JP2016023182A - Medicine for treating cancer - Google Patents
Medicine for treating cancer Download PDFInfo
- Publication number
- JP2016023182A JP2016023182A JP2014151278A JP2014151278A JP2016023182A JP 2016023182 A JP2016023182 A JP 2016023182A JP 2014151278 A JP2014151278 A JP 2014151278A JP 2014151278 A JP2014151278 A JP 2014151278A JP 2016023182 A JP2016023182 A JP 2016023182A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- shrna
- cancer
- dna
- treatment
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 77
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 56
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 44
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title claims 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 52
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 51
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 50
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 50
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 claims description 174
- 101000721661 Homo sapiens Cellular tumor antigen p53 Proteins 0.000 claims description 172
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 claims description 52
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 claims description 44
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 34
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 31
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 claims description 14
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 claims description 9
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 7
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 claims description 7
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 5
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 claims description 4
- 108020004394 Complementary RNA Proteins 0.000 claims description 4
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 claims description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 4
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims 2
- 229940000425 combination drug Drugs 0.000 claims 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 abstract description 12
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 10
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 91
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 29
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 28
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 27
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 description 19
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 17
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 17
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 16
- RFBVBRVVOPAAFS-UHFFFAOYSA-N 2,2-bis(hydroxymethyl)-1-azabicyclo[2.2.2]octan-3-one Chemical compound C1CC2CCN1C(CO)(CO)C2=O RFBVBRVVOPAAFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 13
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 13
- 230000005735 apoptotic response Effects 0.000 description 13
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 11
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 10
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 10
- 102000041788 p53 family Human genes 0.000 description 9
- 108091075611 p53 family Proteins 0.000 description 9
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 9
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 8
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 8
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 8
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 7
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 6
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 6
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 6
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 6
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 6
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 6
- 108050002772 E3 ubiquitin-protein ligase Mdm2 Proteins 0.000 description 5
- 102000012199 E3 ubiquitin-protein ligase Mdm2 Human genes 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 5
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 4
- 101000891649 Homo sapiens Transcription elongation factor A protein-like 1 Proteins 0.000 description 4
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 101000596402 Mus musculus Neuronal vesicle trafficking-associated protein 1 Proteins 0.000 description 4
- 101000800539 Mus musculus Translationally-controlled tumor protein Proteins 0.000 description 4
- 101000781972 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) Protein wos2 Proteins 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 101001009610 Toxoplasma gondii Dense granule protein 5 Proteins 0.000 description 4
- 102100040250 Transcription elongation factor A protein-like 1 Human genes 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 208000016691 refractory malignant neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 4
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 4
- 102000003952 Caspase 3 Human genes 0.000 description 3
- 108090000397 Caspase 3 Proteins 0.000 description 3
- 101710087047 Cytoskeleton-associated protein 4 Proteins 0.000 description 3
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 3
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 3
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 3
- 108010091356 Tumor Protein p73 Proteins 0.000 description 3
- 102000018252 Tumor Protein p73 Human genes 0.000 description 3
- 108010040002 Tumor Suppressor Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000001742 Tumor Suppressor Proteins Human genes 0.000 description 3
- 101710140697 Tumor protein 63 Proteins 0.000 description 3
- 102100027881 Tumor protein 63 Human genes 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- 239000012830 cancer therapeutic Substances 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 230000025084 cell cycle arrest Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 3
- CTSPAMFJBXKSOY-UHFFFAOYSA-N ellipticine Chemical compound N1=CC=C2C(C)=C(NC=3C4=CC=CC=3)C4=C(C)C2=C1 CTSPAMFJBXKSOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 108700025694 p53 Genes Proteins 0.000 description 3
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 3
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012130 whole-cell lysate Substances 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- BGBNULCRKBVAKL-UHFFFAOYSA-N 2-(hydroxymethyl)-2-(methoxymethyl)-1-azabicyclo[2.2.2]octan-3-one Chemical compound C1CC2CCN1C(COC)(CO)C2=O BGBNULCRKBVAKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VCHFWHQHIKFOIC-UHFFFAOYSA-N 2-ethenyl-1h-quinazolin-4-one Chemical compound C1=CC=C2NC(C=C)=NC(=O)C2=C1 VCHFWHQHIKFOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000005778 DNA damage Effects 0.000 description 2
- 231100000277 DNA damage Toxicity 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 2
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 2
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 2
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N ciprofloxacin Chemical compound C12=CC(N3CCNCC3)=C(F)C=C2C(=O)C(C(=O)O)=CN1C1CC1 MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000001378 electrochemiluminescence detection Methods 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- GLVAUDGFNGKCSF-UHFFFAOYSA-N mercaptopurine Chemical compound S=C1NC=NC2=C1NC=N2 GLVAUDGFNGKCSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 238000010208 microarray analysis Methods 0.000 description 2
- NIHSNFSFDGHHRG-SDNWHVSQSA-N n-[2-[(e)-2-(4-methoxyphenyl)ethenyl]quinazolin-4-yl]-n',n'-dimethylpropane-1,3-diamine Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1\C=C\C1=NC(NCCCN(C)C)=C(C=CC=C2)C2=N1 NIHSNFSFDGHHRG-SDNWHVSQSA-N 0.000 description 2
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 2
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 2
- 230000023603 positive regulation of transcription initiation, DNA-dependent Effects 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 230000002100 tumorsuppressive effect Effects 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 1-beta-D-Xylofuranosyl-NH-Cytosine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VSNHCAURESNICA-NJFSPNSNSA-N 1-oxidanylurea Chemical compound N[14C](=O)NO VSNHCAURESNICA-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- OHNNJGHRUIGGBO-UHFFFAOYSA-N 2-(4,5-dihydro-1,3-thiazol-2-ylsulfanyl)-1-(3,4-dihydroxyphenyl)ethanone Chemical compound C1=C(O)C(O)=CC=C1C(=O)CSC1=NCCS1 OHNNJGHRUIGGBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NDMPLJNOPCLANR-UHFFFAOYSA-N 3,4-dihydroxy-15-(4-hydroxy-18-methoxycarbonyl-5,18-seco-ibogamin-18-yl)-16-methoxy-1-methyl-6,7-didehydro-aspidospermidine-3-carboxylic acid methyl ester Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 NDMPLJNOPCLANR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 4'-epidoxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 0.000 description 1
- AGFIRQJZCNVMCW-UAKXSSHOSA-N 5-bromouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 AGFIRQJZCNVMCW-UAKXSSHOSA-N 0.000 description 1
- WYWHKKSPHMUBEB-UHFFFAOYSA-N 6-Mercaptoguanine Natural products N1C(N)=NC(=S)C2=C1N=CN2 WYWHKKSPHMUBEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASUCSHXLTWZYBA-UMMCILCDSA-N 8-Bromoguanosine Chemical compound C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=C(Br)N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O ASUCSHXLTWZYBA-UMMCILCDSA-N 0.000 description 1
- HDZZVAMISRMYHH-UHFFFAOYSA-N 9beta-Ribofuranosyl-7-deazaadenin Natural products C1=CC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(CO)C(O)C1O HDZZVAMISRMYHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011729 BALB/c nude mouse Methods 0.000 description 1
- 101150003242 Bbc3 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 101800001415 Bri23 peptide Proteins 0.000 description 1
- COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N Busulfan Chemical compound CS(=O)(=O)OCCCCOS(C)(=O)=O COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102400000107 C-terminal peptide Human genes 0.000 description 1
- 101800000655 C-terminal peptide Proteins 0.000 description 1
- KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N Camptothecin Natural products CCC1(O)C(=O)OCC2=C1C=C3C4Nc5ccccc5C=C4CN3C2=O KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 108091092236 Chimeric RNA Proteins 0.000 description 1
- PTOAARAWEBMLNO-KVQBGUIXSA-N Cladribine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC(Cl)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 PTOAARAWEBMLNO-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N Crotonoside Natural products C1=NC2=C(N)NC(=O)N=C2N1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N Cytarabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N Cytidine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N D-guanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100021122 DNA damage-binding protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 230000033616 DNA repair Effects 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- HTIJFSOGRVMCQR-UHFFFAOYSA-N Epirubicin Natural products COc1cccc2C(=O)c3c(O)c4CC(O)(CC(OC5CC(N)C(=O)C(C)O5)c4c(O)c3C(=O)c12)C(=O)CO HTIJFSOGRVMCQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 1
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000054184 GADD45 Human genes 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- ZIXGXMMUKPLXBB-UHFFFAOYSA-N Guatambuinine Natural products N1C2=CC=CC=C2C2=C1C(C)=C1C=CN=C(C)C1=C2 ZIXGXMMUKPLXBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000766853 Homo sapiens Cytoskeleton-associated protein 4 Proteins 0.000 description 1
- 101001041466 Homo sapiens DNA damage-binding protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101001066158 Homo sapiens Growth arrest and DNA damage-inducible protein GADD45 alpha Proteins 0.000 description 1
- 101000732336 Homo sapiens Transcription factor AP-2 gamma Proteins 0.000 description 1
- 101000987003 Homo sapiens Tumor protein 63 Proteins 0.000 description 1
- 101000584845 Homo sapiens Tumor protein p73 Proteins 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- GSDSWSVVBLHKDQ-JTQLQIEISA-N Levofloxacin Chemical compound C([C@@H](N1C2=C(C(C(C(O)=O)=C1)=O)C=C1F)C)OC2=C1N1CCN(C)CC1 GSDSWSVVBLHKDQ-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 108010006519 Molecular Chaperones Proteins 0.000 description 1
- VQAYFKKCNSOZKM-IOSLPCCCSA-N N(6)-methyladenosine Chemical compound C1=NC=2C(NC)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O VQAYFKKCNSOZKM-IOSLPCCCSA-N 0.000 description 1
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 description 1
- VQAYFKKCNSOZKM-UHFFFAOYSA-N NSC 29409 Natural products C1=NC=2C(NC)=NC=NC=2N1C1OC(CO)C(O)C1O VQAYFKKCNSOZKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700019961 Neoplasm Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000048850 Neoplasm Genes Human genes 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 101150074164 PMAIP1 gene Proteins 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 description 1
- 108020002230 Pancreatic Ribonuclease Proteins 0.000 description 1
- 102000005891 Pancreatic ribonuclease Human genes 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012083 RIPA buffer Substances 0.000 description 1
- 238000011530 RNeasy Mini Kit Methods 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- AHHFEZNOXOZZQA-ZEBDFXRSSA-N Ranimustine Chemical compound CO[C@H]1O[C@H](CNC(=O)N(CCCl)N=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AHHFEZNOXOZZQA-ZEBDFXRSSA-N 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- SUYXJDLXGFPMCQ-INIZCTEOSA-N SJ000287331 Natural products CC1=c2cnccc2=C(C)C2=Nc3ccccc3[C@H]12 SUYXJDLXGFPMCQ-INIZCTEOSA-N 0.000 description 1
- BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N Temozolomide Chemical compound O=C1N(C)N=NC2=C(C(N)=O)N=CN21 BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FOCVUCIESVLUNU-UHFFFAOYSA-N Thiotepa Chemical compound C1CN1P(N1CC1)(=S)N1CC1 FOCVUCIESVLUNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100033345 Transcription factor AP-2 gamma Human genes 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical class O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N Vinblastine Natural products O=C(O[C@H]1[C@](O)(C(=O)OC)[C@@H]2N(C)c3c(cc(c(OC)c3)[C@]3(C(=O)OC)c4[nH]c5c(c4CCN4C[C@](O)(CC)C[C@H](C3)C4)cccc5)[C@@]32[C@H]2[C@@]1(CC)C=CCN2CC3)C JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 150000003838 adenosines Chemical class 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 description 1
