JP2017001996A - Viral vaccine enhancer, iga production promoting agent, and tlr-7 expression promoting agent - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、ウイルスワクチン増強剤、ＩｇＡの産生促進剤、及びＴＬＲ−７の発現促進剤に関する。 The present invention relates to a virus vaccine enhancer, an IgA production promoter, and a TLR-7 expression promoter.
疫学研究より、茶を摂取することで、インフルエンザ等のウイルス感染症に感染するリスクを低下させるということが報告されている（非特許文献１）。 Epidemiological studies have reported that taking tea reduces the risk of infection with viral infections such as influenza (Non-patent Document 1).
例えば、特許文献１には、エピガロカテキンとエピガロカテキンガレートとを所定比で含む免疫賦活剤が開示されており、該免疫賦活剤によると、ＩｇＡの産生が促進できることが開示されている。
For example,
特許文献２には、茶に含まれる成分であるＬ−テアニンとエピガロカテキンガレートとをそれぞれ所定量ずつ含む組成物の投与により、全身性免疫が向上し、風邪及びインフルエンザの発症が減少することが記載されている。
高齢者は加齢に伴い免疫が低下しているため、より一層、ウイルス感染症に対する免疫の向上が求められる。高齢者のウイルス感染症に対する免疫獲得にはワクチンが使用されるが、免疫が低下している高齢者に対しては、ワクチンによる免疫向上作用が弱い。 Since immunity of elderly people decreases with age, further improvement in immunity against viral infections is required. Vaccines are used to acquire immunity against viral infections in the elderly, but the immunity-improving effect of the vaccine is weak for elderly people with reduced immunity.
そのため、ウイルス感染症に対するワクチンの免疫向上作用をより増強させる必要があるが、特許文献１に記載された免疫賦活剤や、特許文献２に記載された組成物は、この点で十分でない。
Therefore, it is necessary to further enhance the immunity-improving action of the vaccine against viral infections, but the immunostimulant described in
また、ＩｇＡは、免疫の向上に関連することが知られており、ウイルス感染症を予防するにはウイルス抗原に特異的なＩｇＡの産生を向上させることが必要となる。しかしながら、特許文献１に記載された免疫賦活剤や、特許文献２に記載された組成物は、ウイルス抗原に特異的なＩｇＡの産生を向上するという点で、十分でない。
In addition, IgA is known to be related to improvement of immunity, and in order to prevent viral infection, it is necessary to improve production of IgA specific to a viral antigen. However, the immunostimulant described in
本発明は以上の実情に鑑みてなされたものであり、ウイルス感染症に対するワクチンの免疫向上作用の増強効果に優れたウイルスワクチン増強剤、ウイルス抗原に特異的なＩｇＡの産生促進効果に優れたＩｇＡの産生促進剤、及び、ウイルスを認識する受容体であるＴＬＲ−７の発現促進剤を提供することを目的とする。 The present invention has been made in view of the above circumstances, and is a virus vaccine enhancer excellent in the effect of enhancing the immunity of the vaccine against viral infections, and IgA excellent in the effect of promoting the production of IgA specific to a virus antigen And an expression promoter for TLR-7, which is a receptor that recognizes viruses.
本発明者らは、べにふうきの茶葉又はべにふうきの抽出物により、ウイルス感染症に対するワクチンの免疫向上作用が増強すること、ウイルス抗原に特異的なＩｇＡの産生が促進すること、及び、ＴＬＲ−７の発現が促進することを見出し、本発明を完成するに至った。より具体的には、本発明は以下のようなものを提供する。 The inventors of the present invention have enhanced the immunity-improving effect of a vaccine against viral infections, promoted the production of IgA specific for viral antigens, and the TLR-7, using Benifuuki tea leaves or Benifuuki extract. The inventors have found that expression is promoted, and have completed the present invention. More specifically, the present invention provides the following.
（１） べにふうきの茶葉又はべにふうきの抽出物を含有する、ウイルスワクチン増強剤。 (1) A virus vaccine potentiator comprising Benifuuki tea leaves or Benifuuki extract.
（２） インフルエンザウイルス用である、（１）に記載のウイルスワクチン増強剤。 (2) The virus vaccine enhancer according to (1), which is for influenza virus.
（３） べにふうきの茶葉又はべにふうきの抽出物を含有する、ウイルス抗原に特異的なＩｇＡの産生促進剤。 (3) An IgA production promoter specific to a viral antigen, comprising Benifuuki tea leaves or Benifuuki extract.
（４） 前記ＩｇＡは、気管支におけるＩｇＡである、（３）に記載のＩｇＡの産生促進剤。 (4) The IgA production promoter according to (3), wherein the IgA is IgA in bronchi.
（５） べにふうきの茶葉又はべにふうきの抽出物を含有する、ＴＬＲ−７の発現促進剤。 (5) TLR-7 expression promoter containing Benifuuki tea leaves or Benifuuki extract.
（６） メチル化カテキンを含有する、ウイルスワクチン増強剤。 (6) A virus vaccine potentiator containing methylated catechins.
（７） インフルエンザウイルス用である、（６）に記載のウイルスワクチン増強剤。 (7) The virus vaccine enhancer according to (6), which is for influenza virus.
（８） メチル化カテキンを含有する、ウイルス抗原に特異的なＩｇＡの産生促進剤。 (8) An IgA production promoter specific to a viral antigen, containing methylated catechins.
（９） 前記ＩｇＡは、気管支におけるＩｇＡである、（８）に記載のＩｇＡの産生促進剤。 (9) The IgA production promoter according to (8), wherein the IgA is IgA in bronchi.
（１０） メチル化カテキンを含有する、ＴＬＲ−７の発現促進剤。 (10) A TLR-7 expression promoter containing methylated catechin.
本発明によれば、ウイルス感染症に対するワクチンの免疫向上作用の増強効果に優れたウイルスワクチン増強剤、ウイルス抗原に特異的なＩｇＡの産生促進効果に優れたＩｇＡの産生促進剤、及び、ウイルスを認識する受容体であるＴＬＲ−７の発現促進剤を提供することができる。 According to the present invention, a virus vaccine enhancer excellent in enhancing the immunity-improving effect of a vaccine against a viral infection, an IgA production promoter excellent in an IgA production promoting effect specific to a virus antigen, and a virus An expression promoter for TLR-7 that is a receptor to be recognized can be provided.
