JP2014231497A - 腫瘍細胞への選択的取り込み能を備えている粒子及びその製造方法 - Google Patents
腫瘍細胞への選択的取り込み能を備えている粒子及びその製造方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2014231497A JP2014231497A JP2013113251A JP2013113251A JP2014231497A JP 2014231497 A JP2014231497 A JP 2014231497A JP 2013113251 A JP2013113251 A JP 2013113251A JP 2013113251 A JP2013113251 A JP 2013113251A JP 2014231497 A JP2014231497 A JP 2014231497A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- particles
- boron
- particle
- tumor cells
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000002245 particle Substances 0.000 title claims abstract description 92
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 7
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 title abstract description 6
- ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N Boron Chemical compound [B] ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 27
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 claims abstract description 24
- 239000010954 inorganic particle Substances 0.000 claims abstract description 20
- 108010020346 Polyglutamic Acid Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 229920002643 polyglutamic acid Polymers 0.000 claims abstract description 17
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 claims abstract description 12
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 11
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 claims abstract description 11
- 229910052580 B4C Inorganic materials 0.000 claims abstract description 8
- INAHAJYZKVIDIZ-UHFFFAOYSA-N boron carbide Chemical compound B12B3B4C32B41 INAHAJYZKVIDIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 7
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 abstract description 4
- 238000000576 coating method Methods 0.000 abstract description 4
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 abstract description 2
- 239000011147 inorganic material Substances 0.000 abstract description 2
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 58
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 13
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 12
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 12
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 9
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 5
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 5
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 5
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 4
- 150000001639 boron compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 3
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 206010020843 Hyperthermia Diseases 0.000 description 2
- ABUBSBSOTTXVPV-UHFFFAOYSA-H [U+6].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CC([O-])=O.CC([O-])=O.CC([O-])=O.CC([O-])=O Chemical compound [U+6].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CC([O-])=O.CC([O-])=O.CC([O-])=O.CC([O-])=O ABUBSBSOTTXVPV-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- HOQPTLCRWVZIQZ-UHFFFAOYSA-H bis[[2-(5-hydroxy-4,7-dioxo-1,3,2$l^{2}-dioxaplumbepan-5-yl)acetyl]oxy]lead Chemical compound [Pb+2].[Pb+2].[Pb+2].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O.[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HOQPTLCRWVZIQZ-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000011852 carbon nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000003822 epoxy resin Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 230000036031 hyperthermia Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 238000000879 optical micrograph Methods 0.000 description 2
- 238000002428 photodynamic therapy Methods 0.000 description 2
- 229920000647 polyepoxide Polymers 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 229910052594 sapphire Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010980 sapphire Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NFIVJOSXJDORSP-QMMMGPOBSA-N (2s)-2-amino-3-(4-boronophenyl)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(B(O)O)C=C1 NFIVJOSXJDORSP-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 206010070308 Refractory cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000003917 TEM image Methods 0.000 description 1
- 230000001174 ascending effect Effects 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 125000003462 boron containing inorganic group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000006957 competitive inhibition Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 108010045676 holotransferrin Proteins 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000009546 lung large cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052762 osmium Inorganic materials 0.000 description 1
- SYQBFIAQOQZEGI-UHFFFAOYSA-N osmium atom Chemical compound [Os] SYQBFIAQOQZEGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000489 osmium tetroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012285 osmium tetroxide Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- XNSAINXGIQZQOO-SRVKXCTJSA-N protirelin Chemical compound NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)CC1=CN=CN1 XNSAINXGIQZQOO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 208000016691 refractory malignant neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
