JP2013194050A

JP2013194050A - New compound having dna polymerase inhibitory activity

Info

Publication number: JP2013194050A
Application number: JP2012066745A
Authority: JP
Inventors: Yoshiyuki Mizushina; 善之水品; Michifumi Takeuchi; 倫文竹内; Shinji Kamisuki; 伸治紙透; Isoko Kuriyama; 磯子栗山; Fumio Sugawara; 二三男菅原; Hiromi Yoshida; 弘美吉田
Original assignee: Kobe Gakuin Educational Foundation
Current assignee: Kobe Gakuin Educational Foundation
Priority date: 2012-03-23
Filing date: 2012-03-23
Publication date: 2013-09-30

Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To find a new compound with a DNA polymerase inhibitory activity and to provide a new pharmaceutical composition utilizing the same compound.SOLUTION: A new compound having a DNA polymerase inhibitory activity is separated from a mold parasitic on a moss. In addition, the new compound has the DNA polymerase inhibitory activity, a human leukemia T-cell growth suppression activity, a cancer cell growth suppression activity, and a macrophage growth suppression activity.

Description

本発明は、ＤＮＡポリメラーゼ阻害活性を有する新規化合物及び該化合物を含む組成物に関する。 The present invention relates to a novel compound having DNA polymerase inhibitory activity and a composition containing the compound.

（ＤＮＡポリメラーゼ）
真核生物のＤＮＡ合成酵素（ＤＮＡポリメラーゼ）は、これまでα、β、γ、δ、ε、ζ、η、θ、ι、κ、λ、μ、σ、ＴｄＴ（ターミナル・デオキシヌクレオチジル・トランスフェラーゼ）及びＲｅｖ１の１５種類の分子種が知られている。
これらのＤＮＡポリメラーゼは、細胞の増殖、分裂、分化等に関与している。例えば、α型はＤＮＡ複製、β型、λ型及びＴｄＴは修復と組換え、δ型及びε型は複製と修復の双方、ζ〜κ型は修復を担っている。 (DNA polymerase)
Eukaryotic DNA synthesizing enzymes (DNA polymerases) are α, β, γ, δ, ε, ζ, η, θ, ι, κ, λ, μ, σ, TdT (terminal deoxynucleotidyl transferase). ) And Rev1 15 molecular species are known.
These DNA polymerases are involved in cell proliferation, division, differentiation and the like. For example, α type is responsible for DNA replication, β type, λ type and TdT are responsible for repair and recombination, δ type and ε type are both responsible for replication and repair, and ζ to κ type are responsible for repair.

（ＤＮＡポリメラーゼ阻害活性を有する化合物）
本発明者らの１人は、ＤＮＡ複製型のＤＮＡポリメラーゼα,δ,ε阻害剤には、ヒト由来癌細胞増殖抑制活性があることを報告している（参照：非特許文献１）。
また、本発明者らの１人は、ＤＮＡ修復・組換え型のＤＮＡポリメラーゼλ阻害活性と起炎剤ＴＰＡで誘導したマウス耳抗炎症活性やＬＰＳで炎症刺激を与えたマクロファージのＴＮＦ−α産生抑制活性には正の相関があることを報告している（参照：非特許文献２）。
以上により、ＤＮＡポリメラーゼ阻害活性を有する化合物は、癌、エイズ等のウイルス疾患、免疫疾患の予防・治療に期待されている。 (Compound having DNA polymerase inhibitory activity)
One of the present inventors has reported that a DNA replication type DNA polymerase α, δ, ε inhibitor has a human cancer cell growth inhibitory activity (see Non-patent Document 1).
In addition, one of the inventors of the present invention has shown that DNA repair / recombinant DNA polymerase λ inhibitory activity and anti-inflammatory activity of mouse ear induced by TPA, a macrophage, and TNF-α production of macrophages stimulated by inflammation with LPS It has been reported that the inhibitory activity has a positive correlation (see Non-Patent Document 2).
As described above, compounds having DNA polymerase inhibitory activity are expected for the prevention and treatment of viral diseases such as cancer and AIDS and immune diseases.

（ＤＮＡポリメラーゼ阻害剤）
ＤＮＡポリメラーゼの酵素活性を阻害するＤＮＡポリメラーゼ阻害剤は、例えば、癌に対して癌細胞の増殖抑制活性を示し、エイズに対してＨＩＶ由来逆転写酵素に対する阻害活性を示し、また、免疫疾患に対して抗原に対する特異的抗体産生を抑制する免疫抑制活性を示すことが知られている。
ＤＮＡポリメラーゼ阻害活性を有する糖脂質が、制癌剤、ＨＩＶ由来逆転写酵素阻害剤、免疫抑制剤として有用であることが報告されている（参照：特許文献１）。
現在、ＤＮＡポリメラーゼ阻害剤として、ジデオキシＴＴＰ（ｄｄＴＴＰ）、Ｎ-メチルマレイミド、ブチルフェニル-ｄＧＴＰなどが知られている。また植物由来の糖脂質であるスルホキノボシルアシルグリセリドにもＤＮＡ合成酵素阻害作用が見出されている（参照：特許文献１）。 (DNA polymerase inhibitor)
A DNA polymerase inhibitor that inhibits the enzyme activity of DNA polymerase, for example, exhibits cancer cell growth inhibitory activity against cancer, exhibits inhibitory activity against HIV-derived reverse transcriptase against AIDS, and also against immune diseases It is known to exhibit immunosuppressive activity that suppresses the production of specific antibodies against antigens.
It has been reported that glycolipids having DNA polymerase inhibitory activity are useful as anticancer agents, HIV-derived reverse transcriptase inhibitors, and immunosuppressive agents (see Patent Document 1).
Currently, dideoxy TTP (ddTTP), N-methylmaleimide, butylphenyl-dGTP, and the like are known as DNA polymerase inhibitors. Furthermore, sulfosynovosyl acylglycerides, which are plant-derived glycolipids, have also been found to have a DNA synthase inhibitory effect (see Patent Document 1).

また、本発明者らの１人は、ＤＮＡポリメラーゼ阻害剤を複数開発して報告している（参照：特許文献２〜４）。 In addition, one of the present inventors has developed and reported a plurality of DNA polymerase inhibitors (see: Patent Documents 2 to 4).

しかし、報告されたＤＮＡポリメラーゼ阻害剤は、本発明のＤＮＡポリメラーゼ阻害剤と構造が明らかに異なる。 However, the reported DNA polymerase inhibitors are clearly different in structure from the DNA polymerase inhibitors of the present invention.

Y. Mizushina (2009) Biosci. Biotechnol. Biochem. 73, 1239-1251Y. Mizushina (2009) Biosci. Biotechnol. Biochem. 73, 1239-1251 Y. Mizushina (2011) 日本栄養・食糧学会誌. 64, 377-384Y. Mizushina (2011) Journal of Japanese Society of Nutrition and Food. 64, 377-384

特平１１−１０６３９５11-106395 特開２０１１−３７７３０JP 2011-37730 A 特開２０１０−１２０８８２JP 2010-120882 A 特開２００２−２２３７５０JP 2002-223750 A

本発明は、ＤＮＡポリメラーゼ阻害活性を有する新規な化合物を見出すと共に、同化合物を利用した新たな医薬組成物（ＤＮＡポリメラーゼ阻害剤、抗癌剤、抗炎症剤、白血病治療剤）を提供することを解決すべき課題とした。 The present invention finds a novel compound having a DNA polymerase inhibitory activity and provides a new pharmaceutical composition (DNA polymerase inhibitor, anticancer agent, anti-inflammatory agent, leukemia therapeutic agent) using the compound. It was a problem to be solved.