以下、本発明の具体的な実施形態について詳細に説明するが、本発明は以下の実施形態に何ら限定されるものではなく、本発明の目的の範囲内において、適宜変更を加えて実施することができる。 Hereinafter, specific embodiments of the present invention will be described in detail. However, the present invention is not limited to the following embodiments, and may be implemented with appropriate modifications within the scope of the object of the present invention. Can do.
＜ウイルスワクチン増強剤＞
本発明のウイルスワクチン増強剤は、べにふうきの茶葉又はべにふうきの抽出物を含有する。これにより、本発明のウイルスワクチン増強剤は、ウイルスワクチンの増強効果に優れる。なお、本明細書において、「ウイルスワクチン」とは、ウイルス感染症に対するワクチンを意味する。また、「ウイルスワクチン増強」とは、ウイルスワクチンにより向上した免疫を増強することを意味する。
<Virus vaccine enhancer>
The virus vaccine enhancer of the present invention contains Benifuuki tea leaves or Benifuuki extract. Thereby, the virus vaccine enhancer of this invention is excellent in the enhancement effect of a virus vaccine. In the present specification, the “viral vaccine” means a vaccine against viral infection. “Viral vaccine enhancement” means enhancing immunity improved by a viral vaccine.
べにふうきの茶葉又はべにふうきの抽出物には、メチル化カテキンが多く含まれている。このメチル化カテキンは、ＴＬＲ（Ｔｏｌｌ様受容体）−７＋細胞である樹状細胞中のＴＬＲ−７の発現量を増加させる。ＴＬＲ−７の発現量が増加すると、ウイルス抗原に特異的なＩｇＡを産生するＢ細胞が活性化し、ウイルスワクチンの増強が促進する。これにより、本発明のウイルスワクチン増強剤は、ウイルスワクチン増強効果に優れるものと推測される。 Benifuuki tea leaves or Benifuuki extract is rich in methylated catechins. This methylated catechin increases the expression level of TLR-7 in dendritic cells, which are TLR (Toll-like receptor) -7 + cells. When the expression level of TLR-7 increases, B cells producing IgA specific to the viral antigen are activated, and the enhancement of the viral vaccine is promoted. Thereby, it is estimated that the virus vaccine enhancer of this invention is excellent in the virus vaccine enhancement effect.
また、本発明のウイルスワクチン増強剤に含まれるべにふうきの茶葉又はべにふうきの抽出物は、ＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＩＬ−２の産生を促進することができる。本発明のウイルスワクチン増強剤は、これにより、ウイルスワクチン増強効果を促進することができる。 In addition, Benifuuki tea leaves or Benifuuki extract contained in the virus vaccine enhancer of the present invention can promote the production of IL-2 in CD8 + T cells. Thereby, the virus vaccine enhancement agent of the present invention can promote the virus vaccine enhancement effect.
また、本発明のウイルスワクチン増強剤は、上述のとおり、メチル化カテキンによりウイルスワクチン増強効果に優れるものである。そのため、本発明のウイルスワクチン増強剤は、べにふうきの茶葉又はべにふうきの抽出物を含むものに限定されず、メチル化カテキンを含有するもの、又は、メチル化カテキンからなるものであってもよい。 Further, as described above, the virus vaccine potentiator of the present invention is excellent in the virus vaccine enhancement effect due to methylated catechin. Therefore, the virus vaccine enhancer of the present invention is not limited to those containing Benifuuki tea leaves or Benifuuki extract, but may contain methylated catechins or consist of methylated catechins.
本発明のウイルスワクチン増強剤に含まれるべにふうきは、べにふうきの茶葉又はべにふうきの抽出物のいずれであってもよい。また、本発明のウイルスワクチン増強剤は、べにふうきの茶葉又はべにふうきの抽出物の両方を含んでもよく、いずれか一方のみ含んでもよい。また、本発明のウイルスワクチン増強剤は、べにふうきの茶葉又はべにふうきの抽出物以外の成分を含んでもよく、べにふうきの茶葉又はべにふうきの抽出物のみにより構成されてもよい。 Benifuuki contained in the virus vaccine enhancer of the present invention may be either Benifuuki tea leaves or Benifuuki extract. Further, the virus vaccine enhancer of the present invention may contain both Benifuuki tea leaves or Benifuuki extract, or may contain only one of them. Moreover, the virus vaccine enhancer of the present invention may contain components other than Benifuuki tea leaves or Benifuuki extract, or may be composed only of Benifuuki tea leaves or Benifuuki extract.
本発明のウイルスワクチン増強剤に含まれるべにふうきの茶葉又はべにふうきの抽出物には、メチル化カテキンが含まれる。本発明のウイルスワクチン増強剤におけるメチル化カテキンの含有量は、特に限定されないが、ウイルスワクチン増強効果に優れる点で、固形分含有量で、１ｇ／１００ｇ以上であることが好ましく、１．５ｇ／１００ｇ以上であることがより好ましく、２ｇ／１００ｇ以上であることが更に好ましい。また、本発明のウイルスワクチン増強剤に含まれるメチル化カテキンの量の上限は、特に限定されず、例えば、固形分含有量で、３ｇ／１００ｇ以下であってもよい。なお、本発明のウイルスワクチン増強剤中のメチル化カテキンの固形分含有量は、液体クロマトグラフィーで測定する。 Benifuuki tea leaves or Benifuuki extract contained in the virus vaccine enhancer of the present invention contains methylated catechins. The content of methylated catechin in the virus vaccine enhancer of the present invention is not particularly limited, but is preferably 1 g / 100 g or more in terms of solid content in terms of excellent virus vaccine enhancement effect, and preferably 1.5 g / It is more preferably 100 g or more, and further preferably 2 g / 100 g or more. In addition, the upper limit of the amount of methylated catechin contained in the virus vaccine enhancer of the present invention is not particularly limited, and may be, for example, 3 g / 100 g or less in terms of solid content. The solid content of methylated catechin in the virus vaccine enhancer of the present invention is measured by liquid chromatography.
