JP2014144952A - 双極性トランスカロテノイド塩及びそれらの使用 - Google Patents

Abstract

【課題】哺乳動物における、赤血球と体組織との間の酸素の拡散性を改善するのに有用なトランスカロテノイド塩化合物、それらの製造方法、それらの可溶化方法、及びそれらの使用方法を提供する。
【解決手段】下式で示されるトランスカロテノイド化合物。但し、トランスソディウムクロセチネートは除く。ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ［ＹはＮａ^＋、Ｋ^＋等のカチオン；Ｚはカルボキシル基（ＣＯＯ⁻）、硫酸基（ＯＳＯ３⁻）等の前記カチオンに結合した極性基；ＴＣＲＯはトランスカロテノイド骨格］
【選択図】なし

Description

本発明は、双極性トランスカロテノイド塩化合物、それらを可溶化する方法、それらを製造する方法、及びそれらを使用する方法に関する。これらの双極性トランスカロテノイド塩（ＢＴＣＳ）化合物は、ヒトを含めた哺乳動物において、赤血球と体組織との間の酸素の拡散性を改善するのに有用である。

カロテノイドは、分子の中央でその配置が逆転するように連結したイソプレノイドユニットからなる炭化水素の一種である。この分子の骨格は、共役した炭素−炭素二重結合及び単結合からなり、場合によりペンダント基も有する。かつては、カロテノイドの骨格は炭素４０個を含むと考えられていたが、かなり以前から、カロテノイドには、炭素原子が４０個未満の炭素骨格を有するものもあることが認識されている。炭素−炭素二重結合の周囲の４つの単結合は、すべて同一平面内に位置する。ペンダント基が炭素−炭素二重結合に対して同じ側に存在すれば、それらの基はシスと称される。ペンダント基が炭素−炭素結合に対して反対側に存在すれば、それらはトランスと称される。多数の二重結合により、カロテノイドの幾何（シス／トランス）異性に関しては莫大な可能性があり、また、異性化は溶液中で容易に起こる。近年の一連の書籍は、カロテノイドの性質等の多くに関する優れた参照文献である（「Ｃａｒｏｔｅｎｏｉｄｓ」、Ｇ．Ｂｒｉｔｔｏｎ、Ｓ．Ｌｉａａｅｎ−Ｊｅｎｓｅｎ及びＨ．Ｐｆａｎｄｅｒ編、Ｂｉｒｋｈａｕｓｅｒ Ｖｅｒｌａｇ、バーゼル、１９９５、参照することにより、本明細書にそのまま組み込まれる）。

多くのカロテノイドは非極性であり、それ故、水に不溶である。これらの化合物は、極度に疎水的であり、それ故、それらを可溶化するために、水性溶媒よりもむしろ有機溶媒を用いる必要があるので、生物学的使用のための製剤化が困難となっている。カロテノイドには、単極性で、界面活性剤の性質（疎水性部分及び親水性極性基）を有するものもある。これらの化合物は、バルク液体に溶解するよりむしろ水溶液表面に引き付けられる。天然の双極性カロテノイド化合物は少数存在し、これらの化合物は、中央の疎水性部分と、分子の各末端に１つずつ存在する２つの極性基とを含む。カロテノイドサルフェートは、水に対して「０．４ｍｇ／ｍＬまでの大きな溶解性」を有することが報告されている（「Ｃａｒｏｔｅｎｏｉｄｓ」１Ａ巻、２８３頁）。双極性と考えられるカロテノイドには、水にあまり溶解しないものもある。例えば、ジアルデヒド及びジケトンである。クロセチンのジピリジン塩も報告されているが、水に対する溶解性は、室温で１ｍｇ／ｍＬ未満である。双極性カロテノイドとしては、他にクロセチン及びクロシン（いずれも、香辛料のサフラン中に見出される。）が挙げられる。しかし、クロセチンは水にわずかに溶けるにすぎない。実際には、すべての双極性カロテノイドのうち、クロシンのみが水に対する顕著な溶解性を示す。

米国特許第４１７６１７９号、第４０７０４６０号、第４０４６８８０号、第４０３８１４４号、第４００９２７０号、第３９７５５１９号、第３９６５２６１号、第３８５３９３３号及び第３７８８４６８号は、クロセチンの種々の使用に関する。

米国特許第５１０７０３０号は、２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンジアール及びその誘導体の製造方法に関する。

米国特許第６０６０５１１号は、トランスソディウムクロセチネート（ｔｒａｎｓ ｓｏｄｉｕｍ ｃｒｏｃｅｔｉｎａｔｅ）（ＴＳＣ）及びその使用に関する。ＴＳＣは、天然サフランを水酸化ナトリウムと反応させ、その後抽出することによって製造される。

Ｒｏｙら、Ｓｈｏｃｋ １０、２１３〜７頁（１９９８）では、出血したラット（血液容積の５５％）に、出血終了後、トランスソディウムクロセチネート（ＴＳＣ）がボーラス投与され、その後更に３０分間、食塩水が与えられた。ＴＳＣで処置した動物はすべて生存したが、対照動物はすべて死亡した。ＴＳＣ群では全身酸素消費量が増加し、約１５分後に正常安静値の７５％に達した。

Ｌａｉｄｉｇら、Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ． １２０、９３９４〜９３９５頁（１９９８）は、ＴＳＣのコンピューターモデリングに関する。シミュレーションされたＴＳＣ分子は、水分子で取り囲むことによって「水和」された。ＴＳＣ周辺の水を並べ換えると、酸素分子が系に拡散するのが更に容易になった。計算上は拡散性が約３０％増大したが、これは、インビトロ及び動物実験の両方で得られた結果と一致した。

Ｓｉｎｇｅｒら、Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ ２８、１９６８〜７２頁（２０００）では、急性低酸素症のラットモデルにおいて、ＴＳＣが血液動態を改善し、ラットの生存を延長した。低酸素濃度（１０％）空気混合物を用いて低酸素症が誘発され、１０分後、動物に食塩水又はＴＳＣが与えられた。低酸素症は、血流の減少、及び塩基欠乏の増大をもたらした。対照群では、６匹の動物のうち、２匹しか生存しなかった。処置群では、すべてが生存し、血液動態は、２時間以上、十分な安定性を示し、その後緩やかに悪化した。

本発明は、下記構造：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
［式中、
Ｙはカチオンであり、
Ｚは、前記カチオンに結合した極性基であり、
ＴＣＲＯはトランスカロテノイド骨格である。］
を有する双極性トランスカロテノイド塩（ＢＴＣＳ）化合物、及びそのような化合物の合成に関する。

本発明はまた、可視光波長領域で生じる（ＢＴＣＳ組成物の水溶液の）最大ピークの吸光度を、ＵＶ波長領域で生じるピークの吸光度で割った値が７．０を超え、好適には７．５を超え、最も好適には８を超える、個々のＢＴＣＳ化合物の組成物（ＴＳＣ組成物を含む。）に関する。

本発明はまた、下記式：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
を有する治療有効量の化合物を、治療を要する哺乳動物に投与することを含む、種々の疾患の治療方法に関する。

本発明はまた、下記式：
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
を有する化合物を可溶化し、また、合成するいくつかの方法を包含する。

本発明はまた、本発明の化合物を送達するための吸入器にも関する。

新たな種類のカロテノイド及びカロテノイド関連化合物が見出されている。これらの化合物は、「双極性トランスカロテノイド塩」（ＢＴＣＳ）と称されている。

（本発明の化合物）
本発明は、疎水性のカロテノイド又はカロテノイド関連骨格が水溶液に溶解することを可能にする一群の化合物である双極性トランスカロテノイド塩、及びそれらの製造方法に関する。これらの塩のカチオンとしては、多くの種が挙げられるが、ナトリウム又はカリウム（これらは大部分の生体系で見出される。）が好適である。本願の発明者が保有する米国特許第６０６０５１１号（参照することにより、本明細書にそのまま組み込まれる。）には、トランスソディウムクロセチネート（ＴＳＣ）（ＢＴＣＳの１つ）をサフランから製造する抽出方法が記載されている。

双極性トランスカロテノイド塩の一般構造は下記式で表される。
ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ

式中、Ｙ（両末端で同一でも異なってもよい。）はカチオンであり、好ましくはＮａ^＋、Ｋ^＋又はＬｉ^＋である。Ｙは、好適には一価金属イオンである。Ｙは、有機カチオン、例えばＲ_４Ｎ^＋、Ｒ_３Ｓ^＋［Ｒは、Ｈ、又はＣ_ｎＨ_２ｎ＋１（ｎは、１〜１０、好適には１〜６）である。Ｒは、例えば、メチル、エチル、プロピル又はブチルである。］でもよい。

式中、Ｚ（両末端で同一でも異なってもよい。）は、上記カチオンに結合する極性基である。このような基は、カロテノイド（又はカロテノイド関連化合物）上の末端炭素を任意的に含み、例えば、カルボキシル（ＣＯＯ⁻）基又はＣＯ基である。また、硫酸基（ＯＳＯ_３ ⁻）、又はモノリン酸基（ＯＰＯ_３ ⁻）、（ＯＰ（ＯＨ）Ｏ_２ ⁻）、ジリン酸基、トリリン酸、又はそれらの組合せでもよい。

式中、ＴＣＲＯは、直鎖で、ペンダント基（以下で定義する。）を有するトランスカロテノイド又はカロテノイド関連骨格（好適には炭素１００個未満）であって、一般に、「共役した」、すなわち交互に連結された炭素−炭素二重結合及び単結合（一実施形態において、ＴＣＲＯは、リコペンのように完全には共役していない。）を含むものである。ペンダント基は、一般にメチル基であるが、後述のように他の基でもよい。好適な一実施形態において、骨格のユニットは、分子の中央でその配置が逆転するように連結している。炭素−炭素二重結合の周囲の４つの単結合はすべて同一平面内に位置する。ペンダント基が炭素−炭素二重結合に対して同じ側に存在すれば、それらの基はシスと称される。炭素−炭素結合に対して反対側に存在すれば、トランスと称される。本発明の化合物はトランスである。シス異性体は、一般に有害であり、拡散性を増大させない。一実施形態では、骨格が直鎖のままのトランス異性体を利用することができる。

トランスカロテノイド又はカロテノイド関連骨格は、例えば、下記式で表されるものである。

式中、ペンダント基Ｘ（同一でも異なってもよい。）は、水素（Ｈ）原子、又は１０個以下、好適には４個以下の炭素原子を有する直鎖状若しくは分岐鎖状の基（ハロゲンを任意的に含む）、又はハロゲンである。Ｘは、例えば、メチル基（ＣＨ_３）、エチル基（Ｃ_２Ｈ_５）、ハロゲン含有アルキル基（Ｃ１〜Ｃ１０）（例えば、ＣＨ_２Ｃｌ）、又はハロゲン（例えば、Ｃｌ又はＢｒ）である。ペンダント基Ｘは同一でも異なってもよいが、Ｘ基としては、骨格を直鎖状に維持するものを用いる必要がある。

自然界に存在するカロテノイドは多いが、カロテノイド塩は自然界に存在しない。本願の発明者が保有する米国特許第６０６０５１１号は、トランスソディウムクロセチネート（ＴＳＣ）に関する。ＴＳＣは、天然サフランを水酸化ナトリウムと反応させた後、主にトランス異性体を選択する抽出を行うことによって製造された。

ＢＴＣＳのシス異性体及びトランス異性体の存在は、水溶液に溶解したカロテノイド試料の紫外−可視スペクトルを調べることによって決定することができる。スペクトルが得られれば、可視光波長領域４１６〜４２３ｎｍ（数字は、用いる溶媒に応じて決まる。）で生じる最大ピークの吸光度の値を、ＵＶ波長領域２５０〜２５６ｎｍで生じるピークの吸光度で割った値を、トランス異性体の純度レベルの決定に用いることができる。ＢＴＣＳが水に溶解している場合、可視光波長領域の最大ピークは約４２１ｎｍにあり、ＵＶ波長領域のピークは約２５４ｎｍにある。Ｍ．Ｃｒａｗ及びＣ．Ｌａｍｂｅｒｔ、Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌｏｇｙ、第３８巻（２）、２４１〜２４３頁（１９８３）（参照することにより、本明細書にそのまま組み込まれる。）によると、計算結果（クロセチンを分析した場合）は３．１であり、その値は精製後、６．６に増加した。

本願の発明者が保有する米国特許第６０６０５１１号のトランスナトリウムクロセチン（天然サフランを水酸化ナトリウムと反応させた後、主にトランス異性体を選択する抽出を行うことによって製造されたＴＳＣ）について、ＵＶ及び可視光波長領域用に設計されたキュベットを用いてＣｒａｗ及びＬａｍｂｅｒｔの分析を行うと、平均約６．８の値が得られる。この試験を本発明の合成ＴＳＣについて行うと、その比は、７．０を超える値（例えば７．０〜８．５）、好適には７．５を超える値（例えば７．５〜８．５）、最も好適には８を超える値となる。実施例５を改良した方法により合成されたＴＳＣに関しては、その比が７．４を超える（例えば７．４〜８．５）。合成された物質は、「より純粋な」、すなわち高度に精製されたトランス異性体である。

近年、ＴＳＣは室温で約１０ｍｇ／ｍＬの水溶性を有することが見出されているが、その値は、そのような長い疎水性部分を含む分子の値としては異例である。ＴＳＣは、液体中における酸素の拡散性を増大させることも見出されている。

米国特許第６０６０５１１号には、サフランからＴＳＣを製造する抽出方法が記載されているが、サフランを用いても、単一のカロテノイド骨格しか塩に組み込むことができないので、同方法を用いて他の双極性カロテノイドを製造することはできない。

本明細書に開示する発明によれば、一群の化合物、すなわち種々のカロテノイド又はカロテノイド関連骨格を含む双極性トランスカロテノイド塩のすべての合成が可能になる。そのような化合物は水溶液に可溶であり、有利な生物学的用途を有し、例えば、酸素利用を増大させるために用いることができる。この増大は、双極性トランスカロテノイド塩の疎水性部分（骨格）が水分子の結合に影響を及ぼすことができるためと考えられる。実際に、これによって、酸素分子がその領域をより速やかに拡散することが可能になる。

（本発明の化合物及び組成物の可溶化）
本発明によれば、水溶液中へのトランスカロテノイド又はカロテノイド関連骨格分子の溶解が可能になる。以下、新規の溶解方法を説明する。本方法は、任意の双極性トランスカロテノイド塩及びその組成物に適用される。

ＢＴＣＳ含有注入用食塩水：
出血性ショックの治療のために、大量（推定失血量の３倍）の等張食塩水（生理食塩水とも呼ばれる。）を注入する。等張食塩水は、体内に注入された時に血漿のイオン強度を乱さないように、水１リットル当たりＮａＣｌ９ｇを含有する。この食塩水にＴＳＣを添加すると、優れた注入液が得られることが明らかになっているが、ＴＳＣ粉末とその食塩水とを単に混合しても、そのような溶液を調製することはできない。（１ｍＬ当たり数ミリグラムまでは、）どんなにＴＳＣを添加しても、生理食塩水に溶解するのはＴＳＣ約５０％である。これは、不溶のＴＳＣ粒子がまだ存在することを意味する。それを防止するには、必要量の２倍を超えるＴＳＣを添加し、その後、溶解していない粒子を遠心分離で除去することによって原液を調製すればよい。原液の実際の組成は、ＵＶ−可視スペクトロスコピーを用いて確認することができる。この原液は生理食塩水に添加することができるが、ＴＳＣは溶解したままである。

この方法は、他のタイプの塩化ナトリウム溶液や、塩（ＫＣｌ、Ｎａ_２ＳＯ_４、乳酸塩等）の溶液にＢＴＣＳを溶解させるのに用いることができる。このようにして、数ｍｇ／ｍＬ（例えば１〜３ｍｇ／ｍＬ）を溶液化することができる。

炭酸ナトリウムの希薄溶液はＢＴＣＳを溶解させる：
ＴＳＣのようなＢＴＣＳは、極希薄炭酸ナトリウム溶液に溶解する。炭酸ナトリウムの希薄溶液（例えば０．００００１〜０．００１Ｍ溶液）は、脱イオン水のｐＨ（通常５〜６である。）が８．０になるまで、脱イオン水に滴下することができる。これには、例えば脱イオン水５０ｍＬ当たり、極希薄炭酸ナトリウム２、３滴しか要しない。この炭酸ナトリウム−脱イオン水溶液は、大量のＴＳＣ（約１０ｍｇ／ｍＬ）を完全に溶解させることができる。ＢＴＣＳのカロテノイド部分の疎水性を考慮すると、驚くべき量である。

ＢＴＣＳは、炭酸ナトリウム水入りの滅菌びんと共に、粉末として供給することができる。この高濃度溶液は直接注射することができ（血漿よりも低いイオン強度を有する溶液のごく少量を注射することができる）、また、高濃度溶液は、生理食塩水に添加した後、注射することができる。ＴＳＣが炭酸ナトリウム−水溶媒に溶解していれば、その後、更に多量の同溶媒を添加しても、ＴＳＣは溶液状態のままである。

別の一実施形態では、炭酸ナトリウムの代わりに炭酸水素ナトリウムを用いる。塩基性ｐＨを有する脱イオン水を生成する他の塩を用いることもできる。

この方法で５〜１０ｍｇ／ｍＬのカロテノイド骨格濃度を実現することができる。

水はＢＴＣＳを溶解させる：
ＴＳＣは水（水道水、蒸留水、脱イオン水）に溶解するが、これらの溶液は、塩基性になるようにｐＨを調整しない限り安定しない。ＴＳＣは、標準水よりも脱イオン水（ごく少量のＮａ^＋イオンが存在する。）に多く溶解する。ＴＳＣを始めとするＢＴＣＳは、脱イオンしただけの水単独に溶解するものの、無調整の脱イオン水をその溶液に添加すると、ＴＳＣは析出する。ＢＴＣＳは、脱イオンしただけの水単独に溶解するが、わずかに塩基性になるようにｐＨを調整しなければ、脱イオン水の追加はＢＴＣＳの析出を引き起こす。

