localization Of Human Carcinoma Xenografics In Athymic. Enzymol. 121: 802-16 (1986).
放射性標識または他の標識は、公知の方法でイムノコンジュゲート中に取り込まれ得る。例えば、ペプチドは、生合成され得る、または例えば、水素の代わりにフッ素−19を含む適切なアミノ酸前駆体を使用して、化学的アミノ酸合成によって合成され得る。標識、例えば、99Tcまたは123I、186Re、188Reおよび111Inは、ペプチド中のシステイン残基を介して結合され得る。イットリウム−90は、リシン残基を介して結合され得る。IODOGEN法(Frakerら、Biochem. Biophys. Res. Commun. 80巻:49〜57頁(1978年))は、ヨウ素−123を取り込むために使用され得る。「Monoclonal Antibodies in Immunoscintigraphy」(Chatal、CRC Press 1989年)は、他の方法を詳細に記載している。 A radioactive label or other label can be incorporated into the immunoconjugate in a known manner. For example, peptides can be biosynthesized or synthesized by chemical amino acid synthesis, for example using a suitable amino acid precursor containing fluorine-19 instead of hydrogen. Labels such as 99 Tc or 123 I, 186 Re, 188 Re and 111 In can be attached via cysteine residues in the peptide. Yttrium-90 can be linked via a lysine residue. The IODOGEN method (Fraker et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 80: 49-57 (1978)) can be used to incorporate iodine-123. “Monoclonal Antibodies in Immunoscinography” (Chatal, CRC Press 1989) describes other methods in detail.
抗体部分と細胞傷害剤とのイムノコンジュゲートは、種々の二官能性タンパク質カップリング剤、例えば、N−スクシンイミジル−3−(2−ピリジルジチオ)プロピオネート(SPDP)、スクシンイミジル−4−(N−マレイミドメチル)シクロヘキサン−1−カルボキシレート(SMCC)、イミノチオラン(IT)、イミドエステルの二官能性誘導体(例えば、アジプイミド酸ジメチルHCI)、活性エステル(例えば、スベリン酸ジスクシンイミジル)、アルデヒド(例えば、グルタルアルデヒド)、ビス−アジド化合物(例えば、ビス(p−アジドベンゾイル)ヘキサンジアミン)、ビス−ジアゾニウム誘導体(例えば、ビス−(p−ジアゾニウムベンゾイル)−エチレンジアミン)、ジイソシアネート(例えば、2,6−ジイソシアン酸トルエン)、およびビス−活性フッ素化合物(例えば、1,5−ジフルオロ−2,4−ジニトロベンゼン)を使用して作製され得る。例えば、リシン免疫毒素は、Vitettaら、Science 238巻:1098頁(1987年)に記載されるように調製され得る。炭素−14標識1−イソチオシアナトベンジル−3−メチルジエチレントリアミン五酢酸(1−isothiocyanatobenzyl−3−methyldiethylene tnaminepentaacetic acid)(MX−DTPA)は、抗体への放射性核種の結合体化のための例示的なキレート剤である。例えば、WO94/11026を参照のこと。リンカーは、細胞における細胞傷害薬の放出を促進する「切断可能なリンカー」であり得る。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、光分解性リンカー、ジメチルリンカーまたはジスルフィド含有リンカー(Chariら、Cancer Research 52巻:127〜131頁(1992年);米国特許第5,208,020号)が使用され得る。 Immunoconjugates of antibody moieties and cytotoxic agents include various bifunctional protein coupling agents such as N-succinimidyl-3- (2-pyridyldithio) propionate (SPDP), succinimidyl-4- (N-maleimide) Methyl) cyclohexane-1-carboxylate (SMCC), iminothiolane (IT), bifunctional derivatives of imidoesters (eg dimethyl adipimidate HCI), active esters (eg disuccinimidyl suberate), aldehydes (eg Glutaraldehyde), bis-azide compounds (for example, bis (p-azidobenzoyl) hexanediamine), bis-diazonium derivatives (for example, bis- (p-diazonium benzoyl) -ethylenediamine), diisocyanates (for example, 2,6-dii). Cyanate toluene), and bis - active fluorine compounds (e.g., may be made using the 1,5-difluoro-). For example, a ricin immunotoxin can be prepared as described in Vitetta et al., Science 238: 1098 (1987). Carbon-14-labeled 1-isothiocyanatobenzyl-3-methyldiethylenetriaminepentaacetic acid (MX-DTPA) is an exemplary for the conjugation of radionuclides to antibodies. Chelating agent. For example, see WO94 / 11026. The linker may be a “cleavable linker” that facilitates release of the cytotoxic drug in the cell. For example, acid labile linkers, peptidase sensitive linkers, photodegradable linkers, dimethyl linkers or disulfide-containing linkers (Chari et al., Cancer Research 52: 127-131 (1992); US Pat. No. 5,208,020) Can be used.
本発明の抗E7MCイムノコンジュゲートは、クロスリンカー試薬:(例えば、Pierce Biotechnology,Inc.、Rockford、IL、U.S.Aから)市販される、BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC−SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、スルホ−EMCS、スルホ−GMBS、スルホ−KMUS、スルホ−MBS、スルホ−SIAB、スルホ−SMCCおよびスルホ−SMPB、ならびにSVSB(スクシンイミジル−(4−ビニルスルホン)ベンゾエート)を用いて調製されたADCを明示的に企図するが、これに限定されない。2003〜2004年 Applications Handbook and Catalogの467〜498頁を参照のこと。 The anti-E7MC immunoconjugates of the invention are cross-linker reagents: BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, commercially available (eg, from Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL, USA) MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, sulfo-EMCS, sulfo-GMBS, sulfo-KMUS, sulfo-MBS, sulfo-SIAB, sulfo-SMCC and sulfo-SMPB, and SVSB (succinimidyl- ( ADCs prepared using 4-vinylsulfone) benzoate) are explicitly contemplated but not limited thereto. See pages 467-498 of the Applications Handbook and Catalog, 2003-2004.
医薬組成物
抗E7MC構築物を含む組成物(例えば、医薬組成物、本明細書で製剤とも呼ぶ)もまた、本明細書で提供される。一部の実施形態では、組成物は、抗E7MC構築物と会合した細胞(例えば、エフェクター細胞、例えば、T細胞)をさらに含む。一部の実施形態では、抗E7MC構築物および薬学的に許容されるキャリアを含む医薬組成物が提供される。一部の実施形態では、医薬組成物は、抗E7MC構築物と会合した細胞(例えば、エフェクター細胞、例えば、T細胞)をさらに含む。
Pharmaceutical Compositions Compositions comprising anti-E7MC constructs (eg, pharmaceutical compositions, also referred to herein as formulations) are also provided herein. In some embodiments, the composition further comprises cells (eg, effector cells, eg, T cells) associated with the anti-E7MC construct. In some embodiments, a pharmaceutical composition comprising an anti-E7MC construct and a pharmaceutically acceptable carrier is provided. In some embodiments, the pharmaceutical composition further comprises cells (eg, effector cells, eg, T cells) associated with the anti-E7MC construct.
抗E7MC構築物の適切な製剤は、所望の程度の純度を有する抗E7MC構築物を、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で、任意選択の薬学的に許容されるキャリア、賦形剤または安定剤(Remington’s Pharmaceutical Sciences 第16版、Osol, A.編(1980年))と混合することによって取得される。許容されるキャリア、賦形剤または安定剤は、使用される投薬量および濃度においてレシピエントにとって非毒性であり、これには、緩衝剤、例えば、ホスフェート、シトレートおよび他の有機酸;アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤;防腐剤(例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド;塩化ヘキサメトニウム;塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム;フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール;アルキルパラベン、例えば、メチルパラベンもしくはプロピルパラベン;カテコール;レゾルシノール;シクロヘキサノール;3−ペンタノール;およびm−クレゾール);低分子量(約10残基未満)ポリペプチド;タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチンもしくは免疫グロブリン;親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン(olyvinylpyrrolidone);アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンもしくはリシン;グルコース、マンノースもしくはデキストリンを含む、単糖、二糖および他の炭水化物;キレート剤、例えば、EDTA;糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロースもしくはソルビトール;塩形成性対イオン、例えば、ナトリウム;金属錯体(例えば、Zn−タンパク質錯体);および/または非イオン性界面活性剤、例えば、TWEEN(商標)、PLURONICS(商標)もしくはポリエチレングリコール(PEG)が含まれる。例示的な製剤は、参照によって本明細書に明示的に組み込まれるWO98/56418に記載されている。皮下投与のために適応させた凍結乾燥製剤は、WO97/04801に記載されている。かかる凍結乾燥製剤は、適切な希釈剤で高いタンパク質濃度に再構成され得、再構成された製剤は、本明細書で処置される個体に皮下投与され得る。リポフェクチンまたはリポソームが、本発明の抗E7MC構築物を細胞中に送達するために使用され得る。 A suitable formulation of an anti-E7MC construct is an optional pharmaceutically acceptable carrier, excipient or stabilizer (Remington's) in the form of a lyophilized formulation or an aqueous solution having the desired degree of purity. s Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. (1980)). Acceptable carriers, excipients or stabilizers are nontoxic to recipients at the dosages and concentrations used, including buffers such as phosphates, citrates and other organic acids; ascorbic acid and Antioxidants including methionine; preservatives (eg octadecyldimethylbenzylammonium chloride; hexamethonium chloride; benzalkonium chloride, benzethonium chloride; phenol, butyl or benzyl alcohol; alkyl parabens such as methyl paraben or propyl paraben; catechol; Resorcinol; cyclohexanol; 3-pentanol; and m-cresol); low molecular weight (less than about 10 residues) polypeptide; protein such as serum albumin, gelatin or immunoglobulin; parent Sex polymers such as polyvinylpyrrolidone; amino acids such as glycine, glutamine, asparagine, histidine, arginine or lysine; monosaccharides, disaccharides and other carbohydrates including glucose, mannose or dextrin; chelating agents such as EDTA; sugars such as sucrose, mannitol, trehalose or sorbitol; salt-forming counterions such as sodium; metal complexes (eg Zn-protein complexes); and / or nonionic surfactants such as TWEEN ™ ), PLURONICS ™ or polyethylene glycol (PEG). Exemplary formulations are described in WO 98/56418 which is expressly incorporated herein by reference. A lyophilized formulation adapted for subcutaneous administration is described in WO 97/04801. Such lyophilized formulations can be reconstituted to a high protein concentration with a suitable diluent, and the reconstituted formulation can be administered subcutaneously to the individual being treated herein. Lipofectin or liposomes can be used to deliver the anti-E7MC constructs of the invention into cells.
本明細書の製剤は、処置されている特定の適応症に必要な場合、抗E7MC構築物に加えて、1または複数の活性化合物、好ましくは、互いに有害な影響を与えない補完的活性を有する活性化合物もまた含み得る。例えば、抗E7MC構築物に加えて、抗新生物剤、成長阻害剤、細胞傷害剤または化学療法剤をさらに提供することが望まれ得る。かかる分子は、適切には、意図した目的のために有効な量で組み合わされて存在する。かかる他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗E7MC構築物の量、疾患または障害または処置の型、および上で議論した他の因子に依存する。これらは一般に、本明細書に記載されるのと同じ投薬量および投与経路で、またはこれまでに使用された投薬量の約1〜99%で、使用される。 The formulations herein may have, as necessary for the particular indication being treated, one or more active compounds in addition to the anti-E7MC construct, preferably activities with complementary activities that do not adversely affect each other Compounds can also be included. For example, it may be desirable to further provide an antineoplastic agent, growth inhibitory agent, cytotoxic agent or chemotherapeutic agent in addition to the anti-E7MC construct. Such molecules are suitably present in combination in amounts that are effective for the purpose intended. The effective amount of such other agents depends on the amount of anti-E7MC construct present in the formulation, the type of disease or disorder or treatment, and other factors discussed above. These are generally used at the same dosages and routes of administration as described herein, or at about 1-99% of the dosages used so far.
抗E7MC構築物はまた、それぞれ、例えば、コアセルベーション技術によってまたは界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ−(メチルメタクリレート)マイクロカプセル中に、コロイド薬物送達系(例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル)中に、またはマクロエマルジョン中に捕捉され得る。かかる技術は、Remington’s Pharmaceutical Sciences 第16版、Osol, A.編(1980年)に開示されている。徐放性調製物が調製され得る。 The anti-E7MC construct is also a colloid drug delivery system in microcapsules prepared by, for example, coacervation techniques or by interfacial polymerization, such as hydroxymethylcellulose or gelatin-microcapsules and poly- (methyl methacrylate) microcapsules, respectively. It can be entrapped in (eg, liposomes, albumin microspheres, microemulsions, nanoparticles and nanocapsules) or in macroemulsions. Such techniques are described in Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. et al. (1980). Sustained release preparations can be prepared.
抗E7MC構築物の徐放性調製物が調製され得る。徐放性調製物の適切な例には、抗体(またはその断片)を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、このマトリックスは、成形物品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル(例えば、ポリ(2−ヒドロキシエチル−メタクリレート)またはポリ(ビニルアルコール))、ポリラクチド(米国特許第3,773,919号)、L−グルタミン酸およびエチル−L−グルタメートのコポリマー、非分解性エチレン酢酸ビニル、分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、例えば、LUPRON DEPOT(商標)(乳酸−グリコール酸コポリマーおよび酢酸ロイプロリドから構成される注射可能なミクロスフェア)、ならびにポリ−D−(−)−3−ヒドロキシ酪酸が含まれる。エチレン酢酸ビニルおよび乳酸−グリコール酸などのポリマーは、100日を超えた分子の放出を可能にするが、ある特定のヒドロゲルは、より短い期間にわたってタンパク質を放出する。封入された抗体が、身体中で長期にわたって残存する場合、これらは、37℃での湿気への曝露の結果として、変性または凝集して、生物学的活性の喪失および免疫原性の可能な変化を生じ得る。合理的戦略が、関与する機構に依存して、抗E7MC構築物の安定化のために考案され得る。例えば、凝集機構が、チオ−ジスルフィド相互変換を介した分子間S−S結合形成であることが発見された場合、安定化は、スルフヒドリル残基を改変し、酸性溶液から凍結乾燥し、水分含量を制御し、適切な添加剤を使用し、特定のポリマーマトリックス組成物を開発することによって、達成され得る。 Sustained release preparations of anti-E7MC constructs can be prepared. Suitable examples of sustained release preparations include a semi-permeable matrix of solid hydrophobic polymer containing antibodies (or fragments thereof), which matrix is in the form of a molded article, eg, a film or microcapsule. . Examples of sustained release matrices include polyesters, hydrogels (eg, poly (2-hydroxyethyl-methacrylate) or poly (vinyl alcohol)), polylactides (US Pat. No. 3,773,919), L-glutamic acid and ethyl. Copolymers of L-glutamate, non-degradable ethylene vinyl acetate, degradable lactic acid-glycolic acid copolymers, such as LUPRON DEPOT ™ (injectable microspheres composed of lactic acid-glycolic acid copolymer and leuprolide acetate), and Poly-D-(-)-3-hydroxybutyric acid is included. While polymers such as ethylene vinyl acetate and lactic acid-glycolic acid allow release of molecules for over 100 days, certain hydrogels release proteins over shorter time periods. If encapsulated antibodies remain in the body for a long time, they denature or aggregate as a result of exposure to moisture at 37 ° C., resulting in loss of biological activity and possible changes in immunogenicity. Can result. Rational strategies can be devised for the stabilization of anti-E7MC constructs, depending on the mechanism involved. For example, if it is discovered that the aggregation mechanism is intermolecular SS bond formation via thio-disulfide interconversion, stabilization modifies sulfhydryl residues, freeze-drys from acidic solutions, By developing a specific polymer matrix composition using a suitable additive and using appropriate additives.
一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、クエン酸塩、NaCl、酢酸塩、コハク酸塩、グリシン、ポリソルベート80(Tween 80)、または上記のものの任意の組合せを含む緩衝液中で製剤化される。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、約100mM〜約150mMのグリシンを含む緩衝液中で製剤化される。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、約50mM〜約100mMのNaClを含む緩衝液中で製剤化される。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、約10mM〜約50mMの酢酸塩を含む緩衝液中で製剤化される。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、約10mM〜約50mMのコハク酸塩を含む緩衝液中で製剤化される。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、約0.005%〜約0.02%のポリソルベート80を含む緩衝液中で製剤化される。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、約5.1と5.6との間のpHを有する緩衝液中で製剤化される。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、10mMのクエン酸塩、100mMのNaCl、100mMのグリシンおよび0.01%のポリソルベート80を含む緩衝液中で製剤化され、この製剤は、pH5.5である。
In some embodiments, the anti-E7MC construct is formulated in a buffer comprising citrate, NaCl, acetate, succinate, glycine, polysorbate 80 (Tween 80), or any combination of the above. The In some embodiments, the anti-E7MC construct is formulated in a buffer comprising about 100 mM to about 150 mM glycine. In some embodiments, the anti-E7MC construct is formulated in a buffer comprising about 50 mM to about 100 mM NaCl. In some embodiments, the anti-E7MC construct is formulated in a buffer comprising about 10 mM to about 50 mM acetate. In some embodiments, the anti-E7MC construct is formulated in a buffer comprising about 10 mM to about 50 mM succinate. In some embodiments, the anti-E7MC construct is formulated in a buffer comprising about 0.005% to about 0.02
in vivo投与に使用される製剤は、無菌でなければならない。これは、例えば、無菌濾過膜を介した濾過によって容易に達成される。 Formulations used for in vivo administration must be sterile. This is easily accomplished, for example, by filtration through a sterile filtration membrane.
抗E7MC構築物を使用した処置方法
本発明の抗E7MC構築物および/または組成物は、例えば、HPV16−E7陽性がん(例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がん、肛門がん、膣がん、外陰部がん、陰茎がん、頭頸部がんまたは中咽頭がん)を含む、HPV16−E7発現と関連する疾患および/または障害(本明細書で「HPV16−E7陽性」疾患または障害とも呼ぶ)を処置するために、個体(例えば、ヒトなどの哺乳動物)に投与することができる。したがって、本出願は、一部の実施形態では、個体におけるHPV16−E7陽性疾患(例えば、がん、例えば、扁平上皮細胞癌)を処置する方法であって、個体に、有効量の、本明細書に記載の抗E7MC構築物のいずれか1つなどの抗E7MC抗体部分を含む抗E7MC構築物を含む組成物(例えば、医薬組成物)を投与するステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、組成物は、抗E7MC構築物と会合する細胞(例えば、エフェクター細胞)をさらに含む。一部の実施形態では、がんは、例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がん、肛門がん、膣がん、外陰部がん、陰茎がん、頭頸部がんまたは中咽頭がんからなる群から選択される。
Methods of treatment using anti-E7MC constructs Anti-E7MC constructs and / or compositions of the invention include, for example, HPV16-E7 positive cancers (eg, squamous cell carcinoma, cervical cancer, anal cancer, vaginal cancer, Diseases and / or disorders associated with HPV16-E7 expression, including vulvar cancer, penile cancer, head and neck cancer or oropharyngeal cancer (also referred to herein as “HPV16-E7 positive” disease or disorder) ) Can be administered to an individual (eg, a mammal such as a human). Accordingly, the application provides, in some embodiments, a method of treating an HPV16-E7 positive disease (eg, cancer, eg, squamous cell carcinoma) in an individual, wherein the individual has an effective amount of the present specification. Administering a composition (eg, pharmaceutical composition) comprising an anti-E7MC construct comprising an anti-E7MC antibody moiety, such as any one of the anti-E7MC constructs described in the literature. In some embodiments, the composition further comprises cells (eg, effector cells) associated with the anti-E7MC construct. In some embodiments, the cancer is, for example, from squamous cell carcinoma, cervical cancer, anal cancer, vaginal cancer, vulvar cancer, penile cancer, head and neck cancer, or oropharyngeal cancer. Selected from the group consisting of
例えば、一部の実施形態では、個体におけるHPV16−E7陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分を含む抗E7MC構築物を含む組成物を投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、HPV16−E7ペプチドは、HPV16−E7 11−19(配列番号4)である。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A02である。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A*02:01である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、多特異的(例えば、二重特異的)分子である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、組成物は、抗E7MC構築物と会合する細胞(例えば、エフェクター細胞)をさらに含む。一部の実施形態では、HPV16−E7陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がん、肛門がん、膣がん、外陰部がん、陰茎がん、頭頸部がんまたは中咽頭がんである。一部の実施形態では、がんは、HPV16−E7陽性扁平上皮細胞癌である。一部の実施形態では、個体はヒトである。
For example, in some embodiments, a method of treating an HPV16-E7 positive disease in an individual, wherein the individual specifically binds to an effective amount of a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein. There is provided a method comprising administering a composition comprising an anti-E7MC construct comprising an anti-E7MC antibody moiety. In some embodiments, the HPV16-E7 peptide is HPV16-E7 11-19 (SEQ ID NO: 4). In some embodiments, the MHC class I protein is HLA-A02. In some embodiments, the MHC class I protein is HLA-
一部の実施形態では、個体におけるHPV16−E7陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、HPV16−E7 11−19ペプチド(配列番号4)およびHLA−A*02:01を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分を含む抗E7MC構築物を含む組成物を投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、多特異的(例えば、二重特異的)分子である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、組成物は、抗E7MC構築物と会合する細胞(例えば、エフェクター細胞)をさらに含む。一部の実施形態では、HPV16−E7陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がん、肛門がん、膣がん、外陰部がん、陰茎がん、頭頸部がんまたは中咽頭がんである。一部の実施形態では、がんは、HPV16−E7陽性扁平上皮細胞癌である。一部の実施形態では、個体はヒトである。
In some embodiments, a method of treating an HPV16-E7 positive disease in an individual, wherein the individual is administered an effective amount of HPV16-E7 11-19 peptide (SEQ ID NO: 4) and HLA-
一部の実施形態では、個体におけるHPV16−E7陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分を含む抗E7MC構築物を含む組成物を投与するステップを含み、ここで、抗E7MC抗体部分は、i)配列番号183のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号184もしくは185のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号186〜188のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号189もしくは190のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号191のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約3(例えば、約1、2または3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、多特異的(例えば、二重特異的)分子である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、組成物は、抗E7MC構築物と会合する細胞(例えば、エフェクター細胞)をさらに含む。一部の実施形態では、HPV16−E7陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がん、肛門がん、膣がん、外陰部がん、陰茎がん、頭頸部がんまたは中咽頭がんである。一部の実施形態では、がんは、HPV16−E7陽性扁平上皮細胞癌である。一部の実施形態では、個体はヒトである。 In some embodiments, a method of treating HPV16-E7 positive disease in an individual, wherein the individual specifically binds to an effective amount of a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein. Administering a composition comprising an anti-E7MC construct comprising an antibody moiety, wherein the anti-E7MC antibody moiety comprises i) HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 183, or up to about 3 (eg, about Variants thereof containing amino acid substitutions, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 184 or 185, or up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids HC-CDR3 comprising the variant thereof, and the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 186-188, Or a heavy chain variable domain sequence comprising a variant thereof comprising substitutions of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids; and ii) LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 189 or 190 Or a variant thereof comprising a substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 191, or up to about 3 (eg, about 1 A method is provided comprising a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising amino acid substitutions (either 2 or 3). In some embodiments, the anti-E7MC construct is not naturally occurring. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a full length antibody. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a multispecific (eg, bispecific) molecule. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a chimeric antigen receptor. In some embodiments, the anti-E7MC construct is an immunoconjugate. In some embodiments, the composition further comprises cells (eg, effector cells) associated with the anti-E7MC construct. In some embodiments, the HPV 16-E7 positive disease is cancer. In some embodiments, the cancer is, for example, squamous cell carcinoma, cervical cancer, anal cancer, vaginal cancer, vulvar cancer, penile cancer, head and neck cancer, or oropharyngeal cancer . In some embodiments, the cancer is HPV16-E7 positive squamous cell carcinoma. In some embodiments, the individual is a human.
一部の実施形態では、個体におけるHPV16−E7陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号183のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号184または185のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号186〜188のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号189または190のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、および配列番号191のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む、抗E7MC抗体部分を含む抗E7MC構築物を含む組成物を投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、多特異的(例えば二重特異的)分子である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、組成物は、抗E7MC構築物と会合した細胞(例えば、エフェクター細胞)をさらに含む。一部の実施形態では、HPV16−E7陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がん、肛門がん、膣がん、外陰部がん、陰茎がん、頭頸部がんまたは中咽頭がんである。一部の実施形態では、がんは、HPV16−E7陽性扁平上皮細胞癌である。一部の実施形態では、個体はヒトである。 In some embodiments, a method of treating HPV16-E7 positive disease in an individual, wherein the individual specifically binds to an effective amount of a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein. An antibody portion, i) HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 183, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 184 or 185, and HC comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 186 to 188 An anti-E7MC comprising a heavy chain variable domain sequence comprising CDR3; and ii) an LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 189 or 190, and a light chain variable domain comprising LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 191 Administering a composition comprising an anti-E7MC construct comprising an antibody moiety. The law is provided. In some embodiments, the anti-E7MC construct is not naturally occurring. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a full length antibody. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a multispecific (eg, bispecific) molecule. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a chimeric antigen receptor. In some embodiments, the anti-E7MC construct is an immunoconjugate. In some embodiments, the composition further comprises cells (eg, effector cells) associated with the anti-E7MC construct. In some embodiments, the HPV 16-E7 positive disease is cancer. In some embodiments, the cancer is, for example, squamous cell carcinoma, cervical cancer, anal cancer, vaginal cancer, vulvar cancer, penile cancer, head and neck cancer, or oropharyngeal cancer . In some embodiments, the cancer is HPV16-E7 positive squamous cell carcinoma. In some embodiments, the individual is a human.
一部の実施形態では、個体におけるHPV16−E7陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4、もしくは5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4、もしくは5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3;または最大で約5(例えば、約1、2、3、4、もしくは5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4、もしくは5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4、もしくは5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント;および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3;または最大で約5(例えば、約1、2、3、4、もしくは5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメイン配列を含む抗E7MC抗体部分を含む抗E7MC構築物を含む組成物を投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、多特異的(例えば二重特異的)分子である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、組成物は、抗E7MC構築物と会合した細胞(例えば、エフェクター細胞)をさらに含む。一部の実施形態では、HPV16−E7陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がん、肛門がん、膣がん、外陰部がん、陰茎がん、頭頸部がんまたは中咽頭がんである。一部の実施形態では、がんは、HPV16−E7陽性扁平上皮細胞癌である。一部の実施形態では、個体はヒトである。 In some embodiments, a method of treating an HPV16-E7 positive disease in an individual, wherein the individual specifically binds to an effective amount of a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein. An antibody portion, i) HC-CDR1 comprising any one of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 57-77, or up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4, or 5) amino acids Variants thereof comprising HC-CDR2 comprising any one of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 78-98, or up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4, or 5) amino acids Variants thereof comprising substitutions; and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245; or up to about 5 For example, any of about 1, 2, 3, 4, or 5) a heavy chain variable domain sequence comprising a variant thereof containing amino acid substitutions; and ii) an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 120-140 and 246 LC-CDR1 comprising, or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4, or 5) amino acids; comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 141-161 LC-CDR2, or a variant thereof comprising substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4, or 5) amino acids; and any one of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250 LC-CDR3 comprising an amino acid sequence; or substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4, or 5) amino acids Comprising administering a composition comprising an anti E7MC constructs comprising anti E7MC antibody portion comprising a light chain variable domain sequence comprising Musono variants are provided. In some embodiments, the anti-E7MC construct is not naturally occurring. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a full length antibody. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a multispecific (eg, bispecific) molecule. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a chimeric antigen receptor. In some embodiments, the anti-E7MC construct is an immunoconjugate. In some embodiments, the composition further comprises cells (eg, effector cells) associated with the anti-E7MC construct. In some embodiments, the HPV 16-E7 positive disease is cancer. In some embodiments, the cancer is, for example, squamous cell carcinoma, cervical cancer, anal cancer, vaginal cancer, vulvar cancer, penile cancer, head and neck cancer, or oropharyngeal cancer . In some embodiments, the cancer is HPV16-E7 positive squamous cell carcinoma. In some embodiments, the individual is a human.