本発明者らは、上記課題を解決するために、コケに寄生するカビから、ＤＮＡポリメラーゼ阻害活性を有する新規化合物｛参照：下記式（ＩＩ）〜（ＶＩ）、本発明者の一人が、（ＩＩ）〜（ＶＩ）を、それぞれ、「SF235」、「SF231」、「SF233」、「SF234」及び「SF232」と命名｝を単離した。
さらに、本発明者らは、該新規化合物がＤＮＡポリメラーゼ阻害活性、癌細胞増殖抑制活性、ヒト白血病T細胞増殖抑制活性及びマクロファージ増殖抑制活性を有することを確認した。
以上により、本発明を完成した。 In order to solve the above-mentioned problems, the present inventors have developed a novel compound having DNA polymerase inhibitory activity from fungus parasitic on moss {see the following formulas (II) to (VI), II) to (VI) were isolated as “SF235”, “SF231”, “SF233”, “SF234” and “SF232”, respectively}.
Furthermore, the present inventors have confirmed that the novel compound has DNA polymerase inhibitory activity, cancer cell proliferation inhibitory activity, human leukemia T cell proliferation inhibitory activity and macrophage proliferation inhibitory activity.
Thus, the present invention has been completed.

すなわち、本発明は以下の通りである。
「１．以下の一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物又はその薬学的に許容し得る塩。
（式中、R_１は、以下のいずれか１から選択され、
式中、R_２は、水素又はヒドロキシ基である）
２．前記化合物が、2-(1-ヒドロキシヘプチル)-3-(ヒドロキシメチル)ベンゼン-1,4-ジオールである前項１に記載の化合物又はその薬学的に許容し得る塩。
３．前記化合物が、(E)-2-(ヘプタ-1-エン-1-イル)-3-(ヒドロキシメチル)ベンゼン-1,4-ジオールである前項１に記載の化合物又はその薬学的に許容し得る塩。
４．前記化合物が、2-ヘプチル-3-(ヒドロキシメチル)ベンゼン-1,4-ジオールである前項１に記載の化合物又はその薬学的に許容し得る塩。
５．前記化合物が、3-(1-ヒドロキシヘプチル)-2-(ヒドロキシメチル)フェノールである前項１に記載の化合物又はその薬学的に許容し得る塩。
６．前記化合物が、(E)-3-(ヘプタ-1-エン-1-イル)-4,5-ジヒドロキシ-2-(ヒドロキシメチル)シクロヘキサ-2-エノンである前項１に記載の化合物又はその薬学的に許容し得る塩。
７．前項１〜６のいずれか１に記載の化合物又はその薬学的に許容し得る塩を有効成分として含有するＤＮＡポリメラーゼ阻害剤。
８．前項１〜６のいずれか１に記載の化合物又はその薬学的に許容し得る塩を有効成分として含有する抗癌剤。
９．前項１〜６のいずれか１に記載の化合物又はその薬学的に許容し得る塩を有効成分として含有する抗炎症剤。
１０．前項１〜６のいずれか１に記載の化合物又はその薬学的に許容し得る塩を有効成分として含有する白血病治療剤。
１１．前項１〜６のいずれか１に記載の化合物又はその薬学的に許容し得る塩を食品に配合してなる食用組成物。」 That is, the present invention is as follows.
“1. A compound represented by the following general formula (I) or (II) or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
(Wherein R ₁ is selected from any _one of the following:
Wherein R ₂ is hydrogen or a hydroxy group)
2. 2. The compound according to item 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein the compound is 2- (1-hydroxyheptyl) -3- (hydroxymethyl) benzene-1,4-diol.
3. 2. The compound according to item 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein the compound is (E) -2- (hept-1-en-1-yl) -3- (hydroxymethyl) benzene-1,4-diol. Get salt.
4). 2. The compound according to item 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein the compound is 2-heptyl-3- (hydroxymethyl) benzene-1,4-diol.
5. 2. The compound according to item 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein the compound is 3- (1-hydroxyheptyl) -2- (hydroxymethyl) phenol.
6). 2. The compound according to item 1 above, wherein the compound is (E) -3- (hept-1-en-1-yl) -4,5-dihydroxy-2- (hydroxymethyl) cyclohex-2-enone, or a pharmacy thereof Acceptable salt.
7). A DNA polymerase inhibitor comprising the compound according to any one of items 1 to 6 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
8). 7. An anticancer agent comprising the compound according to any one of items 1 to 6 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
9. 7. An anti-inflammatory agent comprising the compound according to any one of items 1 to 6 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
10. 7. A therapeutic agent for leukemia comprising the compound according to any one of items 1 to 6 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
11. 7. An edible composition comprising the food according to any one of items 1 to 6 or a pharmaceutically acceptable salt thereof. "

本発明の新規な化合物はＤＮＡポリメラーゼ阻害活性、癌細胞増殖抑制活性、ヒト白血病T細胞増殖抑制活性及びマクロファージ増殖抑制活性を有する。 The novel compounds of the present invention have DNA polymerase inhibitory activity, cancer cell growth inhibitory activity, human leukemia T cell growth inhibitory activity and macrophage growth inhibitory activity.

SF231、SF232、SF233、SF234、SF235の構造並びに炭素番号を示す構造式Structure of SF231, SF232, SF233, SF234, SF235 and structural formula showing carbon number SF231、SF232、SF233、SF234、SF235の¹H-¹H COSY並びにHMBC相関を示す構造式Structural formula showing ¹ H- ¹ H COZY and HMBC correlation of SF231, SF232, SF233, SF234, SF235 SF231の¹H-NMR及び¹³C-NMRデータ ¹ H-NMR and ¹³ C-NMR data of SF231 SF232の¹H-NMR及び¹³C-NMRデータ ¹ H-NMR and ¹³ C-NMR data of SF232 SF233の¹H-NMR及び¹³C-NMRデータ ¹ H-NMR and ¹³ C-NMR data of SF233 SF234の¹H-NMR及び¹³C-NMRデータ ¹ H-NMR and ¹³ C-NMR data of SF234 SF235の¹H-NMR及び¹³C-NMRデータ ¹ H-NMR and ¹³ C-NMR data of SF235 ＤＮＡポリメラーゼα、γ阻害活性の測定結果Measurement results of DNA polymerase α, γ inhibitory activity ＤＮＡポリメラーゼκ、λ阻害活性の測定結果Measurement results of DNA polymerase κ and λ inhibitory activities 培養細胞増殖抑制活性（５０％増殖抑制濃度）の測定結果Measurement results of cultured cell growth inhibitory activity (50% growth inhibitory concentration)

（本発明の化合物）
本発明の化合物は、下記の一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物又はその薬学的に許容し得る塩に関する。 (Compound of the present invention)
The compound of the present invention relates to a compound represented by the following general formula (I) or (II) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

式中、R_１は、以下のいずれか１から選択され、 Wherein R ₁ is selected from any _one of the following:

さらに、式中、R_２は、水素又はヒドロキシ基である。 Further, in the formula, R ₂ is hydrogen or a hydroxy group.

一般式（Ｉ）で表される化合物において、好ましくは、以下の化合物（ＩＩＩ）〜（ＶＩ）である。 In the compound represented by the general formula (I), the following compounds (III) to (VI) are preferable.

