JP2016037501A - Astaxanthin-containing desmoglein reducing agent - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、アスタキサンチンを含有する、角層細胞におけるデスモグレイン減少剤に関する。 The present invention relates to a desmoglein reducing agent in stratum corneum cells containing astaxanthin.
くすみは、肌の印象年齢に大きく影響を及ぼすことから、幅広い年代で女性の肌悩みとして挙げられることが多い。くすみの要因としては肌の色調と肌表面状態の形態変化に分類されるが、特に肌表面状態の形態変化に関しては、皮膚表面凹凸などによる影、透明感の減少やつやの低下が挙げられ、いずれも加齢と共に悪化することが知られている。例えば、ターンオーバーが適切に行われずに角層の肥厚や重層化が見られる、不全角化が生じる、角層の水分量が減少する、内分泌や疾病などの全身的かつ皮膚の内面からの影響を受ける、などが肌や口唇のくすみの発生要因として挙げられる。 Dullness greatly affects the age of skin impression, so it is often cited as a skin problem for women in a wide range of ages. Factors that cause dullness are categorized into changes in skin tone and skin surface condition, especially regarding changes in skin surface condition such as shadows due to skin surface irregularities, decreased transparency, and reduced gloss. Both are known to worsen with aging. For example, thickening and stratification of the stratum corneum without proper turnover, keratokeratosis, reduced water content of the stratum corneum, systemic and internal skin effects such as endocrine and disease Is a cause of dullness of the skin and lips.
ここで、「角層」とは、平板状になった角層細胞が、顔面で約１０層程度、他の部位で約１５層程度積み重なって密接に接着した重層化構造を有し、皮膚の一番上にある層をいう。「表皮角化細胞」とは、表皮の大部分を占め、角化という特殊な分化を示す細胞で、ケラチノサイト、角化細胞ともいう。「角層細胞」とは、表皮角化細胞が分化し、角化したものをいう。また、「不全角化」とは、角化過程が不完全であり、本来、角層に至る過程において消失するはずの核が残存し、角層において有核細胞が出現した状態をいう。 Here, the “stratum corneum” is a layered structure in which the stratum corneum cells in the form of a plate are stacked approximately 10 layers on the face and approximately 15 layers on other parts and closely adhered, The top layer. “Epithelial keratinocytes” are cells that occupy most of the epidermis and exhibit special differentiation called keratinization, and are also called keratinocytes or keratinocytes. “Chorn layer cells” refer to cells that have differentiated and keratinized epidermal keratinocytes. In addition, “insufficient keratinization” refers to a state in which the keratinization process is incomplete, nuclei that should have disappeared in the process of reaching the stratum corneum remain, and nucleated cells have appeared in the stratum corneum.
肌や口唇のくすみの対策としては、主に、古くなった角層を取り除くことで、肌表面の凹凸をなめらかにし、明度や透明感を上げることが挙げられる。しかしながら、肌や口唇のくすみに関与する皮膚内成分についての検討はほとんどなされておらず、肌や口唇のくすみ発生機序については、多くの不明な点が残されていた（非特許文献１）。 As measures against dullness of the skin and lips, it is possible to mainly remove the old stratum corneum so as to smooth the unevenness of the skin surface and increase the brightness and transparency. However, almost no investigation has been made on the components in the skin involved in dullness of the skin and lips, and many unclear points remain regarding the dullness generation mechanism of the skin and lips (Non-patent Document 1). .
本発明は、皮膚内成分に作用し、ターンオーバーを正常化へと導き、肌や口唇のくすみを改善する剤を提供することを主目的とする。 The main object of the present invention is to provide an agent that acts on skin components, leads to normalization of turnover, and improves dullness of the skin and lips.
本発明者らは、皮膚内成分であるデスモグレインに着目し、上記課題を解決すべく鋭意検討を行った結果、角層細胞中のデスモグレインの量がアスタキサンチンによってコントロールされ得ることを見出し、本発明を完成するに至った。 The present inventors have focused on desmoglein, a component in the skin, and as a result of intensive studies to solve the above problems, found that the amount of desmoglein in the stratum corneum can be controlled by astaxanthin. The invention has been completed.
ここで、「デスモグレイン」とは、デスモソームにある細胞接着分子タンパク質であって、カルシウム依存性の細胞−細胞接着を担う膜貫通タンパク質をいう。「デスモソーム」とは、角層細胞や表皮角化細胞の細胞接着において、細胞が他の細胞と接着結合する細胞構造の１種をいい、細胞同士は、デスモソームを介して相互に接着される。 Here, “desmoglein” is a cell adhesion molecule protein in the desmosome and refers to a transmembrane protein responsible for calcium-dependent cell-cell adhesion. “Desmosome” refers to one type of cell structure in which cells adhere and bond to other cells in cell adhesion of stratum corneum cells and epidermal keratinocytes, and the cells are adhered to each other via desmosomes.
なお、「デスモグレイン」には、アイソフォームのデスモグレイン−１、デスモグレイン−２、デスモグレイン−３、デスモグレイン−４がある。これらのアイソフォームは、繰返し単位ドメインの数が異なり、デスモグレイン−１は５個、デスモグレイン−２は６個、デスモグレイン−３は２個、デスモグレイン−４は３個の繰返し単位ドメインを持っている。 “Desmograin” includes isoforms of desmoglein-1, desmoglein-2, desmoglein-3, and desmoglein-4. These isoforms differ in the number of repeating unit domains: 5 for desmoglein-1, 6 for desmoglein-2, 2 for desmoglein-3 and 3 for desmoglein-4. have.
本発明では、アスタキサンチンを有効成分として含有する、角層細胞におけるデスモグレインの減少剤を提案する。本技術により減少され得る角層細胞中のデスモグレインは、特に限定されないが、例えば、デスモグレイン−１が挙げられる。 The present invention proposes a desmoglein reducing agent in stratum corneum cells, which contains astaxanthin as an active ingredient. Although the desmoglein in the horny layer cell which can be reduced by this technique is not specifically limited, For example, desmoglein-1 is mentioned.
ここで、くすみが見られる肌や口唇の状態と、角層細胞のデスモグレインの減少との関係について説明する。
通常、角層細胞は、細胞膜がコーニファイドエンベロープとして残り、細胞小器官は消失し、ケラチン繊維と繊維間物質（ケラトヒアリン顆粒、天然保湿因子）を内包する形態を有する。表皮角化細胞が角層細胞となり、角層の最外層では、その接着機構が弱まって角層細胞が皮膚からはがれ落ちる。角層が最終的に表面から離脱するまで、肌で約４０〜６０日、口唇で約３〜４日を要するとされる。
Here, the relationship between the state of skin and lips in which dullness is observed and the decrease in desmoglein of stratum corneum cells will be described.
In general, stratum corneum cells have a form in which a cell membrane remains as a cornified envelope, organelles disappear, and keratin fibers and interfiber substances (keratohyalin granules, natural moisturizing factor) are included. The epidermal keratinocytes become stratum corneum cells, and in the outermost layer of the stratum corneum, the adhesion mechanism weakens and the stratum corneum cells peel off from the skin. It takes about 40 to 60 days for the skin and about 3 to 4 days for the lips until the stratum corneum finally leaves the surface.
健康な皮膚では、皮溝と皮丘がはっきりと整っていて、核のある角層細胞がほとんどない。角層重層化が進んでいないため、角層が上から一枚ずつ剥がれていき、良好にターンオーバーが進む。 In healthy skin, the clefts and cuticles are clearly arranged and there are few horny cells with nuclei. Since the stratum corneum has not been layered, the stratum corneum is peeled off one by one from the top, and the turnover proceeds well.