メチル化カテキンの種類は、特に限定されず、例えば、エピガロカテキン−３−Ｏ−（３−Ｏ−メチル）ガレート、エピカテキン−３−Ｏ−（３−Ｏ−メチル）ガレート、エピカテキン−３−Ｏ−（４−Ｏ−メチル）ガレート、エピガロカテキン−３−Ｏ−（４−Ｏ−メチル）ガレート、ガロカテキン−３−Ｏ−（３−Ｏ−メチル）ガレート、カテキン−３−Ｏ−（３−Ｏ−メチル）ガレート、カテキン−３−Ｏ−（４−Ｏ−メチル）ガレート、ガロカテキン−３−Ｏ−（４−Ｏ−メチル）ガレート、エピガロカテキン−３−Ｏ−メチルエチルガレート、エピカテキン−３−Ｏ−メチルエチルガレート、エピカテキン−３−Ｏ−（３，５−Ｏ−ジメチル）ガレート、これらの異性化体等が挙げられる。これらは、単独で用いてもよく、２種以上を併用してもよい。 The kind of methylated catechin is not particularly limited. For example, epigallocatechin-3-O- (3-O-methyl) gallate, epicatechin-3-O- (3-O-methyl) gallate, epicatechin- 3-O- (4-O-methyl) gallate, epigallocatechin-3-O- (4-O-methyl) gallate, gallocatechin-3-O- (3-O-methyl) gallate, catechin-3-O -(3-O-methyl) gallate, catechin-3-O- (4-O-methyl) gallate, gallocatechin-3-O- (4-O-methyl) gallate, epigallocatechin-3-O-methylethyl Examples include gallate, epicatechin-3-O-methylethyl gallate, epicatechin-3-O- (3,5-O-dimethyl) gallate, and isomers thereof. These may be used alone or in combination of two or more.
本発明のウイルスワクチン増強剤は、メチル化カテキン以外のカテキン類を含んでもよく、含まなくてもよい。このようなカテキン類としては、特に限定されないが、例えば、ガロカテキン、エピガロカテキン、カテキン、エピガロカテキンガレート、エピカテキン、ガロカテキンカレートエピカテキンガレート、カテキンガレート等が挙げられる。これらは、単独で含まれてもよく、２種以上を含んでもよい。 The virus vaccine enhancer of the present invention may or may not contain catechins other than methylated catechins. Such catechins are not particularly limited, and examples include gallocatechin, epigallocatechin, catechin, epigallocatechin gallate, epicatechin, gallocatechin calate epicatechin gallate, catechin gallate and the like. These may be contained alone or in combination of two or more.
本発明のウイルスワクチン増強剤は、ウイルスを認識するＴＬＲ−７の発現を向上させるため、対象とするウイルスの用途は、特に限定されないが、特に、ウイルスワクチン増強効果が優れることから、インフルエンザウイルス用のウイルスワクチン（例えば、インフルエンザワクチンヘマグルチニン等）増強剤であることが好ましい。ただし、これに限定されず、例えば、ラッサ熱ウイルス、ノロウイルス、風疹ウイルス、ポリオウイルス、エボラウイルス、黄熱ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス等のウイルス用のウイルスワクチン増強剤として用いてもよい。 Since the virus vaccine enhancer of the present invention improves the expression of TLR-7 that recognizes the virus, the intended use of the virus is not particularly limited. It is preferable that it is a virus vaccine (for example, influenza vaccine hemagglutinin etc.) enhancer. However, the present invention is not limited thereto, and for example, it may be used as a virus vaccine enhancer for viruses such as Lassa fever virus, Norovirus, rubella virus, polio virus, Ebola virus, yellow fever virus, hepatitis C virus and the like.
べにふうきの茶葉の形状は、どのような形状であってもよく、例えば、方形状、円形状等に裁断したものであってもよい。また、茶葉を粉砕して粒状に丸めて成形された粉末状の茶葉であってもよい。 The shape of the Benifuuki tea leaves may be any shape, for example, it may be cut into a square shape or a circular shape. Alternatively, it may be a powdered tea leaf formed by pulverizing tea leaves and rolling them into granules.
べにふうき抽出物は、従来の公知の方法により抽出することができる。例えば、べにふうきの茶葉を５０〜１００℃、５〜２０分間、抽出することができる。また、抽出に使用する溶媒は、特に限定されず、例えば、水、エタノール、ヘキサン、イソプロピルアルコール、液化炭酸ガス等であってもよい。 Benifuuki extract can be extracted by a conventionally known method. For example, Benifuuki tea leaves can be extracted at 50-100 ° C. for 5-20 minutes. Moreover, the solvent used for extraction is not specifically limited, For example, water, ethanol, hexane, isopropyl alcohol, liquefied carbon dioxide etc. may be sufficient.
上述の抽出液に、従来の公知の種々の成分を配合してもよく、配合しなくてもよい。そのような公知の成分としては、例えば、香料、酸味料（アスコルビン酸、無水クエン酸等）のほか、安定剤、増粘剤、乳化剤、ｐＨ調整剤（重曹等）を任意に使用できる。これら成分はどのように配合してもよく、例えば、溶媒に抽出物を抽出する前に配合してもよく、溶媒に抽出物を抽出した後に配合してもよい。 Various conventional known components may or may not be added to the above-described extract. As such known components, for example, a stabilizer, a thickener, an emulsifier, and a pH adjuster (eg, baking soda) can be arbitrarily used in addition to a fragrance and a sour agent (ascorbic acid, anhydrous citric acid, etc.). These components may be blended in any way, for example, may be blended before extracting the extract into the solvent, or may be blended after extracting the extract into the solvent.