（薬学的に許容し得る塩）
本発明における「その薬学的に許容し得る塩」の塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩；アンモニウム塩；１級、２級又は３級アミンの塩；４級アンモニウム塩；アミノ酸塩などが挙げられる。なお、一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物又はその薬学的に許容し得る塩は、水等の溶媒和物であってもよい。 (Pharmaceutically acceptable salt)
Examples of the salt of “pharmaceutically acceptable salt thereof” in the present invention include alkali metal salts such as sodium salt and potassium salt; ammonium salt; primary, secondary or tertiary amine salt; quaternary ammonium salt; amino acid Examples include salt. The compound represented by the general formula (I) or (II) or a pharmaceutically acceptable salt thereof may be a solvate such as water.

（本発明の化合物の単離・精製）
一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物において、化合物（ＩＩ）〜（ＶＩ）である化合物は、コケ（京都府京都市嵐山）に寄生するカビを培養して得られる培養物から単離・精製することができる。具体的には、該カビをＰＤＢ培地（ポテトデキストロース液体培地）で静置培養し、培養液から菌体を除去して得られる濾液を溶媒で抽出する。
抽出溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類、１，３−ブチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール等のグリコール類、酢酸エチル、酢酸ブチル等のエステル類、エチルエーテル、プロピルエーテル、イソプロピルエーテル，テトラヒドロフラン、ジオキサン等のエーテル類、塩化メチレン、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素等の極性有機溶媒；ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の無極性有機溶媒等を用いることができるこれらの溶媒を単独で又は２種以上の混合溶媒として用いることもできる。 (Isolation and purification of the compound of the present invention)
In the compound represented by the general formula (I) or (II), the compounds (II) to (VI) are obtained from a culture obtained by culturing mold that infests moss (Arashiyama, Kyoto, Kyoto). It can be isolated and purified. Specifically, the mold is statically cultured in a PDB medium (potato dextrose liquid medium), and the filtrate obtained by removing the cells from the culture is extracted with a solvent.
Examples of the extraction solvent include alcohols such as methanol, ethanol, propanol and butanol, glycols such as 1,3-butylene glycol, glycerin and propylene glycol, esters such as ethyl acetate and butyl acetate, ethyl ether and propyl ether. Polar organic solvents such as ethers such as isopropyl ether, tetrahydrofuran and dioxane, halogenated hydrocarbons such as methylene chloride and chloroform; non-polar organic solvents such as hexane, cyclohexane and petroleum ether, etc. It can also be used alone or as a mixed solvent of two or more.

上記方法によって抽出物を得た後、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、クロロホルム、酢酸エチル、トルエン、ヘキサン、ベンゼン等の有機溶媒を１種又は２種以上用いた溶媒分画操作によって、得られた抽出液から活性画分を分取することができる。
更に、アルミナカラムクロマトグラフィーやシリカゲルクロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等の適当な分離精製手段を１種若しくは２種以上組み合わせて精製することもできる。 After obtaining the extract by the above method, it was obtained by solvent fractionation operation using one or more organic solvents such as methanol, ethanol, propanol, butanol, chloroform, ethyl acetate, toluene, hexane, benzene and the like. The active fraction can be separated from the extract.
Furthermore, it can also be purified by combining one or more suitable separation and purification means such as alumina column chromatography, silica gel chromatography, gel filtration chromatography, ion exchange chromatography, hydrophobic chromatography, and high performance liquid chromatography. .

（本発明の化合物の用途）
本発明の一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物は、ＤＮＡポリメラーゼ阻害活性、癌細胞増殖抑制活性、ヒト白血病T細胞増殖抑制活性及びマクロファージ増殖抑制活性を有することから、医薬品への利用が可能である。
例えば、ＤＮＡポリメラーゼ阻害剤、抗癌剤、抗炎症剤、白血病治療剤等の医薬組成物として有用である。
加えて、本発明の化合物は、さらに、医薬品開発過程におけるリード化合物として利用することもできる。
なお、ヒトと他の哺乳類のＤＮＡポリメラーゼの構造は殆ど同じであるため、本発明のＤＮＡポリメラーゼ阻害剤は、ヒト以外の哺乳類由来のＤＮＡポリメラーゼ阻害剤としても利用可能である。 (Use of the compound of the present invention)
The compound represented by the general formula (I) or (II) of the present invention has a DNA polymerase inhibitory activity, a cancer cell proliferation inhibitory activity, a human leukemia T cell proliferation inhibitory activity and a macrophage proliferation inhibitory activity. It can be used.
For example, it is useful as a pharmaceutical composition for DNA polymerase inhibitors, anticancer agents, anti-inflammatory agents, leukemia therapeutic agents and the like.
In addition, the compound of the present invention can also be used as a lead compound in the pharmaceutical development process.
Since the DNA polymerase structures of humans and other mammals are almost the same, the DNA polymerase inhibitor of the present invention can also be used as a DNA polymerase inhibitor derived from mammals other than humans.

（本発明の化合物を含む医薬組成物）
本発明の化合物を有効成分とする医薬組成物（ＤＮＡポリメラーゼ阻害剤、抗癌剤、抗炎症剤、白血病治療剤等）は、単独又は自体公知の担体と共に医薬組成物となし、動物及びヒトに投与することができる。
医薬組成物の剤形としては特に制限されるものではなく必要に応じて適宜選択すればよいが、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤等の経口剤、注射剤、坐剤等の非経口剤が挙げられ、好適には非経口剤を挙げることができる。 (Pharmaceutical composition comprising the compound of the present invention)
A pharmaceutical composition (DNA polymerase inhibitor, anticancer agent, anti-inflammatory agent, leukemia therapeutic agent, etc.) containing the compound of the present invention as an active ingredient is used alone or in combination with a carrier known per se, and is administered to animals and humans. be able to.
The dosage form of the pharmaceutical composition is not particularly limited and may be appropriately selected as necessary. For example, tablets, capsules, granules, fine granules, powders and other oral preparations, injections, and suppositories Parenteral preparations such as agents, and the like, and preferably include parenteral preparations.

非経口剤の医薬組成物の場合には、患者の年齢、体重、疾患の程度により異なるが、通常、成人で本発明の化合物の重量として１日あたり１〜２００ｍｇの静注、点滴静注、皮下注射、筋肉注射が適当である。この非経口投与剤は常法に従って製造され、希釈剤として一般に注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、注射用植物油、ゴマ油、ラッカセイ油、大豆油、トウモロコシ油、プロピレングリコール等を用いることができる。 In the case of a parenteral pharmaceutical composition, it varies depending on the patient's age, body weight, and the degree of disease, but is usually 1 to 200 mg / day, intravenous drip, Subcutaneous injection and intramuscular injection are appropriate. This parenteral preparation is produced according to a conventional method, and generally used as a diluent is distilled water for injection, physiological saline, aqueous glucose solution, vegetable oil for injection, sesame oil, peanut oil, soybean oil, corn oil, propylene glycol, etc. it can.

（本発明の化合物を含む食用組成物）
本発明の化合物は、医薬品への利用以外に、食品への利用が可能である。例えば、飲食品へ添加・配合することにより抗癌効果、抗発癌効果、又は抗炎症効果をもった食用組成物（例えば、健康食品等）として利用することも可能である。 (Edible composition containing the compound of the present invention)
The compound of the present invention can be used for food as well as for pharmaceuticals. For example, it can also be used as an edible composition (for example, a health food) having an anticancer effect, an anticarcinogenic effect, or an anti-inflammatory effect by adding and blending into a food or drink.