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 1
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 229960002170 azathioprine Drugs 0.000 description 1
- LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N azathioprine Chemical compound CN1C=NC([N+]([O-])=O)=C1SC1=NC=NC2=C1NC=N2 LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700000707 bcl-2-Associated X Proteins 0.000 description 1
- 229960002707 bendamustine Drugs 0.000 description 1
- YTKUWDBFDASYHO-UHFFFAOYSA-N bendamustine Chemical compound ClCCN(CCCl)C1=CC=C2N(C)C(CCCC(O)=O)=NC2=C1 YTKUWDBFDASYHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 1
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 229960002092 busulfan Drugs 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 229940127093 camptothecin Drugs 0.000 description 1
- VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N camptothecin Chemical compound C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N 0.000 description 1
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 description 1
- 190000008236 carboplatin Chemical compound 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000006369 cell cycle progression Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 230000004637 cellular stress Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229960003405 ciprofloxacin Drugs 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960002436 cladribine Drugs 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 229960000684 cytarabine Drugs 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N cytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- 229960000975 daunorubicin Drugs 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N dl-camptothecin Natural products C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)C5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003534 dna topoisomerase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229960003668 docetaxel Drugs 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229960001904 epirubicin Drugs 0.000 description 1
- 150000002118 epoxides Chemical class 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- XRECTZIEBJDKEO-UHFFFAOYSA-N flucytosine Chemical compound NC1=NC(=O)NC=C1F XRECTZIEBJDKEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004413 flucytosine Drugs 0.000 description 1
- 229960005304 fludarabine phosphate Drugs 0.000 description 1
- GIUYCYHIANZCFB-FJFJXFQQSA-N fludarabine phosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC(F)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@@H]1O GIUYCYHIANZCFB-FJFJXFQQSA-N 0.000 description 1
- 125000005519 fluorenylmethyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 1
- 229960005277 gemcitabine Drugs 0.000 description 1
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000048996 human TP73 Human genes 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 229960001101 ifosfamide Drugs 0.000 description 1
- HOMGKSMUEGBAAB-UHFFFAOYSA-N ifosfamide Chemical compound ClCCNP1(=O)OCCCN1CCCl HOMGKSMUEGBAAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 229960004768 irinotecan Drugs 0.000 description 1
- UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N irinotecan Chemical compound C1=C2C(CC)=C3CN(C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=4)=O)C=4C3=NC2=CC=C1OC(=O)N(CC1)CCC1N1CCCCC1 UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 101150066555 lacZ gene Proteins 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 229960003376 levofloxacin Drugs 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229960001924 melphalan Drugs 0.000 description 1
- SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N melphalan Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229960001428 mercaptopurine Drugs 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 230000025090 microtubule depolymerization Effects 0.000 description 1
- 230000029115 microtubule polymerization Effects 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- NCAJLQDPTZBGJV-UHFFFAOYSA-N n-[2-[[4-[bis(4-chlorophenyl)methyl]piperazin-1-yl]methyl]quinazolin-4-yl]-n',n'-dimethylpropane-1,3-diamine Chemical compound N=1C2=CC=CC=C2C(NCCCN(C)C)=NC=1CN(CC1)CCN1C(C=1C=CC(Cl)=CC=1)C1=CC=C(Cl)C=C1 NCAJLQDPTZBGJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002077 nanosphere Substances 0.000 description 1
- 229950007221 nedaplatin Drugs 0.000 description 1
- 190000005734 nedaplatin Chemical compound 0.000 description 1
- 229960001420 nimustine Drugs 0.000 description 1
- VFEDRRNHLBGPNN-UHFFFAOYSA-N nimustine Chemical compound CC1=NC=C(CNC(=O)N(CCCl)N=O)C(N)=N1 VFEDRRNHLBGPNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100001143 noxa Toxicity 0.000 description 1
- 230000006508 oncogene activation Effects 0.000 description 1
- 229960001756 oxaliplatin Drugs 0.000 description 1
- DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L oxaliplatin Chemical compound O1C(=O)C(=O)O[Pt]11N[C@@H]2CCCC[C@H]2N1 DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 229940021222 peritoneal dialysis isotonic solution Drugs 0.000 description 1
- 230000004526 pharmaceutical effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000007505 plaque formation Effects 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 229960002185 ranimustine Drugs 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- -1 t-butyloxycarbonyl Chemical group 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- 229960004964 temozolomide Drugs 0.000 description 1
- 238000006177 thiolation reaction Methods 0.000 description 1
- 229960001196 thiotepa Drugs 0.000 description 1
- 229960003087 tioguanine Drugs 0.000 description 1
- MNRILEROXIRVNJ-UHFFFAOYSA-N tioguanine Chemical compound N1C(N)=NC(=S)C2=NC=N[C]21 MNRILEROXIRVNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940044693 topoisomerase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 229960000303 topotecan Drugs 0.000 description 1
- UCFGDBYHRUNTLO-QHCPKHFHSA-N topotecan Chemical compound C1=C(O)C(CN(C)C)=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 UCFGDBYHRUNTLO-QHCPKHFHSA-N 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- UYPYRKYUKCHHIB-UHFFFAOYSA-N trimethylamine N-oxide Chemical compound C[N+](C)(C)[O-] UYPYRKYUKCHHIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HDZZVAMISRMYHH-KCGFPETGSA-N tubercidin Chemical compound C1=CC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O HDZZVAMISRMYHH-KCGFPETGSA-N 0.000 description 1
- 230000005740 tumor formation Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 230000005760 tumorsuppression Effects 0.000 description 1
- 229960003048 vinblastine Drugs 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N vincaleukoblastine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004355 vindesine Drugs 0.000 description 1
- UGGWPQSBPIFKDZ-KOTLKJBCSA-N vindesine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(N)=O)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1N=C1[C]2C=CC=C1 UGGWPQSBPIFKDZ-KOTLKJBCSA-N 0.000 description 1
- 201000008551 xeroderma pigmentosum group C Diseases 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
本発明は、ｐ５３および／もしくはｐ５３を誘導する物質と組み合わせて使用するための、またはｐ５３および／もしくはｐ５３を誘導する物質と組み合わせた、ある特定の核酸を含有する、がんを処置するための医薬に関する。 The present invention is for use in combination with a substance that induces p53 and / or p53, or for treating cancer containing certain nucleic acids in combination with a substance that induces p53 and / or p53. It relates to medicine.
腫瘍抑制因子として知られるｐ５３は、ストレス条件下に置かれた細胞において細胞周期停止を引き起こし、アポトーシスを誘導する。ヒトに生じる全てのがんの約半数でｐ５３遺伝子の突然変異に起因するｐ５３タンパク質の異常が認められており（非特許文献１）、ｐ５３の欠失および活性を失った変異ｐ５３の存在はがんの進展や治療抵抗性に大きく関与すると考えられている。例えば、ｐ５３の欠失または変異が、発がんを引き起こすのみならず化学療法や放射線治療に対する抵抗性にも関与していることが報告されている（非特許文献２）。 P53, known as a tumor suppressor, causes cell cycle arrest and induces apoptosis in cells placed under stress conditions. About half of all cancers that occur in humans, p53 protein abnormalities due to mutations in the p53 gene have been observed (Non-patent Document 1). It is thought to be greatly involved in cancer development and treatment resistance. For example, it has been reported that deletion or mutation of p53 not only causes carcinogenesis, but is also involved in resistance to chemotherapy and radiotherapy (Non-patent Document 2).
ウイルスベクターを用いてｐ５３を発現させることでがんを治療する遺伝子治療は、いくつかが臨床試験段階にあるものの、必ずしも全てのがんにおいて良好な治療成績を示すわけではない（非特許文献３および４）。 Gene therapy that treats cancer by expressing p53 using a viral vector, although some are in clinical trials, does not necessarily show good therapeutic results in all cancers (Non-patent Document 3). And 4).
近年、ｐ５３を用いたがんの遺伝子治療をより有効なものとするための技術開発が進められている。その１つとして、本発明者らは、ｐ５３の標的遺伝子であってアポトーシス阻害的に働くｐ２１の発現を抑制する人工ｍｉＲＮＡとｐ５３とを共発現するアデノウイルスベクターを開発しており、ｐ５３を単独で発現させた場合よりも強いアポトーシス誘導効果および腫瘍退縮効果を有することを確認している（非特許文献５、特許文献１）。 In recent years, technological development for making cancer gene therapy using p53 more effective has been promoted. As one of them, the present inventors have developed an adenoviral vector that co-expresses p53 and an artificial miRNA that suppresses the expression of p21, which is a target gene of p53 and acts to inhibit apoptosis. It has been confirmed that it has a stronger apoptosis-inducing effect and tumor regression effect than when expressed in (Non-patent Document 5, Patent Document 1).
本発明は、がん、特にｐ５３を単独で発現させた場合には十分な治療効果が認められないｐ５３抵抗性を示すがんにおいて、その抵抗性を減弱させ、ｐ５３の有するがん治療効果を増強することを目的とする。 The present invention reduces the resistance of cancer, particularly cancer showing p53 resistance for which sufficient therapeutic effect is not observed when p53 is expressed alone, and has the cancer therapeutic effect of p53. The purpose is to strengthen.
本発明者らは、ある種の核酸が、ｐ５３抵抗性のがんにおいてもｐ５３にアポトーシス誘導作用を発揮させることを見出し、下記の各発明を完成させた。 The present inventors have found that certain nucleic acids cause p53 to exert an apoptosis-inducing action even in p53-resistant cancer, and have completed the following inventions.
（１）ｐ５３および／またはｐ５３を誘導する物質と組み合わせて使用するための、配列番号１〜２８のいずれかに示される塩基配列を含むＤＮＡおよび／または該ＤＮＡによりコードされるＲＮＡを含有する、ｐ５３のみによる処置に抵抗性を有するがんを処置するための医薬。
（２）
ｐ５３および／またはｐ５３を誘導する物質と、
配列番号１〜２８のいずれかに示される塩基配列を含むＤＮＡおよび／または該ＤＮＡによりコードされるＲＮＡ
とを含有する、ｐ５３のみによる処置に抵抗性を有するがんを処置するための医薬。
（３）ｐ５３および／またはｐ５３を誘導する物質が、ｐ５３タンパク質およびその機能的等価物、これらをコードする核酸、ならびに変異ｐ５３の機能を回復させる物質よりなる群から選択される１以上の物質である、（１）または（２）に記載の医薬。
（４）前記ＤＮＡが、
ｓｉＲＮＡを構成する二本鎖ＲＮＡのうちのいずれか一方のＲＮＡ鎖、または
該ＲＮＡ鎖とその相補的ＲＮＡ鎖とがヘアピンループを形成することができる一本鎖ＲＮＡ部分によって連結された構造を有するｓｈＲＮＡ
をコードする、（１）から（３）のいずれかに記載の医薬。
（５）前記ＤＮＡが配列番号１に示される塩基配列を含む、（１）から（４）のいずれかに記載の医薬。
（６）前記ｓｈＲＮＡが、配列番号２９に示される塩基配列を有するＤＮＡによりコードされる、（４）に記載の医薬。
（７）ｐ５３を活性化する処置とさらに組み合わせて使用される、（１）から（６）のいずれかに記載の医薬。
（８）ｐ５３を活性化する処置が、がんの放射線治療または化学療法である、（７）に記載の医薬。
（９）ｐ５３を活性化する物質と、（１）から（６）のいずれかに記載の医薬とを組み合わせた、組み合わせ医薬。
（１０）ｐ５３を活性化する物質が、化学療法のための抗がん剤である、（９）に記載の医薬。
(1) containing DNA containing the base sequence shown in any one of SEQ ID NOs: 1 to 28 and / or RNA encoded by the DNA for use in combination with p53 and / or a substance that induces p53. A medicament for treating cancer resistant to treatment with p53 alone.
(2)
a substance that induces p53 and / or p53;
DNA comprising the base sequence shown in any one of SEQ ID NOs: 1 to 28 and / or RNA encoded by the DNA
And a medicament for treating cancer resistant to treatment with p53 alone.
(3) The substance that induces p53 and / or p53 is one or more substances selected from the group consisting of p53 protein and functional equivalents thereof, nucleic acids encoding them, and substances that restore the function of mutant p53. The pharmaceutical according to (1) or (2).
(4) The DNA is
One of the double-stranded RNAs constituting the siRNA, or a structure in which the RNA strand and its complementary RNA strand are linked by a single-stranded RNA portion capable of forming a hairpin loop shRNA
The medicament according to any one of (1) to (3), which encodes
(5) The medicament according to any one of (1) to (4), wherein the DNA comprises the base sequence represented by SEQ ID NO: 1.
(6) The medicament according to (4), wherein the shRNA is encoded by a DNA having the base sequence represented by SEQ ID NO: 29.
(7) The medicament according to any one of (1) to (6), further used in combination with a treatment that activates p53.
(8) The medicament according to (7), wherein the treatment that activates p53 is cancer radiotherapy or chemotherapy.
(9) A combined medicine in which a substance that activates p53 and the medicine according to any one of (1) to (6) are combined.
(10) The medicament according to (9), wherein the substance that activates p53 is an anticancer agent for chemotherapy.
本発明によれば、がんのｐ５３抵抗性を減弱させ、ｐ５３のがん治療効果を増強することができる。したがって、従来のｐ５３単独療法では困難であったｐ５３抵抗性がんを効果的に処置することが可能になる。さらに、本発明の医薬はウイルスベクターの使用を必須としないことから、ウイルス治療の欠点や副作用を回避し得るという利点も有する。 According to the present invention, p53 resistance of cancer can be attenuated and the cancer therapeutic effect of p53 can be enhanced. Therefore, it becomes possible to effectively treat p53 resistant cancer, which has been difficult with conventional p53 monotherapy. Furthermore, since the medicament of the present invention does not require the use of a viral vector, it has the advantage that the drawbacks and side effects of virus treatment can be avoided.
本発明の一実施形態は、ｐ５３および／またはｐ５３を誘導する物質と組み合わせて使用するための、ある特定の核酸を含有する、ｐ５３のみによる処置に抵抗性を有するがんを処置するための医薬に関する。 One embodiment of the present invention is a medicament for treating cancer resistant to treatment with p53 alone, containing a specific nucleic acid, for use in combination with p53 and / or a substance that induces p53 About.
（１）ｐ５３
本発明におけるｐ５３とは、正常な機能を有するｐ５３タンパク質、すなわち、野生型のｐ５３タンパク質をいう。かかる正常な機能を有するｐ５３は、ＤＮＡ損傷、低酸素状態などのストレス条件下で活性化され、四量体を形成する。その四量体が標的遺伝子の転写調節領域に特異的に結合することで、それらの遺伝子の発現を誘導し、細胞周期停止、アポトーシス誘導、ＤＮＡ修復などの腫瘍抑制作用を引き起こす。
(1) p53
In the present invention, p53 refers to a p53 protein having a normal function, that is, a wild-type p53 protein. P53 having such a normal function is activated under stress conditions such as DNA damage and hypoxia to form a tetramer. The tetramer specifically binds to the transcriptional regulatory region of the target gene, thereby inducing the expression of those genes and causing tumor suppressive effects such as cell cycle arrest, apoptosis induction, and DNA repair.
また、本発明において用いられるｐ５３は、上述の正常な機能を有するｐ５３タンパク質に加えて、これらと機能的に等価である、すなわち細胞または生体内でｐ５３と同等の機能を発揮することができる機能的等価物を包含する。ｐ５３の機能的等価物としては、具体的に、ｐ５３ファミリーのタンパク質、ならびにそれらのアイソフォーム、機能的断片およびキメラタンパク質、ならびにそれらの機能的変異体を挙げることができる。 Further, p53 used in the present invention is functionally equivalent to the above-described p53 protein having normal functions, that is, a function capable of exhibiting a function equivalent to p53 in cells or in vivo. Including the equivalents. Specific functional equivalents of p53 can include p53 family proteins, and isoforms, functional fragments and chimeric proteins thereof, and functional variants thereof.
ｐ５３ファミリーとしては、ｐ５３、ｐ６３およびｐ７３が挙げられる。これらをコードする核酸の塩基配列は、公的に利用可能なデータベース、例えばＧｅｎＢａｎｋ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）などにおいて開示されており、例えば、アクセッション番号ＮＭ＿０００５４６（ヒトｐ５３）、ＮＭ＿００３７２２（ヒトｐ６３）、ＮＭ＿００５４２７（ヒトｐ７３）、ＮＭ＿００１００３２１０（イヌｐ５３）、ＮＭ＿００１００９２９４（ネコｐ５３）、ＸＭ＿５４５２４９（イヌｐ６３）、ＡＹ０６９９８９（イヌｐ７３）などとして入手することができる。 Examples of the p53 family include p53, p63 and p73. Nucleotide sequences of nucleic acids encoding them are disclosed in publicly available databases, such as GenBank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/), for example, accession number NM_000546 ( Human p53), NM_003722 (human p63), NM_005427 (human p73), NM_001003210 (dog p53), NM_001009294 (cat p53), XM_545249 (dog p63), AY069989 (dog p73), and the like.
ｐ５３ファミリーのタンパク質には多数のアイソフォームが存在する。本発明におけるｐ５３ファミリーのタンパク質のアイソフォームとしては、例えば、ｐ５３およびｐ６３についてはα、βおよびγ、ｐ７３についてはα、β、γ、δ、ε、θ、ζ、ηおよびη１を挙げることができる。 There are many isoforms of the p53 family of proteins. Examples of isoforms of p53 family proteins in the present invention include α, β and γ for p53 and p63, and α, β, γ, δ, ε, θ, ζ, η and η1 for p73. it can.
さらに、ｐ５３ファミリーのタンパク質は、Ｎ末端側から順に、転写活性およびＭＤＭ２との結合を制御するトランス活性化ドメイン（Ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎ Ｄｏｍａｉｎ，ＴＡＤ）、標的遺伝子のプロモーター部位に結合するＤＮＡ結合ドメイン（ＤＮＡ−ｂｉｎｄｉｎｇ Ｄｏｍａｉｎ，ＤＢＤ）ならびに四量体形成に関与するオリゴマー形成ドメイン（Ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ Ｄｏｍａｉｎ，ＯＤ）という３つのドメイン構造を有している（例えば、Ｗｅｉ Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ．２０１２；２０１２：６８７３５９などを参照）。したがって、本発明において用いられるｐ５３ファミリーの機能的断片は、これらのドメインを少なくとも１つ含むｐ５３ファミリータンパク質の断片であって、ｐ５３タンパク質と機能的に等価である断片である。 Furthermore, proteins from the p53 family are, in order from the N-terminal side, a transactivation domain (Transactivation Domain, TAD) that controls transcriptional activity and binding to MDM2, and a DNA binding domain (DNA-binding) that binds to the promoter site of the target gene. (Domain, DBD) and an oligomerization domain involved in tetramer formation (Oligomerization Domain, OD) (see, for example, Wei J. et al., J Nucleic Acids. 2012; 2012: 687359). Etc.) Therefore, the functional fragment of the p53 family used in the present invention is a fragment of a p53 family protein containing at least one of these domains, and is a fragment functionally equivalent to the p53 protein.
さらに、本発明において用いられるｐ５３ファミリーのキメラタンパク質は、２以上の異なるｐ５３ファミリータンパク質に由来する、または２以上の異なる生物種に由来する上述のドメインを含むタンパク質であって、ｐ５３タンパク質と機能的に等価であるタンパク質である。 Furthermore, the p53 family chimeric protein used in the present invention is a protein comprising the above-mentioned domains derived from two or more different p53 family proteins or derived from two or more different species, and is functional with the p53 protein. Is a protein that is equivalent to
ここで、ｐ５３の機能的等価物であるそれぞれのタンパク質は、以下の機能的変異体を包含する。
１）かかるタンパク質のアミノ酸配列と少なくとも約８０％以上、好ましくは少なくとも約８５％以上、より好ましくは少なくとも約９０％以上、最も好ましくは少なくとも約９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、ｐ５３タンパク質と機能的に等価であるタンパク質。
２）かかるタンパク質のアミノ酸配列において１または複数のアミノ酸残基を付加し、欠失させまたは置換したタンパク質であって、ｐ５３タンパク質と機能的に等価であるタンパク質。
３）かかるタンパク質をコードする核酸とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸によってコードされるタンパク質であって、ｐ５３タンパク質と機能的に等価であるタンパク質。
Here, each protein which is a functional equivalent of p53 includes the following functional variants.
1) consisting of an amino acid sequence having at least about 80% or more, preferably at least about 85% or more, more preferably at least about 90% or more, most preferably at least about 95% or more identity with the amino acid sequence of such a protein, p53 A protein that is functionally equivalent to a protein.
2) A protein that has one or more amino acid residues added, deleted, or substituted in the amino acid sequence of such a protein, and is functionally equivalent to the p53 protein.
3) A protein encoded by a nucleic acid that hybridizes under stringent conditions with a nucleic acid encoding such a protein and is functionally equivalent to the p53 protein.
なお、本明細書におけるアミノ酸配列または塩基配列の同一性（％）は、当業者によって通常用いられる適当なソフトプログラム、例えばＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴサーチ（ｈｔｔｐ：／／ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）などを用い、比較される配列をアラインメントしたときに得られる最大のパーセント配列同一性を意味する。 The identity (%) of the amino acid sequence or base sequence in the present specification is determined by an appropriate software program usually used by those skilled in the art, such as NCBI BLAST search (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/). Is used to mean the maximum percent sequence identity obtained when the sequences being compared are aligned.
また、アミノ酸残基の置換は、好ましくは保存的置換である。本明細書中で用いられる用語「保存的置換」とは、アミノ酸残基を、類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換することをいう。類似の側鎖を有するアミノ酸残基の群としては、例えば、塩基性側鎖を有するアミノ酸（リジン、アルギニン、ヒスチジンなど）、酸性側鎖を有するアミノ酸（アスパラギン酸、グルタミン酸など）、非荷電性極性側鎖を有するアミノ酸（アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システインなど）、非極性側鎖を有するアミノ酸（グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファンなど）、分岐側鎖を有するアミノ酸（バリン、ロイシン、イソロイシンなど）、芳香族側鎖を有するアミノ酸（チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジンなど）、ヒドロキシル基含有側鎖を有するアミノ酸（セリン、スレオニン、チロシンなど）、および硫黄含有側鎖を有するアミノ酸（システイン、メチオニンなど）が挙げられる。 The substitution of amino acid residues is preferably a conservative substitution. The term “conservative substitution” as used herein refers to substitution of an amino acid residue with an amino acid residue having a similar side chain. Examples of groups of amino acid residues having similar side chains include amino acids having basic side chains (lysine, arginine, histidine, etc.), amino acids having acidic side chains (aspartic acid, glutamic acid, etc.), uncharged polarity Amino acids with side chains (asparagine, glutamine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, etc.), amino acids with nonpolar side chains (glycine, alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, phenylalanine, methionine, tryptophan, etc.), branch side Amino acids with chains (valine, leucine, isoleucine, etc.), amino acids with aromatic side chains (tyrosine, phenylalanine, tryptophan, histidine, etc.), amino acids with hydroxyl group-containing side chains (serine, threonine, tyrosine, etc.), and Amino acids (cysteine, etc. methionine) with a yellow-containing side chains.
本明細書中で用いられる用語「ストリンジェントな条件」とは、核酸分子の間で特異的なハイブリッドが形成され、非特異的なハイブリッドが形成されない条件をいう。かかる条件は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ（２００１）、ＡｕＳｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ（１９９２）などの標準的なプロトコルに記載されており、例えば、６×ＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム）中、約４５℃でのハイブリダイゼーション、続いて、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、５０〜６５℃での１または２回以上の洗浄である。 As used herein, the term “stringent conditions” refers to conditions under which specific hybrids are formed between nucleic acid molecules and non-specific hybrids are not formed. Such conditions are described, for example, in Sambrook et al. , Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd ed. , Cold Spring Harbor Press (2001), AuSubel et al. , Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates (1992), eg, hybridization at about 45 ° C. in 6 × SSC (sodium chloride / sodium citrate), followed by , 0.2 × SSC, 0.1% SDS, one or more washes at 50-65 ° C.
上述のｐ５３の機能的等価物は、腫瘍抑制、細胞周期停止、アポトーシス誘導などの活性を、正常なｐ５３が有する活性と比較することで、ｐ５３と機能的に等価であることを確認することができる。かかる活性は、当業者に周知の方法で評価することができ、一例として、アポトーシス誘導活性は、カスパーゼ−３の遺伝子発現量、タンパク質発現量もしくは酵素活性を測定することにより、または細胞集団中のＳｕｂ−Ｇ１期細胞の割合をフローサイトメトリーで測定することにより、評価することができる。 It is possible to confirm that the functional equivalent of p53 described above is functionally equivalent to p53 by comparing activities such as tumor suppression, cell cycle arrest, and apoptosis induction with those of normal p53. it can. Such activity can be evaluated by methods well known to those skilled in the art. As an example, apoptosis-inducing activity can be determined by measuring the gene expression level, protein expression level or enzyme activity of caspase-3, or in a cell population. It can be evaluated by measuring the ratio of Sub-G 1 phase cells by flow cytometry.
または、ｐ５３による発現制御が知られている因子、例えば、ｐ２１、ＧＡＤＤ４５、ＸＰ−Ｃ、ＤＤＢ２、Ｐｕｍａ、Ｎｏｘａ、Ｂａｘ、ＭＤＭ２などの遺伝子またはタンパク質発現量を測定することによっても、ｐ５３との機能的等価性を確認することができる。 Alternatively, by measuring the expression level of a gene or protein such as p21, GADD45, XP-C, DDB2, Puma, Noxa, Bax, MDM2, etc. whose expression is regulated by p53, the function with p53 Can be confirmed.
（２）ｐ５３を誘導する物質
本発明におけるｐ５３を誘導する物質は、生体内で正常なｐ５３タンパク質またはその機能的等価物の発現および／または活性を誘導する能力を持つ物質であり、好ましくは、ｐ５３もしくはその機能的等価物をコードする核酸、または変異ｐ５３の機能を回復させる物質である。
(2) Substance that induces p53 The substance that induces p53 in the present invention is a substance capable of inducing the expression and / or activity of a normal p53 protein or a functional equivalent thereof in vivo, preferably, A nucleic acid that encodes p53 or a functional equivalent thereof, or a substance that restores the function of mutant p53.
ｐ５３またはその機能的等価物をコードする核酸は、かかる核酸とストリンジェントな条件でハイブリダイズする核酸を包含する。 Nucleic acids that encode p53 or functional equivalents thereof include nucleic acids that hybridize with such nucleic acids under stringent conditions.
本明細書中で用いられる用語「変異ｐ５３」とは、ｐ５３遺伝子の変異などに起因して、正常なｐ５３が有する腫瘍抑制活性が喪失または低減したｐ５３タンパク質をいい、これらの中には腫瘍増悪活性を有するものすら存在する。変異ｐ５３の多くは、野生型ｐ５３を構成するアミノ酸配列に１または複数のアミノ酸残基の置換を有しており、その結果、正常なｐ５３が有する腫瘍抑制活性が損なわれるものと考えられている（例えば、Ｍｕｌｌｅｒ ＰＡ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ．２５（３）：３０４−１７；２０１４を参照）。 As used herein, the term “mutant p53” refers to a p53 protein in which tumor suppressor activity of normal p53 is lost or reduced due to mutations in the p53 gene, etc. Some have activity. Many of mutant p53 have substitution of one or more amino acid residues in the amino acid sequence constituting wild-type p53, and as a result, it is considered that the tumor suppressive activity of normal p53 is impaired. (See, eg, Muller PA et al., Cancer Cell. 25 (3): 304-17; 2014).
本発明において用いられる変異ｐ５３の機能を回復させる物質は、処置を受けたがんの細胞内で正常なｐ５３が有する腫瘍抑制活性と同等の腫瘍抑制活性が発揮されるように変異ｐ５３および／またはそのシグナル伝達を変化させる物質であり、例えば、変異ｐ５３の野生型活性を回復させる剤、変異ｐ５３の分解を促進する剤および変異ｐ５３のシグナル伝達下流に作用する剤が知られている（前出のＭｕｌｌｅｒ ＰＡ ｅｔ ａｌ．を参照）。これらとしては、例えば、ｐ５３Ｃ末端ペプチド（例えば、Ｇａｌｉｎａ Ｓｅｌｉｖａｎｏｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．Ｍａｙ １９９９；１９（５）：３３９５−３４０２に記載されるペプチド４６）およびこれをコードする核酸、ＰＲＩＭＡ−１（ＣＡＳ番号５６０８−２４−２）、ＰＲＩＭＡ−１ＭＥＴ（ＡＰＲ−２４６とも呼ばれる、ＣＡＳ番号５２９１−３２−７）、ＣＰ−３１３９８（ＣＡＳ番号２５９１９９−６５−０）、ＳＣＨ５２９０７４（ＣＡＳ番号９２２１５０−１１−６）、ＳＴＩＭＡ−１（ＣＡＳ番号９１６３４−１２−７）、ＮＳＣ３１９２６（ＣＡＳ番号６３１９−８６−４）、ＰｈｉＫａｎ０８３（ＣＡＳ番号８８０８１３−３６−５）、ＰＫ７０８８、ＲＥＴＲＡ（ＣＡＳ番号１０３６０６９−２６−７）、Ｍｉｒａ−３（ＣＡＳ番号７４５０−６８−２）、エリプチシン（ＣＡＳ番号５１９−２３−３）、ＷＲ１０６５（ＣＡＳ番号１４６５３−７７−１）、およびこれらの誘導体、ならびにグリセロールおよびトリメチルアミンＮ−オキシドなどの化学シャペロンを限定することなく挙げることができる。当業者は、処置を受けるがんが有する変異ｐ５３の種類に応じて、これらの物質を適宜選択し、本発明におけるｐ５３を誘導する物質として使用することができる。 The substance that restores the function of the mutant p53 used in the present invention is a mutant p53 and / or a tumor suppressor activity equivalent to that of normal p53 in the treated cancer cells. Substances that change the signal transduction, for example, agents that restore the wild-type activity of mutant p53, agents that promote degradation of mutant p53, and agents that act downstream of signal transduction of mutant p53 are known (see above). Muller PA et al.). These include, for example, p53 C-terminal peptide (eg, peptide 46 described in Galina Selibanova et al., Mol Cell Biol. May 1999; 19 (5): 3395-3402) and the nucleic acid encoding it, PRIMA-1. (CAS number 5608-24-2), PRIMA-1 MET (also called APR-246, CAS number 5291-32-7), CP-31398 (CAS number 259199-65-0), SCH529074 (CAS number 922150-11) -6), STIMA-1 (CAS number 91634-12-7), NSC 31926 (CAS number 6319-86-4), PhiKan083 (CAS number 880813-36-5), PK7088, RETRA (CAS number 103) 069-26-7), Mira-3 (CAS number 7450-68-2), ellipticine (CAS number 519-23-3), WR1065 (CAS number 14653-77-1), and derivatives thereof, and glycerol and A chemical chaperone such as trimethylamine N-oxide can be mentioned without limitation. Those skilled in the art can appropriately select these substances according to the type of mutant p53 possessed by the cancer to be treated, and use them as substances that induce p53 in the present invention.
本発明におけるｐ５３を誘導する物質は、ｐ５３もしくはその機能的等価物または変異ｐ５３の機能を回復させる物質をコードする塩基配列を含む核酸を包含する。かかる核酸は、一般的な遺伝子工学的方法に従って作成し、適切な発現ベクターに組み込むことができる。発現ベクターは、転写発現を調節する任意の機能性塩基配列、例えばプロモーター配列、オペレーター配列、リボソーム結合部位、ポリアデニル化シグナル、エンハンサーなどをさらに含んでいてもよい。これらの機能性塩基配列は、上記核酸と機能的に連結され得る。 The substance that induces p53 in the present invention includes a nucleic acid containing a base sequence encoding a substance that restores the function of p53 or a functional equivalent thereof or mutant p53. Such a nucleic acid can be prepared according to a general genetic engineering method and incorporated into an appropriate expression vector. The expression vector may further contain any functional base sequence that regulates transcriptional expression, such as a promoter sequence, an operator sequence, a ribosome binding site, a polyadenylation signal, an enhancer, and the like. These functional base sequences can be operably linked to the nucleic acid.
遺伝子工学的方法としては、当業者に公知または周知の手法、例えば前出のＳａｍｂｒｏｏｋらその他の、当該技術分野の教科書またはハンドブックに記載され、当業者に広く利用されている手法を挙げることができる。また市販のキットや試薬を使用するときは、当該キットや試薬の製造者が定めたプロトコルおよび／またはパラメータに従うことが好ましい。 Examples of genetic engineering methods include methods known or well known to those skilled in the art, such as those described in the above-mentioned Sambrook et al., Other textbooks or handbooks in the technical field, and widely used by those skilled in the art. . In addition, when using a commercially available kit or reagent, it is preferable to follow the protocol and / or parameters defined by the manufacturer of the kit or reagent.
本発明におけるｐ５３および／またはｐ５３を誘導する物質がタンパク質である場合、一般的な遺伝子工学的方法に従って、前述の発現ベクターを原核生物または真核生物内に導入して組換えタンパク質を発現させ、これを必要に応じて精製して用いることができる。また、本発明において用いるタンパク質は、Ｆｍｏｃ法（フルオレニルメチルオキシカルボニル法）、ｔＢｏｃ法（ｔ−ブチルオキシカルボニル法）などの当業者に周知の化学合成法によって製造してもよい。 When the substance that induces p53 and / or p53 in the present invention is a protein, the expression vector is introduced into prokaryotic organisms or eukaryotic organisms according to a general genetic engineering method to express the recombinant protein, This can be purified and used as necessary. The protein used in the present invention may be produced by chemical synthesis methods well known to those skilled in the art, such as the Fmoc method (fluorenylmethyloxycarbonyl method) and the tBoc method (t-butyloxycarbonyl method).
なお、本明細書における「タンパク質」は、「ポリペプチド」と交換可能に用いられる。 In the present specification, “protein” is used interchangeably with “polypeptide”.
（３）核酸
本発明において用いられる核酸は、がんのｐ５３抵抗性を減弱させることができる核酸であり、具体的には、配列番号１〜２９の少なくともいずれか１に示される塩基配列を含むＤＮＡおよび／または該ＤＮＡによりコードされるＲＮＡである。これらの核酸は、その塩基配列から、ＲＮＡ干渉誘導性核酸であると推定される。
(3) Nucleic acid The nucleic acid used in the present invention is a nucleic acid that can attenuate p53 resistance of cancer, and specifically includes the base sequence shown in at least any one of SEQ ID NOs: 1 to 29. DNA and / or RNA encoded by the DNA. These nucleic acids are presumed to be RNA interference-inducing nucleic acids from their base sequences.
ＲＮＡ干渉誘導性核酸とは、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を誘導することができる核酸であり、好ましくはｓｉＲＮＡもしくはｓｈＲＮＡ、またはこれらをコードするＤＮＡをいう。 An RNA interference-inducing nucleic acid is a nucleic acid capable of inducing RNA interference (RNAi), and preferably refers to siRNA or shRNA or DNA encoding them.
ＲＮＡ干渉は、ｍＲＮＡと同一の核酸配列またはその部分配列を含む二本鎖構造のＲＮＡが当該ｍＲＮＡの発現を抑制する現象である。ｓｉＲＮＡは、相互に相補的な二本のＲＮＡ鎖から構成される。ｓｈＲＮＡは、ヘアピンループ構造を取ることができる一本鎖ＲＮＡであり、二本鎖構造を形成した後、細胞内のＤｉｃｅｒにより認識、切断されて対応するｓｉＲＮＡを生じる。この二本鎖構造のＲＮＡは、好ましくは少なくとも２０以上の連続する標的ｍＲＮＡと同一の核酸配列またはその部分配列を有する。 RNA interference is a phenomenon in which RNA having a double-stranded structure containing the same nucleic acid sequence as mRNA or a partial sequence thereof suppresses the expression of the mRNA. siRNA is composed of two RNA strands complementary to each other. shRNA is a single-stranded RNA that can take a hairpin loop structure. After forming a double-stranded structure, it is recognized and cleaved by Dicer in the cell to produce a corresponding siRNA. This double-stranded RNA preferably has at least 20 or more consecutive nucleic acid sequences identical to the target mRNA or a partial sequence thereof.
本発明における核酸がｓｉＲＮＡである場合、このｓｉＲＮＡは、配列番号１〜２８の少なくともいずれか１に示される塩基配列を含むＤＮＡによりコードされるＲＮＡ鎖と、このＲＮＡ鎖と相補的な塩基配列を有する相補的ＲＮＡ鎖とがアニールして形成される。また、本発明における核酸がｓｈＲＮＡである場合、このｓｈＲＮＡは、配列番号１〜２８の少なくともいずれか１に示される塩基配列を含むＤＮＡによりコードされるＲＮＡ鎖と、このＲＮＡ鎖と相補的な塩基配列を有する相補的ＲＮＡ鎖とが、ヘアピンループを形成することができる一本鎖ＲＮＡ部分によって連結された構造を取り、その一例は配列番号２９に示される塩基配列を有するＤＮＡによりコードされるｓｈＲＮＡである。 When the nucleic acid in the present invention is siRNA, the siRNA has an RNA strand encoded by a DNA comprising the base sequence represented by at least any one of SEQ ID NOs: 1 to 28 and a base sequence complementary to the RNA strand. It is formed by annealing with a complementary RNA strand. Moreover, when the nucleic acid in the present invention is shRNA, the shRNA is composed of an RNA strand encoded by a DNA containing the base sequence represented by at least any one of SEQ ID NOs: 1 to 28 and a base complementary to the RNA strand. ShRNA encoded by a DNA having a base sequence shown in SEQ ID NO: 29, which has a structure in which a complementary RNA strand having a sequence is linked by a single-stranded RNA portion capable of forming a hairpin loop. It is.
ここで、配列番号１に示される塩基配列を含むＤＮＡに由来するｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡは、その配列に基づくＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴサーチによると、ＡＰ−２γ（ＴＦＡＰ２Ｃ）を標的とし、そのｍＲＮＡを特異的にノックダウンすることができるものと推定される。したがって、本発明における核酸は、配列番号１に示される塩基配列を含むＤＮＡおよびこれによりコードされるＲＮＡのみならず、ＡＰ−２γを標的とするＲＮＡ干渉誘導性核酸をも包含し得るものと理解される。しかしながら、このことは、他の標的分子の存在を排除するものではない。 Here, siRNA or shRNA derived from DNA containing the base sequence shown in SEQ ID NO: 1 targets AP-2γ (TFAP2C) and specifically knocks down its mRNA according to NCBI BLAST search based on that sequence. It is estimated that it can be done. Therefore, it is understood that the nucleic acid in the present invention can include not only DNA containing the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 1 and RNA encoded thereby, but also RNA interference-inducing nucleic acid targeting AP-2γ. Is done. However, this does not exclude the presence of other target molecules.
ｓｉＲＮＡおよびｓｈＲＮＡの二本鎖ＲＮＡ部分は、ＲＮＡ干渉を誘導できる限り長さに特に制限はないが、例えば、１５〜４５塩基の長さ、好ましくは１９〜４０塩基の長さ、より好ましくは２１〜３０塩基の長さである。 The length of the double-stranded RNA portion of siRNA and shRNA is not particularly limited as long as RNA interference can be induced. For example, the length is 15 to 45 bases, preferably 19 to 40 bases, more preferably 21. It is ~ 30 bases long.
ＲＮＡ干渉誘導性核酸は、センス鎖およびアンチセンス鎖の一方または双方の５’末端および／または３’末端において、１または数個（例として１、２または３個）の塩基の付加により形成されるオーバーハング配列を有していてもよい。 RNA interference-inducing nucleic acids are formed by the addition of one or several (eg, 1, 2 or 3) bases at the 5 ′ end and / or 3 ′ end of one or both of the sense strand and the antisense strand. May have an overhang arrangement.
上記のように、本発明における核酸は、好ましくは、ＲＮＡ干渉誘導性核酸である。しかしながら、配列番号１〜２９の少なくともいずれか１に示される塩基配列を含むＤＮＡおよび／または該ＤＮＡによりコードされるＲＮＡであるかぎり、ＲＮＡ干渉を誘導しない核酸もまた本発明に包含される。 As described above, the nucleic acid in the present invention is preferably an RNA interference-inducing nucleic acid. However, a nucleic acid that does not induce RNA interference is also encompassed by the present invention as long as it is DNA comprising the base sequence shown in at least any one of SEQ ID NOs: 1 to 29 and / or RNA encoded by the DNA.
さらに、本発明における核酸は、以下のＤＮＡ、および該ＤＮＡによりコードされるＲＮＡを包含する。
１）配列番号１〜２９の少なくともいずれか１に示される塩基配列と少なくとも約８０％以上、好ましくは少なくとも約８５％以上、より好ましくは少なくとも約９０％以上、最も好ましくは少なくとも約９５％以上の同一性を有する塩基配列を含むＤＮＡであって、がんのｐ５３抵抗性を減弱させることができるＤＮＡ。
２）配列番号１〜２９の少なくともいずれか１に示される塩基配列において１または複数の塩基を付加し、欠失させまたは置換した塩基配列を含むＤＮＡであって、がんのｐ５３抵抗性を減弱させることができるＤＮＡ。
３）配列番号１〜２９の少なくともいずれか１に示される塩基配列を含むＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡであって、がんのｐ５３抵抗性を減弱させることができるＤＮＡ。
Furthermore, the nucleic acid in the present invention includes the following DNA and RNA encoded by the DNA.
1) at least about 80% or more, preferably at least about 85% or more, more preferably at least about 90% or more, and most preferably at least about 95% or more with the nucleotide sequence shown in at least any one of SEQ ID NOs: 1 to 29 DNA comprising a nucleotide sequence having identity, which can attenuate p53 resistance of cancer.
2) DNA comprising a base sequence in which one or more bases are added, deleted or substituted in at least any one of SEQ ID NOs: 1 to 29, and attenuates p53 resistance of cancer DNA that can be allowed to.
3) A DNA that hybridizes under stringent conditions with a DNA comprising the base sequence represented by at least any one of SEQ ID NOs: 1 to 29, and that can attenuate the p53 resistance of cancer.
本発明において用いられる核酸は、ヌクレアーゼによる分解に対する安定性を向上させるため、２’Ｏ−メチル化、２’−Ｆ化、４’−チオ化などの修飾を行ってもよい。また、ＲＮＡ鎖を構成するリボヌクレオチドの一部が、対応するデオキシリボヌクレオチドまたはヌクレオチド類似体に置き換えられたキメラＲＮＡもまた、本発明の範囲内にある。ヌクレオチド類似体としては、例えば、５位修飾ウリジンまたはシチジン、例えば５‐（２‐アミノ）プロピルウリジン、５‐ブロモウリジンなど；８位修飾アデノシンまたはグアノシン、例えば８‐ブロモグアノシンなど；デアザヌクレオチド、例えば７−デアザ−アデノシンなど；Ｏ−またはＮ−アルキル化ヌクレオチド、例えばＮ６−メチルアデノシンなどを挙げることができる。 The nucleic acid used in the present invention may be modified such as 2'O-methylation, 2'-F formation, 4'-thiolation, etc. in order to improve stability against degradation by nuclease. Also within the scope of the invention are chimeric RNAs in which a portion of the ribonucleotides that make up the RNA strand are replaced by corresponding deoxyribonucleotides or nucleotide analogs. Nucleotide analogs include, for example, 5-position modified uridine or cytidine, such as 5- (2-amino) propyluridine, 5-bromouridine, etc .; 8-position modified adenosine or guanosine, such as 8-bromoguanosine; Mention may be made, for example, of 7-deaza-adenosine; O- or N-alkylated nucleotides, such as N6-methyladenosine.
本発明において用いられる核酸がＤＮＡである場合、かかるＤＮＡは、一般的な遺伝子工学的方法に従って作成して、適切な発現ベクターに組み込むことができる。発現ベクターは、転写発現を調節する任意の機能性塩基配列、例えばＰｏｌ ＩＩＩプロモーターなどのプロモーター配列、オペレーター配列、リボソーム結合部位、ポリアデニル化シグナル、エンハンサーなどをさらに含んでいてもよい。これらの機能性塩基配列は、上記核酸と機能的に連結され得る。 When the nucleic acid used in the present invention is DNA, such DNA can be prepared according to a general genetic engineering method and incorporated into an appropriate expression vector. The expression vector may further contain any functional base sequence that regulates transcriptional expression, for example, a promoter sequence such as a Pol III promoter, an operator sequence, a ribosome binding site, a polyadenylation signal, an enhancer, and the like. These functional base sequences can be operably linked to the nucleic acid.
かかるＤＮＡは生体に投与された後、生体内での転写により生じた２本のＲＮＡ鎖がハイブリダイズしてｓｉＲＮＡを形成するか、または一本のＲＮＡ鎖がヘアピンループ構造を有するｓｈＲＮＡを形成する。 After such DNA is administered to a living body, two RNA strands generated by transcription in the living body hybridize to form siRNA, or one RNA strand forms shRNA having a hairpin loop structure. .
本発明において用いられる核酸を含む核酸構築物、およびこれを含むベクターもまた、本発明の範囲内にある。また、本発明において２以上の核酸を用いる場合、これらの核酸は単一の発現ベクターに組み込んでもよく、２以上のベクターに別々に組み込んでもよい。 Nucleic acid constructs containing the nucleic acids used in the present invention and vectors containing the same are also within the scope of the invention. Further, when two or more nucleic acids are used in the present invention, these nucleic acids may be incorporated into a single expression vector or separately into two or more vectors.
（４）ｐ５３のみによる処置に抵抗性を有するがんを処置するための医薬
本発明の医薬は、任意の腫瘍およびがんの処置に用いることが可能であるが、特に好ましくはｐ５３のみによる処置に抵抗性を有するがんの処置に用いられる。
(4) Medicament for treating cancer resistant to treatment with p53 alone The medicament of the present invention can be used for the treatment of any tumor and cancer, particularly preferably treatment with p53 alone Used to treat cancer that is resistant to.
本明細書中で用いられる「ｐ５３のみによる処置に抵抗性を有するがん」とは、ｐ５３もしくはその機能的等価物またはこれらをコードする核酸による処置によって、治療効果が全く認められないか、または治療効果が不十分であるがんをいう。かかる抵抗性は、細胞内でＭＤＭ２が正常なｐ５３を分解するため、または変異ｐ５３が有するドミナントネガティブ効果により正常なｐ５３の活性が抑制されるために生ずるものと推測されている。したがって、ｐ５３のみによる処置に抵抗性を有するがんは、ｐ５３の分解が亢進されているがん、および変異ｐ５３を有するがんを包含する。 As used herein, “cancer resistant to treatment with p53 alone” means that no therapeutic effect is observed by treatment with p53 or a functional equivalent thereof or a nucleic acid encoding them, or Refers to cancer that has insufficient therapeutic effect. Such resistance is presumed to occur because MDM2 degrades normal p53 in cells or because normal p53 activity is suppressed by the dominant negative effect of mutant p53. Thus, cancers that are resistant to treatment with p53 alone include cancers with enhanced p53 degradation and cancers with mutant p53.
なお、本明細書において「ｐ５３のみによる処置に抵抗性を有するがん」および「ｐ５３抵抗性のがん」は交換可能に用いられる。 In the present specification, “cancer resistant to treatment with p53 alone” and “cancer resistant to p53” are used interchangeably.
本発明の医薬がｐ５３のみによる処置に抵抗性を有するがんの処置に用いられる場合、上述の核酸が抵抗性に関与する遺伝子をノックダウンして抵抗性を減弱させ、その結果、ｐ５３の活性が増強されて、がんの治療が達成されるものと考えられる。 When the medicament of the present invention is used for the treatment of cancer having resistance to treatment with p53 alone, the above-mentioned nucleic acid knocks down the gene involved in the resistance to attenuate the resistance, and as a result, the activity of p53 It is thought that cancer treatment will be achieved.
本明細書において用いられる「処置」は、疾患の治癒、一時的寛解または予防などを目的とする医学的に許容される全てのタイプの予防的および／または治療的介入を包含する。すなわちがんの処置とは、がんの進行の遅延または停止、病変の退縮または消失、発症の予防または再発の防止などを含む、種々の目的の医学的に許容される介入を包含する。 “Treatment” as used herein encompasses all types of medically acceptable prophylactic and / or therapeutic interventions intended to cure, temporarily ameliorate or prevent disease. That is, cancer treatment includes medically acceptable interventions for various purposes, including delaying or stopping cancer progression, regression or disappearance of lesions, prevention of onset or prevention of recurrence, and the like.
なお、本明細書における「がん」は、「悪性腫瘍」「腫瘍」と交換可能に用いられる。 In the present specification, “cancer” is used interchangeably with “malignant tumor” and “tumor”.
本発明の別の実施形態は、ｐ５３および／またはｐ５３を誘導する物質と上述の核酸とを含有する、ｐ５３のみによる処置に抵抗性を有するがんを処置するための医薬を提供する。 Another embodiment of the present invention provides a medicament for treating cancer resistant to treatment with p53 alone, comprising p53 and / or a substance that induces p53 and the nucleic acid described above.
処置を受けるがんがｐ５３を十分に発現している場合、核酸は単独で対象に投与することができる。投与された核酸は、対象内でかかる内因性ｐ５３と組み合わされて、がんを処置するための医薬としての効果を発揮する。一方、ｐ５３が存在しないもしくは発現量が減少している、または変異ｐ５３を発現しているがんを処置する場合、核酸は、好ましくは、外因性のｐ５３および／またはｐ５３を誘導する物質と組み合わせて対象に投与される。 A nucleic acid can be administered to a subject alone if the cancer being treated fully expresses p53. The administered nucleic acid is combined with such endogenous p53 in the subject to exert a pharmaceutical effect for treating cancer. On the other hand, when treating cancers in which p53 is absent or expressed in a reduced amount, or expressing mutant p53, the nucleic acid is preferably combined with exogenous p53 and / or a substance that induces p53. Administered to the subject.
本発明の医薬は、ｐ５３を活性化する処置とさらに組み合わせて使用することもできる。ｐ５３の活性化は、ＤＮＡ損傷、がん遺伝子の活性化、紡錘体損傷および低酸素状態などの様々な細胞ストレスにより誘導されることが知られている。したがって、かかる処置は、細胞にこのようなストレスを付与する処置であり、例えば放射線治療および抗がん剤を用いた化学療法を挙げることができる。 The medicament of the present invention can also be used in combination with a treatment that activates p53. It is known that p53 activation is induced by various cellular stresses such as DNA damage, oncogene activation, spindle damage and hypoxia. Therefore, such treatment is treatment that imparts such stress to cells, and examples thereof include radiotherapy and chemotherapy using an anticancer agent.
本発明の医薬と組み合わせることができる放射線治療は、例えば、Ｘ線、γ線、重粒子線、陽子線などの放射線を用いたものである。 The radiotherapy that can be combined with the medicament of the present invention uses, for example, radiation such as X-rays, γ-rays, heavy particle beams, and proton beams.
また、本発明の医薬と組み合わせることができる化学療法に用いられる抗がん剤は、例えば、アルキル化剤、例えばシクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、ブスルファン、チオテパ、ニムスチン、ラニムスチン、ダカルバシン、プロカルバシン、テモゾロマイド、ベンダムスチンなど；白金製剤、例えばシスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチンなど；代謝拮抗剤、例えば５−フルオロウラシル、フルシトシン、メソトレキセート、６−メルカプトプリン、アザチオプリン、ヒドロキシウレア、チオグアニン、リン酸フルダラビン、クラドリビン、シタラビン、ゲムシタビンなど；トポイソメラーゼ阻害剤、例えばカンプトテシン、イリノテカン、ノギテカン、アドリアマイシン（ドキソルビシン）、エトポシド（ＶＰ−１６）、レボフロキサシン、シプロフロキサシンなど；微小管重合阻害剤、例えばビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンなど；微小管脱重合阻害剤、例えばパクリタキセル、ドセタキセルなど；抗腫瘍性抗生物質、例えばマイトマイシンＣ、エピルビシン、ダウノルビシン、ブレオマイシンなどである。 Anticancer agents used for chemotherapy that can be combined with the medicament of the present invention include, for example, alkylating agents such as cyclophosphamide, ifosfamide, melphalan, busulfan, thiotepa, nimustine, ranimustine, dacarbacin, procarbacin , Temozolomide, bendamustine, etc .; platinum preparations such as cisplatin, carboplatin, oxaliplatin, nedaplatin, etc .; antimetabolites such as 5-fluorouracil, flucytosine, methotrexate, 6-mercaptopurine, azathioprine, hydroxyurea, thioguanine, fludarabine phosphate, cladribine , Cytarabine, gemcitabine, etc .; topoisomerase inhibitors such as camptothecin, irinotecan, nogitecan, adriamycin (doxorubicin), Toposide (VP-16), levofloxacin, ciprofloxacin and the like; microtubule polymerization inhibitors such as vinblastine, vincristine and vindesine; microtubule depolymerization inhibitors such as paclitaxel and docetaxel; antitumor antibiotics such as mitomycin C, epirubicin, daunorubicin, bleomycin and the like.
当業者は、ｐ５３を十分に活性化できる処置の条件を、ｐ５３のみによる処置が有効ながんの場合の処置条件を参照することなどにより、適宜設定することができ、例えば、化学療法の場合は使用する抗がん剤の種類、投与量、投与回数などを、放射線治療の場合は使用する核種、照射線量、照射スケジュールなどを、適宜決定することができる。 Those skilled in the art can appropriately set treatment conditions that can sufficiently activate p53 by referring to treatment conditions in the case of cancer for which treatment with p53 alone is effective. For example, in the case of chemotherapy Can appropriately determine the type, dose, number of doses, and the like of the anticancer agent to be used, and in the case of radiotherapy, the nuclide to be used, the irradiation dose, the irradiation schedule, etc.
本発明の医薬は、これらの処置によりｐ５３が活性化されている状態のがんに対して用いられ、その結果、より強い効果が発揮される。 The medicament of the present invention is used for cancer in which p53 is activated by these treatments, and as a result, a stronger effect is exhibited.
なお、本明細書中で、医薬または処置を組み合わせて投与または使用すると表現する場合、それぞれの医薬または処置を同時に投与または使用すること、および逐次的に投与または使用することのいずれもが包含される。 In addition, in this specification, when it is expressed that a medicine or treatment is administered or used in combination, it includes both simultaneous administration or use of each medicine or treatment and sequential administration or use. The
本発明の他の実施形態は、ｐ５３および／またはｐ５３を誘導する物質と核酸とを組み合わせた医薬の有効量を対象に投与することを含む、ｐ５３のみによる処置に抵抗性を有するがんを処置する方法も提供する。 Another embodiment of the present invention treats cancer resistant to treatment with p53 alone, comprising administering to a subject an effective amount of a pharmaceutical agent comprising a combination of p53 and / or a substance that induces p53 and a nucleic acid. It also provides a way to do this.
本明細書中で用いられる「対象」とは、がんに罹患し得る任意の動物を意味し、好ましくは哺乳動物の個体、例えば、ヒト、チンパンジーなどの霊長類、マウス、ラット、モルモット、ハムスターなどの齧歯類、ウシ、ヤギ、ヒツジなどの偶蹄目、ウマなどの奇蹄目、ウサギ、イヌ、ネコなどの個体であり、さらに好ましくはヒトの個体である。 As used herein, “subject” means any animal that can suffer from cancer, preferably a mammal individual, for example, a human, a primate such as a chimpanzee, a mouse, a rat, a guinea pig, a hamster. Rodents such as cattle, goats and sheep, cloven hoofed eyes such as horses, individuals such as rabbits, dogs and cats, and more preferably human individuals.
また「有効量」とは、ｐ５３のみによる処置に抵抗性を有するがんを処置するのに効果的な量を意味する。かかる有効量はがんの種類、症状の重症度、患者その他の医学的要因によって適宜調節される。 “Effective amount” means an amount effective to treat cancer resistant to treatment with p53 alone. The effective amount is appropriately adjusted according to the type of cancer, the severity of symptoms, the patient and other medical factors.
本発明の医薬は、経口製剤または非経口製剤のいずれの形態であってもよいが、注射剤、点滴剤などの非経口製剤の形態で用いるのが好ましい。非経口製剤に用いることができる担体としては、例えば、生理食塩水や、ブドウ糖、Ｄ−ソルビトールなどを含む等張液といった細胞製剤において通常用いられる水性担体が挙げられる。 The medicament of the present invention may be in the form of an oral preparation or a parenteral preparation, but is preferably used in the form of a parenteral preparation such as an injection or infusion. Examples of carriers that can be used in parenteral preparations include aqueous carriers that are usually used in cell preparations such as physiological saline, isotonic solutions containing glucose, D-sorbitol, and the like.
本発明の医薬はさらに、薬学的に許容される緩衝剤、安定剤、保存剤その他の成分を含んでもよい。薬学的に許容される成分は当業者において周知であり、当業者が通常の実施能力の範囲内で、例えば第十六改正日本薬局方その他の規格書に記載された成分から製剤の形態に応じて適宜選択して使用することができる。 The medicament of the present invention may further contain pharmaceutically acceptable buffers, stabilizers, preservatives and other components. Pharmaceutically acceptable ingredients are well known to those skilled in the art, and those skilled in the art can use the ingredients from the ingredients described in the 16th revised Japanese Pharmacopoeia and other standards within the scope of their normal performance. Can be selected and used as appropriate.
また、本発明の医薬は、高分子ミセル、リポソーム、エマルジョン、マイクロスフェアおよびナノスフェアなどの適切なＤＤＳに封入および／または固定することもできる。 The medicament of the present invention can also be encapsulated and / or fixed in a suitable DDS such as polymer micelles, liposomes, emulsions, microspheres and nanospheres.
本発明の医薬の投与方法は、特に制限されないが、非経口製剤である場合は、例えば血管内投与（好ましくは静脈内投与）、腹腔内投与、腸管内投与、腫瘍内またはその近傍への局所投与などを挙げることができる。好ましい態様の一つにおいて、本発明の医薬は、静脈内投与または腫瘍内もしくはその近傍への局所投与により対象に投与される。また、本発明の医薬は、処置されるがんに応じて、その他の医薬と併用して使用してもよい。 The administration method of the pharmaceutical agent of the present invention is not particularly limited. However, in the case of a parenteral preparation, for example, intravascular administration (preferably intravenous administration), intraperitoneal administration, intestinal administration, local in the tumor or in the vicinity thereof. Administration etc. can be mentioned. In one of the preferred embodiments, the medicament of the present invention is administered to a subject by intravenous administration or local administration in or near a tumor. The medicament of the present invention may be used in combination with other medicaments depending on the cancer to be treated.
また、本発明の医薬に含まれる核酸は、任意の既知の細胞導入手法、例えばリン酸カルシウム法、リポフェクション法、超音波導入法、エレクトロポレーション法、パーティクルガン法、ウイルスベクター（例えば、アデノウイルスベクターまたはレトロウイルスベクターなど）を利用する方法、またはマイクロインジェクション法などを用いることによって、処置されるがんの細胞内に導入され得る。 The nucleic acid contained in the medicament of the present invention may be any known cell introduction method such as calcium phosphate method, lipofection method, ultrasonic introduction method, electroporation method, particle gun method, virus vector (for example, adenovirus vector or It can be introduced into the cancer cells to be treated by using a retroviral vector or the like, or using a microinjection method or the like.
ウイルスベクターを利用する場合、その用量範囲は、例えば、ヒト対象１人あたり、１×１０３〜１×１０１４、好ましくは１×１０５〜１×１０１２、より好ましくは１×１０６〜１×１０１１、最も好ましくは１×１０７〜１×１０１０のプラーク形成単位（ｐ．ｆ．ｕ．）であることができる。 When viral vectors are utilized, the dosage range is, for example, 1 × 10 3 to 1 × 10 14 , preferably 1 × 10 5 to 1 × 10 12 , more preferably 1 × 10 6 to 1 per human subject. It may be 1 × 10 11 , most preferably 1 × 10 7 to 1 × 10 10 plaque forming units (pf).
以下、非限定的な実施例によって本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は、本明細
書に記載の特定の方法論、プロトコル、細胞株、動物種および属、コンストラクトならびに試薬に限定されるものではなく、これらは適宜変更することができるものであることは当業者に容易に理解されるものである。
The invention will now be described in more detail by way of non-limiting examples, but the invention is limited to the specific methodologies, protocols, cell lines, animal species and genera, constructs and reagents described herein. However, those skilled in the art can easily understand that these can be appropriately changed.
＜方法および材料＞
細胞培養
ヒト肝がん細胞株Ｈｕｈ−７、膵がん細胞株Ｐａｎｃ−１および大腸がん細胞株ＳＷ４８０は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから購入した。Ｈｕｈ−７細胞、Ｐａｎｃ−１細胞およびＳＷ４８０細胞は、それぞれ、１０％ ＦＣＳを添加したＤＭＥＭ、ＲＰＭＩ−１６４０およびＬｅｉｂｏｖｉｔｚ Ｌ−１５培地中で培養した。
<Method and Material>
Cell culture human liver cancer cell line Huh-7, pancreatic cancer cell line Panc-1 and colon cancer cell line SW480 were purchased from American Type Culture Collection. Huh-7 cells, Panc-1 cells and SW480 cells were cultured in DMEM, RPMI-1640 and Leibovitz L-15 medium supplemented with 10% FCS, respectively.
組換えアデノウイルス
ｐ５３遺伝子またはｌａｃＺ遺伝子を組み込んだ複製欠損組換えアデノウイルス（それぞれＡｄ−ｐ５３、Ａｄ−ＬａｃＺ）の構築、精製および感染は、非特許文献５に記載されるように行った。簡潔には、組換えアデノウイルスは、ＶｉｒａＰｏｗｅｒ Ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、製造者のプロトコルに従って作製した。ｐＤＯＮＲ２２１の組換え領域を、ｉｎ ｖｉｔｒｏ組換え反応で、Ｇａｔｅｗａｙ Ｖｅｃｔｏｒ ｐＡｄ／ＣＭＶ／Ｖ５−ＤＥＳＴにトランスファーした。このようにしてｐＡｄ／ＣＭＶ／Ｖ５−ＤＥＳＴから生成した組換えアデノウイルスプラスミドで、コンピテントＤＨ５α（ＴＯＹＯＢＯ）を形質転換した。選択後、ＤＨ５αの単一のクローンを単離し、拡張した。組換えアデノウイルスプラスミドを精製し、次いで２９３Ａ細胞にトランスフェクトした。２９３Ａ細胞に十分な細胞変性効果が認められた後、アデノウイルスをＡｄｅｎｏ−Ｘ Ｖｉｒｕｓ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（クロンテック）を用いて精製した。ｐ．ｆ．ｕ．表示でのアデノウイルス力価は、ＨＥＫ２９３細胞の感染後のプラーク形成アッセイで決定した。感染多重度（Ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ；ＭＯＩ）は、感染した細胞の総数に対する、ｐ．ｆ．ｕ．の総数の比率として定義した。実験の再現性を確認するために、重複サンプルからアデノウイルスを滴定した。
Construction, purification, and infection of replication-deficient recombinant adenoviruses incorporating Adenovirus p53 gene or lacZ gene (Ad-p53 and Ad-LacZ, respectively) were performed as described in Non-Patent Document 5. Briefly, recombinant adenoviruses were generated using the ViraPower Adenoviral Expression System (Invitrogen) according to the manufacturer's protocol. The recombination region of pDONR221 was transferred to Gateway Vector pAd / CMV / V5-DEST in an in vitro recombination reaction. Competent DH5α (TOYOBO) was transformed with the recombinant adenovirus plasmid thus generated from pAd / CMV / V5-DEST. After selection, a single clone of DH5α was isolated and expanded. The recombinant adenoviral plasmid was purified and then transfected into 293A cells. Adenovirus was purified using Adeno-X Virus Purification Kit (Clontech) after sufficient cytopathic effect was observed in 293A cells. p. f. u. The indicated adenovirus titer was determined in a plaque formation assay after infection of HEK293 cells. The multiplicity of infection (MOI) is the p. f. u. Defined as the ratio of the total number of. To confirm the reproducibility of the experiment, adenovirus was titrated from duplicate samples.
＜実施例１ ｐ５３抵抗性がん細胞におけるゲノム網羅的スクリーニングによるｐ５３誘導性アポトーシスを増強するｓｈＲＮＡの取得＞
がん細胞におけるｐ５３誘導性アポトーシスへの抵抗性を減弱させ得るｓｈＲＮＡを同定するため、肝がん細胞株Ｈｕｈ−７および膵がん細胞株Ｐａｎｃ−１においてアレイべースのゲノム網羅的レンチウイルスｓｈＲＮＡライブラリースクリーニングを行った。スクリーニングの概要を図１に示す。Ｈｕｈ−７細胞株およびＰａｎｃ−１細胞株は変異ｐ５３を有し、野生型ｐ５３導入によって弱いアポトーシス応答を示す。ヒトｓｈＲＮＡライブラリーは、４７，４００個のヒトｍＲＮＡ転写産物を標的とする約２００，０００個のｓｈＲＮＡ配列を含んでおり、レンチウイルス粒子内にパッケージングされ、プールされたものであった。このｓｈＲＮＡライブラリーにおいて、各レンチウイルスベクターｓｈＲＮＡ配列は、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘマイクロアレイ（ＧｅｎｅＣｈｉｐ）上のプローブ配列に対応する。したがって、ｓｈＲＮＡ集団をｃＤＮＡマイクロアレイで定量することで、各ｓｈＲＮＡの発現レベルを決定することができる。
<Example 1 Acquisition of shRNA that enhances p53-induced apoptosis by genome-wide screening in p53-resistant cancer cells>
To identify shRNA that can attenuate resistance to p53-induced apoptosis in cancer cells, an array-based genome-wide lentivirus in the hepatoma cell line Huh-7 and pancreatic cancer cell line Panc-1 shRNA library screening was performed. The outline of screening is shown in FIG. Huh-7 and Panc-1 cell lines have a mutant p53 and show a weak apoptotic response upon introduction of wild-type p53. The human shRNA library contained approximately 200,000 shRNA sequences targeting 47,400 human mRNA transcripts and was packaged and pooled within lentiviral particles. In this shRNA library, each lentiviral vector shRNA sequence corresponds to a probe sequence on an Affymetrix microarray (GeneChip). Therefore, the expression level of each shRNA can be determined by quantifying the shRNA population with a cDNA microarray.
ｓｈＲＮＡライブラリーのスクリーニングは、製造者のプロトコルに従って行った。簡潔には、１０ｃｍプレートに３×１０６個のＨｕｈ−７細胞およびＰａｎｃ−１細胞を播種し、２４時間後、ＧｅｎｅＮｅｔ ｓｉＲＮＡ Ｌｉｂｒａｒｙ（Ｓｙｓｔｅｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）のレンチウイルス粒子を細胞に感染させた。レンチウイルス感染から７２時間後、Ａｄ−ｐ５３またはＡｄ−ＬａｃＺをＭＯＩ５０で細胞に感染させた。アデノウイルス感染から４８時間後、ＴＲＩＺｏｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して全ＲＮＡを抽出し、抽出したＲＮＡからｃＤＮＡを合成した。ビオチン標識したプライマーを用いてＰＣＲを２ラウンド行って、ｓｉＲＮＡインサートをｃＤＮＡから増幅した。次いでλエキソヌクレアーゼでＰＣＲ産物を処理し、ビオチン標識されていないセンス鎖を除去した。１０μｇのビオチン標識試料をＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ＧｅｎｅＣｈｉｐマイクロアレイ（ＨＧ−Ｕ１３３＋２．０）にハイブリダイズさせた。取得したデータは、ＧｅｎｅＮｅｔ ｓｉＲＮＡ Ｌｉｂｒａｒｙ Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｓｙｓｔｅｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して解析した。 Screening of the shRNA library was performed according to the manufacturer's protocol. Briefly, 3 × 10 6 Huh-7 and Panc-1 cells were seeded in 10 cm plates, and 24 hours later, the cells were infected with lentiviral particles from GeneNet siRNA Library (System Biosciences). 72 hours after lentiviral infection, cells were infected with MO-50 with Ad-p53 or Ad-LacZ. 48 hours after infection with adenovirus, total RNA was extracted using TRIZol (Invitrogen), and cDNA was synthesized from the extracted RNA. Two rounds of PCR were performed using biotin-labeled primers to amplify siRNA inserts from cDNA. The PCR product was then treated with λ exonuclease to remove the sense strand not labeled with biotin. 10 μg of biotin labeled sample was hybridized to an Affymetrix GeneChip microarray (HG-U133 + 2.0). The acquired data was analyzed using GeneNet siRNA Library Data Analysis Software (System Biosciences).
マイクロアレイでの定量によって、コントロール細胞と比較してｐ５３導入細胞において顕著に減少したｓｈＲＮＡを同定した。いくつかのｓｈＲＮＡが、ｐ５３誘導性アポトーシスに抵抗性のがん細胞へのｐ５３導入によりアポトーシス性応答を引き起こした。Ｈｕｈ−７細胞では、コントロール細胞と比較してｐ５３導入細胞において４倍より大きく減少したｓｈＲＮＡが５４７個あった。Ｐａｎｃ−１細胞では、コントロール細胞と比較してｐ５３導入細胞において１６倍より大きく減少したｓｈＲＮＡが１４１８個あった（図２Ａ、破線で囲まれた領域）。両細胞株で共通して減少していた２８個のｓｈＲＮＡ（図２Ｂ）について、そのｓｉＲＮＡセンス鎖をコードする塩基配列を表１に示す。
これらのｓｈＲＮＡのうち、ｓｈＲＮＡ−５８３３５がｐ５３存在下で著しく減少していた（Ｈｕｈ−７細胞で６６倍、Ｐａｎｃ−１細胞で４３６倍）。以下、このｓｈＲＮＡ−５８３３５についてさらなる評価を行った。 Of these shRNAs, shRNA-58335 was markedly reduced in the presence of p53 (66-fold for Huh-7 cells and 436-fold for Panc-1 cells). Hereinafter, this shRNA-58335 was further evaluated.
＜実施例２ ｓｈＲＮＡ−５８３３５によるｐ５３誘導性アポトーシスの増強＞
ｓｈＲＮＡ−５８３３５を発現するレンチウイルスまたはコントロール配列を発現するレンチウイルスをＨｕｈ−７細胞に感染させて安定発現させ、Ｓｕｂ−Ｇ１期の細胞集団を評価することでｐ５３誘導性アポトーシスを定量化した。
<Example 2 Enhancement of p53-induced apoptosis by shRNA-58335>
p53-induced apoptosis was quantified by infecting Huh-7 cells stably with lentivirus expressing shRNA-58335 or lentivirus expressing control sequences, and evaluating sub-G 1 phase cell populations. .
Ｈｕｈ−７細胞に、ｓｈＲＮＡ−５８３３５（５’−ＴＧＧＣＧＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＴＧＴＧＴＡＡＡＧＡＡＴＣＴＴＣＣＴＧＴＣＡＧＡＡＴＴＣＴＴＴＡＣＡＣＡＧＴＴＧＣＴＧＧＧＣＣＧＣＣＡ−３’（配列番号２９））またはルシフェラーゼコントロールｓｈＲＮＡ（５’−ＧＴＧＣＧＴＴＧＴＴＡＧＴＡＣＴＡＡＴＣＣＴＡＴＴＴＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＴＧＡＡＡＴＡＧＧＧＴＴＧＧＴＡＣＴＡＧＣＡＡＣＧＣＡＣ−３’（配列番号３０））を発現するレンチウイルス（ｐＳＩＨ−Ｈ１−ｐｕｒｏ）を感染させた。感染から２４時間後、ピューロマイシン（２μｇ／ｍｌ）を含有する培地で細胞を培養し、選択されたピューロマイシン抵抗性細胞をｓｈＲＮＡ安定発現Ｈｕｈ−７細胞として、以下の試験に用いた。 In Huh-7 cells, shRNA-58335 (5'-TGGCGGCCCAGCAACTGTGTAAAGAATCTTCCTGTCAGAATTCTTTACACAGTTGCTGGGCCGCCA-3 '(SEQ ID NO: 29)) or luciferase control shRNA (5'-GTGCGTTGTTAGTACTAATCCTATTTGTGAAGCAGATGAAATAGGGTTGGTACTAGCAACGCAC-3' (SEQ ID NO: 30)) lentiviruses expressing (pSIH-H1 -Puro). Twenty-four hours after infection, the cells were cultured in a medium containing puromycin (2 μg / ml), and the selected puromycin-resistant cells were used as shRNA stably expressing Huh-7 cells in the following tests.
ｓｈＲＮＡ安定発現Ｈｕｈ−７細胞にＡｄ−ｐ５３またはＡｄ−ＬａｃＺをＭＯＩ２００で感染させた。感染から２４時間後、細胞を０．５μｇ／ｍｌのアドリアマイシン（Ｓｉｇｍａ）で処理した。処理から４８時間後、細胞をウェスタンブロットまたはフローサイトメトリーによる分析に供した。 shRNA stable expression Huh-7 cells were infected with Ad-p53 or Ad-LacZ at MOI200. Twenty-four hours after infection, the cells were treated with 0.5 μg / ml adriamycin (Sigma). 48 hours after treatment, cells were subjected to analysis by Western blot or flow cytometry.
ウェスタンブロット分析のため、アドリアマイシン処理後の細胞を、ＲＩＰＡバッファー（１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１％ ＮＰ４０、０．５％デオキシコール酸ナトリウム、０．１％ ＳＤＳおよび５０ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ、ｐＨ８．０）を使用して４℃で抽出し、全細胞溶解液を調製した。試料をＳＤＳ−ＰＡＧＥで分画し、Ｉｍｍｏｂｉｌｏｎ−Ｐメンブレン（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）にトランスファーして、ウェスタンブロット分析を行った。ｐ５３、ＭＤＭ２、ｐ２１、カスパーゼ−３（切断型）およびアクチンのそれぞれについて、一次抗体として、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから購入した抗ｐ５３マウス抗体（ＤＯ−１）、抗ＭＤＭ２マウス抗体（ＳＭＰ１４）および抗ｐ２１マウス抗体（Ｆ−５）、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅから購入した抗アクチンマウス抗体、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから購入した抗カスパーゼ−３ウサギ抗体（８Ｇ１０）を使用して、増強化学発光（ＥＣＬ）（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて、検出を行った。 For Western blot analysis, cells after adriamycin treatment were used using RIPA buffer (150 mM NaCl, 1% NP40, 0.5% sodium deoxycholate, 0.1% SDS and 50 mM Tris HCl, pH 8.0). Extraction was performed at 4 ° C. to prepare a whole cell lysate. Samples were fractionated by SDS-PAGE, transferred to Immobilon-P membrane (Millipore), and subjected to Western blot analysis. Anti-p53 mouse antibody (DO-1), anti-MDM2 mouse antibody (SMP14) and anti-p21 mouse purchased from Santa Cruz Biotechnology as primary antibodies for each of p53, MDM2, p21, caspase-3 (cleaved type) and actin Using antibody (F-5), anti-actin mouse antibody purchased from Millipore, anti-caspase-3 rabbit antibody (8G10) purchased from Cell Signaling Technology, using enhanced chemiluminescence (ECL) (GE Healthcare), Detection was performed.
フローサイトメトリーによる分析のため、アドリアマイシン処理後の細胞をトリプシン処理により回収し、遠心分離によりペレット化した。ペレット化した細胞を９０％の冷エタノールで固定し、ＲＮアーゼＡ（５００単位／ｍｌ）で処理し、次いでヨウ化プロピジウム（５０ｍｇ／ｍｌ）で染色した。試料を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で分析した。実験は少なくとも３反復し、各試料について５０，０００イベントを分析した。データはＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ）を用いて分析した。 For analysis by flow cytometry, cells after treatment with adriamycin were collected by trypsinization and pelleted by centrifugation. Pelleted cells were fixed with 90% cold ethanol, treated with RNase A (500 units / ml) and then stained with propidium iodide (50 mg / ml). Samples were analyzed on a FACSCalibur flow cytometer (BD Bioscience). The experiment was repeated at least 3 times and 50,000 events were analyzed for each sample. Data was analyzed using FlowJo software (Tree Star).
結果を図３に示す。ｐ５３導入によってｓｈＲＮＡ−５８３３５感染細胞ではコントロール細胞と比べて強いアポトーシス応答が誘導され、さらにアドリアマイシンで処理するとアポトーシス応答は顕著に増強された（図３ＡおよびＢ）。ウェスタンブロッティングにより、別のアポトーシス指標であるカスパーゼ−３切断の増大も観察された（図３Ｃ）。同じく変異ｐ５３を有し、ｐ５３導入によって弱いアポトーシス応答を示す大腸がん細胞株ＳＷ４８０においても、ｓｈＲＮＡ−５８３３５はｐ５３誘導性アポトーシス応答を感作した（図３Ｄ）。したがって、ｓｈＲＮＡ−５８３３５はがん細胞株においてアポトーシス応答を改善することが示された。 The results are shown in FIG. The introduction of p53 induced a strong apoptotic response in shRNA-58335-infected cells as compared to control cells, and when treated with adriamycin, the apoptotic response was significantly enhanced (FIGS. 3A and B). Western blotting also observed an increase in caspase-3 cleavage, another indicator of apoptosis (FIG. 3C). ShRNA-58335 also sensitized the p53-induced apoptotic response in colorectal cancer cell line SW480, which also has mutation p53 and shows a weak apoptotic response upon introduction of p53 (FIG. 3D). Thus, shRNA-58335 was shown to improve the apoptotic response in cancer cell lines.
なお、ｐ５３の下流に存在するＭＤＭ２およびｐ２１のタンパク質量は、ｐ５３のタンパク質量に対応して増減しており、ｓｈＲＮＡ−５８３３５による影響は観察されなかった。 Note that the amounts of MDM2 and p21 proteins present downstream of p53 increased or decreased in accordance with the amount of p53 protein, and no effect of shRNA-58335 was observed.
＜実施例３ ｓｈＲＮＡ−５８３３５存在下でのｐ５３による腫瘍増殖阻害＞
腫瘍形成の異種移植モデルにおいて、ｐ５３導入の腫瘍抑制効果を試験した。
<Example 3 Tumor growth inhibition by p53 in the presence of shRNA-58335>
The tumor-suppressing effect of p53 introduction was tested in a xenograft model of tumorigenesis.
全ての動物は、ＳＰＦ条件下で維持し、札幌医科大学の動物実験委員会によって定められたガイドラインに従って取り扱った。定着腫瘍を処置する効果を評価するため、２４匹の雌性ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに、ｓｈＲＮＡ−５８３３５またはコントロールのレトロウイルスベクターを感染させた２×１０６個のＨｕｈ−７細胞を両脇腹に皮下注射した（ｓ．ｃ．）。腫瘍サイズが１００ｍｍ３に達したら、マウスに１×１０９ｐ．ｆ．ｕ（１００マイクロリットルのＰＢＳ中）のＡｄ−ｐ５３またはＡｄ−ＬａｃＺを、第０日、第１日および第２日（図４中の矢印）の合計３回、直接腫瘍内に注射した。各処置群あたり３匹のマウスを用いた。マウスにおける腫瘍形成を２週までモニターした。腫瘍体積は、式Ｖ（ｍｍ３）＝ａ×ｂ２／２（式中、「ａ」は最長径を示し、「ｂ」は垂直直径である）で計算した。 All animals were maintained under SPF conditions and handled according to the guidelines established by the Animal Care Committee of Sapporo Medical University. To evaluate the effect of treating established tumors, 24 female BALB / c nude mice were subcutaneously injected on both flank with 2 × 10 6 Huh-7 cells infected with shRNA-58335 or control retroviral vector. Injected (sc). When the tumor size reached 100 mm 3 , the mice were given 1 × 10 9 p. f. u (in 100 microliters of PBS) of Ad-p53 or Ad-LacZ were injected directly into the tumor three times on day 0, day 1 and day 2 (arrows in FIG. 4). Three mice were used for each treatment group. Tumor formation in mice was monitored for up to 2 weeks. Tumor volume was calculated by the formula V (mm 3 ) = a × b 2/2 (where “a” indicates the longest diameter and “b” is the vertical diameter).
結果を図４に示す。コントロールｓｈＲＮＡを感染させたＨｕｈ−７細胞ではＡｄ−ｐ５３注射は腫瘍体積に影響を及ぼさなかった一方（図４左）、ｓｈＲＮＡ−５８３３５を感染させたＨｕｈ−７細胞ではＡｄ−ｐ５３注射によって腫瘍体積の顕著な減少が認められた（図４右）。したがって、ｐ５３と特定のｓｈＲＮＡとを組み合わせた処置がｉｎ ｖｉｖｏでのがん治療に効果的であることが示された。 The results are shown in FIG. In Huh-7 cells infected with control shRNA, Ad-p53 injection did not affect tumor volume (FIG. 4 left), whereas in Huh-7 cells infected with shRNA-58335, tumor volume was increased by Ad-p53 injection. A marked decrease was observed (right side of FIG. 4). Therefore, it was shown that the treatment combining p53 and a specific shRNA is effective for cancer treatment in vivo.
＜実施例４ ｓｈＲＮＡ−５８３３５によるＰＲＩＭＡ−１誘導性アポトーシスの増強＞
アデノウイルスでのｐ５３導入の代わりに、変異ｐ５３タンパク質の配列特異的ＤＮＡ結合能および活性構造を回復させることが知られているＰＲＩＭＡ−１を用いて、実施例２と同様の試験を行った。
<Example 4 Enhancement of PRIMA-1-induced apoptosis by shRNA-58335>
The same test as in Example 2 was performed using PRIMA-1, which is known to restore the sequence-specific DNA binding ability and active structure of the mutant p53 protein, instead of introducing p53 with adenovirus.
ｓｈＲＮＡ安定発現Ｈｕｈ−７細胞を、２００μＭのＰＲＩＭＡ−１（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）および／または０．５μｇ／ｍｌのアドリアマイシンで処理し、処理から７２時間後にフローサイトメトリーに供した。また、選択培地として４μｇ／ｍｌのピューロマイシンを含有する培地を用いて選抜したｓｈＲＮＡ安定発現Ｐａｎｃ−１細胞を、２００μＭのＰＲＩＭＡ−１（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）および／または３００μＭのＶＰ−１６（Ｓｉｇｍａ）で処理し、処理から４８時間後にフローサイトメトリーに供した。その他の点は実施例２と同様の方法で試験を行った。 shRNA stably expressing Huh-7 cells were treated with 200 μM PRIMA-1 (Cayman Chemical) and / or 0.5 μg / ml adriamycin and subjected to flow cytometry 72 hours after treatment. In addition, stable shRNA-expressing Panc-1 cells selected using a medium containing 4 μg / ml puromycin as a selective medium were added with 200 μM PRIMA-1 (Cayman Chemical) and / or 300 μM VP-16 (Sigma). Treated and subjected to flow cytometry 48 hours after treatment. The other points were tested in the same manner as in Example 2.
結果を図５に示す。Ｈｕｈ−７細胞の場合、ＰＲＩＭＡ−１とアドリアマイシンとを組み合わせた処理により、コントロールｓｈＲＮＡ感染細胞と比べてｓｈＲＮＡ−５８３３５感染細胞において強いアポトーシス応答が誘導された（図５ＡおよびＢ）。 The results are shown in FIG. In the case of Huh-7 cells, treatment with a combination of PRIMA-1 and adriamycin induced a strong apoptotic response in shRNA-58335 infected cells compared to control shRNA infected cells (FIGS. 5A and B).
Ｐａｎｃ−１細胞の場合、アドリアマイシン処理ではアポトーシス応答が誘導されなかったことから、アドリアマイシンの代わりにＶＰ−１６（エポキシド）を用いて同様の試験を行った。ＰＲＩＭＡ−１とＶＰ−１６とを組み合わせた処理により、コントロールｓｈＲＮＡ感染細胞と比べてｓｈＲＮＡ−５８３３５感染細胞においてアポトーシス応答の顕著な増強が認められた（図５Ｃ）。 In the case of Panc-1 cells, the apoptotic response was not induced by treatment with adriamycin. Therefore, a similar test was performed using VP-16 (epoxide) instead of adriamycin. Treatment with combination of PRIMA-1 and VP-16 resulted in a marked enhancement of the apoptotic response in shRNA-58335 infected cells compared to control shRNA infected cells (FIG. 5C).
したがって、ｓｈＲＮＡ−５８３３５は、ｐ５３導入によるアポトーシス応答だけでなく、ｐ５３の機能回復によるアポトーシス応答も効果的に増強することが明らかになった。 Therefore, it was revealed that shRNA-58335 effectively enhances not only apoptotic response due to p53 introduction but also apoptotic response due to functional recovery of p53.
＜実施例５ ｓｈＲＮＡ−５８３３５による遺伝子発現パターンの変化＞
さらに、ｐ５３誘導性アポトーシスに対するｓｈＲＮＡ−５８３３５の効果を評価するため、以下のマイクロアレイ分析を行って、遺伝子発現パターンの変化を観察した。
<Example 5 Change of gene expression pattern by shRNA-58335>
Furthermore, in order to evaluate the effect of shRNA-58335 on p53-induced apoptosis, the following microarray analysis was performed to observe changes in gene expression patterns.
ｓｈＲＮＡ−５８３３５またはコントロールｓｈＲＮＡを安定発現するＨｕｈ−７細胞に、Ａｄ−ｐ５３をＭＯＩ２００で感染させた。感染から２４時間後、全ＲＮＡをＲＮｅａｓｙ ｍｉｎｉキット（ＱＩＡＧＥＮ）により、製造者のプロトコルに従って抽出した。全ＲＮＡをＣｙ３で標識し、ｃＤＮＡマイクロアレイ（Ａｇｉｌｅｎｔ ＳｕｒｅＰｒｉｎｔ Ｇ３ Ｈｕｍａｎ ＧＥ）にハイブリダイズさせて、Ａｇｉｌｅｎｔ ＳｕｒｅＳｃａｎにより製造者のプロトコルに従ってスキャンした。取得したデータはＬｉｍｍａ（Ｒ ｐａｃｋａｇｅ）を用いて正規化した。マイクロアレイデータはＮＣＢＩ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｏｍｎｉｂｕｓ（ＧＥＯ）に登録した（アクセッション番号ＧＳＥ５６１５６）。 Huh-7 cells stably expressing shRNA-58335 or control shRNA were infected with Ad-p53 at MOI200. Twenty-four hours after infection, total RNA was extracted with the RNeasy mini kit (QIAGEN) according to the manufacturer's protocol. Total RNA was labeled with Cy3, hybridized to a cDNA microarray (Agilent SurePrint G3 Human GE) and scanned by Agilent SureScan according to the manufacturer's protocol. The acquired data was normalized using Limma (R package). The microarray data was registered in NCBI Gene Expression Omnibus (GEO) (accession number GSE56156).
マイクロアレイ分析の結果、コントロール細胞と比較してｓｈＲＮＡ−５８３３５感染細胞において２倍以上の発現量の減少が認められた３５０個の遺伝子の一覧を表２に、これらについての遺伝子オントロジー解析の結果を表３に示す。
遺伝子オントロジー解析により、ｓｈＲＮＡ−５８３３５は、細胞周期進行および細胞分裂に関与する遺伝子群と関連することが明らかになった。この結果は、ｓｈＲＮＡ−５８３３５が細胞分裂プロセスに関連する遺伝子の発現を調節することでｐ５３導入後のアポトーシス応答を引き起こし得ることを示唆するものである。 Gene ontology analysis revealed that shRNA-58335 is associated with a group of genes involved in cell cycle progression and cell division. This result suggests that shRNA-58335 may trigger an apoptotic response after introduction of p53 by regulating the expression of genes associated with the cell division process.
本発明の医薬は、がんのｐ５３抵抗性を減弱させ、ｐ５３のがん治療効果を増強することから、従来のｐ５３単独治療では困難であったｐ５３抵抗性がんに対する効果的な処置を提供する。さらに、本発明の医薬は、ウイルスベクターの使用を必須とせず、また従来の放射線治療および化学療法との併用によって一層効果が高められて、多様ながんの処置に用いることができる。 Since the medicament of the present invention attenuates p53 resistance of cancer and enhances the cancer therapeutic effect of p53, it provides an effective treatment for p53 resistant cancer that has been difficult with conventional p53 monotherapy. To do. Furthermore, the medicament of the present invention does not require the use of a viral vector, and the effect is further enhanced by the combined use with conventional radiotherapy and chemotherapy, and can be used for treatment of various cancers.
Claims (10)
配列番号１〜２８のいずれかに示される塩基配列を含むＤＮＡおよび／または該ＤＮＡによりコードされるＲＮＡ
とを含有する、ｐ５３のみによる処置に抵抗性を有するがんを処置するための医薬。 a substance that induces p53 and / or p53;
DNA comprising the base sequence shown in any one of SEQ ID NOs: 1 to 28 and / or RNA encoded by the DNA
And a medicament for treating cancer resistant to treatment with p53 alone.
ｓｉＲＮＡを構成する二本鎖ＲＮＡのうちのいずれか一方のＲＮＡ鎖、または
該ＲＮＡ鎖とその相補的ＲＮＡ鎖とがヘアピンループを形成することができる一本鎖ＲＮＡ部分によって連結された構造を有するｓｈＲＮＡ
をコードする、請求項１から３のいずれかに記載の医薬。 The DNA is
One of the double-stranded RNAs constituting the siRNA, or a structure in which the RNA strand and its complementary RNA strand are linked by a single-stranded RNA portion capable of forming a hairpin loop shRNA
The medicament according to any one of claims 1 to 3, which encodes.
The medicament according to claim 9, wherein the substance that activates p53 is an anticancer agent for chemotherapy.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2014151278A JP2016023182A (en) | 2014-07-24 | 2014-07-24 | Medicine for treating cancer |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2014151278A JP2016023182A (en) | 2014-07-24 | 2014-07-24 | Medicine for treating cancer |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2016023182A true JP2016023182A (en) | 2016-02-08 |
Family
ID=55270271
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2014151278A Pending JP2016023182A (en) | 2014-07-24 | 2014-07-24 | Medicine for treating cancer |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2016023182A (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2021516214A (en) * | 2018-01-02 | 2021-07-01 | ルイ ジン ホスピタル，シャンハイ ジアオ トン ユニバーシティ スクール オブ メディスン | How to treat MP53 rescue compounds and P53 disorders |
-
2014
- 2014-07-24 JP JP2014151278A patent/JP2016023182A/en active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2021516214A (en) * | 2018-01-02 | 2021-07-01 | ルイ ジン ホスピタル，シャンハイ ジアオ トン ユニバーシティ スクール オブ メディスン | How to treat MP53 rescue compounds and P53 disorders |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Topper et al. | Epigenetic therapy ties MYC depletion to reversing immune evasion and treating lung cancer | |
| JP2021063120A (en) | Combination method for treatment of cancer | |
| JP2024069537A (en) | Combination Vectors and Methods for Treating Cancer | |
| EP3430143B1 (en) | Inhibitors of srsf1 to treat neurodegenerative disorders | |
| US20210324384A1 (en) | SILENCING TGF-BETA 1 and COX2 USING siRNAs DELIVERED in a POLYPEPTIDE NANOPARTICLE ALONE and in COMBINATION with IMMUNE CHECKPOINT INHIBITORS to TREAT CANCER | |
| US20210220417A1 (en) | Hsv-1 oncolytic virus therapies that specifically kill alt dependent cancers | |
| WO2019083971A1 (en) | Methods of treating cancer using lsd1 inhibitors in combination with immunotherapy | |
| CN115297868B (en) | Compositions and methods for organ protective expression and modulation of ribonucleic acids | |
| Zhou et al. | Targeting RPTPσ with lentiviral shRNA promotes neurites outgrowth of cortical neurons and improves functional recovery in a rat spinal cord contusion model | |
| Kwan et al. | Macrophages mediate the antitumor effects of the oncolytic virus HSV1716 in mammary tumors | |
| JP2020533414A (en) | Methods and Compositions for Enhancer Tumor Immunogenicity | |
| Liang et al. | Targeting matrix metalloproteinase MMP3 greatly enhances oncolytic virus mediated tumor therapy | |
| WO2020146345A1 (en) | Methods of treating cancer using lsd1 inhibitors and/or tgf-beta inhibitors in combination with immunotherapy | |
| Jiang et al. | Artificial microRNA-mediated Tgfbr2 and Pdgfrb co-silencing ameliorates carbon tetrachloride–induced hepatic fibrosis in mice | |
| Guo et al. | siRNA-mediated inhibition of hTERT enhances chemosensitivity of hepatocellular carcinoma | |
| US20100260718A1 (en) | Irf-4 as a tumor suppressor and uses thereof | |
| JP7362156B2 (en) | Pharmaceutical compositions, kits and methods for treating tumors | |
| JP2016023182A (en) | Medicine for treating cancer | |
| KR101858128B1 (en) | Pharmaceutical composition for treating cancer having radioresistant phenotype comprising SULF2 inhibitor | |
| WO2019209704A1 (en) | Microrna 584-5p compositions and methods for treating cancer | |
| US20200038440A1 (en) | Short-term activated dc1s and methods for their production and use | |
| US20230270881A1 (en) | Oncogenic trim37 is a targetable epigenetic driver of metastasis and links chemoresistance and metastatic fate in triple-negative breast cancer | |
| Malik et al. | Antitumor efficacy of a sequence-specific DNA-targeted γPNA-based c-Myc inhibitor | |
| US20220347180A1 (en) | Enhancing cancer therapy treatment with bh3 mimetics | |
| JP2020517580A (en) | Methods and compositions for treating ionizing radiation resistant tumors |