一方、くすみが見られる肌や口唇の状態は、肌・口唇の表面形態が乱れている状態である。この場合、角化過程が不完全であり、本来、角層に至る過程において消失するはずの核が残存した「不全角化」と、角層が上から１枚ずつ剥がれない、「角層重層剥離」の片方、あるいは両方が生じることが多い。ここで、「角層重層剥離」とは、角層の最外層において角層細胞が皮膚からはがれ落ちるときに、角層が複数枚重なった形で皮膚表面からはがれ落ちることをいう。このような角層の離脱には、角層細胞における、角層細胞同士のデスモソームによる接着の変化や角層細胞間脂質の変化が関係していると考えられている。 On the other hand, the state of skin and lips in which dullness is seen is a state in which the surface morphology of the skin and lips is disturbed. In this case, the keratinization process is incomplete, the “keratokeratinization” in which nuclei that should have disappeared in the process of reaching the stratum corneum remain, and the stratum corneum is not peeled off one by one from the top. One or both of “peeling” often occurs. Here, “stratification of stratum corneum” means that when stratum corneum cells are peeled off from the skin in the outermost layer of the stratum corneum, they are peeled off from the skin surface in a form in which a plurality of stratum corneum is overlapped. Such detachment of the stratum corneum is thought to be related to changes in adhesion between stratum corneum cells by desmosomes and changes in stratum corneum lipids.
本発明の角層細胞におけるデスモグレインの減少剤は、角層重層化を亢進させる角層細胞中のデスモグレインを減少させ、ターンオーバーの乱れ、肌や口唇のくすみを改善することができる。 The agent for reducing desmoglein in the horny layer cell of the present invention can reduce desmoglein in the horny layer cell that promotes stratification of the horny layer, and can improve turnover disturbance and dullness of skin and lips.
以下、本発明を実施するための好適な形態について説明する。なお、以下に説明する実施形態は、本発明の代表的な実施形態の一例を示したものであり、これにより本発明の範囲が狭く解釈されることはない。 Hereinafter, preferred embodiments for carrying out the present invention will be described. In addition, embodiment described below shows an example of typical embodiment of this invention, and, thereby, the range of this invention is not interpreted narrowly.
＜角層細胞におけるデスモグレインの減少剤＞
本技術のデスモグレインの減少剤は、アスタキサンチンを有効成分として含む。アスタキサンチンは、酸化防止効果、抗炎症効果、皮膚老化防止効果、美白効果を有するものと従来から認識されていた。本技術は、アスタキサンチンが角層細胞におけるデスモグレインを減少させる効果を有することを、初めて明らかにし、それを応用したものである。
<Desmoglein reducing agent in stratum corneum>
The desmoglein reducing agent of the present technology contains astaxanthin as an active ingredient. Astaxanthin has been conventionally recognized as having an antioxidant effect, an anti-inflammatory effect, an anti-skin aging effect, and a whitening effect. This technique is the first to clarify that astaxanthin has an effect of reducing desmoglein in stratum corneum cells and applied it.
（１）アスタキサンチン
本明細書において「アスタキサンチン」は、特に断らない限り、アスタキサンチンエステルなどの誘導体を含めるものとする。
(1) Astaxanthin As used herein, “astaxanthin” includes derivatives such as astaxanthin esters unless otherwise specified.
アスタキサンチンは、４７６ｎｍ（エタノール）、４６８ｎｍ（ヘキサン）に吸収極大を持つ赤色の色素でキサントフィル類に分類され、化学構造は３，３’−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−β，β−ｃａｒｏｔｅｎｅ−４，４’−ｄｉｏｎｅ（Ｃ４０Ｈ５２Ｏ４、分子量５９６．８２）である。アスタキサンチンは、分子の両端に存在する環構造の３（３’）−位の水酸基の立体配置により異性体が存在する３Ｓ，３Ｓ’−体、３Ｓ，３Ｒ’−体（ｍｅｓｏ−体）、３Ｒ，３Ｒ’−体の三種で、さらに分子中央の共役二重結合のｃｉｓ−、ｔｒａｎｓ−の異性体も存在する。例えば、全ｃｉｓ−、９−ｃｉｓ体と１３−ｃｉｓ体などの如くである。３，３’−位の水酸基は脂肪酸とエステルを形成することができる。オキアミから得られるアスタキサンチンは、脂肪酸二個結合したジエステル体、Ｈａｅｍａｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｌｕｖｉａｌｉｓから得られるものは３Ｓ，３Ｓ’−体である。脂肪酸一個結合したモノエステル体が多く含まれている、赤色酵母のＰｈａｆｆｉａ Ｒｈｏｄｏｚｙｍａより得られるアスタキサンチンは、３Ｒ，３Ｒ’−体で、通常天然に見出される３Ｓ，３Ｓ’−体と反対の構造を持っている。 Astaxanthin is a red pigment having an absorption maximum at 476 nm (ethanol) and 468 nm (hexane), and is classified into xanthophylls, and its chemical structure is 3,3′-dihydroxy-β, β-carotene-4, 4′-dione ( C 40 H 52 O 4 , molecular weight 596.82). Astaxanthin is a 3S, 3S′-form, 3S, 3R′-form (meso-form), 3R in which isomers exist due to the configuration of the hydroxyl groups at the 3 (3 ′)-position of the ring structure present at both ends of the molecule. , 3R′-isomers, and cis- and trans-isomers of conjugated double bonds at the center of the molecule. For example, all cis-, 9-cis and 13-cis isomers. The hydroxyl group at the 3,3′-position can form an ester with a fatty acid. Astaxanthin obtained from krill is a diester form in which two fatty acids are bonded, and those obtained from Haematococcus publicis are 3S, 3S′-forms. Astaxanthin obtained from Phaffia Rhodozyma of red yeast, which contains many monoesters linked with a single fatty acid, is a 3R, 3R'-form and has the opposite structure to the 3S, 3S'-form, which is normally found in nature. ing.
本技術に用いられるアスタキサンチンは、例えば、オキアミ、サケ、マス、福寿草、赤色酵母、ヘマトコッカス藻などの天然物から抽出したものや、分離して得られるアスタキサンチン含有オイルでもよいし、それを適宜精製したもの、合成品でもよい。特に、ヘマトコッカス藻から抽出されたものが、品質、生産性の点から好ましい。 Astaxanthin used in the present technology may be, for example, one extracted from natural products such as krill, salmon, trout, Fujusakusa, red yeast, Haematococcus algae, or astaxanthin-containing oil obtained by separation, or may be purified as appropriate. Or a synthetic product. In particular, those extracted from Haematococcus algae are preferred in terms of quality and productivity.
天然物からアスタキサンチンを得る場合の抽出溶媒については、水系溶媒でも有機溶媒であってもよい。有機溶媒としてはメタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトン、１，３−ブチレングリコール、エチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン、酢酸エチル、エーテル、ヘキサンなどを用いることができる。また、超臨界状態の二酸化炭素などを用いることもできる。これらの溶媒は単独で用いてもよいし２種類以上を混合して用いてもよい。 The extraction solvent for obtaining astaxanthin from a natural product may be an aqueous solvent or an organic solvent. As the organic solvent, methanol, ethanol, isopropanol, acetone, 1,3-butylene glycol, ethylene glycol, propylene glycol, glycerin, ethyl acetate, ether, hexane, or the like can be used. Also, carbon dioxide in a supercritical state can be used. These solvents may be used alone or in combination of two or more.
