JP2017161349A - Chemiluminescent material supply container - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は酵素免疫測定などに用いられる化学発光用材料の供給容器に関する。 The present invention relates to a supply container for a chemiluminescent material used for enzyme immunoassay and the like.
酵素免疫測定には様々な化学発光用材料が用いられている。これらの中で自動分析装置に用いられているものは、ほとんどにおいて液状品であり、従来、供給容器の容量は50mLから100mLであり、場合によって200mLということもある。容量が多いことは化学発光用材料溶液の交換頻度が少なくなるというメリットがある。しかし、化学発光用材料溶液が汚染されてしまうと、残量にかかわらず廃棄するしかない。さらに測定数が少ない場合には化学発光用材料溶液の消費量も少なく、開封後に一定期間経過した後に残量にかかわらず廃棄する場合もある。また、酵素免疫測定に必要な試薬一式を一体型カートリッジに封入しているものも考案されている(特許文献1参照)。しかし、一体型カートリッジであることは、化学発光用材料以外の試薬の保存安定性に依存して、例えば化学発光用材料溶液の保存安定性が1年であっても、酵素標識試薬の保存安定性が6か月の場合には、一体型カートリッジの有効期間は6か月と設定されてしまう弊害があった。よって、化学発光用材料溶液のみ独立して小型化した供給容器が求められていた。 Various chemiluminescent materials are used for enzyme immunoassay. Among these, most used in automatic analyzers are liquid products. Conventionally, the capacity of a supply container is 50 mL to 100 mL, and sometimes 200 mL. The large capacity has the advantage of reducing the frequency of exchanging the chemiluminescent material solution. However, if the chemiluminescent material solution is contaminated, it must be discarded regardless of the remaining amount. Further, when the number of measurements is small, the consumption of the chemiluminescent material solution is also small, and it may be discarded regardless of the remaining amount after a certain period of time after opening. Also, a device in which a set of reagents necessary for enzyme immunoassay is enclosed in an integrated cartridge has been devised (see Patent Document 1). However, the integral cartridge is dependent on the storage stability of reagents other than the chemiluminescent material. For example, even if the storage stability of the chemiluminescent material solution is 1 year, the storage stability of the enzyme-labeled reagent is stable. In the case where the property is 6 months, the effective period of the integrated cartridge is set to 6 months. Therefore, there has been a demand for a supply container in which only the chemiluminescent material solution is independently reduced in size.
本発明は、化学発光用材料溶液のみ独立した供給容器を提供することを目的とする。また本発明は、酵素免疫測定用基質試薬としても使用可能な、保存安定性に優れ、高感度測定を可能にする化学発光用材料溶液を提供することを目的とする。 An object of the present invention is to provide a supply container in which only the chemiluminescent material solution is independent. Another object of the present invention is to provide a chemiluminescent material solution that can be used as a substrate reagent for enzyme immunoassay and has excellent storage stability and enables highly sensitive measurement.
本発明者らは上記課題について鋭意検討した結果、本発明に到達した。すなわち本発明は、以下の通りである。
(1)化学発光基質溶液を収容した収容部一つ以上と、
前記化学発光基質の発光増強試薬溶液を収容した収容部一つ以上と、
からなる化学発光用材料の供給容器であって、
収容部の内底面の形状がいずれも略半球状であり、光透過性のない前記容器。
(2)容器に備えた化学発光基質溶液および発光増強試薬溶液の収容部がそれぞれ一つである、(1)に記載の容器。
As a result of intensive studies on the above problems, the present inventors have reached the present invention. That is, the present invention is as follows.
(1) one or more storage units containing the chemiluminescent substrate solution;
One or more storage units containing the chemiluminescent substrate luminescence enhancing reagent solution; and
A chemiluminescent material supply container comprising:
The container in which the shape of the inner bottom surface of the housing part is substantially hemispherical and has no light transmittance.
(2) The container according to (1), wherein the container includes one chemiluminescent substrate solution and one luminescence enhancing reagent solution storage unit.