一部の実施形態では、個体におけるHPV16−E7陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1;配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2;および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3;または、HC−CDR配列内に最大で約5(例えば、約1、2、3、4、もしくは5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1;配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2;および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3;または、LC−CDR配列内に最大で約3(例えば、約1、2もしくは3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメイン配列を含む抗E7MC抗体部分を含む抗E7MC構築物を含む組成物を投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、多特異的(例えば二重特異的)分子である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、組成物は、抗E7MC構築物と会合した細胞(例えば、エフェクター細胞)をさらに含む。一部の実施形態では、HPV16−E7陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がん、肛門がん、膣がん、外陰部がん、陰茎がん、頭頸部がんまたは中咽頭がんである。一部の実施形態では、がんは、HPV16−E7陽性扁平上皮細胞癌である。一部の実施形態では、個体はヒトである。 In some embodiments, a method of treating HPV16-E7 positive disease in an individual, wherein the individual specifically binds to an effective amount of a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein. An antibody portion comprising: i) HC-CDR1 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 57-77; HC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98; and SEQ ID NOs: 99-119 HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of 244 and 245; or substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4, or 5) amino acids within the HC-CDR sequence A heavy chain variable domain sequence comprising the variant thereof; and ii) the amino acid of any one of SEQ ID NOs: 120-140 and 246 LC-CDR1 comprising the sequence; LC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 141-161; and LC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250; or An anti-E7MC construct comprising an anti-E7MC antibody portion comprising a light chain variable domain sequence comprising a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2 or 3) amino acids within the LC-CDR sequence A method is provided comprising administering a composition. In some embodiments, the anti-E7MC construct is not naturally occurring. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a full length antibody. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a multispecific (eg, bispecific) molecule. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a chimeric antigen receptor. In some embodiments, the anti-E7MC construct is an immunoconjugate. In some embodiments, the composition further comprises cells (eg, effector cells) associated with the anti-E7MC construct. In some embodiments, the HPV 16-E7 positive disease is cancer. In some embodiments, the cancer is, for example, squamous cell carcinoma, cervical cancer, anal cancer, vaginal cancer, vulvar cancer, penile cancer, head and neck cancer, or oropharyngeal cancer . In some embodiments, the cancer is HPV16-E7 positive squamous cell carcinoma. In some embodiments, the individual is a human.
一部の実施形態では、個体におけるHPV16−E7陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1;配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2;および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;ならびにii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1;配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2;および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン配列を含む抗E7MC抗体部分を含む抗E7MC構築物を含む組成物を投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、多特異的(例えば二重特異的)分子である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、組成物は、抗E7MC構築物と会合した細胞(例えば、エフェクター細胞)をさらに含む。一部の実施形態では、HPV16−E7陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がん、肛門がん、膣がん、外陰部がん、陰茎がん、頭頸部がんまたは中咽頭がんである。一部の実施形態では、がんは、HPV16−E7陽性扁平上皮細胞癌である。一部の実施形態では、個体はヒトである。 In some embodiments, a method of treating HPV16-E7 positive disease in an individual, wherein the individual specifically binds to an effective amount of a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein. An antibody portion comprising: i) HC-CDR1 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 57-77; HC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98; and SEQ ID NOs: 99-119 A heavy chain variable domain sequence comprising HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of 244 and 245; and ii) LC-CDR1 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 120-140 and 246; SEQ ID NO: 141 LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of any one of ˜161; and SEQ ID NOs: 162-1 And a method comprising administering an anti-E7MC construct comprising an anti-E7MC antibody portion comprising a light chain variable domain sequence comprising LC-CDR3 comprising an amino acid sequence of any one of 2 and 247-250. . In some embodiments, the anti-E7MC construct is not naturally occurring. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a full length antibody. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a multispecific (eg, bispecific) molecule. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a chimeric antigen receptor. In some embodiments, the anti-E7MC construct is an immunoconjugate. In some embodiments, the composition further comprises cells (eg, effector cells) associated with the anti-E7MC construct. In some embodiments, the HPV 16-E7 positive disease is cancer. In some embodiments, the cancer is, for example, squamous cell carcinoma, cervical cancer, anal cancer, vaginal cancer, vulvar cancer, penile cancer, head and neck cancer, or oropharyngeal cancer . In some embodiments, the cancer is HPV16-E7 positive squamous cell carcinoma. In some embodiments, the individual is a human.
一部の実施形態では、個体におけるHPV16−E7陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分を含む抗E7MC構築物を含む組成物を投与するステップを含み、ここで、抗E7MC抗体部分は、配列番号15〜35および233〜237のいずれか1つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれか)の配列同一性を有するそのバリアント、ならびに配列番号36〜56および238〜243のいずれか1つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれか)の配列同一性を有するそのバリアントを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、多特異的(例えば、二重特異的)分子である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、組成物は、抗E7MC構築物と会合する細胞(例えば、エフェクター細胞)をさらに含む。一部の実施形態では、HPV16−E7陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がん、肛門がん、膣がん、外陰部がん、陰茎がん、頭頸部がんまたは中咽頭がんである。一部の実施形態では、がんは、HPV16−E7陽性扁平上皮細胞癌である。一部の実施形態では、個体はヒトである。 In some embodiments, a method of treating HPV16-E7 positive disease in an individual, wherein the individual specifically binds to an effective amount of a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein. Administering a composition comprising an anti-E7MC construct comprising an antibody moiety, wherein the anti-E7MC antibody moiety comprises a heavy chain variable domain comprising an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 15-35 and 233-237; Or a variant thereof having at least about 95% sequence identity, such as at least about 96%, 97%, 98% or 99%, and any one amino acid of SEQ ID NOs: 36-56 and 238-243 A light chain variable domain comprising the sequence, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97% Including its variants with 98% or 99% sequence identity either), a method is provided. In some embodiments, the anti-E7MC construct is not naturally occurring. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a full length antibody. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a multispecific (eg, bispecific) molecule. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a chimeric antigen receptor. In some embodiments, the anti-E7MC construct is an immunoconjugate. In some embodiments, the composition further comprises cells (eg, effector cells) associated with the anti-E7MC construct. In some embodiments, the HPV 16-E7 positive disease is cancer. In some embodiments, the cancer is, for example, squamous cell carcinoma, cervical cancer, anal cancer, vaginal cancer, vulvar cancer, penile cancer, head and neck cancer, or oropharyngeal cancer . In some embodiments, the cancer is HPV16-E7 positive squamous cell carcinoma. In some embodiments, the individual is a human.
一部の実施形態では、個体におけるHPV16−E7陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分を含む抗E7MC構築物を含む組成物を投与するステップを含み、ここで、抗E7MC抗体部分は、配列番号15〜35および233〜237のいずれか1つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、ならびに配列番号36〜56および238〜243のいずれか1つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、多特異的(例えば、二重特異的)分子である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、組成物は、抗E7MC構築物と会合する細胞(例えば、エフェクター細胞)をさらに含む。一部の実施形態では、HPV16−E7陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がん、肛門がん、膣がん、外陰部がん、陰茎がん、頭頸部がんまたは中咽頭がんである。一部の実施形態では、がんは、HPV16−E7陽性扁平上皮細胞癌である。一部の実施形態では、個体はヒトである。 In some embodiments, a method of treating HPV16-E7 positive disease in an individual, wherein the individual specifically binds to an effective amount of a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein. Administering a composition comprising an anti-E7MC construct comprising an antibody moiety, wherein the anti-E7MC antibody moiety comprises a heavy chain variable domain comprising an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 15-35 and 233-237; And a light chain variable domain comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 36-56 and 238-243 is provided. In some embodiments, the anti-E7MC construct is not naturally occurring. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a full length antibody. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a multispecific (eg, bispecific) molecule. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a chimeric antigen receptor. In some embodiments, the anti-E7MC construct is an immunoconjugate. In some embodiments, the composition further comprises cells (eg, effector cells) associated with the anti-E7MC construct. In some embodiments, the HPV 16-E7 positive disease is cancer. In some embodiments, the cancer is, for example, squamous cell carcinoma, cervical cancer, anal cancer, vaginal cancer, vulvar cancer, penile cancer, head and neck cancer, or oropharyngeal cancer . In some embodiments, the cancer is HPV16-E7 positive squamous cell carcinoma. In some embodiments, the individual is a human.
上記のHPV16−E7陽性疾患を処置するための方法のいずれかの一部の実施形態では、抗E7MC構築物を、個体への投与前に細胞(例えば、免疫細胞、例えばT細胞)とコンジュゲートする。したがって、例えば、個体におけるHPV16−E7陽性疾患を処置する方法であって、a)本明細書に記載の抗E7MC構築物のいずれか1つを細胞(例えば、免疫細胞、例えばT細胞)とコンジュゲートして抗E7MC構築物/細胞コンジュゲートを形成するステップ、およびb)個体に、有効量の、抗E7MC構築物/細胞コンジュゲートを含む組成物を投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、細胞は、個体に由来する。一部の実施形態では、細胞は、個体に由来しない。一部の実施形態では、抗E7MC構築物と細胞を、細胞の表面上の分子との共有結合によってコンジュゲートする。一部の実施形態では、抗E7MC構築物と細胞を、細胞の表面上の分子との非共有結合によってコンジュゲートする。一部の実施形態では、抗E7MC構築物を、抗E7MC構築物の一部分を細胞の外膜に挿入することによって細胞とコンジュゲートする。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、天然に存在しない。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、全長抗体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、多特異的(例えば二重特異的)分子である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、キメラ抗原受容体である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物は、イムノコンジュゲートである。一部の実施形態では、HPV16−E7陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がん、肛門がん、膣がん、外陰部がん、陰茎がん、頭頸部がんまたは中咽頭がんである。一部の実施形態では、がんは、HPV16−E7陽性扁平上皮細胞癌である。一部の実施形態では、個体はヒトである。 In some embodiments of any of the methods for treating HPV16-E7 positive disease described above, the anti-E7MC construct is conjugated to a cell (eg, immune cell, eg, T cell) prior to administration to the individual. . Thus, for example, a method of treating an HPV16-E7 positive disease in an individual comprising: a) conjugating any one of the anti-E7MC constructs described herein with a cell (eg, an immune cell, eg, a T cell) Thus forming an anti-E7MC construct / cell conjugate, and b) administering to the individual an effective amount of a composition comprising the anti-E7MC construct / cell conjugate. In some embodiments, the cell is from an individual. In some embodiments, the cell is not derived from an individual. In some embodiments, the anti-E7MC construct and the cell are conjugated by covalent linkage with a molecule on the surface of the cell. In some embodiments, the anti-E7MC construct and the cell are conjugated by non-covalent binding to a molecule on the surface of the cell. In some embodiments, the anti-E7MC construct is conjugated to the cell by inserting a portion of the anti-E7MC construct into the outer membrane of the cell. In some embodiments, the anti-E7MC construct is not naturally occurring. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a full length antibody. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a multispecific (eg, bispecific) molecule. In some embodiments, the anti-E7MC construct is a chimeric antigen receptor. In some embodiments, the anti-E7MC construct is an immunoconjugate. In some embodiments, the HPV 16-E7 positive disease is cancer. In some embodiments, the cancer is, for example, squamous cell carcinoma, cervical cancer, anal cancer, vaginal cancer, vulvar cancer, penile cancer, head and neck cancer, or oropharyngeal cancer . In some embodiments, the cancer is HPV16-E7 positive squamous cell carcinoma. In some embodiments, the individual is a human.
一部の実施形態では、個体は、哺乳動物(例えば、ヒト、非ヒト霊長類、ラット、マウス、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコなど)である。一部の実施形態では、個体はヒトである。一部の実施形態では、個体は、臨床患者、臨床試験の志願者、実験動物などである。一部の実施形態では、個体は、約60歳未満(例えば、約50歳未満、約40歳未満、約30歳未満、約25歳未満、約20歳未満、約15歳未満、または約10歳未満のいずれかを含む)である。一部の実施形態では、個体は、約60歳超(例えば、約70歳超、約80歳超、約90歳超、または約100歳超のいずれかを含む)である。一部の実施形態では、個体は、本明細書に記載の疾患または障害(例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がん、肛門がん、膣がん、外陰部がん、陰茎がん、頭頸部がんまたは中咽頭がん)のうちの1つまたは複数と診断されているまたはそれに遺伝的にかかりやすい。一部の実施形態では、個体は、1つまたは複数の本明細書に記載の疾患または障害に関連づけられる1つまたは複数の危険因子を有する。 In some embodiments, the individual is a mammal (eg, a human, non-human primate, rat, mouse, cow, horse, pig, sheep, goat, dog, cat, etc.). In some embodiments, the individual is a human. In some embodiments, the individual is a clinical patient, a clinical trial volunteer, a laboratory animal, or the like. In some embodiments, the individual is less than about 60 years old (e.g., less than about 50 years old, less than about 40 years old, less than about 30 years old, less than about 25 years old, less than about 20 years old, less than about 15 years old, or about 10 years old). Any one under age). In some embodiments, the individual is over about 60 years old (eg, including any of over about 70 years old, over about 80 years old, over about 90 years old, or over about 100 years old). In some embodiments, the individual has a disease or disorder described herein (eg, squamous cell carcinoma, cervical cancer, anal cancer, vaginal cancer, vulvar cancer, penile cancer, head and neck Or one or more of the cancers of the oropharynx) or is genetically susceptible to it. In some embodiments, the individual has one or more risk factors associated with one or more of the diseases or disorders described herein.
本出願は、一部の実施形態では、個体において、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体をその表面上に提示する細胞に抗E7MC構築物(例えば、本明細書に記載の抗E7MC構築物のいずれか1つ)を送達する方法であって、個体に、抗E7MC構築物を含む組成物を投与するステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、送達される抗E7MC構築物は、細胞(例えば、エフェクター細胞、例えば、T細胞)と会合している。 The application provides, in some embodiments, an anti-E7MC construct (eg, an anti-E7MC described herein) in a cell that presents on its surface a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein in an individual. A method of delivering any one of the constructs) comprising administering to an individual a composition comprising an anti-E7MC construct. In some embodiments, the anti-E7MC construct to be delivered is associated with a cell (eg, an effector cell, eg, a T cell).
HPV16−E7陽性がん(例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がん、肛門がん、膣がん、外陰部がん、陰茎がん、頭頸部がんまたは中咽頭がん)またはHPV16−E7発現を示す任意の他の疾患およびそれらの疾患の臨床像に関する多くの診断方法が当技術分野で公知である。そのような方法としては、これらに限定されないが、例えば、免疫組織化学的検査、PCR、および蛍光in situハイブリダイゼーション(FISH)が挙げられる。 HPV16-E7 positive cancer (eg squamous cell carcinoma, cervical cancer, anal cancer, vaginal cancer, vulvar cancer, penile cancer, head and neck cancer or oropharyngeal cancer) or HPV16-E7 Many diagnostic methods are known in the art for any other disease that exhibits expression and the clinical picture of those diseases. Such methods include, but are not limited to, immunohistochemical examination, PCR, and fluorescence in situ hybridization (FISH), for example.
一部の実施形態では、HPV16−E7発現を伴う疾患または障害を処置するために、本発明の抗E7MC構築物および/または組成物を第2の薬剤、第3の薬剤、または第4の薬剤(例えば、抗新生物剤、成長阻害剤、細胞傷害剤、または化学療法剤を含む)と組み合わせて投与する。一部の実施形態では、抗E7MC構築物を、MHCクラスIタンパク質の発現を増大させ、かつ/またはMHCクラスIタンパク質によるHPV16−E7ペプチドの表面提示を増強する薬剤と組み合わせて投与する。一部の実施形態では、薬剤として、例えば、IFN受容体アゴニスト、Hsp90阻害剤、p53発現のエンハンサー、および化学療法剤が挙げられる。一部の実施形態では、薬剤は、例えばIFNγ、IFNβ、およびIFNαを含むIFN受容体アゴニストである。一部の実施形態では、薬剤は、例えばタネスピマイシン(17−AAG)、アルベスピマイシン(17−DMAG)、レタスピマイシン(IPI−504)、IPI−493、CNF2024/BIIB021、MPC−3100、Debio 0932(CUDC−305)、PU−H71、ガネテスピブ(STA−9090)、NVP−AUY922(VER−52269)、HSP990、KW−2478、AT13387、SNX−5422、DS−2248、およびXL888を含むHsp90阻害剤である。一部の実施形態では、薬剤は、例えば5−フルオロウラシルおよびヌトリン−3を含むp53発現のエンハンサーである。一部の実施形態では、薬剤は、例えばトポテカン、エトポシド、シスプラチン、パクリタキセル、およびビンブラスチンを含む化学療法剤である。 In some embodiments, an anti-E7MC construct and / or composition of the invention is treated with a second agent, third agent, or fourth agent (to treat a disease or disorder associated with HPV16-E7 expression ( For example, an antineoplastic agent, growth inhibitory agent, cytotoxic agent, or chemotherapeutic agent). In some embodiments, the anti-E7MC construct is administered in combination with an agent that increases the expression of MHC class I protein and / or enhances the surface presentation of HPV16-E7 peptide by MHC class I protein. In some embodiments, agents include, for example, IFN receptor agonists, Hsp90 inhibitors, enhancers of p53 expression, and chemotherapeutic agents. In some embodiments, the agent is an IFN receptor agonist, including, for example, IFNγ, IFNβ, and IFNα. In some embodiments, the agent is, for example, tanespimycin (17-AAG), alvespimycin (17-DMAG), letaspimycin (IPI-504), IPI-493, CNF2024 / BIIB021, MPC-3100, Hsp90 inhibition including Debio 0932 (CUDC-305), PU-H71, Ganetespib (STA-9090), NVP-AUY922 (VER-52269), HSP990, KW-2478, AT13387, SNX-5422, DS-2248, and XL888 It is an agent. In some embodiments, the agent is an enhancer of p53 expression including, for example, 5-fluorouracil and nutrine-3. In some embodiments, the agent is a chemotherapeutic agent including, for example, topotecan, etoposide, cisplatin, paclitaxel, and vinblastine.
一部の実施形態では、個体におけるHPV16−E7陽性疾患を処置する方法であって、ここで、HPV16−E7を発現する細胞が、通常はHPV16−E7タンパク質およびMHCクラスIタンパク質を含む複合体をそれらの表面上に提示しないまたは比較的低レベルで提示するものである、個体に、抗E7MC構築物を含む組成物を、MHCクラスIタンパク質の発現を増大させ、かつ/またはMHCクラスIタンパク質によるHPV16−E7ペプチドの表面提示を増強する薬剤と組み合わせて投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、薬剤として、例えば、IFN受容体アゴニスト、Hsp90阻害剤、p53発現のエンハンサー、および化学療法剤が挙げられる。一部の実施形態では、薬剤は、例えばIFNγ、IFNβ、およびIFNαを含むIFN受容体アゴニストである。一部の実施形態では、薬剤は、例えばタネスピマイシン(17−AAG)、アルベスピマイシン(17−DMAG)、レタスピマイシン(IPI−504)、IPI−493、CNF2024/BIIB021、MPC−3100、Debio 0932(CUDC−305)、PU−H71、ガネテスピブ(STA−9090)、NVP−AUY922(VER−52269)、HSP990、KW−2478、AT13387、SNX−5422、DS−2248、およびXL888を含むHsp90阻害剤である。一部の実施形態では、薬剤は、例えば5−フルオロウラシルおよびヌトリン−3を含むp53発現のエンハンサーである。一部の実施形態では、薬剤は、例えばトポテカン、エトポシド、シスプラチン、パクリタキセル、およびビンブラスチンを含む化学療法剤である。 In some embodiments, a method of treating HPV16-E7 positive disease in an individual, wherein cells expressing HPV16-E7 typically comprise a complex comprising HPV16-E7 protein and MHC class I protein. Individuals that do not present on their surface or that present at a relatively low level are given a composition comprising an anti-E7MC construct to increase expression of MHC class I protein and / or HPV16 by MHC class I protein. -A method is provided comprising administering in combination with an agent that enhances the surface presentation of the E7 peptide. In some embodiments, agents include, for example, IFN receptor agonists, Hsp90 inhibitors, enhancers of p53 expression, and chemotherapeutic agents. In some embodiments, the agent is an IFN receptor agonist, including, for example, IFNγ, IFNβ, and IFNα. In some embodiments, the agent is, for example, tanespimycin (17-AAG), alvespimycin (17-DMAG), letaspimycin (IPI-504), IPI-493, CNF2024 / BIIB021, MPC-3100, Hsp90 inhibition including Debio 0932 (CUDC-305), PU-H71, Ganetespib (STA-9090), NVP-AUY922 (VER-52269), HSP990, KW-2478, AT13387, SNX-5422, DS-2248, and XL888 It is an agent. In some embodiments, the agent is an enhancer of p53 expression including, for example, 5-fluorouracil and nutrine-3. In some embodiments, the agent is a chemotherapeutic agent including, for example, topotecan, etoposide, cisplatin, paclitaxel, and vinblastine.
がんの処置は、例えば、腫瘍の退縮、腫瘍の重量またはサイズの減少、進行までの時間、生存の持続時間、無増悪生存期間、奏効率、応答の持続時間、生活の質、タンパク質の発現および/または活性によって評価することができる。例えば放射線画像法による応答の測定を含む、療法の有効性を決定するための手法を用いることができる。 Cancer treatment includes, for example, tumor regression, tumor weight or size reduction, time to progression, duration of survival, progression-free survival, response rate, duration of response, quality of life, protein expression And / or by activity. Techniques for determining the effectiveness of the therapy can be used including, for example, measurement of response by radiographic imaging.
一部の実施形態では、処置の有効性は、腫瘍成長阻害の百分率(%TGI)として測定され、これは、方程式100−(T/C×100)(式中、Tは、処置される腫瘍の相対的な腫瘍体積の平均であり、Cは、無処置の腫瘍の相対的な腫瘍体積の平均である)を使用して算出される。一部の実施形態では、%TGIは、約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、または95%超である。
In some embodiments, the effectiveness of treatment is measured as a percentage of tumor growth inhibition (% TGI), which is equal to
抗E7MC構築物組成物の投薬および投与方法
個体(例えば、ヒト)に投与される抗E7MC構築物組成物の用量は、特定の組成物、投与形式、および処置される疾患の型によって変動し得る。一部の実施形態では、組成物の量は、目的の応答(例えば、部分奏効または完全奏効)をもたらすために有効な量である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物組成物の量は、個体における完全奏効をもたらすために十分である。一部の実施形態では、抗E7MC構築物組成物の量は、個体における部分奏効をもたらすために十分である。一部の実施形態では、投与される抗E7MC構築物組成物の量(例えば単独で投与した場合)は、抗E7MC構築物組成物を用いて処置された個体の集団の中で、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約64%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、または約90%のいずれかを超える全体の奏効率をもたらすために十分である。本明細書に記載の方法の処置に対する個体の応答は、例えば、RECISTレベルに基づいて決定することができる。
Methods of Dosing and Administering the Anti-E7MC Construct Composition The dose of the anti-E7MC construct composition administered to an individual (eg, a human) can vary depending on the particular composition, the mode of administration, and the type of disease being treated. In some embodiments, the amount of the composition is an amount effective to produce the desired response (eg, partial response or complete response). In some embodiments, the amount of anti-E7MC construct composition is sufficient to provide a complete response in the individual. In some embodiments, the amount of anti-E7MC construct composition is sufficient to provide a partial response in the individual. In some embodiments, the amount of anti-E7MC construct composition administered (eg, when administered alone) is about 20%, about 20% of the population of individuals treated with the anti-E7MC construct composition. 25%, about 30%, about 35%, about 40%, about 45%, about 50%, about 55%, about 60%, about 64%, about 65%, about 70%, about 75%, about 80% Sufficient to provide an overall response rate greater than either about 85% or about 90%. An individual's response to treatment with the methods described herein can be determined, for example, based on RECIST levels.
一部の実施形態では、組成物の量は、個体の無増悪生存期間を延長するために十分である。一部の実施形態では、組成物の量は、個体の全生存期間を延長するために十分である。一部の実施形態では、組成物の量(例えば、単独で(along)投与した場合)は、抗E7MC構築物組成物を用いて処置された個体の集団の中で、約50%、約60%、約70%、または約77%のいずれかを超える臨床的利益をもたらすために十分である。 In some embodiments, the amount of the composition is sufficient to prolong the progression free survival of the individual. In some embodiments, the amount of the composition is sufficient to prolong the overall survival of the individual. In some embodiments, the amount of the composition (eg, when administered alone) is about 50%, about 60% in the population of individuals treated with the anti-E7MC construct composition. Sufficient to provide a clinical benefit of greater than either about 70%, or about 77%.
一部の実施形態では、組成物の量は、単独で、または第2の薬剤、第3の薬剤、および/または第4の薬剤と組み合わせて、処置前の同じ被験体における対応する腫瘍サイズ、がん細胞の数、もしくは腫瘍成長速度と比較して、または処置を受けていない他の被験体における対応する活性と比較して、少なくとも約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%、約95%または約100%のいずれかだけ、腫瘍のサイズを縮小させる、がん細胞の数を減少させる、または腫瘍の成長速度を低下させるために十分な量である。精製された酵素を用いたin vitroアッセイ、細胞に基づくアッセイ、動物モデル、またはヒト試験などの標準の方法を使用して、この効果の大きさを測定することができる。 In some embodiments, the amount of the composition alone or in combination with the second agent, third agent, and / or fourth agent, the corresponding tumor size in the same subject prior to treatment, At least about 10%, about 20%, about 30%, about 40% compared to the number of cancer cells, or tumor growth rate, or compared to the corresponding activity in other subjects not receiving treatment Reduce tumor size, reduce the number of cancer cells, or about 50%, about 60%, about 70%, about 80%, about 90%, about 95% or about 100%, or An amount sufficient to reduce the growth rate of the tumor. The magnitude of this effect can be measured using standard methods such as in vitro assays with purified enzymes, cell-based assays, animal models, or human tests.
一部の実施形態では、組成物中の抗E7MC構築物(例えば、全長抗E7MC抗体、多特異的抗E7MC分子、抗E7MC CAR、または抗E7MCイムノコンジュゲート)の量は、毒物学的影響(すなわち、臨床的に許容されるレベルの毒性を超える影響)を誘導するレベルを下回る、または、組成物を個体に投与した場合に、潜在的な副作用を制御または耐容することができるレベルである。 In some embodiments, the amount of anti-E7MC construct (eg, full-length anti-E7MC antibody, multispecific anti-E7MC molecule, anti-E7MC CAR, or anti-E7MC immunoconjugate) in the composition is a toxicological effect (ie, A level that induces (beyond a clinically acceptable level of toxicity), or a level at which potential side effects can be controlled or tolerated when the composition is administered to an individual.