ヘマトコッカス藻からの抽出物としては、例えば、ヘマトコッカス・プルビアリス（Ｈａｅｍａｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｌｕｖｉａｌｉｓ）、ヘマトコッカス・ラキュストリス（Ｈａｅｍａｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｕｓｔｒｉｓ）、ヘマトコッカス・カペンシス（Ｈａｅｍａｔｏｃｏｃｃｕｓ ｃａｐｅｎｓｉｓ）、ヘマトコッカス・ドロエバゲンシス（Ｈａｅｍａｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｒｏｅｂａｋｅｎｓｉｓ）、ヘマトコッカス・ジンバビエンシス（Ｈａｅｍａｔｏｃｏｃｃｕｓ ｚｉｍｂａｂｗｉｅｎｓｉｓ）などからの抽出物が挙げられるが、特に限定されない。 Examples of extracts from Haematococcus algae include, for example, Haematococcus pluviaris, Haematocos d. -An extract from, for example, Haematococcus zimbabiensis is mentioned, but it is not particularly limited.
本技術では、市販されているアスタキサンチンを用いてもよく、例えば、マリン大王（株）製のＡＳＴＡＸ（登録商標）−Ｓ、武田紙器（株）製のアスタッツ（登録商標）−ＳＳ、アスタッツ−Ｓ、アスタッツ−１０Ｏ、アスタッツ−ＥＣＳ、アスタッツ−２．０ＰＷ、アスタッツ−１．０ＰＷ、アスタッツ−１．５ＭＢなど、富士化学工業（株）製のアスタリールオイル（登録商標）５０Ｆ、アスタリールオイル５Ｆ、アスタリールパウダー２０Ｆ、水溶性アスタリール液、アスタリールＷＳ液など、東洋酵素化学（株）製のＢｉｏＡｓｔｉｎ（登録商標）、オリザ油化社製のアスタキサンチン−５Ｃなどとして入手できる。 In the present technology, commercially available astaxanthin may be used. For example, ASTAX (registered trademark) -S manufactured by Marine Daio Co., Ltd., ASTAZ (registered trademark) -SS manufactured by Takeda Shiki Co., Ltd., ASTAZ-S , ASTAZ-10O, ASTAZ-ECS, ASTAZ-2.0PW, ASTAZ-1.0PW, ASTAZ-1.5MB, etc., manufactured by Fuji Chemical Industry Co., Ltd. Asteryl powder 20F, water-soluble Asteryl liquid, Asteryl WS liquid, etc., such as BioAstin (registered trademark) manufactured by Toyo Enzyme Chemical Co., Ltd., Astaxanthin-5C manufactured by Oriza Oil Chemical Co., Ltd. and the like can be obtained.
本技術のデスモグレインの減少剤へのアスタキサンチンの含有量は、特に限定されないが、減少剤に対して、好ましくは０．００００１質量％以上、より好ましくは０．０００１質量％以上の濃度を採用することができる。また、含有量の上限は特に限定されないが、好ましくは１％以下、より好ましくは０．１％以下の濃度を採用することができる。 The content of astaxanthin in the desmoglein reducing agent of the present technology is not particularly limited, but is preferably 0.00001% by mass or more, more preferably 0.0001% by mass or more with respect to the reducing agent. be able to. Moreover, although the upper limit of content is not specifically limited, Preferably it is 1% or less, More preferably, the density | concentration of 0.1% or less is employable.
（２）デスモグレインの減少剤の剤形
本技術の角層細胞におけるデスモグレインの減少剤は、化粧料、医薬部外品、医薬品などの皮膚に適用できる剤形のものであれば特に限定されない。具体的な剤形としては、例えばクリーム状、ゲル状、液状、懸濁状、粉末状、フォーム状、シート状、固形のものなどが挙げられる。
(2) Desmoglein reducing agent dosage form The desmoglein reducing agent in the stratum corneum cells of the present technology is not particularly limited as long as it is in a dosage form that can be applied to skin such as cosmetics, quasi drugs, and pharmaceuticals. . Specific examples of the dosage form include cream, gel, liquid, suspension, powder, foam, sheet, and solid.
（３）デスモグレインの減少剤の化粧料（薬用化粧料）
本技術のデスモグレインの減少剤を化粧料・薬用化粧料に適用する場合、特に限定されないが、例えば、皮膚化粧料、口唇化粧料に配合されることが好ましい。具体的には、ハンドクリーム、化粧水、乳液、美容液、フェイスクリーム、クレンジングクリーム、洗顔石鹸、パック、日焼けクリーム、日焼けローション、日焼け止めクリーム、化粧下地、ファンデーション、おしろい、パウダー、口紅、リップグロス、リップクリーム、アイクリーム、アイシャドウ、シャンプー、リンス、コンディショナー、ボディシャンプー、ボディローションなどの製品にすることができる。
(3) Desmoglein reducing agent cosmetics (medicinal cosmetics)
When the desmoglein reducing agent of the present technology is applied to cosmetics and medicinal cosmetics, it is not particularly limited, but for example, it is preferably blended into skin cosmetics and lip cosmetics. Specifically, hand cream, lotion, milky lotion, beauty essence, face cream, cleansing cream, facial soap, pack, tan cream, sun lotion, sunscreen, makeup base, foundation, funny, powder, lipstick, lip gloss Can be made into products such as lip balm, eye cream, eye shadow, shampoo, rinse, conditioner, body shampoo, body lotion.
本技術のデスモグレインの減少剤には、デスモグレイン減少のための有効成分であるアスタキサンチンの他に、化粧料に用いられる各種成分、例えば、基剤、保湿剤、美白剤、抗酸化剤、抗炎症剤、血行促進剤、細胞賦活剤、紫外線吸収剤などを適宜配合することができる。 In addition to astaxanthin, which is an active ingredient for reducing desmoglein, the desmoglein reducing agent of the present technology includes various components used in cosmetics, such as bases, moisturizers, whitening agents, antioxidants, anti-oxidants, and the like. Inflammatory agents, blood circulation promoters, cell activators, ultraviolet absorbers and the like can be appropriately blended.
更に、本技術のデスモグレインの減少剤には、賦形剤、崩壊剤、結合剤、可塑剤、乳化剤、滑沢剤、増粘剤、糖類、ｐＨ調整剤、防腐剤、界面活性剤、キレート剤、色素、ｐＨ調整剤、香料、清涼剤、収斂剤、増泡剤などを含めてもよい。 Further, the desmoglein reducing agent of the present technology includes excipients, disintegrants, binders, plasticizers, emulsifiers, lubricants, thickeners, sugars, pH adjusters, preservatives, surfactants, chelating agents. Agents, pigments, pH adjusters, fragrances, refreshing agents, astringents, foam boosters and the like may be included.
（４）デスモグレインの減少剤の皮膚外用剤（医薬品・医薬部外品）
本技術のデスモグレインの減少剤を皮膚外用剤に適用する場合、例えば、外用液剤、外用ゲル剤、クリーム剤、軟膏剤、スプレー剤、点鼻液剤、リニメント剤、ローション剤、ハップ剤、硬膏剤、噴霧剤、エアゾール剤などの形にすることができる。
(4) Desmoglein reducing agent for external use on skin (drugs and quasi drugs)
When the desmoglein reducing agent of the present technology is applied to an external preparation for skin, for example, an external preparation, an external gel, a cream, an ointment, a spray, a nasal drop, a liniment, a lotion, a haptic, and a plaster , Sprays, aerosols and the like.
本技術の皮膚外用剤の適用方法は、肌や口唇に適量を塗布、噴霧、散布、浸潤、湿布などで適用することが好ましいが、特に限定されない。本技術のデスモグレインの減少剤に係る化粧料、薬用化粧料、医薬部外品のいずれにおいても皮膚外用剤と同様に適用できる。 The application method of the external preparation for skin of the present technology is preferably applied by applying, spraying, spraying, infiltration, poultice, etc., in an appropriate amount to the skin and lips, but is not particularly limited. Any of the cosmetics, medicinal cosmetics, and quasi drugs related to the desmoglein reducing agent of the present technology can be applied in the same manner as the skin external preparation.
