JP2018506997A - 健康のサイン - Google Patents
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Abstract
Description
(a)対象からの血液サンプル中の1つ以上のmiRNAの第1の所定のセットの発現プロフィールを決定すること、ここで、該miRNAの第1の所定のセットに含まれるmiRNAは図1および/または図3に列挙されたmiRNAから選択される
(b)該対象からの該血液サンプル中の1つ以上のmiRNAの第2の所定のセットの発現プロフィールを決定すること、ここで、該miRNAの第2の所定のセットに含まれるmiRNAは図2および/または図4に列挙されたmiRNAから選択される
(c)該miRNAの第2の所定のセットに対して該miRNAの第1の所定のセットの発現プロフィールを正規化すること
(d)工程(c)の正規化された発現プロフィールを参照と比較すること
(e)該参照との比較が変更されたとき、該対象において健康状態の変化を診断することを含む、方法を提供する。
(a)対象からの血液サンプル中のmiRNAの第1の所定のセットの発現プロフィールを決定すること
(b)該対象からの該血液サンプル中のmiRNAの第2の所定のセットの発現プロフィールを決定すること
(c)該工程(a)の発現プロフィールおよび該工程(b)の発現プロフィールを参照発現プロフィールと比較すること
(d)該第1の参照発現プロフィールに対する比較が変更され、該第2の参照発現プロフィールに対する比較が変更されなかったとき、該対象において健康状態の変化を診断すること
を含む、方法を提供する。
(i.)1つ以上の対象間の健康状態を比較すること
(ii.)対象において健康状態をモニターすること
(iii.)対象において免疫系の状態をモニターすること
(iv.)対象において治療処置、好ましくは薬物処置に対する応答をモニターすること
のための、本願発明の第1および第2の局面による方法の使用を提供する。
(a)第1および第2の局面による方法を実施することにより、最初の時点で対象において健康状態を診断すること
(b)第1および第2の局面による方法を実施することにより、1つ以上の後の時点で対象において健康状態を診断すること、および
(c)工程(a)において診断された健康状態を工程(b)において診断された健康状態と比較し、それにより対象において健康状態をモニターすること
を含む、方法を提供する。
定義
本願発明を以下に詳細に説明する前に、本願発明は、変化してもよいとき、本願明細書に記載されている特定の方法論、プロトコールおよび試薬に限定されないことを理解されたい。本願明細書において使用される用語は、特定の態様を単に記載する目的であって、特許請求の範囲によってのみ限定される本願発明の範囲を限定することを意図しないことも理解されたい。他に定義されていない限り、本願明細書において使用される全ての専門および科学用語は、当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。
本願発明をさらに説明する。以下の段落において、本願発明の異なる局面をより詳細に定義する。そのように定義された各局面は、それとは反対に明確に指示されていない限り、他の任意の局面(複数も含む)と組み合わされ得る。特に、好ましい、または有利であると指示されている任意の特徴は、それとは反対に明確に指示されていない限り、好ましい、または有利であると指示されている他の任意の特徴(複数も含む)と組み合わされ得る。
(a)対象からの血液サンプル中の1つ以上の(疾患調節)miRNAの第1の所定のセットの発現プロフィールを決定すること、ここで、該miRNAの第1の所定のセットに含まれるmiRNAは図1および/または図3に列挙されたmiRNAから選択される
(b)該対象からの該血液サンプル中の1つ以上の(疾患保存)miRNAの第2の所定のセットの発現プロフィールを決定すること、ここで、該miRNAの第2の所定のセットに含まれるmiRNAは図2および/または図4に列挙されたmiRNAから選択される
(c)該miRNAの第2の所定のセットに対して該miRNAの第1の所定のセットの発現プロフィールを正規化すること
(d)工程(c)の正規化された発現プロフィールを参照と比較すること
(e)該参照との比較が変更されたとき、該対象において健康状態の変化を診断すること
を含む、方法を提供する。