以下、本発明をさらに詳細に説明する。 Hereinafter, the present invention will be described in more detail.
本発明の供給容器は、化学発光基質の溶液を収容した化学発光基質溶液収容部一つ以上と、化学発光基質の化学発光を増強する試薬溶液を収容した発光増強試薬溶液(以下、エンハンサー溶液ともいう)収容部一つ以上と、を備えている。化学発光基質溶液収容部およびエンハンサー溶液収容部の配置は、1列に複数個の収容部が連続した並びであってもよいし、複数列に複数個の収容部が連続した並びであってもよい。ただし、装置上での操作性を考慮に入れると、1列に2個から20個の収容部が連続した並びからなる測定容器が好ましく、一つの化学発光基質溶液収容部と一つのエンハンサー溶液収容部とが一列に並び、かつ一体に成形された測定容器が特に好ましい。 The supply container of the present invention includes one or more chemiluminescent substrate solution storage units containing a chemiluminescent substrate solution and a luminescence enhancing reagent solution (hereinafter also referred to as an enhancer solution) containing a reagent solution that enhances chemiluminescence of the chemiluminescent substrate. And one or more storage units. The arrangement of the chemiluminescent substrate solution storage unit and the enhancer solution storage unit may be a sequence in which a plurality of storage units are continuous in one row, or a sequence in which a plurality of storage units are continuous in a plurality of rows. Good. However, in consideration of operability on the apparatus, a measurement container having a continuous arrangement of 2 to 20 storage units in one row is preferable, and one chemiluminescent substrate solution storage unit and one enhancer solution storage Particularly preferred is a measuring container in which the parts are aligned in a row and are integrally formed.
本発明の供給容器における各収容部の大きさは、測定規模や装置の大きさにより適宜選択すればよく、一例として内径(円筒型の場合)または一辺(角筒型の場合)が1mmから20mm程度で、深さが1mmから50mm程度からなる収容部をあげることができる。 The size of each accommodating portion in the supply container of the present invention may be appropriately selected depending on the measurement scale and the size of the apparatus. As an example, the inner diameter (in the case of a cylindrical type) or one side (in the case of a rectangular tube type) is 1 mm to 20 mm. By the way, it is possible to raise an accommodating portion having a depth of about 1 mm to 50 mm.
本発明の供給容器における各収容部の外部形状および大きさは、同じであってもよいし、試料(検体)や試薬の量に応じて外部形状および/または大きさを変化させてもよい。
ただし、供給容器を成形する際の容易性を考慮すると、同じ外部形状および大きさを有した複数の収容部が一体に成形された測定容器が好ましい。
The external shape and size of each container in the supply container of the present invention may be the same, or the external shape and / or size may be changed according to the amount of sample (specimen) or reagent.
However, in consideration of the ease of forming the supply container, a measurement container in which a plurality of accommodating portions having the same external shape and size are integrally formed is preferable.
本発明の供給容器において、収容部の内底面はいずれ略半球状である。これにより、平底と比較して化学発光基質溶液及びエンハンサー溶液のデッドボリュームを低減することができる。 In the supply container according to the present invention, the inner bottom surface of the storage portion is substantially hemispherical. Thereby, the dead volume of a chemiluminescent substrate solution and an enhancer solution can be reduced compared with a flat bottom.