一部の実施形態では、組成物の量は、同じ投薬レジメンに従った組成物の最大耐量(MTD)付近である。一部の実施形態では、組成物の量は、MTDの約80%、約90%、約95%、または約98%のいずれかを超える。 In some embodiments, the amount of the composition is near the maximum tolerated dose (MTD) of the composition according to the same dosing regimen. In some embodiments, the amount of the composition is greater than either about 80%, about 90%, about 95%, or about 98% of the MTD.
一部の実施形態では、組成物中の抗E7MC構築物(例えば、全長抗E7MC抗体、多特異的抗E7MC分子、抗E7MC CAR、または抗E7MCイムノコンジュゲート)の量は、約0.001μg〜約1000μgの範囲に含まれる。 In some embodiments, the amount of anti-E7MC construct (eg, full length anti-E7MC antibody, multispecific anti-E7MC molecule, anti-E7MC CAR, or anti-E7MC immunoconjugate) in the composition is from about 0.001 μg to about It is included in the range of 1000 μg.
上記の態様のいずれかの一部の実施形態では、組成物中の抗E7MC構築物(例えば、全長抗E7MC抗体、多特異的抗E7MC分子、抗E7MC CAR、または抗E7MCイムノコンジュゲート)の有効量は、総体重1kg当たり約0.1μg〜約100mgの範囲である。 In some embodiments of any of the above aspects, an effective amount of an anti-E7MC construct (eg, full-length anti-E7MC antibody, multispecific anti-E7MC molecule, anti-E7MC CAR, or anti-E7MC immunoconjugate) in the composition. Is in the range of about 0.1 μg to about 100 mg per kg of total body weight.
抗E7MC構築物組成物は、個体(例えば、ヒト)に、例えば静脈内、動脈内、腹腔内、肺内、経口、吸入、小胞内、筋肉内、気管内、皮下、眼内、髄腔内、経粘膜、および経皮を含む種々の経路によって投与することができる。一部の実施形態では、組成物の持続的継続的放出製剤を使用することができる。一部の実施形態では、組成物を静脈内に投与する。一部の実施形態では、組成物を門脈内に投与する。一部の実施形態では、組成物を動脈内に投与する。一部の実施形態では、組成物を腹腔内に投与する。一部の実施形態では、組成物を肝内に投与する。一部の実施形態では、組成物を肝動脈注入によって投与する。 The anti-E7MC construct composition can be administered to an individual (eg, a human), for example, intravenous, intraarterial, intraperitoneal, intrapulmonary, oral, inhalation, intravesicular, intramuscular, intratracheal, subcutaneous, intraocular, intrathecal. Can be administered by a variety of routes including transmucosal and transdermal. In some embodiments, sustained continuous release formulations of the compositions can be used. In some embodiments, the composition is administered intravenously. In some embodiments, the composition is administered intraportally. In some embodiments, the composition is administered intraarterially. In some embodiments, the composition is administered intraperitoneally. In some embodiments, the composition is administered intrahepatically. In some embodiments, the composition is administered by hepatic artery infusion.
抗E7MC CARエフェクター細胞療法
本出願は、エフェクター細胞(例えば、一次T細胞)の特異性を、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に再指向するための、抗E7MC CARの使用方法も提供する。したがって、本発明は、哺乳動物においてE7MCを提示している細胞を含む標的細胞集団または組織に対するエフェクター細胞媒介性応答(例えば、T細胞性免疫応答)を刺激する方法であって、哺乳動物に、抗E7MC CARを発現するエフェクター細胞(例えば、T細胞)を投与するステップを含む方法も提供する。
Anti-E7MC CAR Effector Cell Therapy This application relates to the use of anti-E7MC CAR to redirect the specificity of effector cells (eg, primary T cells) to complexes comprising HPV16-E7 peptides and MHC class I proteins. Also provide. Accordingly, the present invention provides a method of stimulating an effector cell-mediated response (eg, a T cell-mediated immune response) to a target cell population or tissue comprising cells presenting E7MC in a mammal comprising the steps of: Also provided is a method comprising administering an effector cell (eg, T cell) that expresses an anti-E7MC CAR.
抗E7MC CARを発現する抗E7MC CARエフェクター細胞(例えば、T細胞)を、それを必要とするレシピエントに注入することができる。注入された細胞は、レシピエントにおいてE7MCを提示している細胞を死滅させることができる。一部の実施形態では、抗体療法とは異なり、抗E7MC CARエフェクター細胞(例えば、T細胞)をin vivoで複製することができ、その結果、持続的な腫瘍制御をもたらすことができる長期間の持続性がもたらされる。 Anti-E7MC CAR effector cells (eg, T cells) that express anti-E7MC CAR can be injected into a recipient in need thereof. The injected cells can kill cells presenting E7MC in the recipient. In some embodiments, unlike antibody therapy, anti-E7MC CAR effector cells (eg, T cells) can replicate in vivo, resulting in long-term tumor control that can result in sustained tumor control. Sustainability is provided.
一部の実施形態では、抗E7MC CARエフェクター細胞は、ロバストなin vivo T細胞の拡大増殖(expansion)を受けることができ、長時間にわたって持続可能な抗E7MC CAR T細胞である。一部の実施形態では、本発明の抗E7MC CAR T細胞は、再活性化されてあらゆるさらなる腫瘍形成または成長を阻害することができる、特異的なメモリーT細胞へと発生する。 In some embodiments, the anti-E7MC CAR effector cell is an anti-E7MC CAR T cell that is capable of undergoing robust in vivo T cell expansion and is sustainable over time. In some embodiments, the anti-E7MC CAR T cells of the invention develop into specific memory T cells that can be reactivated to inhibit any further tumor formation or growth.
本発明の抗E7MC CAR T細胞はまた、哺乳動物におけるex vivo免疫および/またはin vivo療法のためのワクチンの一種としても機能し得る。一部の実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。 The anti-E7MC CAR T cells of the present invention may also function as a type of vaccine for ex vivo immunization and / or in vivo therapy in mammals. In some embodiments, the mammal is a human.
ex vivo免疫に関しては、細胞を哺乳動物へと投与する前にin vitroにおいて以下のうちの少なくとも(of least)1つを行う:i)細胞の拡大増殖、ii)抗E7MC CARをコードする核酸の細胞への導入、および/またはiii)細胞の凍結保存。 For ex vivo immunization, at least one of the following is performed in vitro prior to administering the cell to the mammal: i) expansion of the cell, ii) the nucleic acid encoding the anti-E7MC CAR. Introduction into cells and / or iii) cryopreservation of cells.
ex vivoにおける手順は当技術分野で周知であり、以下でより詳細に考察する。簡単に述べると、細胞を哺乳動物(好ましくはヒト)から単離し、本明細書に開示されている抗E7MC CARを発現するベクターを用いて遺伝子改変する(すなわち、in vitroにおいて形質導入またはトランスフェクトする)。抗E7MC CAR細胞を哺乳動物レシピエントに投与して、治療利益をもたらすことができる。哺乳動物レシピエントはヒトであってよく、抗E7MC CAR細胞は、レシピエントに関して自己由来であってよい。あるいは、細胞は、レシピエントに関して同種異系、同系または異種であってよい。 Ex vivo procedures are well known in the art and are discussed in more detail below. Briefly, cells are isolated from a mammal (preferably a human) and genetically modified (ie, transduced or transfected in vitro) using the vectors expressing the anti-E7MC CAR disclosed herein. To do). Anti-E7MC CAR cells can be administered to a mammalian recipient to provide a therapeutic benefit. The mammalian recipient can be a human and the anti-E7MC CAR cells can be autologous with respect to the recipient. Alternatively, the cells may be allogeneic, syngeneic or xenogeneic with respect to the recipient.
参照により本明細書に組み込まれる米国特許第5,199,942号に記載されている造血幹細胞および造血前駆細胞のex vivoにおける拡大増殖の手順を本発明の細胞に適用することができる。他の適切な方法は当技術分野で公知であり、したがって、本発明は、細胞のex vivoにおける拡大増殖のいかなる特定の方法にも限定されない。簡単に述べると、T細胞のex vivoにおける培養および拡大増殖は、(1)哺乳動物由来のCD34+造血幹細胞および造血前駆細胞を末梢血回収物または骨髄外植片から採取するステップ;ならびに(2)そのような細胞をex vivoにおいて拡大増殖させるステップを含む。米国特許第5,199,942号に記載されている細胞成長因子に加えて、flt3−L、IL−1、IL−3およびc−kitリガンドなどの他の因子を細胞の培養および拡大増殖に使用することができる。 The procedure for ex vivo expansion of hematopoietic stem cells and hematopoietic progenitor cells described in US Pat. No. 5,199,942, incorporated herein by reference, can be applied to the cells of the invention. Other suitable methods are known in the art, and therefore the present invention is not limited to any particular method of expansion of cells ex vivo. Briefly, ex vivo culture and expansion of T cells comprises (1) collecting mammalian-derived CD34 + hematopoietic stem cells and hematopoietic progenitor cells from a peripheral blood collection or bone marrow explant; and (2 ) Expanding such cells ex vivo. In addition to the cell growth factors described in US Pat. No. 5,199,942, other factors such as flt3-L, IL-1, IL-3 and c-kit ligand are used for cell culture and expansion. Can be used.
ex vivo免疫に関して細胞に基づくワクチンを使用することに加えて、本発明は、患者において抗原を対象とする免疫応答を引き出すためのin vivo免疫のための組成物および方法も提供する。 In addition to using cell-based vaccines for ex vivo immunity, the present invention also provides compositions and methods for in vivo immunization to elicit an immune response directed against an antigen in a patient.
本発明の抗E7MC CARエフェクター細胞(例えば、T細胞)は、単独で、あるいは、希釈剤および/またはIL−2もしくは他のサイトカインなどの他の成分または細胞集団と組み合わせた医薬組成物としてのいずれかで投与することができる。簡単に述べると、本発明の医薬組成物は、抗E7MC CARエフェクター細胞(例えば、T細胞)を、1つまたは複数の薬学的にまたは生理的に許容されるキャリア、希釈剤または賦形剤と組み合わせて含み得る。そのような組成物は、例えば中性緩衝食塩水、リン酸緩衝食塩水などの緩衝液;グルコース、マンノース、スクロースまたはデキストラン、マンニトールなどの炭水化物;タンパク質;ポリペプチドまたはグリシンなどのアミノ酸;抗酸化剤;EDTAまたはグルタチオンなどのキレート剤;アジュバント(例えば、水酸化アルミニウム);ならびに防腐剤を含み得る。一部の実施形態では、抗E7MC CARエフェクター細胞(例えば、T細胞)組成物を静脈内投与用に製剤化する。 The anti-E7MC CAR effector cells (eg, T cells) of the present invention can be either alone or as a pharmaceutical composition in combination with diluents and / or other components or cell populations such as IL-2 or other cytokines. Can be administered. Briefly, the pharmaceutical composition of the present invention comprises anti-E7MC CAR effector cells (eg, T cells) with one or more pharmaceutically or physiologically acceptable carriers, diluents or excipients. May be included in combination. Such compositions include, for example, buffers such as neutral buffered saline, phosphate buffered saline; carbohydrates such as glucose, mannose, sucrose or dextran, mannitol; proteins; amino acids such as polypeptides or glycine; antioxidants A chelating agent such as EDTA or glutathione; an adjuvant (eg, aluminum hydroxide); and a preservative. In some embodiments, the anti-E7MC CAR effector cell (eg, T cell) composition is formulated for intravenous administration.
投与される本発明の抗E7MC CARエフェクター細胞(例えば、T細胞)組成物の正確な量は、医師が患者(被験体)の年齢、重量、腫瘍サイズ、感染または転移の程度、および状態の個々の差異を考慮に入れて決定することができる。一部の実施形態では、抗E7MC CARエフェクター細胞(例えば、T細胞)を含む医薬組成物を、体重1kg当たり細胞約104〜約109個、例えば体重1kg当たり細胞約104〜約105個、約105〜約106個、約106〜約107個、約107〜約108個、または約108〜約109個(これらの範囲内の全ての整数値を含めて)のいずれかの投与量で投与する。抗E7MC CARエフェクター細胞(例えば、T細胞)組成物は、これらの投与量で複数回投与することもできる。細胞は、免疫療法において一般に公知の注入技法を使用することによって投与することができる(例えば、Rosenbergら、New Eng. J. of Med.、319巻:1676頁、1988年を参照されたい)。特定の患者に最適な投与量および処置レジメンは、医薬の当業者が、患者を疾患の徴候についてモニタリングし、それに応じて処置を調整することによって容易に決定することができる。 The exact amount of the anti-E7MC CAR effector cell (eg, T cell) composition of the invention to be administered will depend on the physician's age, weight, tumor size, degree of infection or metastasis, and individuality of the condition. Can be determined by taking into account the differences. In some embodiments, the anti E7MC CAR effector cells (eg, T cells) a pharmaceutical composition comprising a 4 to about 10 9 body weight 1kg per cell to about 10, such as weight 1kg per cell to about 104 to about 105 including pieces, about 10 5 to about 10 6, about 106 to about 107, from about 10 7 to about 10 8, or about 10 8 to about 10 9 (all integer values within these ranges )) At any dose. The anti-E7MC CAR effector cell (eg, T cell) composition can also be administered multiple times at these dosages. Cells can be administered by using generally known infusion techniques in immunotherapy (see, eg, Rosenberg et al., New Eng. J. of Med., 319: 1676, 1988). Optimal dosages and treatment regimens for a particular patient can be readily determined by one skilled in the art of medicine by monitoring the patient for signs of disease and adjusting treatment accordingly.
一部の実施形態では、活性化した抗E7MC CAR T細胞を被験体に投与し、その後、血液を再度抜き取り(またはアフェレーシスを実施し)、本発明に従ってそこからT細胞を活性化し、患者にこれらの活性化し拡大増殖させたT細胞を再注入することが望ましい場合がある。このプロセスは、数週間ごとに複数回行うことができる。一部の実施形態では、T細胞を10cc〜400ccの採血から活性化することができる。一部の実施形態では、T細胞を20cc、30cc、40cc、50cc、60cc、70cc、80cc、90cc、または100ccの採血から活性化する。 In some embodiments, activated anti-E7MC CAR T cells are administered to a subject, after which blood is again drawn (or apheresis is performed), from which T cells are activated according to the present invention, to the patient. It may be desirable to reinject the activated and expanded T cells. This process can be performed multiple times every few weeks. In some embodiments, T cells can be activated from 10 cc to 400 cc of blood draw. In some embodiments, T cells are activated from 20 cc, 30 cc, 40 cc, 50 cc, 60 cc, 70 cc, 80 cc, 90 cc, or 100 cc blood draws.
抗E7MC CARエフェクター細胞(例えば、T細胞)の投与は、エアロゾル吸入、注射、経口摂取、輸血、埋め込みまたは移植によるものを含む、任意の都合のよい様式で行うことができる。本明細書に記載の組成物は、患者に、皮下に、皮内に、腫瘍内に、結節内に、髄内に、筋肉内に、静脈内(i.v.)注射によって、または腹腔内に、投与することができる。一部の実施形態では、本発明の抗E7MC CARエフェクター細胞(例えば、T細胞)組成物を患者に皮内注射または皮下注射によって投与する。一部の実施形態では、本発明の抗E7MC CARエフェクター細胞(例えば、T細胞)組成物をi.v.注射によって投与する。抗E7MC CARエフェクター細胞(例えば、T細胞)の組成物は、腫瘍、リンパ節、または感染部位に直接注射することができる。 Administration of anti-E7MC CAR effector cells (eg, T cells) can be done in any convenient manner, including by aerosol inhalation, injection, oral ingestion, blood transfusion, implantation or implantation. The compositions described herein may be administered to a patient, subcutaneously, intradermally, intratumorally, intranodally, intramedullary, intramuscularly, by intravenous (iv) injection, or intraperitoneally. Can be administered. In some embodiments, an anti-E7MC CAR effector cell (eg, T cell) composition of the invention is administered to a patient by intradermal or subcutaneous injection. In some embodiments, an anti-E7MC CAR effector cell (eg, T cell) composition of the invention is i. v. Administer by injection. The composition of anti-E7MC CAR effector cells (eg, T cells) can be injected directly into the tumor, lymph node, or site of infection.
したがって、例えば、一部の実施形態では、個体におけるHPV16−E7陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分を含む細胞外ドメイン、b)膜貫通ドメイン、ならびにc)CD3ζ細胞内シグナル伝達配列およびCD28細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗E7MC CARを発現するエフェクター細胞(例えば、T細胞)を含む組成物を投与するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、HPV16−E7ペプチドは、HPV16−E7 11−19(配列番号4)である。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A02である。一部の実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A*02:01である。一部の実施形態では、HPV16−E7陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がん、肛門がん、膣がん、外陰部がん、陰茎がん、頭頸部がんまたは中咽頭がんである。一部の実施形態では、がんは、HPV16−E7陽性扁平上皮細胞癌である。一部の実施形態では、個体はヒトである。
Thus, for example, in some embodiments, a method of treating an HPV16-E7 positive disease in an individual, wherein the individual is specific for a complex comprising an effective amount of a) an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein. Expressing an anti-E7MC CAR comprising an extracellular domain comprising an anti-E7MC antibody moiety that binds electrically, b) a transmembrane domain, and c) an intracellular signaling domain comprising a CD3ζ intracellular signaling sequence and a CD28 intracellular signaling sequence There is provided a method comprising administering a composition comprising effector cells (eg, T cells). In some embodiments, the HPV16-E7 peptide is HPV16-E7 11-19 (SEQ ID NO: 4). In some embodiments, the MHC class I protein is HLA-A02. In some embodiments, the MHC class I protein is HLA-
一部の実施形態では、個体におけるHPV16−E7陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、a)HPV16−E7 11−19ペプチド(配列番号4)およびHLA−A*02:01を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分を含む細胞外ドメイン、b)膜貫通ドメイン、ならびにc)CD3ζ細胞内シグナル伝達配列およびCD28細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗E7MC CARを発現するエフェクター細胞(例えば、T細胞)を含む組成物を投与するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、HPV16−E7陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がん、肛門がん、膣がん、外陰部がん、陰茎がん、頭頸部がんまたは中咽頭がんである。一部の実施形態では、がんは、HPV16−E7陽性扁平上皮細胞癌である。一部の実施形態では、個体はヒトである。 In some embodiments, a method of treating an HPV16-E7 positive disease in an individual, wherein the individual includes an effective amount of a) HPV16-E7 11-19 peptide (SEQ ID NO: 4) and HLA-A * 02: An extracellular domain comprising an anti-E7MC antibody moiety that specifically binds to a complex comprising 01, b) a transmembrane domain, and c) an intracellular signaling domain comprising a CD3ζ intracellular signaling sequence and a CD28 intracellular signaling sequence Administering a composition comprising an effector cell (eg, T cell) that expresses an anti-E7MC CAR comprising: In some embodiments, the HPV 16-E7 positive disease is cancer. In some embodiments, the cancer is, for example, squamous cell carcinoma, cervical cancer, anal cancer, vaginal cancer, vulvar cancer, penile cancer, head and neck cancer, or oropharyngeal cancer . In some embodiments, the cancer is HPV16-E7 positive squamous cell carcinoma. In some embodiments, the individual is a human.
一部の実施形態では、個体におけるHPV16−E7陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号183のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約3(例えば、約1、2、もしくは3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号184または185のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2、もしくは3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号186〜188のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約3(例えば、約1、2、もしくは3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列;およびii)配列番号189または190のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約3(例えば、約1、2、もしくは3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号191のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約3(例えば、約1、2、もしくは3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む、抗E7MC抗体部分を含む細胞外ドメイン、b)膜貫通ドメイン、ならびにc)CD3ζ細胞内シグナル伝達配列およびCD28細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗E7MC CARを発現するエフェクター細胞(例えば、T細胞)を含む組成物を投与するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、HPV16−E7陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がん、肛門がん、膣がん、外陰部がん、陰茎がん、頭頸部がんまたは中咽頭がんである。一部の実施形態では、がんは、HPV16−E7陽性扁平上皮細胞癌である。一部の実施形態では、個体はヒトである。 In some embodiments, a method of treating an HPV16-E7 positive disease in an individual, wherein the individual specifically binds to an effective amount of a) a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein. An anti-E7MC antibody portion, i) an HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 183, or a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, about 1, 2 or 3) amino acids HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of number 184 or 185, or variants thereof comprising substitutions of up to about 3 (eg, any of about 1, 2, or 3) amino acids, and any one of SEQ ID NOs: 186-188 HC-CDR3 containing one amino acid sequence, or up to about 3 (eg, any of about 1, 2, or 3) amino acid positions A heavy chain variable domain sequence comprising a variant thereof comprising: and ii) LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 189 or 190, or up to about 3 (eg, any of about 1, 2, or 3) amino acids Light chain variable comprising a variant thereof including substitutions, and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 191, or substitutions of up to about 3 (eg, any of about 1, 2, or 3) amino acids Expressing an anti-E7MC CAR comprising an extracellular domain comprising an anti-E7MC antibody portion comprising a domain, b) a transmembrane domain, and c) an intracellular signaling domain comprising a CD3ζ intracellular signaling sequence and a CD28 intracellular signaling sequence Administering a composition comprising effector cells (e.g., T cells) , A method is provided. In some embodiments, the HPV 16-E7 positive disease is cancer. In some embodiments, the cancer is, for example, squamous cell carcinoma, cervical cancer, anal cancer, vaginal cancer, vulvar cancer, penile cancer, head and neck cancer, or oropharyngeal cancer . In some embodiments, the cancer is HPV16-E7 positive squamous cell carcinoma. In some embodiments, the individual is a human.
一部の実施形態では、個体におけるHPV16−E7陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号183のアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号184または185のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、および配列番号186〜188のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;および、ii)配列番号189または190のアミノ酸配列を含むLC−CDR1、および配列番号191のアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメインを含む、抗E7MC抗体部分を含む細胞外ドメイン、b)膜貫通ドメイン、ならびにc)CD3ζ細胞内シグナル伝達配列およびCD28細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、抗E7MC CARを発現するエフェクター細胞(例えば、T細胞)を含む組成物を投与するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、HPV16−E7陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がん、肛門がん、膣がん、外陰部がん、陰茎がん、頭頸部がんまたは中咽頭がんである。一部の実施形態では、がんは、HPV16−E7陽性扁平上皮細胞癌である。一部の実施形態では、個体はヒトである。 In some embodiments, a method of treating an HPV16-E7 positive disease in an individual, wherein the individual specifically binds to an effective amount of a) a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein. An anti-E7MC antibody portion comprising: i) HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 183, HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 184 or 185, and any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 186 to 188 A heavy chain variable domain sequence comprising HC-CDR3 comprising; and ii) comprising a light chain variable domain comprising LC-CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 189 or 190 and LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 191 , An extracellular domain comprising an anti-E7MC antibody portion, b) a transmembrane domain, and c) A method comprising administering a composition comprising an effector cell (eg, T cell) expressing an anti-E7MC CAR, comprising an intracellular signaling domain comprising a D3ζ intracellular signaling sequence and a CD28 intracellular signaling sequence is provided. Is done. In some embodiments, the HPV 16-E7 positive disease is cancer. In some embodiments, the cancer is, for example, squamous cell carcinoma, cervical cancer, anal cancer, vaginal cancer, vulvar cancer, penile cancer, head and neck cancer, or oropharyngeal cancer . In some embodiments, the cancer is HPV16-E7 positive squamous cell carcinoma. In some embodiments, the individual is a human.
一部の実施形態では、個体におけるHPV16−E7陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4、もしくは5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4、もしくは5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4、もしくは5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;およびii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4、もしくは5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3(例えば、約1、2、もしくは3のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約5(例えば、約1、2、3、4、もしくは5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメインを含む抗E7MC抗体部分を含む細胞外ドメイン;b)膜貫通ドメイン、ならびにc)CD3ζ細胞内シグナル伝達配列およびCD28細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗E7MC CARを発現するエフェクター細胞(例えば、T細胞)を含む組成物を投与するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、HPV16−E7陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がん、肛門がん、膣がん、外陰部がん、陰茎がん、頭頸部がんまたは中咽頭がんである。一部の実施形態では、がんは、HPV16−E7陽性扁平上皮細胞癌である。一部の実施形態では、個体はヒトである。 In some embodiments, a method of treating an HPV16-E7 positive disease in an individual, wherein the individual specifically binds to an effective amount of a) a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein. An anti-E7MC antibody portion, i) HC-CDR1 comprising any one of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 57-77, or at most about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4, or 5) ) Variants thereof containing amino acid substitutions, HC-CDR2 comprising any one of the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 78-98, or up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4, or 5) Variants thereof comprising amino acid substitutions, and HC-CDR3 comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245, or at most A heavy chain variable domain comprising a variant thereof comprising 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4, or 5) amino acid substitutions; and ii) an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 120-140 and 246 Or an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 141-161 comprising a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4, or 5) amino acids LC-CDR2 comprising, or a variant thereof comprising substitution of up to about 3 (eg, any of about 1, 2, or 3) amino acids, and any one amino acid sequence of SEQ ID NOs 162-182 and 247-250 LC-CDR3 containing, or its vacancies containing up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4, or 5) amino acid substitutions An extracellular domain comprising an anti-E7MC antibody portion comprising a light chain variable domain comprising ant; b) a transmembrane domain, and c) an intracellular signaling domain comprising a CD3ζ intracellular signaling sequence and a CD28 intracellular signaling sequence A method is provided comprising administering a composition comprising effector cells (eg, T cells) that express anti-E7MC CAR. In some embodiments, the HPV 16-E7 positive disease is cancer. In some embodiments, the cancer is, for example, squamous cell carcinoma, cervical cancer, anal cancer, vaginal cancer, vulvar cancer, penile cancer, head and neck cancer, or oropharyngeal cancer . In some embodiments, the cancer is HPV16-E7 positive squamous cell carcinoma. In some embodiments, the individual is a human.
一部の実施形態では、個体におけるHPV16−E7陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1;配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2;および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3;またはHC−CDR配列内に最大で約5(例えば、約1、2、3、4、もしくは5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン配列;およびii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1;配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2;および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3;またはLC−CDR配列内に最大で約5(例えば、約1、2、3、4、もしくは5のいずれか)アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメイン配列を含む抗E7MC抗体部分を含む細胞外ドメイン;b)膜貫通ドメイン、ならびにc)CD3ζ細胞内シグナル伝達配列およびCD28細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗E7MC CARを発現するエフェクター細胞(例えば、T細胞)を含む組成物を投与するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、HPV16−E7陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がん、肛門がん、膣がん、外陰部がん、陰茎がん、頭頸部がんまたは中咽頭がんである。一部の実施形態では、がんは、HPV16−E7陽性扁平上皮細胞癌である。一部の実施形態では、個体はヒトである。 In some embodiments, a method of treating an HPV16-E7 positive disease in an individual, wherein the individual specifically binds to an effective amount of a) a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein. An anti-E7MC antibody portion, i) HC-CDR1 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 57-77; HC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98; and SEQ ID NO: 99 HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of ˜119, 244 and 245; or up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4, or 5) amino acids within the HC-CDR sequence A heavy chain variable domain sequence comprising that variant containing substitutions; and ii) the amino acid of any one of SEQ ID NOs: 120-140 and 246 LC-CDR1 comprising the sequence; LC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 141-161; and LC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250; or LC A cell comprising an anti-E7MC antibody portion comprising a light chain variable domain sequence comprising a variant thereof comprising a substitution of up to about 5 (eg, any of about 1, 2, 3, 4, or 5) amino acids within the CDR sequence An effector cell (eg, T cell) expressing an anti-E7MC CAR comprising an outer domain; b) a transmembrane domain, and c) an intracellular signaling domain comprising a CD3ζ intracellular signaling sequence and a CD28 intracellular signaling sequence A method is provided comprising administering a composition. In some embodiments, the HPV 16-E7 positive disease is cancer. In some embodiments, the cancer is, for example, squamous cell carcinoma, cervical cancer, anal cancer, vaginal cancer, vulvar cancer, penile cancer, head and neck cancer, or oropharyngeal cancer . In some embodiments, the cancer is HPV16-E7 positive squamous cell carcinoma. In some embodiments, the individual is a human.