ＢＴＣＳを可溶化する他の方法：
ＢＴＣＳは、薬物送達を高める送達システムに製剤化することができる。本発明の化合物の製剤化（後述）を参照のこと。

（本発明の化合物である双極性トランスカロテノイド塩の合成法）
以下、双極性トランスカロテノイド塩の合成に用いることができる新規の合成方法を説明する。場合により、種々の合成ステップには、当業者に自明の変形態様が存在する。

Ａ． ＴＳＣの合成法：
トランスソディウムクロセチネート（ＴＳＣ）は、共役炭素−炭素二重結合を含む対称Ｃ_１０ジアルデヒド（２，７−ジメチルオクタ−２，４，６−トリエン−１，８−ジアール）を［３−カルボメトキシ−２−ブテン−１−イリデン］トリフェニルホスホランとカップリングさせることによって、合成することができる。これにより、クロセチンのトランスジメチルエステルが形成される。そして、このジメチルエステルは、けん化により最終生成物のＴＳＣに変換する。一般に、けん化は、水酸化ナトリウム水溶液又は水酸化ナトリウムのＴＨＦ（テトラヒドロフラン）溶液のいずれかでエステルを処理することによって行われるが、この場合、これらの方法では最良の結果が得られなかった。この場合は、エステルをＮａＯＨ／メタノール溶液と反応させることによって、けん化を非常に良好に行うことができる。ＴＳＣは、けん化の後、真空乾燥により回収する。

本合成に用いる反応物質であるＣ_１０ジアルデヒド及びトリフェニルホスホランは、種々の経路で調製することができる。例えば、Ｃ_１０ジアルデヒドは、ウィッティヒ（Ｗｉｔｔｉｇ）反応を用いて、ブロモ酢酸エチル及びフランから調製した。所望のホスホランの調製では、チグリン酸を出発物質とした。種々の長さの反応物質（例えば、Ｃ_１４ジアルデヒド及びトリフェニルホスホラン）を連結することによって、種々の長さのカロテノイド骨格を製造することができる。この方法により、種々のトランス双極性カロテノイド塩が形成される。改変を行って、種々のペンダント基を得ることもできる（ＴＳＣは、ペンダント基としてメチル基を有する）。

このように製造されたＴＳＣは、室温で、（炭酸ナトリウムの極希薄溶液でｐＨを８．０に調整した）水に、＞１０ｍｇ／ｍＬのレベルで可溶である。他にも、中性以上のｐＨを有する水に室温で可溶である双極性トランスカロテノイド塩は存在する。本明細書において、「可溶である」とは、室温で、水１ｍＬ当たり５ｍｇを超える量が溶解することを意味する（前述のように、カロテノイドの参照文献では、０．４ｍｇ／ｍＬを「極めて大きな溶解性」と述べているが、これは本明細書における溶解性の定義よりも低い）。

Ｂ． 一般的な合成法：
カロテノイド又はカロテノイド関連構造は、下記のように構築することができる。

（３−カルボメトキシ−２−ブテン−１−イリデン）トリフェニルホスホラン（Ｘがメチル基以外である場合は、関連化合物）は、イソプレノイドユニット（又はイソプレノイド関連ユニット）を対称カロテノイド（又はカロテノイド関連化合物）の両端に付加する重要な前駆体である。このプロセスは無限に繰り返すことができる。例えば、ジメチルトランスクロセチネートは、上記の化学反応を用いて、対応する対称ジアルデヒドに還元することができる。このジアルデヒドを過剰の（３−カルボメトキシ−２−ブテン−１−イリデン）トリフェニルホスホランと反応させて、対応するジエステルを得ることができる。この一連の合成手順は何度も繰り返すことができる。

（改良合成法）
２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンジアール（２，７−ジメチルオクタ２，４，６−トリエン−１，８ジアール）は、ＴＳＣ合成の重要な中間体である。この重要な前駆体は、３つの二重結合を有し、それ故、いくつかの異性体が可能である。ＴＳＣについては、オールトランス異性体（Ｅ，Ｅ，Ｅ−異性体）が必要である。一般的な合成経路では１１ステップの合成を要し、いくつかのステップでは、収率が比較的低く、選択性も乏しい（実施例１参照）。結局、途中で、いくつかの中間体を精製するためにカラムクロマトグラフィーを行う必要がある。

改良合成経路ははるかに簡単である（以下の反応スキームを参照のこと）。米国特許第５１０７０３０号（参照することにより、本明細書にそのまま組み込まれる。）に記載の３ステップ製法によれば、ジアルデヒドの幾何異性体混合物が得られる（米国特許第５１０７０３０号では、この混合物に言及されていない）。実施例１に記載の本発明の方法では、９６〜９７％の所望の異性体（オールトランス又はＥ，Ｅ，Ｅ−異性体）が、メタノール又は酢酸エチルからの数回の再結晶により、５９％の収率で得られる。

本発明の改良合成方法は、適切な溶媒（例えば、１，４−ジオキサン、テトラヒドロフラン、又はジアルキルエーテル［アルキル基は、１つ又は２つのＣ１〜Ｃ１０直鎖又は分岐アルキル基である。］）中で、パラ−トルエンスルフィン酸のようなスルフィン酸（ＲＳＯ_２Ｈ）［式中、ＲはＣ１〜Ｃ１０直鎖若しくは分岐アルキル基、又はアリール基（置換フェニル基）である。］を用いて異性化することにより、ジアルデヒドの残りの異性体混合物を所望のトランスアルデヒド（Ｅ，Ｅ，Ｅ）に変換することを含む。更に８％の収率で純粋な所望のジアルデヒドが得られ、最終ステップの全収率は５９％から７６％に高まる。この収率の改善は重要である。この異性化ステップを米国特許第５１０７０３０号の方法の第三ステップに組み込めば、更に良好な収率を得ることができる。

改良合成経路：

２種の望ましくない異性体：

望ましくないジアルデヒドから所望のジアルデヒドへの異性化：

けん化は、メタノールにジエステルを溶解させ、次いで、ＮａＯＨのような塩基を添加することによって行うことができる（ＮａＯＨの場合、ＢＴＣＳのＹはＮａ^＋である）。或いは、ジエステルは、既に塩基を含有するメタノールに溶解させてもよい。ＮａＯＨは、一般に水溶液（２０〜６０ｗｔ％）であるが、固体でもよい。ジエステルを溶解させる溶媒としては、メタノールに替えて、エタノール、プロパノール及びイソプロパノールを用いてもよい。けん化は、種々の方法で商業的に行うことができる。一相系又は二相系（１つの有機相及び１つの水相）を用いることができる。

上記の方法により、トランスクロセチンを合成することもできる。

更に、ＴＳＣに関して報告されているように、このようなＢＴＣＳ化合物は水中における酸素の拡散性を増大させる（カロテノイド骨格と水との疎水性相互作用が拡散性の増大をもたらすと考えられていることから、拡散性の増大は、最終生成物に組み込まれた疎水性部分の性質（例えば炭素鎖長）にも依存すると思われる）。

（本発明の化合物の製剤）
双極性トランスカロテノイド塩の高濃度溶液は、前述のように、炭酸ナトリウムの極希薄溶液に溶解させることによって調製することができる。得られた混合物は、そのまま使用しても、また、生理食塩水又は他の水性溶媒で更に希釈してもよい。双極性トランスカロテノイド塩の溶液は、更に、塩溶液に双極性トランスカロテノイド塩を直接溶解させ、次いで、溶解していない物質を除去することによって調製することができる。

双極性トランスカロテノイド塩は、室温で、乾燥形態で安定であり、長期保存することができる。そのような塩の製剤は、経口的に投与された場合、胃よりもむしろ腸管で吸収されるのが好適である。

本発明の化合物は、単独で投与することができるが、医薬製剤の一部として投与することもできる。そのような製剤は、当業者に公知の薬学的に許容される担体及び他の治療薬を含んでもよい（下記参照）。その製剤は、酸素の拡散性を改善する本発明の化合物の能力を阻害する化合物を含まないのが好適である。

本発明の化合物及び組成物の適切な投与量は、治療対象である病状の重症度に依存する。用量が「治療的に有効」であるためには、所望の効果、すなわち酸素の拡散性の増大という効果を有する必要がある。これにより、次は、酸素関連パラメータが正常値に戻ることになる。

投与は、任意の適切な経路（例えば、経口、経鼻、局所、非経口（皮下、筋肉内、静脈内、皮内、骨内、等）、経膣又は経直腸）によって行うことができる。好ましい投与経路は状況に依存する。ＢＴＣＳが血流に非常に迅速に入ることが必要な緊急状況では、吸入経路が治療に有利である。従って、製剤には、そのような経路の投与に適したもの（噴霧用の液体又は粉末）も含まれる。好ましい経路は、例えば患者の状態及び年齢により変わることは理解されるであろう。製剤は、ユニット剤形、例えば錠剤及び徐放性カプセルの形で適宜提供することができ、薬学分野で公知の方法によって調製し、投与することができる。製剤は、ＢＴＣＳの即時放出、又は徐放若しくは放出制御用のものでもよい。例えば、ＷＯ９９／１５１５０（参照することにより、本明細書にそのまま組み込まれる。）の徐放性製剤を参照のこと。

経口投与に適した本発明の製剤は、丸剤、カプセル剤、カシェ剤（ｃａｃｈｅｔ）若しくは錠剤（ｔａｂｌｅｔ）のような個別のユニットとして、又は散剤若しくは顆粒剤として、又は液剤、懸濁剤若しくは乳剤として提供することができる。経口投与に適した製剤の例としては、更に、トローチ剤（ｌｏｚｅｎｇｅ）、錠剤（ｐａｓｔｉｌｌｅ）、及び適切な基剤又は液体担体に入った状態で投与される吸入ミストが挙げられる。皮膚への局所投与用の製剤は、有効薬剤及び薬学的に許容される担体を含む軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤若しくはパスタ剤として、又は貼付剤の形で提供することができる。

経鼻投与に適した製剤のうち、担体が固体であるものの例としては、鼻腔通過を介した迅速な吸入により投与することができる粒子サイズの粉末が挙げられる。担体が液体である適切な製剤は、例えば鼻孔スプレー（ｎａｓａｌ ｓｐｒａｙ）又は点鼻液（ｎａｓａｌ ｄｒｏｐ）として投与することができる。

非経口投与に適した製剤の例としては、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤、及び当該製剤を対象となるレシピエントの血液と等張にする溶質を含んでもよい水性及び非水性の滅菌注射液、並びに懸濁化剤及び増粘剤を含んでもよい水性及び非水性の滅菌懸濁液が挙げられる。製剤は、ユニット型又は多容量型（ｍｕｌｔｉ−ｄｏｓｅ）容器、例えば密閉アンプル又は密閉バイアルの形で提供することができ、また、凍結乾燥を行い、後は、注射用水のような滅菌液体担体を使用直前に添加すればよいだけの状態にすることができる。注射液及び懸濁注射液は、滅菌した粉末、顆粒及び錠剤から調製することができる。

（本発明の化合物及び組成物の使用）
体組織への酸素の送達は、多種多様な状態を制御又は仲介する。クロセチンについて記載されているのと同じ医薬用途、同じ有効量で、本発明の化合物及び組成物を使用することができる。米国特許第４１７６１７９号、第４０７０４６０号、第４０４６８８０号、第４０３８１４４号、第４００９２７０号、第３９７５５１９号、第３９６５２６１号、第３８５３９３３号、及び第３７８８４６８号（これらは、各々、参照することにより、本明細書にそのまま組み込まれる。）を参照のこと。

ＴＳＣは、水溶液中における酸素の拡散性を約３０％増大させることが示されている。ＴＳＣは、哺乳動物における低酸素症後の生存を延長させ、低酸素症又は身体的ストレス後の酸素消費を増加させ、低酸素症後の血圧を増加させ、低酸素症後の血液アシドーシスを低減させ（すなわち、血中塩基の欠乏を低減させ、血液ｐＨを増加させ、かつ血漿乳酸レベルを低下させる）、低酸素症後の臓器傷害（例えば肝臓、腎臓）を低減させる。従って、本発明の化合物は、低酸素（低酸素症）を特徴とする哺乳動物（ヒトを含む。）の疾患／状態、例えば、呼吸器疾患、出血性ショック及び循環器疾患、特に、（例えば、ＡＲＤＳ敗血症又は出血性ショックによる）多臓器不全、慢性腎不全、アテローム性動脈硬化、気腫、喘息、高血圧症、脳浮腫、乳頭腫、脊髄損傷、脳卒中を治療するのに有用である。本発明の化合物はまた、上記疾患／状態のリスクのある哺乳動物を治療するのにも有用である。他の双極性トランスカロテノイド塩も類似の性質を有する。そのような化合物は、体内の酸素利用を増大させる方法として一般に提案されている他の方法（例えば、酸素療法、及びヘモグロビン又はフルオロカーボンの使用）と併用することもできる。

本発明の一実施形態では、酸素を投与する一方で、患者にＢＴＣＳを投与する。或いは、ヘモグロビン又はフルオロカーボンとＢＴＣＳとを共に与えることができる。これらの場合には、相加的効果が実現される。

これらの塩のいずれに関しても、治療に必要な最小投与量は、酸素の拡散性が増大する投与量である。本発明の化合物の有効投与量は、治療される病状、病状の重症度、並びに対象となる各哺乳動物患者の病期及び特質に依存する。しかし、投与量は、有効化合物の量が、体重１ｋｇ当たり約０．００１ｍｇから約５００ｍｇまで、好適には体重１ｋｇ当たり約０．０１〜３０ｍｇとなる範囲で変動すると思われる。ＩＶ投与は好適であるが、他の注射経路（例えば、筋肉内、皮下）、又は吸入経路を用いることもできる。経皮送達又は骨内送達が可能なのと同様に、経口投与を用いることもできる。

呼吸器障害：
双極性トランスカロテノイド塩は、急性及び慢性の呼吸器障害の治療に使用することができる。これらは、動脈酸素分圧が、９０〜１００ｍｍＨｇの正常値より低下した状態、例えば、６０〜７０ｍｍＨｇの値に低下した状態と説明されている。そのような急性及び慢性の呼吸器障害の例としては、気腫、急性肺傷害（ＡＬＩ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）及び喘息が挙げられる。

ＴＳＣは、血中の酸素分圧が低い場合（これは気腫、ＡＲＤＳ及びＣＯＰＤの症状である）、その分圧の値を増加させる。血中の酸素分圧の増加によって、気腫、ＡＲＤＳ及びＣＯＰＤの症状の多くが軽減する。ＴＳＣは、疾患の原因を取り除くことはないが、酸化的損傷、及びその根底にある原因から生じる損傷を軽減する。

出血性ショック：
出血性ショックは、酸素消費の減少によって特徴づけられる。双極性トランスカロテノイド塩は、より多くの酸素を赤血球から組織に拡散させることによって、身体の酸素消費を増加させる。ＴＳＣは、出血性ショックの状態にあるラットの酸素消費を増加させることが示され、また、ショックの他の症状を軽減することも示されている。本発明の化合物は、低い血圧を増加させ、増加した心拍数を減少させ、かつショックの間に生じた血液アシドーシスを逆転させる。本発明の化合物は、出血性ショック後の臓器傷害も低減させる。

本発明の化合物は、吸入投与又は注射によって、或いは、標準的な蘇生液（ラクテートリンゲル液又は生理食塩水）に添加することによって、出血性ショックに使用することができる。

循環器疾患：
欧米文化において、主な死因は虚血性心疾患である。死亡は、心臓の収縮能力が徐々に低下するか、或いは、頻繁にあることだが、突然停止するかのいずれかによって生じる。心突然死（ＳＣＤ）は、症状開始後６０秒から２４時間後までの時間に生じる。これらの死は、通常、急性冠閉塞（遮断）、又は（場合により閉塞に起因する）心室細動の結果である。

心筋虚血は、心筋への酸素の供給が不十分な場合に見られる。冠血流が極端に低い場合、心筋は機能できず、死滅する。筋肉のその領域は梗塞したといわれる。冠血流の減少は、冠動脈に生じるアテローム性動脈硬化によって生じることが最も多い。虚血によって、機械的及び電気的パフォーマンスの障害、並びに筋細胞の傷害が起こるが、これらは、心室細動（ＶＦ）と呼ばれる致死的な不整脈を引き起こすことがある。心室細動では、心室の電気活動が無秩序となり、心電図が、不規則なリズムを伴い、かつ判別可能なパターンを有しないものとなる。心室細動は、心筋虚血及び心筋梗塞に伴って起こることが多く、ほぼ常に、心突然死を引き起こす。双極性トランスカロテノイド塩は、心筋虚血の治療に有効である。心筋虚血に先行して起こることが多いアテローム性動脈硬化、及びうっ血性心不全も、これらの塩で治療することができる。

虚血：
双極性トランスカロテノイド塩は、腎虚血、肝虚血、脊髄虚血及び脳虚血（例えば脳卒中）のような他の形態の虚血（組織又は臓器への血流不足）の治療にも有効である。

手術：
手術は、失血又は動脈のクリッピング（例えばバイパス術）のいずれかを伴うことが多いが、これらは虚血の原因となることがある。双極性トランスカロテノイド塩は、手術の前治療に、又は手術中若しくは手術後の治療に有効である。

高血圧症：
高血圧症（ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ）、すなわち高血圧（ｈｉｇｈ ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ）は、循環器疾患に関連することが多い。本発明の化合物は、血圧の低下に用いることができる。