本発明の供給容器の材質は、熱可塑性樹脂(例えばオレフィン系樹脂、スチレン系樹脂、ビニル系樹脂、カーボネート系樹脂、ポリエステル系樹脂、ポリアミド系樹脂)やガラス等が例示できる。ただし、取り扱いの面を考慮すると熱可塑性樹脂が材質として好ましい。また、熱可塑性樹脂の中でも、容器や樹脂成形品の製造に通常用いられている、オレフィン系単独重合体(ホモポリマー)または共重合体(コポリマー)が材質として特に好ましい。前記特に好ましい材質の一例として、低密度ポリエチレン、中密度ポリエチレン、高密度ポリエチレン、線状低密度ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリブテン−1、ポリ4−メチルペンテン−1、プロピレン−エチレン共重合体、アイオノマー、エチレン−アクリル共重合体、エチレン−酢酸ビニル共重合体があげられる。 Examples of the material of the supply container of the present invention include thermoplastic resins (for example, olefin resins, styrene resins, vinyl resins, carbonate resins, polyester resins, polyamide resins) and glass. However, in view of handling, a thermoplastic resin is preferable as a material. Among thermoplastic resins, olefin homopolymers (homopolymers) or copolymers (copolymers), which are usually used for the production of containers and resin molded products, are particularly preferred. Examples of the particularly preferable materials include low density polyethylene, medium density polyethylene, high density polyethylene, linear low density polyethylene, polypropylene, polybutene-1, poly-4-methylpentene-1, propylene-ethylene copolymer, ionomer, and ethylene. -Acrylic copolymer and ethylene-vinyl acetate copolymer.
本発明の供給容器は光透過性が無いものである。例えば白色顔料(二酸化チタン等)を練りこんでいる白色容器や、白色顔料(二酸化チタン等)と黒色顔料(カーボンブラック等)とを練りこんでいる灰色容器や、黒色顔料(カーボンブラック等)を練りこんでいる黒色容器が好ましい。この中でも灰色容器と黒色容器が特に好ましい。 The supply container of the present invention is not light transmissive. For example, a white container in which a white pigment (titanium dioxide, etc.) is kneaded, a gray container in which a white pigment (titanium dioxide, etc.) and a black pigment (carbon black, etc.) are kneaded, or a black pigment (carbon black, etc.) A black container kneaded is preferred. Among these, a gray container and a black container are particularly preferable.
化学発光基質溶液としては特に限定されるものではないが、例えば
一般式(I)
Although it does not specifically limit as a chemiluminescent substrate solution, For example, general formula (I)
置換基のアルキル基としては、炭素数1〜20個の直鎖状、分枝鎖状、または環状のアルキル基をいい、例えばメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシル、ノナデシル、イコサニルなどの直鎖の基、又はこれらのアルキル基が適宜分枝状に結合した基(例えばi−プロピル基、i−ブチル基、t−ブチル基等)、または環状になった基を例示することができる。これらのアルキル基は、さらに置換基を有していてもよく、例えば、ヒドロキシル基、アルコキシル基、アリール基等が置換していてもよい。 The alkyl group for the substituent means a linear, branched or cyclic alkyl group having 1 to 20 carbon atoms, such as methyl, ethyl, propyl, butyl, pentyl, hexyl, heptyl, octyl, nonyl. , Decyl, undecyl, dodecyl, tetradecyl, pentadecyl, hexadecyl, heptadecyl, octadecyl, nonadecyl, icosanyl and the like, or a group in which these alkyl groups are appropriately branched (for example, an i-propyl group, i- A butyl group, a t-butyl group, etc.) or a cyclic group. These alkyl groups may further have a substituent, for example, a hydroxyl group, an alkoxyl group, an aryl group, or the like may be substituted.
アリール基としては、例えばフェニル、ナフチル基等の炭素数6〜20個の芳香族炭化水素基、および、フリル、チエニル、ピリジル基等のように環内に1〜5個の窒素原子、酸素原子または硫黄原子を有するヘテロアリール基等を挙げることができる。アルコキシル基としては、例えばメトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ、メトキシエトキシ、メトキシプロポキシ、エトキシエトキシ、エトキシプロポキシ、メトキシエトキシエトキシ基等の炭素数1〜20個のアルコキシル基が直鎖状または分枝状に1〜5個結合したもの等を挙げることができる。アラルキルオキシ基としては、ベンジルオキシ、フェネチルオキシ基等の炭素数7〜20の基が例示でき、ハロゲン原子としてはフッ素、塩素、臭素等が例示できる。 Examples of the aryl group include aromatic hydrocarbon groups having 6 to 20 carbon atoms such as phenyl and naphthyl groups, and 1 to 5 nitrogen atoms and oxygen atoms in the ring such as furyl, thienyl and pyridyl groups. Or the heteroaryl group which has a sulfur atom etc. can be mentioned. Examples of the alkoxyl group include linear alkoxyl groups having 1 to 20 carbon atoms such as methoxy, ethoxy, propoxy, butoxy, pentyloxy, hexyloxy, methoxyethoxy, methoxypropoxy, ethoxyethoxy, ethoxypropoxy, and methoxyethoxyethoxy groups. And 1-5 bonded in a branched or branched form. Examples of the aralkyloxy group include groups having 7 to 20 carbon atoms such as benzyloxy and phenethyloxy groups, and examples of the halogen atom include fluorine, chlorine, bromine and the like.