本発明のウイルスワクチン増強剤は、どのような形態で使用してもよく、例えば、上記のべにふうきの茶葉又はべにふうきの抽出物をそのままウイルスワクチン増強剤として使用してもよい。あるいは、べにふうきの茶葉又はべにふうきの抽出物を加工したものであってもよい。加工する増強剤の形状は、錠剤、顆粒剤、カプセル剤等の種々の形状であってもよく、また、液体状であってもよい。あるいは、茶抽出物を粉末化し、凍結乾燥させた状態ものであってもよい。増強剤の加工を行う場合、一般に使用される結合剤、包含剤、賦形剤、滑沢剤、崩壊剤、湿潤剤のような添加剤を含有してもよい。 The virus vaccine enhancer of the present invention may be used in any form, for example, the above-mentioned Benifuuki tea leaf or Benifuuki extract may be used as it is as a virus vaccine enhancer. Alternatively, it may be processed from Benifuuki tea leaves or Benifuuki extract. The shape of the enhancer to be processed may be various shapes such as tablets, granules, capsules, etc., or may be liquid. Alternatively, the tea extract may be powdered and freeze-dried. When processing the enhancer, it may contain commonly used additives such as binders, inclusion agents, excipients, lubricants, disintegrants, wetting agents.
本発明のウイルスワクチン増強剤を液体状とする場合、例えば、容器に収容された形態にすることができる。液体状のウイルスワクチン増強剤が容器に収容された場合、その量は特に限定されず、例えば、１容器当たり５０ｍｌ〜３０００ｍｌであってもよいが、ウイルス増強の効果と摂取又は投与する頻度のバランスの観点から、１容器当たり１００〜２０００ｍｌであることが好ましく、１容器当たり２００〜１０００ｍｌであることが更に好ましく、１容器当たり３００〜６００ｍｌであることが最も好ましい。 When the virus vaccine enhancer of the present invention is in a liquid state, for example, it can be in a form housed in a container. When the liquid virus vaccine enhancer is contained in a container, the amount is not particularly limited, and may be, for example, 50 ml to 3000 ml per container, but the balance between the effect of virus enhancement and the frequency of ingestion or administration In view of the above, it is preferably 100 to 2000 ml per container, more preferably 200 to 1000 ml per container, and most preferably 300 to 600 ml per container.
本発明のウイルスワクチン増強剤の摂取又は投与方法は、特に限定されず、例えば、経口であってもよく、非経口であってもよい。経口摂取又は投与の方法は、特に限定されず、錠剤、顆粒剤、カプセル剤等に加工したものや、あるい加工していないものをそのまま経口摂取又は投与することができる。また、非経口摂取又は投与の方法は、特に限定されず、注射、吸入等の方法により、摂取又は投与することができる。ウイルスワクチン増強剤の摂取又は投与は、ウイルスワクチンを接種する前（例えば、ウイルスワクチンの接種の１〜３０日前）に行ってもよく、あるいは、ウイルスワクチンを接種した後（例えば、ウイルスワクチンの接種の１〜３０日後）に行ってもよく、ウイルスワクチンの接種と同時に行ってもよい。なお、本発明のウイルスワクチン増強剤の摂取又は投与は、ウイルスワクチンの接種と同様の方法で摂取又は投与してもよく、異なる方法で摂取又は投与してもよい。また、本発明のウイルスワクチン増強剤は、連続して継続的に摂取又は投与してもよく、単発の摂取又は投与であってもよい。本発明のウイルスワクチン増強剤を継続的に摂取又は投与を行う場合、１日当たりの摂取又は投与量は、特に限定されず、目的やウイルスワクチンの量等に応じて適切に選択することができる。 The method for ingesting or administering the virus vaccine enhancer of the present invention is not particularly limited, and may be, for example, oral or parenteral. The method of oral ingestion or administration is not particularly limited, and those processed into tablets, granules, capsules, etc., or those not processed can be ingested or administered as they are. The method for parenteral ingestion or administration is not particularly limited, and can be ingested or administered by methods such as injection and inhalation. The ingestion or administration of the virus vaccine enhancer may be performed before inoculating the virus vaccine (for example, 1 to 30 days before the inoculation of the virus vaccine) or after inoculating the virus vaccine (for example, inoculation of the virus vaccine). 1-30 days later) or at the same time as the vaccination with the virus vaccine. In addition, the ingestion or administration of the virus vaccine enhancer of the present invention may be ingested or administered by the same method as inoculation of the virus vaccine, or may be ingested or administered by a different method. Moreover, the virus vaccine enhancer of the present invention may be continuously ingested or administered, or may be a single ingestion or administration. When the virus vaccine enhancer of the present invention is continuously ingested or administered, the daily intake or dose is not particularly limited, and can be appropriately selected according to the purpose, the amount of the virus vaccine, and the like.
＜ＩｇＡの産生促進剤＞
本発明のＩｇＡの産生促進剤は、べにふうきの茶葉又はべにふうきの抽出物を含有する、ウイルス抗原に特異的なＩｇＡの産生促進剤である。本発明のＩｇＡの産生促進剤は、これにより、ＩｇＡの産生促進効果に優れる。本発明のＩｇＡの産生促進剤は、上述のウイルスワクチン増強剤と同様のものを用いることができる。
<IgA production promoter>
The IgA production promoter of the present invention is an IgA production promoter specific for a viral antigen, containing Benifuuki tea leaves or Benifuuki extract. Thus, the IgA production promoter of the present invention is excellent in the IgA production promoting effect. As the IgA production promoter of the present invention, the same virus vaccine enhancer as described above can be used.
本発明のＩｇＡの産生促進剤におけるウイルス抗原は、特に限定されないが、特に、ＩｇＡの産生促進効果が優れることから、インフルエンザウイルス抗原（例えば、インフルエンザワクチンヘマグルチニン等）であることが好ましい。ただし、これに限定されず、例えば、ラッサ熱ウイルス、ノロウイルス、風疹ウイルス、ポリオウイルス、エボラウイルス、黄熱ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス等のウイルス抗原であってもよい。 The viral antigen in the IgA production promoter of the present invention is not particularly limited, but is particularly preferably an influenza virus antigen (for example, influenza vaccine hemagglutinin, etc.) because of its excellent IgA production promoting effect. However, it is not limited to this, For example, viral antigens, such as Lassa fever virus, Norovirus, rubella virus, polio virus, Ebola virus, yellow fever virus, hepatitis C virus, may be sufficient.