【課題】ホウ素等の無機材料を含むサブミクロンサイズの粒子を、腫瘍細胞に選択的に取り込ませることができる粒子及びその製造方法の提供。【解決手段】粒径サイズ２００ｎｍ〜１０００ｎｍの無機粒子の表面をトランスフェリン（Ｔｆ）で修飾した腫瘍細胞への選択的取り込み能を備えていることを特徴とする粒子。無機粒子の表面を、ポリリジンで被覆した後にポリグルタミン酸で被覆し、該被覆表面にＴｆを修飾することを特徴とする腫瘍細胞への選択的取り込み能を備えている粒子の製造方法。特に、無機粒子が炭化ホウ素粒子であり、該炭化ホウ素サブミクロン粒子にＴｆを修飾する方法を開発し、腫瘍細胞中の核近傍への粒子取り込みを実現し、少ない投与量で効率よい熱中性子線を照射により腫瘍細胞破壊効果を得ようとするものである。【選択図】図２
Description
ホウ素等の無機材料を含むサブミクロンサイズの粒子を、腫瘍細胞に選択的に取り込ませることができる（一部は核近傍に位置する粒子もある）粒子及びその製造方法に関する。
粒子の細胞内へのターゲッティングに関する研究が多く進められているが、有機系や高分子系のものが多かった。しかし、生体内の粒子に対して遠隔的に何らかの局所的な効果を及ぼすためには、無機系の粒子を使えばより効率的に行えると考えられる。
例えば腫瘍細胞に無機粒子を選択的に取り込ます手法が使えるようになれば、ホウ素含有無機粒子を利用した中性子捕捉療法、磁性無機粒子を利用したハイパーサーミア、無機粒子の光吸収と活性酸素発生を利用した光線力学療法、などさまざまな新規医療応用粒子の開発が進展するものと期待される。
例えば腫瘍細胞に無機粒子を選択的に取り込ます手法が使えるようになれば、ホウ素含有無機粒子を利用した中性子捕捉療法、磁性無機粒子を利用したハイパーサーミア、無機粒子の光吸収と活性酸素発生を利用した光線力学療法、などさまざまな新規医療応用粒子の開発が進展するものと期待される。
ホウ素中性子捕捉療法（Boron neutron capture therapy; ＢＮＣＴ）は、腫瘍細胞に取り込まれた１０Ｂに熱中性子線を照射し、核反応によって発生するα粒子と７Ｌｉにより腫瘍細胞を死滅させる治療法である。脳腫瘍や頭頸部の難治療ガンの治療法として最近注目を集めてきている。特にこの手法は、治療後の予後が良いことから患者の治療後の生活の質（ＱＯＬ）を維持することができることも、重要な点である。
このため、腫瘍細胞に特異的かつ、十分な量の１０Ｂの蓄積が必須となる（非特許文献１、２参照）。これまでに、腫瘍細胞に効率的に取り込まれるホウ素化合物（mercaptoundecahydrododecaborane、4-dihydroxyboryl phenylalanine）がＢＮＣＴに用いられてきたが、十分な量の蓄積を得ることは困難であり、大量に投与する必要があるなどの問題点があった。
この問題を克服するために、ドラッグデリバリーシステムが注目され、ホウ素を運ぶキャリアとしてリポソーム（非特許文献３、４参照）、低比重リポタンパク質（非特許文献５参照）、炭素ナノ粒子（非特許文献１参照）などが開発されてきたが、ホウ素濃度は低いことは上記のホウ素化合物と同様であった。
Hwang, K. C., Lai P., D., Chiang, C-S., Wang, P-J., and Yuan, C-J. (2010) Neutron capture nuclei-containing carbon nanoparticles for destruction of cancer cells. Biomaterials 31, 8419-8425.
Mortensen, M., W., Bjorkdahl, O., Sorensen, P., G., Hansen, T., Jensen, M., R., Gundersen, H., J., G., and Bjornholm, T. (2006) Functionalization and cellular uptake of boron carbide nanoparticles. The first step toward T cell-guided boron neutron capture therapy. Bioconjug. Chem. 17, 284-290.
Ueno, M., Ban, H., S., Nakai, K., Inomata, R., Kaneda, Y., Matsumura, A., and Nakamura, H. (2010) Dodecaborate lipid liposomes as new vehicles for boron delivery system of neutron capture therapy. Bioorg. Med. Chem. 18, 3059-3065.
Doi, A., Kawabata, S., Iida, K., Yokoyama, K., Kajimoto, Y., Kuroiwa, T., Shirakawa, T., Kirihata, M., Kasaoka, S., Maruyama, K., Kumada, H., Sakurai, Y., Masunaga, S-I., Ono, K., and Miyatake, S-I. (2008) Tumor-specific targeting of sodium borocaptate (BSH) to malignant glioma by transferrin-PEG liposomes: a modality for boron neutron capture therapy. J. Neurooncol. 87, 287-294.
Laster, B., H., Kahl, S., B., Popenoe, E., A., Pate, D., W., and Fairchild, R., G. (1991) Biological efficacy of boronated low-density lipoprotein for boron neutron capture therapy as measured in cell culture. Cancer Res., 51, 4588-4593.
Mortensen, M., W., Sorensen, P., G., Bjorkdahl, O., Jensen, M., R., Gundersen, H., J., G., and Bjornholm, T. (2006) Preparation and characterization of Boron carbide nanoparticles for use as a novel agent in T cell-guided boron neutron capture therapy. Appl. Radiat. Isot. 64, 315-324.
Petersen, M., S., Petersen, C., C., Agger, R., Sutmuller, M., Jensen, M., R., Sorensen, P., G., Mortensen, M., W., Hansen, T., Bjornholm, T., Gundersen, H., J., Huiskamp, R., and Hokland, M. (2008) Boron nanoparticles inhibit tumour growth by boron neutron capture therapy in the murine B16-OVA model. Anticancer Res. 28, 571-576.
Ishikawa, Y., Shimizu, Y., Sasaki, T., and Koshizaki, N. (2007) Boron carbide spherical particles encapsulated in graphite prepared by pulsed laser irradiation of boron in liquid medium. Appl. Phys. Lett. 91, 161110.
Jani, P., Halbert, G., W., Langridge, J., and Florence., A., T. (1990) Nanoparticle uptake by the rat gastrointestinal mucosa: quantitation and particle size dependency. J. Pharm. Pharmacol. 42, 821-826.
Qian, Z., M., Li, H., Sun, H., and Ho, K. (2002) Targeted drug delivery via the transferrin receptor-mediated endocytosis pathway. Pharmacol. Rev. 54, 561-587.
Wagner, E., Curial, D., and Cotton, M. (1994) Delivery of drugs, proteins and genes into cells using transferrin as a ligand for receptor-mediated endocytosis. Adv. Drug Delivery Rev. 14, 113-135.
Ryschich, E., Huszty, G., Knaebel, H., P., Hartel, M., Buchler, M., W., and Schmidt, J. (2004) Transferrin receptor is a marker of malignant phenotype in human pancreatic cancer and in neuroendocrine carcinoma of the pancreas. Eur. J. Cancer 40, 1418-1422.
Tsuji, T., Yoshitomi, H., and Usukura, J. Endocytic mechanism of transferrin-conjugated nanoparticles and the effects of their size and ligand number on the efficiency of drug delivery. J. Electron Microsc. doi: 10.1093/jmicro/dfs080
Lao, B., J., Tsai, W., L., P., Mashayekhi, F., Pham, E., A., Mason, A., B., and Kamei, D., T. (2007) Inhibition of transferrin iron release increases in vitro drug carrier efficacy. J. Control. Release 117, 403-412.
