JP2017114810A - Novel pyrrole derivative - Google Patents
Novel pyrrole derivative Download PDFInfo
- Publication number
- JP2017114810A JP2017114810A JP2015251735A JP2015251735A JP2017114810A JP 2017114810 A JP2017114810 A JP 2017114810A JP 2015251735 A JP2015251735 A JP 2015251735A JP 2015251735 A JP2015251735 A JP 2015251735A JP 2017114810 A JP2017114810 A JP 2017114810A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- pyrrole derivative
- salt
- production
- acid
- psbs
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- BQJCDNLMKFVIER-UHFFFAOYSA-O N=CCSCC(C(N(C1)C(CSCC=[NH2+])C(N=O)=O)=O)[n]2c1ccc2CO Chemical compound N=CCSCC(C(N(C1)C(CSCC=[NH2+])C(N=O)=O)=O)[n]2c1ccc2CO BQJCDNLMKFVIER-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
Landscapes
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
本発明は、新規ピロール誘導体及びその用途に関する。 The present invention relates to a novel pyrrole derivative and its use.
植物中には、ピロール環が４つ環状に結合したクロロフィルやピロール環が４つ鎖状に結合したフィコビリンなどが存在する（非特許文献１）。また、沖縄海綿からは、３種の新規ブロモピロールアルカロイドが単離され、いずれの化合物も抗菌活性があることが報告されている（非特許文献２、３）。 In plants, there are chlorophyll in which four pyrrole rings are bonded in a ring, phycobilin in which four pyrrole rings are bonded in a chain (Non-patent Document 1). In addition, three novel bromopyrrole alkaloids have been isolated from Okinawa sponge, and it has been reported that any compound has antibacterial activity (Non-patent Documents 2 and 3).
一方、ニンニクには特徴的な成分としてγ−グルタミル−Ｓ−アリルシステインが含まれる。該成分はニンニクを切ったり、つぶしたり、すりおろしたり、又は熟成することにより、ニンニク中に含まれるγ−グルタミルトランスペプチダーゼという酵素により、水溶性のＳ−アリルシステイン（以下、ＳＡＣと略す）に変換される。このような酵素反応により生成される水溶性化合物として、ＳＡＣの他にＳ−メチルシステイン、Ｓ−１−プロペニルシステインなどが存在する（非特許文献4）。しかしながら、ニンニクにはピロール誘導体の存在は報告されていない。 On the other hand, garlic contains γ-glutamyl-S-allylcysteine as a characteristic component. The component is made into water-soluble S-allylcysteine (hereinafter abbreviated as SAC) by cutting, crushing, grated, or aging garlic, and using an enzyme called γ-glutamyltranspeptidase contained in garlic. Converted. In addition to SAC, S-methylcysteine, S-1-propenylcysteine, and the like exist as water-soluble compounds produced by such an enzymatic reaction (Non-patent Document 4). However, the presence of pyrrole derivatives in garlic has not been reported.
イムノグロブリンＡ（ＩｇＡ）は、哺乳類において最も分泌量の多い抗体であり、腸管粘膜固有層においてＩｇＡ産生細胞より分泌される。ＩｇＡは、主として、食品に含まれる異物や侵入した病原菌からの体の保護及び腸内細菌叢のバランスの維持を通じて、身体の恒常性を維持するために機能している（非特許文献５〜７）。また、ＩｇＡ欠損症の患者では、アレルギー性の疾患や自己免疫疾患の発現進度が高いことが知られている（非特許文献８）。また、インターロイキン−６（ＩＬ−６）は、Ｔ細胞やマクロファージから産生されるサイトカインの一種で、造血や抗体産生細胞の分化を促進する役割を担う一方、過剰産生されることで、慢性炎症や自己免疫疾患の原因となる等、炎症反応を亢進する作用を併せ持っている（非特許文献９，１０）。 Immunoglobulin A (IgA) is the most secreted antibody in mammals and is secreted from IgA-producing cells in the lamina propria of the intestinal tract. IgA mainly functions to maintain body homeostasis through protecting the body from foreign substances contained in food and invading pathogens and maintaining the balance of intestinal flora (Non-Patent Documents 5 to 7). ). Moreover, it is known that patients with IgA deficiency have a high degree of expression of allergic diseases and autoimmune diseases (Non-patent Document 8). Interleukin-6 (IL-6) is a kind of cytokine produced from T cells and macrophages, and plays a role in promoting the differentiation of hematopoietic and antibody-producing cells. It also has the effect of enhancing the inflammatory reaction such as causing autoimmune diseases (Non-patent Documents 9 and 10).
したがって、ＩｇＡの産生を促進し、ＩＬ−６の過剰産生を抑制することによって免疫機能の調整を図ることは、身体の恒常性を維持し、アレルギー発症の予防や炎症反応の抑制に有用である。 Therefore, adjusting the immune function by promoting the production of IgA and suppressing the overproduction of IL-6 is useful for maintaining the homeostasis of the body, preventing the development of allergies, and suppressing the inflammatory reaction. .
また、転写因子Ｎｒｆ２は、生体内で親電子性物質、活性酸素、小胞体ストレスや血流によるずり応力によって活性化され、酸化ストレス適応反応を統一的に制御することが知られている。そのため、Ｎｒｆ２を活性化することで、酸化ストレスに起因するガンや糖尿病、高脂血症、肝機能低下などの生活習慣病を予防できると考えられる（非特許文献11）。 In addition, it is known that the transcription factor Nrf2 is activated in vivo by electrophilic substances, active oxygen, endoplasmic reticulum stress and shear stress due to blood flow, and controls the oxidative stress adaptation reaction in a unified manner. Therefore, it is considered that activating Nrf2 can prevent lifestyle-related diseases such as cancer, diabetes, hyperlipidemia, and liver function deterioration caused by oxidative stress (Non-patent Document 11).
本発明は、抗酸化作用や免疫調整作用を有する新規ピロール誘導体を提供することに関する。 The present invention relates to providing a novel pyrrole derivative having an antioxidant action and an immunomodulating action.
本発者らは、乾燥したニンニク又はその粉末、或いはニンニクエキスの乾燥物を加熱処理した場合に、抗酸化作用や免疫調整作用を有する新規なピロール誘導体が生成されること、また、当該ピロール誘導体は、S-アリルシステインと糖類とを加熱処理することにより、効率よく合成できることを見出し、本発明を完成するに至った。 The present inventors found that when a dried garlic or powder thereof, or a dried product of garlic extract was heat-treated, a novel pyrrole derivative having an antioxidant action or an immunomodulating action was produced, and the pyrrole derivative Has found that S-allylcysteine and saccharide can be efficiently synthesized by heat treatment, and the present invention has been completed.
すなわち、本発明は、以下の１）〜１０）に関するものである。
１）下記式（１）で示されるピロール誘導体又はその塩。
That is, the present invention relates to the following 1) to 10).
1) A pyrrole derivative represented by the following formula (1) or a salt thereof.
２）式（１）で示されるピロール誘導体が、下記式（１ａ）で示される（２Ｒ，４Ｒ）体又はこれを含む立体異性体混合物である上記１）に記載のピロール誘導体又はその塩。 2) The pyrrole derivative or the salt thereof according to 1) above, wherein the pyrrole derivative represented by the formula (1) is a (2R, 4R) isomer represented by the following formula (1a) or a stereoisomer mixture containing the isomer.