またR1、R2が一体となり、ジオキセタン環にスピロ結合する環式又は多環式有機環基としては、例えばアダマンチル基をあげることができる。R3とR1又はR2とが一体となってジオキセタン環と酸素原子を含む縮合環としては、例えばフラン環、ピラン環をあげることができる。またR4のリン酸塩基としては、例えばPO4 3−のナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩等をあげることができる。 In addition, examples of the cyclic or polycyclic organic ring group in which R 1 and R 2 are combined and spiro-bonded to the dioxetane ring include an adamantyl group. Examples of the condensed ring in which R 3 and R 1 or R 2 are combined and contain a dioxetane ring and an oxygen atom include a furan ring and a pyran ring. Examples of the phosphate group of R 4 include sodium salt, potassium salt and ammonium salt of PO 4 3− .
このような置換基の中で、好ましくは、R1、R2は炭素数1〜20個の直鎖状、分枝鎖状、または環状のアルキル基であり、R4はヒドロキシル基またはリン酸塩基であり、R5は水素原子またはハロゲン原子である。 Among such substituents, R 1 and R 2 are preferably linear, branched or cyclic alkyl groups having 1 to 20 carbon atoms, and R 4 is a hydroxyl group or phosphoric acid. A base, and R 5 is a hydrogen atom or a halogen atom.
このような置換基を有する一般式(I)で表される1,2−ジオキセタン誘導体として、具体的には、リン酸3−[3’−メトキシスピロ[アダマンタン−2,4’−[1,2]ジオキセタン]−3’−イル]フェニル、5−t−ブチル−4,4−ジメチル−1−(3’−ホスホリルオキシ)フェニル−2,6,7−トリオキサビシクロ[3.2.0]ヘプタンジナトリウム塩、リン酸モノ−[5−(5−t−ブチル−4,4−ジメチル−2,6,7−トリオキサビシクロ[3.2.0]ヘプト−1−イル)−2−クロロフェニル]エステル ジナトリウム塩などがあげられる。中でもリン酸3−[3’−メトキシスピロ[アダマンタン−2,4’−[1,2]ジオキセタン]−3’−イル]フェニル、5−t−ブチル−4,4−ジメチル−1−(3’−ホスホリルオキシ)フェニル−2,6,7−トリオキサビシクロ[3.2.0]ヘプタンジナトリウム塩が好ましく、5−t−ブチル−4,4−ジメチル−1−(3’−ホスホリルオキシ)フェニル−2,6,7−トリオキサビシクロ[3.2.0]ヘプタンジナトリウム塩が更に好ましい。 Specific examples of the 1,2-dioxetane derivative represented by the general formula (I) having such a substituent include 3- [3′-methoxyspiro phosphate [adamantane-2,4 ′-[1, 2] Dioxetane] -3′-yl] phenyl, 5-t-butyl-4,4-dimethyl-1- (3′-phosphoryloxy) phenyl-2,6,7-trioxabicyclo [3.2.0 ] Heptane disodium salt, mono- [5- (5-t-butyl-4,4-dimethyl-2,6,7-trioxabicyclo [3.2.0] hept-1-yl) -2 phosphate -Chlorophenyl] ester disodium salt and the like. Among them, 3- [3′-methoxyspiro [adamantane-2,4 ′-[1,2] dioxetane] -3′-yl] phenyl phosphate, 5-t-butyl-4,4-dimethyl-1- (3 '-Phosphoryloxy) phenyl-2,6,7-trioxabicyclo [3.2.0] heptane disodium salt is preferred, 5-t-butyl-4,4-dimethyl-1- (3'-phosphoryloxy ) Phenyl-2,6,7-trioxabicyclo [3.2.0] heptane disodium salt is more preferred.
