JP2016083370A - 単核細胞の採集のための方法とシステム - Google Patents

Abstract

【課題】循環光療法のための残留血漿量が低減された単核細胞を採集するシステムと方法を提供する。【解決手段】赤血球、血漿と血小板を含む生物学的流体から単核細胞を分離し、血漿と残留赤血球と血小板とを含む懸濁液中の標的とする数の単核細胞を採集し、分離した単核細胞を濃縮し、濃縮された単核細胞内に残る残留血漿が予め決定された体積に到達するまで濃縮した単核細胞から血漿を除去し、そして、濃縮された単核細胞に晶質液を添加する。関連する器具と得られる単核細胞生成物も開示される。【選択図】なし

Description

本開示は、一般的には、単核細胞を採集するためのシステムと方法に関する。より特定的には、本開示は、循環光療法の間、血漿の干渉を低減するために、残留血漿量が低減された単核細胞を採集するためのシステムと方法に関する。

全血は、赤血球、白血球、そして液体成分の血漿中に懸濁する血小板のような様々な細胞成分によって構成される。全血は、構成要素（細胞または液体）に分離され得、所望の成分は分離されて、特定の成分の必要に応じて患者に投与され得る。例えば、単核細胞（ＭＮＣ）は、主にリンパ球と単球であり、患者の全血から取り除かれ、採集され、一般に体外光循環法、すなわちＥＣＰと呼ばれる手順において、光線力学的療法を受けさせられ得る。ＥＣＰでは、ＭＮＣは感光剤で処理され、その後、所望の効果を達成するよう特定の波長の光の照射を受け、そして、例えば、細胞中の免疫原性を除去し、選択された細胞を不活性化し、または殺し、ウィルスやバクテリアを不活性化し、または、所望の免疫反応を活性化するために、様々な血液疾患の治療のために患者に戻される。

より特定的には、分離されたＭＮＣは、全血から分離され得、８−メトキシソラレン（分離されたＭＮＣに添加された、または、患者に先に投与された８−ＭＯＰ）のような光活性化剤によって化学的に処理され得、紫外光に曝され得、そして患者に戻され得る。活性化された８−メトキシソラレンは、曝されたＭＮＣ中のＤＮＡと架橋し、最終的には、ＭＮＣのアポトーシスに行き着く。光化学的に損傷されたＭＮＣは、Ｔ細胞形成に対する細胞障害効果を誘発するために患者に戻され、抗腫瘍作用を起こす。

一般的には、ＭＮＣは全血を遠心分離装置に導入することによって採集される。全血は、様々な成分の大きさと密度に基づいて構成成分に分離され、標的成分が採集されると、標的でない成分は患者に戻されるか廃棄される。したがって典型的な血液処理システムは、血液を回転させ汲み出すハードウェア（駆動システム、ポンプ、弁アクチュエータ、プログラム可能な制御等）を含む、耐久性の、再使用可能な遠心分離アセンブリと、ハードウェアと協働的に搭載された使い捨ての、密封され殺菌された流体処理アセンブリとを含む。採集処理の間、遠心分離アセンブリは、流体処理アセンブリ内の使い捨ての遠心分離室を回転させ、それによって血液が構成成分に分離される。

光療法の実行における困難は、特に懸濁液が光に対して実質的に透明でない物質を含んで光活性化のための光エネルギーを減衰させる場合に、懸濁液中の光活性化物質に適切な量の光エネルギーを送達することである。特に、循環光療法のためのＭＮＣの収集の間、ＭＮＣ生成物内に存在する他の物質は、ＵＶ−Ａの意図された線量を標的ＭＮＣへの送達に干渉する。しかしながら、高いビリルビン値やミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）やシクロスポリンのような薬のような、高脂血症を引き起こす特に特定の疾患状態や薬物療法において、血漿タンパク質と脂肪もＵＶ−Ａ光吸収に寄与し得る。

本開示としては、循環光療法の間、血漿の干渉を低減するために、残留血漿量が低減された単核細胞を採集するためのシステムと方法が提供される。

１つの局面においては、本開示は、分離装置を用いて単核細胞を得て循環光療法のために単核細胞を調製する方法に関する。この方法は、赤血球、血漿と血小板を含む生物学的流体から単核細胞を分離し、血漿と赤血球と血小板とを含む懸濁液中の標的とする数の単核細胞を採集し、分離した単核細胞を濃縮し、濃縮された単核細胞内に残る残留血漿の量が予め決定された体積に到達するまで濃縮した単核細胞から血漿を除去し、そして、濃縮された単核細胞に晶質液を添加することを含む。