Barth, R., F., Coderre, J., A., Vicente., M., G., H., and Blue, T., E. (2005) Boron neutron capture therapy of cancer: current status and future prospects. Clin. Cancer Res. 11, 3987-4002.
Weissfloch, L., Wagner, M., Probst, T., Senekowitsch-Schmidtke, R., Tempel, K., and Molls, M. (2001) A new class of drugs for BNCT? Borylated derivatives of ferrocenium compounds in animal experiments. BioMetals 14, 43-49.
Yamada, S., Hirao, K., Yamauchi, Y., and Kanzaki, S. (2003) Mechanical and electrical properties of B4C-CrB2 ceramics fabricated by liquid phase sintering. Ceram. Int. 29, 299-304.
近年、大量の１０Ｂを細胞内に届けることができるホウ素粒子が注目を集めている（非特許文献２、６、７参照）。我々はこれまでにパルスレーザー光照射を用いた炭化ホウ素サブミクロン粒子（born carbide submicron particle, ＢＣＳＰ）作製法を開発した（特許文献１及び非特許文献８参照）。このサイズの粒子は大量の１０Ｂを含有するが、その大きさ故に細胞に取り込まれにくい（特許文献９参照）。そのため粒子の表面修飾が必須となる。
薬物をがん細胞に選択的に作用させるために、その受容体が多種のがん細胞に高発現しているトランスフェリン（Ｔｆ）が利用されている（非特許文献１０、１１、１２参照）。これまでに我々は２００ ｎｍ以上のポリスチレン粒子にＴｆ修飾を行うことにより、がん細胞へ効率良くまた選択的に積み荷を運ぶことができることを示した（非特許文献１３参照）。
本発明では、ＢＣＳＰにＴｆを修飾する方法を開発し、がん細胞中の核近傍への粒子取り込みを実現し、少ない投与量で効率よいがん細胞破壊効果を得ようとするものである。
本発明では、ＢＣＳＰにＴｆを修飾する方法を開発し、がん細胞中の核近傍への粒子取り込みを実現し、少ない投与量で効率よいがん細胞破壊効果を得ようとするものである。
上記課題に鑑み、ホウ素を含有する無毒で安定な粒子の合成と細胞内に効率よく取り込まれる仕組みを与える粒子表面の処理という観点から、本発明者らは、次の発明を提供するものである。
１）粒径サイズ２００ｎｍ〜１０００ｎｍの無機粒子の表面をトランスフェリンで修飾した腫瘍細胞への選択的取り込み能を備えていることを特徴とする粒子。
２）前記無機粒子がホウ素含有粒子であることを特徴とする上記１）記載の粒子。
３）前記ホウ素含有粒子が炭化ホウ素粒子であることを特徴とする上記２）記載の粒子。
４）前記粒子の表面に、ポリリジン及びポリグルタミン酸をこの順に被覆し、その上にトランスフェリンで修飾したことを特徴とする上記１）〜３）のいずれか一項に記載の粒子。
５）上記１）〜４）のいずれか一項に記載の粒子からなることを特徴とする中性子捕捉療法用薬剤。
２）前記無機粒子がホウ素含有粒子であることを特徴とする上記１）記載の粒子。
３）前記ホウ素含有粒子が炭化ホウ素粒子であることを特徴とする上記２）記載の粒子。
４）前記粒子の表面に、ポリリジン及びポリグルタミン酸をこの順に被覆し、その上にトランスフェリンで修飾したことを特徴とする上記１）〜３）のいずれか一項に記載の粒子。
５）上記１）〜４）のいずれか一項に記載の粒子からなることを特徴とする中性子捕捉療法用薬剤。
６）粒径サイズ２００ｎｍ〜１０００ｎｍの無機粒子の表面を、ポリリジンで被覆した後にポリグルタミン酸で被覆し、該被覆表面にトランスフェリンを修飾することを特徴とする腫瘍細胞への選択的取り込み能を備えている粒子の製造方法。
７）前記無機粒子がホウ素含有粒子であることを特徴とする上記６）記載の粒子の製造方法。
８）前記ホウ素含有粒子が炭化ホウ素粒子であることを特徴とする上記７）記載の粒子の製造方法
７）前記無機粒子がホウ素含有粒子であることを特徴とする上記６）記載の粒子の製造方法。
８）前記ホウ素含有粒子が炭化ホウ素粒子であることを特徴とする上記７）記載の粒子の製造方法
ホウ素中性子捕捉療法（Boron neutron capture therapy, ＢＮＣＴ）により効率良く腫瘍細胞を死滅させるためには、腫瘍細胞に特異的かつ、十分な量の１０Ｂの蓄積（１０９原子／細胞）が有効である（非特許文献１、１５、１６参照）。ＢＣＳＰは大量の１０Ｂを含有し、１２粒子でこの条件を達成することができる（２．５ ｇ／ｃｍ３、直径２００ ｎｍ：非特許文献１７参照）。
しかし、従来中性子捕捉療法に使用されているホウ素化合物は、中性子捕捉能が高い１０Ｂの存在比を１００％に濃縮したホウ素を原料として用いる必要があり、そのためコストの大幅な上昇を強いている。
これに対し、本発明の粒子は少ない個数で、大量のホウ素原子を細胞中に導入出来るので、１０Ｂを２０％しか含まない安価な天然ホウ素で作製した場合の粒子でも、十分な治療効果が確保出来る優れた効果を有する。すなわち、上記のようにＢＣＳＰにＴｆ を修飾することにより、この粒子はがん細胞によく取り込まれ、１０９原子の１０Ｂを細胞内に届けることができる効果を有する。
しかし、従来中性子捕捉療法に使用されているホウ素化合物は、中性子捕捉能が高い１０Ｂの存在比を１００％に濃縮したホウ素を原料として用いる必要があり、そのためコストの大幅な上昇を強いている。
これに対し、本発明の粒子は少ない個数で、大量のホウ素原子を細胞中に導入出来るので、１０Ｂを２０％しか含まない安価な天然ホウ素で作製した場合の粒子でも、十分な治療効果が確保出来る優れた効果を有する。すなわち、上記のようにＢＣＳＰにＴｆ を修飾することにより、この粒子はがん細胞によく取り込まれ、１０９原子の１０Ｂを細胞内に届けることができる効果を有する。