発光増強試薬溶液(エンハンサー溶液)としては例えばカチオン性界面活性剤および蛍光性物質を含有する溶液を用いることができる。例えばカチオン性界面活性剤は、市販のEmerald−IITM(TROPIX社製)に含有されるポリ(ベンジルトリブチル)アンモニウムクロリドや一般式(III) As the luminescence enhancing reagent solution (enhancer solution), for example, a solution containing a cationic surfactant and a fluorescent substance can be used. For example, cationic surfactants include poly (benzyltributyl) ammonium chloride and general formula (III) contained in commercially available Emerald-II ™ (manufactured by TROPIX).
一般式(III)において、炭素数8〜20のアルキル基としては、炭素数8〜20個の直鎖状または分枝鎖状のアルキル基をいい、例えばオクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシル、ノナデシル、イコサニルなどの直鎖の基、又はこれらのアルキル基が適宜分枝状に結合した基を例示することができる。炭素数1〜8のアルキル基としては、炭素数1〜8個の直鎖状または分枝鎖状のアルキル基をいい、例えばメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチルなどの直鎖の基、又はこれらのアルキル基が適宜分枝状に結合した基を例示することができる。炭素数8〜20のアリール基としては、例えばナフチル基等の炭素数8〜20個の芳香族炭化水素基、又は環内に1〜5個の窒素原子、酸素原子または硫黄原子を有するヘテロアリール基等を挙げることができる。ハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子等が例示できる。 In the general formula (III), the alkyl group having 8 to 20 carbon atoms refers to a linear or branched alkyl group having 8 to 20 carbon atoms, such as octyl, nonyl, decyl, undecyl, dodecyl, Examples thereof include straight-chain groups such as tetradecyl, pentadecyl, hexadecyl, heptadecyl, octadecyl, nonadecyl, icosanyl, and groups in which these alkyl groups are appropriately linked. The alkyl group having 1 to 8 carbon atoms refers to a linear or branched alkyl group having 1 to 8 carbon atoms, such as methyl, ethyl, propyl, butyl, pentyl, hexyl, heptyl, octyl and the like. Examples thereof include a linear group or a group in which these alkyl groups are appropriately branched. Examples of the aryl group having 8 to 20 carbon atoms include an aromatic hydrocarbon group having 8 to 20 carbon atoms such as a naphthyl group, or a heteroaryl having 1 to 5 nitrogen atoms, oxygen atoms, or sulfur atoms in the ring. Groups and the like. Examples of the halogen atom include a fluorine atom, a chlorine atom, and a bromine atom.
以上のような置換基を有する、一般式(III)で表される第4級アンモニウム塩の好適な例として、臭化セチルトリメチルアンモニウム(CTAB)、塩化ベンザルコニウムおよび塩化ベンゼトニウムがあげられる。また第4級ホスホニウム塩の好適な例は、臭化トリ−n−ブチルヘキサデシルホスホニウム、臭化エチルトリフェニルホスホニウム、臭化トリヘプチルフェニルホスホニウムおよび臭化テトラデシルトリフェニルホスホニウムがあげられる。その中でも、臭化トリ−n−ブチルヘキサデシルホスホニウムがきわめて望ましい。 Preferable examples of the quaternary ammonium salt represented by the general formula (III) having the above substituent include cetyltrimethylammonium bromide (CTAB), benzalkonium chloride and benzethonium chloride. Preferable examples of the quaternary phosphonium salt include tri-n-butylhexadecylphosphonium bromide, ethyltriphenylphosphonium bromide, triheptylphenylphosphonium bromide and tetradecyltriphenylphosphonium bromide. Of these, tri-n-butylhexadecylphosphonium bromide is highly desirable.