本方法の別の局面においては、濃縮された単核細胞内に残る残留血漿の体積は、５０ｍＬ以下であり得る。

別の局面では、濃縮された単核細胞は、晶質液の添加後、２％以下のヘマトクリットを有し得る。

本方法のさらに別の局面においては、晶質液は、血漿の体積％が２５％以下になるように濃縮された単核細胞に添加される。

関連する局面においては、晶質液は懸濁液に１５０ｍＬから２００ｍＬの量、添加され得る。

本方法の別の局面においては、分離装置は、晶質液または血漿で洗浄され得る。

別の局面においては、本開示は、単核細胞を採集するためにシステムに関する。システムは、分離装置と生物学的流体の処理に対する指示を含むプログラム可能なマイクロプロセッサで駆動される制御部とを有する、再使用可能なハードウェア器具を含む。システムはまた、器具に接続された使い捨て可能な処理回路を含み、回路は生物学的流体を受容するための処理室と単核細胞を採集するための１以上の容器とを含む。制御部は、赤血球、血漿そして血小板を含む生物学的流体から単核細胞を分離し、単核細胞を濃縮し、濃縮された単核細胞内に残る血漿残量が予め定められた体積に到達するまで血漿を除去し、濃縮された単核細胞と晶質液を組み合わせるようにプログラムされる。

別の局面においては、本開示は、単核細胞、血漿、晶質液、そして残留赤血球と血小板とを含み、全体積で２００ｍＬであり、ヘマトクリットが２％以下である、単核細胞生成物に関する。関連する局面においては、生成物は、２５体積％以下の血漿、および／または、５０ｍＬ以下の体積の残留血漿を有し得る。

本開示に従って、単核細胞の採集と他の処理工程において用いられ得る自動化循環光療法装置の斜視図である。 単核細胞を採集するための典型的な使い捨て処理セットが装置に搭載された、図３に示す装置の前面パネルの拡大斜視図である。 図２の使い捨て処理セットを示す模式図である。 主に血漿または生理食塩水中に懸濁されたＭＮＣ生成物（２００ｍＬ，２％ Ｈｃｔ）のＥＣＰ処理（３０Ｊ／ｃｍ^２）後の７２時間の培養の間のリンパ球アポトーシスレベルを示すグラフである。 ０〜０．２Ｊ／ｃｍ^２の範囲の既知のＵＶ−Ａ光量によって処理された生理食塩水中の精製されたＭＮＣから生成された標準曲線を示すグラフである。

本開示に従ったシステムと方法のより詳細な説明が以下に述べられる。以下の特定の装置と方法の記載は例示を意図しており、すべての可能性のある変形又は応用を網羅しているものではないと理解されるべきである。従って、本開示の範囲の制限を意図せず、当業者が想到する変形または実施形態を包含すると理解されるべきである。

図１と図２は、ここで記載されるように、単核細胞の分離と採集に有用な、代表的な分離システム１０を示す。システム１０は耐久性の分離要素１２とそこに搭載される使い捨て処理キット１４を含む。１つの実施形態においては、分離器１２に用いられる分離の原理は遠心分離に基づいているが、異なる分離の原理に基づく自動化分離器も使用され得る。

循環光療法を実施するために使用される時、ここに参照として組み込まれるＵＳ２０１３／０１９７４１９に示され説明されているように、分離要素とは別に収容されている照射要素が分離システム１０と共に使用される。別個に収容され、独立した装置ではあるが、分離装置と照射装置は互いに隣接して配置されることが好ましい。しかしながら、ここに説明される方法は分離要素と照射要素を一体的に有する装置とともに用いられ得ることもよいであろう。

ここに記載されるシステムと方法に従えば、患者は血液処理セット、すなわち、流体回路１４に接続される。流体回路１４は、分離要素１２と照射要素との間に無菌の閉鎖流路を備える。ここに記載されるシステムは、任意で、好ましくは分離要素１２内に収容された洗浄要素も含む。好ましくは、分離要素１２と洗浄要素は１つであり、同一である。