パフォーマンスの増強：
ＢＴＣＳは歩行、走行、リフティング等の間の酸素消費レベルを増加させて、好気的代謝を増強する。持久力も増加する。

外傷性脳損傷：
外傷性脳損傷後の低酸素症は脳障害を増大させる。ＢＴＣＳは、衝撃損傷（限局性及びびまん性損傷）後の脳組織中の酸素レベルを増加させる。衝撃損傷の例としては、自動車／オートバイ事故及び落下が挙げられる。ＢＴＣＳはまた、高酸素療法が用いられる場合に、正常な脳組織に到達する酸素の量を増加させる。

アルツハイマー病：
ＢＴＣＳは、アルツハイマー病における脳の酸素消費レベルを増加させ、それ故、アルツハイマー病の症状を緩和する。血流及び酸素消費は、認知症に罹患していない高齢者に見られる値よりも約３０％低いレベルに低下する（Ｗｕｒｔｍａｎ、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ、第２５２巻、１９８５）。

ＢＴＣＳによる脳内酸素消費レベルの増加は、記憶喪失も低減させる。

糖尿病：
ＢＴＣＳは、糖尿病の合併症（潰瘍、壊疽、糖尿病性網膜症等）の治療に有用である。糖尿病性足部潰瘍は、高圧酸素呼吸療法を用いた方が、治癒が良好である（Ｍ．Ｋａｌａｎｉら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄｉａｂｅｔｅｓ ＆ Ｉｔｓ Ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、第１６巻、２号、１５３〜１５８頁、２００２）。

ＢＴＣＳはまた、低酸素分圧に関連する糖尿病性網膜症という合併症も治癒させる（Ｄｅｎｎｉｎｇｈｏｆｆら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、第２巻、１号、１１１〜１１３頁、２０００）。

その他の使用：
双極性トランスカロテノイド塩はまた、脊髄損傷、脳浮腫、貧血及び皮膚乳頭腫の治療にも使用することができる。いずれの場合にも、状態を緩和し、重症度を低下させる。これは、双極性トランスカロテノイド塩の使用に起因する酸素消費の増加によるものと考えられる。

双極性トランスカロテノイド塩は更に、生理学的に重要な他の分子（例えば、グルコース、ＣＯ_２又はＮＯ）の拡散性を増大させるのに使用することができる。ＢＴＣＳはまた、酸素由来フリーラジカルを除去する。

以下の実施例は例示的なものであり、本発明の組成物及び方法を限定するものではない。通常行われる、種々の条件及びパラメータの適切な変更及び調整は、当業者に自明であり、本発明の精神及び範囲に属する。

（実施例１：トランスソディウムクロセチネートの合成）

共役した炭素−炭素二重結合を含む対称Ｃ_１０ジアルデヒドを［３−カルボメトキシ−２−ブテン−１−イリデン］トリフェニルホスホランとカップリングさせることによって、トランスソディウムクロセチネートを合成する。そして、ＮａＯＨ／メタノールの溶液を用いて、この生成物をけん化する。

酢酸エチルに（約２モル／リットルの濃度で）溶解させたトリフェニルホスフィンを、ブロモ酢酸エチルにゆっくりと加える。単離、及び塩基を用いた処理後に、生成物をヨウ化メチル及び苛性剤で順次処理して、ホスホランを形成することができる。この場合、カロテノイド骨格を形成するための基本化合物は、フランのような環状化合物から製造することができる。フランを臭素及びメタノールと反応させ、選択的脱プロトンステップを経て、モノアルデヒドを形成する。そして、これをホスホランとカップリングさせる。酸性条件でもう一方のジメチルアセタール基を脱保護して、遊離アルデヒドを形成した。その後、この化合物を同ホスホランともう一度反応させて、ジエチルジエステルを得る。エステル基を還元してアルコールにし、更に、（例えばＭｎＯ_２を用いて）酸化することにより、ジアルデヒド型のＣ_１０骨格が形成される。そして、これを、チグリン酸から製造されたホスホランと反応させる。酸性条件でチグリン酸をメタノールでエステル化して、メチルエステルを得、次いで、臭素化ステップを行う。その結果、アリルブロマイド異性体が形成されるが、これは、結晶化を用いて分離することができる。その後、所望の臭化物を水酸化ナトリウムで処理することにより、所望のホスホランが得られる。更に、このホスホラン及びＣ_１０ジアルデヒドを、トルエン又はベンゼンのような溶媒に溶解させ、還流する。得られた生成物を粉末として単離し、次いで、４０％ＮａＯＨ／メタノール混液でけん化し、溶媒を除去した後、ＴＳＣを形成する。

トランス−ソディウムクロセチネート１（ＴＳＣ）を、１７ステップの合成手順で、全収率１．５％で調製した。出発物質としてブロモ酢酸エチル、フラン及びチグリン酸を用いて、全量４．１ｇのＴＳＣを調製した。

ジメチルクロセチネートのけん化から、トランス−ソディウムクロセチネート（ＴＳＣ）を合成した。ジメチルクロセチネートの調製は、Ｂｕｃｈｔａ及びＡｎｄｒｅｅ^１によって報告された全合成に基づいて行った。ジメチルクロセチネートを調製する合成戦略は、対称Ｃ_１０ジアルデヒド（２，７−ジメチルオクタ−２，４，６−トリエン−１，８−ジアール）を（３−カルボメトキシ−２−ブテン−１−イリデン）トリフェニルホスホランとカップリングさせることに基づくものだった。

元のＢｕｃｈｔａ及びＡｎｄｒｅｅの論文^１は、「トランス−２，２−ビスジメチル−クロセチン−ジメチルエステル及びトランス−クロセチン−ジメチルエステルの全合成」という表題が付されていたが、実験の詳細及び収率は報告されていなかった。Ｃ_１０ジアルデヒド及びホスホランに至る種々のステップに関する手順は、文献の広範囲な調査の後に見出された。結局、ＴＳＣは、ブロモ酢酸エチル、フラン及びチグリン酸を出発物質として用いた１７ステップの手順で、全収率１．５％で調製された。

ウィッティヒ反応を用いて、ブロモ酢酸エチル^２及びフラン^３からＣ_１０対称ジアルデヒドを調製した。ブロモ酢酸エチルをトリフェニルホスフィン及びヨウ化メチルで処理して、ホスホラン６を得た。

第一ステップの収率は、相当高い９２％であった。この一連の手順のその後のステップの定量は、ホスホラン４及びホスホニウム塩５の性質から複雑であった。これらの化合物はいずれも、極端に粘性の高いシロップであり、ロータリーエバポレーターで濃縮中に活発に発泡した。両化合物は、好都合なことに、塩化メチレン溶液として取り扱うことができ、ホスホラン６の全収率は、定性的な観点から許容可能と考えられた（７５％よりも高いと推定された）。

臭素を用いてフランを開環し、フマルアルデヒドビス（ジメチルアセタール）８を形成した^３。

酸性条件下のビス（ジメチルアセタール）８のモノ脱保護^４から、アルデヒド９を得、次いで、それをホスホラン６とカップリングさせて、収率４５％で１０を得た。ジメチルアセタール１０の脱保護には酸性条件を用いた。ホスホラン６で１１を処理して、ジエステル１２を得た。ＤＩＢＡＬ−Ｈによってエステル基をアルコールに還元し、更にＭｎＯ_２で酸化して、Ｃ_１０ジアルデヒド１４を得た。ＮＭＲデータから、１４の立体化学特性はトランスであると判断した。特に、この化合物のＣ_２対称性は、^１３Ｃ ＮＭＲスペクトルに、予想された５つの共鳴を与え、^１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、δ９．５４（１Ｈ）、７．０７（２Ｈ）及び１．９５（３Ｈ）にシグナルを示した。

ステップｈ〜ｋの収率の幅は、最初の試験的実験からスケールアップした反応にかけて単離が改善したことを反映している。

４ステップの手順で、チグリン酸１５をホスホラン２０に変換した。フィッシャーエステル化条件を１５に適用することによって、メチルエステル１６を得た。ＮＢＳを用いた反応から、γ−ブロモチグリン酸メチル５９％、α−ブロモチグリン酸メチル２６％の混合物を得たが、残りの物質は未反応の出発物質であった。報告された文献に基づいて位置異性体の形成が予想された^５。次のステップでは、ホスホニウム塩のα／γ混合物を再結晶させて、所望のγ−ホスホニウムブロマイド１９を得た^６。更に水酸化ナトリウムで処理して、ホスホラン２０を得た。

ホスホラン２０及びＣ_１０ジアルデヒド１４を、ベンゼン中で還流することによってカップリングさせた^６。ジメチルクロセチネート２１を赤色粉末として単離した。メチルエステルのけん化は予想よりも困難であることが判明した。室温下、エステル２１をＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ中の２当量のＮａＯＨで処理し、還流しても、物質は変化しなかった。溶解性が重大な問題であると考えられたため、ピリジンを加えた。この操作は固体の大部分を溶解させたが、ピリジン及び２．５Ｎ ＮａＯＨの混合物を還流しても、生成物が得られなかった。標準的なＴＨＦ／２．５Ｎ ＮａＯＨけん化条件も、このエステルに作用しなかった。結局、４０％ＮａＯＨ／メタノールを一晩還流すると好結果となることが判明した。これにより、ＴＳＣ１を橙色固体として得た。

^１Ｈ ＮＭＲスペクトルを得るために、ＴＳＣを溶解させることを試みた。しかし、ＴＳＣは、大部分の通常の有機溶媒（クロロホルム、ＤＭＳＯ、ピリジン、メタノール、アセトン及び氷酢酸）に事実上不溶であった。このプロジェクトから生成したＴＳＣを、ＩＲ、ＵＶ、ＨＰＬＣ及び元素分析によって同定した。ＩＲは、１５４４及び１４０２ｃｍ^−１で特徴的な吸光を示した（共役したカルボキシレートと一致）。ＵＶ及びＨＰＬＣは基準ＴＳＣと一致した^７。元素分析からは、満足な値が得られた。

一連の反応の全収率は１．５％であった（フランに基づく）。

以下、合成について詳細に説明する。

すべての試薬及び化学物質はＡｌｄｒｉｃｈ又はＳｉｇｍａから購入し、特に断らない限り、入手時の状態で使用した。溶媒は、ＡＣＳ試薬又はＨＰＬＣ等級としてＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購入し、それ以上精製せずに使用した。無水溶媒は、Ｓｕｒｅ／Ｓｅａｌ（商標）ボトルに入った状態でＡｌｄｒｉｃｈから購入し、それ以上精製せずに直接使用した。脱イオン水は、社内のＣｕｌｌｉｇａｎ水処理システムから得た。

融点は、Ｍｅｌ−Ｔｅｍｐ ＩＩで得、補正を行わなかった。赤外スペクトルは、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ １６００ ＦＴＩＲ分光光度計で測定した。核磁気スペクトルは、試料の性質に応じて内部又は外部重水素ロックを有する５ｍｍ多核プローブを用いて、ＪＥＯＬ ＦＸ９０Ｑスペクトロメータで測定した。プロトン及びカーボンＮＭＲ化学シフトは、それぞれＴＭＳ又は重水素溶媒に対応させた。５％リン酸水溶液の同軸挿入管を用いて、プロトンデカップリングモードでリンＮＭＲスペクトルを通常通り測定し、これを外部標準とした。

反応の進行を評価し、また、生成物の組成を推定するためのガスクロマトグラフィーによる通常の分析は、水素炎イオン化検出器及びＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ ３３９４Ａインテグレータを備えるＶａｒｉａｎ ３７００ガスクロマトグラフで行った。ヘリウムキャリアガスを伴う１５メートルのＤＢ５カラム（内径０．５３ｍｍ、フィルム厚１．５ミクロン）に溶液１マイクロリットルを注入し、２０℃／分で５０℃から２５０℃に変化させ、２５０℃に１０分間維持するという温度プログラムを使用した。インジェクター及び検出器温度を、通常通り２５０℃に設定した。

検出方法に応じて蛍光指示薬（１Ｂ２又は１Ｂ２−Ｆ）を用いて、又は用いずに、Ｂａｋｅｒ−ｆｌｅｘ２．５×７．５ｃｍシリカゲルプレートで薄層クロマトグラフィーを行った。展開後のプレート上の成分をＵＶで検出した。

元素分析は、Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．（ホワイトハウス、ニュージャージー州）が行った。

［（エトキシカルボニル）メチレン］トリフェニルホスホラン（４）^２ （ＡＣＬ−Ｇ２９−１）：
トリフェニルホスフィン（２３５．６ｇ、０．９０ｍｏｌ）をＥｔＯＡｃ（５４０ｍＬ）に溶解させた。すべての固体が溶解するのに約３０分を要した。この過程は吸熱的であった（周囲温度が２０℃の時、溶液は１３℃まで冷却された）。ＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）に溶解させたブロモ酢酸エチル（１００ｍＬ、０．９０ｍｏｌ）の溶液を１．５時間かけて滴下した。その添加の間に白色沈殿が形成した。周囲温度（１８℃）で一晩（２０時間）攪拌した。

固体を真空ろ過により収集し、多量のＥｔ_２Ｏでリンスした。減圧下、４５℃で一晩乾燥させ、３を収率９２．６％（０．８３ｍｏｌ）で、白色固体（３５６．３ｇ）として得た。^１Ｈ ＮＭＲは文献値と一致した。

この固体を塩化メチレン（３Ｌ）に溶解させ、１２Ｌ容のフラスコ中で、１Ｍ ＮａＯＨ（３．６Ｌ）と共に４５分間激しく攪拌して処理した。有機相を分離し、水相を、塩化メチレン（２×１Ｌ）を追加して抽出した。有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、残りの体積が約１Ｌとなるまで濃縮した。少量の物質を取り出し、^１Ｈ ＮＭＲで検査し、文献値と一致することが判明した。

［１−（エトキシカルボニル）エチリデン］トリフェニルホスホニウムアイオダイド（５）^２ （ＡＣＬ−Ｇ２９−２）：
反応フラスコを氷浴中で冷却しながら、ＡＣＬ−Ｇ２９−１で得た物質をヨードメタン（６４．０ｍＬ、１．０３ｍｏｌ）で処理した。添加が完了した時（１時間）、反応混合物をＴＬＣ（シリカゲル、１０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３）でチェックし、かなりの量の出発物質が残っていることが示された。氷浴を外し、反応混合物を１．５時間後にＴＬＣでチェックした。主バンドの幅の減少（出発物質は筋状になる。）に基づき、反応は完全であるように見えた。ロータリーエバポレーターで反応混合物を濃縮し、大部分の溶媒が除去された時、生成物は発泡し始め、蒸気ダクトまで上昇した。出現したホスホニウム塩５は、極めて粘度の高いシロップであったが、取扱いを容易にするために、塩化メチレン溶液として保存した。５の性質が原因で、この物質の定量は行わなかった。

［１−（エトキシカルボニル）エチリデン］トリフェニルホスホラン（６）^２ （ＡＣＬ−Ｇ２９−２Ａ）：
５の一部をＣＨ_２Ｃｌ_２（３５０ｍＬ）に溶解させ、１Ｍ ＮａＯＨ（５００ｍＬ）と共に４５分間激しく攪拌した。有機相を分離し、水相をＣＨ_２Ｃｌ_２で抽出した（２×１００ｍＬ）。有機相を合わせ、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濃縮して、６を黄色固体８．０ｇとして得た。^１Ｈ ＮＭＲスペクトルは文献値と一致した。

フマルアルデヒドビス（ジメチルアセタール）（８）^３ （ＡＣＬ−Ｇ２９−３）：
無水ＭｅＯＨ（６５０ｍＬ）に溶解させたフラン（８８．０ｇ、１．２９ｍｏｌ）の溶液をＮ_２下で−４５℃に冷却した。臭素（６８．０ｍＬ、１．３２ｍｏｌ）の溶液を、≦−４５℃を維持する速度で２．５時間かけて滴下した。赤色溶液を２．５時間かけて−１０℃に温め、更に２時間そのままに保持した。反応混合物は淡琥珀色であった。Ｎａ_２ＣＯ_３５ｇの添加により、かなりの量のガス放出及び４℃の発熱が生じた。反応混合物をドライアイスで冷却し、残りのＮａ_２ＣＯ_３（全量２１０ｇ）を５０分かけて添加した。一晩（１１時間）、−１０℃に保持した後、氷浴を外し、反応混合物を室温に温め、２０時間攪拌した。

得られた塩を減圧ろ過により取り出し、ヴィグリュー（ｖｉｇｒｅｕｘ）カラムを用いて、約１５０ｍＬが除去されるまでろ液を減圧蒸留した。塩が更に析出し、蒸留器の激しい衝突を引き起こした。ろ過後、更に１５０ｍＬを蒸留し、更に多量の塩が溶液から析出した。再度、猛烈な衝突が問題となった。蒸留器を冷却し、ろ過し、ろ液をＥｔ_２Ｏ（４００ｍＬ）で処理し、沈殿を減圧ろ過によって取り出した。少なくとも塩１２０ｇを収集した（初期に収穫した塩は定量せずに捨てた）。水流吸引器を備えるロータリーエバポレーターを用いて、２５℃でＥｔ_２Ｏの大部分を除去した。ヴィグリューカラムを用いて蒸留を再開し、８を、沸点８６〜９２℃／９ｔｏｒｒ（文献値８５〜９０℃／１５ｔｏｒｒ）の無色透明液体１７５．２ｇとして収集した（収率７６．９％）。^１Ｈ ＮＭＲスペクトルは所望の生成物と一致した。ＧＣ分析：純度８１．９％。