（本発明の化合物の特性）
本発明者の一人は、ＤＮＡポリメラーゼ阻害活性、抗炎症活性及び抗発癌活性の間には互いに関連性が認められることを確認している。
したがって、本発明の化合物をリードとして、ＤＮＡポリメラーゼに対する阻害活性を調べることにより、抗癌剤又は抗炎症剤の候補化合物の効率的なスクリーニングができる。本発明は、このようなスクリーニング方法も含まれる。なお、本スクリーニング方法において、ＤＮＡポリメラーゼに対する阻害活性を調べる方法は自体公知の方法を採用することができる。 (Characteristics of the compound of the present invention)
One of the present inventors has confirmed that there is a correlation between DNA polymerase inhibitory activity, anti-inflammatory activity and anti-carcinogenic activity.
Therefore, by examining the inhibitory activity against DNA polymerase using the compound of the present invention as a lead, it is possible to efficiently screen for candidate compounds for anticancer agents or anti-inflammatory agents. The present invention includes such a screening method. In this screening method, a method known per se can be adopted as a method for examining the inhibitory activity against DNA polymerase.

以下、実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明はこれら実施例により何ら限定されるものではない。 EXAMPLES Hereinafter, although an Example is given and this invention is demonstrated, this invention is not limited at all by these Examples.

（SF231、SF232、SF233、SF234、SF235の単離、精製及び構造決定）
コケに寄生するカビよりSF231、SF232、SF233、SF234、SF235を単離、精製した。そして、SF231、SF232、SF233、SF234、SF235の構造を決定した。詳細は、以下の通りである。 (Isolation, purification and structure determination of SF231, SF232, SF233, SF234, SF235)
SF231, SF232, SF233, SF234, and SF235 were isolated and purified from molds that infested moss. Then, the structures of SF231, SF232, SF233, SF234, and SF235 were determined. Details are as follows.

（１）菌株の単離
京都府京都市嵐山にて採取したコケをPDA培地（ポテトデキストロース寒天培地）で培養し、菌株を単離した。 (1) Isolation of strains Moss collected in Arashiyama, Kyoto, Kyoto, was cultured in PDA medium (potato dextrose agar medium) to isolate the strain.

（２）SF231、SF232、SF233、SF234、SF235の精製
上記（１）で単離した菌株を1 L×8のPDB培地（ポテトデキストロース液体培地）を入れた8個の2 L三角フラスコで14日間、暗所で静置培養した。本菌株を培養した培養液はガーゼを用いて菌体を除去した。得られた濾液を塩化メチレン（CH₂Cl₂）で抽出し、ロータリーエバポレーターを用いて溶媒を留去し、粗抽出物（2.12 g）を得た。この粗抽出物はシリカゲルを担体とし、展開溶媒としてクロロホルム-メタノール（100: 0→10: 1）を用いたカラムクロマトグラフィーによって4つのフラクション（フラクション1〜4）に分画した。
6つのフラクションの内のフラクション1を、シリカゲルを担体とし、展開溶媒としてトルエン-酢酸エチル（10: 1→4: 1）を用いたカラムクロマトグラフィーによって、2つのフラクション（フラクション1-1〜1-2）に分画した。さらに、フラクション1-1を、シリカゲルを担体とし、展開溶媒としてトルエン-酢酸エチル（10: 1）を用いたカラムクロマトグラフィーによってさらに精製し、薄茶色の粉末としてSF231を得た。
6つのフラクションの内のフラクション2を、シリカゲルを担体とし、展開溶媒としてトルエン-酢酸エチル（8: 1→3: 1）を用いたカラムクロマトグラフィーによって、3つのフラクション（フラクション2-1〜2-3）に分画した。
フラクション2-3から油状物としてSF233を得た。
フラクション2-1は、シリカゲルを担体とし、展開溶媒としてトルエン-酢酸エチル（8: 1）を用いたカラムクロマトグラフィーによってさらに精製し、薄茶色の粉末としてSF234を得た。
6つのフラクションの内のフラクション3を、シリカゲルを担体とし、展開溶媒としてトルエン-酢酸エチル（3: 1→2: 1）を用いたカラムクロマトグラフィーによって、2つのフラクション（フラクション3-1〜3-2）に分画した。
フラクション3-1から薄茶色の粉末としてSF232を得た。
フラクション3-2は、オクタデシルシリル化シリカゲル（ODS）を担体とし、展開溶媒としてメタノール-水（1: 9→3: 7）を用いたカラムクロマトグラフィーによってさらに精製し、茶色の粉末としてSF235を得た。 (2) Purification of SF231, SF232, SF233, SF234, SF235 The strain isolated in (1) above was stored in 8 2 L Erlenmeyer flasks containing 1 L × 8 PDB medium (potato dextrose liquid medium) for 14 days. Then, static culture was performed in the dark. From the culture solution in which this strain was cultured, the cells were removed using gauze. The obtained filtrate was extracted with methylene chloride (CH ₂ Cl ₂ ), and the solvent was distilled off using a rotary evaporator to obtain a crude extract (2.12 g). This crude extract was fractionated into four fractions (fractions 1 to 4) by column chromatography using silica gel as a carrier and chloroform-methanol (100: 0 → 10: 1) as a developing solvent.
Fraction 1 of the 6 fractions was purified by column chromatography using silica gel as a carrier and toluene-ethyl acetate (10: 1 → 4: 1) as a developing solvent. Fractionated into 2). Further, the fraction 1-1 was further purified by column chromatography using silica gel as a carrier and toluene-ethyl acetate (10: 1) as a developing solvent to obtain SF231 as a light brown powder.
Fraction 2 of the 6 fractions was analyzed by column chromatography using silica gel as a carrier and toluene-ethyl acetate (8: 1 → 3: 1) as a developing solvent. Fractionated into 3).
From fraction 2-3, SF233 was obtained as an oil.
Fraction 2-1 was further purified by column chromatography using silica gel as a carrier and toluene-ethyl acetate (8: 1) as a developing solvent to obtain SF234 as a light brown powder.
Fraction 3 of the 6 fractions was purified by column chromatography using silica gel as the carrier and toluene-ethyl acetate (3: 1 → 2: 1) as the developing solvent. Fractionated into 2).
SF232 was obtained as a light brown powder from fraction 3-1.
Fraction 3-2 was further purified by column chromatography using octadecylsilylated silica gel (ODS) as a carrier and methanol-water (1: 9 → 3: 7) as a developing solvent to obtain SF235 as a brown powder. It was.