ＩｇＡはウイルス抗原に特異的なものであれば、特に限定されず、ＩｇＡはウイルス抗原に特異的なＩｇＡが存在する器官（例えば、口腔、鼻腔、呼吸器官、消化器官等）、組織、あるいは細胞に存在するものであれば、どのようなものであってもよい。特に、本発明のＩｇＡの産生促進剤は、呼吸器官のうち、気管支におけるＩｇＡの産生の促進に好適に用いることができる。 IgA is not particularly limited as long as it is specific to a viral antigen. IgA is an organ (eg, oral cavity, nasal cavity, respiratory organ, digestive organ, etc.), tissue, or cell where IgA specific to the viral antigen is present. As long as it exists in any, what kind of thing may be sufficient. In particular, the IgA production promoter of the present invention can be suitably used for promoting the production of IgA in the bronchi among respiratory organs.
本発明のＩｇＡの産生促進剤は、ウイルス抗原に特異的なＩｇＡの産生を促進することから、ウイルス感染症（例えば、ラッサ熱ウイルス、ノロウイルス、風疹ウイルス、ポリオウイルス、エボラウイルス、黄熱ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス等）の予防又は治療の効能を有する。そのため、本発明のＩｇＡの産生促進剤は、ウイルス感染症の予防又は治療に用いることができる。 Since the IgA production promoter of the present invention promotes the production of IgA specific to a viral antigen, viral infections (for example, Lassa fever virus, Norovirus, rubella virus, poliovirus, Ebola virus, yellow fever virus, Hepatitis C virus, etc.). Therefore, the IgA production promoter of the present invention can be used for prevention or treatment of viral infections.
本発明のＩｇＡの産生促進剤は、上述のとおり、ウイルスワクチン増強剤と同様のものを用いることができるが、他方で、ウイルス感染症の予防又は治療に適しているため、その摂取又は投与は、本発明のＩｇＡの産生促進剤を単独で日常的に摂取又は投与を行うことが好ましい。より具体的には、例えば、本発明のＩｇＡの産生促進剤が液体状である場合、ウイルス感染症の予防又は治療に適していることから、単独で１日当たり５０〜１００ｍｌの量を摂取又は投与することが好ましく、単独で１日当たり１００〜８００ｍｌの量を摂取又は投与することがより好ましく、単独で１日当たり３００〜６００ｍｌの量を摂取又は投与することが更に好ましい。 As described above, the IgA production promoter of the present invention can be the same as the virus vaccine enhancer, but on the other hand, since it is suitable for the prevention or treatment of viral infection, its ingestion or administration is The IgA production promoter of the present invention is preferably taken or administered daily on a daily basis. More specifically, for example, when the IgA production promoter of the present invention is in a liquid form, it is suitable for the prevention or treatment of viral infections, so that it is taken or administered in an amount of 50 to 100 ml per day alone. It is preferable to ingest or administer an amount of 100 to 800 ml per day alone, and it is more preferable to ingest or administer an amount of 300 to 600 ml per day alone.
＜ＴＬＲ−７の発現促進剤＞
本発明のＴＬＲ−７の発現促進剤は、べにふうきの茶葉又はべにふうきの抽出物を含有する。本発明のＴＬＲ−７の発現促進剤は、これにより、ＴＬＲ−７の発現促進効果に優れる。本発明のＴＬＲ−７の発現促進剤は、上述のウイルスワクチン増強剤と同様のものと用いることができる。
<Expression promoter for TLR-7>
The expression promoter for TLR-7 of the present invention contains Benifuuki tea leaves or Benifuuki extract. Thereby, the TLR-7 expression promoting agent of the present invention is excellent in the TLR-7 expression promoting effect. The TLR-7 expression promoter of the present invention can be used in the same manner as the above-described virus vaccine enhancer.
本発明のＴＬＲ−７の発現促進剤により、ＴＬＲ−７の発現が促進される器官、組織、細胞等の箇所は、特に限定されない。ＴＬＲ−７の発現を促進する器官は、例えば、免疫器官としては脾臓が挙げられ、粘膜を有しかつ、感染の標的となる臓器としては、口腔、鼻腔、呼吸器官、腸、胃、消化管、肛門、陰茎、膣等が挙げられ、またワクチン接種を行う場合のある器官としては、筋肉等が挙げられる。 The location of organs, tissues, cells, etc., where TLR-7 expression is promoted by the TLR-7 expression promoter of the present invention is not particularly limited. Examples of the organ that promotes the expression of TLR-7 include the spleen as an immune organ, the mucous membrane, and the organs targeted for infection include the oral cavity, nasal cavity, respiratory organs, intestine, stomach, and digestive tract. , Anus, penis, vagina and the like, and organs that may be vaccinated include muscle and the like.
本発明のＴＬＲ−７の発現促進剤は、ＴＬＲ−７の発現促進効果に優れるが、ＴＬＲ−７はウイルスを認識する受容体であるため、ウイルス感染症（例えば、ラッサ熱ウイルス、ノロウイルス、風疹ウイルス、ポリオウイルス、エボラウイルス、黄熱ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス等）の予防又は治療の効能を有する。そのため、本発明のＴＬＲ−７の発現促進剤は、ウイルス感染症の予防又は治療に用いることができる。 The TLR-7 expression promoting agent of the present invention is excellent in the TLR-7 expression promoting effect, but since TLR-7 is a receptor that recognizes viruses, viral infections (for example, Lassa fever virus, norovirus, rubella) Virus, poliovirus, Ebola virus, yellow fever virus, hepatitis C virus, etc.). Therefore, the TLR-7 expression promoter of the present invention can be used for prevention or treatment of viral infections.