図１を参照して、全血は患者から引かれて分離要素１２に導入され、全血は標的の細胞個体群を提供するように分離される。それは、本開示の文脈では単核細胞であり得る。赤血球や血小板のような、全血から分離された他の要素は、患者に戻されるか、血液処理セットの予め取り付けられた容器に採集される。分離された細胞個体群、例えば単核細胞は、その後、以下により詳細に説明する方法に従って処理するために調製される。

単核細胞の採集（そして洗浄）に有用で、図１の分離要素１２を備える器具は、イリノイ州レイクズーリックのフェンウォール、インコーポレイテッドによって製造販売されているＡｍｉｃｕｓ（登録商標）分離器を含む。Ａｍｉｃｕｓ（登録商標）のような装置を用いた単核細胞の採集は、ここに全体が組み込まれる米国特許第６，０２７，６５７号により詳細に記載されている。流体回路（図３）は、単核細胞（ＭＮＣ）を全血から採取するのに適した分離室を規定する血液処理容器１６を含む。

図２に示すように、使い捨て処理セットまたは（容器１６を含む）流体回路１４は、分離要素１２の前面パネル上に搭載されている。処理セット（流体回路１４）は、分離要素１２の蠕動ポンプと接続するための管ループを有する複数の処理流体流通カセット２３Ｌ，２３Ｍ，２３Ｒを含む。流体回路１４はまた、より詳細には図３に示されるように、流体と血液と血液成分の処理と採集のために患者と流体連通を確立するために、管と予め接続された容器のネットワークを含む。

図３に示すように、使い捨て処理セット１４は、抗凝固剤を供給するための容器６０、単核細胞の処理と洗浄の手順の１以上の工程中の廃棄物を収集するための廃棄容器６２、生理食塩水や他の洗浄または再懸濁媒体のような晶質液を保持する容器６４、血漿を採集する容器６６、単核細胞を採集する容器６８、そして、任意で、光活性化剤を保持するための容器６９を含み得る。

容器６８は照明容器としても用いられ得、好ましくは使い捨てセット１４に予め取り付けられている。代わりに、容器６８は、無菌ドッキング等の既知の無菌接続技術によって、セット１４に取り付けられ得る。

図３を参照して、流体回路は入口ライン７２、抗凝固剤を容器６０から輸送するための抗凝固剤（ＡＣ）ライン７４、赤血球を容器１４の室１２から容器６７に運ぶためのＲＢＣライン７６、ＰＰＰを容器６６に運ぶための貧血小板血漿（ＰＰＰ）ライン７８、そして、単核細胞を分離室１６と採集／照明容器６８へ、そして分離室１６と採集／照明容器６８から運ぶためのライン８０を含む。

血液処理セットはまた、患者の循環系にアクセスするための１以上の静脈穿刺針を含む。図３に示すように、流体回路１４は入口針７０と戻り針８２を含む。別の実施形態においては、単一の針が入口と出口の針として用いられ得る。

流体回路１４を通る流体流通は、好ましくは、上述の米国特許第６，０２７，６５７に詳細が記載されているように、分離要素１２と流体回路１４の弁、ポンプ、重量計と検知部と協働して、マイクロプロセッサに基づく制御部によって駆動され、制御され、調整される。

図示された流体回路はさらに、処理要素（すなわち、照射装置）との結合のために適用される。単核細胞の照射のための器具は既知であり、カリフォルニア州コンコルドのシーラス コーポレイションから入手可能である。適切な照射装置の一例は、米国特許第７，４３３，０３０号に記載され、その内容はここに全体が参照として組み込まれる。米国特許第７，４３３，０３０号に示され説明されているように、照射装置は、処理の間、１以上の容器を受容するために、好ましくはトレイまたは他のホルダを含む。ここで説明した方法とシステムとともに使用する、Ｍａｃｏｐｈａｒｍａおよび／またはＶｉｌｂｅｒ Ｌｏｕｍｅｔから利用可能な装置を含む他の照射装置も適切であり得る。