フマルアルデヒドモノ（ジメチルアセタール）（９）^４ （ＡＣＬ−Ｇ２９−４）：
フマルアルデヒドビス（ジメチルアセタール）８（５．２９ｇ、０．０３ｍｏｌ）をアセトン（１２０ｍＬ）に溶解させた。Ｈ_２Ｏ（１．８０ｍＬ）及びアンバーリスト１５（１．２０ｇ）を順次添加した。得られた混合物を５分間激しく攪拌し、次いで、ろ過して樹脂を除去した。この間に、溶液は無色から黄色に変わった。室温下、ろ液をロータリーエバポレーターで濃縮し、小麦色の残留物をクーゲルロール（ｋｕｇｅｌｒｏｈｒ）で蒸留し（３７℃／２００ミリｔｏｒｒ）、９を、７１．８％の収率で、黄色液体２．８０ｇとして得た。蒸留器が最初に衝突した時に少量の物質が失われた。^１Ｈ ＮＭＲスペクトルは所望の生成物と一致した。ＧＣ分析では、純度が８０％であることが示された。

（ＡＣＬ−Ｇ２９−７）：
フマルアルデヒドビス（ジメチルアセタール）８（７２．１ｇ、０．４１ｍｏｌ）をアセトン（１６００ｍＬ）に溶解させた。Ｈ_２Ｏ（２５．０ｍＬ）及びアンバーリスト１５（１６．７ｇ、アセトンで予洗）を加えた。混合物を５分間激しく攪拌し、次いで、ろ過して酸性樹脂を除去した。反応混合物はわずかに黄色に呈色し、その色は以前の大規模調製よりもはるかに淡かった。ＧＣ分析では、生成物３４．５％及び出発物質４６．１％の存在が示された。更に５分間、樹脂で処理した。ＧＣ分析では、生成物５９．５％及び出発物質２１．７％の存在が示された。更に１０分間、樹脂で処理した（合計時間２０分）。ＧＣ分析では、生成物７３．９％及び出発物質２．０％の存在が示された。室温下、ロータリーエバポレーターでろ液を濃縮して、褐色油状物質５４ｇを得た。減圧蒸留により黄緑色油状物質３４．４８ｇを得た。ＧＣ分析では、純度６４．７％（８．２２分）であり、主不純物１７．５％（９．００分）及び６．９％（９．１４分）が存在することが示された。正味の回収収量は、２２．３ｇ（０．１７ｍｏｌ）であった。ＧＣによる初期カットの分析では、不純物を極めて多く含んだ物質であることが示された。

（ＡＣＬ−Ｇ２９−１３）：
アンバーリスト１５（８．６１ｇ）をアセトン（１００ｍＬ）中で３０分間攪拌し、ろ過によって収集した。アセタール８（３５．０ｇ、０．１６ｍｏｌ）をアセトニトリル（６２０ｍＬ）に溶解させ、機械的に攪拌しながら、酸性樹脂及び脱イオン水（１０．０ｍＬ、０．５５ｍｏｌ）を添加した。ＴＬＣ（ヘキサン：Ｅｔ_２Ｏ（１０：３））で反応過程を観察したところ、１５分後には、大部分の出発物質が変換されていた。２０分後には、痕跡量のジメチルアセタールしか検出されなかった。樹脂をろ過によって除去し、≦４０℃で、ロータリーエバポレーターでろ液を濃縮した。粗生成物をＢｉｏｔａｇｅカラム（７．５×９．０ｃｍ）にロードし、ヘキサン中の１５％Ｅｔ_２Ｏで溶出させて、１９．８ｇを得た（収率６５％）。

６，６−ジメトキシ−２−メチルヘキサ−２，４−ジエノエート（１０）^２ （ＡＣＬ−Ｇ２９−５）：
イリド６（７．８０ｇ、２２ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（６５ｍＬ）に溶解させた。フマルアルデヒドモノ（ジメチルアセタール）９（２．８０ｇ、１７ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、この溶液を一晩攪拌した。ロータリーエバポレーターで減圧して、溶媒を除去した。粗製物の^１Ｈ ＮＭＲは、所望の生成物が存在することを示した。静置すると、結晶が成長した（トリフェニルホスフィンオキシドと推定された）。この固体（減圧ろ過による乾燥後、１４．１ｇ）を石油エーテル中でスラリーとし、ろ過した。ろ液を濃縮して、固体が析出した黄色油状物質を得、これを塩化メチレン（１５ｍＬ）に溶解させ、Ｂｉｏｔａｇｅ４×７．５ｃｍカラムを用いてクロマトグラフィーを行い、塩化メチレンで溶出させて、１０を黄色油状物質１．８ｇとして得た（収率５０％）。黄色油状物質の^１Ｈ ＮＭＲスペクトルは文献値と一致したが、痕跡量の塩化メチレンが残留していたため（０．７５当量）、その物質を４５分間、ロータリーエバポレーターに入れた。質量は１．５ｇ（収率４０．６％）に減少し、塩化メチレンの共鳴は消失した。ＧＣ分析の主ピークは１２．６分。８７．５％（５０℃に５分間保持し、２０℃／分で最終温度２５０℃まで上昇させた）。

（ＡＣＬ−Ｇ２９−６）：
塩化メチレン（６５０ｍＬ）に溶解させたイリド６（５９．２ｇ、０．１６ｍｏｌ）の溶液を氷浴中で冷却し、９（２５．７ｇ、０．１９ｍｏｌ）の溶液を添加した。氷浴が溶けるのを放置したまま、溶液を一晩攪拌した。ＴＬＣ（ヘキサン：Ｅｔ_２Ｏ（１０：３））は、生成物のごく近くを移動する少なくとも３つの他の化合物が存在することを示した。ＧＣ分析によるアルデヒドの検査では、純度が５０．０％であることが示された。溶媒を除去して、固体／油混合物を得た。

（ＡＣＬ−Ｇ２９−８）：
イリド６（５９．２ｇ、０．１６ｍｏｌ）及びアセタール９（０．１９ｍｏｌ）を塩化メチレン（１．１Ｌ）中でカップリングさせて、上述のようにワークアップして、黄緑色油状物質８０ｇを得た。粗反応混合物の一部（元の８０ｇのうちの４．１３ｇ）をクーゲルロールに入れ、５０℃／２５０ｍｔｏｒｒで蒸留した。無色油状物質を濃縮して２．２８ｇとしたが、^１Ｈ ＮＭＲは、それが出発アルデヒドであり、他方、生成物１０（１．８５ｇ）が蒸留器中に残留していることを示した。５０℃／２５０ｍｔｏｒｒのクーゲルロール蒸留によって、大部分の粗生成物から揮発性成分を除去した（正味３５ｇ）。

エチル２−メチル−６−オキソ−ヘキサ−２，４−ジエノエート（１１）^２ （ＡＣＬ−Ｇ２９−９）：
予備蒸留器から得たアセタール１０（ＡＣＬ−Ｇ２９−８、１．８５ｇ、９ｍｍｏｌ）をアセトン（３３ｍＬ）に溶解させた。脱イオン水（０．５０ｍＬ）及びアンバーリスト１５樹脂（０．３５ｇ、アセトンで予洗）を添加した。この混合物を２０分間攪拌した。ろ過し、ロータリーエバポレーターで濃縮して、黄緑色油状物質１．５３ｇを得た。Ｂｉｏｔａｇｅカラム（４．５×７ｃｍ）を用いてクロマトグラフィーを行い、ヘキサン中の１５％Ｅｔ_２Ｏで溶出させた。このシステムでは分離が不完全であったが、主成分０．３２ｇを単離し、分析した。^１Ｈ ＮＭＲスペクトルは文献データと一致し、ＩＲ（１７１１、１６８２ｃｍ^−１）は所望の生成物と一致した。ＧＣでは９５．６％。更に０．３５ｇを回収したが、極性のより低い物質と、より高い物質とが交差混入していた。^１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、かなり純度の高い物質であることを示した。ＧＣでは９０．６％。収率：４２％。

ジエチル２，７−ジメチルオクタ−２，４，６−トリエン−１，８−ジオエート（１２）^２ （ＡＣＬ−Ｇ２９−１０）：
Ｇ２９−９で得たアルデヒド１１（０．６５ｇ、３．５ｍｍｏｌ）を塩化メチレンに溶解させ、マグネチックスターラーで攪拌した。イリド（１．５９ｇ、４．４ｍｍｏｌ）を加えた。薄黄緑色溶液は、数分以内により暗い色合いの黄色に変わった。１０分後のＴＬＣは、出発物質がほぼ完全に消費されたことを示した。２０時間攪拌後、反応混合物（褐色溶液）を、シリカゲルが部分的に充填されたピペットに通してろ過した。ろ液を濃縮して褐色固体を得た。少量のＣＨＣｌ_３を含むヘキサン中の５％Ｅｔ_２Ｏに固体を溶解させた。Ｂｉｏｔａｇｅカラム（４×７．５ｃｍ）を用いてクロマトグラフィーを行い、ヘキサン中の５％Ｅｔ_２Ｏで溶出させた。主生成物を白色結晶固体０４５ｇとして単離した（収率５０％）。^１Ｈ ＮＭＲスペクトルは文献データと一致した。

（ＡＣＬ−Ｇ２９−１４）：
１２を上述のようにして更に調製し、クロマトグラフィーで精製後、２１．８ｇを得た（８１．６％）。^１Ｈ ＮＭＲスペクトルは所望の生成物と一致した。

２，７−ジメチルオクタ−２，４，６−トリエン−１，８−ジオール（１３）^２ （ＡＣＬ−Ｇ２９−１１）：
ジエステル１２（０．４５ｇ、１．８ｍｍｏｌ）を無水ヘキサン（１５．０ｍＬ）に入れた。物質の一部は溶解したように見えたが、混合物はかなり濁っていた。この混合物を−７８℃の浴中で冷却すると、より多くの物質が溶液から析出したように見えた。ニートのＤＩＢＡＬ−Ｈ（２．５０ｍＬ）を無水ヘキサン（総容積１０．０ｍＬ）に溶解させたが、そのジエステルをドライアイス浴で冷却している時に、不注意により、ＤＩＢＡＬ−Ｈ溶液の一部（約２ｍＬ）を反応混合物中に吸引してしまった。合計５．０ｍＬ（６．７ｍｍｏｌ）が添加されるまで、ＤＩＢＡＬ−Ｈ溶液を更に添加した。ＣＯ_２浴を温めた。２時間５０分攪拌後に、ジエステルが完全に消費されたことがＴＬＣで示された。浴温度を−２０℃に調整して、２０分間で０℃に加温した。Ｈ_２Ｏ／シリカゲル混合物（２ｍＬ／７ｇ）で３０分間処理した。Ｋ_２ＣＯ_３及びＭｇＳＯ_４を添加した。ろ過して固形物を除去し、塩化メチレンで十分にリンスした。濃縮して、白色固体０．１４ｇを得た（収率５０％）。ＴＬＣのＲ_ｆ＝０．２１（５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３）は非常に極性が高いことに注意。塩化メチレンでリンスしても、すべての生成物を回収するのに十分でないことがある。^１Ｈ ＮＭＲスペクトルは文献値と一致した。

（ＡＣＬ−Ｇ２９−１５）：
ジエステル（５．４ｇ、２１ｍｍｏｌ）を無水ヘキサン（１７５ｍＬ、溶解性は非常に低い）に入れ、−７８℃浴中で冷却して、３５分間ＤＩＢＡＬ−Ｈの溶液（無水ヘキサン５０ｍＬ中１４．５ｍＬ）で処理した。添加中に激しい気体の発生を観察した。スラリーの色は、先ず白色から暗黄色となり、ＤＩＢＡＬ−Ｈを更に添加すると、色は薄まった。２時間かけて−４０℃に温めた後、−２８℃の浴に移し、一晩置いた。反応混合物をＨ_２Ｏ／シリカゲル（４ｍＬ／１４．４ｇ）の均質混合物で３０分間処理した。ＭｇＳＯ_４（７．５ｇ）及びＫ_２ＣＯ_３（５．１ｇ）を添加し、反応混合物を冷却浴から取り出した。２０分間攪拌し、次いで、焼結ガラス漏斗でろ過した。得られた固体を塩化メチレンで洗浄した。これにより相当量の沈殿が形成した。ロータリーエバポレーターに入れて加温することによって、沈殿した固体を溶解させた。焼結ガラス漏斗に残留した固体をＥｔＯＡｃ（４×７５ｍＬ）で洗浄して、ろ液を濃縮した。

ＣＨ_２Ｃｌ_２でリンスすることにより、淡黄色固体１．７ｇを得た。^１Ｈ ＮＭＲは文献値と一致した。ＥｔＯＡｃでリンスすることにより、灰白色固体１．０ｇを得た。^１Ｈ ＮＭＲは文献値と一致した。合計回収量２．７ｇ、収率７５％。

（ＡＣＬ−Ｇ２９−１７）：
ジエステル（１６．４ｇ、６．５ｍｍｏｌ）をＮ_２下、無水ヘキサン（５００ｍＬ）に入れて攪拌し、−７８℃に冷却した。ヘキサン（１５０ｍＬ）に溶解させたＤＩＢＡＬ−Ｈ（４５ｍＬ、２５３ｍｍｏｌ）の溶液を１時間かけて添加した。−３０℃に温め、一晩（合計１７．５時間）攪拌した。Ｈ_２Ｏ／シリカゲル（１２．３ｇ／４３．７ｇ）の均質混合物を添加して、４５分間、混合物を手動でかき混ぜた。Ｋ_２ＣＯ_３（１５．５ｇ）及びＭｇＳＯ_４（２３．５ｇ）を添加した。更に３０分間かき混ぜた。焼結ガラス漏斗でろ過し、塩化メチレンでリンスし（恐らく蒸発冷却が原因となって、沈殿が形成される）、ろ液を濃縮した。固体を数回ＥｔＯＡｃ（約１００ｍＬずつ、合計容積２Ｌ）でリンスし、元のろ液と共にプールした。濃縮して、黄色固体８．９ｇ、粗収率８１％を得た。^１Ｈ ＮＭＲスペクトルは所望の生成物と一致した。

２，７−ジメチルオクタ−２，４，６−トリエン−１，８−ジアール（１４）^２ （ＡＣＬ−Ｇ２９−１２）：
ＭｎＯ_２（７．８０ｇ、９０ｍｍｏｌ）のスラリーをＮ_２下、氷浴中で冷却した。ジオール１３（０．１４ｇ、０．８ｍｍｏｌ）の溶液を、アセトン溶液（５．０ｍＬ）としてピペットで添加した。アセトン２．０ｍＬを更に用いて、フラスコをリンスし、移し替えを完了した。氷浴が溶けるのを一晩放置したまま、反応混合物を攪拌した。Ｈｙｆｌｏに通すろ過により固体を除去し、濃縮して、黄色固体を得た。最小量のＣＨＣｌ_３を用いて、１０％Ｅｔ_２Ｏ／ヘキサンにその物質を溶解させ、シリカゲルのカラム（３０×１９０ｍｍ）にアプライし、１０％Ｅｔ_２Ｏ／ヘキサンで溶出させた。生成物は、溶出する際に黄色のバンドとして目で追うことができ、１４を薄黄色固体３７ｍｇとして単離した（収率２６％）。^１Ｈ ＮＭＲスペクトルは文献値と一致した。

（ＡＣＬ−Ｇ２９−１６）：
アセトン（５００ｍＬ）に溶解させたジオール１３（２．７０ｇ、１６ｍｍｏｌ）の溶液をＮ_２下、氷浴中で冷却した。ＭｎＯ_２（６０．０ｇ、０．６９ｍｏｌ）を、２０分間に何回かに分けて添加した。氷浴が溶けるのを放置したまま、反応混合物を一晩攪拌した。反応混合物を、Ｈｙｆｌｏに通してろ過し、ろ液を濃縮して、黄色固体１．６ｇを得た（粗収率６１％）。^１Ｈ ＮＭＲは文献値と一致した。粗黄色固体を塩化メチレン（ヘキサン中の少量の１０％Ｅｔ_２Ｏと共に添加した。）に溶解させ、Ｂｉｏｔａｇｅシリカゲルカラム（４×７．５ｃｍ）にチャージした。先ず、ヘキサン中の１０％エーテル（１Ｌ）で溶出させ、次いで、１５％Ｅｔ_２Ｏ（１Ｌ）及び２０％Ｅｔ_２Ｏ（０．５Ｌ）まで極性を上げた。黄色固体１．０ｇを回収した（収率３８％）。^１Ｈ ＮＭＲスペクトルは所望の生成物と一致した。

（ＡＣＬ−Ｇ２９−２１）：
アセトン（５００ｍＬ）に溶解させたジオール（９．３１ｇ、６０ｍｍｏｌ）の溶液をＮ_２下、氷浴中で冷却した。ＭｎＯ_２（１００ｇ、１．１５ｍｏｌ）を添加して、氷浴が溶けるのを放置したまま、混合物を一晩攪拌した。２４時間後にＩＲでチェックすると、かなりの量の生成物が形成されていたが、依然としてかなり多くのアルコールが存在していた。酸化剤５０ｇを更に添加し、もう一晩攪拌を続けた。反応混合物の一部をろ過し、^１Ｈ ＮＭＲでチェックし、出発物質の消費に基づいて、反応は完了したと思われた。反応混合物の残りを、Ｈｙｆｌｏのパッドに通してろ過して、アセトンで十分にリンスした。濃縮して、暗黄色固体を得た。ベンゼン４０ｍＬで一度共沸させ、次いで、４０℃で５時間、更に室温で一晩、真空乾燥した。５．２８ｇを回収した（収率５８％）。^１Ｈ ＮＭＲ及びＩＲスペクトルは所望の生成物と一致した。