本発明は、腫瘍細胞への選択的取り込み能を備えている粒子を提供するものであり、粒径サイズは２００ｎｍ〜１０００ｎｍである無機粒子の表面をトランスフェリンで修飾することにより、それを達成することができる。この無機粒子としては、好適にはホウ素含有粒子であり、さらに炭化ホウ素粒子であることが望ましい。
上記の通り、現在中性子捕捉療法に使用されているホウ素化合物は、中性子捕捉能が高い１０Ｂの存在比を１００％に濃縮したホウ素を原料として用いる必要があり、そのためコストの大幅な上昇を強いている。
これに対し、今回の発明の粒子は少ない個数で大量のホウ素原子を細胞中に導入出来るので、１０Ｂを２０％しか含まない安価な天然ホウ素で作製した場合の粒子でも、十分な治療効果が確保出来ることから、製造コストの大幅な低減を図ることが可能である。
上記の通り、現在中性子捕捉療法に使用されているホウ素化合物は、中性子捕捉能が高い１０Ｂの存在比を１００％に濃縮したホウ素を原料として用いる必要があり、そのためコストの大幅な上昇を強いている。
これに対し、今回の発明の粒子は少ない個数で大量のホウ素原子を細胞中に導入出来るので、１０Ｂを２０％しか含まない安価な天然ホウ素で作製した場合の粒子でも、十分な治療効果が確保出来ることから、製造コストの大幅な低減を図ることが可能である。
上記の通り、１０９原子の１０Ｂは、ホウ素中性子捕捉療法（ＢＮＣＴ）により、効率良く腫瘍細胞を死滅させるために有効であるが、同様の機能を持つ無機粒子であれば、腫瘍細胞への選択的取り込み能を備えることにより、同様に腫瘍細胞を死滅させる効果を有する。本願発明は、これらを包含するものである。
前記粒子の表面に、ポリリジン及びポリグルタミン酸をこの順に被覆し、その上にトランスフェリンで修飾することにより、上記の機能を備えた粒子を効果的に得ることができる。さらに、これらの機能を持つ材料は中性子捕捉療法用薬剤として有用である。
前記粒子の表面に、ポリリジン及びポリグルタミン酸をこの順に被覆し、その上にトランスフェリンで修飾することにより、上記の機能を備えた粒子を効果的に得ることができる。さらに、これらの機能を持つ材料は中性子捕捉療法用薬剤として有用である。
本願発明は、その多くを実験により確認しつつ、最適な条件を見出すことを前提とした。したがって、以下の具体的な説明は、実験との関連での説明が中心となる。また、特に効果があることを確認したＢＣＳＰのＴｆ修飾を中心に説明するが、他の材料への展開を制限するものではないことを、予め申し述べる。
（細胞培養）
ＨｅＬａ細胞（ヒト子宮頸かん由来細胞株: RIKEN BioResource Center, Tsukuba, Japan）とＮＲＫ細胞（ラット腎細胞由来: RIKEN BioResource Center, Tsukuba, Japan）を、６０ ｍｍディッシュ（BD FALCON, Flanklin Lakes. NJ, USA）に播種し、炭酸ガス培養装置内（５％ ＣＯ２, ３７°Ｃ）で培養した。培養液は１０％（Ｖ／Ｖ）fetal bovine serum（FBS; 牛胎児血清; PAA, Vienne, Austria）、１００ Ｕ／ｍｌ ペニシリン、１００ μｇ／ｍｌ ストレプトマイシン (Wako Pure Chemical Industries, Osaka, Japan)を添加したDulbecco’s Modified Eagle’s Medium（DMEM; Sigma-Aldrich）を使用した。
ＨｅＬａ細胞（ヒト子宮頸かん由来細胞株: RIKEN BioResource Center, Tsukuba, Japan）とＮＲＫ細胞（ラット腎細胞由来: RIKEN BioResource Center, Tsukuba, Japan）を、６０ ｍｍディッシュ（BD FALCON, Flanklin Lakes. NJ, USA）に播種し、炭酸ガス培養装置内（５％ ＣＯ２, ３７°Ｃ）で培養した。培養液は１０％（Ｖ／Ｖ）fetal bovine serum（FBS; 牛胎児血清; PAA, Vienne, Austria）、１００ Ｕ／ｍｌ ペニシリン、１００ μｇ／ｍｌ ストレプトマイシン (Wako Pure Chemical Industries, Osaka, Japan)を添加したDulbecco’s Modified Eagle’s Medium（DMEM; Sigma-Aldrich）を使用した。
（ＢＣＳＰのＴｆ修飾）
１ｍｇのＢＣＳＰを１ｍｌの蒸留水中に分散させ、１ｍｇのポリリジン（poly-L-lysine, ＰＬＬ; mol. wt. 4,000-15,000, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA）を加え、室温で１０分間放置した。その後、遠心分離（6,500×g, 20 min, 25°C）により粒子を洗浄し、フリーなＰＬＬを除去した。回収した粒子を再び蒸留水中に分散させ、１０ｍｇのポリグルタミン酸（poly-γ-glutamic acid, ＰＧＡ; mol. wt. 200,000-500,000, Wako Pure Chemical Industries, Osaka, Japan）を加えた。同様に遠心分離（6,500×g, 20 min, 25°C）を行いフリーなＰＧＡを除去した。
１ｍｇのＢＣＳＰを１ｍｌの蒸留水中に分散させ、１ｍｇのポリリジン（poly-L-lysine, ＰＬＬ; mol. wt. 4,000-15,000, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA）を加え、室温で１０分間放置した。その後、遠心分離（6,500×g, 20 min, 25°C）により粒子を洗浄し、フリーなＰＬＬを除去した。回収した粒子を再び蒸留水中に分散させ、１０ｍｇのポリグルタミン酸（poly-γ-glutamic acid, ＰＧＡ; mol. wt. 200,000-500,000, Wako Pure Chemical Industries, Osaka, Japan）を加えた。同様に遠心分離（6,500×g, 20 min, 25°C）を行いフリーなＰＧＡを除去した。