分離室は処理容器１６の壁によって規定される。操作においては、分離装置１２が、処理容器１６内に遠心場を生みだしながら処理容器１６を軸周りに回転させる。処理容器１６を引き起こすための機構の詳細は、ここに参照として組み込まれる、「Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ ｗｉｔｈ Ｓｅｐａｒａｂｌｅ Ｂｏｗｌ ａｎｄ Ｓｐｏｏｌ Ｅｌｅｍｅｎｔｓ Ｐｒｏｖｉｄｉｎｇ Ａｃｃｅｓｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｃｈａｍｂｅｒ」と題する米国特許第５，３６０，５４２号に開示されている。

１つの実施形態においては、アフェレーシス装置は、１以上の選択可能なプロトコルを用いて予めプログラムされたプログラム可能な制御部を含み得る。使用者／操作者は、所望の結果または目的を達成するために、特定の処理プロトコルを選択し得る。予めプログラムされた選択可能なプロトコルは、１以上の固定された、および／または、調整可能なパラメータに基づき得る。特定の処理手順の間、予め定められた制御部は、図３に図示された処理セット１４のような、処理セットの様々な開放可能な弁と管部分を通過する血液、血液成分および／または溶液を動かすための１以上のポンプを動作させるのと同様、血液を様々な成分に分離するために、遠心分離器とそれに関連づけられた処理室を動作し得る。これは、例えば、分離室１６における全血からの単核成分の遠心分離の開始と実行、ＭＮＣ濃縮液を得るために単核細胞からの血漿の除去（すなわち、除去された血漿を貯蔵または廃棄バッグにポンプで送ること）、処理後に管内に滞留または残留する追加のＭＮＣを採集するための管部分のパージまたは洗浄、濃縮されたＭＮＣと晶質液の組み合わせを含む。予めプログラムされた自動化アフェレーシス装置によって実行される種々の処理工程は、別々に、連続して、同時に、またはこれらのいかなる組み合わせによっても起こり得る。

本開示に従えば、自動化アフェレーシス装置は、標的サイクル体積に到達するまでＭＮＣが連続して室１６に採集されるバッチ処理でＭＮＣの採集を実行するために使用され得る。ＭＮＣが室１６の外に移送される時、ＭＮＣ採取の開始と終了（すなわち、生成物容器に導く弁をいつ開け閉めするか）を決定するために管ライン内の細胞の存在を検知する光学センサを通過する。ＭＮＣ採取が完了した後、ライン中に残った細胞は「血漿洗浄」として知られる、予め定められた体積の血漿を用いて生成物容器に流される。血漿の体積は、血漿洗浄を晶質液洗浄で低減、除去または置換することによってさらに低減される。

ＭＮＣ生成物（ＭＮＣ、ＲＢＣ、血漿中の血小板を含む）の体積は予め定められた低い値で固定される。もし必要があれば、処理されるＭＮＣの所望の産出を達成するために、ＷＢ処理の追加のサイクルとＭＮＣ採取が実行される。予め定められた残留血漿体積に到達するために、血漿の大半はＭＮＣ濃縮液から除去され、ＭＮＣ濃縮液はその後、光療法に備えるＭＮＣ生成物を得るために晶質液とともに再構築される。より特定的には、ＵＶ−Ａ照射のために所望のヘマトクリット（典型的には１５０〜２００ｍＬ程度の生理食塩水が２％以下のヘマトクリットを達成するために添加される）を得るために十分な晶質液（好ましくは生理食塩水）が濃縮されたＭＮＣに添加される。全生成物中の血漿成分は、典型的には全体積の２５％以下であり、ＭＮＣに送達されるＵＶ−Ａ光量に対する増加した血漿タンパク質または脂肪レベルの影響が低減される。

ＥＣＰ中の血漿の干渉の低減における本方法の効果を確認するために実験が行われた。これは、ＥＣＰ処理された血漿中に懸濁しているＭＮＣ生成物と、ＥＣＰ処理された晶質液（すなわち、生理食塩水）中に懸濁しているＭＮＣ生成物とのＵＶ−Ａ照射後の７２時間後のリンパ球アポトーシスレベルを比較することによってなされた。

