JP2017006022A - 非アルコール性脂肪肝炎モデル動物の製造方法 - Google Patents
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
【解決手段】 メラノコルチン4型受容体を欠損するマウスに、高脂肪食を少なくとも15日間摂取させた上で、四塩化炭素を単回投与することによって、NASHに特徴的な肝組織像を示すNASHモデル動物を作製できることを見出した。
【選択図】 なし
Description
<1> 非アルコール性脂肪肝炎モデルマウスを製造するための方法であって、下記工程(1)及び(2)を含む方法
(1)メラノコルチン4型受容体の発現を抑制したマウスに、高脂肪食を摂取させる工程、
(2)前記高脂肪食を少なくとも15日間摂取させたマウスに、四塩化炭素を単回投与する工程。
<2> 非アルコール性脂肪肝炎を抑制する活性を有する化合物をスクリーニングするための方法であって、下記工程(1)〜(6)を含む方法
(1)メラノコルチン4型受容体の発現を抑制したマウスに、高脂肪食を摂取させる工程、
(2)前記高脂肪食を少なくとも15日間摂取させたマウスに、四塩化炭素を単回投与する工程、
(3)前記四塩化炭素を投与したマウスに、被験物質を接触させる工程、
(4)前記被験物質を接触させたマウスにおいて、非アルコール性脂肪肝炎の程度を検出する工程、
(5)工程(2)において前記四塩化炭素を投与したマウスに、前記被験物質を接触させずに、非アルコール性脂肪肝炎の程度を検出する工程、
(6)工程(4)及び工程(5)において検出した非アルコール性脂肪肝炎の程度を比較し、工程(4)において検出した非アルコール性脂肪肝炎の程度が、工程(5)において検出した非アルコール性脂肪肝炎の程度よりも低い場合に、前記被験物質は非アルコール性脂肪肝炎を抑制する活性を有する化合物であると判定する工程。
<3> 前記高脂肪食が、脂肪をエネルギー比率にて40%以上含む組成物である、<1>又は<2>に記載の方法。
<4> 前記四塩化炭素の単回投与量が0.05〜0.4mL/kgである、<1>〜<3>のいずれか一に記載の方法。
<5> メラノコルチン4型受容体の発現が抑制されており、高脂肪食を少なくとも15日間摂取させ、かつ四塩化炭素を単回投与することにより、非アルコール性脂肪肝炎が誘導されたマウス。
<6> 前記高脂肪食が、脂肪をエネルギー比率にて40%以上含む組成物である、<5>に記載のマウス。
<7> 前記四塩化炭素の単回投与量が0.05〜0.4mL/kgである、<5>又は<6>に記載のマウス。
本発明の非アルコール性脂肪肝炎モデルマウスの製造するための方法は、下記工程(1)及び(2)を含む
(1)メラノコルチン4型受容体の発現を抑制したマウスに、高脂肪食を摂取させる工程、
(2)前記高脂肪食を少なくとも15日間摂取させたマウスに、四塩化炭素を単回投与する工程。
本発明においては、上述のNASHモデルマウスの製造方法を利用した、NASHを抑制する活性を有する化合物のスクリーニング方法をも提供し得る。すなわち、本発明は、下記工程(1)〜(6)を含む、NASHを抑制する活性を有する化合物をスクリーニングするための方法も提供し得る。
(1)メラノコルチン4型受容体の発現を抑制したマウスに、高脂肪食を摂取させる工程、
(2)前記高脂肪食を少なくとも15日間摂取させたマウスに、四塩化炭素を単回投与する工程、
(3)前記四塩化炭素を投与したマウスに、被験物質を接触させる工程、
(4)前記被験物質を接触させたマウスにおいて、非アルコール性脂肪肝炎の程度を検出する工程、
(5)工程(2)において前記四塩化炭素を投与したマウスに、前記被験物質を接触させずに、非アルコール性脂肪肝炎の程度を検出する工程、
(6)工程(4)及び工程(5)において検出した非アルコール性脂肪肝炎の程度を比較し、工程(4)において検出した非アルコール性脂肪肝炎の程度が、工程(5)において検出した非アルコール性脂肪肝炎の程度よりも低い場合に、前記被験物質は非アルコール性脂肪肝炎を抑制する活性を有する化合物であると判定する工程。
(1)メラノコルチン4型受容体の発現を抑制したマウスに、高脂肪食を摂取させる工程、
(2)前記高脂肪食を少なくとも15日間摂取させたマウスに、四塩化炭素を単回投与する工程、
(3)前記四塩化炭素を投与したマウスから試料を採取し、該試料における遺伝子転写産物、遺伝子翻訳産物、遺伝子修飾、タンパク質修飾又は代謝産物を検出し、対照におけるそれと比較し、変動する物質を同定する工程。
メラノコルチン4型受容体を欠損させたマウス(以下、「MC4Rノックアウトマウス」とも称する。遺伝的バックグランド:C57BL/6J)は、テキサス大学メディカルセンター Joel K.Elmquistより提供したものを使用した(Balthasar N.ら、Cell、2005年11月4日発行、123巻、3号、493〜505ページ 参照)。また、対照群として、C57BL/6J野生型マウスを、日本クレア株式会社より購入して用意した。
前記マウスから採取した肝臓は、中性緩衝ホルマリン溶液に浸漬して固定化し、パラフィン包埋に供し、切片を調製した。
前記マウスから採取した血液に関し、Itoh M.ら、Am J Pathol、2011年、179巻、2454〜2463ページに記載の方法に沿って、アラニンアミノ基転移酵素(ALT)の濃度を測定した。
MC4Rノックアウトマウス(雄、8週齢)に、高脂肪食(Research Diets社製、高脂肪飼料:D12079B、468kcal/100g、脂肪をエネルギー比率にて41%含む、スクロースを34.0%含む、コレステロールを0.2%含む)を4週間摂取させた。次いで、0.1mL/kgの四塩化炭素を腹腔内に単回投与した。なお、投与に際しては、四塩化炭素を溶媒(オリーブ油)にて40倍に希釈したものを用いた。また、対照群として、溶媒のみを投与したマウスも用意した。そして、当該投与2、4、7又は10日後に肝臓を採取し、上記の通り、パラフィン切片を調製し、HE染色、シリウスレッド染色、TUNEL染色、F4/80染色に供した。得られた結果を、HE染色に関しては図1に示し、TUNEL染色に関しては図2及び3に示し、F4/80染色に関しては図4及び5に示し、シリウスレッド染色に関しては図8及び9に示す。また、四塩化炭素投与7及び10日後に採取した肝臓については、凍結切片も調製し、上記の通り、F4/80及びCD11cの二重染色に供した。得られた結果を図6及び7に示す。
高脂肪食の摂取期間を4週間から2週間に短縮した以外は、実施例1に記載の方法と同様の方法にてマウスを調製し、四塩化炭素投与7日後に肝臓を採取し、パラフィン切片を調製し、シリウスレッド染色及びF4/80染色に供した。得られた結果を、図10に示す。
MC4Rノックアウトマウスを野生型マウスとした以外は、実施例1に記載の方法と同様の方法にてマウスを調製し、四塩化炭素投与7日後に肝臓を採取し、パラフィン切片を調製し、シリウスレッド染色及びF4/80染色に供した。得られた結果を、図11に示す。
四塩化炭素の単回投与量を0.05mL/kg、0.2mL/kg又は0.4mL/kg(実施例2〜4)とした以外は、実施例1同様にマウスを調製した。また、併せて投与量を0.1mL/kgとするマウス(実施例1)も調製した。
Claims (5)
- 非アルコール性脂肪肝炎モデルマウスの製造するための方法であって、下記工程(1)及び(2)を含む方法
(1)メラノコルチン4型受容体の発現を抑制したマウスに、高脂肪食を摂取させる工程、
(2)前記高脂肪食を少なくとも15日間摂取させたマウスに、四塩化炭素を単回投与する工程。 - 非アルコール性脂肪肝炎を抑制する活性を有する化合物をスクリーニングするための方法であって、下記工程(1)〜(6)を含む方法
(1)メラノコルチン4型受容体の発現を抑制したマウスに、高脂肪食を摂取させる工程、
(2)前記高脂肪食を少なくとも15日間摂取させたマウスに、四塩化炭素を単回投与する工程、
(3)前記四塩化炭素を投与したマウスに、被験物質を接触させる工程、
(4)前記被験物質を接触させたマウスにおいて、非アルコール性脂肪肝炎の程度を検出する工程、
(5)工程(2)において前記四塩化炭素を投与したマウスに、前記被験物質を接触させずに、非アルコール性脂肪肝炎の程度を検出する工程、
(6)工程(4)及び工程(5)において検出した非アルコール性脂肪肝炎の程度を比較し、工程(4)において検出した非アルコール性脂肪肝炎の程度が、工程(5)において検出した非アルコール性脂肪肝炎の程度よりも低い場合に、前記被験物質は非アルコール性脂肪肝炎を抑制する活性を有する化合物であると判定する工程。 - 前記高脂肪食が、脂肪をエネルギー比率にて40%以上含む組成物である、請求項1又は2に記載の方法。
- 前記四塩化炭素の単回投与量が0.05〜0.4mL/kgである、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
- メラノコルチン4型受容体の発現が抑制されており、高脂肪食を少なくとも15日間摂取させ、かつ四塩化炭素を単回投与することにより、非アルコール性脂肪肝炎が誘導されたマウス。
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