本発明で用いられる蛍光性物質としては、カチオン性界面活性剤と共に一般式(I)で表される1,2−ジオキセタン誘導体の化学発光を増強する効果を持つものであれば特に限定はないが、例えばフルオレセインおよびフルオレセイン誘導体(フルオレセインナトリウム、アミノフルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート(FITC)等)、ボディピー(BODIPY)色素、オレゴングリーン488、オレゴングリーン514、Rhodol green(登録商標)、Alexa Fluor 488(登録商標)およびヒドラジド、5−(および−6)−カルボキシ−2’,7’−ジクロロフルオレセインが挙げられる。その中でも、フルオレセイン、フルオレセインナトリウム、フルオレセインイソシアネートが好ましく、フルオレセインが特に望ましい。 The fluorescent substance used in the present invention is not particularly limited as long as it has an effect of enhancing the chemiluminescence of the 1,2-dioxetane derivative represented by the general formula (I) together with the cationic surfactant. Fluorescein and fluorescein derivatives (sodium fluorescein, aminofluorescein, fluorescein isothiocyanate (FITC), etc.), body pea (BODIPY) dye, Oregon Green 488, Oregon Green 514, Rhodol green (registered trademark), Alexa Fluor 488 (registered trademark) And hydrazide, 5- (and -6) -carboxy-2 ', 7'-dichlorofluorescein. Among these, fluorescein, sodium fluorescein, and fluorescein isocyanate are preferable, and fluorescein is particularly desirable.
本発明の化学発光用材料の供給容器は、前述の溶液を有するものである。その溶媒としては、例えば水や水性緩衝液などのプロトン性溶媒が用いられる。また溶液中の化学発光基質や発光増強試薬の濃度は特に限定されるものではないが、酵素免疫測定の基質として使用する場合には、使用時にその好適な濃度範囲をとれるものであることが好ましい。また化学発光基質の溶液は、実質的に発光増強試薬を含有せず、これによって化学発光基質の高い保存安定性が得られる。一方、pH調整剤や、保存安定性を確保するためにアジ化ナトリウムなどの保存剤を適宜含有していてもよい。 The supply container for the chemiluminescent material of the present invention has the aforementioned solution. As the solvent, for example, a protic solvent such as water or an aqueous buffer is used. In addition, the concentration of the chemiluminescent substrate and the luminescence enhancing reagent in the solution is not particularly limited, but when used as a substrate for enzyme immunoassay, it is preferable that the concentration range is suitable for use. . In addition, the solution of the chemiluminescent substrate does not substantially contain a luminescence enhancing reagent, and thereby high storage stability of the chemiluminescent substrate can be obtained. On the other hand, a pH adjuster and a preservative such as sodium azide may be appropriately contained in order to ensure storage stability.
本発明では、化学発光基質を、活性化剤により化学発光させる際に、発光増強試薬を添加する。これにより従来法と同等以上の発光量を得ることができる。 In the present invention, when the chemiluminescent substrate is chemiluminescent with an activator, a luminescence enhancing reagent is added. Thereby, it is possible to obtain a light emission amount equal to or higher than that of the conventional method.