本技術のデスモグレインの減少剤には、デスモグレイン減少のための有効成分であるアスタキサンチンの他に、上述した化粧品に用いられる各種成分や、医薬品に用いられる各種成分を適宜配合することができる。例えば、賦形剤、崩壊剤、結合剤、可塑剤、乳化剤、滑沢剤、増粘剤、糖類、ｐＨ調整剤、防腐剤、界面活性剤、キレート剤、色素、ｐＨ調整剤、角質溶解剤、創傷治療剤、抗菌剤、抗アレルギー剤などを含めてもよい。薬理学的に許容される添加剤及び医薬製剤の分野で通常使用し得る添加剤を、１種以上又は２種以上組み合わせて適宜含有させることができる。 In the desmoglein reducing agent of the present technology, in addition to astaxanthin which is an active ingredient for desmoglein reduction, various components used in the above-described cosmetics and various components used in pharmaceuticals can be appropriately blended. For example, excipients, disintegrants, binders, plasticizers, emulsifiers, lubricants, thickeners, sugars, pH adjusters, preservatives, surfactants, chelating agents, dyes, pH adjusters, keratolytic agents , Wound healing agents, antibacterial agents, antiallergic agents and the like may be included. Pharmacologically acceptable additives and additives that can be usually used in the field of pharmaceutical preparations can be appropriately contained in one or a combination of two or more.
医薬品、医薬部外品などを製造する際は医薬品などの製造技術分野において慣用の方法、例えば医薬品であれば、日本薬局方に記載の方法あるいはそれに準じる方法に従って製造することができる。 When a pharmaceutical product, quasi-drug, etc. are produced, it can be produced according to a method commonly used in the technical field of production of the pharmaceutical product, for example, a pharmaceutical product according to the method described in the Japanese Pharmacopoeia or a method analogous thereto.
（５）デスモグレインの減少剤の応用
表皮角化細胞や角層細胞中のデスモグレインの存在量が適切な状態にない場合、角層深層から異常に角層が剥離され、各種の病態を示す。デスモグレインなどの接着分子の異常分解によるデスモグレインの減少で生じる疾患としては、Ｎｅｔｈｅｒｔｏｎ症候群、アトピー性皮膚炎、乾癬、酒さ、魚鱗癬や毛髪異常などの皮膚疾患が挙げられる。そこで、本技術のデスモグレインの減少剤は、それらの皮膚病の研究に用いることができる。具体的にいえば、これらの病態モデルの作成や、研究に際してのコントロール薬剤としての利用、治療薬のスクリーニング方法、スクリーニングに当たってのポジティブコントロールなどとして利用が可能である。
(5) Application of a desmoglein reducing agent When the abundance of desmoglein in epidermal keratinocytes and stratum corneum cells is not in an appropriate state, the stratum corneum is abnormally detached from the deep stratum corneum, showing various pathological conditions . Examples of diseases caused by a decrease in desmoglein due to abnormal degradation of adhesion molecules such as desmoglein include skin diseases such as Netherton syndrome, atopic dermatitis, psoriasis, rosacea, ichthyosis and hair abnormalities. Therefore, the desmoglein reducing agent of the present technology can be used for the study of these skin diseases. Specifically, it is possible to create these pathological models, use them as control agents in research, screening methods for therapeutic agents, and positive controls for screening.
さらに、粘膜細胞が異常角化亢進した病気に白板症がある。この病気の原因は不明だが、表層の細胞があたかも皮膚の上皮＝表皮のように、高密度のケラチンが細胞内に蓄積し、粘膜の重層扁平上皮の性質を保ったままの、細胞核を失わない不完全な角化状態にもかかわらず、量的には角化亢進している状態になる。ターンオーバーが正常化することによりこのような病気の治療に役立つ可能性も想定できる。 Furthermore, leukoplakia is a disease in which mucosal cells are abnormally hyperkeratinized. The cause of this disease is unknown, but as the cells in the surface layer are like the epithelium of the skin = the epidermis, high-density keratin accumulates in the cells, and the nucleus of the mucosal stratified squamous epithelium is maintained and the cell nucleus is not lost. In spite of the incomplete keratinization state, the amount of keratinization is increased quantitatively. It can be assumed that the normalization of the turnover can help to treat such diseases.
＜デスモグレインの減少剤によるターンオーバーの改善＞
本技術のデスモグレインの減少剤を皮膚に適用すると、ターンオーバーが改善することによって、肌や口唇のくすみを改善できる。角層は、角層細胞が層状に重なったものであり、デスモグレインが関与する角層細胞の細胞接着性が亢進すると（角化亢進）、ターンオーバーが遅れ、更に角層重層化が進み、肌や口唇の表面形態が乱れ、角層重層剥離が生じる。
<Improvement of turnover with desmoglein reducing agent>
When the desmoglein reducing agent of the present technology is applied to the skin, the dullness of the skin and lips can be improved by improving the turnover. The stratum corneum is a layer of stratum corneum cells, and when cell adhesion of the stratum corneum cells involving desmoglein is enhanced (hyperkeratinization), turnover is delayed, and stratum corneum stratification further proceeds, The surface morphology of the skin and lips is disturbed, and stratum corneum peeling occurs.
角層重層剥離を調べる方法には、目視や触診がある。その他の角層重層剥離を調べる方法には、例えば、皮膚にスライドガラスや粘着テープを接触させて角層細胞を剥離、採取し、この角層細胞に２５０〜３３０ｎｍの紫外線を照射して、３１０〜４００ｎｍの自家発光物質を指標として、蛍光顕微鏡で健康な角層細胞と比較観察する方法がある。この方法において、明度が高く、細胞形状もはっきり観察されると、皮膚が乱れていると評価される（特開２００８−２８１４９６号公報参照）。 Methods for examining stratum corneum delamination include visual inspection and palpation. Other methods for investigating stratum corneum detachment include, for example, bringing a skin glass or adhesive tape into contact with the skin to separate and collect the stratum corneum cells, and irradiating the stratum corneum cells with ultraviolet rays of 250 to 330 nm. There is a method of comparatively observing healthy stratum corneum cells with a fluorescence microscope using an autoluminescent substance of ˜400 nm as an index. In this method, when the brightness is high and the cell shape is clearly observed, it is evaluated that the skin is disturbed (see JP 2008-28196 A).
＜デスモグレインの減少剤による角層細胞面積の減少＞
角層細胞は、加齢によりターンオーバーが遅れ、徐々に細胞面積が大きくなる。逆に角層細胞の細胞面積が減少すると、皮膚が抗老化（若返り）に向かっていると考えられる。本技術のデスモグレインの減少剤を皮膚に適用すると、ターンオーバーが改善し、角層細胞の面積を減少させることがわかった。これは、肌や口唇のくすみを改善し、健康な皮膚に導くことができることを示している。
<Decrease of stratum corneum cell area by desmoglein reducing agent>
The stratum corneum cells are delayed in turnover due to aging, and the cell area gradually increases. On the other hand, when the cell area of stratum corneum cells decreases, the skin is considered to be anti-aging (rejuvenation). It has been found that applying the desmoglein reducing agent of the present technology to the skin improves turnover and reduces the area of stratum corneum cells. This shows that dullness of the skin and lips can be improved and lead to healthy skin.
角層細胞の面積を調べる方法として、例えば、皮膚の表面にテープを一定圧で押し当てて剥がし（テープストリッピング）、その角層試料を染色して顕微鏡にて画像を取得し、市販の画像解析ソフトで角層細胞の面積を算出する方法がある。 As a method for examining the area of the stratum corneum cells, for example, the tape is pressed against the surface of the skin at a constant pressure and peeled off (tape stripping), the stratum corneum sample is stained, and an image is obtained with a microscope, and a commercially available image analysis is performed. There is a method of calculating the area of stratum corneum by software.