回収したＰＧＡ−ｃｏａｔｅｄ ＢＣＳＰを０．５ｍｌのＭＥＳ緩衝液（10 mM, pH 5.5）中に分散させ、３．１７×１０−９ ｍｏｌの1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide (EDC; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) とN-hydroxysuccinimide (NHS; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)を加え、３０分間室温で反応させた。
１０倍濃度のＰＢＳを５０ μｌ加え反応を停止させた。続いて０．２５ｍｇのhuman holo-transferrin（Tf; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA）、他の材料として０．２１ｍｇのａｌｂｕｍｉｎ (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)を用い、粒子を室温で８時間反応させた。反応後、粒子に結合しなかったＴｆ又はａｌｂｕｍｉｎを遠心分離（6,500 × g, 20 min, 25°C, twice）により除去した。なお、ａｌｂｕｍｉｎは、比較（効果確認）のために用いたものである。
また、共焦点観察を行うために、粒子表面に結合したＴｆ、ａｌｂｕｍｉｎを０．１ ｍｇのＦＩＴＣ−Ｉ（Wako Pure Chemical Industries, Osaka, Japan）を用いて、ｃａｒｂｏｎａｔｅ緩衝液（50 mM, pH 9.5）中で蛍光標識した。２時間後、遠心分離（6,500×g, 20 min, 25°C, thrice）により粒子を洗浄し、結合していない蛍光色素を除去した。
（共焦点顕微鏡観察）
ＨｅＬａ細胞とＮＲＫ細胞を３５ ｍｍガラスボトムディッシュ（Matsunami Glass Ind., Ltd., Osaka, Japan）上に播種し、１２時間以上培養した。細胞が十分ディッシュ底面に接着した後、０．０５ｍｇ／ｍｌのＴｆ修飾ＢＳＣＰ、ａｌｂｕｍｉｎ修飾ＢＣＳＰを含む培養液中で２時間培養した。同様に、３５ｍｍガラスボトムディッシュに播種したＨｅＬａ細胞を０．０５ｍｇ／ｍｌのＴｆ修飾ＢＣＳＰと２ ｍｇ／ｍｌのｈｏｌｏ−Ｔｆを含む培養液中で培養した。
粒子暴露後、ＰＢＳで細胞を洗い、４％パラフォルムアルデヒトで室温において１０分間固定した。固定後、さらにＰＢＳで３回洗浄し、共焦点顕微鏡（A1Rsi; Nikon, Tokyo, Japan）を用いて観察を行った。
ＨｅＬａ細胞とＮＲＫ細胞を３５ ｍｍガラスボトムディッシュ（Matsunami Glass Ind., Ltd., Osaka, Japan）上に播種し、１２時間以上培養した。細胞が十分ディッシュ底面に接着した後、０．０５ｍｇ／ｍｌのＴｆ修飾ＢＳＣＰ、ａｌｂｕｍｉｎ修飾ＢＣＳＰを含む培養液中で２時間培養した。同様に、３５ｍｍガラスボトムディッシュに播種したＨｅＬａ細胞を０．０５ｍｇ／ｍｌのＴｆ修飾ＢＣＳＰと２ ｍｇ／ｍｌのｈｏｌｏ−Ｔｆを含む培養液中で培養した。
粒子暴露後、ＰＢＳで細胞を洗い、４％パラフォルムアルデヒトで室温において１０分間固定した。固定後、さらにＰＢＳで３回洗浄し、共焦点顕微鏡（A1Rsi; Nikon, Tokyo, Japan）を用いて観察を行った。
（透過型電子顕微鏡観察）
ＨｅＬａ細胞をあらかじめカーボンを蒸着したサファイアガラス（Matsunami Glass Ind., Ltd., Osaka, Japan）上に播種し、１２以時間上培養した。細胞がサファイアガラスに十分接着した後、０．０２５ｍｇ／ｍｌのＴｆ修飾ＢＣＳＰを含む培養液を与え2時間培養した。
粒子暴露後、ＨｅＬａ細胞を2%パラフォルムアルデヒド、１％グルタルアルデヒドを含むＲｉｎｇｅｒ緩衝液中で前固定し、その後１％四酸化オスミウムで後固定を行った。
ＨｅＬａ細胞をあらかじめカーボンを蒸着したサファイアガラス（Matsunami Glass Ind., Ltd., Osaka, Japan）上に播種し、１２以時間上培養した。細胞がサファイアガラスに十分接着した後、０．０２５ｍｇ／ｍｌのＴｆ修飾ＢＣＳＰを含む培養液を与え2時間培養した。
粒子暴露後、ＨｅＬａ細胞を2%パラフォルムアルデヒド、１％グルタルアルデヒドを含むＲｉｎｇｅｒ緩衝液中で前固定し、その後１％四酸化オスミウムで後固定を行った。
次に、エタノールを用いて細胞を脱水し、エポキシ樹脂（Polysciences, Inc., Warrington, PA, USA）に包埋した。６０°Ｃで３０時間以上熱し、十分に硬化したサンプルをウルトラミクロトームを用いて７０ｎｍの厚さで薄切した。得られた切片を、フォルムバールを支持膜とした電顕用グリッドで回収し酢酸ウラン、クエン酸鉛により電子染色し、透過型電子顕微鏡（H-7600; Hitachi, Tokyo, Japan）で観察した。
以下、本発明を実施例および比較例に基づき、さらに詳細に説明する。なお、説明する実施例は理解を容易にするためのものであり、本願発明がこれに限定されるものではないことは言うまでもない。
（実施例１）
ＢＣＳＰは表面に官能基を持たず、そのままではＴｆ修飾を行えない。そこでまず始めに正電荷を持つポリペプチドであるポリリジン（ＰＬＬ）と負電荷を持ち、カルボキシル基に富むポリグルタミン酸（ＰＧＡ）により粒子表面を被覆した。ＰＧＡにより表面を被覆したＢＣＳＰの透過型電子顕微鏡像を図１に示す。ＰＧＡの層が形成され、粒子がＰＧＡにより覆われている様子がわかる。このＰＧＡ被覆ＢＣＳＰのカルボキシル基を架橋剤により活性化させ、Ｔｆを結合させた。
ＢＣＳＰは表面に官能基を持たず、そのままではＴｆ修飾を行えない。そこでまず始めに正電荷を持つポリペプチドであるポリリジン（ＰＬＬ）と負電荷を持ち、カルボキシル基に富むポリグルタミン酸（ＰＧＡ）により粒子表面を被覆した。ＰＧＡにより表面を被覆したＢＣＳＰの透過型電子顕微鏡像を図１に示す。ＰＧＡの層が形成され、粒子がＰＧＡにより覆われている様子がわかる。このＰＧＡ被覆ＢＣＳＰのカルボキシル基を架橋剤により活性化させ、Ｔｆを結合させた。
次に、Ｔｆ修飾ＢＣＳＰの腫瘍細胞選択性を評価した。Ｔｆ受容体が高発現しているＨｅＬａ細胞（上記非特許文献１４参照）とラット正常腎由来のＮＲＫ細胞に粒子を２時間暴露し、比較観察した。共焦点顕微鏡観察により得られた結果を図２に示す。
上段は代表的な光学切片像であり、中段は細胞表面から底面までの、maximum-intensity projectionである。また、下段は対応する光学顕微鏡像である。