配列番号:5)、またはhsa−miR−16(配列番号:28)によって割られたhsa−miR−17(配列番号:8)、またはhsa−miR−140−3p(配列番号:35)によって割られたhsa−miR−20a(配列番号:10)、またはhsa−miR−16(配列番号:28)によって割られたhsa−miR−20a(配列番号:10)、またはhsa−miR−30b(配列番号:37)によって割られたhsa−miR−144*(配列番号:7)、またはhsa−miR−16(配列番号:28)によって割られたhsa−miR−106a(配列番号:13)、またはhsa−miR−140−3p(配列番号:35)によって割られたhsa−miR−17(配列番号:8)、またはhsa−miR−140−3p(配列番号:35)によって割られたhsa−miR−144*(配列番号:7)、またはhsa−miR−140−3p(配列番号:35)によって割られたhsa−miR−106a(配列番号:13)、またはhsa−miR−27b(配列番号:34)によって割られたhsa−miR−93*(配列番号:21)、またはhsa−miR−19a(配列番号:29)によって割られたhsa−miR−144*(配列番号:7)、またはhsa−miR−140−3p(配列番号:35)によって割られたhsa−miR−222(配列番号:15)、またはhsa−miR−19a(配列番号:29)によって割られたhsa−miR−20b(配列番号:6)、またはhsa−miR−22(配列番号:38)によって割られたhsa−miR−363(配列番号:24)、またはhsa−miR−140−3p(配列番号:35)によって割られたhsa−miR−363(配列番号:24)、またはhsa−miR−99b(配列番号:54)によって割られたhsa−miR−93*(配列番号:21)、またはhsa−miR−19a(配列番号:29)によって割られたhsa−miR−720(配列番号:5)、またはhsa−miR−361−3p(配列番号:55)によって割られたhsa−miR−720(配列番号:5)のmiRNA発現レベルの比率である。
(i.)1つ以上の参照対象からの血液サンプル中の1つ以上のmiRNAの第1の所定のセットの発現プロフィールを決定すること、ここで、該miRNAの第1の所定のセットに含まれるmiRNAは図1および/または図3に列挙されたmiRNAから選択される
(ii.)1つ以上の参照対象からの該血液サンプル中の1つ以上のmiRNAの第2の所定のセットの発現プロフィールを決定すること、ここで、該miRNAの第2の所定のセットに含まれるmiRNAは図2および/または図4に列挙されたmiRNAから選択される
(iii.)該1つ以上の参照対象からの該miRNAの第2の所定のセットに対して該miRNAの第1の所定のセットの発現プロフィールを正規化すること
を含む得られた正規化された参照発現プロフィールである。
)によって割られたhsa−miR−720(配列番号:5)、またはhsa−miR−16(配列番号:28)によって割られたhsa−miR−17(配列番号:8)、またはhsa−miR−140−3p(配列番号:35)によって割られたhsa−miR−20a(配列番号:10)、またはhsa−miR−16(配列番号:28)によって割られたhsa−miR−20a(配列番号:10)、またはhsa−miR−30b(配列番号:37)によって割られたhsa−miR−144*(配列番号:7)、またはhsa−miR−16(配列番号:28)によって割られたhsa−miR−106a(配列番号:13)、またはhsa−miR−140−3p(配列番号:35)によって割られたhsa−miR−17(配列番号:8)、またはhsa−miR−140−3p(配列番号:35)によって割られたhsa−miR−144*(配列番号:7)、またはhsa−miR−140−3p(配列番号:35)によって割られたhsa−miR−106a(配列番号:13)、またはhsa−miR−27b(配列番号:34)によって割られたhsa−miR−93*(配列番号:21)、またはhsa−miR−19a(配列番号:29)によって割られたhsa−miR−144*(配列番号:7)、またはhsa−miR−140−3p(配列番号:35)によって割られたhsa−miR−222(配列番号:15)、またはhsa−miR−19a(配列番号:29)によって割られたhsa−miR−20b(配列番号:6)、またはhsa−miR−22(配列番号:38)によって割られたhsa−miR−363(配列番号:24)、またはhsa−miR−140−3p(配列番号:35)によって割られたhsa−miR−363(配列番号:24)、またはhsa−miR−99b(配列番号:54)によって割られたhsa−miR−93*(配列番号:21)、またはhsa−miR−19a(配列番号:29)によって割られたhsa−miR−720(配列番号:5)、またはhsa−miR−361−3p(配列番号:55)によって割られたhsa−miR−720(配列番号:5)のmiRNA発現レベルの比率である。