（３）SF231、SF232、SF233、SF234、SF235の構造決定
化合物SF231、SF232、SF233、SF234、SF235は、HR-ESIMS、¹H-NMR、¹³C-NMR、¹H-¹HCOSY、HMBC及びHMQCによって構造決定した。
図１には、SF231、SF232、SF233、SF234、SF235の構造並びに炭素番号を示す構造式を示した。
図２には、SF231、SF232、SF233、SF234、SF235の¹H-¹H COSY 及びHMBC相関を示した。
図３には、CDCl₃で測定したSF231の¹H-NMR、¹³C-NMRデータを示した。
図４には、CDCl₃で測定したSF232の¹H-NMR、¹³C-NMRデータを示した。
図５には、CDCl₃で測定したSF233の¹H-NMR、¹³C-NMRデータを示した。
図６には、CDCl₃で測定したSF234の¹H-NMR、¹³C-NMRデータを示した。
図７には、CDCl₃で測定したSF235の¹H-NMR、¹³C-NMRデータを示した。 (3) Structure determination of SF231, SF232, SF233, SF234, SF235 Compounds SF231, SF232, SF233, SF234, SF235 are HR-ESIMS, ¹ H-NMR, ¹³ C-NMR, ¹ H- ¹ HCOSY, HMBC, and HMQC. The structure was determined by
FIG. 1 shows the structures of SF231, SF232, SF233, SF234, and SF235 and the structural formulas indicating the carbon numbers.
FIG. 2 shows the ¹ H- ¹ H COZY and HMBC correlations of SF231, SF232, SF233, SF234, and SF235.
FIG. 3 shows ¹ H-NMR and ¹³ C-NMR data of SF231 measured with CDCl ₃ .
FIG. 4 shows SF232 ¹ H-NMR and ¹³ C-NMR data measured with CDCl ₃ .
FIG. 5 shows ¹ H-NMR and ¹³ C-NMR data of SF233 measured with CDCl ₃ .
FIG. 6 shows ¹ H-NMR and ¹³ C-NMR data of SF234 measured with CDCl ₃ .
FIG. 7 shows ¹ H-NMR and ¹³ C-NMR data of SF235 measured with CDCl ₃ .

（SF231）
SF231の諸性質及びスペクトルデータ（NMRデータは除く）は次の通りである。
薄茶色固体状; [α]_D ²⁵+2.9 (c0.27, MeOH); HR ESIMS m/z 277.1400 [M+Na]⁺（calcd for 277.1410）
SF231の構造決定の詳細の解析は、以下の通りである。
SF231はHR-ESIMSから分子式C₁₄H₂₂O₄を持つことが示された。H-4（δ 6.57）からC-2（δ 130.4）及びC-6（δ150.1）へのHMBC相関、及びH-5（δ 6.59）からC-1（δ 125.0）及びC-3（δ 150.0）へのHMBC相関より、SF231は部分構造としてヒドロキノンを有していることが示唆された。H-7（δ 4.68、δ 4.71）からC-1、C-2及びC-6へのHMBC相関より、ヒドロキシメチル基がヒドロキノンの1位に結合することを決定した。1’位から7’位の脂肪鎖は、主に¹H-¹H COSY実験において測定された¹H-¹H相関によって決定された。C-1’ （δ 72.0）の化学シフト値から、水酸基に隣接することが示唆された。H-2’からC-2へのHMBC相関より、この脂肪鎖はヒドロキノンの2位に結合していると決定された。
以上から、SF231を2-(1-ヒドロキシヘプチル)-3-(ヒドロキシメチル)ベンゼン-1,4-ジオール｛2-(1-hydroxyheptyl)-3-(hydroxymethyl)benzene-1,4-diol｝であると決定した。 (SF231)
Various properties and spectrum data (excluding NMR data) of SF231 are as follows.
Light brown solid; [α] _D ²⁵ +2.9 (c0.27, MeOH); HR ESIMS m / z 277.1400 [M + Na] ⁺ (calcd for 277.1410)
The detailed analysis of the structure determination of SF231 is as follows.
SF231 was shown by HR-ESIMS to have the molecular formula C ₁₄ H ₂₂ O ₄ . HMBC correlation from H-4 (δ 6.57) to C-2 (δ 130.4) and C-6 (δ150.1), and H-5 (δ 6.59) to C-1 (δ 125.0) and C-3 ( From the HMBC correlation to δ 150.0), it was suggested that SF231 has hydroquinone as a partial structure. From the HMBC correlation from H-7 (δ 4.68, δ 4.71) to C-1, C-2 and C-6, it was determined that the hydroxymethyl group was bonded to the 1-position of hydroquinone. 1 fatty chain of 'from position 7' position was determined primarily by the ¹ H- ¹ H correlation measured at ¹ H- ¹ H COZY experiments. The chemical shift value of C-1 ′ (δ 72.0) suggested that it is adjacent to the hydroxyl group. From the HMBC correlation from H-2 'to C-2, this fatty chain was determined to be bound to the 2-position of hydroquinone.
From the above, SF231 is 2- (1-hydroxyheptyl) -3- (hydroxymethyl) benzene-1,4-diol {2- (1-hydroxyheptyl) -3- (hydroxymethyl) benzene-1,4-diol} It was decided that there was.

（SF232）
SF232の諸性質及びスペクトルデータ（NMRデータは除く）は次の通りである。
薄茶色固体状; [α]_D ²⁵+0.5 (c 0.76, CHCl₃); HRESIMS m/z 261.1460 [M+Na]⁺（calcd for 261.1461）
SF232の構造決定の詳細の解析は、以下の通りである。
SF232はHR-ESIMSから分子式C₁₄H₂₂O₃を持つことが示された。¹H及び¹³C-NMRスペクトラより、SF232はSF231と類似した構造を有しており、C-3においてのみ異なっていることが示唆された。SF231においてC-3（δ 150.0）の¹³Cシグナルが、SF232ではC-3（δ 118.1）に置換されていた。さらに、SF232においてH-3（δ 6.89）が観測された。このことは、HR-ESIMSの結果とも一致し、3位の水酸基が水素で置換されていることを示唆している。
以上から、SF232を3-(1-ヒドロキシヘプチル)-2-(ヒドロキシメチル)フェノール｛3-(1-hydroxyheptyl)-2-(hydroxymethyl)phenol｝であると決定した。 (SF232)
The properties and spectral data (excluding NMR data) of SF232 are as follows.
Light brown solid; [α] _D ²⁵ +0.5 (c 0.76, CHCl ₃ ); HRESIMS m / z 261.1460 [M + Na] ⁺ (calcd for 261.1461)
The detailed analysis of the structure determination of SF232 is as follows.
SF232 was shown by HR-ESIMS to have the molecular formula C ₁₄ H ₂₂ O ₃ . ^{From 1} H and ¹³ C-NMR spectra, it was suggested that SF232 has a similar structure to SF231 and is different only in C-3. In SF231, the ¹³ C signal of C-3 (δ 150.0) was replaced with C-3 (δ 118.1) in SF232. Furthermore, H-3 (δ 6.89) was observed in SF232. This agrees with the result of HR-ESIMS and suggests that the hydroxyl group at the 3-position is substituted with hydrogen.
From the above, SF232 was determined to be 3- (1-hydroxyheptyl) -2- (hydroxymethyl) phenol {3- (1-hydroxyheptyl) -2- (hydroxymethyl) phenol}.