ここで使用される活性化剤は、化学発光基質に応じて適宜選択すればよいが、化学発光基質が一般式(I)で表される1,2−ジオキセタン誘導体の場合は、塩基、酸、塩、フッ素化合物、酵素、触媒およびアミン化合物からなる群から選択されるものが使用される。これは一般式(I)で表される1,2−ジオキセタン誘導体の基R4に作用して不安定なオキシド中間体を経てカルボニル化合物に変化させると同時に化学発光を生じさせることのできるものである。例えばR4がヒドロキシル基ならば塩基が、またR4が−OSi(R6R7R8)(ただし、R6、R7およびR8は互いに独立にアルキル基又はアリール基である。)で表される基ならばテトラブチルアンモニウムフルオライドが活性化剤として好適に使用できる。一般式(I)で表される1,2−ジオキセタン誘導体を酵素免疫測定の基質として使用する場合は、活性化剤として各種酵素たとえば、アルカリ性ホスファターゼ、アリールエステラーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、ペルオキシダーゼおよびガラクトシダーゼなどが好適に使用できる。特にR4がリン酸塩基の場合は、アルカリ性ホスファターゼが好適に使用できる。 The activator used here may be appropriately selected according to the chemiluminescent substrate. However, when the chemiluminescent substrate is a 1,2-dioxetane derivative represented by the general formula (I), a base, an acid, Those selected from the group consisting of salts, fluorine compounds, enzymes, catalysts and amine compounds are used. This is capable of acting on the group R 4 of the 1,2-dioxetane derivative represented by the general formula (I) to be converted into a carbonyl compound via an unstable oxide intermediate and simultaneously generating chemiluminescence. is there. For example, when R 4 is a hydroxyl group, the base is used, and R 4 is —OSi (R 6 R 7 R 8 ) (wherein R 6 , R 7 and R 8 are each independently an alkyl group or an aryl group). If it is a group represented, tetrabutylammonium fluoride can be suitably used as an activator. When the 1,2-dioxetane derivative represented by the general formula (I) is used as a substrate for enzyme immunoassay, various enzymes such as alkaline phosphatase, arylesterase, acetylcholinesterase, peroxidase and galactosidase are suitable as the activator. Can be used for In particular, when R 4 is a phosphate group, alkaline phosphatase can be preferably used.
本発明により、保存安定性を有している化学発光用材料の供給容器を提供することができる。 According to the present invention, a supply container of a chemiluminescent material having storage stability can be provided.
次に、実施例を示して本発明を具体的に説明する。しかし本発明はこれら実施例のみに限定されるものではない。 Next, an Example is shown and this invention is demonstrated concretely. However, the present invention is not limited to these examples.
(実施例1)
図1に示される内底面が略半球状収容部を2つ有する、各収容部の最大容量が500μLである、白色顔料(二酸化チタン)と黒色顔料(カーボンブラック)とを練りこんでいる光透過性のない灰色のポリプロピレン製容器を用意した。1,2−ジオキセタン誘導体として、5−t−ブチル−4,4−ジメチル−1−(3’−ホスホリルオキシ)フェニル−2,6,7−トリオキサビシクロ[3.2.0]ヘプタンジナトリウム塩を0.8mM、及びアジ化ナトリウム0.1%を含む、50mMの2−アミノ−2−メチル−1−プロパノール緩衝溶液(pH10)を調製し、内底面が略半球状の収容部に350μL分注した。蛍光性物質としてフルオレセインを0.3mM、カチオン性界面活性剤として臭化トリ−n−ブチルヘキサデシルホスホニウムを2.0mM、及びアジ化ナトリウム0.1%を含む、500mMの2−アミノ−2−メチル−1−プロパノール緩衝溶液(pH10)を調製し、もう一方の内底面が略半球状の収容部に350μL分注した。その後、アルミシールにて2つの収容部を封入し、4℃又は20℃に7日間保管した。保管する際にアルミシール面を上面としてそのまま静置した。
Example 1
The inner bottom surface shown in FIG. 1 has two substantially hemispherical accommodating parts, and the maximum capacity of each accommodating part is 500 μL, and light transmission kneaded with white pigment (titanium dioxide) and black pigment (carbon black). An innocent gray polypropylene container was prepared. As a 1,2-dioxetane derivative, 5-t-butyl-4,4-dimethyl-1- (3′-phosphoryloxy) phenyl-2,6,7-trioxabicyclo [3.2.0] heptane disodium A 50 mM 2-amino-2-methyl-1-propanol buffer solution (pH 10) containing 0.8 mM salt and 0.1% sodium azide was prepared, and 350 μL of the inner bottom surface was placed in a substantially hemispherical container. Dispensed. 500 mM 2-amino-2-containing 0.3 mM fluorescein as a fluorescent substance, 2.0 mM tri-n-butylhexadecylphosphonium bromide as a cationic surfactant, and 0.1% sodium azide A methyl-1-propanol buffer solution (pH 10) was prepared, and 350 μL was dispensed into a housing portion having the other inner bottom surface in a substantially hemispherical shape. Thereafter, the two accommodating portions were sealed with an aluminum seal and stored at 4 ° C. or 20 ° C. for 7 days. During storage, the aluminum seal surface was left as it was as an upper surface.