３）上記１）又は２）に記載のピロール誘導体又はその塩を有効成分とする抗酸化剤。
４）上記１）又は２）に記載のピロール誘導体又はその塩を有効成分とする免疫機能調整剤。
５）食品である、上記３）に記載の抗酸化剤。
６）食品である、上記４）に記載の免疫機能調整剤。
７）アリウム属植物エキスを濃縮及び乾燥させた後、８０〜１２０℃で３０分〜２４時間加熱処理することを特徴とする上記１）に記載のピロール誘導体又はその塩の製造法。
８）アリウム属植物の乾燥物又はその粉末を、２００〜３００℃で1〜５分加熱処理することを特徴とする上記１）に記載のピロール誘導体又はその塩の製造法。
９）糖類とS-アリルシステインを非晶質化した後、８０〜１２０℃で３０分〜２時間反応させることを特徴とする上記１）に記載のピロール誘導体又はその塩の製造法。
１０）糖類がフルクトース又はグルコースである上記９）に記載の製造法。
3) An antioxidant containing the pyrrole derivative or salt thereof according to 1) or 2) as an active ingredient.
4) The immune function regulator which uses the pyrrole derivative or its salt as described in said 1) or 2) as an active ingredient.
5) The antioxidant according to 3) above, which is a food.
6) The immune function regulator according to 4) above, which is a food.
7) The method for producing a pyrrole derivative or a salt thereof according to 1) above, wherein the allium plant extract is concentrated and dried and then heat-treated at 80 to 120 ° C. for 30 minutes to 24 hours.
8) The method for producing a pyrrole derivative or a salt thereof according to 1) above, wherein a dried product of an Allium genus plant or a powder thereof is heat-treated at 200 to 300 ° C. for 1 to 5 minutes.
9) The method for producing a pyrrole derivative or a salt thereof according to 1) above, wherein the saccharide and S-allylcysteine are amorphized and then reacted at 80 to 120 ° C. for 30 minutes to 2 hours.
10) The production method according to 9) above, wherein the saccharide is fructose or glucose.
本発明のピロール誘導体又はその塩によれば、ＩｇＡの産生促進及びＩＬ−６の産生抑制という免疫機能調整作用によって、外部異物の侵襲あるいは侵襲による障害を緩和し、生体の恒常性を維持することができる。また、炎症反応やアレルギー反応を抑えることができる。更に、転写因子Ｎｒｆ２を活性化することにより、酸化ストレス適応反応を統一的に制御することで、酸化ストレスに起因するガンや糖尿病、高脂血症、肝機能低下などの生活習慣病を予防することもできる。 According to the pyrrole derivative or a salt thereof of the present invention, it is possible to alleviate damage caused by invasion or invasion of an external foreign body and maintain the homeostasis of the living body by regulating the immune function of promoting production of IgA and suppressing production of IL-6. Can do. In addition, inflammatory reactions and allergic reactions can be suppressed. Furthermore, by activating the transcription factor Nrf2, the adaptive response to oxidative stress is controlled in a unified manner to prevent lifestyle-related diseases such as cancer, diabetes, hyperlipidemia, and decreased liver function caused by oxidative stress. You can also.
本発明のピロール誘導体は、下記式（１）で示される。 The pyrrole derivative of the present invention is represented by the following formula (1).
該化合物（１）は、分子中に２個の不斉炭素を有するため、（２Ｒ，４Ｒ）体＜(2R)-3-(allylthio)-2-((4R)-4-((allylthio)methyl)-6-formyl-3-oxo-3,4-dihydropyrrolo[1,2-a]pyrazin-2(1H)-yl)propanoic acid （以下、ＰＳＢＳ−Ａと略す）＞と、（２Ｒ，４Ｓ）体＜(2R)-3-(allylthio)-2-((4S)-4-((allylthio)methyl)-6-formyl-3-oxo-3,4-dihydropyrrolo[1,2-a]pyrazin-2(1H)-yl)propanoic acid（以下、ＰＳＢＳ−Ｂと略す）＞、（２Ｓ，４Ｒ）体＜(2S)-3-(allylthio)-2-((4R)-4-((allylthio)methyl)-6-formyl-3-oxo-3,4-dihydropyrrolo[1,2-a]pyrazin-2(1H)-yl)propanoic acid＞、及び（２Ｓ，４Ｓ）体＜(2S)-3-(allylthio)-2-((4S)-4-((allylthio)methyl)-6-formyl-3-oxo-3,4-dihydropyrrolo[1,2-a]pyrazin-2(1H)-yl)propanoic acid＞の４個の立体異性体が存在する。本発明においては、薬理活性の点から下記式（１ａ）で示される（２Ｒ，４Ｒ）体（ＰＳＢＳ−Ａ）若しくはこれを含む立体異性体混合物であるのが好ましい。 Since the compound (1) has two asymmetric carbon atoms in the molecule, the (2R, 4R) isomer <(2R) -3- (allylthio) -2-((4R) -4-((allylthio)) methyl) -6-formyl-3-oxo-3,4-dihydropyrrolo [1,2-a] pyrazin-2 (1H) -yl) propanoic acid (hereinafter abbreviated as PSBS-A)>, and (2R, 4S ) << 2R) -3- (allylthio) -2-((4S) -4-((allylthio) methyl) -6-formyl-3-oxo-3,4-dihydropyrrolo [1,2-a] pyrazin -2 (1H) -yl) propanoic acid (hereinafter abbreviated as PSBS-B)>, (2S, 4R) isomer <(2S) -3- (allylthio) -2-((4R) -4-((allylthio ) methyl) -6-formyl-3-oxo-3,4-dihydropyrrolo [1,2-a] pyrazin-2 (1H) -yl) propanoic acid>, and (2S, 4S) body <(2S) -3 -(allylthio) -2-((4S) -4-((allylthio) methyl) -6-formyl-3-oxo-3,4-dihydropyrrolo [1,2-a] pyrazin-2 (1H) -yl) There are four stereoisomers of propanoic acid>. In the present invention, from the viewpoint of pharmacological activity, a (2R, 4R) form (PSBS-A) represented by the following formula (1a) or a stereoisomer mixture containing the same is preferable.
上記式（１）で示されるピロール誘導体には塩が存在するが、酸付加塩又は塩基付加塩の何れでもよい。酸付加塩としては、たとえば、（イ）塩酸、硫酸、硝酸、リン酸などの鉱酸との塩、（ロ）ギ酸、酢酸、クエン酸、フマル酸、グルコン酸、リンゴ酸、コハク酸、酒石酸、トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸などの有機カルボン酸との塩、（ハ）メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メシチレンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸などのスルホン酸類との塩を、また、塩基付加塩としては、たとえば、（イ）ナトリウム、カリウム、カルシクム、マグネシウムなどのアルカリ金属との塩、（ロ）カルシウム、マグネシウムなどのアルカリ土類金属との塩、（ハ）アンモニウム塩、（ニ）トリメチルアミン、トリエチルアミン、トリブチルアミン、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−メチルモルホリン、ジエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ−ベンジル−β−フェネチルアミン、１−エフェナミン、Ｎ，Ｎ′−ジベンジルエチレンジアミンなどの含窒素有機塩基との塩を挙げることができる。 Although a salt exists in the pyrrole derivative represented by the above formula (1), either an acid addition salt or a base addition salt may be used. Examples of acid addition salts include (i) salts with mineral acids such as hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid, (b) formic acid, acetic acid, citric acid, fumaric acid, gluconic acid, malic acid, succinic acid, tartaric acid. , Salts with organic carboxylic acids such as trichloroacetic acid and trifluoroacetic acid, (c) salts with sulfonic acids such as methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, mesitylenesulfonic acid and naphthalenesulfonic acid, Examples of base addition salts include (a) salts with alkali metals such as sodium, potassium, calcium, and magnesium, (b) salts with alkaline earth metals such as calcium and magnesium, (c) ammonium salts, ( D) Trimethylamine, triethylamine, tributylamine, pyridine, N, N-dimethylaniline, N-methylpiperidine, - it includes methyl morpholine, diethylamine, dicyclohexylamine, procaine, dibenzylamine, N- benzyl -β- phenethylamine, 1-Efenamin, N, salts with nitrogen-containing organic bases such as N'- dibenzylethylenediamine.