（SF233）
SF233の諸性質及びスペクトルデータ（NMRデータは除く）は次の通りである。
油状; HR ESIMS m/z 259.1295 [M+Na]⁺（calcd for 259.1304）
SF233の構造決定の詳細の解析は、以下の通りである。
SF233はHR-ESIMSから分子式C₁₄H₂₀O₃を持つことが示された。¹H及び¹³C-NMRスペクトラより、SF233はSF231と類似した構造を有しており、脂肪鎖のH-1’とH-2’においてのみ異なっていることが示唆された。SF231においてH-1’（δ 5.15）とH-2’（δ 1.71）の¹Hシグナルが、SF233ではH-1’（δ 6.45）とH-2’（δ 6.06）に置換されていた。このことは、HR-ESIMSの結果とも一致し、SF233では1’位と2’位で二重結合を形成していることを示唆している。また、結合定数（J_1’-2’=16.0 Hz）より立体をEと決定した。
以上から、SF233を(E)-2-(ヘプタ-1-エン-1-イル)-3-(ヒドロキシメチル)ベンゼン-1,4-ジオール｛(E)-2-(hept-1-en-1-yl)-3-(hydroxymethyl)benzene-1,4-diol｝であると決定した。 (SF233)
Various properties and spectrum data (excluding NMR data) of SF233 are as follows.
Oily; HR ESIMS m / z 259.1295 [M + Na] ⁺ (calcd for 259.1304)
The details of the structure determination of SF233 are as follows.
SF233 was shown by HR-ESIMS to have the molecular formula C ₁₄ H ₂₀ O ₃ . ^{From 1} H and ¹³ C-NMR spectra, it was suggested that SF233 has a structure similar to SF231 and is different only in the fatty chains H-1 ′ and H-2 ′. ¹ H signal H-1 in SF231 '(δ 5.15) and H-2' (δ 1.71) was substituted in SF233 in H-1 '([delta] 6.45) and H-2' (δ 6.06) . This agrees with the results of HR-ESIMS, suggesting that SF233 forms a double bond at the 1 'and 2' positions. The solid was determined as E from the binding constant (J _{1′-2 ′} = 16.0 Hz).
From the above, SF233 was converted to (E) -2- (hept-1-en-1-yl) -3- (hydroxymethyl) benzene-1,4-diol {(E) -2- (hept-1-en- 1-yl) -3- (hydroxymethyl) benzene-1,4-diol}.

（SF234）
SF234の諸性質及びスペクトルデータ（NMRデータは除く）は次の通りである。
薄茶色固体状; HRESIMS m/z 261.1464 [M+Na]⁺（calcd for 261.1461）
SF234の構造決定の詳細の解析は、以下の通りである。
SF234はHR-ESIMSから分子式C₁₄H₂₂O₃を持つことが示された。¹H及び¹³C-NMRスペクトラより、SF234はSF231と類似した構造を有しており、脂肪鎖のC-1’においてのみ異なっていることが示唆された。SF231においてH-1’（δ 5.15）の¹Hシグナルが、SF234ではH-1’（δ 2.66）に置換されていた。このことは、HR-ESIMSの結果とも一致し、1’位の水酸基が水素に置換されていることを示唆している。
以上から、SF234を2-ヘプチル-3-(ヒドロキシメチル)ベンゼン-1,4-ジオール｛2-heptyl-3-(hydroxymethyl)benzene-1,4-diol｝であると決定した。 (SF234)
Various properties and spectrum data (excluding NMR data) of SF234 are as follows.
Light brown solid; HRESIMS m / z 261.1464 [M + Na] ⁺ (calcd for 261.1461)
The detailed analysis of the structure determination of SF234 is as follows.
SF234 was shown by HR-ESIMS to have the molecular formula C ₁₄ H ₂₂ O ₃ . ^{From 1} H and ¹³ C-NMR spectra, it was suggested that SF234 had a similar structure to SF231 and differed only in C-1 ′ of the fatty chain. In SF231, the ¹ H signal of H-1 ′ (δ 5.15) was replaced with H-1 ′ (δ 2.66) in SF234. This is in agreement with the result of HR-ESIMS and suggests that the hydroxyl group at the 1 ′ position is substituted with hydrogen.
From the above, SF234 was determined to be 2-heptyl-3- (hydroxymethyl) benzene-1,4-diol {2-heptyl-3- (hydroxymethyl) benzene-1,4-diol}.

（SF235）
SF235の諸性質及びスペクトルデータ（NMRデータは除く）は次の通りである。
油状; [α]_D ²⁰-83.9 (c0.29, CHCl₃); HR ESIMS m/z 277.1416 [M+Na]⁺（calcd for 277.1410）
SF235の構造決定の詳細の解析は、以下の通りである。
SF235はHR-ESIMSから分子式C₁₄H₂₂O₄を持つことが示された。C-6 （δ 199.0）の化学シフト値から、ケトン基の存在が示唆された。H-7（δ 4.38及びδ 4.44）からC-1（δ 133.7）、C-2（δ 152.1）及びC-6へのHMBC相関より、ヒドロキシメチル基がエノン構造に隣接していることが示唆された。1’位から7’位の脂肪鎖は、主に¹H-¹H COSY実験において測定された¹H-¹H相関によって決定された。C-1’（δ 127.9）及びC-2’（δ 143.2）の化学シフト値よりこれらは二重結合を形成し、結合定数（J_1’-2’=15.6Hz）より立体をEと決定した。H-1’からC-2及びC-3へのHMBC相関、及びH-2’からC-2へのHMBC相関より、1’位から7’位の脂肪鎖はエノン構造の2位で結合することを決定した。3位から5位の部分構造は、主に¹H-¹H COSY実験において測定された¹H-¹H相関によって決定された。C-3（δ 68.6）及びC-4（δ 71.4）の化学シフト値より、3位と4位は水酸基に隣接することが示唆された。H-5からC-6へのHMBC相関より、5位はケトンに隣接していることが示唆された。
以上から、SF235を(E)-3-(ヘプタ-1-エン-1-イル)-4,5-ジヒドロキシ-2-(ヒドロキシメチル)シクロヘキサ-2-エノン｛(E)-3-(hept-1-en-1-yl)-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)cyclohex-2-enone｝であると決定した。 (SF235)
The properties and spectral data (excluding NMR data) of SF235 are as follows.
Oily; [α] _D ²⁰ -83.9 (c0.29, CHCl ₃ ); HR ESIMS m / z 277.1416 [M + Na] ⁺ (calcd for 277.1410)
The detailed analysis of the structure determination of SF235 is as follows.
SF235 was shown by HR-ESIMS to have the molecular formula C ₁₄ H ₂₂ O ₄ . The chemical shift value of C-6 (δ 199.0) suggested the presence of a ketone group. HMBC correlation from H-7 (δ 4.38 and δ 4.44) to C-1 (δ 133.7), C-2 (δ 152.1) and C-6 suggests that the hydroxymethyl group is adjacent to the enone structure. It was done. 1 fatty chain of 'from position 7' position was determined primarily by the ¹ H- ¹ H correlation measured at ¹ H- ¹ H COZY experiments. From the chemical shift values of C-1 '(δ 127.9) and C-2' (δ 143.2), they form a double bond, and the solid is determined as E from the binding constant (J _{1'-2 '} = 15.6Hz). did. From the HMBC correlation from H-1 'to C-2 and C-3, and from the HMBC correlation from H-2' to C-2, the fatty chain from the 1'-position to the 7'-position is bound at the 2-position of the enone structure. Decided to do. Partial structure at the 5 position 3 was determined primarily by the measured ¹ H- ¹ H correlation in ¹ H- ¹ H COZY experiments. The chemical shift values of C-3 (δ 68.6) and C-4 (δ 71.4) suggest that the 3rd and 4th positions are adjacent to the hydroxyl group. The HMBC correlation from H-5 to C-6 suggested that the 5th position is adjacent to the ketone.
From the above, SF235 is converted into (E) -3- (hept-1-en-1-yl) -4,5-dihydroxy-2- (hydroxymethyl) cyclohex-2-enone {(E) -3- (hept- 1-en-1-yl) -4,5-dihydroxy-2- (hydroxymethyl) cyclohex-2-enone}.