一部の実施形態では、個体におけるHPV16−E7陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1;配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2;および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖可変ドメイン配列;および、ii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1;配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2;および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖可変ドメイン配列を含む抗E7MC抗体部分を含む細胞外ドメイン;b)膜貫通ドメイン、ならびにc)CD3ζ細胞内シグナル伝達配列およびCD28細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗E7MC CARを発現するエフェクター細胞(例えば、T細胞)を含む組成物を投与するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、HPV16−E7陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がん、肛門がん、膣がん、外陰部がん、陰茎がん、頭頸部がんまたは中咽頭がんである。一部の実施形態では、がんは、HPV16−E7陽性扁平上皮細胞癌である。一部の実施形態では、個体はヒトである。 In some embodiments, a method of treating an HPV16-E7 positive disease in an individual, wherein the individual specifically binds to an effective amount of a) a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein. An anti-E7MC antibody portion, i) HC-CDR1 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 57-77; HC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98; and SEQ ID NO: 99 A heavy chain variable domain sequence comprising HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of ˜119, 244 and 245; and ii) LC-CDR1 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 120-140 and 246; LC-CDR2 comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 141-161; and SEQ ID NO: 162 An extracellular domain comprising an anti-E7MC antibody portion comprising a light chain variable domain sequence comprising LC-CDR3 comprising an amino acid sequence of any one of 182 and 247-250; b) a transmembrane domain, and c) CD3ζ intracellular signaling A method is provided comprising administering a composition comprising an effector cell (eg, T cell) that expresses an anti-E7MC CAR comprising a sequence and an intracellular signaling domain comprising a CD28 intracellular signaling sequence. In some embodiments, the HPV 16-E7 positive disease is cancer. In some embodiments, the cancer is, for example, squamous cell carcinoma, cervical cancer, anal cancer, vaginal cancer, vulvar cancer, penile cancer, head and neck cancer, or oropharyngeal cancer . In some embodiments, the cancer is HPV16-E7 positive squamous cell carcinoma. In some embodiments, the individual is a human.
一部の実施形態では、個体におけるHPV16−E7陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、a)HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、i)配列番号15〜35および233〜237のいずれか1つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれか)の配列同一性を有するそのバリアント、ならびに配列番号36〜56および238〜243のいずれか1つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または少なくとも約95%(例えば、少なくとも約96%、97%、98%または99%のいずれかを含む)の配列同一性を有するそのバリアントを含む、抗E7MC抗体部分を含む細胞外ドメイン;b)膜貫通ドメイン、ならびにc)CD3ζ細胞内シグナル伝達配列およびCD28細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗E7MC CARを発現するエフェクター細胞(例えば、T細胞)を含む組成物を投与するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、HPV16−E7陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がん、肛門がん、膣がん、外陰部がん、陰茎がん、頭頸部がんまたは中咽頭がんである。一部の実施形態では、がんは、HPV16−E7陽性扁平上皮細胞癌である。一部の実施形態では、個体はヒトである。 In some embodiments, a method of treating an HPV16-E7 positive disease in an individual, wherein the individual specifically binds to an effective amount of a) a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein. An anti-E7MC antibody portion, i) a heavy chain variable domain comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 15-35 and 233-237, or at least about 95% (eg, at least about 96%, 97%, 98 A variant thereof having a sequence identity of either 1% or 99%) and a light chain variable domain comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 36-56 and 238-243, or at least about 95% (eg, at least Variants thereof having a sequence identity of about 96%, 97%, 98% or 99%) An extracellular domain comprising an anti-E7MC antibody portion; b) a transmembrane domain, and c) an effector expressing an anti-E7MC CAR comprising an intracellular signaling domain comprising a CD3ζ intracellular signaling sequence and a CD28 intracellular signaling sequence A method is provided comprising administering a composition comprising cells (eg, T cells). In some embodiments, the HPV 16-E7 positive disease is cancer. In some embodiments, the cancer is, for example, squamous cell carcinoma, cervical cancer, anal cancer, vaginal cancer, vulvar cancer, penile cancer, head and neck cancer, or oropharyngeal cancer . In some embodiments, the cancer is HPV16-E7 positive squamous cell carcinoma. In some embodiments, the individual is a human.
一部の実施形態では、個体におけるHPV16−E7陽性疾患を処置する方法であって、個体に、有効量の、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体に特異的に結合する抗E7MC抗体部分であって、a)配列番号15〜35および233〜237のいずれか1つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号36〜56および238〜243のいずれか1つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む抗E7MC抗体部分を含む細胞外ドメイン;b)膜貫通ドメイン、ならびにc)CD3ζ細胞内シグナル伝達配列およびCD28細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む抗E7MC CARを発現するエフェクター細胞(例えば、T細胞)を含む組成物を投与するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、HPV16−E7陽性疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がん、肛門がん、膣がん、外陰部がん、陰茎がん、頭頸部がんまたは中咽頭がんである。一部の実施形態では、がんは、HPV16−E7陽性扁平上皮細胞癌である。一部の実施形態では、個体はヒトである。 In some embodiments, a method of treating HPV16-E7 positive disease in an individual, wherein the individual specifically binds to an effective amount of a complex comprising HPV16-E7 peptide and MHC class I protein. An antibody portion comprising a) a heavy chain variable domain comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 15-35 and 233-237 and a light chain comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 36-56 and 238-243 An anti-E7MC CAR comprising an extracellular domain comprising an anti-E7MC antibody portion comprising a chain variable domain; b) a transmembrane domain, and c) an intracellular signaling domain comprising a CD3ζ intracellular signaling sequence and a CD28 intracellular signaling sequence. A step of administering a composition comprising an effector cell to be expressed (eg, a T cell). A method is provided that includes: In some embodiments, the HPV 16-E7 positive disease is cancer. In some embodiments, the cancer is, for example, squamous cell carcinoma, cervical cancer, anal cancer, vaginal cancer, vulvar cancer, penile cancer, head and neck cancer, or oropharyngeal cancer . In some embodiments, the cancer is HPV16-E7 positive squamous cell carcinoma. In some embodiments, the individual is a human.
がん
一部の実施形態では、抗E7MC構築物および抗E7MC CAR細胞は、HPV16−E7陽性のがんを処置するために有用であり得る。本明細書に記載の方法のいずれかを使用して処置することができるがんは、血管化していないまたはまだ実質的には血管化していない腫瘍、ならびに血管化した腫瘍を含む。がんは、非固形腫瘍(例えば、血液腫瘍、例えば、白血病およびリンパ腫)を含み得る、または固形腫瘍を含み得る。本発明の抗E7MC構築物および抗E7MC CAR細胞を用いて処置されるがんの型としては、これらに限定されないが、癌(carcinoma)、芽細胞腫、および肉腫、ならびにある特定の白血病またはリンパ系悪性腫瘍、良性腫瘍および悪性腫瘍(malignant tumor)、ならびに悪性腫瘍(malignancy)、例えば、肉腫、癌、および黒色腫が挙げられる。成人腫瘍/がんおよび小児腫瘍/がんも含まれる。
Cancer In some embodiments, anti-E7MC constructs and anti-E7MC CAR cells may be useful for treating HPV16-E7 positive cancer. Cancers that can be treated using any of the methods described herein include tumors that are not vascularized or not yet substantially vascularized, as well as vascularized tumors. The cancer can include non-solid tumors (eg, hematological tumors, such as leukemias and lymphomas), or can include solid tumors. Types of cancer treated with the anti-E7MC constructs and anti-E7MC CAR cells of the present invention include, but are not limited to, cancer (carcinoma), blastoma, and sarcoma, and certain leukemias or lymphatic systems. Examples include malignant tumors, benign tumors and malignant tumors, and malignancies such as sarcomas, cancers, and melanomas. Adult tumor / cancer and childhood tumor / cancer are also included.
血液がん(hematologic cancer)は、血液または骨髄のがんである。血液(または造血性(hematogenous)がんの例としては、急性白血病(例えば、急性リンパ球性白血病、急性骨髄球性白血病、急性骨髄性白血病、ならびに骨髄芽球性白血病、前骨芽球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病および赤白血病)、慢性白血病(例えば、慢性骨髄球性(顆粒球性)白血病、慢性骨髄性白血病、および慢性リンパ球性白血病)を含む白血病、真性赤血球増加症、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫(無痛性および高悪性度の形態)、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、重鎖病、骨髄異形成症候群、ヘアリー細胞白血病および脊髄形成異常症が挙げられる。 A hematological cancer is a cancer of the blood or bone marrow. Examples of blood (or hematogenous cancers) include acute leukemias (eg, acute lymphocytic leukemia, acute myelocytic leukemia, acute myeloid leukemia, as well as myeloblastic leukemia, preosteoblastic leukemia) Leukemias, including red blood cells, myelomonocytic leukemia, monocytic leukemia and erythroleukemia), chronic leukemia (eg, chronic myelocytic (granulocytic) leukemia, chronic myelogenous leukemia, and chronic lymphocytic leukemia) Augmentation, lymphoma, Hodgkin's disease, non-Hodgkin's lymphoma (painless and high-grade forms), multiple myeloma, Waldenstrom's macroglobulinemia, heavy chain disease, myelodysplastic syndrome, hairy cell leukemia and spinal cord Examples include dysplasia.
固形腫瘍は、通常は、嚢胞または液体領域を含有しない、組織の異常な腫瘤である。固形腫瘍は、良性または悪性であり得る。異なる型の固形腫瘍の名称は、それらを形成する細胞型に由来する(例えば、肉腫、癌、およびリンパ腫)。肉腫および癌などの固形腫瘍の例としては、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、および他の肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、リンパ系悪性腫瘍、膵がん、乳がん、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、肝細胞癌、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、褐色細胞腫、脂腺癌、乳頭癌、乳頭状腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、ヘパトーマ、胆管癌、絨毛癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸がん(例えば、子宮頸癌および前浸潤性子宮頸部異形成)、肛門、肛門管または肛門直腸のがん、膣がん、外陰部のがん(例えば、扁平上皮細胞癌、上皮内癌、腺癌および線維肉腫)、陰茎がん、中咽頭がん、頭部がん(例えば、扁平上皮細胞癌)、頸部がん(例えば、扁平上皮細胞癌)、精巣がん(例えば、セミノーマ、奇形腫、胎児性癌、奇形癌、絨毛癌、肉腫、ライディッヒ細胞腫、線維腫、線維腺腫、腺腫様腫瘍および脂肪腫)、膀胱癌、黒色腫、子宮のがん(例えば、子宮内膜癌)、尿路上皮がん(例えば、扁平上皮細胞癌、移行上皮癌、腺癌、尿管がんおよび膀胱がん)、およびCNS腫瘍(例えば、神経膠腫(例えば、脳幹神経膠腫および混合型神経膠腫)、神経膠芽腫(多形神経膠芽腫としても公知)、星状細胞腫、CNSリンパ腫、胚細胞腫、髄芽腫、シュワン細胞腫、頭蓋咽頭腫(craniopharyogioma)、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏枝神経膠腫、髄膜腫(menangioma)、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫および脳転移)が挙げられる。 A solid tumor is an abnormal mass of tissue that usually does not contain cysts or fluid areas. Solid tumors can be benign or malignant. The names of the different types of solid tumors are derived from the cell types that form them (eg, sarcomas, cancers, and lymphomas). Examples of solid tumors such as sarcoma and cancer include fibrosarcoma, myxosarcoma, liposarcoma, chondrosarcoma, osteosarcoma, and other sarcomas, synovial, mesothelioma, Ewing sarcoma, leiomyosarcoma, striated muscle Tumor, colon cancer, lymphoid malignancy, pancreatic cancer, breast cancer, lung cancer, ovarian cancer, prostate cancer, hepatocellular carcinoma, squamous cell carcinoma, basal cell carcinoma, adenocarcinoma, sweat gland carcinoma, medullary thyroid cancer, Papillary thyroid cancer, pheochromocytoma, sebaceous gland cancer, papillary cancer, papillary carcinoma, medullary cancer, bronchogenic cancer, renal cell carcinoma, hepatoma, cholangiocarcinoma, choriocarcinoma, Wilms tumor, cervical cancer (eg Cervical cancer and preinvasive cervical dysplasia), anal, anal canal or anorectal cancer, vaginal cancer, vulvar cancer (eg squamous cell carcinoma, carcinoma in situ, adenocarcinoma and Fibrosarcoma), penile cancer, oropharyngeal cancer, head cancer (eg squamous cell carcinoma), cervical cancer Eg squamous cell carcinoma), testicular cancer (eg seminoma, teratomas, fetal cancer, teratocarcinoma, choriocarcinoma, sarcoma, Leydig celloma, fibroma, fibroadenoma, adenomatous tumor and lipoma), bladder Cancer, melanoma, uterine cancer (eg, endometrial cancer), urothelial cancer (eg, squamous cell carcinoma, transitional cell carcinoma, adenocarcinoma, ureteral and bladder cancer), and CNS Tumors (eg, glioma (eg, brainstem glioma and mixed glioma), glioblastoma (also known as glioblastoma multiforme), astrocytoma, CNS lymphoma, germ cell tumor, Medulloblastoma, schwannoma, craniopharyogioma, ependymoma, pineal gland, hemangioblastoma, acoustic neuroma, oligodendroglioma, menangioma, neuroblastoma, retina Blastoma and brain metastases).
がんの処置は、例えば、腫瘍の退縮、腫瘍の重量またはサイズの減少、進行までの時間、生存の持続時間、無増悪生存期間、奏効率、応答の持続時間、生活の質、タンパク質の発現および/または活性によって評価することができる。例えば放射線画像法による応答の測定を含む、療法の有効性を決定するための手法を使用することができる。 Cancer treatment includes, for example, tumor regression, tumor weight or size reduction, time to progression, duration of survival, progression-free survival, response rate, duration of response, quality of life, protein expression And / or by activity. Techniques for determining the effectiveness of the therapy can be used including, for example, measurement of response by radiographic imaging.
抗E7MC構築物を使用した診断および画像化のための方法
細胞の表面上のE7MCに特異的に結合する標識された抗E7MC抗体部分ならびにその誘導体および類似体を、がんなどの上記の疾患および障害のいずれかを含む、HPV16−E7の発現に関連する疾患および/または障害を、診断目的のために、検出、診断、またはモニタリングするのに使用することができる。例えば、本発明の抗E7MC抗体部分を、in situ、in vivo、ex vivo、およびin vitroにおける診断アッセイまたは画像化アッセイにおいて使用することができる。
Methods for Diagnosis and Imaging Using Anti-E7MC Constructs Labeled anti-E7MC antibody moieties that specifically bind to E7MC on the surface of cells and derivatives and analogs thereof can be used for the above diseases and disorders such as cancer. Diseases and / or disorders associated with the expression of HPV16-E7, including any of the above, can be used to detect, diagnose, or monitor for diagnostic purposes. For example, the anti-E7MC antibody portion of the invention can be used in diagnostic or imaging assays in situ, in vivo, ex vivo, and in vitro.
本発明のさらなる実施形態は、個体(例えば、ヒトなどの哺乳動物)におけるHPV16−E7の発現に関連する疾患または障害を診断する方法を含む。方法は、個体におけるE7MCを提示する細胞を検出するステップを含む。一部の実施形態では、個体(例えば、ヒトなどの哺乳動物)におけるHPV16−E7の発現に関連する疾患または障害を診断する方法であって、(a)個体に、有効量の、上記実施形態のいずれかに従う標識された抗E7MC抗体部分を投与するステップ;および(b)個体における標識のレベルを決定するステップであって、閾値レベルを上回る標識のレベルは、個体が疾患または障害を有することを示す、ステップを含む方法が提供される。閾値レベルは、例えば、疾患または障害を有する個体の第1のセットおよび疾患または障害を有さない個体の第2のセットにおける上記の診断方法に従い標識を検出し、第1のセットと第2のセットとの間の識別が可能になるレベルに閾値を設定することによるものを含め、種々の方法によって決定することができる。一部の実施形態では、閾値レベルはゼロであり、方法は、個体における標識の存在または非存在を決定するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、ステップ(a)の投与後ある時間間隔をおいて、標識された抗E7MC抗体部分を、個体における、E7MCが発現している部位に優先的に集中させる(そして、結合していない標識された抗E7MC抗体部分は取り除く)ステップをさらに含め。一部の実施形態では、方法は、標識のバックグラウンドレベルを差し引くステップをさらに含む。バックグラウンドレベルは、例えば、標識された抗E7MC抗体部分を投与する前の個体における標識を検出することによるもの、または疾患もしくは障害を有さない個体における上記の診断方法に従い標識を検出することによるものを含む、種々の方法によって決定することができる。一部の実施形態では、疾患または障害は、がんである。一部の実施形態では、がんは、例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がん、肛門がん、膣がん、外陰部がん、陰茎がん、頭頸部がんまたは中咽頭がんからなる群から選択される。 Further embodiments of the invention include methods of diagnosing a disease or disorder associated with the expression of HPV16-E7 in an individual (eg, a mammal such as a human). The method includes detecting cells presenting E7MC in the individual. In some embodiments, a method of diagnosing a disease or disorder associated with expression of HPV16-E7 in an individual (eg, a mammal such as a human), wherein (a) the individual is in an effective amount of the above embodiment. Administering a labeled anti-E7MC antibody moiety according to any of the above; and (b) determining the level of labeling in the individual, wherein the level of labeling above the threshold level indicates that the individual has a disease or disorder A method is provided that includes the steps of: The threshold level is detected, for example, according to the diagnostic method described above in a first set of individuals with a disease or disorder and a second set of individuals without a disease or disorder, and the first set and second It can be determined by various methods, including by setting a threshold at a level that allows discrimination between sets. In some embodiments, the threshold level is zero and the method includes determining the presence or absence of the label in the individual. In some embodiments, the method preferentially concentrates the labeled anti-E7MC antibody portion at a site where E7MC is expressed in an individual at a time interval after administration of step (a) ( And removing the unbound labeled anti-E7MC antibody portion). In some embodiments, the method further comprises subtracting the background level of the label. The background level is, for example, by detecting the label in the individual prior to administration of the labeled anti-E7MC antibody portion, or by detecting the label according to the diagnostic method described above in an individual having no disease or disorder. Can be determined by various methods, including: In some embodiments, the disease or disorder is cancer. In some embodiments, the cancer is, for example, from squamous cell carcinoma, cervical cancer, anal cancer, vaginal cancer, vulvar cancer, penile cancer, head and neck cancer, or oropharyngeal cancer. Selected from the group consisting of
本発明の抗E7MC抗体部分は、当業者に公知の方法を使用して生体試料中のE7MCを提示する細胞のレベルをアッセイするために使用することができる。適切な抗体標識は当技術分野で公知であり、それらとして、グルコースオキシダーゼなどの酵素標識;ヨウ素(131I、125I、123I、121I)、炭素(14C)、硫黄(35S)、トリチウム(3H)、インジウム(115mIn、113mIn、112In、111In)、テクネチウム(99Tc、99mTc)、タリウム(201Ti)、ガリウム(68Ga、67Ga)、パラジウム(103Pd)、モリブデン(99Mo)、キセノン(133Xe)、フッ素(18F)、サマリウム(153Sm)、ルテチウム(177Lu)、ガドリニウム(159Gd)、プロメチウム(149Pm)、ランタン(140La)、イッテルビウム(175Yb)、ホルミウム(166Ho)、イットリウム(90Y)、スカンジウム(47Sc)、レニウム(186Re、188Re)、プラセオジム(142Pr)、ロジウム(105Rh)、およびルテニウム(97Ru)などの放射性同位体;ルミノール;フルオレセインおよびローダミンなどの蛍光標識;ならびにビオチンが挙げられる。 The anti-E7MC antibody portion of the invention can be used to assay the level of cells presenting E7MC in a biological sample using methods known to those skilled in the art. Suitable antibody labels are known in the art and include enzyme labels as those, such as glucose oxidase; Iodine (131 I, 125 I, 123 I, 121 I), carbon (14 C), sulfur (35 S), Tritium ( 3 H), indium ( 115 m In, 113 m In, 112 In, 111 In), technetium ( 99 Tc, 99 m Tc), thallium ( 201 Ti), gallium ( 68 Ga, 67 Ga), palladium ( 103 Pd) , Molybdenum ( 99 Mo), xenon ( 133 Xe), fluorine ( 18 F), samarium ( 153 Sm), lutetium ( 177 Lu), gadolinium ( 159 Gd), promethium ( 149 Pm), lanthanum ( 140 La), ytterbium (175 Yb), holmium (166 Ho , Yttrium (90 Y), scandium (47 Sc), rhenium (186 Re, 188 Re), praseodymium (142 Pr), rhodium (105 Rh), and radioactive isotopes, such as ruthenium (97 Ru); luminol; fluorescein and Fluorescent labels such as rhodamine; as well as biotin.
当技術分野で公知の技法は、本発明の標識された抗E7MC抗体部分に適用することができる。そのような技法としては、これらに限定されないが、二官能性コンジュゲート剤の使用が挙げられる(例えば、米国特許第5,756,065号;同第5,714,631号;同第5,696,239号;同第5,652,361号;同第5,505,931号;同第5,489,425号;同第5,435,990号;同第5,428,139号;同第5,342,604号;同第5,274,119号;同第4,994,560号;および同第5,808,003号を参照されたい)。上記のアッセイに加えて、種々のin vivoアッセイおよびex vivoアッセイが当業者には利用可能である。例えば、被験体の体内の細胞を、検出可能な標識、例えば放射性同位体を用いて任意選択で標識した抗E7MC抗体部分に曝露させることができ、抗E7MC抗体部分の細胞への結合を、例えば、放射活性についての外部スキャニングによって、または、抗E7MC抗体部分に予め曝露させた、被験体に由来する試料(例えば、生検もしくは他の生体試料)を分析することによって評価することができる。 Techniques known in the art can be applied to the labeled anti-E7MC antibody portion of the invention. Such techniques include, but are not limited to, the use of bifunctional conjugate agents (eg, US Pat. Nos. 5,756,065; 5,714,631; 696,239; 5,652,361; 5,505,931; 5,489,425; 5,435,990; 5,428,139; No. 5,342,604; 5,274,119; 4,994,560; and 5,808,003). In addition to the above assays, various in vivo and ex vivo assays are available to those skilled in the art. For example, cells in a subject's body can be exposed to an anti-E7MC antibody portion that is optionally labeled with a detectable label, eg, a radioisotope, and binding of the anti-E7MC antibody portion to the cell can be achieved, for example, Can be assessed by external scanning for radioactivity, or by analyzing a sample (eg, a biopsy or other biological sample) derived from a subject that has been previously exposed to an anti-E7MC antibody portion.
製造物品およびキット
本発明の一部の実施形態では、E7MCをその表面上に提示する細胞に抗E7MC構築物を送達するため、または個体におけるE7MCを提示する細胞を単離もしくは検出するための、がん(例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がん、肛門がん、膣がん、外陰部がん、陰茎がん、頭頸部がんまたは中咽頭がん)などのHPV16−E7陽性疾患の処置に有用な材料を含有する製造物品が提供される。製造物品は、容器、および、容器上のまたは容器に付随する標識または添付文書を含み得る。適切な容器としては、例えば、ビン、バイアル、シリンジなどが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの種々の材料から形成されたものであってよい。一般に、容器は、本明細書に記載の疾患または障害の処置に有効である組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有し得る(例えば、容器は、静脈内溶液バッグまたは皮下注射針で穴をあけることができる止め栓を有するバイアルであってよい)。組成物中の少なくとも1つの活性剤は、本発明の抗E7MC構築物である。標識または添付文書は、組成物が特定の状態を処置するために使用されるものであることを示す。標識または添付文書は、抗E7MC構築物組成物の患者への投与に関する指示をさらに含む。本明細書に記載のコンビナトリアル療法(combinatorial therapy)を含む製造物品およびキットも意図される。
Articles of Manufacture and KitsIn some embodiments of the invention, for delivering an anti-E7MC construct to cells presenting E7MC on its surface, or for isolating or detecting cells presenting E7MC in an individual. Treatment of HPV16-E7 positive diseases such as squamous cell carcinoma, cervical cancer, anal cancer, vaginal cancer, vulvar cancer, penile cancer, head and neck cancer or oropharyngeal cancer Articles of manufacture containing useful materials are provided. The article of manufacture may include a container and a label or package insert on or associated with the container. Suitable containers include, for example, bottles, vials, syringes and the like. The container may be formed from a variety of materials such as glass or plastic. In general, a container holds a composition that is effective in the treatment of the diseases or disorders described herein and may have a sterile access port (eg, the container may be punctured with an intravenous solution bag or hypodermic needle. It may be a vial with a stopcock that can be opened). At least one active agent in the composition is an anti-E7MC construct of the invention. The label or package insert indicates that the composition is to be used to treat a particular condition. The label or package insert further comprises instructions regarding administration of the anti-E7MC construct composition to the patient. Articles of manufacture and kits comprising the combinatorial therapy described herein are also contemplated.
添付文書とは、市販の治療用製品のパッケージに習慣的に含まれる、そのような治療用製品の使用にかかわる適応症、使用法、投与量、投与、禁忌および/または警告についての情報を含有する指示を指す。一部の実施形態では、添付文書は、組成物が、HPV16−E7陽性がん(例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がん、肛門がん、膣がん、外陰部がん、陰茎がん、頭頸部がんまたは中咽頭がん)を処置するために使用されるものであることを示す。 The package insert contains information about indications, usage, dosage, administration, contraindications and / or warnings related to the use of such therapeutic products, which are customarily included in packages of commercial therapeutic products Point to instructions to do. In some embodiments, the package insert is such that the composition comprises HPV16-E7 positive cancer (eg, squamous cell carcinoma, cervical cancer, anal cancer, vaginal cancer, vulvar cancer, penile cancer, , Head and neck cancer or oropharyngeal cancer).
さらに、製造物品は、注射用静菌水(BWFI)、リン酸緩衝食塩水、リンゲル液およびブドウ糖溶液などの、薬学的に許容される緩衝液を含む第2の容器をさらに含み得る。製造物品は、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、およびシリンジを含む、商業的観点および使用者の観点から望ましい他の材料をさらに含み得る。 In addition, the article of manufacture may further comprise a second container comprising a pharmaceutically acceptable buffer, such as bacteriostatic water for injection (BWFI), phosphate buffered saline, Ringer's solution and glucose solution. The article of manufacture may further include other materials desirable from a commercial and user standpoint, including other buffers, diluents, filters, needles, and syringes.