更に、式（１）で示されるピロール誘導体又はその塩は、未溶媒和型のみならず、水和物や溶媒和物としても存在することができ、斯かる水和物又は溶媒和物は製造条件により任意の結晶形として存在することができる。従って、本発明におけるピロール誘導体又はその塩は、全ての立体異性体、水和物、溶媒和物、及び全ての多形結晶形態もしくは非晶形を包含するものである。 Furthermore, the pyrrole derivative represented by the formula (1) or a salt thereof can exist not only as an unsolvated form but also as a hydrate or a solvate, and such a hydrate or solvate is produced. It can exist as an arbitrary crystal form depending on conditions. Therefore, the pyrrole derivative or a salt thereof in the present invention includes all stereoisomers, hydrates, solvates, and all polymorphic crystalline or amorphous forms.
本発明のピロール誘導体は、S-アリルシステインと糖類を非晶質化した後、８０〜１２０℃で３０分〜２時間反応させることにより製造することができる。
ここで用いられる糖類としては、フルクトース又はグルコースが挙げられ、S-アリルシステインとしては、S-アリル-Ｌ-システインが挙げられる。
糖類とS-アリルシステインとの混合比は、モル比で１０：１〜１：１であるが、好ましくは５：１〜１：１である。更にフルクトースを使用する場合は４：１であるの好ましく、グルコースを使用する場合は、２：１であるのが好ましい。
加熱反応は、糖類とS-アリルシステインの混合物を非晶質化した後に行うことが反応効率の点から好ましい。非晶質化は、糖類とS-アリルシステインの混合物を、例えばｐＨ４．０〜６．０のリン酸バッファー等に溶解し、凍結乾燥等により乾燥させることにより行うことができる
加熱反応は、８０〜１２０℃で３０分〜２時間行うことが好ましく、９０〜１１０℃で１時間行うのがより好ましい。
反応終了後、酢酸エチル、ジエチルエーテル等の疎水性溶媒にて反応生成物を抽出し、液体クロマトグラフィーや高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて分離・精製することにより、式（１）で示されるピロール誘導体を取得することができる。
The pyrrole derivative of the present invention can be produced by making S-allylcysteine and a saccharide amorphous, and then reacting at 80 to 120 ° C. for 30 minutes to 2 hours.
Examples of the saccharide used herein include fructose or glucose, and examples of S-allylcysteine include S-allyl-L-cysteine.
The mixing ratio of the saccharide and S-allyl cysteine is 10: 1 to 1: 1 by mole ratio, but preferably 5: 1 to 1: 1. Furthermore, when fructose is used, the ratio is preferably 4: 1, and when glucose is used, the ratio is preferably 2: 1.
The heating reaction is preferably performed after making the mixture of saccharide and S-allylcysteine amorphous, from the viewpoint of reaction efficiency. Amorphization can be performed by dissolving a mixture of saccharides and S-allylcysteine in, for example, a phosphate buffer having a pH of 4.0 to 6.0 and drying by freeze drying, etc. It is preferable to carry out at -120 degreeC for 30 minutes-2 hours, and it is more preferable to carry out at 90-110 degreeC for 1 hour.
After completion of the reaction, the reaction product is extracted with a hydrophobic solvent such as ethyl acetate or diethyl ether, separated and purified using liquid chromatography or high performance liquid chromatography (HPLC), and expressed by formula (1). Pyrrole derivatives can be obtained.
式（１）で示されるピロール誘導体は、常法に従い酸付加塩又は塩基付加塩とすることができる。本反応は、メタノ−ル、エタノ−ル等のようなアルコ−ル類或いは水等の極性溶媒中、式（１）で示されるピロール誘導体を、塩酸、硫酸等の鉱酸、ギ酸、酢酸、クエン酸等の有機カルボン酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メシチレンスルホン酸等のスルホン酸、或いは、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム等の塩基性化合物、アンモニア、トリメチルアミン、トリエチルアミン等の含窒素有機塩基の存在下、室温又は適宜加熱することにより行われる。 The pyrrole derivative represented by the formula (1) can be converted into an acid addition salt or a base addition salt according to a conventional method. In this reaction, an alcohol such as methanol, ethanol or the like, or a pyrrole derivative represented by the formula (1) in a polar solvent such as water, a mineral acid such as hydrochloric acid or sulfuric acid, formic acid, acetic acid, Organic carboxylic acids such as citric acid, sulfonic acids such as methanesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid and mesitylenesulfonic acid, or basic compounds such as sodium hydroxide, potassium hydroxide, calcium hydroxide and magnesium hydroxide, ammonia In the presence of a nitrogen-containing organic base such as trimethylamine or triethylamine, the reaction is performed at room temperature or by heating appropriately.
また、本発明のピロール誘導体又はその塩は、アリウム属植物又はアリウム属植物エキスを所定の条件で加熱処理し、当該処理物から分離精製することにより得ることもできる。
加熱処理は、原料を乾燥させた状態で行うことが必要であり、アリウム属植物を用いる場合、当該植物の乾燥物又はその粉末を、２００〜３００℃で１〜５分加熱することが好ましく、２３０〜２７０℃で２〜４分加熱することがより好ましく、２４０〜２６０℃で２〜４分加熱することが更に好ましい。アリウム属植物エキスを用いる場合は、当該エキスを濃縮及び乾燥した後、８０〜１２０℃で３０分〜２４時間加熱処理することが好ましく、９０〜１１０℃で３〜６時間加熱処理することがより好ましい。
In addition, the pyrrole derivative or a salt thereof of the present invention can also be obtained by heat-treating an Allium plant or Allium plant extract under predetermined conditions and separating and purifying it from the treated product.
The heat treatment needs to be performed in a state where the raw material is dried, and when using an Allium genus plant, it is preferable to heat the dried product of the plant or its powder at 200 to 300 ° C. for 1 to 5 minutes, Heating at 230 to 270 ° C. for 2 to 4 minutes is more preferable, and heating at 240 to 260 ° C. for 2 to 4 minutes is even more preferable. When using an Allium genus extract, after concentrating and drying the extract, it is preferably heat-treated at 80 to 120 ° C. for 30 minutes to 24 hours, more preferably 90 to 110 ° C. for 3 to 6 hours. preferable.
ここで、アリウム属植物エキスは、アリウム属植物を直接圧搾する、アリウム植物を粉砕又はすりおろした後の搾汁を得る、又はアリウム属植物を含水エタノールで抽出することにより調製することができる。
アリウム属植物を含水エタノールで抽出する場合、アリウム属植物を１０〜５０％のエタノール水溶液で、１ヶ月以上抽出に付すが、好ましく２０〜４０％のエタノール水溶液で１〜２０ヶ月抽出に付すことができる。また、抽出は、室温や常温で抽出することができるが、抽出温度を高めれば、抽出期間を短縮できることは言うまでも無い。
ここで、アリウム属植物としては、ニンニク（Allium sativum L.）、タマネギ（Allium cepa L.）、エレファントガーリック（Allium ampeloprazum L.）、ニラ（Allium tuberosum Rottl. ex Sprengel）及びネギ（Allium fistulosum L.）等が挙げられる。これらの植物は、単独あるいは組み合わせて用いてもよいが、望ましくはニンニクである。また、上記アリウム属植物は生のものをそのまま、あるいは必要に応じて外皮を取り除き、切断又は細断したものを使用することもできる。更に、凍結乾燥や熱風乾燥などにより乾燥したもの、あるいはこれらを粉末化したものを用いることもできる。
Here, the Allium genus plant extract can be prepared by directly squeezing the Allium genus plant, obtaining a squeezed juice after pulverizing or grated the Allium plant, or extracting the Allium genus plant with hydrous ethanol.