（ＤＮＡポリメラーゼ阻害活性の確認）
上記実施例１で得られたSF231〜SF235のＤＮＡポリメラーゼ群に対する阻害活性を以下の方法で測定した。なお、哺乳類のポリメラーゼ（ｐｏｌ）分子種は１５種類が存在しており、アミノ酸配列の相同性や機能の類似性からＡ−, Ｂ−, Ｘ−, Ｙ−の４つのファミリーに分類されている。各ポリメラーゼファミリーを代表してＤＮＡ複製型の子牛ｐｏｌα（Ｂ−ファミリーｐｏｌ）、ミトコンドリアＤＮＡ合成を担うヒトｐｏｌγ（Ａ−ファミリーｐｏｌ）、ＤＮＡ修復型のヒトｐｏｌκ（Ｙ−ファミリーｐｏｌ）、ＤＮＡ修復・組換え型のヒトｐｏｌλ（Ｘ−ファミリーｐｏｌ）を用いた。 (Confirmation of DNA polymerase inhibitory activity)
The inhibitory activity of SF231 to SF235 obtained in Example 1 above on the DNA polymerase group was measured by the following method. In addition, there are 15 types of mammalian polymerase (pol) molecular species, which are classified into four families, A-, B-, X-, and Y-, based on amino acid sequence homology and functional similarity. . Representing each polymerase family, DNA replication type calf polα (B-family pol), human polγ responsible for mitochondrial DNA synthesis (A-family pol), DNA repair type human polκ (Y-family pol), DNA repair Recombinant human pol λ (X-family pol) was used.

（ＤＮＡポリメラーゼ阻害活性の測定方法）
ＤＮＡポリメラーゼとして、哺乳類由来のＤＮＡポリメラーゼα、γ、κ、λについて試験を行った。ＤＮＡポリメラーゼαは、子牛の胸腺から常法により抽出し、抗体カラムで精製した標品を用いた。ＤＮＡポリメラーゼγ、κ、λは、ヒト由来の該当遺伝子を、通常の遺伝子組み換え法により大腸菌に組み込み、生産させた標品を用いた。 (Measurement method of DNA polymerase inhibitory activity)
As DNA polymerases, tests were performed on mammalian DNA polymerases α, γ, κ, and λ. For DNA polymerase α, a sample extracted from calf thymus by a conventional method and purified with an antibody column was used. For DNA polymerases γ, κ, and λ, samples prepared by incorporating human-derived genes into Escherichia coli by an ordinary genetic recombination method were used.

これらのＤＮＡポリメラーゼに対するSF231〜SF235の阻害活性の測定には、一般的なＤＮＡポリメラーゼ反応系（日本生化学会編、新生化学実験講座２、核酸IV、東京化学同人、63〜66頁）を用いた。すなわち、放射性同位元素で標識した[³Ｈ]-ＴＴＰを含む系においてＤＮＡ合成反応を行い、鋳型ＤＮＡ [ｐｏｌｙ(ｄＡ)/ｏｌｉｇｏ(ｄＴ)₁₈]へ重合された放射比活性を生成物（合成ＤＮＡ鎖）量の指標とするものである。 In order to measure the inhibitory activity of SF231 to SF235 against these DNA polymerases, a general DNA polymerase reaction system (edited by the Japanese Biochemical Society, Shinsei Chemistry Laboratory 2, Nucleic Acid IV, Tokyo Kagaku Dojin, pages 63 to 66) was used. . That is, a DNA synthesis reaction is performed in a system containing [ ³ H] -TTP labeled with a radioisotope, and a specific activity of radioactivity polymerized into a template DNA [poly (dA) / oligo (dT) ₁₈ ] is produced (synthesis). DNA strand) as an index of the amount.

阻害率は、(a)コントロールでの合成ＤＮＡ量、(b) 被検物質存在下での合成ＤＮＡ量について、
(a - b) / a × 100 = 阻害率（％）
として評価した。なお、得られたデータは３回の測定値の平均値である。 The inhibition rate is (a) the amount of synthetic DNA in the control, and (b) the amount of synthetic DNA in the presence of the test substance.
(a-b) / a × 100 = inhibition rate (%)
As evaluated. The obtained data is an average value of three measurements.

（ＤＮＡポリメラーゼ阻害活性の測定結果）
ＤＮＡポリメラーゼ阻害活性の測定結果を図８及び図９に示す。図８及び図９の結果から明らかなように、１００μＭのSF231はＤＮＡポリメラーゼα、κ、λのＤＮＡ合成活性を阻害した。１００μＭのSF233はＤＮＡポリメラーゼα、λのＤＮＡ合成活性を阻害した。１００μＭのSF234はＤＮＡポリメラーゼαのＤＮＡ合成活性を阻害した。
１００μＭで５０％以上の阻害活性を有する化合物はＤＮＡポリメラーゼ阻害剤として有効であるので、SF230はＤＮＡポリメラーゼ阻害活性があることを確認した。
以上により、本発明の化合物がＤＮＡポリメラーゼ阻害活性を持つことを確認した。 (Measurement result of DNA polymerase inhibitory activity)
The measurement results of the DNA polymerase inhibitory activity are shown in FIGS. As is apparent from the results of FIGS. 8 and 9, 100 μM SF231 inhibited the DNA synthesis activities of DNA polymerases α, κ, and λ. 100 μM SF233 inhibited the DNA synthesis activity of DNA polymerases α and λ. 100 μM SF234 inhibited the DNA synthesis activity of DNA polymerase α.
Since a compound having an inhibitory activity of 50% or more at 100 μM is effective as a DNA polymerase inhibitor, it was confirmed that SF230 has a DNA polymerase inhibitory activity.
From the above, it was confirmed that the compound of the present invention has a DNA polymerase inhibitory activity.

ＤＮＡポリメラーゼは、癌細胞のような細胞分裂が盛んな細胞や組織に対して酵素活性が高い。従って、本発明の化合物は抗癌剤として利用できる。 DNA polymerase has a high enzyme activity against cells and tissues with high cell division such as cancer cells. Therefore, the compound of the present invention can be used as an anticancer agent.

（培養細胞増殖抑制活性の確認）
上記実施例１で得られたSF231、SF232、SF233、SF234、SF235の培養細胞増殖抑制活性｛５０％増殖抑制濃度：LD₅₀値（μM）｝を以下の方法で測定した。 (Confirmation of cultured cell growth inhibitory activity)
The cultured cell growth inhibitory activity {50% growth inhibitory concentration: LD ₅₀ value (μM)} of SF231, SF232, SF233, SF234, and SF235 obtained in Example 1 was measured by the following method.

（培養細胞増殖抑制活性の測定）
本実施例に用いた細胞は、ヒト子宮癌由来ＨｅＬａ細胞、ヒト肺癌由来ＭＣＦ-７細胞、ヒト白血病Ｔ細胞（Ｊｕｒｋａｔｃｅｌｌｓ）、ヒト急性リンパ芽球性白血病細胞（ＭＯＬＴ-４ｃｅｌｌｓ）、ヒト大腸癌由来ＨＣＴ１１６細胞、マウスマクロファージ（ＲＡＷ２６４．７ｃｅｌｌｓ）である。
培地としてはＲＰＭＩ１６４０培地｛日水製薬(株)製｝に、牛胎児血清１０％（ｖ/ｖ）を添加したものを用いた。培養は、５％ＣＯ₂インキュベーターにて３７℃で行った。 (Measurement of cultured cell growth inhibitory activity)
The cells used in this example were human uterine cancer-derived HeLa cells, human lung cancer-derived MCF-7 cells, human leukemia T cells (Jurkat cells), human acute lymphoblastic leukemia cells (MOLT-4 cells), human large intestine. Cancer-derived HCT116 cells, mouse macrophages (RAW264.7 cells).
As the medium, RPMI1640 medium (manufactured by Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.) supplemented with 10% (v / v) fetal calf serum was used. The culture was performed at 37 ° C. in a 5% CO ₂ incubator.