＜その他の肌や口唇状態の評価方法＞
（１）角層細胞における有核細胞の減少
肌や口唇状態の評価方法には、上記の他に、例えば、角層を採取し、その細胞中に核があるかどうか（有核細胞か否か）をみる方法が挙げられる。肌表面形態が乱れているときには、角層細胞に核が残る不全角化が認められることから、単に角層のみの変化にとどまらず、表皮角化細胞の増殖や角化の過程の異常を伴っていると考えられる。そこで、本技術のデスモグレインの減少剤を皮膚に適用し、角層細胞のうち、有核細胞の数が少なくなれば、表皮角化細胞の増殖や角化の過程の異常が改善され、肌や口唇のくすみが改善されたと考えられる。
<Other skin and lip evaluation methods>
(1) Decrease of nucleated cells in stratum corneum In addition to the above-mentioned methods for evaluating the skin and lip state, for example, the stratum corneum is collected and whether there are nuclei in the cells (whether or not nucleated cells are present) Can be seen. When the skin surface morphology is disturbed, keratinocytes with nuclei remaining in the stratum corneum are observed, which not only changes the stratum corneum, but also involves abnormalities in the process of epidermal keratinocyte proliferation and keratinization. It is thought that. Therefore, if the desmoglein reducing agent of the present technology is applied to the skin, and the number of nucleated cells among the stratum corneum cells decreases, abnormalities of the epidermal keratinocyte proliferation and keratinization process are improved, and the skin And dullness of the lips are considered to have improved.
（２）角層細胞における自家発光の蛍光分光測定
また、別の方法として、スライドガラスなどに採取した角層と、標準物質試料として、スライドガラスなどに載せたトリプトファン試薬とを、蛍光分光測定装置を用いて蛍光分光測定を行う方法もある。この方法では、蛍光スペクトルから、トリプトファンの極大蛍光波長よりも短波長側に極大値が観察されると健常な皮膚と評価され、長波長側に極大値が観察されると肌表面形態が乱れていると評価される（特開平２００８−２８１４９６号公報参照）。
(2) Fluorescence spectroscopic measurement of autoluminescence in stratum corneum cells As another method, a stratum corneum collected on a slide glass or the like, and a tryptophan reagent placed on the slide glass or the like as a standard substance sample, are used in a fluorescence spectroscopic measurement apparatus. There is also a method of performing fluorescence spectroscopic measurement by using. In this method, when a maximum value is observed on the shorter wavelength side than the maximum fluorescence wavelength of tryptophan from the fluorescence spectrum, it is evaluated as healthy skin, and when a maximum value is observed on the longer wavelength side, the skin surface morphology is disturbed. (Refer to Japanese Patent Laid-Open No. 2008-28196).
（３）標識抗体によるデスモグレインの検出
更に、肌や口唇状態の別の評価方法として、採取した角層に標識抗デスモグレイン抗体を適用する方法も挙げられる。検出された標識が少なければ（弱ければ）、デスモグレインも少ないことを示す。本技術のデスモグレインの減少剤を皮膚に適用した結果、角層中のデスモグレインが少なくなれば、ターンオーバーの遅れ、肌や口唇のくすみが改善されたと考えられる。
(3) Detection of desmoglein with labeled antibody Furthermore, as another evaluation method of the skin and lip state, a method of applying a labeled anti-desmoglein antibody to the collected stratum corneum is also mentioned. Less detected (weak) label indicates less desmoglein. As a result of applying the desmoglein reducing agent of the present technology to the skin, if the desmoglein in the stratum corneum decreases, it is considered that the turnover delay and dullness of the skin and lips are improved.
以下に、具体的な実施例などを説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。 Specific examples and the like will be described below, but the present invention is not limited thereto.
＜アスタキサンチン含有リップクリームの製造＞
下記成分を含有するリップクリームを製造した。
成分１ ポリエチレンワックス ６．０質量％
成分２ マイクロクリスタリンワックス １０．０質量％
成分３ ２−エチルヘキサン酸セチル １０．０質量％
成分４ トリ２−エチルヘキサン酸グリセリル ２０．０質量％
成分５ ワセリン ２０．０質量％
成分６ ポリブテン １０．０質量％
成分７ トリイソステアリン酸ジグリセリル 残量
成分８ フェノキシエタノール ０．３質量％
成分９ アスタキサンチン５％含有油（オリザ油化社製 アスタキサンチン−５Ｃ） ０．１質量％
成分１０ ビタミンＥ ０．３質量％
<Production of astaxanthin-containing lip balm>
A lip balm containing the following ingredients was prepared.
Ingredient 1 Polyethylene wax 6.0% by mass
Ingredient 2 Microcrystalline wax 10.0% by mass
Component 3 Cetyl 2-ethylhexanoate 10.0% by mass
Component 4 Glyceryl tri-2-ethylhexanoate 20.0% by mass
Ingredient 5 Petrolatum 20.0% by mass
Ingredient 6 Polybutene 10.0% by mass
Component 7 Diglyceryl triisostearate Remaining component 8 Phenoxyethanol 0.3% by mass
Component 9 Oil containing 5% astaxanthin (Oryza Oil Chemical Co., Ltd. Astaxanthin-5C) 0.1% by mass
Ingredient 10 Vitamin E 0.3% by mass
上記成分１〜６を混合、加熱し、均一に溶解した。一方、上記成分７〜１０を均一に混合した。成分１〜６の溶解物に、成分７〜１０の混合物を加え、成型してアスタキサンチン含有リップクリーム（以下、「リップクリームＡ」ということがある。）を製造した。 The above components 1 to 6 were mixed and heated to dissolve uniformly. On the other hand, the above components 7 to 10 were mixed uniformly. A mixture of components 7 to 10 was added to the dissolved components 1 to 6 and molded to produce an astaxanthin-containing lip balm (hereinafter sometimes referred to as “lip balm A”).
上記成分９の代わりに上記成分７をその分増量し、上記と同様にして、アスタキサンチンを含有しないリップクリーム（以下、「リップクリームＮ」ということがある。）を製造した。 The above component 7 was increased by an amount corresponding to the above component 9, and a lip balm containing no astaxanthin (hereinafter sometimes referred to as “lip balm N”) was produced in the same manner as described above.
＜アスタキサンチン含有リップクリームを口唇に適用したときの角層細胞におけるデスモグレイン−１の発現＞
（１）試料の採取
２０代から４０代の男女被験者１０名より、下口唇の角層のテープストリッピングを行った。その後、４０代の男性被験者を選定し、リップクリームＡもしくはリップクリームＮを１週間、１日２回以上使用させた。リップクリーム使用前、使用１週間後にそれぞれ下口唇の角層のテープストリッピングを行った。テープストリッピングは、透明両面テープ（ニチバン社製）をスライドガラスに貼り付け、粘着面を下口唇の中央部に一定圧で押し当て、下口唇から剥がして行った。
<Expression of desmoglein-1 in stratum corneum cells when an astaxanthin-containing lip balm is applied to the lips>
(1) Collection of sample Tape stripping of the horny layer of the lower lip was performed from 10 male and female subjects in their 20s to 40s. Thereafter, male subjects in their 40s were selected and lip balm A or lip balm N was used at least twice a day for one week. Tape stripping of the horny layer of the lower lip was performed before and 1 week after use of the lip balm. Tape stripping was performed by attaching a transparent double-sided tape (manufactured by Nichiban Co., Ltd.) to a slide glass, pressing the adhesive surface against the center of the lower lip with a constant pressure, and peeling it from the lower lip.