(a)対象からの血液サンプル中のmiRNAの第1の所定のセットの発現プロフィールを決定すること
(b)該対象からの該血液サンプル中のmiRNAの第2の所定のセットの発現プロフィールを決定すること
(c)該工程(a)の発現プロフィールおよび該工程(b)の発現プロフィールを参照発現プロフィールと比較すること
(d)該第1の参照発現プロフィールに対する比較が変更され、該第2の参照発現プロフィールに対する比較が変更されなかったとき、該対象において健康状態の変化を診断すること
を含む、方法に関する。
(a)健康状態について診断される対象の全血サンプルを提供すること
(b)該全血サンプルから血球サンプルを得ること
(c)該血球サンプルから全RNAを抽出すること
(d)抽出された全RNAから(配列番号:1〜26を有する図1に列挙されたmiRNAから選択される)1つ以上の疾患調節miRNAの第1のセットおよび(配列番号:27〜59を有する図2に列挙されたmiRNAから選択される)の1つ以上の疾患保存miRNAの第2のセットの発現プロフィールを決定すること
を含んで決定されることが好ましい。
(i.)1つ以上の対象間の健康状態を比較すること
(ii.)対象において健康状態をモニターすること
(iii.)対象において免疫系の状態をモニターすること
(iv.)対象において治療処置、好ましくは薬物処置に対する応答をモニターすること
のための、本願発明の第1および第2の局面による方法の使用に関する。
(i.)対象の血液サンプルにおいて配列番号:1〜26からなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAおよび配列番号:27〜59からなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAを含むセットの発現プロフィールを決定するための手段、および
(ii.)少なくとも1つの参照
を含む、対象の健康状態を診断するためのキットに関する。
(i.)対象の血液サンプルにおいて配列番号:1〜26からなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAおよび配列番号:27〜59からなる群から選択される少なくとも1つのmiRNAを含むセットを決定するための少なくとも2つのポリヌクレオチドのセット、および
(ii.)マイクロアレイ、RT−PCTシステム、PCRシステム、フローサイトメーター、ビーズに基づく多重システムまたは次世代シーケンシングシステム
を含む。
(a)第1および第2の局面による方法を実施することにより、最初の時点で対象において健康状態を診断すること
(b)第1および第2の局面による方法を実施することにより、1つ以上の後の時点で対象において健康状態を診断すること、および
(c)工程(a)において診断された健康状態を工程(b)において診断された健康状態と比較し、それにより対象において健康状態をモニターすること
を含む、方法を提供する。
(f)対象からの血液サンプル中の1つ以上のmiRNAの第1の所定のセットの発現プロフィールを決定すること、ここで、該miRNAの第1の所定のセットに含まれるmiRNAは図1および/または図3に列挙されたmiRNAから選択される
(g)該対象からの該血液サンプル中の1つ以上のmiRNAの第2の所定のセットの発現プロフィールを決定すること、ここで、該miRNAの第2の所定のセットに含まれるmiRNAは図2および/または図4に列挙されたmiRNAから選択される
(h)該miRNAの第2の所定のセットに対して該miRNAの第1の所定のセットの発現プロフィールを正規化すること
(i)工程(c)の正規化された発現プロフィールを参照と比較すること
(j)該参照との比較が変更されたとき、該対象において健康状態の変化を診断すること
を含み、
該血液サンプルは、全血、血球、赤血球、白血球および血小板からなる血液細胞画分、赤血球、白血球および血小板を含む血液細胞画分、または、赤血球、白血球または血小板を含む血液細胞画分から選択される、方法。
(i.)1つ以上の参照対象からの血液サンプル中の1つ以上のmiRNAの第1の所定のセットの発現プロフィールを決定すること、ここで、該miRNAの第1の所定のセットに含まれるmiRNAは図1および/または図3に列挙されたmiRNAから選択される
(ii.)1つ以上の参照対象からの該血液サンプル中の1つ以上のmiRNAの第2の所定のセットの発現プロフィールを決定すること、ここで、該miRNAの第2の所定のセットに含まれるmiRNAは図2および/または図4に列挙されたmiRNAから選択される