任意選択で製造物品と組み合わせた、種々の目的のため、例えば、本明細書に記載のHPV16−E7陽性疾患もしくは障害の処置のため、その表面上にE7MCを提示する細胞に抗E7MC構築物を送達するため、または個体におけるE7MCを提示する細胞を単離もしくは検出するために有用なキットも提供される。本発明のキットは、抗E7MC構築物組成物(または単位剤形および/もしくは製造物品)を含む1つまたは複数の容器を含み、一部の実施形態では、別の薬剤(例えば、本明細書に記載の薬剤)および/または本明細書に記載の方法のいずれかに従い使用するための指示をさらに含む。キットは、処置に適する個体の選択についての記載をさらに含み得る。本発明のキット中に供給される指示は、一般には、ラベルまたは添付文書(例えば、キットに含まれる紙シート)上に書かれた指示であるが、機械により可読の指示(例えば、磁気または光学的な記憶ディスクに保持された指示)も許容される。 Delivering an anti-E7MC construct to cells presenting E7MC on its surface for various purposes, optionally in combination with an article of manufacture, eg, for the treatment of HPV16-E7 positive diseases or disorders described herein Also provided are kits useful for isolating or detecting cells presenting E7MC in an individual. The kits of the invention comprise one or more containers comprising an anti-E7MC construct composition (or unit dosage form and / or article of manufacture), and in some embodiments, another agent (eg, as described herein). Instructions) and / or instructions for use in accordance with any of the methods described herein. The kit may further comprise a description of the selection of individuals suitable for treatment. The instructions supplied in the kits of the present invention are generally instructions written on a label or package insert (eg, a paper sheet included in the kit), but are machine readable instructions (eg, magnetic or optical). Instructions held on a typical storage disk) are also allowed.
例えば、一部の実施形態では、キットは、抗E7MC構築物(例えば、全長抗E7MC抗体、多特異的抗E7MC分子(例えば、二重特異的抗E7MC抗体)、または抗E7MCイムノコンジュゲート)を含む組成物を含む。一部の実施形態では、キットは、a)抗E7MC構築物を含む組成物、およびb)有効量の、少なくとも1つの他の薬剤であって、MHCクラスIタンパク質の発現を増大させ、かつ/またはMHCクラスIタンパク質によるHPV16−E7ペプチドの表面提示を増強する他の薬剤(例えば、IFNγ、IFNβ、IFNα、またはHsp90阻害剤)を含む。一部の実施形態では、キットは、a)抗E7MC構築物を含む組成物、およびb)例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がんまたは肛門がんを含むHPV16−E7陽性疾患の処置のために、個体に、抗E7MC構築物組成物を投与することに関する指示を含む。一部の実施形態では、キットは、a)抗E7MC構築物を含む組成物、b)有効量の、少なくとも1つの他の薬剤であって、MHCクラスIタンパク質の発現を増大させ、かつ/またはMHCクラスIタンパク質によるHPV16−E7ペプチドの表面提示を増強する他の薬剤(例えば、IFNγ、IFNβ、IFNα、またはHsp90阻害剤)、ならびにc)例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がんまたは肛門がんを含むHPV16−E7陽性疾患の処置のために、個体に、抗E7MC構築物組成物および他の薬剤(複数可)を投与することに関する指示を含む。抗E7MC構築物および他の薬剤(複数可)は別々の容器中に存在していてもよく、単一の容器中に存在していてもよい。例えば、キットは、1つの別個の組成物を含んでもよく、2つまたはそれ超の組成物であって、ここで、1つの組成物が抗E7MC構築物を含み、別の組成物が別の薬剤を含む組成物を含んでもよい。 For example, in some embodiments, the kit includes an anti-E7MC construct (eg, full-length anti-E7MC antibody, multispecific anti-E7MC molecule (eg, bispecific anti-E7MC antibody), or anti-E7MC immunoconjugate). Including a composition. In some embodiments, the kit includes: a) a composition comprising an anti-E7MC construct, and b) an effective amount of at least one other agent that increases MHC class I protein expression and / or Other agents that enhance the surface presentation of HPV16-E7 peptides by MHC class I proteins (eg, IFNγ, IFNβ, IFNα, or Hsp90 inhibitors) are included. In some embodiments, the kit comprises a) a composition comprising an anti-E7MC construct, and b) for the treatment of HPV16-E7 positive diseases including, for example, squamous cell carcinoma, cervical cancer or anal cancer. Instructions for administering the anti-E7MC construct composition to the individual. In some embodiments, the kit comprises a) a composition comprising an anti-E7MC construct, b) an effective amount of at least one other agent that increases expression of MHC class I protein and / or MHC. Other agents that enhance the surface presentation of HPV16-E7 peptides by class I proteins (eg, IFNγ, IFNβ, IFNα, or Hsp90 inhibitors), and c) eg, squamous cell carcinoma, cervical cancer or anal cancer Instructions for administering an anti-E7MC construct composition and other drug (s) to an individual for the treatment of HPV16-E7 positive diseases, including: The anti-E7MC construct and other drug (s) may be present in separate containers or may be present in a single container. For example, a kit may comprise one separate composition, two or more compositions, wherein one composition comprises an anti-E7MC construct and another composition comprises another agent. The composition containing this may be included.
一部の実施形態では、キットは、a)抗E7MC構築物(例えば、全長抗E7MC抗体、多特異的抗E7MC分子(例えば、二重特異的抗E7MC抗体)、または抗E7MCイムノコンジュゲート)を含む組成物、およびb)抗E7MC構築物を細胞(例えば、個体に由来する細胞、例えば免疫細胞)と組み合わせて抗E7MC構築物/細胞コンジュゲートを含む組成物を形成し、抗E7MC構築物/細胞コンジュゲート組成物を、HPV16−E7陽性疾患(例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がんまたは肛門がんを含む)の処置のために個体に投与することに関する指示を含む。一部の実施形態では、キットは、a)抗E7MC構築物を含む組成物、およびb)細胞(例えば、細胞傷害性細胞)を含む。一部の実施形態では、キットは、a)抗E7MC構築物を含む組成物、b)細胞(例えば、細胞傷害性細胞)、およびc)抗E7MC構築物を細胞と組み合わせて抗E7MC構築物/細胞コンジュゲートを含む組成物を形成し、抗E7MC構築物/細胞コンジュゲート組成物を、例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がんまたは肛門がんを含むHPV16−E7陽性疾患の処置のために個体に投与することに関する指示を含む。一部の実施形態では、キットは、細胞(例えば、細胞傷害性細胞)と会合した抗E7MC構築物を含む組成物を含む。一部の実施形態では、キットは、a)細胞(例えば、細胞傷害性細胞)と会合した抗E7MC構築物を含む組成物、およびb)例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がんまたは肛門がんを含むHPV16−E7陽性疾患の処置のために組成物を個体に投与することに関する指示を含む。一部の実施形態では、会合は、抗E7MC構築物と細胞の表面上の分子のコンジュゲーションによるものである。一部の実施形態では、会合は、抗E7MC構築物の一部を細胞の外膜に挿入することによるものである。 In some embodiments, the kit comprises a) an anti-E7MC construct (eg, full length anti-E7MC antibody, multispecific anti-E7MC molecule (eg, bispecific anti-E7MC antibody), or anti-E7MC immunoconjugate). A composition, and b) combining an anti-E7MC construct with a cell (eg, a cell from an individual, eg, an immune cell) to form a composition comprising the anti-E7MC construct / cell conjugate to form an anti-E7MC construct / cell conjugate composition Instructions for administering the product to an individual for the treatment of HPV16-E7 positive disease (including for example squamous cell carcinoma, cervical cancer or anal cancer). In some embodiments, the kit comprises a) a composition comprising an anti-E7MC construct, and b) a cell (eg, a cytotoxic cell). In some embodiments, the kit comprises a) a composition comprising an anti-E7MC construct, b) a cell (eg, a cytotoxic cell), and c) an anti-E7MC construct / cell conjugate combining the anti-E7MC construct with a cell. And an anti-E7MC construct / cell conjugate composition is administered to an individual for the treatment of HPV16-E7 positive diseases including, for example, squamous cell carcinoma, cervical cancer or anal cancer Including instructions on In some embodiments, the kit comprises a composition comprising an anti-E7MC construct associated with a cell (eg, a cytotoxic cell). In some embodiments, the kit comprises a) a composition comprising an anti-E7MC construct associated with cells (eg, cytotoxic cells), and b) eg, squamous cell carcinoma, cervical cancer or anal cancer Including instructions for administering the composition to an individual for the treatment of HPV16-E7 positive diseases. In some embodiments, the association is by conjugation of molecules on the surface of the cell with the anti-E7MC construct. In some embodiments, the association is by inserting a portion of the anti-E7MC construct into the outer membrane of the cell.
一部の実施形態では、キットは、抗E7MC構築物(例えば、全長抗E7MC抗体、多特異的抗E7MC分子(例えば、二重特異的抗E7MC抗体)、抗E7MC CAR、もしくは抗E7MCイムノコンジュゲート)またはそのポリペプチド部分をコードする核酸(または核酸のセット)を含む。一部の実施形態では、キットは、a)抗E7MC構築物またはそのポリペプチド部分をコードする核酸(または核酸のセット)、およびb)核酸(または核酸のセット)を発現させるための宿主細胞(例えば、エフェクター細胞)を含む。一部の実施形態では、キットは、a)抗E7MC構築物またはそのポリペプチド部分をコードする核酸(または核酸のセット)、ならびに、b)i)抗E7MC構築物を宿主細胞(例えば、エフェクター細胞、例えば、T細胞)において発現させること、ii)抗E7MC構築物または抗E7MC構築物を発現する宿主細胞を含む組成物を調製すること、およびiii)抗E7MC構築物または抗E7MC構築物を発現する宿主細胞を含む組成物を、例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がんまたは肛門がんを含むHPV16−E7陽性疾患の処置のために個体に投与することに関する指示を含む。一部の実施形態では、宿主細胞は、個体に由来するものである。一部の実施形態では、キットは、a)抗E7MC構築物またはそのポリペプチド部分をコードする核酸(または核酸のセット)、b)核酸(または核酸のセット)を発現させるための宿主細胞(例えば、エフェクター細胞)、ならびに、c)i)抗E7MC構築物を宿主細胞において発現させること、ii)抗E7MC構築物または抗E7MC構築物を発現する宿主細胞を含む組成物を調製すること、およびiii)抗E7MC構築物または抗E7MC構築物を発現する宿主細胞を含む組成物を、例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がんまたは肛門がんを含むHPV16−E7陽性疾患の処置のために個体に投与することに関する指示を含む。 In some embodiments, the kit is an anti-E7MC construct (eg, full-length anti-E7MC antibody, multispecific anti-E7MC molecule (eg, bispecific anti-E7MC antibody), anti-E7MC CAR, or anti-E7MC immunoconjugate). Or a nucleic acid (or set of nucleic acids) encoding the polypeptide portion. In some embodiments, the kit comprises a) a nucleic acid (or set of nucleic acids) encoding an anti-E7MC construct or polypeptide portion thereof, and b) a host cell for expressing the nucleic acid (or set of nucleic acids) (eg, Effector cells). In some embodiments, the kit comprises a) a nucleic acid (or set of nucleic acids) encoding an anti-E7MC construct or a polypeptide portion thereof, and b) i) an anti-E7MC construct in a host cell (eg, an effector cell, eg, Ii) preparing a composition comprising an anti-E7MC construct or a host cell expressing an anti-E7MC construct; and iii) a composition comprising a host cell expressing an anti-E7MC construct or anti-E7MC construct. Instructions for administering the product to an individual for the treatment of HPV16-E7 positive diseases including, for example, squamous cell carcinoma, cervical cancer or anal cancer. In some embodiments, the host cell is from an individual. In some embodiments, the kit comprises: a) a nucleic acid (or set of nucleic acids) encoding an anti-E7MC construct or polypeptide portion thereof; b) a host cell for expressing the nucleic acid (or set of nucleic acids) (eg, Effector cells), and c) i) expressing an anti-E7MC construct in a host cell, ii) preparing an anti-E7MC construct or a host cell expressing an anti-E7MC construct, and iii) an anti-E7MC construct. Or instructions on administering a composition comprising host cells expressing an anti-E7MC construct to an individual for the treatment of HPV16-E7 positive diseases including, for example, squamous cell carcinoma, cervical cancer or anal cancer Including.
一部の実施形態では、キットは、抗E7MC CARをコードする核酸を含む。一部の実施形態では、キットは、抗E7MC CARをコードする核酸を含むベクターを含む。一部の実施形態では、キットは、a)抗E7MC CARをコードする核酸を含むベクター、ならびに、b)i)個体に由来するT細胞などのエフェクター細胞にベクターを導入すること、ii)抗E7MC CARエフェクター細胞を含む組成物を調製すること、およびiii)抗E7MC CARエフェクター細胞組成物を、例えば、扁平上皮細胞癌、子宮頸がんまたは肛門がんを含むHPV16−E7陽性疾患の処置のために個体に投与することに関する指示を含む。 In some embodiments, the kit includes a nucleic acid encoding an anti-E7MC CAR. In some embodiments, the kit comprises a vector comprising a nucleic acid encoding an anti-E7MC CAR. In some embodiments, the kit comprises a) a vector comprising a nucleic acid encoding an anti-E7MC CAR, and b) i) introducing the vector into an effector cell such as a T cell derived from an individual, ii) an anti-E7MC Preparing a composition comprising CAR effector cells, and iii) anti-E7MC CAR effector cell compositions for the treatment of HPV16-E7 positive diseases including, for example, squamous cell carcinoma, cervical cancer or anal cancer Instructions for administering to an individual.
本発明のキットは、適切なパッケージ中に入れられる。適切なパッケージとしては、これらに限定されないが、バイアル、ビン、ジャー、フレキシブル包装(例えば、密閉Mylarまたはプラスチックバッグ)などが挙げられる。キットは、任意選択で、バッファなどの追加的な成分および説明情報も提供し得る。したがって、本出願は、バイアル(例えば、密閉バイアル)、ビン、ジャー、フレキシブル包装などを含む製造物品も提供する。 The kit of the invention is placed in a suitable package. Suitable packages include, but are not limited to, vials, bottles, jars, flexible packaging (eg, sealed Mylar or plastic bags), and the like. The kit may optionally also provide additional components such as buffers and explanatory information. Accordingly, the application also provides articles of manufacture including vials (eg, sealed vials), bottles, jars, flexible packaging, and the like.
抗E7MC構築物組成物の使用に関する指示は、一般に、意図された処置のための投与量、投薬スケジュール、および投与経路に関する情報を含む。容器は、単位用量、バルク包装(例えば、複数回用量パッケージ)または亜単位用量(sub−unit dose)であり得る。例えば、個体の有効な処置を、例えば、1週間、8日間、9日間、10日間、11日間、12日間、13日間、2週間、3週間、4週間、6週間、8週間、3カ月間、4カ月間、5カ月間、7カ月間、8カ月間、9カ月間、またはそれ超のいずれかの、長期間にわたってもたらすために十分な投与量の本明細書に開示されている抗E7MC構築物(例えば、全長抗E7MC抗体、多特異的抗E7MC分子(例えば、二重特異的抗E7MC抗体)、抗E7MC CAR、または抗E7MCイムノコンジュゲート)を含有するキットを提供することができる。キットはまた、複数の単位用量の抗E7MC構築物および医薬組成物ならびに使用のための指示を含み、薬局、例えば、病院薬局および調剤薬局における保管および使用のために十分な量で包装されていてもよい。 Instructions regarding the use of the anti-E7MC construct composition generally include information regarding the dosage, dosing schedule, and route of administration for the intended treatment. The container can be a unit dose, a bulk package (eg, a multiple dose package), or a sub-unit dose. For example, the effective treatment of an individual can be, for example, 1 week, 8 days, 9 days, 10 days, 11 days, 12 days, 13 days, 2 weeks, 3 weeks, 4 weeks, 6 weeks, 8 weeks, 3 months Anti-E7MC as disclosed herein in a dosage sufficient to provide an extended period of time, either 4 months, 5 months, 7 months, 8 months, 9 months or more Kits containing constructs (eg, full length anti-E7MC antibodies, multispecific anti-E7MC molecules (eg, bispecific anti-E7MC antibodies), anti-E7MC CAR, or anti-E7MC immunoconjugates) can be provided. The kit also includes multiple unit doses of the anti-E7MC construct and pharmaceutical composition and instructions for use, and may be packaged in an amount sufficient for storage and use in a pharmacy, eg, hospital pharmacy and dispensing pharmacy. Good.
例示的な実施形態
実施形態1.一部の実施形態では、ヒトパピローマウイルスサブタイプ16(HPV16)E7ペプチドおよび主要組織適合複合体(major histocompatibility)(MHC)クラスIタンパク質を含む複合体(HPV16−E7/MHCクラスI複合体またはE7MC)に特異的に結合する抗体部分を含む、単離された抗E7MC構築物が提供される。
実施形態2.実施形態1の一部のさらなる実施形態では、HPV16−E7/MHCクラスI複合体は、細胞表面上に存在する。
実施形態3.実施形態1の一部のさらなる実施形態では、HPV16−E7/MHCクラスI複合体は、がん細胞の表面上に存在する。
実施形態4.実施形態1から3のいずれか1つの一部のさらなる実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、ヒト白血球抗原(HLA)−Aである。
実施形態5.実施形態4の一部のさらなる実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A02である。
実施形態6.実施形態5の一部のさらなる実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A*02:01、HLA−A*02:02、HLA−A*02:06、HLA−A*02:07およびHLA−A*02:11からなる群から選択される。
実施形態7.実施形態6の一部のさらなる実施形態では、MHCクラスIタンパク質は、HLA−A*02:01である。
実施形態8.実施形態1から7のいずれか1つの一部のさらなる実施形態では、抗体部分は、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質とは異なるHLA対立遺伝子を有する第2のMHCクラスIタンパク質を含む複合体と交差反応する。
実施形態9.実施形態1から8のいずれか1つの一部のさらなる実施形態では、HPV16−E7ペプチドは、8〜12アミノ酸の長さである。
実施形態10.実施形態1から9のいずれか1つの一部のさらなる実施形態では、HPV16−E7ペプチドは、ヒトパピローマウイルスサブタイプ16のE7タンパク質に由来する。
実施形態11.実施形態1から10のいずれか1つの一部のさらなる実施形態では、HPV16−E7ペプチドは、配列番号3〜14からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。
実施形態12.実施形態10の一部のさらなる実施形態では、HPV16−E7ペプチドは、YMLDLQPET(配列番号4)のアミノ酸配列を有する。
Embodiment 12 FIG. In some further embodiments of
実施形態13.実施形態12の一部のさらなる実施形態では、単離された抗E7MC構築物は、YMLDVQPET(配列番号11)のアミノ酸配列を有するHPV16−E7ペプチドのバリアントおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体と交差反応する。
実施形態14.実施形態1から13のいずれか1つの一部のさらなる実施形態では、抗体部分は、ヒト、ヒト化または半合成である。
Embodiment 14 FIG. In some further embodiments of any one of
実施形態15.実施形態1から14のいずれか1つの一部のさらなる実施形態では、抗体部分は、全長抗体、Fab、Fab’、(Fab’)2、Fvまたは単鎖Fv(scFv)である。
Embodiment 15. FIG. In some further embodiments of any one of
実施形態16.実施形態1から15のいずれか1つの一部のさらなる実施形態では、抗体部分は、HPV16−E7/MHCクラスI複合体に約0.1pMから約500nMの平衡解離定数(Kd)で結合する。 Embodiment 16. FIG. In some further embodiments of any one of embodiments 1-15, the antibody moiety binds to an HPV16-E7 / MHC class I complex with an equilibrium dissociation constant (Kd) of about 0.1 pM to about 500 nM.
実施形態17.実施形態1から16のいずれか1つの一部のさらなる実施形態では、単離された抗E7MC構築物は、HPV16−E7/MHCクラスI複合体に約0.1pMから約500nMのKdで結合する。
実施形態18.実施形態1から17のいずれか1つの一部のさらなる実施形態では、抗体部分は、
i)G−F/G/Y−S/T−F−S/T−S−Y−A/G(配列番号183)のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域(HC−CDR)1、または最大で約3アミノ酸の置換を含むそのバリアント、I−N/I−P−X−X−G−G/T/I−T/A/PもしくはI−S−X−S/D−G/N−G/S−N−T/I/K(配列番号184もしくは185)のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約3アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびA−R−S/R−Y/S/G−Y/V−Y/W−G−X−Y−D、A−R−G−X−X−X−Y−Y/G/SもしくはA−R−G−X−X−Y−Q/W−W−S−X−D−D(配列番号186〜188)のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約3アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに
ii)N−I−G−S−N/KもしくはL−R−S/N−X−Y(配列番号189もしくは190)のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域(LC−CDR)1、または最大で約3アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびA/Q/N−S/A/V−W/Y/R−D−S/D−S−L/S/G−X−X−X−V(配列番号191)のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約3アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメイン
を含み、ここで、Xは任意のアミノ酸であり得る。
Embodiment 18. FIG. In some further embodiments of any one of
i) heavy chain complementarity determining region (HC-CDR) 1 comprising the amino acid sequence of GF / G / YSS / TFSS / TSYA / G (SEQ ID NO: 183), Or a variant thereof containing up to about 3 amino acid substitutions, I / N / I-X-X-G-G / T / IT / A / P or I-S-X-S / D-G HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of / NG / SNT / I / K (SEQ ID NO: 184 or 185), or variants thereof containing up to about 3 amino acid substitutions, and ARS / RY / S / G-Y / V-Y / W-G-X-Y-D, A-R-G-X-X-X-Y-Y / G / S or A-R-G- HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of XXXYQ / WWSXDD (SEQ ID NO: 186 to 188), or about 3 at most A heavy chain variable domain comprising a variant thereof containing a substitution of noic acid; and ii) an amino acid of NIGSGN / K or LRS / NXY (SEQ ID NO: 189 or 190) A light chain complementarity determining region (LC-CDR) 1 comprising a sequence, or variant thereof comprising substitutions of up to about 3 amino acids, and A / Q / NS / A / VW / Y / RD- Light chain variable comprising LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of S / DSL / S / GXXXXV (SEQ ID NO: 191), or variants thereof containing substitutions of up to about 3 amino acids Contains a domain, where X can be any amino acid.
実施形態19.実施形態1から17のいずれか1つの一部のさらなる実施形態では、抗体部分は、
i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5アミノ酸の置換を含むそのバリアント、ならびに配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3;または最大で約5アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに
ii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3アミノ酸の置換を含むそのバリアント、ならびに配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3;または最大で約5アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメイン
を含む。
Embodiment 19. FIG. In some further embodiments of any one of
i) HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 57-77, or variants thereof containing substitutions of up to about 5 amino acids, HC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98 Or a variant thereof comprising a substitution of up to about 5 amino acids, and HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245; or a variant thereof comprising a substitution of up to about 5 amino acids A heavy chain variable domain comprising; and ii) any LC-CDR1 comprising an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 120-140 and 246, or variants thereof comprising substitutions of up to about 5 amino acids, SEQ ID NOs: 141-161 LC-CDR2 containing one amino acid sequence, or up to about 3 amino acid positions A light chain variable domain comprising a variant thereof including LC, and LC-CDR3 comprising an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250; or a variant thereof comprising up to about 5 amino acid substitutions.
実施形態20.実施形態1から17のいずれか1つの一部のさらなる実施形態では、抗体部分は、
i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1、配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2、ならびに配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3を含む重鎖(HC)可変ドメイン;またはHC−CDR領域中に最大で約5アミノ酸の置換を含むそのバリアント;ならびに
ii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1、配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2、ならびに配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3を含む軽鎖(LC)可変ドメイン;またはLC−CDR領域中に最大で約5アミノ酸の置換を含むそのバリアント
を含む。
i) HC-CDR1 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 57 to 77, HC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78 to 98, and any of SEQ ID NOs: 99 to 119, 244 and 245 A heavy chain (HC) variable domain comprising HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence; or variants thereof comprising substitutions of up to about 5 amino acids in the HC-CDR region; and ii) SEQ ID NOs: 120-140 and 246 LC-CDR1 comprising any one amino acid sequence, LC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 141-161, and LC comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250 A light chain (LC) variable domain comprising CDR3; or in the LC-CDR region Including variants thereof containing up to about 5 amino acid substitutions.
実施形態21.実施形態19または20の一部のさらなる実施形態では、抗体部分は、a)配列番号15〜35および233〜237のいずれか1つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、または配列番号15〜35および233〜237のいずれか1つに対して少なくとも約95%の配列同一性(identify)を有するそのバリアント;ならびにb)配列番号36〜56および238〜243のいずれか1つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または配列番号36〜56および238〜243のいずれか1つに対して少なくとも約95%の配列同一性を有するそのバリアントを含む。
Embodiment 21. FIG. In some further embodiments of
実施形態22.実施形態21の一部のさらなる実施形態では、抗体部分は、配列番号15〜35および233〜237のいずれか1つのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインならびに配列番号36〜56および238〜243のいずれか1つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
実施形態23.実施形態1から22のいずれか1つの一部のさらなる実施形態では、単離された抗E7MC構築物は、全長抗体である。 Embodiment 23. FIG. In some further embodiments of any one of embodiments 1-22, the isolated anti-E7MC construct is a full-length antibody.
実施形態24.実施形態1から23のいずれか1つの一部のさらなる実施形態では、単離された抗E7MC構築物は、単一特異的である。
Embodiment 24. FIG. In some further embodiments of any one of
実施形態25.実施形態1から23のいずれか1つの一部のさらなる実施形態では、単離された抗E7MC構築物は、多特異的である。
Embodiment 25. FIG. In some further embodiments of any one of
実施形態26.実施形態25の一部のさらなる実施形態では、単離された抗E7MC構築物は、二重特異的である。
実施形態27.実施形態25または26の一部のさらなる実施形態では、単離された抗E7MC構築物は、タンデムscFv、ダイアボディ(Db)、単鎖ダイアボディ(scDb)、二重親和性再標的化(DART)抗体、二重可変ドメイン(DVD)抗体、ノブ−イントゥ−ホール(KiH)抗体、ドックアンドロック(DNL)抗体、化学架橋抗体、ヘテロマルチマー抗体またはヘテロコンジュゲート抗体である。
実施形態28.実施形態27の一部のさらなる実施形態では、単離された抗E7MC構築物は、ペプチドリンカーによって連結された2つのscFvを含むタンデムscFvである。
Embodiment 28. FIG. In some further embodiments of
実施形態29.実施形態28の一部のさらなる実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列GGGGSを含む。 Embodiment 29. FIG. In some further embodiments of embodiment 28, the peptide linker comprises the amino acid sequence GGGGS.
