JP2015190886A - 金属微粒子形成過程を利用したカテコールアミン類の検出方法 - Google Patents
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- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
【解決手段】サンプル溶液中に含まれる検出対象化合物を検出する方法であって、前記サンプル溶液と金属粒子形成剤とを混合して混合液を調製する工程と、前記混合液中に金属微粒子を形成させる工程と、前記混合液を光学的に分析する工程と、を有し、前記化合物は、下記一般式で表される、検出方法。
(ただし、R1は、水酸基であり、R2は、炭素数1、2若しくは3の直鎖又は枝分かれ鎖アルキル基、炭素数2若しくは3の直鎖又は枝分かれ鎖アルケニル基、水酸基又は水素を表し、前記アルキル基又前記アルケニル基は、1又は複数の置換基を有してもよく、前記置換基は、水酸基、アミノ基、カルボキシル基及びNH-CH3からなる群より選択される基である。)
【選択図】なし
Description
サンプル溶液中に含まれる検出対象化合物を検出する方法であって、
前記サンプル溶液と金属粒子形成剤とを混合して混合液を調製する工程と、
前記混合液中に金属微粒子を形成させる工程と、
前記混合液を光学的に分析する工程と、を有し、
前記化合物は、下記一般式Iで表される、検出方法が提供される。
R2は、炭素数1、2若しくは3の直鎖又は枝分かれ鎖アルキル基、炭素数2若しくは3の直鎖又は枝分かれ鎖アルケニル基、水酸基又は水素を表し、
前記アルキル基又前記アルケニル基は、1又は複数の置換基を有してもよく、
前記置換基は、水酸基、アミノ基、カルボキシル基及びNH-CH3からなる群より選択される基である)
本実施形態の検出方法は、サンプル溶液中に含まれる検出対象化合物を検出する方法である。また、本実施形態の検出方法は、そのサンプル溶液と金属粒子形成剤とを混合して混合液を調製する工程と、その混合液中に金属微粒子を形成させる工程と、その混合液を光学的に分析する工程と、を有する。そして、その化合物は、下記一般式Iで表される。
R2は、炭素数1、2若しくは3の直鎖又は枝分かれ鎖アルキル基、炭素数2若しくは3の直鎖又は枝分かれ鎖アルケニル基、水酸基又は水素を表し、
前記アルキル基又前記アルケニル基は、1又は複数の置換基を有してもよく、
前記置換基は、水酸基、アミノ基、カルボキシル基及びNH-CH3からなる群より選択される基である)
1. サンプル溶液と金属粒子形成剤とを混合して混合液を調製する工程
本実施形態の検出方法は、サンプル溶液と金属粒子形成剤とを混合して混合液を調製する工程を有する。サンプル溶液は、生体試料であってもよく、カテコール類及び/又はカテコールアミン類が含まれている又は含まれている可能性がある溶液であってもよい。後述する実施例で示すように、サンプル溶液は、溶液中のカテコール類及び/又はカテコールアミン類の安定性及び反応性を保つために、中性付近のpHを有するのが好ましい。中性付近のpHとは、例えば、pH6.0、6.5、6.6、6.8、7.0、7.2、7.4、7.5及び8.0からなる群から選択される任意の2点間の範囲内であってもよい。サンプル溶液は、pH変動を抑制するために、バッファー作用を有するのが好ましい。例えば、カテコール類及び/若しくはカテコールアミン類又はそれを含むサンプル溶液をリン酸バッファー等の緩衝液に加えることで、バッファー作用を有するサンプル溶液とすることができる。
本実施形態において、上記混合は、転倒混和以外にも、振動混和や撹拌混和であってもよい。振動混和は、サンプル数が多い場合に均一に混和ができ、撹拌混和は、サンプル量が多い場合に素早く混和ができ好適である。
本実施形態の検出方法は、混合液中に金属微粒子を形成させる工程を有する。金属粒子形成剤は、カテコール類及び/又はカテコールアミン類と反応すると金属微粒子を形成するが、金属微粒子は、時間とともに増加するため金属微粒子が充分に生じるまで待つことが好ましい。後述する実施例に示すように、混合後の待ち時間は、好ましくは5から180分、より好ましくは5から60分、更に好ましくは5から30分であり、測定する化合物によって適宜調節することが好ましい。金属微粒子を形成させる工程中の温度は、室温であってもよい。室温での操作であれば、特別な恒温装置及び恒温室を用意する必要がないため好適である。後述する実施例にて示すように、室温は、25℃であってもよく、25℃±1、2、3、4、5℃であってもよい。
本実施形態の検出方法は、混合液を光学的に分析する工程を有する。混合液は、例えば、分光光度計、分光測色計や色彩色差計を用いて光学的に分析することができる。後述する実施例に示すように、分光光度計は、検出対象化合物を簡便に精度よく検出することが可能であること実証されているため好適である。分光光度計は、測定可能な波長の範囲が広いこと(例えば、300nmから1000nm)が好ましい。後述する実施例で示すように、測定するサンプルによっては、300nmから700nmまで測定可能な分光光度計であってもよい。また、後述する実施例に示すように、分光光度計を用いて検出されるピークの吸光度は、カテコール類又はカテコールアミン類の濃度と直線的な比例関係にあるため、カテコール類又はカテコールアミン類の濃度を測定するための検量線を作成することも可能である。
本実施形態において,検出対象化合物は、下記一般式Iの化合物である。
R2は、炭素数1、2若しくは3の直鎖又は枝分かれ鎖アルキル基、炭素数2若しくは3の直鎖又は枝分かれ鎖アルケニル基、水酸基又は水素を表し、
前記アルキル基又前記アルケニル基は、1又は複数の置換基を有してもよく、
前記置換基は、水酸基、アミノ基、カルボキシル基及びNH-CH3からなる群より選択される基である)。
本実験で使用するサンプル溶液は、以下の通り調製した。本実験は、別途指示がない限り、実施例1にて調製したサンプル溶液を使用した。サンプル溶液の調製は、室温(25℃)で行った。
塩化金酸水溶液の調製
塩化金酸25.3mg(61.4μmol)(ナカライテスク)を量り取り、蒸留水12.3mlにて溶解した。塩化金酸の終濃度は、5mMであった。
1. 100μMカテコール水溶液の調製
10mlメスフラスコに11mgのカテコール(0.1mmol)(キシダ化学)を量り取り、10mMリン酸バッファー(pH7.2)にて10mlに調製した(10mMカテコール水溶液)。10mlメスフラスコにメスピペットにて10mMカテコール水溶液100μlを量り取り、10mMリン酸バッファー(pH 7.2)により10mlに調製した(100μMカテコール水溶液)。
10mlメスフラスコに11mgのレゾルシノール(0.1mmol)(Wako)を量り取り、10mMリン酸バッファー(pH7.2)にて10mlに調製した(10mMレゾルシノール水溶液)。10mlメスフラスコにメスピペットにて10mMレゾルシノール水溶液100μlを量り取り、10mMリン酸バッファー(pH7.2)により10mlに調製した(100μMレゾルシノール水溶液)。
10mlメスフラスコに11mgのヒドロキノン(0.1mmol)(Sigma-Aldrich)を量り取り、10mMリン酸バッファー(pH7.2)にて10mlに調製した(10mMヒドロキノン水溶液)。10mlメスフラスコにメスピペットにて10mMヒドロキノン水溶液100μlを量り取り、10mMリン酸バッファー(pH 7.2)により10mlに調製した(100μMヒドロキノン水溶液)。
10mlメスフラスコに13mgのピロガロール(0.1mmol)(関東化学)を量り取り、10mMリン酸バッファー(pH7.2)にて10mlに調製した(10mMピロガロール水溶液)。10mlメスフラスコにメスピペットにて10mMピロガロール水溶液100μlを量り取り、10mMリン酸バッファー(pH7.2)により10mlに調製した(100μMピロガロール水溶液)。
10mlメスフラスコに16mgのフェネチルアミン塩酸塩(0.1mmol)(Wako)を量り取り、10mMリン酸バッファー(pH 7.2)にて10mlに調製した(10mMフェネチルアミン塩酸塩水溶液)。10mlメスフラスコにメスピペットにて10mMフェネチルアミン塩酸塩水溶液100μlを量り取り、10mMリン酸バッファー(pH7.2)により10mlに調製した(100μM)。
10mlメスフラスコに17mgのチラミン塩酸塩(0.1mmol)(Aldrich)を量り取り、10mMリン酸バッファー(pH7.2)にて10mlに調製した(10mMチラミン塩酸塩水溶液)。10mlメスフラスコにメスピペットにて10mMチラミン塩酸塩水溶液100μlを量り取り、10mMリン酸バッファー(pH7.2)により10mlに調製した(100μMチラミン塩酸塩水溶液)。
10mlメスフラスコに19mgのドーパミン塩酸塩(0.1mmol)(Wako)を量り取り、10mMリン酸バッファー(pH7.2)にて10mlに調製した(10mMドーパミン塩酸塩水溶液)。10mlメスフラスコにメスピペットにて10mMドーパミン塩酸塩水溶液100μlを量り取り、10mMリン酸バッファー(pH7.2)により10mlに調製した(100μMドーパミン塩酸塩水溶液)。
10mlメスフラスコに18mgのアドレナリン(0.1mmol)(Wako)を量り取り、500μlの1N塩酸にて溶解した後に10mMリン酸バッファー(pH7.2)にて10mlに調製した(10mMアドレナリン水溶液)。10mlメスフラスコにメスピペットにて10mMアドレナリン水溶液100μlを量り取り、10mMリン酸バッファー(pH7.2)により10mlに調製した(100μMアドレナリン水溶液)。
10mlメスフラスコに20mgのL-DOPA(0.1mmol)(ナカライテスク)を量り取り、10mMリン酸バッファー(pH7.2)にて10mlに調製した(10mM L-DOPA)。10mlメスフラスコにメスピペットにて10mM L-DOPA水溶液100μlを量り取り、10mMリン酸バッファー(pH7.2)により10mlに調製した(100μM L-DOPA水溶液)。
10mlメスフラスコに17mgのDOPAC(0.1mmol)(Wako)を量り取り、10mMリン酸バッファー(pH7.2)にて10mlに調製した(10mM DOPAC)。10mlメスフラスコにメスピペットにて10mM DOPAC水溶液100μlを量り取り、10mMリン酸バッファー(pH7.2)により10mlに調製した(100μM DOPAC)。
10mlメスフラスコに18mgのチロシン(0.1mmol)(キシダ化学)を量り取り、500μlの1N塩酸にて溶解した後に10mMリン酸バッファー(pH7.2)にて10mlに調製した(10mM L-チロシン水溶液)。10mlメスフラスコにメスピペットにて10mMチロシン水溶液100μlを量り取り、10mMリン酸バッファー(pH7.2)により10mlに調製した(100μM L-チロシン水溶液)。
各サンプル(カテコール、フェネチルアミン、チラミン及びドーパミン)と塩化金酸との混合液における吸光度の経時及び濃度変化を観察した。実施例1にて調製したサンプル水溶液は、10mMリン酸バッファー(pH7.2)を用いて、表1に記載の濃度になるように希釈した。実施例2において、7種類の濃度(100μM、75μM、50μM、25μM、10μM、5μM及び1μM)のサンプルを調製した(表1)。上記希釈の2分後に、5mM塩化金酸水溶液60μlをサンプル溶液に加えた(塩化金酸の終濃度は、98μM)。塩化金酸の添加後、サンプルを5分間静置させた。塩化金酸の添加の5分、30分、60分、120分及び180分後に、SIMADZU UV-1800を用いて、各濃度のサンプルの吸光度を測定した(300又は340から1000nm)。サンプルの調製及び吸光度の測定は、室温にて行った。
カテコールの実験結果を、図1Aから1Gに示す。図1A-1Dのグラフにおいて、波長400nmから600nm付近におけるピークの吸光度は、時間の経過と共に増加した。図1E-1Gのグラフにおいて、波長400nmから600nm付近におけるピークの吸光度は、時間の経過と共に増加する一方で、吸光度が0.3から0.35に達したピークは、時間が経過してもほぼ一定であった。
フェネチルアミンの実験結果を、図3Aから3Gに示す。これらの図から、フェネチルアミンは、いずれの測定時間及び濃度であっても、波長400nmから600nm付近における吸光度のピークを示さないことが明らかとなった。
チラミンの実験結果を、図4Aから4Gに示す。図4Aから4Gのグラフにおいて、波長400nmから600nm付近におけるピークの吸光度は、時間の経過と共に増加した。チラミンのピークの吸光度は、カテコールにおけるピークの吸光度(図1A-1G)よりも低いことが明らかとなった。
ドーパミンの結果を、図6Aから6Gに示す。図6Aから6Dのグラフにおいて、波長400nmから600nm付近におけるピークの吸光度は、時間の経過と共に増加した。図6E及び6Fのグラフにおいて、波長400nmから600nm付近におけるピークの吸光度は、時間が経過してもほぼ一定であった。図6Gのグラフにおいて、波長400nmから600nm付近におけるピークの吸光度は、時間の経過と共に減少した。
各サンプル(カテコール、フェネチルアミン、チラミン及びドーパミン)と塩化金酸との混合液において、混合液の吸光度がサンプル濃度と比例関係となる濃度範囲を検討した。各サンプルの終濃度は、実施例2と同じであり、塩化金酸水溶液の終濃度は、50μMとなるように調製した。吸光度測定は、塩化金酸の添加の5分、30分、60分、120分及び180分後に行い、各測定値をプロットした(図8Aから図8E)。これらの結果から、塩化金酸の添加から5-30分間で、濃度に依存して直線的に吸光度が増加することが示された。以後の実験は、これらの結果に基づいて、特別な指示がない限り塩化金酸の添加の10分後に吸光度を測定した。
サンプルを11種類に増やして実験を行った(カテコール、レゾルシノール、ヒドロキノン、ピロガロール、フェネチルアミン、チラミン、ドーパミン、アドレナリン、L-DOPA、DOPAC及びチロシン)。実施例1にて調製したサンプル水溶液は、10mMリン酸バッファー(pH7.2)を用いて、表1に記載の濃度になるように希釈した。実施例2と同様に、7種類の濃度のサンプル(100μM、75μM、50μM、25μM、10μM、5μM及び1μM)を調製した(表1)。希釈後に、60μlの5mM塩化金酸水溶液をサンプル溶液に加え(塩化金酸の終濃度は、98μM)、3回転倒混和を行った。実施例3に基づいて、塩化金酸の添加後、サンプルを10分間静置させ、そして、SIMADZU UV-1800を用いて、各濃度のサンプルの吸光度を測定した(340から1000nm)。サンプルの調製及び吸光度の測定は、室温にて行った。
各サンプルのpHを以下の通りに調製し、カテコールアミン類の検出に対する影響を調べた。
pH4:18mgのドレナリン(0.1mmol)を500μlの1N塩酸にて溶解した後に10mM酢酸バッファー(pH4)にて10mlに調製した。上記調製溶液50μlを10mM酢酸バッファー(pH4)により10mlに調製した。アドレナリンの終濃度は、50μMである。
pH7.2:18mgのドレナリン(0.1mmol)を500μlの1N塩酸にて溶解した後に10mMリン酸バッファー(pH7.2)にて10mlに調製した。上記調製溶液50μlを10mMリン酸バッファー(pH7.2)により10mlに調製した。アドレナリンの終濃度は、50μMである。
pH9.5:18mgのドレナリン(0.1mmol)を500μlの1N塩酸にて溶解した後に10mM炭酸バッファー(pH9.5)にて10mlに調製した。上記調製溶液50μlを10mM炭酸バッファー(pH9.5)により10mlに調製した。アドレナリンの終濃度は、50μMである。
pH4:19mgのドーパミン塩酸塩(0.1mmol)を10mM酢酸バッファー(pH4)にて10mlに調製した。上記調製溶液50μlを10mM酢酸バッファー(pH4)により10mlに調製した。ドーパミンの終濃度は、50Μmである。
pH 7.2:19mgのドーパミン塩酸塩(0.1mmol)を10mMリン酸バッファー(pH7.2)にて10mlに調製した。上記調製溶液50μlを10mMリン酸バッファー(pH7.2)により10mlに調製した。ドーパミンの終濃度は、50Μmである。
pH9.5:19mgのドーパミン塩酸塩(0.1mmol)を10mM炭酸バッファー(pH9.5)にて10mlに調製した。上記調製溶液50μlを10mM炭酸バッファー(pH9.5)により10mlに調製した。ドーパミンの終濃度は、50Μmである。
pH4:20mgのL-DOPA(0.1mmol)を10mM酢酸バッファー(pH4)にて10mlに調製した。上記調製溶液50μlを10mM酢酸バッファー(pH4)により10mlに調製した。L-DOPAの終濃度は、50μMである。
pH7.2:20mgのL-DOPA(0.1mmol)を10mMリン酸バッファー(pH7.2)にて10mlに調製した。上記調製溶液50μlを10mMリン酸バッファー(pH7.2)により10mlに調製した。L-DOPAの終濃度は、50μMである。
pH9.5:20mgのL-DOPA(0.1mmol)を10mM炭酸バッファー(pH9.5)にて10mlに調製した。上記調製溶液50μlを10mM炭酸バッファー(pH9.5)により10mlに調製した。L-DOPAの終濃度は、50μMである。
pH4:17mgのDOPAC(0.1mmol)を10mM酢酸バッファー(pH4)にて10mlに調製した。上記調製溶液50μlを10mM酢酸バッファー(pH4)により10mlに調製した。L-DOPAの終濃度は、50μMである。
pH7.2:17mgのDOPAC(0.1mmol)を10mMリン酸バッファー(pH7.2)にて10mlに調製した。上記調製溶液50μlを10mMリン酸バッファー(pH7.2)により10mlに調製した。L-DOPAの終濃度は、50μMである。
pH9.5:17mgのDOPAC(0.1mmol)を10mM炭酸バッファー(pH9.5)にて10mlに調製した。上記調製溶液50μlを10mM炭酸バッファー(pH9.5)により10mlに調製した。L-DOPAの終濃度は、50μMである。
pH4:18mgのチロシン(0.1mmol)を500μlの1N塩酸にて溶解した後に10mM酢酸バッファー(pH4)にて10mlに調製した。上記調製溶液50μlを10mM酢酸バッファー(pH4)により10mlに調製した。チロシンの終濃度は、50μMである。
pH7.2:18mgのチロシン(0.1mmol)を500μlの1N塩酸にて溶解した後に10mMリン酸バッファー(pH7.2)にて10mlに調製した。上記調製溶液50μlを10mMリン酸バッファー(pH7.2)により10mlに調製した。チロシンの終濃度は、50μMである。
pH9.5:18mgのチロシン(0.1mmol)を500μlの1N塩酸にて溶解した後に10mM炭酸バッファー(pH9.5)にて10mlに調製した。上記調製溶液50μlを10mM炭酸バッファー(pH9.5)により10mlに調製した。チロシンの終濃度は、50μMである。
塩化金酸の代わりに硝酸銀を用いてカテコールアミン類の検出が可能か否かを調べた。各サンプル及び硝酸銀水溶液は、以下の通りに調製した。
硝酸銀18.6mg(0.11mmol)(Wako)を量り取り、蒸留水22mlにて溶解した。硝酸銀の終濃度は、5mMであった。
19mgのドーパミン(0.1mmol)を10mMリン酸バッファー(pH7.2)により調製して10mlとした(10mMのドーパミン水溶液)。10mMドーパミン溶液1mlを10mMリン酸バッファー(pH7.2)により調製し10mlとした。ドーパミンの終濃度は、1mMである
20mgのL-DOPA(0.1mmol)を10mMリン酸バッファー(pH7.2)により調製し10mlとした(10mMのL-DOPA水溶液)。10mM L-DOPA溶液1mlを10mMリン酸バッファー(pH7.2)により調製し10mlとした。L-DOPAの終濃度は、1mMである。
17mgのDOPAC(0.1mmol)を10mMリン酸バッファー(pH7.2)により調製し10mlとした(10mMのDOPAC水溶液)。10mM DOPAC溶液1mlを10mMリン酸バッファー(pH7.2)により調製し10mlとした。DOPACの終濃度は、1mMである。
18mgのアドレナリン(0.1mmol)を500μlの1N塩酸水溶液にて溶解した後に10mlメスフラスコを用いて10mMリン酸バッファー(pH7.2)により10mlに調製した(10mMのアドレナリン水溶液)。10mMアドレナリン溶液1mlを10mMリン酸バッファー(pH7.2)により調製し10mlとした。アドレナリンの終濃度は、1mMである。
生体試料のように他の夾雑物が存在するサンプルにおいて、アドレナリンが検出可能か否かを調べた。
複数種のカテコールアミンが混在しているサンプルを用いて更に実験を行った。
1. アドレナリン及びDOPAC(アドレナリンの濃度一定)
実施例1にて調製した100μMアドレナリン水溶液と100μM DOPAC水溶液を、表6に従って混合し、濃度が5、10、25及び50μMのDOPACを調製した。50μMアドレナリン(DOPACを含まず)及び50μM DOPAC(アドレナリンを含まず)もそれぞれ調製した。調製後、5mM塩化金酸水溶液を加え、素早く3回転倒混和した。転倒混和後、10分間静置して吸光度を測定した。再現性を確認するために同様の実験を3回行った。
実施例1にて調製した100μMアドレナリン水溶液と100μM DOPAC水溶液を、表7に従って混合し、濃度が5、10、25及び50μMのアドレナリンを調製した。50μMアドレナリン(DOPACを含まず)及び50μM DOPAC(アドレナリンを含まず)もそれぞれ調製した。調製後、5mM塩化金酸水溶液を加え、素早く3回転倒混和した。転倒混和後、10分間静置して吸光度を測定した。再現性を確認するために同様の実験を3回行った。
アドレナリンの代わりに、ピロガロールを用いて実験をした。実施例1にて調製した100μMピロガロール水溶液と100μM DOPAC水溶液を、表8及び表9に従って混合し、濃度が5、10、25及び50μMのピロガロールとDOPACを調製した。50μMピロガロール(DOPACを含まず)及び50μM DOPAC(ピロガロールを含まず)もそれぞれ調製した。調製後、5mM塩化金酸水溶液を加え、素早く3回転倒混和した。転倒混和後、10分間静置して吸光度を測定した。再現性を確認するために同様の実験を3回行った。
チロシンは、図9Lに示す通り、塩化金酸と反応しなかった。塩化金酸と反応性を示さない化合物とカテコールアミンとの混合溶液においても、カテコールアミンが検出されるか否かを実験した。
本実験では、アドレナリン、ドーパミン、L-DOPA及びDOPACを用いて、それらと金属粒子形成剤との反応によって生じる金属微粒子の粒径分布を測定した。本実験においては、金属粒子形成剤として塩化金酸と硝酸銀を使用した。実施例6にて調製した各1mMのサンプル溶液と金属粒子形成剤を、表11及び12に従って混合液を調製した。調製後、5mM塩化金酸水溶液又は5mM硝酸銀水溶液を加え、素早く3回転倒混和した。転倒混和後、混合液を10分間(塩化金酸)又は30分間(硝酸銀)静置させた。
金微粒子サンプル
所定の時間でサンプルを静置させた後、サンプルを1000 x gで30分間遠心分離して、その後、サンプルの上清を取り除いた。サンプル沈殿物に1mlの蒸留水を加えて、30分間の超音波処理によりサンプル沈殿物を蒸留水中に分散させた。蒸留水中に分散させたサンプルを1000 x gで30分間遠心分離して、その後、サンプルの上清を取り除いた。再び、サンプル沈殿物に1mlの蒸留水を加えて、30分間の超音波処理によりサンプル沈殿物を蒸留水中に分散させた。
所定の時間でサンプルを静置させた後、サンプルを6000 x gで30分間遠心分離して、その後、サンプルの上清を取り除いた。サンプル沈殿物に1mlの蒸留水を加えて、30分間の超音波処理によりサンプル沈殿物を蒸留水中に分散させた。蒸留水中に分散させたサンプルを12000 x gで15分間遠心分離して、その後、サンプルの上清を取り除いた。再び、サンプル沈殿物に1mlの蒸留水を加えて、30分間の超音波処理によりサンプル沈殿物を蒸留水中に分散させた。
所定の時間でサンプルを静置させた後、サンプルを12000 x gで15分間遠心分離して、その後、サンプルの上清を取り除いた。サンプル沈殿物に1mlの蒸留水を加えて、30分間の超音波処理によりサンプル沈殿物を蒸留水中に分散させた。蒸留水中に分散させたサンプルを12000 x gで15分間遠心分離して、その後、サンプルの上清を取り除いた。再び、サンプル沈殿物に1mlの蒸留水を加えて、30分間の超音波処理によりサンプル沈殿物を蒸留水中に分散させた。
真鍮製のSEM試料台にカーボンテープを貼り付け、その上にアルミ箔を貼り付けた。2μlの各蒸留水溶解サンプルをアルミ箔上に滴下した。SEM試料台に滴下されたSEM用サンプルを10ml容量のガラス瓶の中に保管して、2日間自然乾燥させた。各乾燥したサンプルを走査型電子顕微鏡(JSM-6500F, JEOL Ltd.)にセットして、倍率50,000倍にて撮影した。
表11及び12に従って調製したサンプル1020μlを光学セルに入れ、粒度分布測定装置(Nano Particle Analyzer SZ-100, HORIBA Scientific)を用いて25度で3回測定し(データ取込み時間120秒)、それらの平均値より粒径を算出した。
図16Aに示す通り、アドレナリンと塩化金酸とを反応させると、金が還元され微粒子が生じることが明らかとなった。更に、これらの金微粒子の粒径分布を測定すると、粒子径は、23.2±4.3nm(平均値±標準偏差, n = 202)であった(図16B)。更に、同じサンプルを用いて、DLS法により粒径分布を測定すると、粒子径は、24.9±3.3nm(平均値±標準偏差)であった(図16C)。
同様に、L-DOPA、DOPAC及びドーパミンに関して、SEM及びDLS法によって金及び銀微粒子を測定した(それぞれ、図18A-D、図19A-D及び図20A-D)。結果を表13(金微粒子)と表14(銀微粒子)に示している。
Claims (7)
- サンプル溶液中に含まれる検出対象化合物を検出する方法であって、
前記サンプル溶液と金属粒子形成剤とを混合して混合液を調製する工程と、
前記混合液中に金属微粒子を形成させる工程と、
前記混合液を光学的に分析する工程と、を有し、
前記化合物は、下記一般式Iで表される、検出方法。
R2は、炭素数1、2若しくは3の直鎖又は枝分かれ鎖アルキル基、炭素数2若しくは3の直鎖又は枝分かれ鎖アルケニル基、水酸基又は水素を表し、
前記アルキル基又前記アルケニル基は、1又は複数の置換基を有してもよく、
前記置換基は、水酸基、アミノ基、カルボキシル基及びNH-CH3からなる群より選択される基である) - 前記金属微粒子は、混合液中で沈殿しない、請求項1に記載の方法
- 前記金属微粒子の平均粒子径は、10から170nmである、請求項1又は2に記載の方法。
- 前記金属微粒子形成剤と前記化合物とのモル比は、1:0.01〜1である、請求項1から3のいずれかに記載の方法。
- 前記化合物は、カテコール、レゾルシノール、ヒドロキノン、ピロガロール、ドーパミン、DOPAC、L-DOPA及びアドレナリンからなる群より選択される1又は複数の化合物を含む、請求項1から4のいずれかに記載の方法。
- 前記金属粒子形成剤は、金化合物又は銀化合物である、請求項1から5のいずれかに記載の方法。
- 前記金化合物は、塩化金酸であり、
前記銀化合物は、硝酸銀である、請求項6に記載の方法。
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