(iii.)該1つ以上の参照対象からの該miRNAの第2の所定のセットに対して該miRNAの第1の所定のセットの発現プロフィールを正規化すること
を含む、方法。
(e)対象からの血液サンプル中のmiRNAの第1の所定のセットの発現プロフィールを決定すること
(f)該対象からの該血液サンプル中のmiRNAの第2の所定のセットの発現プロフィールを決定すること
(g)該工程(a)の発現プロフィールおよび該工程(b)の発現プロフィールを参照発現プロフィールと比較すること
(h)該第1の参照発現プロフィールに対する比較が変更され、該第2の参照発現プロフィールに対する比較が変更されなかったとき、該対象において健康状態の変化を診断すること
を含み、
ここで、
(i.)該所定のmiRNAの第1のセットに含まれる該miRNAおよび該第1の参照発現プロフィールに含まれるmiRNAは図1および/または図3に列挙されたmiRNAから選択され、
(ii.)該所定のmiRNAの第2のセットに含まれる該miRNAは図2および/または図4に列挙されたmiRNAから選択され、
(iii.)該血液サンプルは、全血、血球、赤血球、白血球および血小板からなる血液細胞画分、赤血球、白血球および血小板を含む血液細胞画分、または、赤血球、白血球または血小板を含む血液細胞画分から選択される
方法。
(ii.)対象において健康状態をモニターすること、
(iii.)対象において免疫系の状態をモニターすること、
(iv.)対象において治療処置、好ましくは薬物処置に対する応答をモニターすること
のための、項目1から12のいずれかに記載の方法の使用。
健常対照および疾患対象 PAXgene Blood RNAチューブ(PreAnalytix)の血液。各血液ドナーについて、PAXgene Blood RNAチューブ中に2.5ml。血球調製物は、遠心分離による全血サンプルの処理に由来する/から得られる。ここで、該血液回収チューブに回収された全血からの血球を10分、5000xg遠心分離によって遠心した。血球ペレット(赤血球、白血球および血小板を含む細胞血液分画)をさらなる処理のために回収したが、上清(細胞外血液分画を含む)は捨てた。低分子RNA(miRNA画分)を含む全RNAを、miRNeasy Miniキット(Qiagen GmbH、Hilden、Germany)を使用して回収された血球から抽出した;詳細には実施例2参照。
低分子RNA(miRNA画分)を含む全RNAの単離を、miRNeasy Miniキット(Qiagen GmbH、Hilden、Germany)の使用によって行った。ここで、血球ペレット(実施例1において概説されるとおりに得られた)を、上下のピペッティングによって700μlのQIAzol溶解試薬に完全に再懸濁し、懸濁液を新たな1,5mlのEppendorfチューブに即座に移した。次に、140μlのクロロホルムを加え、完全にボルテックスし、室温で2−3分インキュベートし、次に4℃で15分12,000gで遠心分離した。その後、上部の水相を、他の2つの相に触れることなく、細心の注意を払って新たな2mlチューブに移した。次に、1.5容量の100%エタノールを移された水相に加え、完全な混合をピペッティングにより行った。次に、700μlのサンプルをカラムに移し、RTで15秒13,000rpmで遠心し、流出液を捨てた。その後、700μlのBuffer RWTを各カラムに加え、RTで15秒13,000rpmで再び遠心し、流出液を捨てた。次に、500μlのBuffer RPEをカラムに加え、RTで15秒13,000rpmで遠心し、流出液を捨てた。その後、別の500μlのBuffer RPEをカラムに加え、RTで2分13,000rpmで遠心し、流出液を捨てた。次に、カラムを新たな2ml回収チューブに置き、RTで1分13,000rpmで遠心し、それを乾燥した。カラムを新たな1.5ml回収チューブに移した。microRNAを含む全RNAの溶離のため、40μlのRNase非含有水をカラム上にピペッティングし、1分インキュベートし、RTで1分13.000rpm遠心した。次に、溶出液を同じカラムに戻し、RTで1分インキュベートし、1分再び遠心した。溶出したmicroRNAを含む全RNAをNanoDrop 1000を使用して定量し、発現プロファイリング実験の使用前に−20℃で貯蔵した。全RNAの品質管理のために、1μlの全RNAを、NanoDrop測定によって決定されるRNA濃度に依存してAgilent’s nanoまたはpico RNA Chipのいずれかを選択してAgilent’s Bioanalyzerに付した。