実施形態30.実施形態25〜29のいずれか1つの一部のさらなる実施形態では、単離された抗E7MC構築物は、第2の抗原に特異的に結合する第2の抗体部分をさらに含む。
実施形態31.実施形態30の一部のさらなる実施形態では、第2の抗原は、T細胞の表面上の抗原である。
実施形態32.実施形態31の一部のさらなる実施形態では、第2の抗原は、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ、CD28、OX40、GITR、CD137、CD27、CD40LおよびHVEMからなる群から選択される。
実施形態33.実施形態31の一部のさらなる実施形態では、第2の抗原はCD3εであり、ここで、単離された抗E7MC構築物は、HPV16−E7/MHCクラスI複合体に特異的なN末端scFvおよびCD3εに特異的なC末端scFvを含むタンデムscFvである。
Embodiment 33. FIG. In some further embodiments of
実施形態34.実施形態31の一部のさらなる実施形態では、T細胞は、細胞傷害性T細胞、ヘルパーT細胞およびナチュラルキラーT細胞からなる群から選択される。
Embodiment 34. FIG. In some further embodiments of
実施形態35.実施形態30の一部のさらなる実施形態では、第2の抗原は、ナチュラルキラー細胞、好中球、単球、マクロファージまたは樹状細胞の表面上の抗原である。
Embodiment 35. FIG. In some further embodiments of
実施形態36.実施形態1から22のいずれか1つの一部のさらなる実施形態では、単離された抗E7MC構築物は、キメラ抗原受容体である。 Embodiment 36. FIG. In some further embodiments of any one of embodiments 1-22, the isolated anti-E7MC construct is a chimeric antigen receptor.
実施形態37.実施形態36の一部のさらなる実施形態では、キメラ抗原受容体は、抗体部分を含む細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、ならびにCD3ζ細胞内シグナル伝達配列およびCD28細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメイン、を含む。 Embodiment 37. FIG. In some further embodiments of embodiment 36, the chimeric antigen receptor comprises an extracellular domain comprising an antibody portion, a transmembrane domain, and an intracellular signaling comprising a CD3ζ intracellular signaling sequence and a CD28 intracellular signaling sequence. Domain.
実施形態38.実施形態1から22のいずれか1つの一部のさらなる実施形態では、単離された抗E7MC構築物は、抗体部分およびエフェクター分子を含むイムノコンジュゲートである。 Embodiment 38. FIG. In some further embodiments of any one of embodiments 1-22, the isolated anti-E7MC construct is an immunoconjugate comprising an antibody moiety and an effector molecule.
実施形態39.実施形態37の一部のさらなる実施形態では、エフェクター分子は、薬物、毒素、放射性同位体、タンパク質、ペプチドおよび核酸からなる群から選択される治療剤である。
実施形態40.実施形態39の一部のさらなる実施形態では、治療剤は、薬物または毒素である。
実施形態41.実施形態38の一部のさらなる実施形態では、エフェクター分子は、標識である。
実施形態42.一部の実施形態では、実施形態1から40のいずれか1つに記載の単離された抗E7MC構築物を含む医薬組成物が提供される。
Embodiment 42. FIG. In some embodiments, a pharmaceutical composition comprising the isolated anti-E7MC construct according to any one of
実施形態43.一部の実施形態では、実施形態1から41のいずれか1つに記載の単離された抗E7MC構築物を発現する宿主細胞が提供される。 Embodiment 43. FIG. In some embodiments, host cells expressing the isolated anti-E7MC construct according to any one of embodiments 1-41 are provided.
実施形態44.一部の実施形態では、実施形態1から41のいずれか1つに記載の単離された抗E7MC構築物のポリペプチド成分をコードする核酸が提供される。 Embodiment 44. FIG. In some embodiments, a nucleic acid encoding a polypeptide component of the isolated anti-E7MC construct according to any one of embodiments 1-41 is provided.
実施形態45.一部の実施形態では、実施形態44に記載の核酸を含むベクターが提供される。 Embodiment 45. FIG. In some embodiments, a vector comprising the nucleic acid of embodiment 44 is provided.
実施形態46.一部の実施形態では、実施形態36または37に記載の単離された抗E7MC構築物を発現するエフェクター細胞が提供される。 Embodiment 46. FIG. In some embodiments, effector cells expressing the isolated anti-E7MC construct of embodiment 36 or 37 are provided.
実施形態47.実施形態46の一部のさらなる実施形態では、エフェクター細胞は、T細胞である。 Embodiment 47. In some further embodiments of embodiment 46, the effector cells are T cells.
実施形態48.一部の実施形態では、HPV16−E7ペプチドおよびMHCクラスIタンパク質を含む複合体をその表面上に提示する細胞を検出するための方法であって、細胞を、実施形態41に記載の単離された抗E7MC構築物と接触させるステップ、および細胞上の標識の存在を検出するステップを含む方法が提供される。
Embodiment 48. FIG. In some embodiments, a method for detecting a cell that presents a complex comprising an HPV16-E7 peptide and an MHC class I protein on its surface, wherein the cell is isolated as described in
実施形態49.一部の実施形態では、HPV16−E7陽性疾患を有する個体を処置するための方法であって、個体に、有効量の実施形態42に記載の医薬組成物を投与するステップを含む方法が提供される。 Embodiment 49. In some embodiments, there is provided a method for treating an individual having an HPV16-E7 positive disease, comprising administering to the individual an effective amount of the pharmaceutical composition of embodiment 42. The
実施形態50.一部の実施形態では、HPV16−E7陽性疾患を有する個体を処置するための方法であって、個体に、有効量の実施形態46または47に記載のエフェクター細胞を投与するステップを含む方法が提供される。
実施形態51.一部の実施形態では、HPV16−E7陽性疾患を有する個体を診断する方法であって、
a)有効量の実施形態41に記載の単離された抗E7MC構築物を個体に投与するステップ;および
b)個体における標識のレベルを決定するステップであって、ここで、閾値レベルを上回る標識のレベルは、個体がHPV16−E7陽性疾患を有することを示す、ステップ
を含む方法が提供される。
Embodiment 51. FIG. In some embodiments, a method of diagnosing an individual having an HPV16-E7 positive disease comprising:
a) administering an effective amount of an isolated anti-E7MC construct according to
実施形態52.一部の実施形態では、HPV16−E7陽性疾患を有する個体を診断する方法であって、
a)個体に由来する試料を、実施形態41に記載の単離された抗E7MC構築物と接触させるステップ;および
b)試料中の、単離された抗E7MC構築物と結合した細胞の数を決定するステップであって、ここで、閾値レベルを上回る、単離された抗E7MC構築物と結合した細胞の数の値は、個体がHPV16−E7陽性疾患を有することを示す、ステップ
を含む方法が提供される。
Embodiment 52. FIG. In some embodiments, a method of diagnosing an individual having an HPV16-E7 positive disease comprising:
a) contacting a sample from an individual with the isolated anti-E7MC construct of
実施形態53.実施形態49から52の一部のさらなる実施形態では、HPV16−E7陽性疾患は、HPV16−E7陽性がんである。 Embodiment 53. FIG. In some further embodiments of embodiments 49-52, the HPV16-E7 positive disease is an HPV16-E7 positive cancer.
実施形態54.実施形態53の一部のさらなる実施形態では、HPV16−E7陽性がんは、扁平上皮細胞癌である。 Embodiment 54. FIG. In some further embodiments of embodiment 53, the HPV 16-E7 positive cancer is squamous cell carcinoma.
実施形態55.実施形態53の一部のさらなる実施形態では、HPV16−E7陽性がんは、子宮頸がん、肛門生殖器がん、頭頸部がんまたは中咽頭がんである。 Embodiment 55. FIG. In some further embodiments of embodiment 53, the HPV 16-E7 positive cancer is cervical cancer, anogenital cancer, head and neck cancer or oropharyngeal cancer.
本発明の範囲および主旨の中でいくつかの実施形態が可能であることが当業者には理解されよう。ここで以下の非限定的な例に言及することにより、本発明をより詳細に記載する。以下の例は、本発明をさらに例示するものであるが、当然、いかなる形でもその範囲を限定するものと解釈されるべきではない。 Those skilled in the art will appreciate that several embodiments are possible within the scope and spirit of the invention. The invention will now be described in more detail by reference to the following non-limiting examples. The following examples further illustrate the invention, but of course should not be construed as limiting its scope in any way.
材料
細胞試料、細胞株および抗体
細胞株には、CaSki(ATCC CRL−1550;HLA−A2+、HPV16+)、頭頸部扁平上皮細胞癌細胞株UM−SCC−104(Millipore;HLA−A2+、HPV16+)、肝臓腺癌細胞株SK−HEP−1(ATCC HTB−52;HLA−A2+、HPV16−)、子宮頸部扁平上皮細胞癌細胞株SiHa(ATCC HTB−35;HLA−A2−、HPV16+)、子宮頸がん細胞株C33A(ATCC HTB−31;HLA−A2+、HPV16−)、子宮頸癌細胞株MS−751(ATCC HTB−34;HLA−A2+、HPV16−)、子宮頸部腺癌細胞株HeLa(ATCC CCL−2;HLA−A2−、HPV16−)、肝細胞癌細胞株Hep3B(ATCC HB−8064;HLA−A2−、HPV16−)、肝細胞癌細胞株HepG2(ATCC HB−8065;HLA−A2−、HPV16−)、リンパ腫細胞株Raji(ATCC CCL−86;HLA−A2−、HPV16−)、T細胞白血病細胞株Jurkat(ATCC TIB−152;HLA−A2−、HPV16−)、リンパ腫細胞株Daudi(ATCC CCL−213;HPA−A2−、HPV16−)、白血病細胞株K562(ATCC CCL−243;HLA−A2−、HPV16−)、およびリンパ芽球細胞株T2(ATCC CRL−1992;HLA−A2+、HPV16−)が含まれる。T2は、TAP欠損細胞株である。細胞株を、5%FCS、ペニシリン、ストレプトマイシン、2mmol/Lグルタミン、および2−メルカプトエタノールを補充したRPMI1640中で37℃/5%CO2で培養した。
Materials Cell samples, cell lines and antibodies Cell lines include CaSki (ATCC CRL-1550; HLA-A2 + , HPV16 + ), head and neck squamous cell carcinoma cell line UM-SCC-104 (Millipore; HLA-A2 + , HPV16 + ), liver adenocarcinoma cell line SK-HEP-1 (ATCC HTB-52; HLA-A2 + , HPV16 − ), cervical squamous cell carcinoma cell line SiHa (ATCC HTB-35; HLA-A2 − , HPV16 + ), cervical cancer cell line C33A (ATCC HTB-31; HLA-A2 + , HPV16 − ), cervical cancer cell line MS-751 (ATCC HTB-34; HLA-A2 + , HPV16 − ), uterus cervical adenocarcinoma cell line HeLa (ATCC CCL-2; HLA -A2 -, HPV16 -), hepatocyte GanHoso Strain Hep3B (ATCC HB-8064; HLA -A2 -, HPV16 -), hepatocellular carcinoma cell line HepG2 (ATCC HB-8065; HLA -A2 -, HPV16 -), lymphoma cell lines Raji (ATCC CCL-86; HLA- A2 -, HPV16 -), T cell leukemia cell line Jurkat (ATCC TIB-152; HLA -A2 -, HPV16 -), lymphoma cell lines Daudi (ATCC CCL-213; HPA -A2 -, HPV16 -), leukemia cell line K562 (ATCC CCL-243; HLA -A2 -, HPV16 -), and lymphoblastoid cell line T2 (ATCC CRL-1992; HLA -A2 +, HPV16 -) are included. T2 is a TAP deficient cell line. Cell lines were cultured at 37 ° C./5% CO 2 in RPMI 1640 supplemented with 5% FCS, penicillin, streptomycin, 2 mmol / L glutamine, and 2-mercaptoethanol.
ペプチドは全て、購入され、Genemed Synthesis,Inc.(San Antonio、Tex.)により合成された。ペプチドの純度は90%超であった。ペプチドをDMSOに溶解し、食塩水で希釈して5mg/mLとし、−180℃で凍結した。ビオチン化単鎖HPV16−E7ペプチド/HLA−A*02:01複合体および対照ペプチド/HLA−A*02:01複合体を、組換えHLA−A02およびベータ−2ミクログロブリン(β2M)(約2M)と共にペプチドをリフォールディングすることによって合成した。HLA−A*02:01を結合する対照ペプチド11種(配列番号193〜203)を以下の10遺伝子から生成した:BCR、BTG2、CALR、CD247、CTSG、DDX5、HLA−E、IFI30、PPP2R1B、SSR1。
All peptides were purchased and purchased from Genemed Synthesis, Inc. (San Antonio, Tex.). The purity of the peptide was greater than 90%. The peptide was dissolved in DMSO, diluted with saline to 5 mg / mL, and frozen at -180 ° C. Biotinylated single chain HPV16-E7 peptide / HLA-
(実施例1)
ビオチン化HPV16−E7/HLA−A*02:01複合体単量体の作製
ビオチン化HPV16−E7/HLA−A*02:01複合体単量体を標準のプロトコールに従って調製した(John D. AltmanおよびMark M. Davis、Current Protocols in Immunology 17.3.1〜17.3.33、2003年)。簡単に述べると、全長ヒトベータ−2ミクログロブリン(β2m)をコードするDNAをGenewizが合成し、ベクターpET−27bにクローニングした。BirA基質ペプチド(BSP)をHLA−A*02:01細胞外ドメイン(ECD)のC末端に付加した。HLA−A*02:01 ECD−BSPをコードするDNAも同様にGenewizが合成し、ベクターpET−27bにクローニングした。ヒトβ2mを発現するベクターおよびHLA−A*02:01 ECD−BSPを発現するベクターを別々にE.coli BL21細胞中に形質転換し、発現されたタンパク質を細菌培養物から封入体として単離した。ペプチドリガンドHPV16−E7ペプチド11−19を、ヒトβ2mおよびHLA−A*02:01 ECD−BSPを用いてリフォールディングして、HPV16−E7ペプチド/HLA−A*02:01複合体単量体を形成した。フォールディングされたペプチド/HLA−A*02:01単量体を限外濾過によって濃縮し、サイズ排除クロマトグラフィーによってさらに精製した。HiPrep 26/60 Sephacryl S−300 HRを、1.5カラム体積のHyclone Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline solution(Thermo Scientific、カタログ番号SH3002802)を用いて平衡化した。未精製の試料をローディングし、1カラム体積を用いて溶出した。ミスフォールディングされた凝集体に対応する第1のピークは、およそ111mLにおいて溶出し、適正にフォールディングされたMHC複合体に対応するピークは212mLにおいて観察され、遊離のβ2Mに対応するピークは267mLにおいて観察された(図1)。ペプチド/HLA−A*02:01単量体をBirA媒介性酵素反応によってビオチン化し、その後、高分解能陰イオン交換クロマトグラフィーによって精製した。ビオチン化ペプチド/HLA−A*02:01単量体をPBS中、−80℃で保管した。
Example 1
Biotinylated HPV16-E7 / HLA-A * 02:01 complex monomer prepared biotinylated HPV16-E7 / HLA-A * 02:01 complex monomers were prepared according to standard protocols (John D. Altman And Mark M. Davis, Current Protocols in Immunology 17.3.1 to 13.333, 2003). Briefly, the gene encoding full-length human beta-2 microglobulin (β2m) was synthesized by Genewiz and cloned into the vector pET-27b. BirA substrate peptide (BSP) was added to the C-terminus of HLA-
精製されたHPV16−E7ペプチド/MHC複合体のSDS−PAGEを実施してタンパク質の純度を決定できる。例えば、タンパク質複合体1μgをNuPAGE LDS Sample Buffer(Life Technologies、NP0008)2.5μLと混合し、脱イオン水を用いて10μLまでにする。試料を70℃で10分間加熱し、次いで、ゲル上にローディングする。ゲル電気泳動を180Vで1時間実施する。 SDS-PAGE of the purified HPV16-E7 peptide / MHC complex can be performed to determine protein purity. For example, 1 μg of protein complex is mixed with 2.5 μL of NuPAGE LDS Sample Buffer (Life Technologies, NP0008) and made up to 10 μL using deionized water. Samples are heated at 70 ° C. for 10 minutes and then loaded onto the gel. Gel electrophoresis is performed at 180V for 1 hour.
(実施例2)
HPV16−E7/HLA−A*02:01複合体に特異的なscFvの選択および特徴付け。
Eureka Therapeuticsにより構築されたヒトscFv抗体ファージディスプレイライブラリー(多様性=10×1010)のコレクションを、HPV16−E7/HLA−A*02:01に特異的なヒトmAbの選択に使用した。15種の完全ヒトファージscFvライブラリーを使用してHPV16−E7/HLA−A*02:01複合体に対してパニングした。タンパク質複合体をプラスチック表面上に固定することによって導入したMHC1複合体のコンフォメーションの変化を低減させるために、従来のプレートパニングの代わりに溶液パニングおよび細胞パニングを使用した。溶液パニングでは、まず、ビオチン化抗原を、PBS緩衝液での広範な洗浄後にヒトscFvファージライブラリーと混合し、次いで、抗原−scFv抗体ファージ複合体を、ストレプトアビジンとコンジュゲートしたDynabeads M−280により、磁気ラックを通じてプルダウンした。次いで、結合したクローンを溶出させ、E.coli XL1−Blue細胞への感染に使用した。細胞パニングでは、まず、HPV16−E7ペプチドを負荷したT2細胞をヒトscFvファージライブラリーと混合した。T2細胞は、TAP欠損HLA−A*02:01+リンパ芽球細胞株である。ペプチドを負荷するために、T2細胞を、無血清RPMI1640培地中ペプチド(50μg/ml)用い、20μg/mlのβ2Mの存在下で一晩パルスした。PBSを用いて広範に洗浄した後、scFv抗体ファージが結合した、ペプチドを負荷したT2細胞を遠心沈澱させた。次いで、結合したクローンを溶出させ、E.coli XL1−Blue細胞への感染に使用した。次いで、細菌において発現させたファージクローンを精製した。溶液パニング、細胞パニングまたは溶液パニングと細胞パニングとの組合せのいずれかを用いてパニングを3〜4ラウンド実施して、HPV16−E7/HLA−A*02:01を特異的に結合したscFvファージクローンを富化させた。
(Example 2)
Selection and characterization of scFv specific for HPV16-E7 / HLA-
A collection of human scFv antibody phage display libraries (diversity = 10 × 10 10 ) constructed by Eureka Therapeutics were used to select human mAbs specific for HPV16-E7 / HLA-
ストレプトアビジンELISAプレートを、ビオチン化HPV16−E7 11−19ペプチド/HLA−A*02:01複合体単量体またはビオチン化C3対照ペプチド/HLA−A*02:01単量体を用いてそれぞれコーティングした。C3ペプチドは、ヒト核タンパク質p68由来ペプチドYLLPAIVHI(配列番号193)である。HPV16−E7 11−19ペプチド/HLA−A*02:01複合体に対する、富化させたファージディスプレイパニングプールからの個々のファージクローンを、コーティングしたプレート中でインキュベートした。ファージクローンの結合を、HRPとコンジュゲートした抗M13抗体によって検出し、HRP基質を使用してし発色させた。450nmにおける吸光度を読み取った。ファージパニングから富化されたファージクローン1272種のELISAスクリーニングによって145種の陽性クローンが同定された。図2は、ELISAアッセイにおけるビオチン化HPV16−E7/HLA−A*02:01単量体へのファージクローン結合の例を提供する。145種のELISA陽性ファージクローンのDNA配列決定により、41種の独特のクローンが同定された。特異的かつ独特のクローンを、生細胞表面上のHLA−A*02:01/ペプチド複合体へのそれらの結合について、HPV16−E7を負荷した生T2細胞を使用したフローサイトメトリー(FACS分析)によってさらに試験した。図3は、HPV16−E7 11−19ペプチドを負荷したT2細胞または対照ペプチド(C3ペプチド)を負荷したT2細胞への代表的な陽性クローンの結合を実証している。対照は、ペプチド負荷を伴わないT2細胞(細胞のみ)およびR−PEとコンジュゲートしたウマ抗マウスIgG対照(二次抗体のみ)を含んだ。簡単に述べると、HPV16−E7 11−19ペプチドまたはC3ペプチドを負荷したT2細胞を、まず、精製されたscFvファージクローンを用いて染色し、その後、マウス抗M13 mAbを用いた第2の染色を行い、Vector LabsのR−PEとコンジュゲートしたウマ抗マウスIgGを用いた第3の染色を行った。各染色ステップを、氷上で30〜60分間実施し、染色の間に細胞を2回洗浄した。試験した41種のクローンの中で、24種がHPV16−E7を負荷したT2細胞を特異的に認識した。これら24種のファージクローンは、HPV16−E7を負荷したT2細胞に特異的に結合し、HLA−A*02:01の状況でC3ペプチドを負荷したT2細胞も、ペプチド負荷を伴わないT2細胞も認識しなかった。
Streptavidin ELISA plates were coated with biotinylated HPV16-E7 11-19 peptide / HLA-
(実施例3)
FACS陽性HPV16−E7特異的ファージクローンの特徴付け
HPV16−E7ペプチド11−19バリアントに対する交差反応性
本発明において選択されたHPV16−E7 11−19ペプチドは、種々のHPV16株間で高度に保存されている。1つの研究では、このペプチドは、17種の既知のHPV16−E7タンパク質配列のうち16種において完全に保存されていることが見出された。E7 11−19内の単一のアミノ酸変異が、残りの配列において同定された。次いで、このバリアントは、分析した35名のHPV16感染子宮頸がんまたは子宮頸管炎患者のうち1名において見出された(Zhang G.L.ら、Database (Oxford). 2014年:bau031、2014年)。HPV16−E7ペプチド11−19を負荷したT2細胞に対するFACS結合分析から選択されたクローンを、生細胞表面上のこのHPV16−E7ペプチド11−19バリアント/HLA−A*02:01複合体に対する交差反応性について、バリアントHPV16−E7ペプチドを負荷した生T2細胞を使用したFACS分析によってさらに特徴付ける。このバリアントペプチドは、保存されたHPV16−E7 11−19ペプチドとは、5位の単一のアミノ酸により異なる。バリアントペプチド配列はYMLDVQPET(配列番号11)であり、一方、保存されたHPV16−E7 11−19配列はYMLDLQPET(配列番号4)である。
(Example 3)
Characterization of FACS-positive HPV16-E7 specific phage clones Cross-reactivity to HPV16-E7 peptide 11-19 variants The HPV16-E7 11-19 peptides selected in the present invention are highly conserved among various HPV16 strains . In one study, this peptide was found to be fully conserved in 16 of the 17 known HPV16-E7 protein sequences. A single amino acid mutation within E7 11-19 was identified in the remaining sequence. This variant was then found in one of the 35 HPV16 infected cervical cancer or cervicitis patients analyzed (Zhang GL et al., Database (Oxford). 2014: bau031, 2014). Clones selected from FACS binding analysis on T2 cells loaded with HPV16-E7 peptide 11-19 were cross-reacted to this HPV16-E7 peptide 11-19 variant / HLA-
簡単に述べると、T2細胞に、保存されたHPV16−E7 11−19ペプチド、バリアントHPV16−E7 11−19ペプチド、またはβ2Mを負荷する。ペプチドを負荷したT2細胞を、精製されたscFvファージクローンを用いて染色し、その後、マウス抗M13mAbを用いた第2の染色を行い、Vector LabsのR−PEとコンジュゲートしたウマ抗マウスIgGを用いた第3の染色を行う。各染色ステップを、氷上で30〜60分間実施し、各染色の間に細胞を2回洗浄する。
アラニンウォーキングによるエピトープマッピング
Briefly, T2 cells are loaded with the conserved HPV16-E7 11-19 peptide, variant HPV16-E7 11-19 peptide, or β2M. T2 cells loaded with peptides were stained with purified scFv phage clones, followed by a second staining with mouse anti-M13 mAb and equine anti-mouse IgG conjugated with Vector Labs R-PE. The third staining used is performed. Each staining step is performed on ice for 30-60 minutes, and the cells are washed twice between each staining.
Epitope mapping by alanine walking
mAbが認識するエピトープを正確に調査するために、1位、5位および8位にアラニン置換を伴うHPV16−E7ペプチドをT2細胞上にパルスした。次いで、抗体ファージクローンを、これらのペプチドを負荷したT2細胞への結合についてFACS分析によって試験した。各FACSアッセイのFACS平均蛍光強度(MFI)値は表6に示される。K07ヘルパーファージは、ファージ粒子表面上のscFv提示なしのファージ単独がペプチドを負荷したT2細胞群のいずれにも結合しないことを示す陰性対照である。抗体BB7.2は、HLA−A02アルファ鎖を認識する。MHC複合体へのペプチド結合は、細胞表面MHC複合体を安定化する。したがって、MHC結合性ペプチドを負荷したT2細胞は、ペプチド負荷を伴わないT2細胞と比較して、BB7.2結合シグナルを増強した(表6の第1の列に示される通り)。BB7.2結合データは、アラニン置換されたペプチドが、T2細胞表面上のHLA−A*02:01分子をなおも結合できることを示している。試験した全ての抗体が、HPV16−E7ペプチドおよびその周囲のMHCアルファ鎖残基によって形成される小さなコンフォメーショナルエピトープを認識したが、種々の抗体と相互作用する重要なペプチド残基は全く異なった。例えば、クローン番号4は、1位または5位におけるアラニン置換によりペプチドを負荷したT2細胞への結合が劇的に低減したので、HPV16−E7ペプチドのN末端側半分に結合することが予測される。対照的に、8位におけるアラニン置換によって、HLA−A*02:01複合体への同じクローンの結合は変化しなかった。他方では、クローン番号11は、1位および8位におけるアラニン置換に対しては非感受性であったが、5位におけるアラニン置換によりその結合が完全に抑制された。図4は、種々のHPV16−E7ペプチドを負荷したT2細胞へのファージクローン番号11の結合を示す、FACS分析の例を提供する。対照は、ペプチド負荷を伴わないT2細胞(細胞のみ)およびR−PEとコンジュゲートしたウマ抗マウスIgG対照(二次抗体のみ)を含んだ。これらの異なるペプチドを負荷したT2細胞への抗体結合を、FACSアッセイによって試験した。
内在性ペプチドに対する抗体結合特異性の評価
平均して、ヒトの体内の有核細胞はそれぞれ、約50万種の異なるペプチド/MHCクラスI複合体を発現する。抗ペプチド/MHCI−複合体抗体を高い特異性および治療指数を有する抗がん薬に発展させるためには、抗体が標的ペプチド/MHCI複合体を特異的に認識するが、MHCI分子自体または細胞表面上に提示された他のペプチドに結合したMHCI分子は認識しないことが必須である。本研究に関して、関連するMHCI分子は、HLA−A*02:01である。本発明者らのファージパニングおよびスクリーニングの初期に、本発明者らは、HLA−A*02:01分子単体に結合した抗体を排除した(例えば、図2および3を参照されたい)。上位のファージクローンは、例えばグロビンアルファ鎖、ベータ鎖、核タンパク質p68などの、複数の型の有核ヒト細胞において通常発現するタンパク質に由来するものである11種の内在性HLA−A*02:01ペプチドに対してもスクリーニングした。11種の内在性ペプチド(表7、配列番号193〜203)を用いてフォールディングされた組換えペプチド/HLA−A*02:01複合体をストレプトアビジンプレートに別々にコーティングし、抗体結合をELISA分析によって決定した。簡単に述べると、個々のファージクローンを、ペプチド/HLA−A*02:01複合体コーティングしたプレート上でインキュベートした。ファージクローンの結合を、HRPとコンジュゲートした抗M13抗体によって検出し、HRP基質を使用して発色させた。450nmにおける吸光度を読み取った。図5に示されている通り、HPV16−E7ペプチド/HLA−A*02:01特異的抗体ファージクローンは、HPV16−E7ペプチド/HLA−A*02:01複合体を結合したが、内在性ペプチドを用いてフォールディングされたHLA−A*02:01複合体を結合しなかった。本発明者らは、同定された抗体はHPV16−E7ペプチド/HLA−A*02:01複合体に特異的であり、他のHLA−A*02:01拘束されたペプチドに結合したHLA−A*02:01分子は認識しないと結論づける。
(実施例4)
二重特異的抗体の工学的作製
二重特異的抗体(BsAb)を、HPV16−E7/HLA−A*02:01特異的ファージクローンのscFv配列を使用して生成した。BsAbは、N末端にHPV16−E7/HLA−A*02:01特異的ファージクローンのscFv配列を含み、C末端に抗ヒトCD3εマウスモノクローナルscFvを含む単鎖二重特異的抗体である(Brischwein, K.ら、Molecular Immunology 43巻:1129〜1143頁、2006年)。HPV16−E7 scFvをコードするDNA断片および抗ヒトCD3ε scFvをコードするDNA断片を、Genewizが合成し、標準のDNA技術を使用してEurekaの哺乳動物発現ベクターpGSN−Hygにサブクローニングした。抗体の精製および検出のために6ヒスタミンタグ(hexhistamine tag)をC末端に挿入した。チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞にBsAb発現ベクターをトランスフェクトし、次いで、BsAb抗体産生のために7日間培養した。分泌されたHPV16−E7 BsAb分子を含有するCHO細胞上清を収集した。BsAbを、HisTrap HPカラム(GE Healthcare)を使用し、FPLC AKTAシステムによって精製した。簡単に述べると、CHO細胞培養物を清澄化し、低イミダゾール濃度(20mM)を用いてカラムにローディングし、次いで、定組成の高イミダゾール濃度溶出緩衝液(500mM)を使用して、結合したBsAbタンパク質を溶出した。精製されたHPV16−E7 BsAbの純度および分子量を還元条件下でゲル電気泳動によって決定した。タンパク質4μgをNuPAGE LDS Sample Buffer(Life Technologies、NP0008)2.5μLと混合し、脱イオン水を用いて10μLまでにした。試料を70℃で10分間加熱し、次いで、ゲル上にローディングした。ゲル電気泳動を180Vで1時間実施した。約50KDのバンドがゲル上の主要なバンドとして観察される(図6)。
Example 4
Engineering Bispecific Antibodies Bispecific antibodies (BsAbs) were generated using the scFv sequence of HPV16-E7 / HLA-
抗体凝集をサイズ排除クロマトグラフィー(SEC)によって評価できる。例えば、試料50μLをSECカラム(例えば、Agilent、BioSEC−3,300A、4.6x300mm)に注入し、それと同時に、pH7.0に調整した、ダルベッコリン酸緩衝食塩水(Fisher Scientific、SH30028.FS)および0.2Mのアルギニンからなる緩衝液を流す。高分子量凝集が10%未満のBsAbをさらなる特徴付けに選択する。 Antibody aggregation can be assessed by size exclusion chromatography (SEC). For example, 50 μL of sample is injected into a SEC column (eg, Agilent, BioSEC-3, 300A, 4.6 × 300 mm) and at the same time, Dulbecco's phosphate buffered saline (Fisher Scientific, SH30028.FS) adjusted to pH 7.0. And a buffer consisting of 0.2 M arginine. BsAbs with high molecular weight aggregation less than 10% are selected for further characterization.