When extracting an Allium genus plant with water-containing ethanol, the Allium genus plant is subjected to extraction for 10 months or more with an aqueous solution of 10 to 50% ethanol, but preferably to an extraction for 1 to 20 months with an aqueous solution of 20 to 40% ethanol. it can. Moreover, although extraction can be performed at room temperature or normal temperature, it cannot be overemphasized that extraction period can be shortened if extraction temperature is raised.
Here, allium plants include garlic (Allium sativum L.), onion (Allium cepa L.), elephant garlic (Allium ampeloprazum L.), leek (Allium tuberosum Rottl. Ex Sprengel) and leek (Allium fistulosum L.). ) And the like. These plants may be used alone or in combination, but are preferably garlic. In addition, the Allium plant can be a raw plant, or a plant that has been cut or chopped by removing the outer skin as necessary. Furthermore, what dried by freeze-drying, hot air drying, etc., or those which powdered these can also be used.
斯くして得られた本発明のピロール誘導体は、後記実施例に示すように、Ｓ−アリルシステインに比べて優れたＩｇＡ産生作用を有し、またＬＰＳ刺激下においてＩＬ−６の産生抑制作用を有する。また、本発明のピロール誘導体は、転写因子Ｎｒｆ２のターゲット遺伝子であるヘムオキシゲナーゼ１（ＨＯ−１：heme oxygenase １）遺伝子及びグルタミン酸システインリガーゼ（ＧＣＬＭ：glutamate-cysteine ligase, modifier subunit）遺伝子の発現を促進する。
したがって、本発明のピロール誘導体又はその塩は、ＩｇＡ産生促進作用及び／又はＩＬ−６産生抑制作用に基づく免疫機能調整剤となり得、また、ヘムオキシゲナーゼ１産生促進、グルタチオン産生促進、或いはＮｒｆ２活性化作用に基づく抗酸化剤となり得る。
The pyrrole derivative of the present invention thus obtained has an IgA production action superior to that of S-allyl cysteine as shown in the examples below, and also has an IL-6 production inhibitory action under LPS stimulation. Have. In addition, the pyrrole derivative of the present invention promotes the expression of heme oxygenase 1 (HO-1) gene and glutamate-cysteine ligase (modifier subunit) gene which are target genes of transcription factor Nrf2. To do.
Therefore, the pyrrole derivative of the present invention or a salt thereof can be an immune function regulator based on an IgA production promoting action and / or an IL-6 production inhibiting action, and also promotes heme oxygenase 1 production, glutathione production, or Nrf2 activation. It can be an antioxidant based on action.
ＩｇＡは、病原性微生物やアレルゲンの侵入を防ぎ、生体の恒常性維持するために機能し、アレルギー発症の予防にも寄与している。また、ＩＬ−６は、Ｂ細胞からの抗体産生誘導、Ｔリンパ球の活性化等の正常な免疫応答や生体防御において中心的な役割を果たす一方で、その過剰発現は、慢性関節リウマチ、変形性関節炎等の慢性炎症、免疫異常症等の病態形成及び悪化と関連することが報告されている（前記非特許文献１〜６）。よって、ＩｇＡの産生を促進し、ＩＬ−６の過剰産生を抑制することによって免疫機能の調整を図ることは、身体の恒常性を維持し、アレルギー発症の予防や炎症反応の抑制に有用である。 IgA functions to prevent the invasion of pathogenic microorganisms and allergens and to maintain the homeostasis of the living body, and also contributes to the prevention of the onset of allergies. In addition, IL-6 plays a central role in normal immune responses such as induction of antibody production from B cells and activation of T lymphocytes and biological defense, while its overexpression is caused by rheumatoid arthritis, deformation It has been reported to be associated with chronic inflammation such as osteoarthritis, and pathological formation and deterioration such as immune disorders (Non-Patent Documents 1 to 6). Therefore, adjusting the immune function by promoting the production of IgA and suppressing the overproduction of IL-6 is useful for maintaining the homeostasis of the body, preventing the development of allergies, and suppressing the inflammatory reaction. .
本発明において、「免疫機能調整」とは、主としてＩｇＡ産生促進作用及び／又はＩＬ−６産生抑制作用に基づく免疫機能の調整を意味し、これにより身体の恒常性維持、アレルギー発症の予防、炎症反応の抑制等の効果が発揮される。ここで、ＩｇＡ産生促進には、ＩｇＡ産生細胞を増加すること及び／又は当該細胞からＩｇＡの分泌量を増加することが含まれる。 In the present invention, “modulation of immune function” means adjustment of immune function mainly based on an IgA production promoting action and / or an IL-6 production suppressing action, thereby maintaining body homeostasis, preventing allergic onset, inflammation Effects such as suppression of reaction are exhibited. Here, promotion of IgA production includes increasing IgA-producing cells and / or increasing the secretion amount of IgA from the cells.
ＨＯ−１及びＧＣＬＭは、Ｎｒｆ２によって発現制御される抗酸化に係る第二相酵素であることから、本発明のピロール誘導体によるＨＯ−１遺伝子及びＧＣＬＭ遺伝子の発現増加は、Ｎｒｆ２の活性化に起因することが示唆される。したがって、本発明のピロール誘導体又はその塩は、Ｎｒｆ２の活性化、ヘムオキシゲナーゼ１産生促進及び／又はグルタチオン産生促進により、酸化ストレスから細胞を保護する作用を有すると考えられる。
本発明において、「抗酸化」とは、生体内のフリーラジカルや活性酸素（ＲＯＳ）といった酸化ストレス因子から細胞を保護することを意味する。抗酸化によれば、酸化ストレスに起因するガンや糖尿病、高脂血症、肝機能低下などの生活習慣病を予防が可能となる。
Since HO-1 and GCLM are anti-oxidative second phase enzymes whose expression is controlled by Nrf2, the increased expression of the HO-1 gene and the GCLM gene by the pyrrole derivative of the present invention is due to the activation of Nrf2. It is suggested to do. Therefore, it is considered that the pyrrole derivative of the present invention or a salt thereof has an action of protecting cells from oxidative stress by activating Nrf2, promoting heme oxygenase 1 production and / or promoting glutathione production.
In the present invention, “antioxidation” means protecting cells from oxidative stress factors such as free radicals and active oxygen (ROS) in vivo. Antioxidation makes it possible to prevent lifestyle-related diseases such as cancer, diabetes, hyperlipidemia, and decreased liver function caused by oxidative stress.
本発明の免疫機能調整剤及び抗酸化剤は、それ自体、ヒトに摂取（投与を含む）した場合にＩｇＡ産生促進作用、ＩＬ−６産生抑制作用のような免疫機能調整効果、ヘムオキシゲナーゼ１産生促進作用、グルタチオン産生促進作用或いはＮｒｆ２活性化作用のような抗酸化効果を発揮する医薬又は食品であってもよく、或いはこれらに配合して使用される素材又は製剤であってもよい。 The immune function regulator and antioxidant of the present invention itself have an immune function regulating effect such as an IgA production promoting action, an IL-6 production inhibiting action, and heme oxygenase 1 production when ingested (including administration) to humans. It may be a pharmaceutical or food that exhibits an antioxidative effect such as a promoting action, a glutathione production promoting action, or an Nrf2 activating action, or may be a material or a preparation used in combination with these.
また、当該食品には、ＩｇＡ産生促進作用、ＩＬ−６産生抑制作用、免疫機能調整作用、ヘムオキシゲナーゼ１産生促進作用、グルタチオン産生促進作用、Ｎｒｆ２活性化作用、或いは抗酸化作用をコンセプトとし、必要に応じてその旨を表示した食品、機能性表示食品、病者用食品、特定保健用食品が包含される。 In addition, the food is based on the concept of IgA production promoting action, IL-6 production inhibiting action, immune function regulating action, heme oxygenase 1 production promoting action, glutathione production promoting action, Nrf2 activation action, or antioxidant action. Foods, functional foods, foods for the sick, and foods for specified health use are included.