7日間経過後アルミシールをシールブレークし、各溶液を25μLとり混合したのちに、バックグラウンド測定を行った。また、アルカリ性ホスファターゼ0.005μg/mL、0.1%ゼラチン加水分解物、1mM MgCl2、0.15M NaClおよび0.05%アジ化ナトリウムを含む50mM Tris−HCl緩衝溶液10μLと反応させ、その発光量を測定した。発光測定にはベルトールド社製ルミノメーターLB96V(検出器:シングルフォトンカウンター;測定波長領域:380〜630nm)を使用し、測光条件は上述のように化学発光用材料と酵素の溶液とを混合した5分後の1秒間の発光量(カウント数)を測定した。 After 7 days, the aluminum seal was broken, and 25 μL of each solution was taken and mixed, and then background measurement was performed. Further, it was reacted with 10 μL of 50 mM Tris-HCl buffer solution containing 0.005 μg / mL of alkaline phosphatase, 0.1% gelatin hydrolyzate, 1 mM MgCl 2 , 0.15 M NaCl and 0.05% sodium azide, and its luminescence The amount was measured. Luminometer LB96V (detector: single photon counter; measurement wavelength region: 380 to 630 nm) manufactured by Bertoled Co. was used for luminescence measurement, and the photometric conditions were a mixture of chemiluminescent material and enzyme solution as described above. The light emission amount (count number) for 1 second after a minute was measured.
(実施例2)
アルミシール面を下面としてアルミシール面に内容液が接触するように転倒させて保管した以外は、実施例1と同様の方法にて実施した。
(Example 2)
The same procedure as in Example 1 was performed, except that the aluminum seal surface was used as the lower surface and the contents were in contact with the aluminum seal surface so as to contact the aluminum seal surface.
(比較例1)
顔料を練りこんでいない半透明のポリプロピレン製容器を使用し、20℃に3日間保管した以外は、実施例1と同様の方法にて実施した。
(Comparative Example 1)
It was carried out in the same manner as in Example 1 except that a translucent polypropylene container into which no pigment was kneaded was used and stored at 20 ° C. for 3 days.
実施例1および実施例2の結果と合わせて表1に示す。 The results are shown in Table 1 together with the results of Example 1 and Example 2.
以上の結果から、光透過性の無い容器を使用することにより、保存安定性を有している化学発光用材料を提供することができる。 From the above results, a chemiluminescent material having storage stability can be provided by using a container that does not transmit light.
1:化学発光用材料の供給容器
2a,2b:供給容器開口部
3a:化学発光基質溶液
3b:発光増強試薬溶液
4:アルミシール
1: Chemiluminescent
Claims (2)
前記化学発光基質の発光増強試薬溶液を収容した収容部一つ以上と、
からなる化学発光用材料の供給容器であって、
収容部の内底面の形状がいずれも略半球状であり、光透過性のない前記容器。 One or more containing parts containing the chemiluminescent substrate solution;
One or more storage units containing the chemiluminescent substrate luminescence enhancing reagent solution; and
A chemiluminescent material supply container comprising:
The container in which the shape of the inner bottom surface of the housing part is substantially hemispherical and has no light transmittance.
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