チグリン酸メチル（１６）：
オーバーヘッドスターラー、冷却器及び温度計を取り付けた２Ｌ容の三つ口フラスコ中で、メタノール９００ｍＬにチグリン酸１５（８９．８ｇ、０．９ｍｏｌ）及び濃硫酸５ｍＬ（０．０９ｍｏｌ）を溶解させた溶液を２０時間加熱還流した。溶液を２５℃に冷却し、ロータリーエバポレーターで３０℃、２７インチＨｇ減圧下で過剰のメタノールを除去した。回収したメタノール蒸留液のＧＬＣ分析により、オーバーヘッドに生成物が存在することが示された。得られた２相の小麦色濃縮液をエチルエーテル５００ｍＬに入れ、水２５０ｍＬ、１０％炭酸水素ナトリウム水溶液２５０ｍＬ及び飽和食塩水２５０ｍＬで順次洗浄した。エーテル溶液を無水炭酸カリウムで乾燥させ、ろ過し、ロータリーエバポレーターで２５℃、２７ｉｎ Ｈｇ減圧下で溶媒除去し、粗チグリン酸メチル４３．６ｇをほぼ無色の油状物質として得た（収率４２％）。ＧＬＣ分析により、出発物質であるチグリン酸の保持時間３．８分に対して、保持時間が２．７分の１つの主揮発性生成物が示された。ＣＤＣｌ_３中でのプロトンＮＭＲは、痕跡量のエチルエーテルの混入を伴った予想シグナルを示した。１．７９ｐｐｍ（ｄ，３Ｈ）、１．８３（ｓ，３Ｈ）、３．７３（ｓ，３Ｈ）、６．８６（ｑ，６．６Ｈｚ）。ＩＲ（ＫＢｒでニート）：１７１８ｃｍ^−１にエステルカルボニル。この油状物質は、そのまま次のステップで使用した。

γ−ブロモチグリン酸メチル（１７）^５：
オーバーヘッドスターラー、温度計及び冷却器を取り付けた１Ｌ容の四つ口フラスコ中で、四塩化炭素５００ｍＬ中の粗チグリン酸メチル（４３．６ｇ、０．３８ｍｏｌ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド（６８ｇ、０．３８ｍｏｌ）及び７０％ベンゾイルペルオキシド（５．３４ｇ、０．０１５ｍｏｌ）の攪拌混合物を２時間加熱還流した。２０℃に冷却した後、不溶性のスクシンイミド（３８．１ｇ、回収率１００％）を吸引ろ過して除去した。ろ液を水２５０ｍＬで３回洗浄して、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、次いで、ロータリーエバポレーターで２５℃、２６ｉｎ Ｈｇ減圧下で除き、黄色油状物質７８．８ｇを得た。ＣＤＣｌ_３に溶解させた上記油状物質のプロトンＮＭＲから複雑なスペクトルを得た。所望のγ−ブロモエステルのメチレンプロトンは、４．０４ｐｐｍを中心とする二重線（８．６Ｈｚ）に帰属され、α−ブロモ異性体の同プロトンは４．２４ｐｐｍの一重線に帰属された。これらのシグナル、及び１．６〜２．０ｐｐｍのメチル多重線のプロトン積分値から、以下の組成（モル％）が示唆された。
γ−ブロモエステル：５９％
α−ブロモエステル：２６％
出発物質：１５％

この粗油状物質は、それ以上精製せずに次のステップで使用した。

わずか０．８７当量のＮ−ブロモスクシンイミドを用い、その他は同一条件で、０．０５モルスケールでもこの反応を行った。この粗油状物質の組成は、そのプロトンＮＭＲスペクトルに基づいて、γ−ブロモエステル５２％、α−ブロモエステル２４％及び未反応のチグリン酸メチル２３％と推定された。この油状物質のＧＬＣ分析では、他の副成分の存在が示され、もう少し複雑であった。

γ−ブロモチグリン酸メチルのトリフェニルホスホニウム塩（１９）^６：
温度計、１００ｍＬの定圧添加漏斗、及び静止窒素システムに接続した冷却器を取り付けた２Ｌ容の四つ口フラスコ中で、ベンゼン３５０ｍＬに粗γ−ブロモチグリン酸メチル（７８．８ｇ）を攪拌して溶解させた溶液に、ベンゼン３５０ｍＬに溶解させたトリフェニルホスフィン（９５ｇ、０．３６ｍｏｌ）の溶液を１．７５時間かけて滴下して処理した。混合物の温度は、わずかに発熱して２４℃から２７℃に上昇し、その他は周囲条件であった。添加後、反応物を一晩激しく攪拌して、フラスコの壁に付着した帯黄色ガム状物質を含有する白色固体のスラリーを得た。帯黄色ガム状物質を乱さずに白色固体を焼結ガラス漏斗で吸引ろ過した。フラスコをベンゼン１００ｍＬで２回洗浄して、フィルターに注いだ。フィルターケーキをベンゼン５０ｍＬで洗浄し、次いで、ヘキサン５０ｍＬで２回洗浄した。湿ケーキを真空乾燥器中、周囲温度で５．５時間かけて乾燥させた。乾燥した白色粉末（９３ｇ、ｍｐ＝１２５℃ｄｅｃ）を加熱しながら、アセトニトリル１５０ｍＬに溶解させ、透明な黄色溶液を得た。この熱溶液に酢酸エチル（３００ｍＬ）を添加し、更に酢酸エチル約１００ｍＬを添加した後に、生成物が結晶化し始めた。フラスコを冷蔵庫に一晩保存した。生成物を吸引ろ過して、最小量のアセトニトリル及び酢酸エチル（１：２）で洗浄した。４５．０ｇ。ｍｐ＝１８７〜１９０℃（分解）。文献ｍｐ＝１８３℃（分解）。

反応フラスコ中のガム状固体を、アセトニトリル１０ｍＬ及び酢酸エチル２０ｍＬから再結晶させた。同様に、ベンゼン母液から固体を、一晩かけて更に沈殿させた。これらの固体をろ過して、同様に再結晶させた。両試料を２時間冷蔵して、吸引ろ過して、生成物１３．３ｇを更に得た。

ベンゼンろ液をロータリーエバポレーターで除去し、黄色油状物質をアセトニトリル１０ｍＬに入れ、酢酸エチル２０ｍＬで沈殿させた。このスラリーを冷蔵庫に一晩保存して、生成物４．６ｇを白色固体として更に得た。ｍ．ｐ．１８５〜１８７℃（分解）。白色固体である所望のホスホニウム塩の合計収量は６２．９ｇ、すなわち粗チグリン酸メチルに対して収率３６．２％であった。プロトンＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ＴＭＳ）ｐｐｍ１．５５（ｄ，４Ｈｚ，３Ｈ）、３．５７（ｓ，３Ｈ）、４．９（ｄｄ，１５．８， ７．９Ｈｚ，２Ｈ）、６．５５（ブロード ｑ，６．６〜７．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．４〜７．９（ｍ，１５Ｈ）。プロトンデカップリングを行ったリンＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、５％Ｈ_３ＰＯ_４水溶液、同軸外部標準）２２．０８ｐｐｍ。部分的カーボンＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：ＣＯ_２ＣＨ_３（１６６．６ｐｐｍ，ｄ，Ｊ_ＣＰ＝３Ｈｚ）、オレフィンＣＨ（１１７．５ｐｐｍ，ｄ，Ｊ_ＣＰ＝８６．１Ｈｚ）、ＣＯ_２ ＣＨ_３（５２．０ｐｐｍ）、Ｐｈ_３Ｐ−ＣＨ_２（２５．４ｐｐｍ，ｄ，Ｊ_ＣＰ＝５０．６Ｈｚ）及びＣＨ_３（１３．４ｐｐｍ，ｄ，Ｊ_ＣＰ＝２．４Ｈｚ）。部分的ＩＲ（ＫＢｒペレット）：１７１１ｃｍ^−１にエステルカルボニル。

（３−カルボメトキシ−２−ブテン−１−イリデン）トリフェニルホスホラン（２０）^６：
オーバーヘッドスターラー、添加漏斗及び温度計を取り付けた５Ｌ容の五つ口フラスコ中で、水２５０ｍＬに溶解させた水酸化ナトリウム（５．１２ｇ、０．１２８ｍｏｌ）の溶液を、水２５００ｍＬ中でγ−ブロモチグリン酸メチルのトリフェニルホスホニウム塩（５８．３ｇ、０．１２８ｍｏｌ）を激しく攪拌した溶液に、２５℃で４１分かけて滴下した。得られた黄色スラリーを室温で１０分間攪拌し、次いで、吸引ろ過した。フィルターケーキを水１８００ｍＬで洗浄し、次いで、窒素雰囲気下、フィルター上で完全に乾燥させた。次いで、この黄色固体を室温及び２７”Ｈｇ減圧下で、Ｐ_２Ｏ_５を入れた真空デシケーター中で一晩乾燥させた。３５．３ｇ（収率７３．７％）。ｍｐ＝１４５〜１５０℃。文献ｍｐ＝１４５〜１６５℃。プロトンデカップリングを行ったＣＤＣｌ_３中のリンＮＭＲは、１７．１ｐｐｍ及び２１．１ｐｐｍに９３：７の比で２つのピークを示した。プロトンＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、ＴＭＳ）ｐｐｍ１．８９（ｓ，３Ｈ）、３．５８（ｓ，３Ｈ）、７．３〜７．８（ｍ，１７Ｈ）。小さいが検出可能な１．７４ｐｐｍでの一重線もこのスペクトルに現れ、これは不純物に起因すると考えた。この固体は、それ以上精製せずに次のステップに使用した。

ジメチルクロセチネート（２１）^６ （ＡＣＬ−Ｇ２９−１８）：
ジアルデヒド１４（０．４８ｇ、２．９ｍｍｏｌ）を１００ｍＬ容丸底フラスコに入れた。ベンゼン（２０ｍＬ）を添加し、マグネチックスターラーで攪拌して固体を溶解させた。イリドを添加し、ベンゼン１０ｍＬを更に用いて、その化合物をフラスコに洗い入れた。加温して、６時間激しく還流した。反応混合物を一晩冷却した。文献の報告とは逆に、非常に少量の固体しか形成されなかった。反応混合物を濃縮し、残渣をＭｅＯＨ（３０ｍＬ）に入れ、３０分間沸騰させた。周囲温度まで冷却し、得られた固体を真空ろ過により収集した。ＣＤＣｌ_３０．５ｍＬに２０ｍｇを溶解させることによってＮＭＲ試料を調製し、多少驚くことに、この時、完全に溶解させるのにヒートガンで加温する必要があった。^１Ｈ ＮＭＲスペクトルを記録して、所望の生成物と一致することがわかった。残りの物質を熱ベンゼンに溶解させ、ろ過し、ろ液を濃縮し、ＭｅＯＨ中に入れ、氷浴中で冷却し、赤色固体３３４ｍｇを収集した（収率３３％）。この物質の溶解性は、最初に単離した物質よりも何ら高くないようであった。

（ＡＣＬ−Ｇ２９−１８Ａ）：
ジアルデヒド１４（５．７８ｇ、３５ｍｍｏｌ）をＮ_２下でベンゼン（３００ｍＬ）に溶解させた。イリド２０（３５．３ｇ、９４ｍｍｏｌ）を添加して、得られた混合物を加温して６時間還流し、暗赤色溶液を形成した。反応混合物を一晩冷却させた後、赤色固体を真空ろ過により収集し、メタノールでリンスした。ＲＢＦ５００ｍＬに移して、メタノール約６５ｍＬと共に３０分間還流した。冷却し、赤色固体を収集した。冷メタノールでリンスし、真空乾燥し、２１（３．００ｇ）を赤色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ及びＩＲスペクトルは所望の生成物と一致した。

元の（反応混合物から得た）ろ液をロータリーエバポレーターで濃縮し、黒っぽい残渣をメタノール１００ｍＬに入れ、４０分間還流した。氷浴中で冷却し、赤色固体を真空ろ過により収集した。冷メタノールでリンスし、真空乾燥し、２１（１．３１ｇ）を赤色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲスペクトルは所望の生成物と一致した。

ろ液をプールし、濃縮し、メタノール７５ｍＬに入れ、室温で一晩静置した。赤色固体０．３８ｇを真空ろ過により回収した。^１Ｈ ＮＭＲスペクトルは所望の生成物と一致した。

更に多量の固体がろ液中に形成した。真空ろ過により単離して、赤色固体０．１２７ｇを得た。ＩＲは上記と一致した。合計回収量：４．８９ｇ、収率３９％。

ＴＨＦ／ＮａＯＨを用いたけん化の試み （ＡＣＬ−Ｇ２９−１９）：
ＴＨＦ（２ｍＬ）中のジエステル２１（１００ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）及び１Ｎ ＮａＯＨ（０．５６ｍＬ、２当量）の攪拌懸濁液を添加した。室温で一晩攪拌した。ＴＬＣは出発物質のみの存在を示した。加温して還流したが、数時間後も変化はなかった。より多量の固体を溶解させようとＴＨＦ（６ｍＬ）を添加したが、重要でないように思われた。一晩還流し続けた。より多量のＴＨＦを添加し（約６ｍＬ、ＴＬＣは出発物質のみの存在を示した）、もう一晩還流した。濃縮し、^１Ｈ ＮＭＲでチェックしたが、出発物質のみであった（メチル及びメチルエステルの積分値に基づく）。加熱マントルで加温しながらピリジン（１０ｍＬ）に溶解させた。２．５Ｎ ＮａＯＨ（１．０ｍＬ）を添加した。数分後に暗橙色溶液が紅色に変わった。加熱マントルを取り外し、固体が形成し始め、マントルを３０分間再度使用し、次いで、室温で一晩攪拌した。高真空で濃縮した。残渣はクロロホルム、ＤＭＳＯ、ピリジンに不溶であり、Ｈ_２Ｏにやや溶けにくかった。ＩＲ（ヌジョールムル）は、出発物質の特徴であるＣ＝Ｏ吸収を示した。

２．５Ｎ ＮａＯＨ及びＴＨＦを用いたけん化 （ＡＣＬ−Ｇ２９−２０）：
ジエステル２１（３７ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）をフラスコに秤量し、ジエチルエーテル（４ｍＬ）中で攪拌した。溶媒は橙色を呈したが、固体は依然として存在した。２．５Ｎ ＮａＯＨ１ｍＬを添加して、加温して還流した。半時間後、エーテルの大部分が蒸発した。これをＴＨＦ（３ｍＬ）と交換し、数時間還流を続けた。固体を真空ろ過により収集し、脱イオン水でリンスし、次いで、真空乾燥器中で乾燥させた。ＩＲは出発物質のみの存在を示した。

４０％ＮａＯＨを用いたけん化（１） （ＡＣＬ−Ｇ２９−２２）：
ジエステル２１（３２ｍｇ、８．９ｍｍｏｌ）をフラスコに秤量し、メタノール（１．５ｍＬ）中で攪拌した。溶媒は橙／赤色を呈したが、固体は依然として存在した。４０％ＮａＯＨ１．５ｍＬを添加して、加温して１７時間還流した。室温に冷却した後、橙色固体を真空ろ過により収集し、脱イオン水でリンスした。４０℃で真空乾燥して、１を橙色粉末２１ｍｇとして得た（５９％）。ＩＲ（ＫＢｒペレット） ３４１２、１５４４、１４０２ｃｍ^−１。この化合物は恐らく吸湿性である。カルボニルの高磁場シフトは共役と合致している。

（ＡＣＬ−Ｇ２９−２２Ａ）：
ジエステル１（３５ｍｇ）を用いて繰り返し、１５時間還流した。反応混合物を氷浴中で冷却し、真空ろ過により収集し、冷脱イオン水で洗浄した。４０℃で真空乾燥した。１を橙色固体２５．５ｍｇとして回収した（６５％）。

（ＡＣＬ−Ｇ２９−２３）：
ジエステル２１（０．４８ｇ、１．３ｍｍｏｌ）をメタノール（１５．０ｍＬ）及び４０％水酸化ナトリウム（１５．０ｍＬ）中に入れ、加温して還流した。不均一な赤色混合物が約２時間後に橙色に変わった。６時間後に加熱を止めて、この混合物を一晩冷却させた。橙色固体を真空ろ過により収集し、冷脱イオン水で洗浄した。真空乾燥して、脆い橙色固体０．３６ｇを得た（収率６８％）。

（ＡＣＬ−Ｇ２９−２４）：
ジエステル２１（１．１０ｇ、３．１ｍｍｏｌ）を１００ｍＬ容の回収フラスコに入れて、メタノール（２０ｍＬ）及び４０％ＮａＯＨ（２０ｍＬ）中で１２時間加熱還流した。氷浴中で冷却した後、橙色固体を真空ろ過により収集し、脱イオン水でリンスした。真空乾燥し、１．４ｇ（１００％）を得た。Ｃ_２０Ｈ_２２Ｏ_４Ｎａ_２−０．４Ｈ_２Ｏに関する分析計算値：Ｃ：６３．２９、Ｈ：６．０５、Ｎａ：１２．１１、Ｈ_２Ｏ：１．９０。実測値：Ｃ：６３．４１、Ｈ：６．２６、Ｎａ：１１．７５、Ｈ_２Ｏ：１．９３。

（ＡＣＬ−Ｇ２９−２５）：
ジエステル２１（３．００ｇ、８．４ｍｍｏｌ）をメタノール（８０ｍＬ）及び４０％ＮａＯＨ（６０ｍＬ）中で１２時間還流した。上述のように、生成物を橙色固体として単離した（２．７ｇ、８０％）。Ｃ_２０Ｈ_２２Ｏ_４Ｎａ_２−０．４Ｈ_２Ｏに関する分析計算値：Ｃ：６３．２９、Ｈ：６．０５、Ｎａ：１２．１１、Ｈ_２Ｏ：１．９０。実測値：Ｃ：６３．２０、Ｈ：６．００、Ｎａ：１１．９３、Ｈ_２Ｏ：１．８１。試料ＡＣＬ−Ｇ２９−２３、−２４及び２５をめのう乳鉢で摩砕し、ＡＣＬ−Ｇ２９−Ａとして混ぜ合わせた。