上記医薬又は食品は、粉末や顆粒などの固形物、ペーストやオイル状の半固形物あるいは液状であってもよい。また、必用に応じて保存剤や添加剤を加えることもできる。更に、免疫機能調整効果や抗酸化効果のある他の物質、例えば、糖類、糖アルコール類及び多糖体、レクチンなどの糖タンパク、リポポリサッカライドなどの糖脂質、乳酸菌、ビフィズス菌、酵母あるいは麹菌などの有用細菌類などを含んでいてもよい。 The medicine or food may be a solid such as a powder or a granule, a paste, an oily semi-solid, or a liquid. Moreover, a preservative and an additive can also be added as needed. Furthermore, other substances having an immune function regulating effect and an antioxidant effect, such as sugars, sugar alcohols and polysaccharides, glycoproteins such as lectins, glycolipids such as lipopolysaccharide, lactic acid bacteria, bifidobacteria, yeasts or gonorrhea Or useful bacteria.
本発明のピロール誘導体又はその塩を含有する医薬の投与形態は、特に限定されるものではなく、種々の形態をとることができるが、経口に適した形態であることが好ましい。経口投与製剤の具体的な形態として、例えば、固形剤としては錠剤、カプセル剤、細粒剤、丸剤、顆粒剤、液剤としては乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤等の形態が挙げられる。斯かる医薬製剤は、本発明のピロール誘導体又はその塩に、必要に応じて賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色料、矯味矯臭剤、ｐＨ調整剤等を適宜配合し、常法に従って調製することができる。 The administration form of the pharmaceutical containing the pyrrole derivative or salt thereof of the present invention is not particularly limited and can take various forms, but is preferably a form suitable for oral administration. Specific forms of orally administered preparations include, for example, tablets, capsules, fine granules, pills, granules, solid forms as emulsions, emulsions, solutions, suspensions, syrups, etc. Is mentioned. Such a pharmaceutical preparation is appropriately blended with the pyrrole derivative of the present invention or a salt thereof, as necessary, with an excipient, a binder, a disintegrant, a lubricant, a colorant, a flavoring agent, a pH adjuster, and the like. It can be prepared according to a conventional method.
本発明のピロール誘導体又はその塩を含有する食品の形態は、特に限定されるものではなく、例えば、固形食品、半流動食品、ゲル状食品、錠剤、キャプレット、カプセル剤等、種々の形態をとることができ、更に具体的には、菓子、飲料、調味料、水産加工食品、食肉加工食品、パン、健康食品等の種々の食品の形態であり得る。
斯かる食品は、これらの食品を通常製造する場合に用いられる食品素材と、本発明のピロール誘導体又はその塩を適宜配合し、常法により製造することができる。
The form of the food containing the pyrrole derivative of the present invention or a salt thereof is not particularly limited, and various forms such as a solid food, a semi-fluid food, a gel food, a tablet, a caplet, and a capsule are available. More specifically, it may be in the form of various foods such as confectionery, beverages, seasonings, processed fishery products, processed meat products, bread, and health foods.
Such a food can be produced by a conventional method by appropriately blending the food material used in the normal production of these foods with the pyrrole derivative of the present invention or a salt thereof.
上記医薬又は食品の、一日当たりの好ましい摂取量は、摂取する対象、摂取の形態、同時に摂取する素材や添加剤等の種類、摂取の間隔等の要因に依存して変動するものであるが、通常本発明のピロール誘導体又はその塩類として、一日当たり０．１〜２．７ｍｇ／ｋｇ摂取することが好ましく、０．３〜０．９ｍｇ／ｋｇ摂取することがより好ましい。また、所望により、この一日量を２〜４回に分割して摂取することもできる。 The preferred daily intake of the above-mentioned medicine or food varies depending on factors such as the subject to be ingested, the form of ingestion, the type of ingredients and additives to be ingested at the same time, the interval of ingestion, etc. Usually, the pyrrole derivative of the present invention or a salt thereof is preferably ingested in an amount of 0.1 to 2.7 mg / kg, more preferably in an amount of 0.3 to 0.9 mg / kg per day. If desired, this daily dose can be taken in 2 to 4 divided doses.
製造例１ ニンニク乾燥粉末におけるピロール誘導体の製造
（１）一般的に流通しているニンニク乾燥粉末１８ｇをフライパンで約３分間加熱した（約２５０℃）。その後、適量の４０％アセトニトリルを加えて分散機にて粉砕抽出し、更に４０％アセトニトリルを用いて１００ｍＬにメスアップした。比較対象物として、等量の生ニンニクをスライスしたもの、スライスした生ニンニクを同様に加熱したものを同様の抽出操作に供した。得られた処理物を超高速液体クロマトグラフィー接続の質量分析計（ＬＣ／ＭＳ）にて分析した。実験に使用した機器及び分析条件は以下の通りである。
Production Example 1 Production of pyrrole derivative in garlic dry powder (1) 18 g of circulated dry garlic powder in general circulation was heated in a frying pan for about 3 minutes (about 250 ° C.). Thereafter, an appropriate amount of 40% acetonitrile was added, and the mixture was pulverized and extracted with a disperser, and further made up to 100 mL with 40% acetonitrile. As comparison objects, a slice of raw garlic in an equal amount and a slice of raw garlic heated in the same manner were subjected to the same extraction operation. The obtained processed product was analyzed with a mass spectrometer (LC / MS) connected to ultra high performance liquid chromatography. The equipment and analysis conditions used in the experiment are as follows.
分析条件と設備
分析機器：超高速液体クロマトグラフィー Acquity UPLC i-class core system (Waters)
質量分析器 Xevo T-QS (Waters)
カラム：BEH phenyl (2.0mm × 150 mm, 1.7 μm, Waters)
移動相A：水 (0.1% 蟻酸)
移動相B：99.9% アセトニトリル(0.1% 蟻酸)
移動相のグラジエント条件;
30% B → 60% B → 99% B → 99% B → 30% B → 30% B
0分 4分 4.2分 4.8分 4.9分 5.0分
移動相流速：0.4 mL/min
MS/MS 条件：m/z 395.2 → 99.1
対象の保持時間：PSBS-A 3.79 分、PSBS-B 3.91 分
Analysis conditions and equipment <br/> Analytical instrument: Ultra-high performance liquid chromatography Acquity UPLC i-class core system (Waters)
Mass spectrometer Xevo T-QS (Waters)
Column: BEH phenyl (2.0 mm × 150 mm, 1.7 μm, Waters)
Mobile phase A: water (0.1% formic acid)
Mobile phase B: 99.9% acetonitrile (0.1% formic acid)
Mobile phase gradient conditions;
30% B → 60% B → 99% B → 99% B → 30% B → 30% B
0 min 4 min 4.2 min 4.8 min 4.9 min 5.0 min Mobile phase flow rate: 0.4 mL / min
MS / MS condition: m / z 395.2 → 99.1
Target retention time: PSBS-A 3.79 minutes, PSBS-B 3.91 minutes
その結果、ニンニク乾燥粉末を加熱したもののみにおいて、以下に示すＰＳＢＳ−ＡとＰＳＢＳ−Ｂの２化合物の生成が確認された。ＬＣ／ＭＳの結果より算出したＰＳＢＳ−Ａ及びＰＳＢＳ−Ｂの生成量を図１に示す。
ニンニク乾燥粉末を加熱したものでは、ＰＳＢＳ−Ａ ５．９ｎｍｏｌ／ｇとＰＳＢＳ−Ｂ ２．８ｎｍｍｏｌ／ｇの生成が確認された。
As a result, it was confirmed that only the heated garlic powder produced the following two compounds, PSBS-A and PSBS-B. The production amounts of PSBS-A and PSBS-B calculated from the LC / MS results are shown in FIG.
Production of PSBS-A 5.9 nmol / g and PSBS-B 2.8 nmol / g was confirmed for the heated garlic powder.
（２）ＰＡＢＳ-Ａ及びＰＡＢＳ-Ｂの構造決定
ＰＡＢＳ-Ａ及びＰＡＢＳ-Ｂの相対構造はＮＭＲ（1H、13C、1H-1H COSY、1H-13C HSQC、1H-13C HMBC）とＬＣＭＳの測定により決定した。それぞれの絶対配置はＣＤスペクトル（円偏光２色性スペクトル）の測定とモデル反応の論理的考察により決定した。以下にそれらのデータを記載する。
(2) Structure determination of PABS-A and PABS-B The relative structures of PABS-A and PABS-B are NMR ( 1 H, 13 C, 1 H- 1 H COZY, 1 H- 13 C HSQC, 1 H- 13 C HMBC) and LCMS measurements. The absolute configuration of each was determined by measuring the CD spectrum (circular dichroism spectrum) and the logical consideration of the model reaction. These data are described below.
（ＰＳＢＳ−ＡのＮＭＲ及びＬＣＭＳデータ）
PSBS-A; 1H NMR: 500 MHz, 13C NMR:125MHz (測定溶媒DMSO-d6)
1H NMR: δ(ppm) 2.59 [dd, 1H, J = 13.6, 7.6 Hz], 2.88 [dd, 1H, J = 13.6, 6.8 Hz], 2.96 [dd, 1H, J = 14.2, 10.5 Hz], 3.07 [m, 1H], 3.08 [m, 2H], 3.12 [m, 2H], 4.69 [d, 1H, J = 16.9 Hz], 4.93 [d, 1H, J = 16.9 Hz], 4.93 [m, 1H, 4.90 - 4.95], 4.93 [m, 1H, 4.90 - 4.95], 5.01 [m, 1H, 4.99- 5.04], 5.10 [m, 2H, 5.06- 5.14], 5.54 [m, 1H], 5.55 [m, 1H], 5.71 [ddt, 1H, J = 17.1, 10.0, 7.2, 7.2 Hz], 6.29 [d, 1H, J = 4.0 Hz], 7.20 [d, 1H, J = 4.0 Hz], 9.47 [s, 1H] ;
13C NMR: δ(ppm) 28.38 [CH2], 33.50 [CH2], 34.08 [CH2], 34.23 [CH2], 41.76 [CH2], 56.57 [CH], 58.26 [CH], 106.47 [CH], 117.41 [CH2], 117.78 [CH2], 125.42 [CH], 129.87 [C], 133.89 [CH], 134.25 [CH], 134.69 [C], 165.95 [C], 170.08 [C], 178.95 [CH].
UPLC-TOF-ESI- : m/z =393.0949 ([M-H]-)
(NMR and LCMS data of PSBS-A)
PSBS-A; 1 H NMR: 500 MHz, 13 C NMR: 125 MHz (Measuring solvent DMSO-d 6 )
1 H NMR: δ (ppm) 2.59 [dd, 1H, J = 13.6, 7.6 Hz], 2.88 [dd, 1H, J = 13.6, 6.8 Hz], 2.96 [dd, 1H, J = 14.2, 10.5 Hz], 3.07 [m, 1H], 3.08 [m, 2H], 3.12 [m, 2H], 4.69 [d, 1H, J = 16.9 Hz], 4.93 [d, 1H, J = 16.9 Hz], 4.93 [m, 1H , 4.90-4.95], 4.93 [m, 1H, 4.90-4.95], 5.01 [m, 1H, 4.99- 5.04], 5.10 [m, 2H, 5.06- 5.14], 5.54 [m, 1H], 5.55 [m, 1H], 5.71 [ddt, 1H, J = 17.1, 10.0, 7.2, 7.2 Hz], 6.29 [d, 1H, J = 4.0 Hz], 7.20 [d, 1H, J = 4.0 Hz], 9.47 [s, 1H ];
13 C NMR: δ (ppm) 28.38 [CH 2 ], 33.50 [CH 2 ], 34.08 [CH 2 ], 34.23 [CH 2 ], 41.76 [CH 2 ], 56.57 [CH], 58.26 [CH], 106.47 [ CH], 117.41 [CH 2 ], 117.78 [CH 2 ], 125.42 [CH], 129.87 [C], 133.89 [CH], 134.25 [CH], 134.69 [C], 165.95 [C], 170.08 [C], 178.95 [CH].
UPLC-TOF-ESI -: m / z = 393.0949 ([MH] -)
（ＰＳＢＳ−ＢのＮＭＲ及びＬＣＭデータ）
PSBS-B; 1H NMR: 500 MHz, 13C NMR:125 MHz (測定溶媒DMSO-d6)
1H NMR: δ(ppm) 2.52 [m, 1H], 2.83 [dd, 1H, J = 13.6, 6.6 Hz], 2.92 [dd, 1H, J = 14.2, 10.7 Hz], 3.09 [m, 2H], 3.11 [m, 1H], 3.17 [m, 2H], 4.55 [d, 1H, J = 16.4 Hz], 4.81 [d, 1H, J = 16.4 Hz], 4.90 [m, 1H, 4.87 - 4.92], 4.98 [m, 1H, 4.96 - 5.00], 5.01 [m, 1H], 5.11 [m, 2H, 5.07- 5.17], 5.54 [m, 1H], 5.58[m, 1H], 5.74 [ddt, 1H, J = 17.0, 10.0, 7.2, 7.2 Hz], 6.31 [d, 1H, J = 4.0 Hz], 7.21 [d, 1H, J = 4.0 Hz], 9.48 [s, 1H]
13C NMR: δ(ppm) 28.67 [CH2], 33.53 [CH2], 34.15 [CH2], 34.19 [CH2], 42.35 [CH2], 56.06 [CH], 58.32 [CH], 106.58 [CH], 117.56 [CH2], 117.73 [CH2], 125.19 [CH], 130.04 [C], 133.93 [CH], 134.14 [CH], 134.26 [C], 165.84 [C], 170.43 [C], 179.05 [CH].
UPLC-TOF-ESI- : m/z =393.0948 ([M-H]-)
(NMR and LCM data of PSBS-B)
PSBS-B; 1 H NMR: 500 MHz, 13 C NMR: 125 MHz (Measuring solvent DMSO-d 6 )
1 H NMR: δ (ppm) 2.52 [m, 1H], 2.83 [dd, 1H, J = 13.6, 6.6 Hz], 2.92 [dd, 1H, J = 14.2, 10.7 Hz], 3.09 [m, 2H], 3.11 [m, 1H], 3.17 [m, 2H], 4.55 [d, 1H, J = 16.4 Hz], 4.81 [d, 1H, J = 16.4 Hz], 4.90 [m, 1H, 4.87-4.92], 4.98 [m, 1H, 4.96-5.00], 5.01 [m, 1H], 5.11 [m, 2H, 5.07- 5.17], 5.54 [m, 1H], 5.58 [m, 1H], 5.74 [ddt, 1H, J = 17.0, 10.0, 7.2, 7.2 Hz], 6.31 [d, 1H, J = 4.0 Hz], 7.21 [d, 1H, J = 4.0 Hz], 9.48 [s, 1H]
13 C NMR: δ (ppm) 28.67 [CH 2 ], 33.53 [CH 2 ], 34.15 [CH 2 ], 34.19 [CH 2 ], 42.35 [CH 2 ], 56.06 [CH], 58.32 [CH], 106.58 [ CH], 117.56 [CH 2 ], 117.73 [CH 2 ], 125.19 [CH], 130.04 [C], 133.93 [CH], 134.14 [CH], 134.26 [C], 165.84 [C], 170.43 [C], 179.05 [CH].
UPLC-TOF-ESI -: m / z = 393.0948 ([MH] -)
以上のデータにより、ＰＡＢＳ-Ａ及びＰＡＢＳ-Ｂは、以下の構造を有するピロール誘導体であると特定した。 Based on the above data, PABS-A and PABS-B were identified as pyrrole derivatives having the following structures.
製造例２ ピロール誘導体（ＰＡＢＳ-Ａ及びＰＡＢＳ-Ｂ）の製造
Ｄ−（＋）−グルコース ２．０６４ｇとＳ−アリル−Ｌ−システイン ７８０ｍｇを秤量し、リン酸バッファー（１００ｍＭ，ｐＨ６．０）を７７．４９ｍＬ加えて溶解した。その後、溶液を凍結乾燥させることによって非晶質混合物を調製し、１００℃のオーブンで１時間加熱した。加熱終了後、２０％アセトニトリルを用いて加熱混合物を溶かし込み、抽出操作に供した。
Production Example 2 Production of pyrrole derivatives (PABS-A and PABS-B) D-(+)-glucose (2.064 g) and S-allyl-L-cysteine (780 mg) were weighed, and phosphate buffer (100 mM, pH 6.0) was added. 77.49 mL was added and dissolved. The amorphous mixture was then prepared by lyophilizing the solution and heated in an oven at 100 ° C. for 1 hour. After completion of heating, the heated mixture was dissolved using 20% acetonitrile and subjected to an extraction operation.
反応溶液を分液漏斗に入れ、その容量の約３〜４倍の酢酸エチルと混合させて分液抽出を行った。酢酸エチル層を回収し、水層は再び同様の抽出操作に供した。この操作を合計６回行った後、回収した酢酸エチル層の溶媒を、エバポレーターを用いて除去し、残留物を２０%アセトニトリルに溶解させることで分取用のサンプル溶液を得た。 The reaction solution was put into a separatory funnel and mixed with about 3 to 4 times its volume of ethyl acetate to perform separation extraction. The ethyl acetate layer was recovered, and the aqueous layer was again subjected to the same extraction operation. After performing this operation six times in total, the solvent of the collected ethyl acetate layer was removed using an evaporator, and the residue was dissolved in 20% acetonitrile to obtain a sample solution for fractionation.
分取用のサンプル溶液をＨＰＬＣ操作に供することで、目的化合物を得た。得られた化合物はＨＰＬＣによる精製操作を通じて高純度化させた後、ＮＭＲ、ＬＣＭＳ、円偏光二色性スペクトルの測定、及び生物活性の評価に用いた。最終的に得られたＰＳＢＳ−Ａは２．３４ｍｇ、ＰＳＢＳ−Ｂは５．２ｍｇであった。実験に使用した機器や分析条件は以下の通りである。 The target compound was obtained by subjecting the sample solution for fractionation to HPLC operation. The resulting compound was purified through HPLC purification and then used for NMR, LCMS, measurement of circular dichroism spectrum, and evaluation of biological activity. PSBS-A finally obtained was 2.34 mg, and PSBS-B was 5.2 mg. The equipment and analysis conditions used in the experiment are as follows.
分析条件と設備
分析機器：JASCO LC-Net II/ADC, MD 2010 plus, PU 2080 plus, AS 2055 plus,
LG 2080-02S, DG 2080-53
カラム：Luna 5μ Phenyl-Hexyl column(20 mm×250 mm, Phenomenex)
移動相A：水 (0.1% 蟻酸)
移動相B：100% メタノール
移動相のグラジエント条件;
50% B → 50% B → 95% B → 95% B → 50% B → 50% B
0分 3分 21分 26分 28分 30分
移動相流速：18 mL/min
検出波長：290 nm
Analysis conditions and equipment <br/> Analytical equipment: JASCO LC-Net II / ADC, MD 2010 plus, PU 2080 plus, AS 2055 plus,
LG 2080-02S, DG 2080-53
Column: Luna 5μ Phenyl-Hexyl column (20 mm x 250 mm, Phenomenex)
Mobile phase A: water (0.1% formic acid)
Mobile phase B: 100% methanol Mobile phase gradient conditions;
50% B → 50% B → 95% B → 95% B → 50% B → 50% B
0 min 3 min 21 min 26 min 28 min 30 min Mobile phase flow rate: 18 mL / min
Detection wavelength: 290 nm
精製ＨＰＬＣの条件(ＰＳＢＳ-Ａ、Ｂ共通)
分析機器：上記のものと同じ
カラム：ODS-Hypersil column(5μ, 10 mm×250 mm, Thermo)
移動相A：水 (0.1% 蟻酸)
移動相B：100% アセトニトリル
移動相のグラジエント条件;
40% B → 40% B → 80% B → 40% B → 40% B
0分 3分 15分 18分 21分
移動相流速：3.6 mL/min
検出波長：290 nm
Purification HPLC conditions (common to PSBS-A and B)
Analytical instrument: Same as above Column: ODS-Hypersil column (5μ, 10 mm x 250 mm, Thermo)
Mobile phase A: water (0.1% formic acid)
Mobile phase B: 100% acetonitrile Mobile phase gradient conditions;
40% B → 40% B → 80% B → 40% B → 40% B
0 min 3 min 15 min 18 min 21 min Mobile phase flow rate: 3.6 mL / min
Detection wavelength: 290 nm
試験例
（１）ＩｇＡ産生促進作用
リンパ球を１０％血清含培地にて１×１０6個／ｍＬに調製し、２４穴プレートに１ｍＬずつ播種した。次いで、ＰＳＢＳ−Ａを適宜希釈し最終濃度６．７、２０および６０ μＭとなるように２４穴プレートへ添加し、３７℃で３日間培養した後、上清をとりＥＬＩＳＡにてＩｇＡ量を測定した。その結果、ＰＳＢＳ−Ａが、ＩｇＡの産生を有意に促進した（図２）。
Test Example (1) IgA Production Promoting Action Lymphocytes were prepared at 1 × 10 6 cells / mL in a medium containing 10% serum, and 1 mL each was seeded in a 24-well plate. Next, PSBS-A is diluted as appropriate and added to a 24-well plate to a final concentration of 6.7, 20 and 60 μM. After culturing at 37 ° C. for 3 days, the supernatant is taken and the amount of IgA is measured by ELISA did. As a result, PSBS-A significantly promoted IgA production (FIG. 2).
（２）ＬＰＳ誘導性ＩｇＡ産生促進作用
リンパ球を１０％血清含培地にて１×１０6個／ｍＬに調製し、２４穴プレートに１ｍＬずつ播種した。次いで、大腸菌Ｏ５５由来リポ多糖（ＬＰＳ）を１μｇ／ｍＬとなるよう添加したのち、ＰＳＢＳ−Ａを適宜希釈し最終濃度６．７、２０および６０μＭとなるように２４穴プレートへ添加し、３７℃で３日間培養した後、上清をとりＥＬＩＳＡにてＩｇＡ量を測定した。その結果、ＰＳＢＳ−Ａが、ＬＰＳにより誘導されたＩｇＡの産生を有意に促進した（図３）。
(2) LPS-induced IgA production promoting action Lymphocytes were prepared to 1 × 10 6 cells / mL in a medium containing 10% serum, and 1 mL each was seeded in a 24-well plate. Next, after adding Escherichia coli O55-derived lipopolysaccharide (LPS) to 1 μg / mL, PSBS-A was appropriately diluted and added to a 24-well plate to a final concentration of 6.7, 20 and 60 μM. After culturing for 3 days, the supernatant was taken and the amount of IgA was measured by ELISA. As a result, PSBS-A significantly promoted the production of IgA induced by LPS (FIG. 3).