(実施例5)
HPV16−E7 BsAb抗体の特徴付け
HPV16−E7 BsAb抗体の結合親和性
組換えHPV16−E7/HLA−A*02:01複合体に対するHPV16−E7 BsAb抗体の結合親和性を、例えば、Surface Plasma Resonance(BiaCore)によって測定する。HPV16−E7 BsAbとHPV16−E7/HLA−A*02:01複合体との間の結合パラメーターを、例えば、Biacore X100(GE Healthcare)においてHis Capture Kit(GE Healthcare、カタログ番号28995056)を使用し、多サイクルカイネティクス測定に関する製造者のプロトコールに従って測定する。アッセイに使用するタンパク質は全てHBS−E緩衝液を使用して希釈する。例えば、1μg/mLのHPV16−E7 BsAbを、抗ヒスチジン抗体を用いて予め官能性をもたせたセンサーチップ上に、溶液をフローセル2を通して毎分2μLで2分間流すことによって固定化する。HPV16−E7/A*02:01複合体に対する結合を、例えば、0.19μg/mL、0.38μg/mL、7.5μg/mL、15μg/mL、および30μg/mLにおいて分析し、各実行は毎分30μLで3分間の会合と3分間の解離からなる。サイクルの最後に、His Capture Kitからの再生緩衝液を使用して表面を再生する。カイネティクス測定の後に、キットからの再生溶液を使用して表面を再生する。BiaCore X−100評価ソフトウェアを用い、1:1結合性部位モードを使用してデータを解析する。次いで、結合パラメーター(会合速度定数ka、解離定数kd、および平衡解離定数Kd)を算出する。
(Example 5)
Characterization of HPV16-E7 BsAb Antibody Binding Affinity of HPV16-E7 BsAb Antibody The binding affinity of HPV16-E7 BsAb antibody to the recombinant HPV16-E7 / HLA-
ペプチドパルスしたT2細胞を用いたT細胞による殺滅アッセイ
腫瘍細胞傷害性をLDH Cytotoxicity Assay(Promega)によってアッセイした。AllCellsから購入したヒトT細胞を、CD3/CD28 Dynabeads(Invitrogen)を用い、製造者のプロトコールに従って活性化し、拡大増殖させた。活性化T細胞(ATC)を、10%FBSプラス30U/mlのIL−2を伴うRPMI1640培地中で培養し、維持し、7〜14日目に使用した。T細胞は、FACS分析により、99%超がCD3+であった。活性化T細胞(エフェクター細胞)および標的ペプチドを負荷したT2細胞を、5:1の比で、1μg/mlまたは0.2μg/mlのBsAbと16時間共培養した。ペプチドを負荷したT2細胞を、50μg/mlの標的HPV16−E7 11−19ペプチド(YMLDLQPET、配列番号4)または陰性対照AFP158ペプチド(FMNKFIYEI、配列番号192)のいずれかと共にT2細胞を一晩インキュベートすることによって調製した。陰性対照AFP158/HLA−A*02:01特異的BsAbもまた含めた。細胞傷害性を、培養上清におけるLDH活性を測定することによって決定した。図7に示されている通り、クローン番号2、番号5、番号17および番号40は、選択的かつ用量依存的様式で、HPV16−E7ペプチドを負荷したT2細胞を死滅させた。陰性対照抗AFP158/HLA−A*02:01 BsAbは、AFP158ペプチドを負荷したT2細胞の殺滅を特異的に指向させた。
T cell killing assay using peptide pulsed T2 cells Tumor cytotoxicity was assayed by LDH Cytotoxicity Assay (Promega). Human T cells purchased from AllCells were activated and expanded using CD3 / CD28 Dynabeads (Invitrogen) according to the manufacturer's protocol. Activated T cells (ATC) were cultured and maintained in RPMI 1640 medium with 10% FBS plus 30 U / ml IL-2 and used on days 7-14. T cells were> 99% CD3 + by FACS analysis. Activated T cells (effector cells) and T2 cells loaded with the target peptide were co-cultured with 1 μg / ml or 0.2 μg / ml BsAb for 16 hours in a 5: 1 ratio. P2 loaded T2 cells are incubated overnight with either 50 μg / ml of target HPV16-E7 11-19 peptide (YMLDLQPET, SEQ ID NO: 4) or negative control AFP158 peptide (FMNKFIYEI, SEQ ID NO: 192) Prepared. A negative control AFP158 / HLA-
がん細胞株を用いたT細胞による殺滅アッセイ
腫瘍細胞傷害性をLDH Cytotoxicity Assay(Promega)によってアッセイした。ヒトT細胞を、AllCellsから購入し、CD3/CD28 Dynabeads(Invitrogen)を用い、製造者のプロトコールに従って活性化し、拡大増殖させた。活性化T細胞(ATC)を、10%FBSプラス30U/mlのIL−2を伴うRPMI1640培地中で培養し、維持し、7〜14日目に使用した。活性化T細胞(エフェクター細胞)および標的がん細胞を5:1の比で、種々の濃度のBsAb(例えば、0.2μg/ml、0.04μg/ml、0.008μg/mlおよび0.0016μg/mlのBsAbを含む)と16時間共培養した。次いで、細胞傷害性を、培養上清におけるLDH活性を測定することによって決定した。
T cell killing assay using cancer cell lines Tumor cytotoxicity was assayed by LDH Cytotoxicity Assay (Promega). Human T cells were purchased from AllCells and activated and expanded using CD3 / CD28 Dynabeads (Invitrogen) according to the manufacturer's protocol. Activated T cells (ATC) were cultured and maintained in RPMI 1640 medium with 10% FBS plus 30 U / ml IL-2 and used on days 7-14. Activated T cells (effector cells) and target cancer cells in a 5: 1 ratio at various concentrations of BsAb (eg, 0.2 μg / ml, 0.04 μg / ml, 0.008 μg / ml and 0.0016 μg / Ml BsAb) for 16 hours. Cytotoxicity was then determined by measuring LDH activity in the culture supernatant.
試験した標的がん細胞は、子宮頸がん細胞株CaSki(ATCC CRL−1550;HLA−A2+、HPV16+)および子宮頸癌細胞株MS−751(ATCC HTB−34;HLA−A2+、HPV16−)を含んだ。図8Aに示されている通り、複数のクローン(例えば、2、41およびUS−7)が、0.2μg/mlのBsAbにおいて、HPV−16+細胞株CaSkiの、HPV−16−細胞株MS−751に対する、選択的殺滅を媒介した。標的陽性CaSkiのBsAb媒介性殺滅は、図8Bに示されている通り、用量依存的である。 The target cancer cells tested were cervical cancer cell line CaSki (ATCC CRL-1550; HLA-A2 + , HPV16 + ) and cervical cancer cell line MS-751 (ATCC HTB-34; HLA-A2 + , HPV16 - ) Included. As shown in FIG. 8A, multiple clones (eg, 2, 41 and US-7) were tested in HPV-16 + cell line CaSki, HPV-16 − cell line MS at 0.2 μg / ml BsAb. Mediated selective killing for -751. BsAb-mediated killing of target positive CaSki is dose dependent as shown in FIG. 8B.
試験され得るさらなる標的がん細胞には、頭頸部扁平上皮細胞癌細胞株UM−SCC−104(Millipore;HLA−A2+、HPV16+)、肝臓腺癌細胞株SK−HEP−1(ATCC HTB−52;HLA−A2+、HPV16−)、子宮頸部扁平上皮細胞癌細胞株SiHa(ATCC HTB−35;HLA−A2−、HPV16+)、子宮頸がん細胞株C33A(ATCC HTB−31;HLA−A2+、HPV16−)、子宮頸部腺癌細胞株HeLa(ATCC CCL−2;HLA−A2−、HPV16−)、肝細胞癌細胞株Hep3B(ATCC HB−8064;HLA−A2−、HPV16−)、肝細胞癌細胞株HepG2(ATCC HB−8065;HLA−A2−、HPV16−)、リンパ腫細胞株Raji(ATCC CCL−86;HLA−A2−、HPV16−)、T細胞白血病細胞株Jurkat(ATCC TIB−152;HLA−A2−、HPV16−)、リンパ腫細胞株Daudi(ATCC CCL−213;HPA−A2−、HPV16−)、および白血病細胞株K562(ATCC CCL−243;HLA−A2−、HPV16−)が含まれる。 Additional target cancer cells that can be tested include head and neck squamous cell carcinoma cell line UM-SCC-104 (Millipore; HLA-A2 + , HPV16 + ), liver adenocarcinoma cell line SK-HEP-1 (ATCC HTB- 52; HLA-A2 + , HPV16 − ), cervical squamous cell carcinoma cell line SiHa (ATCC HTB-35; HLA-A2 − , HPV16 + ), cervical cancer cell line C33A (ATCC HTB-31; HLA -A2 +, HPV16 -), cervical adenocarcinoma cell line HeLa (ATCC CCL-2; HLA -A2 -, HPV16 -), hepatocellular carcinoma cell line Hep3B (ATCC HB-8064; HLA -A2 -, HPV16 - ), hepatocellular carcinoma cell line HepG2 (ATCC HB-8065; HLA -A2 -, HPV16 -), phosphorus Pas lymphoma cell lines Raji (ATCC CCL-86; HLA -A2 -, HPV16 -), T cell leukemia cell line Jurkat (ATCC TIB-152; HLA -A2 -, HPV16 -), lymphoma cell lines Daudi (ATCC CCL-213 ; HPA-A2 -, HPV16 - ), and leukemia cell line K562 (ATCC CCL-243; HLA -A2 -, HPV16 -) are included.
複数のHLA−A02対立遺伝子に対するHPV16−E7 BsAb抗体の交差反応性
ヒトMHCI分子は、6種のクラスアイソフォーム、HLA−A、HLA−B、HLA−C、HLA−E、HLA−F、およびHLA−Gからなる。HLA−A、HLA−B、およびHLA−Cの重鎖遺伝子は高度に多型である。各アイソフォームについて、HLA遺伝子は、重鎖配列の類似性に応じてさらに群分けされる。例えば、HLA−Aは、例えばHLA−A01、HLA−A02、HLA−A03などの異なる対立遺伝子に分けられる。HLA−A02対立遺伝子に関しては、例えばHLA−A*02:01、HLA−A*02:02などの複数のサブタイプが存在する。HLA−A02群の異なるサブタイプの間で、配列の差異は、ほんの数アミノ酸に限られている。したがって、多くの場合、HLA−A*02:01分子に結合するペプチドは、HLA−A02対立遺伝子の複数のサブタイプとも複合体を形成し得る。表8(http://www.allelefrequencies.net/)に示されている通り、HLA−A*02:01は、白人の集団の間では優性HLA−A02サブタイプであるが、アジアでは、A*02:05、A*02:06、A*02:07およびA*02:11も一般的なHLA−A02サブタイプである。HPV16−E7抗体の、HLA−A*02:01の状況でHPV16−E7ペプチドだけでなく、HLA−A02の他のサブタイプも認識する能力により、HPV16−E7抗体薬による処置が有益になり得る患者集団が大きく広がる。交差反応性を決定するために、HLA−A02対立遺伝子の他のサブタイプとのHPV16−E7/MHCクラスI複合体が生成され、これら他の複合体に対するHPV16−E7/HLA−A*02:01特異的抗体の結合親和性が試験される。結合親和性は、例えば、ForteBio Octet QKを使用して決定される。簡単に述べると、5μg/mLの、ビオチン化した、種々のサブタイプを有するHPV16−E7ペプチド/HLA−A02 MHC複合体をストレプトアビジンバイオセンサー上にローディングする。余剰の抗原を洗い流した後、BsAbを、例えば、10μg/mLで会合および解離カイネティクスについて試験する。結合パラメーターを、1:1結合部位、部分的フィッティングモデルを使用して算出する。
(実施例6)
HPV16−E7/HLA−A*02:01特異的キメラ抗原受容体を提示するT細胞(CAR−T)の生成
キメラ抗原受容体療法(CAR−T療法)は、標的化免疫療法の新しい形態である。これは、モノクローナル抗体の精巧な標的化特異性を、細胞傷害性T細胞によりもたらされる強力な細胞傷害性および長期間持続と併合する。この技術により、T細胞が内在性TCRとは独立して長期的な新規の抗原特異性を獲得することが可能になる。臨床試験により、神経芽細胞腫(Louis C.U.ら、Blood 118巻(23号):6050〜6056頁)、B−ALL(Maude S.L.ら、N. Engl. J. Med. 371巻(16号):1507〜1517頁、2014年)、CLL(Brentjens R.J.ら、Blood 118巻(18号):4817〜4828頁、2011年)、およびB細胞リンパ腫(Kochenderfer J.N.ら、Blood. 116巻(20号):4099〜4102頁、2010年)におけるCAR−T療法の臨床的に有意な抗腫瘍活性が示されている。1つの研究では、CD19−CAR T療法を用いて処置されたB−ALLの患者30名において90%の完全寛解率が報告された(Maude S.L.ら、上記)。
(Example 6)
Generation of T cells (CAR-T) presenting HPV16-E7 / HLA-
HPV16−E7/HLA−A*02:01特異的抗体の効力をさらに探究するために、HPV16−E7 scFvを発現するCARを構築し、T細胞に形質導入する。例えば、レンチウイルスCAR発現ベクターを使用してHPV16−E7/HLA−A*02:01特異的CARを構築する。抗HPV16−E7/HLA−A*02:01 scFvを、細胞内T細胞刺激シグナルをもたらすためおよびT細胞を活性化するためにシスに工学的に作製したCD28シグナル伝達ドメインおよびTCRζを有する第2世代CARに移植する(Mackall C.L.ら、Nat. Rev. Clin. Oncol. 11巻(12号):693〜703頁、2014年)。図9は、HPV16−E7 CAR構築物の概略図を提供する。
To further explore the potency of HPV16-E7 / HLA-
(実施例7)
HPV16−E7 CAR−T細胞の特徴付け
HPV16−E7 CAR−T細胞のin vitro細胞傷害性研究
HPV16−E7/HLA−A*02:01特異的キメラ抗原受容体を含有するレンチウイルスを、例えば、293T細胞にCARベクターをトランスフェクトすることによって作製する。30U/mlのインターロイキン2の存在下、CD3/CD28ビーズ(Dynabeads(登録商標)、Invitrogen)を用いて2日刺激した後に形質導入のためにヒトT細胞を使用する。Retronectin(Takara)をコーティングした6ウェルプレートにおいて、72時間にわたり、濃縮したレンチウイルスをT細胞に適用する。形質導入効率を、ビオチン化HPV16−E7四量体およびPEとコンジュゲートしたストレプトアビジンを使用するFACSによって評価する。反復FACS分析を、72時間の時点で、およびその後3〜4日毎に行う。
(Example 7)
Characterization of HPV16-E7 CAR-T cells In vitro cytotoxicity studies of HPV16-E7 CAR-T cells Lentiviruses containing HPV16-E7 / HLA-
形質導入T細胞(HPV16−E7 CAR−T細胞)の機能的評価を、LDH Cytotoxicity Assayを使用して実施する。使用するエフェクターと標的との比には、例えば、5:1および10:1が含まれる。標的細胞株には、例えば、子宮頸がん細胞株CaSki(ATCC CRL−1550;HLA−A2+、HPV16+)、頭頸部扁平上皮細胞癌細胞株UM−SCC−104(Millipore;HLA−A2+、HPV16+)、肝臓腺癌細胞株SK−HEP−1(ATCC HTB−52;HLA−A2+、HPV16−)、子宮頸部扁平上皮細胞癌細胞株SiHa(ATCC HTB−35;HLA−A2−、HPV16+)、子宮頸がん細胞株C33A(ATCC HTB−31;HLA−A2+、HPV16−)、子宮頸癌細胞株MS−751(ATCC HTB−34;HLA−A2+、HPV16−)、子宮頸部腺癌細胞株HeLa(ATCC CCL−2;HLA−A2−、HPV16−)、肝細胞癌細胞株Hep3B(ATCC HB−8064;HLA−A2−、HPV16−)、肝細胞癌細胞株HepG2(ATCC HB−8065;HLA−A2−、HPV16−)、リンパ腫細胞株Raji(ATCC CCL−86;HLA−A2−、HPV16−)、T細胞白血病細胞株Jurkat(ATCC TIB−152;HLA−A2−、HPV16−)、リンパ腫細胞株Daudi(ATCC CCL−213;HPA−A2−、HPV16−)、および白血病細胞株K562(ATCC CCL−243;HLA−A2−、HPV16−)が含まれ得る。対照として、SK−HEP−1−MiniGを、HPV16−E7/HLA−A*02:01複合体の高レベルの細胞表面発現をもたらすHPV16−E7ペプチド発現ミニ遺伝子カセットをSK−HEP−1に形質導入することによって生成する。HPV16−E7 CAR発現T細胞が標的陽性がん細胞を死滅させる特異性および効率が決定される。
Functional evaluation of transduced T cells (HPV16-E7 CAR-T cells) is performed using LDH Cytotoxicity Assay. Effector to target ratios used include, for example, 5: 1 and 10: 1. Target cell lines include, for example, cervical cancer cell line CaSki (ATCC CRL-1550; HLA-A2 + , HPV16 + ), head and neck squamous cell carcinoma cell line UM-SCC-104 (Millipore; HLA-A2 + , HPV16 + ), liver adenocarcinoma cell line SK-HEP-1 (ATCC HTB-52; HLA-A2 + , HPV16 − ), cervical squamous cell carcinoma cell line SiHa (ATCC HTB-35; HLA-A2 − , HPV16 + ), cervical cancer cell line C33A (ATCC HTB-31; HLA-A2 + , HPV16 − ), cervical cancer cell line MS-751 (ATCC HTB-34; HLA-A2 + , HPV16 − ), cervical adenocarcinoma cell line HeLa (ATCC CCL-2; HLA -A2 -, HPV16 -), hepatocellular carcinoma cell lines Hep3B (ATCC HB-8064; HLA -A2 -, HPV16 -), hepatocellular carcinoma cell line HepG2 (ATCC HB-8065; HLA -A2 -, HPV16 -), lymphoma cell lines Raji (ATCC CCL-86; HLA -A2 -, HPV16 -), T cell leukemia cell line Jurkat (ATCC TIB-152; HLA -A2 -, HPV16 -), lymphoma cell lines Daudi (ATCC CCL-213; HPA -A2 -, HPV16 -), and leukemia cell lines K562 (ATCC CCL-243; HLA -A2 -, HPV16 -) may include. As a control, SK-HEP-1-MiniG was transformed into SK-HEP-1 with the HPV16-E7 peptide expression minigene cassette resulting in high level cell surface expression of the HPV16-E7 / HLA-
(実施例8)
全長IgG1 HPV16−E7抗体の生成および特徴付け
選択されたファージクローンの全長ヒトIgG1を、記載の通り、例えば、HEK293およびチャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞株において産生させる(Tomimatsu K.ら、 Biosci. Biotechnol. Biochem. 73巻(7号):1465〜1469頁、2009年)。簡単に述べると、抗体可変領域を、対応するヒトラムダまたはカッパ軽鎖定常領域配列およびヒトIgG1定常領域配列と共に哺乳動物発現ベクターにサブクローニングする。同じクローニング戦略を適用して、マウスIgG1重鎖定常領域および軽鎖定常領域を有するキメラHPV16−E7全長抗体を生成する。精製された全長IgG抗体の分子量を還元条件下および非還元条件下の両方で電気泳動によって測定する。精製されたHPV16−E7マウスキメラIgG1抗体のSDS−PAGEを実施してタンパク質の純度を決定する。簡単に述べると、タンパク質2μgをNuPAGE LDS Sample Buffer(Life Technologies、NP0008)2.5μLと混合し、脱イオン水を用いて10μLまでにする。試料を70℃で10分間加熱し、次いで、ゲル上にローディングする。ゲル電気泳動を180Vで1時間実施する。
(Example 8)
Generation and Characterization of Full-Length IgG1 HPV16-E7 Antibody Full-length human IgG1 of selected phage clones is produced as described, for example, in HEK293 and Chinese hamster ovary (CHO) cell lines (Tomimatsu K. et al., Biosci. Biotechnol Biochem. 73 (7): 1465-1469, 2009). Briefly, antibody variable regions are subcloned into a mammalian expression vector along with corresponding human lambda or kappa light chain constant region sequences and human IgG1 constant region sequences. The same cloning strategy is applied to generate a chimeric HPV16-E7 full-length antibody with a murine IgG1 heavy chain constant region and a light chain constant region. The molecular weight of the purified full-length IgG antibody is measured by electrophoresis under both reducing and non-reducing conditions. SDS-PAGE of purified HPV16-E7 mouse chimeric IgG1 antibody is performed to determine protein purity. Briefly, 2 μg of protein is mixed with 2.5 μL of NuPAGE LDS Sample Buffer (Life Technologies, NP0008) and made up to 10 μL with deionized water. Samples are heated at 70 ° C. for 10 minutes and then loaded onto the gel. Gel electrophoresis is performed at 180V for 1 hour.
HPV16−E7キメラIgG1抗体を、HPV16−E7を提示するSK−HEP−1細胞に対する結合についてフローサイトメトリーによって試験する。SK−HEP−1は、HLA−A*02:01陽性およびHPV16−E7陰性細胞株である。HPV16−E7ミニ遺伝子カセットをSK−HEP−1細胞にトランスフェクトして、HPV16−E7を提示するSK−HEP−1−miniG細胞を生成する。10μg/mLの抗体を細胞に添加して氷上で1時間置く。洗浄後、R−PEとコンジュゲートした抗マウスIgG(H+L)(Vector Labs#EI−2007)を添加して抗体結合を検出する。マウスキメラIgG1 HPV16−E7抗体の結合親和性をForteBio Octet QKによって決定する。5μg/mLの、ビオチン化したHPV16−E7ペプチド/HLA−A*02:01複合体をストレプトアビジンバイオセンサー上にローディングする。余剰の抗原を洗い流した後、マウスキメラ全長抗体を10μg/mLで会合および解離カイネティクスについて試験する。結合パラメーターを、1:1結合部位、部分的フィッティングモデルを使用して算出する。
HPV16-E7 chimeric IgG1 antibody is tested by flow cytometry for binding to SK-HEP-1 cells presenting HPV16-E7. SK-HEP-1 is an HLA-
HPV16−E7特異的および陰性対照(例えば、ET901)マウスキメラIgG1を、HPV16−E7/HLA−A*02:01、HPV16−E7組換えタンパク質および遊離HPV16−E7ペプチドに対する結合について、ELISAアッセイで試験する。抗体は、例えば、100ng/mLから開始して、3×段階希釈、合計8濃度で試験する。ビオチン化HPV16−E7/A*02:01 MHCをストレプトアビジンプレートに2μg/mLでコーティングし、HPV16−E7タンパク質を2μg/mLでコーティングし、HPV16−E7ペプチドを40ng/mLでコーティングする。全長抗HPV16−E7/HLA−A*02:01抗体が、HLA−A02の状況でHPV16−E7ペプチドのみを認識し、組み換えHPV16−E7タンパク質にも遊離のHPV16−E7ペプチドにも結合しない能力を決定する。
HPV16-E7 specific and negative control (eg ET901) mouse chimeric IgG1 tested for binding to HPV16-E7 / HPA-A * 02: 01, HPV16-E7 recombinant protein and free HPV16-E7 peptide in ELISA assay To do. The antibodies are tested, for example, starting at 100 ng / mL, 3 × serial dilution, 8 total concentrations. Biotinylated HPV16-E7 / A * 02 : 01 MHC is coated onto streptavidin plates at 2 μg / mL, HPV16-E7 protein is coated at 2 μg / mL, and HPV16-E7 peptide is coated at 40 ng / mL. The ability of the full-length anti-HPV16-E7 / HLA-
(実施例9)
in vivo有効性研究
マウスにおけるHPV16−E7 CAR−T細胞処置
HLA−A02+/HPV16−E7+がん細胞株(例えば、CaSkiまたはUM−SCC−104)皮下(s.c.)異種移植モデルを、SCID−beige(機能的なT細胞、B細胞、NK細胞なし)マウスにおいて生成する。平均s.c.腫瘍体積が200mm3に達したら、動物をランダム化する。CART投与の24時間前に、動物を(腹腔内経路によって)60mg/kgのシクロホスファミドで処置する。(i)処置なし、(ii)107個の偽形質導入したCAR T細胞、4週間にわたって週に1回、(iii)107個の抗E7MC CAR T細胞、4週間にわたって週に1回、または(iv)2×106個の抗E7MC CAR T細胞、4週間にわたって週に1回のうち1つを受ける4つの群(n=8〜10匹のマウス/群)へとマウスを分割する。それぞれの群の動物を、腫瘍体積、有害応答、ヒトサイトカインプロファイル、CAR T細胞浸潤についての、腫瘍および臓器におけるヒトCD3+細胞に関する腫瘍の病理組織診断、血清HPV16−E7、体重ならびに一般的健康状態(摂食、歩行、日常活動)についてモニタリングする。
Example 9
In vivo efficacy studies HPV16-E7 CAR-T cell treatment in mice HLA-A02 + / HPV16-E7 + cancer cell lines (eg, CaSki or UM-SCC-104) subcutaneous (sc) xenograft model. , SCID-beige (no functional T cells, B cells, NK cells) are generated in mice. Average s. c. When the tumor volume reaches 200 mm 3 , the animals are randomized. Animals are treated with 60 mg / kg cyclophosphamide (by intraperitoneal route) 24 hours prior to CART administration. (Ii) no treatment, (ii) 10 7 mock-transduced CAR T cells, once weekly for 4 weeks, (iii) 10 7 anti-E7MC CAR T cells, once weekly for 4 weeks, Or (iv) split the mice into 4 groups (n = 8-10 mice / group) that receive one of 2 × 10 6 anti-E7MC CAR T cells, once a week for 4 weeks . Each group of animals was analyzed for tumor volume, adverse response, human cytokine profile, CAR T cell invasion, tumor histopathology for human CD3 + cells in tumors and organs, serum HPV16-E7, body weight and general health status. Monitor (eating, walking, daily activities).