（２）一次抗体反応
上記で得られたスライドガラス試料のテープ表面に、抗デスモグレイン−１マウスＩｇＧモノクローナル抗体（ＰＲＯＧＥＮ社製）液を適量かけ、室温にて1時間反応させた。その後、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）に浸し、未反応の抗体を洗い流した。
(2) Primary antibody reaction An appropriate amount of an anti-desmoglein-1 mouse IgG monoclonal antibody (PROGEN) solution was applied to the tape surface of the slide glass sample obtained above and reacted at room temperature for 1 hour. Then, it was immersed in phosphate buffered saline (PBS) to wash away unreacted antibodies.
（３）二次抗体反応
上記一次抗体反応させたスライドガラス試料のテープ表面に、蛍光標識抗マウスＩｇＧ抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）の２００倍ＰＢＳ希釈溶液を適量かけ、室温にて１時間反応させた。その後、ＰＢＳに浸し、未反応の抗体を洗い流した。
(3) Secondary antibody reaction An appropriate amount of a 200-fold PBS diluted fluorescent-labeled anti-mouse IgG antibody (manufactured by Invitrogen) was applied to the tape surface of the slide glass sample subjected to the primary antibody reaction, and reacted at room temperature for 1 hour. . Then, it was immersed in PBS and unreacted antibody was washed away.
（４）封入
上記二次抗体反応させたスライドガラス試料の表面に、マウント・クイック・アクオス（Ｍｏｕｎｔ Ｑｕｉｃｋ Ａｑｕｅｏｕｓ；ＳＰＩ ＳＵＰＰＬＩＥＳ）を滴下し、カバーガラスで覆い観察用試料とした。
(4) Encapsulation Mount Quick Aqueous (SPI SUPPLIES) was dropped on the surface of the slide glass sample reacted with the secondary antibody, and the sample was covered with a cover glass to obtain a sample for observation.
（５）観察
上記包埋したスライドガラス試料をオリンパス社製の倒立型蛍光顕微鏡を用いて観察した。この観察画面を図１〜３に示した。
(5) Observation The embedded slide glass sample was observed using an inverted fluorescent microscope manufactured by Olympus. This observation screen is shown in FIGS.
（６）結果
口唇状態が良好な被験者と口唇状態が悪化している被験者からそれぞれ採取した試料の蛍光顕微鏡写真を図１に示した。左の図１Ａは、良好な口唇状態、右の図１Ｂは、悪化している口唇状態である。図１Ｂは、図１Ａと比べて、角層細胞の１つ１つにおいて全体的に蛍光を発し、明度が高く、細胞形状も部分的にはっきりしたものが見られた。従って、口唇状態が悪化している被験者の角層細胞では、蛍光が強いことから、デスモグレイン−１が多く存在することがわかった。また、図１Ｂの方が、角層細胞の面積が大きく、角層重層剥離の割合も高いことが観察された。
(6) Results FIG. 1 shows fluorescence micrographs of samples collected from subjects with good lip condition and subjects with deteriorated lip condition. FIG. 1A on the left shows a good lip state, and FIG. 1B on the right shows a deteriorated lip state. In FIG. 1B, as compared with FIG. 1A, each of the stratum corneum cells fluoresced entirely, and the brightness was high and the cell shape was partially clear. Therefore, it was found that desmoglein-1 is present in a large amount in the stratum corneum cells of the subject whose lip state is deteriorated because the fluorescence is strong. In addition, it was observed that FIG. 1B had a larger area of horny layer cells and a higher rate of horny layer delamination.
リップクリームＡ使用前と１週間使用後に被験者から採取した試料の蛍光顕微鏡写真を図２に示した。左の図２Ａは、リップクリームＡ使用前のもの、右の図２Ｂは、リップクリームＡを１週間使用後のものである。図２Ａの角層細胞は、全体的に蛍光を発しているのに対し、図２Ｂの角層細胞は、細胞の辺縁は蛍光を発しているものの、細胞の内側は蛍光を発していないか又は蛍光が弱い細胞が多く見られた。これは、アスタキサンチンを含有するリップクリームＡを口唇に適用することにより、角層細胞におけるデスモグレイン−１が減少したこと、また、特に角層細胞の辺縁よりも内側でデスモグレイン−１が減少したことが考えられた。 FIG. 2 shows fluorescence micrographs of samples taken from the subjects before use of lip balm A and after use for 1 week. FIG. 2A on the left shows the lip balm A before use, and FIG. 2B on the right shows the lip balm A after one week. The stratum corneum cells in FIG. 2A are generally fluorescent, whereas the stratum corneum cells in FIG. 2B are fluorescent at the edge of the cell, but are not fluorescent inside the cells? Or many cells with weak fluorescence were seen. This is because desmoglein-1 in stratum corneum cells was reduced by applying lip balm A containing astaxanthin to the lips, and in particular, desmoglein-1 was reduced inside the edge of the stratum corneum cells. It was thought that.
リップクリームＡ又はＮを１週間使用後に採取した試料の蛍光顕微鏡写真を図３に示した。左の図３Ａは、リップクリームＮを１週間使用したもの、右の図３Ｂは、リップクリームＡを１週間使用したものである。図３Ａの角層細胞は、全体的に蛍光を発しているのに対し、図３Ｂの角層細胞は、細胞の辺縁は蛍光を発しているものの、細胞の内側は蛍光を発していないか又は蛍光が弱い細胞が多く見られた。これは、アスタキサンチンを含有しないリップクリームＮを適用しても、ほとんど角層細胞のデスモグレイン−１が減少しなかったのに対し、アスタキサンチンを含有するリップクリームＡを適用すると、デスモグレイン−１が明らかに減少することが考えられた。 The fluorescence micrograph of the sample extract | collected after using lip balm A or N for 1 week was shown in FIG. FIG. 3A on the left shows that lip balm N has been used for one week, and FIG. 3B on the right shows that lip balm A has been used for one week. The stratum corneum cells in FIG. 3A fluoresce as a whole, whereas the stratum corneum cells in FIG. 3B fluoresce at the edges of the cells but are not fluorescent inside the cells? Or many cells with weak fluorescence were seen. When lip balm N containing no astaxanthin was applied, desmoglein-1 of stratum corneum cells was hardly decreased, whereas when lip balm A containing astaxanthin was applied, desmoglein-1 was It was thought that it decreased obviously.
＜アスタキサンチン含有リップクリームを口唇に適用したときの角層重層剥離の低減効果＞
（１）試料の採取
２０〜４０代の男性被験者２０名を１０名ずつ２群に分け、１群にリップクリームＡを、もう１群にリップクリームＮを、１週間１日２回以上使用させた。リップクリーム使用前、使用１週間後にそれぞれ下口唇の角層のテープストリッピングを行った。テープストリッピングは、テープ（ニチバン社製）の粘着面を下口唇の中央部に一定圧で押し当て、
下口唇から剥がし、スライドガラスに貼り付けた。
<Reducing effect of stratum corneum peeling when an astaxanthin-containing lip balm is applied to the lips>
(1) Sample collection 20 male subjects in their 20s and 40s were divided into 2 groups of 10 people, and one group used lip balm A and the other group used lip balm N at least twice a week. It was. Tape stripping of the horny layer of the lower lip was performed before and 1 week after use of the lip balm. Tape stripping presses the adhesive surface of the tape (manufactured by Nichiban) against the center of the lower lip with a constant pressure,
It peeled from the lower lip and stuck on the slide glass.
（２）試料の染色
スライドガラスに貼り付けた角層をキシレンで洗浄し、水洗し、ケルンエヒトロート（武藤化学株式会社製）にて核染した。その後水洗した後に、アルコール脱水とキシレンで処理をし、標本用封入剤ＭＸ（松浪硝子工業株式会社製）で封入した。
(2) Dyeing of sample The stratum corneum affixed to the slide glass was washed with xylene, washed with water, and then nuclear dyed with Cologne Echroth (Muto Chemical Co., Ltd.) Thereafter, it was washed with water, treated with alcohol dehydration and xylene, and sealed with a sample mounting medium MX (manufactured by Matsunami Glass Industrial Co., Ltd.).