ＭＮＣ生成物は健康な提供者から以下の採集設定に従って採集された：１サイクルう、ＷＢ／サイクル＝２０００ｍＬ、血漿洗浄＝１０ｍＬ、血漿貯蔵流体＝１５０ｍＬまたは０ｍＬ。ＭＮＣ生成物は、研究対象（＋８ＭＯＰ、ＵＶなし）として２０ｍＬの試料を提供するために約２２０ｍＬの体積中に懸濁された。１５０ｍＬの血漿貯蔵流体とともに採集されたＭＮＣ生成物については、約３０ｍＬの生理食塩水が採集後の生成物に無菌シリンジ（血漿試験群，ｎ＝６）を用いて添加された。０ｍＬの血漿貯蔵流体とともに採集されたＭＮＣ生成物については、約１９０ｍＬの生理食塩水が採集後の生成物に無菌シリンジ（生理食塩水試験群，ｎ＝６）を用いて添加された。

最終濃度２００ｎｇ／ｍＬのそれぞれのＭＮＣ生成物に８−ＭＯＰが添加され、生成物（２００ｍＬ，〜２％Ｈｃｔ）が３０Ｊ／ｃｍ^２ＵＶ−Ａ光線（３２０〜４００ｎｍ）に、１３〜２０Ｊ／ｃｍ^２の強度で照射された。照射後、ＭＮＣはフィコール・パック勾配を用いて精製され、ＲＰＭＩ１６４０媒体を用いて二度洗浄され、２ｍＭのグルタミンと１０％のヒト血清を追加したＲＯＭＩ１６４０媒体に１〜２×１０^６／ｍＬで再懸濁された。

細胞は５％ＣＯ_２を含む加湿された室内で３７℃で７２時間まで培養された。２４，４８，７２時間後に、試料はアポトーシスについてアッセイされた。リンパ球アポトーシスは、リンパ球の前方／側方散乱ゲートのＣＤ４５＋／アネキシン−Ｖ陽性細胞のパーセンテージとして測定された。

結果は図４と図５に示される。培養の間、本試験の血漿試験群内の処理されたリンパ球は、ＭＮＣに０．５〜１．０Ｊ／ｃｍ^２が送達されたと同様のアポトーシス反応を示したが、生理食塩水試験群では１．５〜２．０Ｊ／ｃｍ^２と同様であった。従って、ＭＮＣ中の主に生理食塩水は血漿に対して少なくとも２倍大きいＵＶ−Ａ光量をＭＮＣに送達することになると結論された。

以上を制限することなく、ここに記載される主題は、１以上の方法、システムおよび／または生成物に見出される。例えば、本主題の第１の局面において、ＭＮＣを得る方法が述べられる。本方法は、赤血球、血漿と血小板を含む生物学的流体から単核細胞を分離し、血漿と残留赤血球と血小板とを含む懸濁液中の標的とする数の単核細胞を採集し、分離した単核細胞を濃縮し、濃縮された単核細胞内に残る残留血漿の量が予め決定された体積に到達するまで濃縮した単核細胞から血漿を除去し、そして、濃縮された単核細胞に晶質液を添加することを含む。

本方法の別の局面においては、濃縮された単核細胞内に残る残留血漿の体積は、５０ｍＬ以下であり得る。

別の局面では、濃縮された単核細胞は、晶質液の添加後、２％以下のヘマトクリットを有し得る。

本方法のさらに別の局面においては、晶質液は、血漿の体積％が２５％以下になるように濃縮された単核細胞に添加される。

関連する局面においては、晶質液は懸濁液に１５０ｍＬから２００ｍＬの量、添加され得る。

本方法の別の局面においては、分離装置は、晶質液または血漿で洗浄され得る。

別の局面においては、本開示は、単核細胞を採集するためにシステムに関する。システムは、分離装置と生物学的流体の処理に対する指示を含むプログラム可能なマイクロプロセッサで駆動される制御部とを有する、再使用可能なハードウェア器具を含む。システムはまた、器具に接続された使い捨て可能な処理回路を含み、回路は生物学的流体を受容するための処理室と単核細胞を採集するための１以上の容器とを含む。制御部は、赤血球、血漿そして血小板を含む生物学的流体から単核細胞を分離し、単核細胞を濃縮し、濃縮された単核細胞内に残る血漿残量が予め定められた体積に到達するまで血漿を除去し、濃縮された単核細胞と晶質液を組み合わせるようにプログラムされる。

別の局面においては、本開示は、単核細胞、血漿、晶質液、そして残留赤血球と血小板とを含み、全体積で２００ｍＬであり、ヘマトクリットが２％以下である、単核細胞生成物に関する。関連する局面においては、生成物は、２５体積％以下の血漿、および／または、５０ｍＬ以下の体積の残留血漿を有し得る。