上段は代表的な光学切片像であり、中段は細胞表面から底面までの、maximum-intensity projectionである。また、下段は対応する光学顕微鏡像である。
図２（ａ−ｃ）はＴｆ修飾ＢＣＳＰを与えたＨｅＬａ細胞の共焦点顕微鏡像である。多数の粒子が細胞内に取り込まれていることがわかる。図２（ｄ−ｆ）は粒子に結合していないＴｆとＴｆ修飾ＢＣＳＰを同時にＨｅＬａ細胞に与えた結果である。過剰量Ｔｆにより競合阻害が起こり、粒子の取り込みが阻害された。つまりＴｆ修飾ＢＣＳＰはＴｆ受容体を介して細胞内に取り込まれることがわかった。これにより、表面修飾の効果が確認できる。
また、ａｌｂｕｍｉｎ修飾ＢＣＳＰを与えたＨｅＬａ細胞ではＴｆ修飾ＢＣＳＰに比べて取り込み量が著しくて低下していた（図２（ｇ−ｉ））。これにより、ａｌｂｕｍｉｎは、有効でないことが分かる。
そして、上記の一連の結果から、Ｔｆ修飾により、ＢＣＳＰが効率的にがん細胞に取り込まれることが示された。すなわち、これはＴｆ修飾の有効性を示すものである。
そして、上記の一連の結果から、Ｔｆ修飾により、ＢＣＳＰが効率的にがん細胞に取り込まれることが示された。すなわち、これはＴｆ修飾の有効性を示すものである。
一方、ラット由来の正常細胞株であるＮＲＫ細胞ではＴｆ修飾ＢＣＳＰはほとんど細胞内に取り込まれず、細胞表面で凝集していた（図２（ｊ−ｌ））。これによって、Ｔｆ修飾ＢＣＳＰはＴｆ受容体が高発現している腫瘍細胞に選択的に取り込まれることが示された。これは、腫瘍細胞に対する選択性を意味するものである。
さらに、透過型電子顕微鏡によりＴｆ修飾ＢＣＳＰを暴露したＨｅＬａ細胞を観察した（図３）。２００ｎｍ以上のＴｆ修飾ＢＣＳＰはＨｅＬａ細胞に多数取り込まれ（ａ）、エンドソーム内（ｃ）や、核周辺（ｂ）に粒子が確認された。これは、細胞内核周辺に取り込まれていることの証拠と考えられる。
（実施例２）
（試験方法）
１）Ｈ４６０細胞（ヒト肺大細胞がん細胞）をマウス（６週齢）皮下に注射した（５×１０６ｃｅｌｌ／ｍｏｕｓｅ）。
２）５日後、Ｔｆ修飾ＢＣＳＰを尾静脈から投与した（４０ｍｇ／ｋｇ）。
３）二日後、腫瘍と肺（コントロール）を回収した。
４）回収したサンプルをそれぞれ２％グルタール、２％パラフォルムアルデヒドで３時間前固定した。
（試験方法）
１）Ｈ４６０細胞（ヒト肺大細胞がん細胞）をマウス（６週齢）皮下に注射した（５×１０６ｃｅｌｌ／ｍｏｕｓｅ）。
２）５日後、Ｔｆ修飾ＢＣＳＰを尾静脈から投与した（４０ｍｇ／ｋｇ）。
３）二日後、腫瘍と肺（コントロール）を回収した。
４）回収したサンプルをそれぞれ２％グルタール、２％パラフォルムアルデヒドで３時間前固定した。
５）１％オスミウムで１時間後固定を行った。
６）エタノールの上昇系列により脱水した。
７）エポキシ樹脂に包埋し、ウルトラミクロトームで薄切した。
８）酢酸ウラン、クエン酸鉛により染色し、透過型電子顕微鏡で観察した。
６）エタノールの上昇系列により脱水した。
７）エポキシ樹脂に包埋し、ウルトラミクロトームで薄切した。
８）酢酸ウラン、クエン酸鉛により染色し、透過型電子顕微鏡で観察した。
（結果と観察）
尾静脈から投与されたＴｆ修飾ＢＣＳＰは腫瘍に到達し、腫瘍細胞に取り込まれていた。これらの粒子はin vitroでの結果と同様に、細胞内で膜に囲まれていた。つまり、エンドサイトーシスにより細胞内に取り込まれたことがわかった。
一方で、コントロールの肺細胞へのＴｆ修飾ＢＣＳＰの取り込みは観察されなかった。
尾静脈から投与されたＴｆ修飾ＢＣＳＰは腫瘍に到達し、腫瘍細胞に取り込まれていた。これらの粒子はin vitroでの結果と同様に、細胞内で膜に囲まれていた。つまり、エンドサイトーシスにより細胞内に取り込まれたことがわかった。
一方で、コントロールの肺細胞へのＴｆ修飾ＢＣＳＰの取り込みは観察されなかった。
この結果を図４に示す。図４はマウス腫瘍の透過型電子顕微鏡像である。左側のスケールは５００ｎｍであり、右側のスケールは２００ｎｍである。この図４から、尾静脈から投与されたＴｆ修飾ＢＣＳＰは腫瘍細胞に取り込まれているのが確認できる。
ホウ素中性子捕捉療法により効率良く腫瘍細胞を死滅させるためには、腫瘍細胞に特異的かつ、一定の量以上の１０Ｂの蓄積（１０９原子／細胞）が有効である。特に、ＢＣＳＰは多くの１０Ｂを含有し、直径２００ｎｍのＢＣＳＰ１２粒子でこの条件を達成することができ、上述のようにＢＣＳＰにＴｆ を修飾することにより、この粒子はがん細胞に選択的によく取り込まれ、１０９原子の１０Ｂを細胞内に届けることができる。本発明の粒子は、少ない個数で大量のホウ素原子を細胞中に導入出来るので、１０Ｂを２０％しか含まない安価な天然ホウ素で作製した場合の粒子でも、十分な治療効果が確保出来ることを確認している。これにより、製造コストの大幅な低減を図ることが可能である。
本願発明の粒径サイズ２００ｎｍ〜１０００ｎｍの無機粒子の表面をトランスフェリンで修飾した腫瘍細胞への選択的取り込み能を備えた粒子は、高効率ＢＮＣＴ用ホウ素含有薬剤、高効率ハイパーサーミア用磁性粒子薬剤、高性能光線力学治療用薬剤等の剤として有用である。
本願発明の粒径サイズ２００ｎｍ〜１０００ｎｍの無機粒子の表面をトランスフェリンで修飾した腫瘍細胞への選択的取り込み能を備えた粒子は、高効率ＢＮＣＴ用ホウ素含有薬剤、高効率ハイパーサーミア用磁性粒子薬剤、高性能光線力学治療用薬剤等の剤として有用である。
Claims (8)
- 粒径サイズ２００ｎｍ〜１０００ｎｍの無機粒子の表面をトランスフェリンで修飾した腫瘍細胞への選択的取り込み能を備えていることを特徴とする粒子。
- 前記無機粒子がホウ素含有粒子であることを特徴とする請求項１記載の粒子。
- 前記ホウ素含有粒子が炭化ホウ素粒子であることを特徴とする請求項２記載の粒子。
- 前記粒子の表面に、ポリリジン及びポリグルタミン酸をこの順に被覆し、その上にトランスフェリンで修飾したことを特徴とする請求項１〜３のいずれか一項に記載の粒子。
- 請求項１〜４のいずれか一項に記載の粒子からなることを特徴とする中性子捕捉療法用薬剤。
- 粒径サイズ２００ｎｍ〜１０００ｎｍの無機粒子の表面を、ポリリジンで被覆した後にポリグルタミン酸で被覆し、該被覆表面にトランスフェリンを修飾することを特徴とする腫瘍細胞への選択的取り込み能を備えている粒子の製造方法。
- 前記無機粒子がホウ素含有粒子であることを特徴とする請求項６記載の粒子の製造方法。