（３）観察
上記包埋したスライドガラス試料をオリンパス社製の倒立型光学顕微鏡を用いて観察した。
まず、リップクリーム使用前の角層重層剥離の程度を初期値「０」とした。次に、リップクリームＮ又はリップクリームＡをそれぞれ１週間適用した被験者の重層角層剥離の程度が、それぞれリップクリーム使用前の角層重層剥離の程度と比較して、角層重層の数が同数程度のもの（変化なし）は、スコア「０」とした。角層重層が減少したと観察されたもの（口唇状態が改善）は、スコア「１」とした。角層重層が増加したと観察されたもの（口唇状態が悪化）は、スコア「−１」とした。図４に、リップクリームＡ又はＮを１週間使用した後の被験者から採取した角層重層剥離の程度をスコアの平均をとってグラフにしたものを示す。
(3) Observation The embedded slide glass sample was observed using an inverted optical microscope manufactured by Olympus.
First, the degree of exfoliation of the stratum corneum before using the lip balm was set to the initial value “0”. Next, the degree of exfoliation of the stratum corneum of the subjects who applied lip balm N or lip cream A for one week was the same as the degree of exfoliation of the stratum corneum before use of the lip balm, respectively. The thing of the grade (no change) was made into the score "0". Those in which stratum corneum stratification was observed to be reduced (improved lip condition) were scored as “1”. What was observed that the stratum corneum increased (the lip state worsened) was scored as “−1”. FIG. 4 is a graph showing the degree of exfoliation of stratum corneum collected from a subject after using lip balm A or N for 1 week, with the average of the scores taken as a graph.
（４）結果
リップクリームＡを１週間使用した群では、角層重層剥離の程度のスコアの平均が約０．３２であった。スコアが「０」よりも大きいほど角層重層剥離が低減されたことを示す。一方、リップクリームＮを１週間使用した群では、角層重層剥離の程度のスコアの平均が約０．１３であった。従って、アスタキサンチンを含有するリップクリームＡは、アスタキサンチンを含有しないリップクリームＮに比べて、有意に角層重層剥離の低減効果が見られた。これは、角層の重層化が抑制され、健康な角層で見られる１枚ごとの剥離が多くなり、口唇状態が改善されたと考えられた。
(4) Results In the group using lip balm A for 1 week, the average score of the degree of stratum corneum peeling was about 0.32. A larger score than “0” indicates that stratum corneum delamination is reduced. On the other hand, in the group using lip balm N for one week, the average score of the degree of stratum corneum peeling was about 0.13. Therefore, the lip balm A containing astaxanthin showed a significant effect of reducing the stratum corneum peeling as compared with the lip balm N not containing astaxanthin. This was thought to be because stratification of the stratum corneum was suppressed, peeling one by one seen in a healthy stratum corneum increased, and the lip condition was improved.
＜アスタキサンチン含有リップクリームによる角層細胞面積の減少効果＞
（１）実験方法
上記＜アスタキサンチン含有リップクリームを口唇に適用したときの角層重層剥離の低減効果＞の「（１）試料の採取」から「（３）観察」に記載した操作と同様の操作にて得られた画像を画像解析ソフトＷｉｎＲＯＯＦ（三谷商事株式会社）にて解析し、角層細胞の面積を測定した。
<Reduction effect of stratum corneum cell area by astaxanthin-containing lip balm>
(1) Experimental method Operation similar to the operation described in “(1) Sample collection” to “(3) Observation” in <Reduction effect of stratum corneum peeling when applying astaxanthin-containing lip balm to the lips> The image obtained in (1) was analyzed with image analysis software WinROOF (Mitani Corporation), and the area of the stratum corneum cells was measured.
まず、リップクリームＮを使用する前の被験者の角層細胞面積とリップクリームＮを１週間適用した被験者の角層細胞面積の変化量（減少量）の平均をとった。一方、リップクリームＡを使用する前の被験者の角層細胞面積とリップクリームＡを１週間使用した被験者の角層細胞面積の変化量(減少量)の平均をとった。そのグラフを図５に示す。 First, the average of the amount of change (decrease) in the stratum corneum cell area of the subject before using the lip balm N and the stratum corneum cell area of the subject who applied the lip balm N for one week was taken. On the other hand, the average of the amount of change (decrease) in the horny layer cell area of the subject before using lip balm A and the horny layer cell area of the subject using lip balm A for one week was taken. The graph is shown in FIG.
（２）結果
アスタキサンチンを含有するリップクリームＡを１週間使用すると、角層細胞の面積が平均で約１５０μｍ２減少した。一方、アスタキサンチンを含有しないリップクリームＮを１週間使用すると、角層細胞の面積が平均で約２５μｍ２しか減少しなかった。したがって、アスタキサンチン含有リップクリームは、角層細胞面積を減少させることが確認された。これは、皮膚老化やターンオーバーの遅れなどによる角層細胞面積の増大を抑制し、健康な口唇に近づいたと考えられた。
(2) Results When lip balm A containing astaxanthin was used for 1 week, the area of stratum corneum cells decreased by about 150 μm 2 on average. On the other hand, when lip balm N containing no astaxanthin was used for 1 week, the area of the stratum corneum cells decreased by about 25 μm 2 on average. Therefore, it was confirmed that astaxanthin-containing lip balm reduces the stratum corneum cell area. This was thought to be due to the suppression of the increase in stratum corneum cell area due to skin aging and delay in turnover, and approached a healthy lip.
＜アスタキサンチン含有リップクリームによる有核細胞の減少効果＞
（１）実験方法
上記＜アスタキサンチン含有リップクリームを口唇に適用したときの角層重層剥離の低減効果＞の「（１）試料の採取」から「（３）観察」に記載した操作と同様の操作にて得られた画像を画像解析ソフトＷｉｎＲＯＯＦにて有核細胞の割合を測定した。
<Decrease effect of nucleated cells by lip balm containing astaxanthin>
(1) Experimental method Operation similar to the operation described in “(1) Sample collection” to “(3) Observation” in <Reduction effect of stratum corneum peeling when applying astaxanthin-containing lip balm to the lips> The ratio of nucleated cells was measured using image analysis software WinROOF.
まず、リップクリーム使用前の有核細胞の割合を初期値「０」とした。次に、リップクリームＮ又はリップクリームＡをそれぞれ１週間適用した被験者の有核細胞の割合の程度が、それぞれリップクリーム使用前の有核細胞の割合の程度と比較して、有核細胞の割合が同数程度のもの（変化なし）は、スコア「０」とした。有核細胞の割合が減少したと観察されたもの（口唇状態が改善）は、スコア「１」とした。有核細胞の割合が増加したと観察されたもの（口唇状態が悪化）は、スコア「−１」とした。図６に、リップクリームＡ又はＮを１週間使用した後の被験者から採取した角層細胞中の有核細胞の増減をスコアから数値化してグラフにしたものを示す。 First, the ratio of nucleated cells before using lip balm was set to an initial value “0”. Next, the percentage of nucleated cells in subjects who applied lip balm N or lip balm A for 1 week, respectively, compared to the percentage of nucleated cells before using lip balm, respectively. Of the same number (no change), the score was “0”. A score of “1” was observed when the percentage of nucleated cells was observed to be decreased (improved lip condition). What was observed that the percentage of nucleated cells increased (the lip state worsened) was scored as “−1”. FIG. 6 shows a graph in which changes in nucleated cells in the stratum corneum cells collected from a subject after using lip balm A or N for one week are converted into numerical values from the score.
（２）結果
リップクリームＡを１週間使用した群では、有核細胞の減少のスコアの平均が約０．０７であった。スコアが「０」よりも大きいほど有核細胞の割合が減少したことを示す。一方、リップクリームＮを１週間使用した群では、有核細胞の減少のスコアの平均が約−０．２５であった。従って、アスタキサンチンを含有するリップクリームＡは、アスタキサンチンを含有しないリップクリームＮに比べて、有核細胞の減少効果が見られた。これは、角化の際、細胞の核が正常に消失して、ターンオーバーのバランスがとれ、口唇状態が改善されたと考えられた。
(2) Results In the group in which lip balm A was used for 1 week, the average score of nucleated cell reduction was about 0.07. It shows that the ratio of nucleated cells decreased as the score was larger than “0”. On the other hand, in the group in which lip balm N was used for 1 week, the average score of nucleated cell reduction was about -0.25. Therefore, the lip cream A containing astaxanthin showed a reduction effect of nucleated cells as compared with the lip cream N not containing astaxanthin. This was thought to be due to the normal disappearance of cell nuclei during keratinization, balanced turnover, and improved lip condition.
＜アスタキサンチン含有リップクリームによる自家蛍光の低減効果＞
（１）実験方法
上記＜アスタキサンチン含有リップクリームを口唇に適用したときの角層重層剥離の低減効果＞の「（１）試料の採取」から「（３）観察」に記載した操作と同様の操作にて得られた試料を、倒立型蛍光顕微鏡（オリンパス社製）にセットし、３４０ｎｍの紫外部領域の波長の光により生じる自家蛍光を観察した。
<Reduction effect of autofluorescence by lip balm containing astaxanthin>
(1) Experimental method Operation similar to the operation described in “(1) Sample collection” to “(3) Observation” in <Reduction effect of stratum corneum peeling when applying astaxanthin-containing lip balm to the lips> The sample obtained in (1) was set in an inverted fluorescence microscope (manufactured by Olympus), and autofluorescence generated by light having a wavelength in the ultraviolet region of 340 nm was observed.
まず、リップクリーム使用前の自家蛍光の蛍光強度を初期値「０」とした。次に、リップクリームＮ又はリップクリームＡをそれぞれ１週間適用した被験者の自家蛍光の蛍光強度が、それぞれリップクリーム使用前の自家蛍光の蛍光強度の程度と比較して、蛍光強度が同程度のもの（変化なし）は、スコア「０」とした。蛍光強度が低減したと観察されたもの（口唇状態が改善）は、スコア「１」とした。蛍光強度が増加したと観察されたもの（口唇状態が悪化）は、スコア「−１」とした。図７に、リップクリームＡ又はＮを１週間使用した後の被験者から採取した角層細胞の自家蛍光の蛍光強度の増減をスコアから数値化してグラフにしたものを示す。 First, the fluorescence intensity of autofluorescence before using the lip balm was set to an initial value “0”. Next, the fluorescence intensity of the autofluorescence of the subject who applied lip balm N or lip balm A for one week is comparable to the level of the autofluorescence intensity before using the lip balm. (No change) was scored “0”. Those observed to have reduced fluorescence intensity (improved lip condition) were scored as “1”. What was observed that the fluorescence intensity increased (the lip state worsened) was scored as “−1”. FIG. 7 shows a graph in which the increase or decrease in the fluorescence intensity of autofluorescence of stratum corneum cells collected from a subject after using lip balm A or N for 1 week is digitized from the score.
（２）結果
リップクリームＡを１週間使用した群では、自家蛍光の蛍光強度のスコアの平均が約０．５であった。スコアが「０」よりも大きいほど自家蛍光が低減したことを示す。一方、リップクリームＮを１週間使用した群では、自家蛍光の蛍光強度のスコアの平均が約−０．１３であった。従って、アスタキサンチンを含有するリップクリームＡは、アスタキサンチンを含有しないリップクリームＮに比べて、有意に自家蛍光の低減効果が見られた。これは、アスタキサンチン含有リップクリームが、口唇状態の改善に、明らかに有効であることを示すと考えられた。
(2) Results In the group in which lip balm A was used for 1 week, the average fluorescence intensity score of autofluorescence was about 0.5. It shows that autofluorescence decreased, so that a score is larger than "0". On the other hand, in the group in which lip balm N was used for 1 week, the average of the fluorescence intensity scores of autofluorescence was about −0.13. Therefore, the lip balm A containing astaxanthin was significantly reduced in autofluorescence as compared with the lip balm N not containing astaxanthin. This was considered to indicate that the astaxanthin-containing lip balm is clearly effective in improving the lip condition.
＜アスタキサンチン含有リップクリーム使用における使用後アンケート＞
（１）実験方法
下記表１に示す成分を含有するアスタキサンチン含有リップクリーム（以下、「リップクリームＡ’」ということがある。）を製造した。
また、表１の成分６の代わりに、成分４のトリイソステアリン酸ポリグリセリル−２をその分増量したアスタキサンチンを含有しないリップクリーム（以下、「リップクリームＮ’」ということがある。）を製造した。
<Post-use questionnaire when using astaxanthin-containing lip balm>
(1) Experimental method
Astaxanthin-containing lip balm containing the components shown in Table 1 below (hereinafter sometimes referred to as “lip balm A ′”) was produced.
Further, instead of component 6 in Table 1, a lip balm containing no astaxanthin (hereinafter sometimes referred to as “lip balm N ′”) in which polyglyceryl-2 triisostearate of component 4 was increased correspondingly was produced.
２０〜５０代の男女被験者２０名を２群に分け、Ｉ群にリップクリームＡ’又はＩＩ群にリップクリームＮ’をそれぞれ３週間使用してもらい、アンケートを実施した。
次に３週間使用を中止した後に、Ｉ群にはリップクリームＮ’を、ＩＩ群にはリップクリームＡ’をそれぞれ３週間使用してもらい、同様にアンケートを実施した。
Twenty male and female subjects in their 20s and 50s were divided into two groups, and lip balm A ′ was used for group I or lip balm N ′ for group II for 3 weeks, respectively, and a questionnaire was conducted.
Next, after stopping the use for 3 weeks, lip balm N ′ was used for group I and lip balm A ′ was used for group II for 3 weeks, and a questionnaire was similarly conducted.
評価項目は、口唇のふっくら感、シワ、うるおい感、くすみの４項目とし、使用前に比べて悪化、やや悪化、変化なし、やや改善、改善の５段階で評価した。結果はやや改善以上で評価した被験者の数の割合を算出した。 The evaluation items were four items of lip plumpness, wrinkle, moisture, and dullness, and the evaluation was made in five stages: worse, slightly worse, no change, slightly improved, and improved. As a result, the ratio of the number of subjects evaluated slightly above improvement was calculated.
（２）結果
使用前に比べてやや改善もしくは改善を実感した被験者の数の割合（％）を表２に示した。
(2) Results Table 2 shows the percentage (%) of the number of subjects who realized improvement or improvement slightly compared to before use.
リップクリームＮ’に比べてリップクリームＡ’使用により、ふっくら感、シワ、うるおい感、くすみの評価項目において改善が確認された。
以上のことから、本技術のデスモグレインの減少剤を含有する口唇用化粧料の使用により、ふっくら感、シワ、うるおい感、くすみが改善することが明らかとなった。
By using lip balm A ′ compared to lip balm N ′, improvements were confirmed in the evaluation items of plumpness, wrinkle, moisture and dullness.
From the above, it has been clarified that the use of the cosmetic for lips containing the desmoglein reducing agent of the present technology improves the feeling of plumpness, wrinkles, moisture and dullness.
本発明によればターンオーバーを改善し、角層細胞面積を減少させ、くすみを改善させる、皮膚外用剤、化粧料などを製造することができる。 ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, a skin external preparation, cosmetics, etc. which improve turnover, reduce a stratum corneum cell area, and improve dullness can be manufactured.
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