Claims (22)

1. ａ）赤血球、血漿と血小板を含む生物学的流体から単核細胞を分離すること、
   ｂ）血漿と残留赤血球と血小板とを含む懸濁液中の標的とする数の単核細胞を採集すること、
   ｃ）分離した単核細胞を濃縮すること、
   ｄ）濃縮された単核細胞内に残る残留血漿の量が予め決定された体積に到達するまで濃縮した単核細胞から血漿を除去すること、そして、
   ｅ）濃縮された単核細胞に晶質液を添加すること
   を含む、分離装置を用いて単核細胞を得て単核細胞を循環光療法のために調整するための方法。
2. 前記濃縮された単核細胞内に残る残留血漿の体積は、５０ｍＬ以下である、請求項１に記載の方法。
3. 前記濃縮された単核細胞は、晶質液の添加後、２％以下のヘマトクリットを有する、請求項１または請求項２に記載の方法。
4. 晶質液は、血漿の体積％が２５％以下になるように前記濃縮された単核細胞に添加される、請求項１から請求項３までのいずれか１項に記載の方法。
5. 晶質液は前記懸濁液に１５０ｍＬから２００ｍＬの量、添加される、請求項１から請求項４までのいずれか１項に記載の方法。
6. さらに前記単核細胞を、単核細胞の照射に適した採集容器内に採集することを含む、請求項１から請求項５までのいずれか１項に記載の方法。
7. 処理器具の１以上の室内で前記単核細胞を分離し濃縮することを含む、請求項１から請求項６までのいずれか１項に記載の方法。
8. 前記処理器具を、前記単核細胞を分離し濃縮するために十分な遠心場に曝すことを含む、請求項７に記載の方法。
9. 前記生物学的流体は全血を含む、請求項１から請求項８までのいずれか１項に記載の方法。
10. 前記懸濁液は、前記分離装置を洗浄することによって分離装置から回収された量の単核細胞を含む、請求項１から請求項９までのいずれか１項に記載の方法。
11. 前記分離装置は晶質液で洗浄される、請求項１０に記載の方法。
12. 前記分離装置は血漿で洗浄される、請求項１０に記載の方法。
13. 前記分離装置は１０ｍＬの晶質液で洗浄される、請求項１１に記載の方法。
14. 前記分離装置は１０ｍＬの血漿で洗浄される、請求項１２に記載の方法。
15. ａ）分離装置と、生物学的流体の処理に対する指示を含むプログラム可能なマイクロプロセッサで駆動される制御部とを含む再使用可能なハードウェア器具と、
    ｂ）前記回路は生物学的流体を受容するための処理室と単核細胞を採集するための１以上の容器とを含む、器具に接続された使い捨て可能な処理回路と、
    ｃ）制御部であって、
    ｉ）赤血球、血漿そして血小板を含む生物学的流体から単核細胞を分離し、
    ｉｉ）単核細胞を濃縮し、濃縮された単核細胞内に残る血漿残量が予め定められた体積に到達するまで血漿を除去し、
    ｉｉｉ）濃縮された単核細胞と晶質液を組み合わせるようにプログラムされた制御部と
    を備える、単核細胞を採集するためのシステム。
16. 前記分離装置は回転可能な要素を備える、請求項１５に記載のシステム。
17. 前記回転可能な要素は、単核細胞を生物学的流体の他の成分から分離するために十分な遠心場を生成する、請求項１５または請求項１６に記載のシステム。
18. さらに晶質液源を備える、請求項１５に記載のシステム。
19. 前記制御部は、選択された体積の前記晶質液を、前記残留量の血漿中の濃縮された単核細胞に送達するようにプログラムされている、請求項１５から請求項１８までのいずれか１項に記載のシステム。
20. 単核細胞、血漿、晶質液、そして残留赤血球と血小板とを含み、全体積で２００ｍＬであり、ヘマトクリットが２％以下である、単核細胞生成物。
21. 血漿の体積％は２５％以下である、請求項２０に記載の単核細胞生成物。
22. 濃縮された単核細胞とともに残る残留血漿の体積は５０ｍＬ以下である、請求項２０または請求項２１に記載の単核細胞生成物。
    
    

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