本発明のＴＬＲ−７の発現促進剤は、上述のとおり、ウイルスワクチン増強剤と同様のものを用いることができるが、他方で、ウイルス感染症の予防又は治療に適しているため、その摂取又は投与は、本発明のＴＬＲ−７の発現促進剤を単独で日常的に摂取又は投与を行うことが好ましい。より具体的には、例えば、本発明のＴＬＲ−７の発現促進剤が液体状である場合、ウイルス感染症の予防又は治療に適していることから、単独で１日当たり５０〜１００ｍｌの量を摂取又は投与することが好ましく、単独で１日当たり１００〜８００ｍｌの量を摂取又は投与することがより好ましく、単独で１日当たり３００〜６００ｍｌの量を摂取又は投与することが更に好ましい。 As described above, the TLR-7 expression promoter of the present invention can be the same as the virus vaccine enhancer, but on the other hand, since it is suitable for the prevention or treatment of viral infections, its intake or The administration is preferably performed by daily intake or administration of the TLR-7 expression promoter of the present invention alone. More specifically, for example, when the TLR-7 expression promoting agent of the present invention is in a liquid form, it is suitable for the prevention or treatment of viral infections, and thus ingests 50 to 100 ml per day alone. Or it is preferable to administer, it is more preferable to ingest or administer an amount of 100 to 800 ml per day, and it is more preferable to ingest or administer an amount of 300 to 600 ml per day alone.
＜べにふうきのマウスに対する投与試験＞
１１週齢のＢＡＬＢ／ｃ雌マウスを１週間の予備飼育し、その後、平均体重が等しくなるように、実施例１に係る「ベにふうき群」、比較例１に係る「やぶきた群」、対照例１に係る「Ｃｏｎｔ．ＰＢＳ群」、対照例２に係る「Ｃｏｎｔ．ｖａｃｃｉｎｅ群」の４群（それぞれ、ｎ＝１０）に分けた。
<Administration test for Benifuki mice>
11 weeks old BALB / c female mice were preliminarily raised for 1 week, and thereafter, the average body weight was equal so that the “Benifuuki group” according to Example 1 and the “Yabukita group” according to Comparative Example 1, It was divided into 4 groups (n = 10, respectively) of “Cont. PBS group” according to Control Example 1 and “Cont.
実施例１に係る「ベにふうき群」は、インフルエンザワクチンを接種させ、かつ、１質量％べにふうき含有食を摂食させるマウスの群である。 The “Benifuuki group” according to Example 1 is a group of mice that are inoculated with an influenza vaccine and fed a 1% by mass of a Buufuuki-containing food.
比較例１に係る「やぶきた群」は、インフルエンザワクチンを接種させ、かつ、１質量％やぶきた含有食を摂食させるマウスの群である。 The “Yabukita group” according to Comparative Example 1 is a group of mice that are inoculated with an influenza vaccine and fed a 1% by mass Yabukita-containing food.
対照例１に係る「Ｃｏｎｔ．ＰＢＳ群」は、インフルエンザワクチンの代わりにＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）を接種させ、かつ、普通食（ＡＩＮ−９３Ｇ食）を摂食させるマウスの群である。 “Cont. PBS group” according to Control Example 1 is a group of mice inoculated with PBS (phosphate buffered saline) instead of influenza vaccine and fed with a normal diet (AIN-93G diet). .
対照例２に係る「Ｃｏｎｔ．ｖａｃｃｉｎｅ群」は、インフルエンザワクチンを接種させ、かつ、普通食（ＡＩＮ−９３Ｇ食）を摂食させるマウスの群である。 The “Cont. Vaccine group” according to Control Example 2 is a group of mice that are inoculated with influenza vaccine and fed a normal diet (AIN-93G diet).
上記４群に分けると同時に、それぞれの群に対して、普通食、やぶきた食、又はべにふうき食の摂食を開始した。なお、摂食は、それぞれの群のマウスの屠殺が行われる１２時間前まで行い、４ｇ／日の量で行った。摂食開始から２週間後に、インフルエンザワクチンヘマグルチニン（ＨＡ）相当１ｍｇ／２００ｍＬ ＰＢＳ、又はＰＢＳをそれぞれ２００ｍＬ皮下注射し、初回免疫を行った。 At the same time as dividing into the above four groups, each group started to eat a normal meal, a fried meal, or a beef meal. In addition, the feeding was performed up to 12 hours before the mice of each group were sacrificed, and the amount was 4 g / day. Two weeks after the start of feeding, 1 mg / 200 mL PBS equivalent to influenza vaccine hemagglutinin (HA) or 200 mL each of PBS was subcutaneously injected to perform initial immunization.
初回免疫の２週間後に、追加免疫を行った。追加免疫の９日後にマウスの屠殺を行い、血清、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ；ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒ ｌａｖａｇｅ ｆｌｕｉｄ）を回収した。また、屠殺後のマウスから、脾臓、肺、パイエル板を摘出した。 A booster immunization was performed 2 weeks after the first immunization. Nine days after booster immunization, mice were sacrificed, and serum and bronchoalveolar lavage fluid (BALF) were collected. In addition, the spleen, lungs, and Peyer's patches were removed from the sacrificed mice.
＜ＩｇＡ及びＩｇＧについての評価＞
ＥＬＩＳＡ法により、上記回収後の血清、気管支肺胞洗浄液のＩｇＡ抗体量及びＩｇＧ抗体量並びにＩｇＡ抗体価及びＩｇＧ抗体価を測定し、体液性免疫及び細胞性免疫に関与する細胞の数及び割合をフローサイトメーターにて測定した。その結果を図１〜図４に示す。図１中、（ａ）は、血清中のＩｇＧ抗体量を示し、（ｂ）は、血清中のＩｇＡ抗体量を示す。また、図２中、（ａ）は、血清中のＩｇＧ抗体価を示し、（ｂ）は、血清中のＩｇＡ抗体価を示す。図３中、（ａ）は、気管支肺胞洗浄液中のＩｇＧ抗体量を示し、（ｂ）は、気管支肺胞洗浄液中のＩｇＡ抗体量を示す。また、図４中、（ａ）は気管支肺胞洗浄液中のＩｇＧ抗体価を示し、（ｂ）は、気管支肺胞洗浄液中のＩｇＡ抗体価を示す。
<Evaluation for IgA and IgG>
By the ELISA method, the collected serum, the IgA antibody amount and the IgG antibody amount of the bronchoalveolar lavage fluid, the IgA antibody titer and the IgG antibody titer are measured, and the number and ratio of cells involved in humoral immunity and cellular immunity are determined. Measured with a flow cytometer. The results are shown in FIGS. In FIG. 1, (a) shows the amount of IgG antibody in the serum, and (b) shows the amount of IgA antibody in the serum. In FIG. 2, (a) shows the IgG antibody titer in the serum, and (b) shows the IgA antibody titer in the serum. In FIG. 3, (a) shows the amount of IgG antibody in bronchoalveolar lavage fluid, and (b) shows the amount of IgA antibody in bronchoalveolar lavage fluid. In FIG. 4, (a) shows the IgG antibody titer in bronchoalveolar lavage fluid, and (b) shows the IgA antibody titer in bronchoalveolar lavage fluid.