(実施例10)
抗HPV16−E7抗体剤の親和性成熟
この実施例は、抗HPV16−E7抗体剤の親和性成熟を実証する。特に、この実施例は、代表的な抗HPV16−E7抗体剤(クローンUS−7)へのランダム変異の取込みと、その後の抗体バリアントのスクリーニングおよび特徴付けとによる、一連の抗体バリアントの生成を具体的に実証する。
(Example 10)
Affinity maturation of anti-HPV16-E7 antibody agents This example demonstrates affinity maturation of anti-HPV16-E7 antibody agents. In particular, this example illustrates the generation of a series of antibody variants by incorporating random mutations into a representative anti-HPV16-E7 antibody agent (clone US-7) followed by screening and characterization of antibody variants. To demonstrate.
バリアントファージライブラリーの生成
抗HPV16−E7クローンUS−7 scFvをコードするDNAを、GeneMorph II Random Mutagenesis kit(Agilent Technologies)を製造者の仕様書に従って使用して、ランダム変異誘発に供した。変異誘発後、DNA配列を、scFvを発現するファージミドベクターにクローニングして、約5×108個の独特のファージクローンを含むバリアントヒト抗体ファージライブラリーを構築した。平均して、バリアントクローンは、scFv配列1つ当たり1から4ヌクレオチドの範囲の変異の親抗HPV16−E7クローンと比較して、2ヌクレオチドの変異を有する。
Generation of variant phage library DNA encoding the anti-HPV16-E7 clone US-7 scFv was subjected to random mutagenesis using the GeneMorph II Random Mutagenesis kit (Agilent Technologies) according to the manufacturer's specifications. After mutagenesis, the DNA sequence was cloned into a phagemid vector expressing scFv to construct a variant human antibody phage library containing approximately 5 × 10 8 unique phage clones. On average, variant clones have a 2 nucleotide variation compared to the parental anti-HPV16-E7 clone with variations ranging from 1 to 4 nucleotides per scFv sequence.
細胞パニング
クローンUS−7から生成した変異体を有するヒトファージscFvライブラリーを使用して、実施例2に記載されるように、HPV16−E7 11−19ペプチド/HLA−A*02:01複合体に対してパニングした。特に、細胞パニングを使用した。ヒトscFvファージライブラリーを、まず、陰性対照パニングとして20種の異なる内在性ペプチドのプール(P20、配列番号193〜212)50ug/mlを負荷したT2細胞と混合した。次いで、陰性対照枯渇させたヒトscFvファージライブラリーを、HPV16−E7 11−19ペプチド(第1ラウンド1.5ug/ml、第2ラウンド0.8ug/ml、第3ラウンド0.4ug/ml)を負荷したT2細胞と混合した。ペプチドを負荷するために、T2細胞を、無血清RPMI1640培地中ペプチドを用い、20μg/mlのβ2Mの存在下で一晩パルスした。PBSを用いて広範に洗浄した後、scFv抗体ファージが結合した、ペプチドを負荷したT2細胞を遠心沈澱させた。次いで、結合したクローンを溶出させ、E.coli XL1−Blue細胞への感染に使用した。次いで、細菌において発現させたファージクローンを精製した。パニングを3ラウンド実施して、HPV16−E7 11−19ペプチド/HLA−A*02:01に特異的に結合したscFvファージクローンを富化させた。
Cell Panning HPV16-E7 11-19 peptide / HLA-
ストレプトアビジンELISAプレートを、ビオチン化HPV16−E7 11−19ペプチド/HLA−A*02:01複合体単量体またはビオチン化P20対照ペプチド/HLA−A*02:01単量体を用いてコーティングした。HPV16−E7 11−19ペプチド/HLA−A*02:01複合体に対する、富化させたファージディスプレイパニングプールからの個々のファージクローンを、コーティングしたプレート中でインキュベートした。ファージクローンの結合を、HRPとコンジュゲートした抗M13抗体によって検出し、HRP基質を使用してし発色させた。450nmにおける吸光度を読み取った。ファージパニングから富化されたファージクローン135種のELISAスクリーニングによって15種の陽性クローンが同定された。15種のELISA陽性ファージクローンのDNA配列決定により、11種の独特のクローンが同定された。特異的かつ独特のクローンを、生細胞表面上のHLA−A*02:01/ペプチド複合体へのそれらの結合について、HPV16−E7 11−19ペプチドを負荷した生T2細胞を使用したフローサイトメトリー(FACS分析)によってさらに試験した。対照は、ペプチド負荷を伴わないT2細胞(細胞のみ)およびR−PEとコンジュゲートしたウマ抗マウスIgG対照(二次抗体のみ)を含んだ。簡単に述べると、HPV16−E7 11−19ペプチドまたはP20ペプチドプールを負荷したT2細胞を、まず、精製されたscFvファージクローンを用いて染色し、その後、マウス抗M13 mAbを用いた第2の染色を行い、Vector LabsのR−PEとコンジュゲートしたウマ抗マウスIgGを用いた第3の染色を行った。各染色ステップを、氷上で30〜60分間実施し、染色ステップの間に細胞を2回洗浄した。試験した10種の独特のクローンの中で、8種がHPV16−E7 11−19を負荷したT2細胞を特異的に認識した(配列番号223〜230)。これら8種のファージクローンは、HPV16−E7 11−19を負荷したT2細胞に特異的に結合し、HLA−A*02:01の状況でP20ペプチドプールを負荷したT2細胞も、ペプチド負荷を伴わないT2細胞も認識しなかった。
Streptavidin ELISA plates were coated with biotinylated HPV16-E7 11-19 peptide / HLA-
(実施例11)
抗HPV16−E7親和性成熟バリアントに基づく二重特異的抗体分子の特徴付け
二重特異的抗体の生成
二重特異的抗体(BsAb)を、実施例4に記載される方法を使用し、実施例10で単離された親和性成熟HPV16−E7/HLA−A*02:01特異的ファージクローンのscFv配列(配列番号223〜232)を使用して生成した。得られた単鎖二重特異的抗体は、N末端にHPV16−E7/HLA−A*02:01特異的ファージクローンのscFv配列を含み、C末端に抗ヒトCD3εマウスモノクローナルscFvを含んだ。
(Example 11)
Characterization of bispecific antibody molecules based on anti-HPV16-E7 affinity matured variants Generation of bispecific antibodies Bispecific antibodies (BsAbs) were prepared using the method described in Example 4 The affinity matured HPV16-E7 / HLA-
HPV16−E7/HLA−A*02:01に対する二重特異的抗体の結合親和性の決定
組換えHPV16−E7/HLA−A*02:01複合体に対する7種のHPV16−E7 BsAb抗体(それぞれ配列番号223、225および227〜230に対応する親和性成熟クローン7−1、7−3、7−6、7−7、7−8および7−9、ならびに親クローンUS−7に由来する)の結合親和性を、Surface Plasma Resonance(BiaCore)によって測定した。HPV16−E7 BsAbとHPV16−E7/HLA−A*02:01複合体との間の結合パラメーターを、Biacore X100(GE Healthcare)においてBiotin CAPture Kit(GE Healthcare、カタログ番号28920233)を使用し、多サイクルカイネティクス測定に関する製造者のプロトコールに従って測定した。アッセイに使用したタンパク質は全てHBS−EPランニング緩衝液を使用して希釈した。5μg/mLの、ビオチン化したHPV16−E7 11−19/HLA−A*02:01/β2M複合体を、ストレプトアビジン(約3,800RUの捕捉されたストレプトアビジン)を用いて予め官能性をもたせたセンサーチップCAP上に、溶液をフローセルを通して毎分5μLで75秒間流すことによって固定化した(1サイクル当たり約120RUのMHC複合体を捕捉した)。HPV16−E7 BsAbに対する結合を150nM、75nM、37.5nM、18.8nMおよび9.4nMにおいて分析し、各実行は毎分30μLで2分間の会合と10分間の解離からなった。サイクルの最後に、Biotin CAPture kitからの再生緩衝液を使用して表面を再生した。BiaCore X−100評価ソフトウェアを用い、1:1結合性部位モードを使用してデータを解析した。次いで、結合パラメーター(会合速度定数ka、解離定数kd、および平衡解離定数Kd)を算出し、表9に示す。クローン7−1、7−3、7−6、7−7および7−9に由来するBsAbは、親クローンUS−7に由来するBsAbと比較して増加した結合親和性を示したが、クローン7−8に由来するBsAbは、減少した結合親和性を示した。
複数のHLA−A02対立遺伝子に対するHPV16−E7二重特異的抗体の交差反応性および結合親和性
実施例5に上記したように、異なるサブタイプのHLA−A02群は、かなり保存されており、複数のHLA−A02サブタイプに対する交差反応性が高度に所望される。したがって、親クローンUS−7および親和性成熟バリアントから生成した二重特異的抗体(BsAb)がHLA−A02群の非HLA−A*02:01サブタイプと交差反応するかどうかを決定するための実験を実施した。具体的には、HLA−A02対立遺伝子の種々のサブタイプとのHPV16−E7 11−19/MHCクラスI複合体を生成し、HPV16−E7 11−19/HLA−A*02:01特異的抗体に対するそれらの結合親和性を、Biolayer Interferometry(BLI)テクノロジーを利用するPall ForteBio LLC(Menlo Park、CA)によるOctet(登録商標)QKe Systemを使用して決定した。試験したBsAbは、親クローンUS−7ならびに親和性成熟バリアントクローン7−1、7−3、7−6、7−7、7−8および7−9を含む。5μg/mLの、ビオチン化した、種々のサブタイプのHLA−A02を有するHPV16−E7 11−19ペプチド/HLA−A02複合体をストレプトアビジンバイオセンサー上にローディングした。余剰の抗原(HPV16−E7ペプチド/HLA−A02複合体)を洗い流した後、BsAbを10μg/mLで会合および解離カイネティクスについて試験した。結合パラメーターを、1:1結合部位、部分的フィッティングモデルを使用して算出した。BLIアッセイの結果は以下の表10に示される。
結果は、試験した抗体クローンのそれぞれが、試験した7種のHLA−A02サブタイプのうち少なくとも4種に特異的に結合したことを示している。いくつかの親和性成熟バリアント抗体は、親クローンよりも多くのHLA−A02サブタイプに結合し、親和性成熟バリアント抗体の多くは、より低いKD値によって示される、親クローンよりも高い親和性でHPV16−E7 11−19/HLA−A02に結合した。 The results show that each of the tested antibody clones specifically bound to at least 4 of the 7 HLA-A02 subtypes tested. Several affinity matured variant antibodies bind to many HLA-A02 subtype than the parent clones, many of affinity matured variant antibodies, indicated by a lower K D values, higher affinity than the parent clone To HPV16-E7 11-19 / HLA-A02.
ペプチド結合特異性アッセイ
親和性成熟バリアント抗体によって認識されるペプチドの特異性を確認するために、HPV16−E7 11−19ペプチドを負荷したT2細胞、P20ペプチドプールを負荷したT2細胞、またはペプチド負荷を伴わないT2細胞を用いてFACS分析を実施した。結果は、親クローンUS−7ならびに親和性成熟バリアントクローン7−1、7−3、7−6、7−7、7−8および7−9を含む試験した全てのBsAbが、HPV16−E7 11−19ペプチドを負荷したT2細胞に特異的に結合したが、P20ペプチドプールを負荷したT2細胞にもいずれのペプチドも負荷しなかったT2細胞にも結合しなかったことを示した。FACSデータは本明細書で表12に示される。
Peptide Binding Specificity Assay To confirm the specificity of the peptides recognized by affinity matured variant antibodies, T2 cells loaded with HPV16-E7 11-19 peptide, T2 cells loaded with P20 peptide pool, or peptide loading FACS analysis was performed using unaccompanied T2 cells. The results show that all BsAbs tested, including parental clone US-7 and affinity matured variant clones 7-1, 7-3, 7-6, 7-7, 7-8 and 7-9, were HPV16-
アラニンウォーキングによるエピトープマッピング
BsAbクローン番号US−7およびその親和性成熟バリアントによる認識について、HPV16−E7 11−19ペプチドの感受性残基を正確に調査するために、アラニンで置換された9個の残基のそれぞれを有するように一連の変異体ペプチドを設計し、合成した(表11に示される)。
次いで、BsAbクローンを、表11のペプチドを負荷したT2細胞、陰性対照P20ペプチドプールを負荷したT2細胞、またはペプチド負荷を伴わないT2細胞への結合についてFACS分析によって試験した。T2細胞上のMHCへのペプチド結合を、BB7.2マウス抗体染色によって評価した。HPV16−E7 11−19mut8を除く全てのペプチドは、ペプチドを伴わない対照T2細胞(cel)と比較して高いBB7.2抗体結合を示し(データは示していない)、HPV16−E7 11−19mut8を除く全てのペプチドが、T2細胞上のMHCに首尾よく結合できたことを示した。BsAb分析のために、細胞を10μg/mLのBsAbを用いて染色し、その後20×希釈のAPC抗His抗体(R&D System #IC050A)を用いて染色した。各FACSアッセイのFACS平均蛍光強度(MFI)値は、表12に示される。親US−7および親和性成熟scFvは、5〜8位におけるアラニン置換によりペプチドを負荷したT2細胞への結合が一般に低減したので、HPV16−E7ペプチドのC末端側半分に結合することが予測される。個々のFACS結合アッセイの結果は、図10Aおよび10Bに示される。
(実施例12)
抗HPV16−E7親和性成熟scFvバリアントを有するキメラ抗原受容体を提示するT細胞(CAR−T)の作製
親和性成熟HPV16−E7 scFvを発現するキメラ抗原受容体を構築し、T細胞に形質導入した。HPV16−E7/HLA−A*02:01特異的CARをコードするレンチウイルスの産生のためのCARベクターを、実施例10で単離された親和性成熟scFv(それぞれ配列番号223、225および227〜230に対応する7−1、7−3、7−6、7−7、7−8および7−9)または親US−7 scFvを、CD28およびCD3ζシグナル伝達ドメインを有するポリペプチド(配列番号256)または4−1BBおよびCD3ζシグナル伝達ドメインを有するポリペプチド(配列番号257)のいずれかと融合させることによって構築した。
(Example 12)
Production of T cell (CAR-T) presenting chimeric antigen receptor having anti-HPV16-E7 affinity matured scFv variant Construction of chimeric antigen receptor expressing affinity matured HPV16-E7 scFv and transduction of T cells did. CAR vectors for the production of lentiviruses encoding HPV16-E7 / HLA-
HPV16−E7/HLA−A*02:01特異的キメラ抗原受容体を含有するレンチウイルスを、293T細胞にCARベクターをトランスフェクトすることによって作製した。100U/mlのインターロイキン2の存在下、CD3/CD28ビーズ(Dynabeads(登録商標)、Invitrogen)を用いて1日刺激した後に形質導入のためにヒトT細胞を使用した。Retronectin(Takara)をコーティングした6ウェルプレートにおいて、72時間にわたり、濃縮したレンチウイルスをT細胞に適用した。形質導入の5日後に、HPV16−E7 CAR−T細胞および偽形質導入した細胞を、ビオチン化HPV16−E7 11−19ペプチド/HLA−A*02:01四量体およびCD4またはCD8抗体を用いて共染色し、フローサイトメトリーによって分析した。図11A〜11Cは、HPV16−E7 CAR−T細胞および偽形質導入した細胞のフローサイトメトリー結果を示す。結果は表13にまとめられる。親和性成熟scFvを有する試験したCARのそれぞれは、親scFvを有するCARよりも高い形質導入効率を有した。
(実施例13)
がん細胞株を用いた、抗HPV16−E7親和性成熟バリアントを有するCAR−Tを使用するT細胞による殺滅アッセイ
HPV16−E7 CAR−T細胞のin vitro細胞傷害性研究
親和性成熟scFv(それぞれ配列番号223、225および227〜230に対応する7−1、7−3、7−6、7−7、7−8および7−9)または親US−7 scFvを有するCARを発現するT細胞の腫瘍細胞傷害性を、LDH Cytotoxicity Assay(Promega)によってアッセイした。AllCellsから購入したヒトT細胞を、CD3/CD28 Dynabeads(Invitrogen)を用い、製造者のプロトコールに従って活性化し、次いでCARを形質導入し、増大させた。活性化CAR−T細胞を、10%FBSプラス100U/mlのIL−2を伴うRPMI1640培地中で培養し、維持し、7〜14日目に使用した。活性化CAR−T細胞(エフェクター細胞)および標的がん細胞を、5:1の比で16時間共培養した。次いで、細胞傷害性を、培養上清におけるLDH活性を測定することによって決定した。
(Example 13)
Killing assay by T cells using CAR-T with anti-HPV16-E7 affinity maturation variants using cancer cell lines In vitro cytotoxicity studies of HPV16-E7 CAR-T cells Affinity mature scFv (each T cells expressing CAR with 7-1, 7-3, 7-6, 7-7, 7-8 and 7-9) or parental US-7 scFv corresponding to SEQ ID NOS 223, 225 and 227-230 Tumor cytotoxicity was assayed by LDH Cytotoxicity Assay (Promega). Human T cells purchased from AllCells were activated using CD3 / CD28 Dynabeads (Invitrogen) according to the manufacturer's protocol and then transduced and expanded with CAR. Activated CAR-T cells were cultured and maintained in RPMI 1640 medium with 10% FBS plus 100 U / ml IL-2 and used on days 7-14. Activated CAR-T cells (effector cells) and target cancer cells were co-cultured at a 5: 1 ratio for 16 hours. Cytotoxicity was then determined by measuring LDH activity in the culture supernatant.
試験した標的がん細胞は、子宮頸がん細胞株CaSki(ATCC CRL−1550;HLA−A2+、HPV16+)、子宮頸癌細胞株MS−751(ATCC HTB−34;HLA−A2+、HPV16−)、およびマントル細胞リンパ腫細胞株JeKo−1(ATCC CRL−3006;HLA−A2+、HPV16−)を含んだ。図12に示されている通り、親和性成熟クローン(7−1、7−3、7−6、7−7、7−8および7−9)は、親クローンUS−7と比較して、CD28/CD3ζ形式および4−1BB/CD3ζ形式の両方で、有意に増加した殺滅活性を実証した。 The target cancer cells tested were cervical cancer cell line CaSki (ATCC CRL-1550; HLA-A2 + , HPV16 + ), cervical cancer cell line MS-751 (ATCC HTB-34; HLA-A2 + , HPV16). -), and mantle cell lymphoma cell line JeKo-1 (ATCC CRL-3006 ; HLA-A2 +, HPV16 -) it contained. As shown in FIG. 12, affinity matured clones (7-1, 7-3, 7-6, 7-7, 7-8 and 7-9) are compared to the parent clone US-7, Significantly increased killing activity was demonstrated in both the CD28 / CD3ζ format and the 4-1BB / CD3ζ format.
試験され得るさらなる標的がん細胞には、頭頸部扁平上皮細胞癌細胞株UM−SCC−104(Millipore;HLA−A2+、HPV16+)、肝臓腺癌細胞株SK−HEP−1(ATCC HTB−52;HLA−A2+、HPV16−)、子宮頸部扁平上皮細胞癌細胞株SiHa(ATCC HTB−35;HLA−A2−、HPV16+)、子宮頸がん細胞株C33A(ATCC HTB−31;HLA−A2+、HPV16−)、子宮頸部腺癌細胞株HeLa(ATCC CCL−2;HLA−A2−、HPV16−)、肝細胞癌細胞株Hep3B(ATCC HB−8064;HLA−A2−、HPV16−)、肝細胞癌細胞株HepG2(ATCC HB−8065;HLA−A2−、HPV16−)、リンパ腫細胞株Raji(ATCC CCL−86;HLA−A2−、HPV16−)、T細胞白血病細胞株Jurkat(ATCC TIB−152;HLA−A2−、HPV16−)、リンパ腫細胞株Daudi(ATCC CCL−213;HPA−A2−、HPV16−)、および白血病細胞株K562(ATCC CCL−243;HLA−A2−、HPV16−)が含まれる。
Claims (31)
i)G−F/G/Y−S/T−F−S/T−S−Y−A/G(配列番号183)のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域(HC−CDR)1、または最大で約3アミノ酸の置換を含むそのバリアント、I−N/I−P−X−X−G−G/T/I−T/A/PもしくはI−S−X−S/D−G/N−G/S−N−T/I/K(配列番号184もしくは185)のアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約3アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびA−R−S/R−Y/S/G−Y/V−Y/W−G−X−Y−D、A−R−G−X−X−X−Y−Y/G/SもしくはA−R−G−X−X−Y−Q/W−W−S−X−D−D(配列番号186〜188)のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3、または最大で約3アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに
ii)N−I−G−S−N/KもしくはL−R−S/N−X−Y(配列番号189もしくは190)のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域(LC−CDR)1、または最大で約3アミノ酸の置換を含むそのバリアント、およびA/Q/N−S/A/V−W/Y/R−D−S/D−S−L/S/G−X−X−X−V(配列番号191)のアミノ酸配列を含むLC−CDR3、または最大で約3アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメイン
を含み、ここで、Xは任意のアミノ酸であり得る、請求項1から7のいずれか一項に記載の単離された抗E7MC構築物。 The antibody portion is
i) heavy chain complementarity determining region (HC-CDR) 1 comprising the amino acid sequence of GF / G / YSS / TFSS / TSYA / G (SEQ ID NO: 183), Or a variant thereof containing up to about 3 amino acid substitutions, I / N / I-X-X-G-G / T / IT / A / P or I-S-X-S / D-G HC-CDR2 comprising the amino acid sequence of / NG / SNT / I / K (SEQ ID NO: 184 or 185), or variants thereof containing up to about 3 amino acid substitutions, and ARS / RY / S / G-Y / V-Y / W-G-X-Y-D, A-R-G-X-X-X-Y-Y / G / S or A-R-G- HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of XXXYQ / WWSXDD (SEQ ID NO: 186 to 188), or about 3 at most A heavy chain variable domain comprising a variant thereof containing a substitution of noic acid; and ii) an amino acid of NIGSGN / K or LRS / NXY (SEQ ID NO: 189 or 190) A light chain complementarity determining region (LC-CDR) 1 comprising a sequence, or variant thereof comprising substitutions of up to about 3 amino acids, and A / Q / NS / A / VW / Y / RD- Light chain variable comprising LC-CDR3 comprising the amino acid sequence of S / DSL / S / GXXXXV (SEQ ID NO: 191), or variants thereof containing substitutions of up to about 3 amino acids 8. The isolated anti-E7MC construct according to any one of claims 1 to 7, comprising a domain, wherein X can be any amino acid.
i)配列番号57〜77のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR1、または最大で約5アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号78〜98のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR2、または最大で約5アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号99〜119、244および245のいずれか1つのアミノ酸配列を含むHC−CDR3;または最大で約5アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む重鎖可変ドメイン;ならびに
ii)配列番号120〜140および246のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR1、または最大で約5アミノ酸の置換を含むそのバリアント、配列番号141〜161のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR2、または最大で約3アミノ酸の置換を含むそのバリアント、および配列番号162〜182および247〜250のいずれか1つのアミノ酸配列を含むLC−CDR3;または最大で約5アミノ酸の置換を含むそのバリアントを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、請求項1から7のいずれか一項に記載の単離された抗E7MC構築物。 The antibody portion is
i) HC-CDR1 comprising the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 57-77, or variants thereof containing substitutions of up to about 5 amino acids, HC-CDR2 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 78-98 Or a variant thereof comprising a substitution of up to about 5 amino acids, and an HC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 99-119, 244 and 245; or a variant thereof comprising a substitution of up to about 5 amino acids A heavy chain variable domain comprising; and ii) any LC-CDR1 comprising an amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 120-140 and 246, or variants thereof comprising substitutions of up to about 5 amino acids, SEQ ID NOs: 141-161 LC-CDR2 containing one amino acid sequence, or substitution of up to about 3 amino acids And a light chain variable domain comprising a variant thereof comprising LC-CDR3 comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 162-182 and 247-250; or a variant thereof comprising up to about 5 amino acid substitutions. Item 8. The isolated anti-E7MC construct according to any one of Items 1 to 7.
a)有効量の請求項20に記載の医薬組成物、または
b)有効量の請求項23もしくは24に記載のエフェクター細胞
を投与するステップを含む方法。 A method of treating an individual having an HPV16-E7 positive disease comprising:
A method comprising administering a) an effective amount of a pharmaceutical composition according to claim 20, or b) an effective amount of an effector cell according to claim 23 or 24.
a)有効量の請求項19に記載の単離された抗E7MC構築物を該個体に投与するステップ;および
b)該個体における前記標識のレベルを決定するステップであって、閾値レベルを上回る該標識のレベルは、該個体が該HPV16−E7陽性疾患を有することを示す、ステップ
を含む方法。 A method for diagnosing an individual having an HPV16-E7 positive disease, comprising:
a) administering to said individual an effective amount of an isolated anti-E7MC construct according to claim 19; and b) determining the level of said label in said individual, said label being above a threshold level Wherein the level indicates that the individual has the HPV16-E7 positive disease.
a)該個体に由来する試料を、請求項19に記載の単離された抗E7MC構築物と接触させるステップ;および
b)該試料中の、該単離された抗E7MC構築物と結合した細胞の数を決定するステップであって、閾値レベルを上回る、該単離された抗E7MC構築物と結合した細胞の数の値は、該個体が該HPV16−E7陽性疾患を有することを示す、ステップ
を含む方法。 A method for diagnosing an individual having an HPV16-E7 positive disease, comprising:
a) contacting a sample from the individual with an isolated anti-E7MC construct according to claim 19; and b) the number of cells bound to the isolated anti-E7MC construct in the sample. Wherein the value of the number of cells associated with the isolated anti-E7MC construct above a threshold level indicates that the individual has the HPV16-E7 positive disease .
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