参照文献：
１． Ｅ．Ｂｕｃｈｔａ 及び Ｆ．Ａｎｄｒｅｅ， Ｎａｔｕｒｗｉｓｓ． １９５９， ４６， ７４．
２． Ｆ．Ｊ．Ｈ．Ｍ．Ｊａｎｓｅｎ， Ｍ．Ｋｗｅｓｔｒｏ， Ｄ．Ｓｃｈｍｉｔｔ， Ｊ．Ｌｕｇｔｅｎｂｕｒｇ， Ｒｅｃｌ．Ｔｒａｖ．Ｃｈｉｍ． Ｐａｙｓ−Ｂａｓ １９９４， １１３， ５５２．
３． Ｒ．Ｇｒｅｅ， Ｈ．Ｔｏｕｒｂａｈ， Ｒ．Ｃａｒｒｉｅ， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ １９８６， ２７， ４９８３．
４． Ｇ．Ｍ．Ｃｏｐｐｏｌａ， Ｓｙｎ．Ｃｏｍｍｕｎ． １９８４， １０２１．
５． Ｄ．Ｓ．Ｌｅｔｈａｍ 及び Ｈ．Ｙｏｕｎｇ， Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９７１， １０， ２０７７．
６． Ｅ．Ｂｕｃｈｔａ 及び Ｆ．Ａｎｄｒｅｅ， Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ． １９６０， ９３， １３４９．

（実施例２：トランスポタジウムノルビキシネートの合成）

トランスポタジウムノルビキシネートは、共役した炭素−炭素二重結合を含む対称Ｃ２０ジアルデヒドを［１−（エトキシカルボニル）メチリデン］トリフェニルホスホランとカップリングさせることによって合成する。この化合物の調製法は、フラン出発物質を適切な環状構造と交換する点を除いて、トランスソディウムクロセチネートに関して前述した調製法と類似している。そして、この生成物は、ＫＯＨ／メタノール溶液を用いてけん化する。

（実施例３：より長鎖のＢＴＣＳの合成）

上記化合物は、共役した炭素−炭素二重結合を含む対称Ｃ_１０ジアルデヒドを過剰の［３−カルボメトキシ−２−ブテン−１−イリデン］トリフェニルホスホランに添加することによって合成する。この化合物の調製法は、フラン出発物質を適切な環状構造と交換する点を除いて、トランスソディウムクロセチネートに関して前述した調製法と類似している。次いで、トランス４０−炭素生成物は、クロマトグラフィーのような手法を用いて単離する。そして、この生成物は、ＮａＯＨ／メタノールの溶液を用いてけん化する。

（実施例４：吸入によるＴＳＣ）
ＴＳＣは、吸入経路によりラットに与えられた。１０匹のラットは、肺に直接ＴＳＣを投与された。これは、気管にチューブを挿入し、空気約３〜６ｍＬと共にＴＳＣ溶液（希薄炭酸ナトリウム溶液に溶解したＴＳＣ）０．２ｍＬを噴霧することによって行った。検討した全投与量（０．５〜２ｍｇ／ｋｇ）について、薬物投与後１分以内は薬物の約２０％が血流中に存在した。０．８〜１．６ｍｇ／ｋｇの投与量については、少なくとも２時間、薬物が血流中に存在した。

（実施例５：改良合成方法）
２−ブテニル−１，４−ビスホスホネートテトラエチルの調製：

２５０ｍＬ容の三つ口フラスコにテフロンコート熱電対、６０ｍＬ定圧添加漏斗及び簡易蒸留ヘッドを装備した。窒素雰囲気下で、ＪＫｅｍコントローラで１４０℃に制御した加熱マントルを用いて、ニートの亜リン酸トリエチル（５９ｍＬ、０．３４４ｍｏｌ）を加熱した。トランス−１，４−ジクロロ−２−ブテン（２６．９ｇ、０．２１５ｍｏｌ）及び亜リン酸トリエチル（３５ｍＬ、０．２０４ｍｏｌ）の溶液を、１３４〜１４４℃で９３分かけて滴下した。そして、得られた透明溶液を窒素下で１４０℃に保持した。３７分後、酢酸エチル１ｍＬ中の一定量（１滴）に対するガスクロマトグラフィーは、所望の生成物、中間生成物及び２つの出発物質の存在を示した。

１４０℃で１５．５時間経過した後、一定量（ＥｔＯＡｃ０．５ｍＬ中の１滴）に対するガスクロマトグラフィーは所望の生成物の存在を示したが、出発ジクロリド及び中間生成物は検出されなかった。１６時間後、微黄色溶液を窒素下で室温に冷却した。２バルブ受け器及びドライアイス−アセトン浴中で冷却したバルブを更に備えるクーゲルロールを用いて、２５〜１００℃、０．１〜０．２ｔｏｒｒで微黄色油状物質を蒸留し、無色油状物質（１４．８ｇ）を初期カットとして得た。ガスクロマトグラフィーは、クーゲルロールポット中に生成物のみが存在することを示した。この薄琥珀色油状物質を、クーゲルロールを用いて、１４０℃、０．１〜０．１５ｔｏｒｒで蒸留して、蒸留物を無色油状物質６６．４５ｇとして得た（収率９４．１％）。ガスクロマトグラフィーは、１つの揮発性成分のみの存在を示した。ＧＣ−ＭＳ分析では、３２８ｍ／ｚに小分子イオンが、１９１ｍ／ｚにベースイオン（ＰＯ_３Ｅｔ_２の損失）が得られ、この成分が所望の生成物であることが示された。プロトンＮＭＲは所望の生成物と一致した。カーボンＮＭＲもまた、所望のビス（ホスホン酸ジエステル）と一致し、アリル炭素へのロングレンジ（Ｗ−カップリング）、及び通常の炭素−リンカップリングのみを示した。

ポット残渣：薄黄色油状物質０．８ｇ。

１，１，８，８−テトラメトキシ−２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンの調製：

窒素雰囲気下、トルエン１０ｍＬ及びシクロヘキサン１０ｍＬ中でトランス−２−ブテニル−１，４−ビスホスホネートテトラエチル（３．３ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）、ピルビン酸アルデヒドジメチルアセタール（２．６ｍＬ、２１．５ｍｍｏｌ）をマグネチックスターラーで混合したものを無水炭酸カリウム（１０．２ｇ、７３．８ｍｍｏｌ）及び粉末水酸化ナトリウム（１．２５ｇ、３１．２ｍｍｏｌ）で順次処理した。溶液は直ちに黄色に変化した。得られたスラリーを窒素下、周囲温度で攪拌した。反応物はゆっくりと発熱し、約２５分後に最大３８℃に達した。また、ガム状沈殿物が形成され、これはマグネチックスターラーによる攪拌に悪影響を与えた。２．５時間後、一定量（トルエン０．５ｍＬ中の１滴）の黄橙色溶液のガスクロマトグラフィーは、２つの出発物質及び３つの他の新規成分の存在を示した。

周囲温度で１６．７５時間後、一定量（トルエン０．５ｍＬ中の１滴）の橙色溶液のガスクロマトグラフィーは、少量の出発ビス（ホスホン酸ジエステル）のみの存在を示した。得られた、ガム状塊を有する橙色混合物（攪拌不能）を氷浴中で冷却し、１０％ＮａＣｌ水溶液１００ｍＬでクエンチした。スパーテルを用いて作業することにより、この水溶液中に固体を溶解させた。次いで、この混合物をエーテル：ヘキサン（１：１）２００ｍＬで抽出した。有機相を１０％ＮａＣｌ水溶液（２００ｍＬ）、飽和食塩水（１００ｍＬ）で順次洗浄した。無色有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。ガスクロマトグラフィーは３つの主成分の存在を示したが、出発ビス（ホスホン酸ジエステル）は検出されなかった。薄層クロマトグラムは、２つの主スポット及び１つの副スポットを示した。Ｎａ_２ＳＯ_４を吸引ろ過して除去し、エーテルで洗浄した。ろ液を３５℃で、ロータリーエバポレーターで濃縮して、無色油状物質１．８ｇを得た。ＧＣ−ＭＳ分析では、２５６ｍ／ｚに分子イオンが、７５ｍ／ｚにベースイオン［（ＭｅＯ）_２ＣＨ^＋］が得られ、３つの主揮発性成分が異性体生成物であることが示された。プロトンＮＭＲもまた、他の未同定不純物と共に異性体生成物の混合物が存在することに合致した。粗生成物の収率＝７０．３％。

１，１，８，８−テトラメトキシ−２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンの調製：

トルエン２００ｍＬ及びシクロヘキサン２００ｍＬ中でトランス−２−ブテニル−１，４−ビスホスホネートテトラエチル（６３．２ｇ、０．１９ｍｏｌ）、ピルビンアルデヒドジメチルアセタール（５０ｍＬ、０．４１ｍｏｌ）を機械的に攪拌して得た混合物を、無水炭酸カリウム（１９６ｇ、１．４２ｍｏｌ）及び粉末水酸化ナトリウム（２４．０ｇ、０．６０ｍｏｌ）で順次処理した。溶液は直ちに黄色に変化した。得られたスラリーを窒素下、周囲温度で攪拌した。反応物は約１１分後に６１℃に発熱し、攪拌混合物を氷浴中で冷却して、温度を３５℃に下げた。２９〜３５℃で４．７時間経過した後、一定量（トルエン０．５ｍＬ中の３滴）に対するガスクロマトグラフィーは、出発ビス（ホスホネート）が存在しないことを示した。約５時間後、混合物を氷浴中で１３℃に冷却したが、１０％塩化ナトリウム水溶液４００ｍＬを添加したところ、温度は３０℃に上昇した。更に１０％塩化ナトリウム水溶液（１５００ｍＬ）を添加し、混合物をエーテル：ヘキサン（１：１）３０００ｍＬで抽出した。黄色味がかった有機相を１０％塩化ナトリウム水溶液（２×１０００ｍＬ）、飽和食塩水（１０００ｍＬ）で順次洗浄した。この黄色味がかった有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、３０℃で、ロータリーエバポレーターで濃縮して、淡黄色油状物質４３．４ｇを得た。ガスクロマトグラフィーは、混合物の８９％を含む３つの主成分の存在を示したが、出発ビス（ホスホネート）は検出されなかった。ＴＬＣ分析では、１つの主成分及び３つの副成分の存在が示された。

プロトンＮＭＲは異性体生成物及びトルエンの存在を示した。この油状物質を、クーゲルロールを用いて、５０℃、０．２ｔｏｒｒで更に３０分間蒸発させた（３１．９ｇ）。プロトンＮＭＲは異性体ビス（アセタール）生成物の存在を示したが、トルエンは検出されなかった。

収率＝６５．５％。

より高いペイロードでの２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンジアールの調製：

窒素雰囲気下、テトラヒドロフラン（１６０ｍＬ）、水（８０ｍＬ）及び氷酢酸（３２０ｍＬ）中で粗１，１，８，８−テトラメトキシ−２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエン異性体（３１．９ｇ、１２４．４ｍｍｏｌ）をマグネチックスターラーで攪拌した溶液を、テフロンコート熱電対を介してＪＫｅｍコントローラで制御した加熱マントルで４５℃に加熱した（午前９：０３）。約３０分後、その混合物は発熱して最大５４℃まで上昇し、その後、４５℃の設定温度に戻った。３時間後、一定量（ＴＨＦ０．５ｍＬ中の３滴）に対するガスクロマトグラフィーは、いくらか残留した出発物質、２つの主生成物、及び１つの副生成物の存在を示した。黄色反応溶液を氷浴中で２１℃に冷却した後、エーテル：ジクロロメタン（４：１）（２０００ｍＬ）で希釈した。そして、この溶液を２０％ＮａＣｌ水溶液（２０００ｍＬ×２）、２０％ＮａＣｌ水溶液：１Ｍ ＮａＯＨ水溶液（４：１）（２０００ｍＬ×３）^１及び２０％ＮａＣｌ水溶液（１０００ｍＬ×２）で順次洗浄した［^１：中性ｐＨにより明らかであるが、最初の２回の洗浄で酢酸が除去されたと思われる。３回目の洗浄により赤くなったが、依然として塩基性であり、副生成物が除去されたことが示唆される］。黄色有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、ロータリーエバポレーターで濃縮して、黄色固体１８．９ｇを得た。ガスクロマトグラフィーは、１つの主成分及び１つの副成分である出発ビス（アセタール）の存在を示した。ＴＬＣ分析では、１つの主スポット及び数個の副スポットとして、より極性の高い不純物の存在が示された。この固体を還流メタノール２５０ｍＬに溶解させ、室温に冷却した後、１時間氷浴中で冷却した。得られたスラリーを吸引ろ過して、黄色綿花様針状物質１４．１５ｇを得た。ガスクロマトグラフィーは、異性体ジアルデヒドの９５：５混合物の存在を示した。この固体を還流メタノール２００ｍＬでもう一度再結晶させ、室温に冷却し、その後、一晩冷蔵庫で冷却した。

このスラリーを吸引ろ過して、冷凍庫で冷却したメタノールで洗浄して、黄色針状物質１１．２ｇを得た。ガスクロマトグラフィーは、異性体ジアルデヒドの９７：３混合物の存在を示した。ＴＬＣ分析では、１つのスポットが示された。針状物質を真空乾燥器中、４５℃で１６０分間、一定の重量（１０．７５ｇ）になるまで乾燥させた。

未補正ｍｐ＝１５４〜１５６℃。文献^２ｍｐ＝１６１〜１６２℃［^２： Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ． Ｖｅｒｓｏｎ １０：２、２００２年９月］。プロトンＮＭＲ及びカーボンＮＭＲは所望の対称ジアルデヒドと一致した。

再結晶から得た２つのメタノールろ液を混ぜ合わせた。薄層クロマトグラムは、生成物及び他の不純物の存在を示した。以下に示すように、ろ液を濃縮して、種々の収穫物（ｃｒｏｐ）を収集した。

収穫物２及び３： これらの収穫物を混ぜ合わせて還流酢酸エチル２０ｍＬに溶解させ、室温に冷却した後、冷凍庫で１時間冷却した。スラリーを吸引ろ過して、冷凍庫で冷却した酢酸エチルで洗浄して、黄色針状物質（１．９５ｇ）を得た。ガスクロマトグラフィーは、異性体の８６：１４の混合物の存在を示した。この固体を酢酸エチル（１０ｍＬ）に入れてもう一度再結晶させて、黄色針状物質（１．５５ｇ）を得た。ガスクロマトグラフィーは、９２：８の比の異性体の存在を示した。酢酸エチル（１０ｍＬ）からの３回目の再結晶により、黄色針状物質１．２５ｇを得た。ｍｐ＝１５２〜１５４℃。ガスクロマトグラフィーは９６：４の異性体比を示した。プロトンＮＭＲにより、所望のジアルデヒドと確認した。ＧＣ−ＭＳ分析では、１６４ｍ／ｚに顕著なＭ^＋イオンが、９１ｍ／ｚにベースイオンが示され、所望のジアルデヒドと一致した。

酢酸エチルろ液を、メタノールろ液から得た黄色固体（収穫物４）と混ぜ合わせ、ロータリーエバポレーターで濃縮して、黄色固体６．０ｇを得た。ガスクロマトグラフィーは、他の不純物と共に２つの異性体の５３：３４の混合物が存在することを示した。

この固体をジクロロメタン１００ｍＬ中に溶解させ、Ｄａｖｉｓｉｌグレード６４３シリカゲル（３３．５ｇ）を添加した。この混合物を３５℃で、ロータリーエバポレーターで除去した。次いで、物質が吸着したシリカゲルを、Ｂｉｏｔａｇｅシステム用の試料導入モジュールに加えた。そのモジュールは、既にグラスウールのプラグ及び砂の層を含んでいた。次いで、シリカゲルの上にろ紙を載せた。Ｂｉｏｔａｇｅ７５Ｓカラムを、ラジアル圧縮圧３５ｐｓｉ及び溶媒圧２０ｐｓｉで、予め溶媒混合物で湿らせた。カラムをヘキサン：酢酸エチル（８５：１５）（６０００ｍＬ）で溶出させた。予め湿らせた段階を含むボイド容積１０００ｍＬを採取した。２５０ｍＬの画分を収集し、薄層クロマトグラム分析に基づいて混ぜ合わせた。以下に示すように、これらの画分を３５℃で、ロータリーエバポレーターで濃縮した。

画分５〜１０： 黄色固体をヘキサン中でスラリーとし、吸引ろ過して、山吹色固体２．５ｇを得た。ガスクロマトグラフィーは、６７：３３の比のジアルデヒド異性体混合物が存在することを示した。

合計収率９６〜９７％。Ｅ，Ｅ，Ｅ−ジアルデヒド＝１０．７５＋１．２５＝１２．０ｇ（収率５８．８％）。

パラ−トルエンスルフィン酸を用いた２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンジアールの異性化：

窒素雰囲気下、２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンジアールの２：１異性体混合物及びそのオフ異性体（２．５ｇ、１５．２ｍｍｏｌ）、４−トルエンスルフィン酸（０．３５ｇ、２．２ｍｍｏｌ）及び無水１，４−ジオキサン５０ｍＬを１５分間加熱還流した。一定量（７滴）をエーテル：ジクロロメタン（４：１）０．５ｍＬで希釈して、Ｋ_２ＣＯ_３で乾燥させた。ガスクロマトグラフィーは、所望の異性体及びオフ異性体の９１：９の混合物の存在を示した。

室温で一晩冷却した後、得られたスラリーをエーテル：ジクロロメタン（４：１）１００ｍＬに溶解させ、水（５０ｍＬ×３）、０．２Ｍ ＮａＯＨ水溶液（５０ｍＬ）、水（５０ｍＬ×２）及び飽和食塩水（５０ｍＬ×３）で順次洗浄した。相の分離後に、残ったラグ相（ｒａｇ ｌａｙｅｒ）をジクロロメタンに溶解させた。混ぜ合わせた有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、４０℃で、ロータリーエバポレーターで濃縮して、橙色固体２．２ｇを得た。ガスクロマトグラフィーは、９３：７の比の所望のジアルデヒド対オフ異性体の存在を示した。この固体をヘキサン中でスラリーとし、吸引ろ過して、橙色固体２．１５ｇを得た。３０〜４０℃に冷却した後、冷凍庫で１時間冷却することによって、還流酢酸エチル２０ｍＬからこの固体を再結晶させた。スラリーを吸引ろ過し、冷凍庫で冷却した酢酸エチルで洗浄して、黄橙色針状物質１．６５ｇを得た。ｍｐ＝１５８〜１６０℃。文献ｍｐ＝１６１〜１６２℃。ガスクロマトグラフィーは、９６：４の比の所望のジアルデヒド対オフ異性体の存在を示した。プロトンＮＭＲ及びカーボンＮＭＲは所望のジアルデヒド異性体と一致した。

収率＝６６％。

メタノール中における塩化チオニルを用いたチグリン酸メチルのスケールアップ調製：

メタノール３０００ｍＬ中に入れて機械的に攪拌して得たチグリン酸（３９７．３５ｇ、３．９７ｍｏｌ）の溶液に、ニートの塩化チオニル（３９７ｍＬ、５．４４ｍｏｌ）を、外部冷却せずに１３０分かけて滴下して処理した。この時、温度は１４℃から８０分後には最高５０℃に上昇した。一定量に対するガスクロマトグラフィーは、エステルへの完全な変換を示し、チグリン酸は検出されなかった。周囲温度で１時間攪拌した後、銀メッキした真空ジャケット付きヴィグリューカラム（４００ｍｍ×２０ｍｍ）に通して、大気圧でその溶液を蒸留した。ポット温度を５８〜６３℃にして、主に５７〜６１℃で濃縮液を収集した（２時間で６３０ｍＬ）。ガスクロマトグラフィーは、蒸留物中にかなりのメチルエステルが存在することを示した。

ヴィグリューカラムをより効率の低いカラム（３０×２ｃｍ ｗ／窪みがより少ない）に換えて、蒸留の速度を加速した。ポット温度を６９〜７１℃にして、６５〜６９℃のヘッド温度で蒸留物を収集した（２．２５時間かけて１３００ｍＬ）。ガスクロマトグラフィーは、蒸留物中にかなりのメチルエステルが存在することを示した。ポット温度が８７℃に達するまで大気圧蒸留を続け、６９〜８３℃のヘッド温度で、この間に蒸留物を収集した（２時間かけて９７５ｍＬ）。ガスクロマトグラフィーは、初期の画分よりも蒸留物中にかなり多量のメチルエステルが存在することを示した。

ポット中の黄色二相混合物をエーテル（３００ ＆ ２００ｍＬ）で抽出し、Ｋ_２ＣＯ_３で乾燥させ、ろ過し、２５℃で、ロータリーエバポレーターで濃縮して、橙色油状物質１３２．６ｇを得た（収率２９．３％）。ガスクロマトグラフィーは生成物の存在を示した。プロトンＮＭＲ及びカーボンＮＭＲは、痕跡量のエチルエーテルを伴う所望の生成物と一致した。エーテル濃縮液のガスクロマトグラフィーは、オーバーヘッド中にいくらかメチルエステルが存在することを示した。

蒸留物３： ３回目のメタノール蒸留物（９７５ｍＬ）を２５℃で、ロータリーエバポレーターで濃縮して、二相混合物（１００〜１５０ｍＬ）を得た。この混合物をエーテル（１００ ＆ ５０ｍＬ）で抽出し、Ｋ_２ＣＯ_３で乾燥させた。

蒸留物２： ２回目のメタノール蒸留物（１３００ｍＬ）を２５℃で、ロータリーエバポレーターで濃縮して、二相混合物（３０〜５０ｍＬ）を得た。この混合物をエーテル（２×５０ｍＬ）で抽出し、Ｋ_２ＣＯ_３で乾燥させた。

蒸留物２及び蒸留物３の濃縮エーテル抽出物を混ぜ合わせ、吸引ろ過し、２５℃で、ロータリーエバポレーターで濃縮して、無色油状物質７７．３ｇを得た。
プロトンＮＭＲ及びカーボンＮＭＲは、以前得た所望のメチルエステルのスペクトルと合致した。

合計収量＝１３２．６＋７７．３＝２０９．９ｇ（４６．３％）。

或いは、１）チグリン酸メチルは、Ａｌｆａ、Ｌａｎｃａｓｔｅｒ又はＡｃｒｏｓから商業的に入手可能であり、また、２）ＪＯＣ、６４、８０５１〜８０５３頁（１９９９）に従って、試験的にホスホニウム塩を製造することができる。

チグリン酸メチルの臭素化：

四塩化炭素２０００ｍＬにチグリン酸メチル（２０９．９ｇ、１．８４ｍｏｌ）及びＮ−ブロモスクシンイミド（３２７．５ｇ、１．８４ｍｏｌ）、７０％過酸化ベンゾイル（３．２ｇ、０．００９ｍｏｌ）を入れて機械的に攪拌して得たスラリーを、５Ｌ容の反応フラスコと還流冷却管との間に１Ｌのクーゲルロールバルブを設けて加熱還流した（７８〜８１℃）。２時間後、還流を停止して、マントルを外し、スターラーを止めた。すべての固体はＣＣｌ_４溶液に浮遊した。これにより、無視しうる量のＮＢＳを有するスクシンイミドであることを示唆された。スラリーを氷浴中で２０℃に冷却し、吸引ろ過して、灰白色固体１８０．７ｇを得た。洗浄は行わなかった。黄色ろ液を水（１Ｌ×３）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させた。ガスクロマトグラフィーは、他の副成分と共に、出発チグリン酸メチル及び２つの一臭化物が約１：２：１の比で存在することを示した。

ＭｇＳＯ_４をろ過して除去した後、薄黄色ろ液を３５℃で、ロータリーエバポレーターで濃縮し、薄黄色油状物質３２７．１ｇを得た。プロトンＮＭＲ及びガスクロマトグラフィーにより、以下の組成が示唆された。

５０％アッセイで調整した所望の生成物の収率＝４６．０％。

この油状物質は、そのまま次のステップで用いる。

わずかに高いペイロードでの、アセトニトリル中におけるγ−ブロモチグリン酸メチルとトリフェニルホスフィンとのスケールアップ反応：

窒素雰囲気下、５Ｌ容の四つ口フラスコに入れた無水アセトニトリル１３００ｍＬ中のγ−ブロモチグリン酸メチルの粗混合物（３２２．６ｇ、８５％アリルブロマイド、１．４２ｍｏｌ）を機械的に攪拌した。

酢酸エチル２０００ｍＬに溶解させたトリフェニルホスフィン（３８７．０ｇ、１．４８ｍｏｌ）の溶液を４時間かけて滴下した。添加中、最初の７５分間で約４０％が添加され、その後、温度は２２℃から最高３０℃に上昇した。１２０分間でトリフェニルホスフィン溶液の約６０％が添加され、その後、溶液は濁り、残りの添加により固体が沈殿し続けた。添加後、漏斗を酢酸エチル（６００ｍＬ）でリンスし、反応混合物に更に添加した。クリーム状のスラリーを、週末にわたり周囲温度で攪拌した。

この白色スラリーを吸引ろ過し、得られたケーキを酢酸エチル：アセトニトリル（２：１）（１５０ｍＬ×３）で洗浄した。得られた白色固体３５２．５５ｇを真空乾燥器中、４０℃で４時間乾燥させた（２時間後に一定重量）（３２２．５５ｇ）。ｍｐ＝１８７〜１８８℃（分解）。文献ｍｐ＝１８３℃（分解）。プロトンＮＭＲ及びカーボンＮＭＲは、以前得た所望のホスホニウム塩のスペクトルと合致した。ＬＣ−ＭＳ分析では、３７５ｍ／ｚに分子イオンが得られ、１つの主成分の存在が示された。ポジティブモードにおけるその主成分のエレクトロスプレーマススペクトルは所望のホスホニウム塩と一致した。リンＮＭＲは、２２．０ｐｐｍに単一のリンシグナルを示した。

出発チグリン酸メチルに基づいた収率＝１００×３２２．５５／（４５５．３２×１．８４×３２２．６／３２７．１）＝３９．０％。

（３−カルボメトキシ−２−Ｚ−ブテン−１−イリデン）トリフェニルホスホランの調製：

脱イオン水３４００ｍＬ中で（３−カルボメトキシ−２−Ｅ−ブテン−１−イリデン）トリフェニルホスホニウムブロマイド（１５４．８ｇ、０．３４ｍｏｌ）を機械的に攪拌して得た微スラリーに、２３℃で３２分かけて水５００ｍＬに溶解させた水酸化ナトリウム（１３．６ｇ、０．３４ｍｏｌ）の溶液を滴下して処理したところ、明らかな発熱はなかったが、直ちに山吹色固体の沈殿が生じた。１５分間攪拌した後、山吹色スラリーを吸引ろ過し、水（１５００ｍＬ）で洗浄し、吸引乾燥して、明黄色固体１５１．７ｇを得た。この固体を真空乾燥器中で３５〜４５℃（午後３時５０分）で一晩乾燥させた。

真空乾燥器中、３５〜４５℃で２２．５時間乾燥させた後、一定重量が得られた（１０７．８ｇ）。ｍｐ＝１４４〜１６０℃。文献ｍｐ＝１４５〜１６５℃。プロトンＮＭＲは、ＮＭＲの磁場の強度における差異を考慮すると、以前得た所望のイリドのスペクトルに類似していた。カーボンＮＭＲは、５０．２ｐｐｍ及び１１．８ｐｐｍにメチル炭素を示し、複雑な芳香族領域を伴い、オレフィン炭素及びイリド炭素については、明らかなシグナルを有しなかった。

収率＝８４．７％。

ジメチルクロセチネートの試験的調製：

窒素雰囲気下で、ベンゼン（１２８ｍＬ）に（３−カルボメトキシ−２−Ｚ−ブテン−１−イリデン）トリフェニルホスホラン（１２．８ｇ、３４．２ｍｍｏｌ）及び２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンジアール（２．１ｇ、１２．８ｍｍｏｌ）を入れてマグネチックスターラーで攪拌して得た混合物を、タイマーを用いて６時間加熱還流した。

得られたスラリーを氷浴中で４０分間冷却して、吸引ろ過し、ベンゼンで洗浄し、吸引乾燥して凍ったベンゼンを溶かし、赤色固体２．１ｇを得た。ＴＬＣ分析では、単一の黄色スポットが示された。この固体を真空乾燥器中、４０〜４５℃で７０分間乾燥させた（１．８５ｇ、収率４０．５％）。未補正ｍｐ＝２１０〜２１３℃。文献^３ｍｐ＝２１４〜２１６℃［^３：Ｅ．Ｂｕｃｈｔａ ＆ Ｆ．Ａｎｄｒｅｅ、Ｃｈｅｍ Ｂｅｒ、９３、１３４９（１９６０）］。プロトンＮＭＲは、以前得た、９０ＭＨｚ装置におけるジメチルクロセチンのスペクトルに類似していた。カーボンＮＭＲは、所望のジメチルエステルの正確な化学シフトを有する１１個の特有のカーボンシグナルをすべて示したが、それらのシグナルは、残留ベンゼンの可能性がある１つの副不純物シグナルを伴った。エレクトロスプレーマススペクトルからは、フラグメントの分解及び再結合が示唆された。

ＴＬＣ分析では、赤色ろ液が、追加の生成物であるトリフェニルホスフィンオキシド、及び単離された固体よりもわずかに小さいＲ_ｆを有する橙色成分を含有することが示された。赤色ろ液を３５℃で、ロータリーエバポレーターで濃縮して、赤色固体１３．２ｇを得た。この固体をメタノール２５ｍＬ中で加熱還流した。そして、得られたスラリーを氷浴中で冷却し、６０分後に吸引ろ過し、メタノールで洗浄して、赤色固体０．６ｇを得た。この固体を真空乾燥器中、４５℃で１３５分間乾燥させた（０．５ｇ）。ｍｐ＝２０３〜２０８℃。プロトンＮＭＲは、残留不純物を伴う所望のジエステルの存在を示した。カーボンＮＭＲは、所望の生成物のシグナルのみを示した。ＴＬＣ分析では、筋状の生成物スポットが示された。

ろ液は濃縮して、保存した。

クロセチンのジメチルエステルの第２の調製：

窒素雰囲気下、ベンゼン４００ｍＬに（３−カルボメトキシ−２−Ｚ−ブテン−１−イリデン）トリフェニルホスホラン（７３．０ｇ、１９５．０ｍｍｏｌ）を入れて機械的に攪拌して得たスラリーに、２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンジアール（１１．９５ｇ、１２．８ｍｍｏｌ）を一度に添加した後、ベンゼン３３０ｍＬを更に添加した。得られた褐色スラリーを、タイマーを用いて６時間加熱還流し、更に、室温に冷却し、窒素下で一晩置いた。

得られたスラリーを氷浴中で６〜１０℃に冷却し、吸引ろ過し、ベンゼン（５０ｍＬ×２）で洗浄して、赤色固体１０．０５ｇを得た。ＴＬＣ分析では、単一の黄色いスポットが示された。この固体を真空乾燥器中、４０℃（午前９時）で３．５時間乾燥させたが、重量損失は見られなかった（１０．０５ｇ、収率３８．７％）。ｍｐ＝２１１〜２１４℃。文献ｍｐ＝２１４〜２１６℃。プロトンＮＭＲ及びカーボンＮＭＲは、以前得たクロセチンの所望のジメチルエステルのスペクトルと合致した。

赤色ろ液を４０℃で、ロータリーエバポレーターで濃縮し、赤色固体８４．４ｇを得た。ＴＬＣ分析は、試験的調製と類似していた。この固体をメタノール１６５ｍＬに入れ、還流下、マグネチックスターラーで攪拌してスラリーとした。そして、得られたスラリーを氷浴中で２．５時間冷却し、吸引ろ過し、最小量のメタノールで洗浄して、橙色ペースト１０．５ｇを得た。ＴＬＣ分析では、単一の黄色スポットが示された。このペーストを真空乾燥器中、４５℃で１９０分間乾燥させた（５．６ｇ）。ｍｐ＝２０１〜２０８℃。ＮＭＲは、未知の芳香族不純物と共に所望のジエステルが存在することを示した。

この不純物固体、及び初期の操作から得た２つの他の類似の固体（合計６．５ｇ）を、還流したクロロホルム７５ｍＬに溶解させ、メタノールで希釈し、一晩冷蔵庫に入れて冷却した。

スラリーを吸引ろ過し、最小量のメタノールで洗浄して、赤色結晶固体６．１ｇを得た。この固体を真空乾燥器中、４５℃で３時間、一定重量になるまで乾燥した（４．２５ｇ）。ｍｐ＝２１１〜２１３℃。プロトンＮＭＲ及びカーボンＮＭＲは、他のオレフィン族不純物又は芳香族不純物の存在を示した。その固体を、還流したトルエン１５０ｍＬに溶解させ、最後に、冷蔵庫に入れて１３０分間冷却した。スラリーを吸引ろ過し、トルエンで洗浄して、赤色固体２．０５ｇを得た。この固体を真空乾燥器中、４５℃で５０分間乾燥させたが、重量変化は見られなかった（２．０５ｇ）。ｍｐ＝２１４〜２１６℃。プロトンＮＭＲは、いくらかの残留トルエン及び無視しうる量のオフ異性体不純物を伴った所望のジメチルクロセチンの存在を示した。カーボンＮＭＲは所望のジメチルクロセチンの存在を示したが、オフ異性体不純物は検出されず、トルエンと一致する２〜３の新規残留物シグナルが見られた。収率＝４５．５％。

クロセチンの二ナトリウム塩の調製：

ジメチルクロセチン（１３．９５ｇ、３９．１ｍｍｏｌ）、４０ｗｔ％水酸化ナトリウム水溶液（２７３ｍＬ、３．９１５ｍｏｌ）及びメタノール（３９１ｍＬ）を機械的に攪拌して得たスラリーを、７４℃で、タイマーを用いて１２時間加熱還流した。

この橙色スラリーを、ろ紙を備えるブフナー漏斗及び焼結ガラス漏斗に通して吸引ろ過した。ろ過はゆっくり行った^４［^４：乾燥後にフィルターが詰まるまでは、焼結ガラスに通した方がろ過は迅速であった。しかし、水で洗浄するとろ紙の詰まりは解消された］。焼結ガラス漏斗に残ったスラリーを、ブフナー漏斗に残った固体に加えた。この橙色ペーストを水（１００ｍＬ×３）、メタノール（５０ｍＬ×３）で順次洗浄した。橙色ペーストを真空乾燥器中、４５〜５０℃で乾燥させた。

２１時間後、橙色塊の重量は２４．２５ｇであった。その物質をスパーテルで粉砕し、真空乾燥器中、４５〜５０℃で乾燥させた。

合計６５．５時間の乾燥の後、橙色粉末の量は２３．１ｇであった。赤外スペクトルは、報告されているＴＳＣのＩＲスペクトルと比較して余分のバンドを示し、特に３４２４及び１４４４ｃｍ^−１に大きなバンドを示した。プロトンＮＭＲは、メチルエステルの証拠を示さなかった。しかし、オレフィン領域及びメチル領域の積分値は、恐らくフェージング問題のために消失していた。

重量の過剰は水酸化ナトリウムが原因であると仮定して、その橙色固体を脱イオン水４００ｍＬ中、３５分間マグネチックスターラーで攪拌した。スラリーを吸引ろ過し、得られたケーキを脱イオン水（５０ｍＬ×２）で洗浄して、橙色ペーストを得た。この物質を真空乾燥器中、４５〜５０℃で一定重量になるまで乾燥させた。約７時間後、この固体を破砕し、粉砕し、更に真空乾燥器中、４５℃で一晩乾燥させた。

４５℃で２１時間乾燥させた後、固体の量は１３．２５ｇであった。更に粉砕して、真空乾燥器中、４５℃で乾燥させた後、固体の量は１３．１５ｇであった。赤外スペクトルは、報告されているＩＲスペクトルと一致した。プロトンＮＭＲでは、二ナトリウム塩と一致するプロトンＮＭＲスペクトルが得られた。ＨＰＬＣ分析では、可能性のある１つの副不純物を伴う１つの主成分の存在が示された。主成分のエレクトロスプレー負イオンマススペクトルは、クロセチンの所望の二ナトリウム塩と一致した。カーボンＮＭＲは、クロセチンの二ナトリウム塩の１０個の特有のカーボンシグナルをすべて示し、分子の対称性が立証された。

水、水酸化ナトリウム及びメタノールの元のろ液は、水洗浄中に更に多くの固体を沈殿させた。このスラリーを吸引ろ過し、水で洗浄して、橙色ペーストを得た。このペーストを真空乾燥器中、４５℃で１８．５時間乾燥させて、橙色固体０．６５ｇを得た。スペクトルデータは、クロセチンの所望の二ナトリウム塩と一致した。この固体を第一収穫物と混ぜ合わせた。

収量＝１３．１５＋０．６５＝１３．８ｇ（９４．８％）。

第一収穫物の元素分析では、所望の生成物に関する許容できない値が示され、これにより、クロセチンの二ナトリウム塩に水酸化ナトリウムが混入していることが示唆された。

クロセチンの二ナトリウム塩の水洗浄：
クロセチンの二ナトリウム塩（１３．６ｇ）を脱イオン水１５０ｍＬに入れてスラリーとし、室温で１時間、マグネチックスターラーで攪拌した。スラリーをブフナー漏斗で吸引ろ過した。そして、得られた橙色ペーストを水で洗浄して、橙色ろ液のｐＨを観察した。

橙色のペーストを、ラバーダムを用いてフィルター上で吸引乾燥した。このペーストを２５〜５５℃で５．５時間、真空乾燥して、脆い橙色固体１１．２ｇを得た。この固体を粉砕し、ボトルに移し、真空乾燥器中、４５℃で一晩乾燥させた。

量＝１１．１ｇ。回収率＝８１．６％。ＩＲ及びプロトンＮＭＲスペクトルは、以前得た、クロセチンの所望の二ナトリウム塩のＩＲ及びプロトンＮＭＲスペクトルと合致した。ＨＰＬＣ分析では、４２０ｎｍで単一成分が示され、負イオンモードにおける当該成分のエレクトロスプレーマススペクトルはクロセチンと一致した。

カーボンＮＭＲは、クロセチンの所望の二ナトリウム塩の正確な化学シフトを有する１０個の特有のカーボンシグナルをすべて示した。元素分析からは、所望の生成物に関する許容可能なデータが得られた。

参照文献：
１． Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ， ２７， ４９８３−４９８６ （１９８６）．
２． Ｆ．Ｊ．Ｈ．Ｍ． Ｊａｎｓｅｎ， Ｍ．Ｋｗｅｓｔｒｏ， Ｄ．Ｓｃｈｍｉｔｔ ＆ Ｊ．Ｌｕｇｔｅｎｂｕｒｇ， Ｒｅｃｌ．Ｔｒａｖ．Ｃｈｅｍ． Ｐａｙｓ−Ｂａｓ， １１３， ５５２−５６２ （１９９４）， 及び当該文献で引用された参照文献．
３． Ｊ．Ｈ．Ｂａｂｌｅｒ， ＵＳ Ｐａｔｅｎｔ Ｎｏ． ４，１０７，０３０， Ａｐｒ ２１， １９９２．
４． Ｔ．Ｗ．Ｇｉｂｓｏｎ ＆ Ｐ．Ｓｔｒａｓｓｂｕｒｇｅｒ， Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．， ４１， ７９１ （１９７６） ＆ Ｊ．Ｍ．Ｓｎｙｄｅｒ ＆ Ｃ．Ｒ．Ｓｃｈｏｌｆｉｅｌｄ， Ｊ．Ａｍ．Ｏｉｌ Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．， ５９， ４６９ （１９８２）．

（実施例６：改良合成方法に従って製造されたＴＳＣの純度の決定）
実施例５の方法に従って合成したＴＳＣ物質について、２５４ｎｍの吸光度に対する４２１ｎｍの吸光度の比は、ＵＶ−可視分光光度計を用いて１１．１であった。

（実施例７：ＴＳＣの経口投与）
ＴＳＣは、ラットにおいて、（胃管栄養法（ｇａｖａｇｅ）により）経口投与した場合に血流に吸収されることが示された。２匹のラットにおいて、与えた投与量の１〜２％が、投与後１５〜３０分の時点で血流に存在することが判明した。経口的に吸収される量は、実際には、その時点よりも前に最大になった。

開示された本発明から逸脱することなく、本発明の化合物及び組成物の両方、並びに関連の方法に対して、多数の変更及び追加を行うことができることは、当業者に容易に理解できるであろう。

Claims (42)

1. 下記構造：
   ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
   ［式中、
   Ｙはカチオンであり、
   Ｚは、前記カチオンに結合した極性基であり、
   ＴＣＲＯはトランスカロテノイド骨格である。］
   を有する化合物であって、
   トランスソディウムクロセチネートでない化合物。
2. Ｙが、Ｎａ^＋、Ｋ^＋、Ｌｉ^＋からなる群より選ばれる一価金属イオン、又はＲ_４Ｎ^＋、Ｒ_３Ｓ^＋［Ｒは、Ｈ、又はＣ_ｎＨ_２ｎ＋１（ｎは１〜１０）である。］からなる群より選ばれる有機カチオンである、請求項１に記載の化合物。
3. Ｚが、カルボキシル（ＣＯＯ⁻）基、硫酸基（ＯＳＯ_３ ⁻）、又はモノリン酸基（ＯＰＯ_３ ⁻）、（ＯＰ（ＯＨ）Ｏ_２ ⁻）、ジリン酸基、トリリン酸、又はそれらの組合せからなる群より選ばれる、請求項１に記載の化合物。
4. ＴＣＲＯが、炭素原子を含む共役した炭素−炭素二重結合及び単結合であり、１つの炭素−炭素二重結合の周囲の４つの単結合がすべて同一平面内に位置する、請求項１に記載の化合物であって、
   直鎖状である化合物。
5. ＴＣＲＯが、
   

   

   
   ［式中、同一でも異なってもよいＸは、Ｈ、１０個以下の炭素を有し、ハロゲンを任意的に含む直鎖状若しくは分岐鎖状の基、又はハロゲンである。］
   である、請求項１に記載の化合物。
6. ＴＣＲＯが、
   

   

   
   ［式中、同一でも異なってもよいＸは、Ｈ、１０個以下の炭素を有し、ハロゲンを任意的に含む直鎖状若しくは分岐鎖状の基、又はハロゲンである。］
   である、請求項１に記載の化合物。
7. ＴＣＲＯが、
   

   

   
   ［式中、同一でも異なってもよいＸは、Ｈ、１０個以下の炭素を有し、ハロゲンを任意的に含む直鎖状若しくは分岐鎖状の基、又はハロゲンである。］
   である、請求項１に記載の化合物。
8. ＴＣＲＯが、
   

   

   
   ［式中、同一でも異なってもよいＸは、Ｈ、１０個以下の炭素を有し、ハロゲンを任意的に含む直鎖状若しくは分岐鎖状の基、又はハロゲンである。］
   である、請求項１に記載の化合物。
9. 哺乳動物における酸素の拡散性を増大させる方法であって、
   下記式：
   ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
   ［式中、
   Ｙはカチオンであり、
   Ｚは、前記カチオンに結合した極性基であり、
   ＴＣＲＯはトランスカロテノイド骨格である。］
   を有する治療有効量の化合物を哺乳動物に投与することを含み、
   前記化合物がトランスソディウムクロセチネートでない方法。
10. 前記投与が吸入による、請求項９に記載の方法。
11. 呼吸器疾患を治療する方法であって、
    下記式：
    ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
    ［式中、
    Ｙはカチオンであり、
    Ｚは、前記カチオンに結合した極性基であり、
    ＴＣＲＯはトランスカロテノイド骨格である。］
    を有する治療有効量の化合物を、治療を要する哺乳動物に投与することを含み、
    前記化合物がトランスソディウムクロセチネートでない方法。
12. 気腫を治療する方法であって、
    下記式：
    ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
    ［式中、
    Ｙはカチオンであり、
    Ｚは、前記カチオンに結合した極性基であり、
    ＴＣＲＯはトランスカロテノイド骨格である。］
    を有する治療有効量の化合物を、治療を要する哺乳動物に投与することを含み、
    前記化合物がトランスソディウムクロセチネートでない方法。
13. 出血性ショックを治療する方法であって、
    下記式：
    ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
    ［式中、
    Ｙはカチオンであり、
    Ｚは、前記カチオンに結合した極性基であり、
    ＴＣＲＯはトランスカロテノイド骨格である。］
    を有する治療有効量の化合物を、治療を要する哺乳動物に投与することを含み、
    前記化合物がトランスソディウムクロセチネートでない方法。
14. 循環器疾患を治療する方法であって、
    下記式：
    ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
    ［式中、
    Ｙはカチオンであり、
    Ｚは、前記カチオンに結合した極性基であり、
    ＴＣＲＯはトランスカロテノイド骨格である。］
    を有する治療有効量の化合物を、治療を要する哺乳動物に投与することを含み、
    前記化合物がトランスソディウムクロセチネートでない方法。
15. アテローム性動脈硬化を治療する方法であって、
    下記式：
    ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
    ［式中、
    Ｙはカチオンであり、
    Ｚは、前記カチオンに結合した極性基であり、
    ＴＣＲＯはトランスカロテノイド骨格である。］
    を有する治療有効量の化合物を、治療を要する哺乳動物に投与することを含み、
    前記化合物がトランスソディウムクロセチネートでない方法。
16. 喘息を治療する方法であって、
    下記式：
    ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
    ［式中、
    Ｙはカチオンであり、
    Ｚは、前記カチオンに結合した極性基であり、
    ＴＣＲＯはトランスカロテノイド骨格である。］
    を有する治療有効量の化合物を、治療を要する哺乳動物に投与することを含み、
    前記化合物がトランスソディウムクロセチネートでない方法。
17. 脊髄損傷を治療する方法であって、
    下記式：
    ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
    ［式中、
    Ｙはカチオンであり、
    Ｚは、前記カチオンに結合した極性基であり、
    ＴＣＲＯはトランスカロテノイド骨格である。］
    を有する治療有効量の化合物を、治療を要する哺乳動物に投与することを含み、
    前記化合物がトランスソディウムクロセチネートでない方法。
18. 脳浮腫を治療する方法であって、
    下記式：
    ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
    ［式中、
    Ｙはカチオンであり、
    Ｚは、前記カチオンに結合した極性基であり、
    ＴＣＲＯはトランスカロテノイド骨格である。］
    を有する治療有効量の化合物を、治療を要する哺乳動物に投与することを含み、
    前記化合物がトランスソディウムクロセチネートでない方法。
19. 乳頭腫を治療する方法であって、
    下記式：
    ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
    ［式中、
    Ｙはカチオンであり、
    Ｚは、前記カチオンに結合した極性基であり、
    ＴＣＲＯはトランスカロテノイド骨格である。］
    を有する治療有効量の化合物を、治療を要する哺乳動物に投与することを含み、
    前記化合物がトランスソディウムクロセチネートでない方法。
20. 低酸素症を治療する方法であって、
    下記式：
    ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
    ［式中、
    Ｙはカチオンであり、
    Ｚは、前記カチオンに結合した極性基であり、
    ＴＣＲＯはトランスカロテノイド骨格である。］
    を有する治療有効量の化合物を、治療を要する哺乳動物に投与することを含み、
    前記化合物がトランスソディウムクロセチネートでない方法。
21. 可視光波長領域で生じた最大ピークの吸光度を、ＵＶ波長領域で生じたピークの吸光度で割った値が７．５を超える双極性トランスカロテノイド塩組成物。
22. 可視光波長領域で生じた最大ピークの吸光度を、ＵＶ波長領域で生じたピークの吸光度で割った値が７．５を超えるトランスソディウムクロセチネート組成物。
23. 哺乳動物における酸素の拡散性を増大させる方法であって、
    治療有効量の双極性トランスカロテノイド塩を哺乳動物に投与することを含み、
    可視光波長領域で生じた最大ピークの吸光度を、ＵＶ波長領域で生じたピークの吸光度で割った値が７．５を超える方法。
24. 気腫を治療する方法であって、
    治療有効量の双極性トランスカロテノイド塩を、治療を要する哺乳動物に投与することを含み、
    可視光波長領域で生じた最大ピークの吸光度を、ＵＶ波長領域で生じたピークの吸光度で割った値が７．５を超える方法。
25. 出血性ショックを治療する方法であって、
    治療有効量の双極性トランスカロテノイド塩を、治療を要する哺乳動物に投与することを含み、
    可視光波長領域で生じた最大ピークの吸光度を、ＵＶ波長領域で生じたピークの吸光度で割った値が７．５を超える方法。
26. 前記双極性トランスカロテノイド塩がトランスソディウムクロセチネートである、請求項２３〜２５のいずれか一項に記載の方法。
27. 哺乳動物における酸素の拡散性を増大させる方法であって、
    治療有効量のトランスソディウムクロセチネートを、吸入によって哺乳動物に投与することを含む方法。
28. オレフィンジアルデヒドの異性体混合物をオールトランスアルデヒドに変換する方法であって、
    ジアルデヒドの前記異性体混合物を、溶媒中でスルフィン酸を用いて異性化することを含む方法。
29. 前記スルフィン酸が式ＲＳＯ_２Ｈ［Ｒは、Ｃ１〜Ｃ１０の直鎖若しくは分岐アルキル基、又はアリール基である。］を有する、請求項２８に記載の方法。
30. 前記溶媒が、１，４−ジオキサン、テトラヒドロフラン又はジアルキルエーテルからなる群より選ばれ、前記アルキル基がＣ１〜Ｃ１０の直鎖又は分岐アルキル基である、請求項２８に記載の方法。
31. 前記スルフィン酸がパラ−トルエンスルフィン酸であり、前記溶媒が１，４−ジオキサンである、請求項２８に記載の方法。
32. 前記オレフィンジアルデヒドが２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンジアールである、請求項２８に記載の方法。
33. 前記オレフィンジアルデヒドが２，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエンジアールであり、前記スルフィン酸がパラ−トルエンスルフィン酸であり、前記溶媒が１，４−ジオキサンである、請求項２８に記載の方法。
34. 虚血を治療する方法であって、
    下記式：
    ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
    ［式中、
    Ｙはカチオンであり、
    Ｚは、前記カチオンに結合した極性基であり、
    ＴＣＲＯはトランスカロテノイド骨格である。］
    を有する治療有効量の化合物を、治療を要する哺乳動物に投与することを含み、
    前記化合物がトランスソディウムクロセチネートでない方法。
35. 外傷性脳損傷を治療する方法であって、
    下記式：
    ＹＺ−ＴＣＲＯ−ＺＹ
    ［式中、
    Ｙはカチオンであり、
    Ｚは、前記カチオンに結合した極性基であり、
    ＴＣＲＯはトランスカロテノイド骨格である。］
    を有する治療有効量の化合物を、治療を要する哺乳動物に投与することを含み、
    前記化合物がトランスソディウムクロセチネートでない方法。
36. 哺乳動物における虚血を治療する方法であって、
    治療有効量の双極性トランスカロテノイド塩を哺乳動物に投与することを含み、
    可視光波長領域で生じた最大ピークの吸光度を、ＵＶ波長領域で生じたピークの吸光度で割った値が７．５を超える方法。
37. 外傷性脳損傷を治療する方法であって、
    治療有効量の双極性トランスカロテノイド塩を、治療を要する哺乳動物に投与することを含み、
    可視光波長領域で生じた最大ピークの吸光度を、ＵＶ波長領域で生じたピークの吸光度で割った値が７．５を超える方法。
38. パフォーマンスを増強する方法であって、
    有効量の双極性トランスカロテノイド塩を哺乳動物に投与することを含み、
    可視光波長領域で生じた最大ピークの吸光度を、ＵＶ波長領域で生じたピークの吸光度で割った値が７．５を超える方法。
39. 糖尿病を治療する方法であって、
    治療有効量の双極性トランスカロテノイド塩を、治療を要する哺乳動物に投与することを含み、
    可視光波長領域で生じた最大ピークの吸光度を、ＵＶ波長領域で生じたピークの吸光度で割った値が７．５を超える方法。
40. アルツハイマー病を治療する方法であって、
    治療有効量の双極性トランスカロテノイド塩を、治療を要する哺乳動物に投与することを含み、
    可視光波長領域で生じた最大ピークの吸光度を、ＵＶ波長領域で生じたピークの吸光度で割った値が７．５を超える方法。
41. 前記双極性トランスカロテノイド塩がトランスソディウムクロセチネートである、請求項３６〜４０のいずれか一項に記載の方法。
42. 哺乳動物の手術に起因する虚血を治療又は予防し、或いはその量を減少させる方法であって、
    治療有効量の双極性トランスカロテノイド塩を、手術前、手術中又は手術後に、哺乳動物に投与することを含む方法。