また、摘出後のそれぞれの群の肺、パイエル板中のＩｇＡ産生細胞の数を、抗ＩｇＡ抗体による染色を行いフローサイトメーターにより測定した。その結果を図５に示す。図５中、（ａ）は、肺中のＩｇＡ産生細胞の数を示し、（ｂ）は、パイエル板中のＩｇＡ産生細胞の数を示す。 Further, the number of IgA-producing cells in each group of lungs and Peyer's patches after excision was stained with an anti-IgA antibody and measured with a flow cytometer. The result is shown in FIG. In FIG. 5, (a) shows the number of IgA producing cells in the lung, and (b) shows the number of IgA producing cells in Peyer's patch.
図１、２に示すように、血清中のＩｇＧ抗体量及びＩｇＡ抗体量は、対照例２、比較例１、実施例１のいずれにおいても、差は見られなかった。 As shown in FIGS. 1 and 2, there was no difference in the amount of IgG antibody and IgA antibody in serum in any of Control Example 2, Comparative Example 1, and Example 1.
図３（ａ）に示すように、気管支肺胞洗浄液中の実施例１のＩｇＧの抗体量は対照例２の抗体量と比較して、有意に減少していた。また、図４（ａ）に示すように、実施例１のＩｇＧ抗体価は、実施例１、比較例１、対照例２の間で差は見られなかった。他方、図３（ｂ）に示すように、実施例１のＩｇＡ抗体量は、増加傾向にあり、図４（ｂ）に示すように、実施例１においてはＩｇＡの割合が有意に増加しており、実施例１においては、対照例２、比較例１と比較して、抗原（ＨＡ）に特異的なＩｇＡが全体的に著しく増加していることがわかった。 As shown in FIG. 3 (a), the antibody amount of the IgG of Example 1 in the bronchoalveolar lavage fluid was significantly reduced as compared with the antibody amount of Control Example 2. Moreover, as shown to Fig.4 (a), the IgG antibody titer of Example 1 showed no difference among Example 1, the comparative example 1, and the control example 2. FIG. On the other hand, as shown in FIG. 3 (b), the amount of IgA antibody in Example 1 tends to increase. As shown in FIG. 4 (b), the proportion of IgA significantly increased in Example 1. In Example 1, compared with Control Example 2 and Comparative Example 1, it was found that IgA specific to the antigen (HA) was significantly increased as a whole.
図５（ａ）に示すように、肺中のＩｇＡ産生細胞の数は、実施例１の方が比較例１より有意に多かった。また、図５（ｂ）に示すように、パイエル板中のＩｇＡ産生細胞の数は、実施例１と対照例２の間で有意な差が見られた。 As shown in FIG. 5A, the number of IgA-producing cells in the lung was significantly higher in Example 1 than in Comparative Example 1. Moreover, as shown in FIG.5 (b), the significant difference was seen between Example 1 and the control example 2 in the number of the IgA production cells in a Peyer's board.
以上に示したとおり、実施例１に係る「べにふうき群」は、比較例１に係る「やぶきた群」より、特に、気管支肺胞洗浄液中において、インフルエンザワクチンヘマグルチニン（ＨＡ）に対するＩｇＡの抗体価が増加した。ウイルスに感染する際は、気道から感染するため、気管支において、ＨＡに対するＩｇＡの抗体価が増えたことは、ウイルスワクチンの効果が増強したことを意味する。すなわち、これらのことから、べにふうきは、やぶきたと比較して、ウイルス抗原に特異的なＩｇＡの産生を促進し、優れたウイルスワクチンの増強効果を有することわかった。 As described above, the “Benifuuki group” according to Example 1 has an antibody titer of IgA against influenza vaccine hemagglutinin (HA), particularly in the bronchoalveolar lavage fluid, from the “Yabukita group” according to Comparative Example 1. Increased. When the virus is infected, since the infection is from the respiratory tract, an increase in the antibody titer of IgA against HA in the bronchi means that the effect of the virus vaccine is enhanced. That is, from these, it was found that Benifukuki promotes the production of IgA specific to the virus antigen and has an excellent effect of enhancing the virus vaccine, compared to Yabukita.
なお、図３（ａ）に示すように、実施例１の気管支肺胞洗浄液中のＩｇＧ抗体量は、対照例２と比較して有意に減少したにもかかわらず、図４（ａ）に示すように、気管支肺胞洗浄液中のＩｇＧ抗体価は対照例２と差がなかった。このことは、実施例１の気管支肺胞洗浄液中ではＩｇＧの力価が増えていることを示し、べにふうきは、感染後の免疫向上にも有効であることがわかった。 In addition, as shown to Fig.3 (a), although the amount of IgG antibodies in the bronchoalveolar lavage fluid of Example 1 decreased significantly compared with the control example 2, it shows to Fig.4 (a). Thus, the IgG antibody titer in the bronchoalveolar lavage fluid was not different from Control Example 2. This indicates that the IgG titer is increased in the bronchoalveolar lavage fluid of Example 1, and it was found that Benifukuki is also effective for improving immunity after infection.
＜ＴＬＲ−７の発現量の評価＞
摘出後のそれぞれの群の脾臓中及び肺中のＴＬＲ−７の発現量の評価を行った。ＴＬＲ−７の発現量は、フローサイトメーターにより測定した。その結果を、図６に示す。図６中、（ａ）は、脾臓のリンパ球についてのＴＬＲ−７の発現量を示したグラフである。図６中、（ｂ）は、脾臓のリンパ球のうち、ＣＤ１１ｃ＋細胞についてのＴＬＲ−７の発現量を示したグラフである。図６中、（ｃ）は、肺のリンパ球についてのＴＬＲ−７の発現量を示したグラフである。図６中、（ｄ）は、肺のリンパ球のうち、ＣＤ１１ｃ＋細胞についてのＴＬＲ−７の発現量を示したグラフである。
<Evaluation of TLR-7 expression level>
The expression level of TLR-7 in the spleen and lung of each group after extraction was evaluated. The expression level of TLR-7 was measured with a flow cytometer. The result is shown in FIG. In FIG. 6, (a) is a graph showing the expression level of TLR-7 for splenic lymphocytes. In FIG. 6, (b) is a graph showing the expression level of TLR-7 for CD11c + cells among splenic lymphocytes. In FIG. 6, (c) is a graph showing the expression level of TLR-7 for lung lymphocytes. In FIG. 6, (d) is a graph showing the expression level of TLR-7 for CD11c + cells among lymphocytes in the lung.
図６（ａ）より、脾臓のリンパ球において、実施例１は、対照例２より有意にＴＬＲ−７の発現が促進したことが確認された。他方、比較例１は、脾臓のリンパ球において、ＴＬＲ−７の発現量が、対照例２に対して有意差がなかった。また、図６の（ｃ）より、肺中のリンパ球において、実施例１は、比較例１及び対照例２より、有意にＴＬＲ−７の発現が促進したことが確認された。 From FIG. 6 (a), it was confirmed that in the spleen lymphocytes, the expression of TLR-7 was significantly promoted in Example 1 than in Control Example 2. On the other hand, in Comparative Example 1, the expression level of TLR-7 was not significantly different from Control Example 2 in splenic lymphocytes. Further, from FIG. 6 (c), it was confirmed that in the lymphocytes in the lung, the expression of TLR-7 was significantly promoted in Example 1 than in Comparative Example 1 and Control Example 2.
図６（ｂ）より、脾臓のリンパ球のうち、ＣＤ１１ｃ＋細胞において、実施例１は、対照例２及び比較例１より有意にＴＬＲ−７の発現が促進したことが確認された。また、比較例１は、ＴＬＲ−７の発現量が、対照例２との有意差がなかった。また、図６の（ｄ）より、肺中のリンパ球のうち、ＣＤ１１ｃ＋細胞において、実施例１は、対照例１より、有意にＴＬＲ−７の発現が促進したことが確認された。他方、比較例１は、肺中のリンパ球のうち、ＣＤ１１ｃ＋細胞において、ＴＬＲ−７の発現量が対照例１に対して有意差がなかった。 From FIG. 6 (b), it was confirmed that among the splenic lymphocytes, the expression of TLR-7 was significantly promoted in Example 11 compared to Control Example 2 and Comparative Example 1 in CD11c + cells. In Comparative Example 1, the expression level of TLR-7 was not significantly different from Control Example 2. Further, from FIG. 6 (d), it was confirmed that in the lymphocytes in the lung, the expression of TLR-7 was significantly promoted in Example 11 compared to Control Example 1 in CD11c + cells. On the other hand, in Comparative Example 1, the expression level of TLR-7 was not significantly different from Control Example 1 in CD11c + cells among lymphocytes in the lung.
この結果より、「べにふうき」は、「やぶきた」より、ＣＤ１１ｃ＋細胞である樹状細胞において、ＴＬＲ−７の発現量を促進させることがわかった。ＴＬＲ−７は、ウイルスに対するセンサーの役割を担う受容体である。 From this result, it was found that “Benifuuki” promotes the expression level of TLR-7 in dendritic cells, which are CD11c + cells, than “Yabukita”. TLR-7 is a receptor that acts as a sensor for viruses.
以上で述べたことから、ＣＤ１１ｃ＋細胞である樹状細胞中のＴＬＲ−７の発現量が増加することで、ウイルス抗原に特異的なＩｇＡを産生するＢ細胞が活性化し、ウイルスワクチンの増強が促進されるものと推測される。 From the above, the increase in the expression level of TLR-7 in dendritic cells, which are CD11c + cells, activates B cells that produce IgA specific for viral antigens, and enhances viral vaccines. Presumed to be promoted.
「べにふうき」と「やぶきた」は、いずれもカテキン類を含むが、「べにふうき」は、「やぶきた」より、メチル化カテキンの量が多い。そのため、上記の「べにふうき」のウイルスワクチンの増強効果、ウイルス抗原に特異的なＩｇＡの産生の促進効果、及び、ＴＬＲ−７の発現促進効果は、メチル化カテキンによるものであると推測される。 “Benifuuki” and “Yabukita” both contain catechins, but “Benifuuki” has more methylated catechins than “Yabukita”. Therefore, the effect of enhancing the above-mentioned “Benifuki” virus vaccine, the effect of promoting the production of IgA specific to the virus antigen, and the effect of promoting the expression of TLR-7 are presumed to be due to methylated catechins.
＜ＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞割合の評価＞ <Evaluation of CD3 + CD8 + cell ratio>
摘出後のそれぞれの群の脾臓中のＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞割合の評価を行った。その結果を、図７に示す。ＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞割合は、フローサイトメーターにより測定した。 The proportion of CD3 + CD8 + cells in the spleen of each group after excision was evaluated. The result is shown in FIG. The CD3 + CD8 + cell ratio was measured with a flow cytometer.
図７に示すように、実施例１は、対照例１と比較して、有意に脾臓中のＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞割合が増加した。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞であり、ＣＤ８＋Ｔ細胞の増加は、ウイルス感染症に対する免疫が向上したことを示す。これらのことから、「べにふうき」は、ＣＤ８＋Ｔ細胞を増加させることで、ウイルス感染症に対する免疫を向上させることがわかった。
As shown in FIG. 7, in Example 1, the proportion of CD3 + CD8 + cells in the spleen was significantly increased compared to Control Example 1. CD8 + T cells are cytotoxic T cells and an increase in CD8 + T cells indicates improved immunity against viral infections. From these facts, it was found that “Benifuuki” improves immunity against viral infections by increasing CD8 + T cells.
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