miRNA画分を含む全RNAサンプル(実施例2のプロトコールによって得られた)を、Geniom Biochip miRNAホモサピエンスを使用するGeniom Realtime Analyzer(febit biomed GmbH、Heidelberg、Germany)にてマイクロアレイハイブリダイゼーションを使用して分析した。各マイクロ流体マイクロアレイは、Sanger miRBase 12.0に注釈されるとおり866個のmiRNAおよびmiRNA*(それぞれ、7つの複製によって表される)の相補的dna−probeを含む。ビオチンでのサンプル標識化は、febitのMPEAアッセイを使用するmiRNAの酵素的オンチップ標識化によって行われた。42℃で16時間のハイブリダイゼーション後、バイオチップを自動的に洗浄し、シグナル増強のためのプログラムをGeniom Realtime Analyzerで処理した。得られた検出画像を、Geniom Wizard Softwareを使用して評価した。各アレイについて、それぞれのmiRNAについて、アレイ上のmiRBaseのそれぞれの複製コピーに対応して7つの強度値が計算されるように、中央シグナル強度を生データファイルから抽出した。バックグラウンド補正後、それぞれのmiRNAの7つの複製強度値を、それらの中央値によって要約した。異なるアレイ間でデータを正規化するために、分位正規化を適用し、正規化されたバックグラウンド減算強度値を使用して全てのさらなる分析を行った。中央g1および中央g2から、発現の倍数変化(=q中央)を比率g1/g2として計算した。
測定されたデータの正規分布を検証した後、パラメトリックt−test(不対、両側)をそれぞれのmiRNAごとに別々に実施し、血液ドナーの異なる群において異なる挙動を示すmiRNAを検出した。得られた生のp値を、Benjamini−Hochberg調整(=ttest_adj)によって複数の試験のために調整した。さらに、本願発明者らは、それぞれのmiRNAごとに別々にlimma−testを適用し、Benjamini−Hochberg(=limma_adj)にしたがって補正した。さらに、本願発明者らは、受信者動作特性を適用し、「曲線下面積」値(=AUC)を計算した。ttest−、limma−test−およびAUC−値は、それぞれのmiRNAに対する統計的有意性に基づいて、群1(g1対象)および群2(g2対象)間で発現される差異があると判断することを可能にする。
この試験の目的は、種々の疾患および健常対照において有意に変更された発現を示すmiRNAおよび対照的に疾患および対照において非常に低い発現変動を示すmiRNAを同定することであった。miRNAの2つの群は「疾患調節」または「疾患保存」miRNAと称される。合計で、miRNAプロフィールは1,049の血液サンプルから得られ、それら全ては同じプロトコールを使用してPAXgene Blood RNAチューブに回収された。それぞれの場合において、プロフィールは、マイクロアレイ分析によって記録される848個のmiRNAの発現値から生成した。「疾患調節」または「疾患保存」miRNAを同定するために、本願発明者らはt−testおよびAUC値を使用した。p値またはAUC値について20個の異なる閾値を使用して、本願発明者らは「疾患調節」(図1)または「疾患保存」miRNA(図2)の異なるセットを得た。
Claims (19)
- 対象において健康状態を診断するための方法であって、工程:
(a)対象からの血液サンプル中の1つ以上のmiRNAの第1の所定のセットの発現プロフィールを決定すること、ここで、該miRNAの第1の所定のセットに含まれるmiRNAは図1および/または図3に列挙されたmiRNAから選択される
(b)該対象からの該血液サンプル中の1つ以上のmiRNAの第2の所定のセットの発現プロフィールを決定すること、ここで、該miRNAの第2の所定のセットに含まれるmiRNAは図2および/または図4に列挙されたmiRNAから選択される
(c)該miRNAの第2の所定のセットに対して該miRNAの第1の所定のセットの発現プロフィールを正規化すること
(d)工程(c)の正規化された発現プロフィールを参照と比較すること
(e)該参照との比較が変更されたとき、該対象において健康状態の変化を診断すること
を含み、
該血液サンプルは赤血球、白血球および血小板を含む血液細胞画分である、方法。 - 工程(c)において正規化することが該miRNAの第1の所定のセットに含まれるmiRNAのそれぞれに対して相対発現レベルを生成する、請求項1に記載の方法。
- 該参照が、得られた正規化された参照発現プロフィールである、請求項2に記載の方法であって、工程:
(i.)1つ以上の参照対象からの血液サンプル中の1つ以上のmiRNAの第1の所定のセットの発現プロフィールを決定すること、ここで、該miRNAの第1の所定のセットに含まれるmiRNAは図1および/または図3に列挙されたmiRNAから選択される
(ii.)1つ以上の参照対象からの該血液サンプル中の1つ以上のmiRNAの第2の所定のセットの発現プロフィールを決定すること、ここで、該miRNAの第2の所定のセットに含まれるmiRNAは図2および/または図4に列挙されたmiRNAから選択される
(iii.)該1つ以上の参照対象からの該miRNAの第2の所定のセットに対して該miRNAの第1の所定のセットの発現プロフィールを正規化すること
を含む、方法。 - 工程(iii)において正規化することが該miRNAの第1の所定のセットに含まれるmiRNAのそれぞれに対して相対参照発現レベルを生成する、請求項3に記載の方法。
- 工程(d)において比較することが、該miRNAの第1の所定のセットに含まれるmiRNAのそれぞれに対して、該対象からの相対発現レベルを相対参照発現レベルと比較することによる、請求項1から4のいずれかに記載の方法。
- 相対発現レベルが、図1に列挙された(疾患調節)miRNAおよび図2に列挙された(疾患保存)miRNAからの比率を計算することにより得られる、請求項2、4または5のいずれかに記載の方法。
- 相対発現レベルが図7に列挙された比率の群から選択される、請求項6に記載の方法。
- 工程(e)において、相対参照発現レベルに対する該対象からの相対発現レベルの比較が該セットに含まれる該1つ以上の所定のmiRNAに対する閾値を超えるとき、健康状態の変化が診断される、請求項1から7のいずれかに記載の方法。
- 該閾値が3標準偏差に設定され、好ましくは5標準偏差に設定され、さらに好ましくは7標準偏差に設定される、請求項1から8のいずれかに記載の方法。
- 対象において健康状態を診断するための方法であって、工程:
(a)対象からの血液サンプル中のmiRNAの第1の所定のセットの発現プロフィールを決定すること
(b)該対象からの該血液サンプル中のmiRNAの第2の所定のセットの発現プロフィールを決定すること
(c)該工程(a)の発現プロフィールおよび該工程(b)の発現プロフィールを参照発現プロフィールと比較すること
(d)該第1の参照発現プロフィールに対する比較が変更され、該第2の参照発現プロフィールに対する比較が変更されなかったとき、該対象において健康状態の変化を診断すること
を含み、
ここで、
(i.)該所定のmiRNAの第1のセットに含まれる該miRNAおよび該第1の参照発現プロフィールに含まれるmiRNAは図1および/または図3に列挙されたmiRNAから選択され、
(ii.)該所定のmiRNAの第2のセットに含まれる該miRNAは図2および/または図4に列挙されたmiRNAから選択され、
(iii.)該血液サンプルは赤血球、白血球および血小板を含む血液細胞画分である、
方法。 - 該参照発現プロフィールが同じ対象の前の時点によって得られる、請求項3から10のいずれかに記載の方法。
- 健康状態の変化が健康状態の改善または悪化である、請求項1から11のいずれかに記載の方法。
- (i.)1つ以上の対象間の健康状態を比較すること
(ii.)対象において健康状態をモニターすること
(iii.)対象において免疫系の状態をモニターすること
(iv.)対象において治療処置、好ましくは薬物処置に対する応答をモニターすること
のための、請求項1から12のいずれかに記載の方法の使用。 - 対象において健康状態をモニターするための方法であって、工程:
(a)請求項1から12のいずれかに記載の方法を実施することにより、最初の時点で対象において健康状態を診断すること
(b)請求項1から12のいずれかに記載の方法を実施することにより、1つ以上の後の時点で対象において健康状態を診断すること、および
(c)工程(a)において診断された健康状態を工程(b)において診断された健康状態と比較し、それにより対象において健康状態をモニターすること
を含む、方法。 - 対象において健康状態が時間とともに改善または悪化する、請求項14に記載の方法。
- モニターされる対象において健康状態が該対象の免疫系の状態を含む、請求項14または15に記載の方法。
- 対象が最初の時点から1つ以上の後の時点の間で治療処置を受けている、請求項14から16のいずれかに記載の方法。
- 治療処置が薬物の投与を含む、請求項17に記載の方法。
- 治療処置が外科処置、化学療法、放射線療法および/または免疫療法を含む、請求項17または18に記載の方法。
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