上記に示した培地に、各濃度の本発明の化合物を溶解した。ただし、本発明の化合物は水に難溶であるため、一度ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）に溶解し、そのものを上記の培地に溶かした。なお、培地中の培地内に存在するＤＭＳＯの終濃度は、すべての試験区で１％以下になっており、本実施例で用いた細胞の増殖の抑制にＤＭＳＯが関わる可能性は否定できる。培養は、９６穴マイクロプレートで行った。各ウェルに３．０×１０^５個の細胞を植え込み、１つの試験濃度に対し５ウェルずつ与えた。またポジティブコントロールとして、培地に１％のＤＭＳＯを含むものを用いた。 Each concentration of the compound of the present invention was dissolved in the medium shown above. However, since the compound of the present invention is hardly soluble in water, it was once dissolved in DMSO (dimethyl sulfoxide) and dissolved in the above medium. In addition, the final concentration of DMSO in the medium in the medium is 1% or less in all test sections, and the possibility that DMSO is involved in the suppression of cell growth used in this example can be denied. The culture was performed in a 96-well microplate. Each well was inoculated with 3.0 × 10 ⁵ cells, giving 5 wells for each test concentration. As a positive control, a medium containing 1% DMSO was used.

本発明の化合物添加後は、５％ＣＯ₂インキュベーター内、３７℃で２４時間培養し、各試験区の細胞生存率の判定を行った。生存率の判定は、文献［「Rapid Colorimetric Assay for Cellular Growth and Surviva1:Application to Proliferation and Cytotoxicity Assays」、Tim Mosmann, J.Immunol. Methods、６５巻、５５頁（１９８３）］に記載されているＭＴＴアッセイ法を用いた。即ち、上記２４時間後テトラゾリウム塩ＭＴＴを添加し、更に４時間培養した。生細胞による還元を経て生産するホルマザン量を生細胞に比例するとみなし、５７０ｎｍの光学密度（Ｏ.Ｄ.）で定量した。 After addition of the compound of the present invention, the cells were cultured for 24 hours at 37 ° C. in a 5% CO ₂ incubator, and the cell viability of each test group was determined. The determination of survival rate is described in the literature [“Rapid Colorimetric Assay for Cellular Growth and Surviva1: Application to Proliferation and Cytotoxicity Assays”, Tim Mosmann, J. Immunol. Methods, 65, 55 (1983)]. The assay method was used. That is, the tetrazolium salt MTT was added after 24 hours and further cultured for 4 hours. The amount of formazan produced through reduction by viable cells was considered to be proportional to viable cells, and was quantified with an optical density (OD) of 570 nm.

細胞生存率は次の式により算出した。
細胞生存率（％） = 試験区のＯ.Ｄ. ［５７０ｎｍ］／対照区のＯ.Ｄ. ［５７０ｎｍ］
得られた結果は５ウェルの平均である。 Cell viability was calculated by the following formula.
Cell viability (%) = OD of test group [570 nm] / OD of control group [570 nm]
The result obtained is an average of 5 wells.

（培養細胞増殖抑制活性の測定結果）
培養細胞増殖抑制活性の測定結果を図１０に示す。図１０の結果から明らかなように、SF231及びSF234は、ヒト子宮癌由来ＨｅＬａ細胞、ヒト肺癌由来ＭＣＦ-７細胞、ヒト白血病Ｔ細胞、ヒト急性リンパ芽球性白血病細胞、ヒト大腸癌由来ＨＣＴ１１６細胞、及びマウスマクロファージの増殖を抑制した。SF233は、ヒト子宮癌由来ＨｅＬａ細胞、ヒト白血病Ｔ細胞、ヒト急性リンパ芽球性白血病細胞、ヒト大腸癌由来ＨＣＴ１１６細胞、及びマウスマクロファージの増殖を抑制した。
以上により、本発明の化合物が癌細胞増殖抑制活性、ヒト白血病T細胞増殖抑制活性及びマクロファージ増殖抑制活性を持つことを確認した。これにより、本発明の化合物が抗癌剤、白血病治療剤及び抗炎症剤に利用できる。 (Measurement results of cell growth inhibitory activity)
The measurement results of the cultured cell growth inhibitory activity are shown in FIG. As is apparent from the results of FIG. 10, SF231 and SF234 are human uterine cancer-derived HeLa cells, human lung cancer-derived MCF-7 cells, human leukemia T cells, human acute lymphoblastic leukemia cells, human colon cancer-derived HCT116 cells. And the proliferation of mouse macrophages. SF233 suppressed the growth of human uterine cancer-derived HeLa cells, human leukemia T cells, human acute lymphoblastic leukemia cells, human colon cancer-derived HCT116 cells, and mouse macrophages.
From the above, it was confirmed that the compound of the present invention has cancer cell growth inhibitory activity, human leukemia T cell growth inhibitory activity and macrophage growth inhibitory activity. Thereby, the compound of this invention can be utilized for an anticancer agent, a leukemia therapeutic agent, and an anti-inflammatory agent.

新規なＤＮＡポリメラーゼ阻害剤、抗癌剤、白血病治療剤及び抗炎症剤を提供することができる。 Novel DNA polymerase inhibitors, anticancer agents, leukemia therapeutic agents and anti-inflammatory agents can be provided.

Claims

A compound represented by the following general formula (I) or (II) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
(Wherein R ₁ is selected from any _one of the following:
Wherein R ₂ is hydrogen or a hydroxy group)

The compound according to claim 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein the compound is 2- (1-hydroxyheptyl) -3- (hydroxymethyl) benzene-1,4-diol.

The compound according to claim 1, wherein the compound is (E) -2- (hept-1-en-1-yl) -3- (hydroxymethyl) benzene-1,4-diol, or a pharmaceutically acceptable salt thereof. Possible salt.

2. The compound according to claim 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein the compound is 2-heptyl-3- (hydroxymethyl) benzene-1,4-diol.

The compound according to claim 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein the compound is 3- (1-hydroxyheptyl) -2- (hydroxymethyl) phenol.

The compound according to claim 1, wherein the compound is (E) -3- (hept-1-en-1-yl) -4,5-dihydroxy-2- (hydroxymethyl) cyclohex-2-enone Pharmaceutically acceptable salt.

A DNA polymerase inhibitor comprising the compound according to any one of claims 1 to 6 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

The anticancer agent which contains the compound of any one of Claims 1-6, or its pharmacologically acceptable salt as an active ingredient.

The anti-inflammatory agent which contains the compound of any one of Claims 1-6, or its pharmaceutically acceptable salt as an active ingredient.

A therapeutic agent for leukemia comprising the compound according to any one of claims 1 to 6 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

The edible composition formed by mix | blending the compound of any one of Claims 1-6, or its pharmacologically acceptable salt with a foodstuff.