- 前記ホウ素含有粒子が炭化ホウ素粒子であることを特徴とする請求項７記載の粒子の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2013113251A JP6142994B2 (ja) | 2013-05-29 | 2013-05-29 | 腫瘍細胞への選択的取り込み能を備えている粒子及びその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2013113251A JP6142994B2 (ja) | 2013-05-29 | 2013-05-29 | 腫瘍細胞への選択的取り込み能を備えている粒子及びその製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2014231497A true JP2014231497A (ja) | 2014-12-11 |
| JP6142994B2 JP6142994B2 (ja) | 2017-06-07 |
Family
ID=52125118
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2013113251A Active JP6142994B2 (ja) | 2013-05-29 | 2013-05-29 | 腫瘍細胞への選択的取り込み能を備えている粒子及びその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP6142994B2 (ja) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007016961A1 (en) * | 2005-08-05 | 2007-02-15 | Institut National De La Santé Et De La Recherche Médicale (Inserm) | Materials useful for support and/or replacement of tissue and the use thereof for making prostheses |
| JP2008266126A (ja) * | 2007-03-23 | 2008-11-06 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | ホウ素ナノ粒子又はホウ素含有ナノ粒子及びその製造方法 |
-
2013
- 2013-05-29 JP JP2013113251A patent/JP6142994B2/ja active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007016961A1 (en) * | 2005-08-05 | 2007-02-15 | Institut National De La Santé Et De La Recherche Médicale (Inserm) | Materials useful for support and/or replacement of tissue and the use thereof for making prostheses |
| JP2008266126A (ja) * | 2007-03-23 | 2008-11-06 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | ホウ素ナノ粒子又はホウ素含有ナノ粒子及びその製造方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| ADV. MATER., vol. 20, no. 9, JPN6016042137, 2008, pages 1671 - 1678, ISSN: 0003431865 * |
| BIOCONJUGATE CHEM., vol. 17, no. 5, JPN6016042138, 2006, pages 1314 - 1320, ISSN: 0003431863 * |
| LANGMUIR, vol. 22, no. 26, JPN6016042136, 2006, pages 11065 - 11071, ISSN: 0003431864 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP6142994B2 (ja) | 2017-06-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Jiang et al. | Engineered cell‐membrane‐coated nanoparticles directly present tumor antigens to promote anticancer immunity | |
| Xu et al. | A biomimetic aggregation‐induced emission photosensitizer with antigen‐presenting and hitchhiking function for lipid droplet targeted photodynamic immunotherapy | |
| Wang et al. | Large hollow cavity luminous nanoparticles with near-infrared persistent luminescence and tunable sizes for tumor afterglow imaging and chemo-/photodynamic therapies | |
| Chang et al. | Supramolecular immunotherapy of cancer based on the self‐assembling peptide design | |
| Tiwari et al. | Accelerated bone regeneration by two-photon photoactivated carbon nitride nanosheets | |