（３）ＬＰＳ誘導性ＩＬ−６産生抑制作用
リンパ球を１０％血清含培地にて１×１０6個／ｍＬに調製し、２４穴プレートに１ｍＬずつ播種した。次いで、大腸菌Ｏ５５由来リポ多糖（ＬＰＳ）を１μｇ／ｍＬとなるよう添加したのち、ＰＳＢＳ−Ａを適宜希釈し最終濃度６．７、２０および６０ μＭとなるように２４穴プレートへ添加し、３７℃で１日間培養した後、上清をとりＥＬＩＳＡにてＩＬ−６量を測定した。その結果、ＰＳＢＳ−Ａが、ＬＰＳにより誘導されたＩＬ−６の産生を有意に抑制した（図４）。
(3) LPS-induced IL-6 production inhibitory action Lymphocytes were prepared at 1 × 10 6 cells / mL in a medium containing 10% serum, and 1 mL each was seeded in a 24-well plate. Next, after adding Escherichia coli O55-derived lipopolysaccharide (LPS) to a concentration of 1 μg / mL, PSBS-A is appropriately diluted and added to a 24-well plate to a final concentration of 6.7, 20 and 60 μM. After culturing at 0 ° C. for 1 day, the supernatant was taken and the amount of IL-6 was measured by ELISA. As a result, PSBS-A significantly suppressed the production of IL-6 induced by LPS (FIG. 4).
（４）抗酸化遺伝子の発現増加作用
ＬＯＮＺＡ社製ＥＧＭ−２培地を用い、４８穴プレートにてヒト臍帯静脈内皮細胞（Ｈｕｖｅｃ）を培養した。コンフルエントに達した後さらに２日間培養を継続後、ＤＭＥＭ培地（５．５ｍＭグルコース、２％血清）に変え、５０〜１００μＭのＰＳＢＳ−Ａを含む条件にて４時間処理し、トータルＲＮＡを抽出した。ＧＣＬＭ（glutamate-cysteine ligase, modifier subunit）およびＨＯ−１（heme oxygenase １）の発現レベルを特異的に検出するプライマーを用い、Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ ＰＣＲ法によりトータルＲＮＡ中の発現レベルを測定した。ＧＣＬＭの検出には、配列が5'‐CAGCGAGGAGCTTCATGATTG‐3'(配列番号１）および5'‐TGCATTCCAAGACATCTGGAAA‐3'(配列番号２)であるプライマーをもちいた。ＨＯ−１の検出には、配列が5'‐CAGGCAGAGAATGCTGAG‐3'(配列番号３)および5'‐GCTTCACATAGCGCTGCA‐3'(配列番号４)であるプライマーを用いた。
その結果、ＰＳＢＳ−Ａを加えた条件でＧＣＬＭとＨＯ−１の発現増加が認められた。Ｎｒｆ２ターゲット遺伝子の有意な発現増加が確認できたことから、ＰＳＢＳ−ＡがＮｒｆ２活性化作用を有することが示唆された（図５）。
(4) Antioxidant gene expression increasing action Human umbilical vein endothelial cells (Huvec) were cultured in 48-well plates using EGM-2 medium manufactured by LONZA. After reaching confluence, the culture was further continued for 2 days, then changed to DMEM medium (5.5 mM glucose, 2% serum), treated for 4 hours under conditions containing 50-100 μM PSBS-A, and total RNA was extracted. . The expression level in total RNA was measured by Real-Time PCR method using primers that specifically detect the expression level of GCLM (glutamate-cysteine ligase, modifier subunit) and HO-1 (heme oxygenase 1). For detection of GCLM, primers having sequences 5′-CAGCGAGGAGCTTCATGATTG-3 ′ (SEQ ID NO: 1) and 5′-TGCATTCCAAGACATCTGGAAA-3 ′ (SEQ ID NO: 2) were used. For detection of HO-1, primers having the sequences 5′-CAGGCAGAGAATGCTGAG-3 ′ (SEQ ID NO: 3) and 5′-GCTTCACATAGCGCTGCA-3 ′ (SEQ ID NO: 4) were used.
As a result, increased expression of GCLM and HO-1 was observed under the condition where PSBS-A was added. A significant increase in the expression of the Nrf2 target gene was confirmed, suggesting that PSBS-A has an Nrf2 activation action (FIG. 5).
Claims (10)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2015251735A JP2017114810A (en) | 2015-12-24 | 2015-12-24 | Novel pyrrole derivative |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2015251735A JP2017114810A (en) | 2015-12-24 | 2015-12-24 | Novel pyrrole derivative |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2017114810A true JP2017114810A (en) | 2017-06-29 |
Family
ID=59233230
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2015251735A Pending JP2017114810A (en) | 2015-12-24 | 2015-12-24 | Novel pyrrole derivative |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2017114810A (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPWO2019031442A1 (en) * | 2017-08-07 | 2020-08-20 | 湧永製薬株式会社 | Blood flow improver |
-
2015
- 2015-12-24 JP JP2015251735A patent/JP2017114810A/en active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPWO2019031442A1 (en) * | 2017-08-07 | 2020-08-20 | 湧永製薬株式会社 | Blood flow improver |
| JP7146768B2 (en) | 2017-08-07 | 2022-10-04 | 湧永製薬株式会社 | Blood flow improver |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6751670B2 (en) | Immune function regulator | |
| JP6802256B2 (en) | GLP-1 secretion promoting composition and method for producing the same | |
| WO2016199885A1 (en) | Blood pressure-lowering agent | |
| US10590496B2 (en) | Composition for preventing and treating degenerative brain disease using novel lactic acid bacteria | |
| JPWO2003007974A1 (en) | Composition having TNF production inhibitory action and TNF production inhibitor | |
| JP5275315B2 (en) | Novel compound and β-secretase inhibitor | |
| KR102315959B1 (en) | A composition for reinforcing immune function comprising the extract of oat sprout | |
| EP3970793A1 (en) | Agent for preventing, ameliorating, or treating periodontal disease | |
| JP2016027031A (en) | Medicine or food for neural network reconstruction/activation | |
| JP2017114810A (en) | Novel pyrrole derivative | |
| WO2022220265A1 (en) | Sirtuin or klotho activator or expression enhancer, nad+ increasing agent, and senolytic agent | |
| JP2019006828A (en) | Brain function improver, and food and drink for brain function improvement | |
| JP6273440B2 (en) | GLP-1 production promoter, DPPIV inhibitor and glucose absorption inhibitor | |
| KR101705253B1 (en) | Pharmaceutical composition for prevention or treatment of inflammatory diseases comprising cerulenin or cerulenin derivative as an active ingredient | |
| WO2019031442A1 (en) | Blood flow improver | |
| WO2019235597A1 (en) | Autophagy activating agent | |
| JP6462755B2 (en) | Brain function improving agent and food and drink for improving brain function | |
| JP2017530110A (en) | A novel compound (KS513) isolated from Pseudosimachion rotundum varieties Subintegrant, a composition for preventing or treating allergic disease, inflammatory disease, asthma or chronic obstructive pulmonary disease, comprising the compound as an active ingredient And its use | |
| JP2022541355A (en) | Method for producing sesame oil cake extract and food composition for preventing or improving colitis containing same as active ingredient | |
| KR101470613B1 (en) | Composition comprising latifolin for preventing or treating inflammatory diseases | |
| KR102279883B1 (en) | A composition comprising Micrandilactone C for preventing or treating inflammatory disease | |
| JP7239135B2 (en) | α-Glucosidase activity inhibitor and blood sugar elevation inhibitor | |
| JP2005206520A (en) | Atherosclerosis inhibitor, and food and pharmaceutical each containing the same | |
| JP7186442B2 (en) | Novel squalene derivatives and anti-inflammatory agents | |
| WO2022039190A1 (en) | Sirtuin activator, and method for activating sirtuin |