| Chen et al. | Activatable multifunctional persistent luminescence nanoparticle/copper sulfide nanoprobe for in vivo luminescence imaging-guided photothermal therapy | |
| Shu et al. | Persistent luminescence immune hydrogel for photodynamic‐immunotherapy of tumors in vivo | |
| EP1744789B1 (fr) | Particules activables par des rayons x et/ou uv, leur preparation et leur utilisation thérapeutique ou diagnostique | |
| Lee et al. | Near-infrared light-triggered photodynamic therapy and apoptosis using upconversion nanoparticles with dual photosensitizers | |
| Obonyo et al. | Quantum dots synthesis and biological applications as imaging and drug delivery systems | |
| Zhang et al. | Direct Presentation of Tumor‐Associated Antigens to Induce Adaptive Immunity by Personalized Dendritic Cell‐Mimicking Nanovaccines | |
| Song et al. | Temperature‐dependent CAT‐Like RGD‐BPNS@ SMFN nanoplatform for PTT‐PDT self‐synergetic tumor phototherapy | |
| Kishwar et al. | Intracellular ZnO nanorods conjugated with protoporphyrin for local mediated photochemistry and efficient treatment of single cancer cell | |
| Wang et al. | Size-controlled preparation and behavior study of phospholipid–calcium carbonate hybrid nanoparticles | |
| Zhang et al. | Exosomes as smart drug delivery vehicles for cancer immunotherapy | |
| Zhang et al. | Co-assembled hybrids of proteins and carbon dots for intracellular protein delivery | |
| Gao et al. | Targeted delivery of paclitaxel in liver cancer using hyaluronic acid functionalized mesoporous hollow alumina nanoparticles | |
| Wu et al. | Recent advancement of bioinspired nanomaterials and their applications: A review | |
| WO2022257849A1 (zh) | 一种工程化囊泡的制备方法及其应用 | |
| Qian et al. | Near‐Infrared Light Triggered Intelligent Nanoplatform for Synergistic Chemo‐Photodynamic Therapy of Tumor | |
| Cao et al. | Dual-functionalized covalent triazine framework nanosheets as hierarchical nonviral vectors for intracellular gene delivery | |
| Peng et al. | Research progress of the engagement of inorganic nanomaterials in cancer immunotherapy | |
| Yang et al. | Exosomes and mimics as novel delivery platform for cancer therapy | |
| Jiang et al. | Cancer cell membrane-wrapped nanoparticles for cancer immunotherapy: A review of current developments | |
| Bai et al. | Nanomedicines in oral cancer: inspiration comes from extracellular vesicles and biomimetic nanoparticles |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20160216 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20161108 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20161226 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20170418 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20170425 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6142994 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |