JP2013063925A - Mixture capable of reducing blood lipid and raising hdl cholesterol, and method for producing the same - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げることができる混合物に関し、特に、モナシン(monascin)またはアンカフラビン(ankaflavin)、もしくはモナシンとアンカフラビンを同時に含有する混合物であって、かつ血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げる機能を有するものに関する。 The present invention relates to a mixture capable of lowering blood lipids and raising HDL cholesterol, in particular monascin or ankaflavin, or a mixture containing monasin and ankaflavin simultaneously, and containing blood lipids It relates to a substance having a function of lowering and raising HDL cholesterol.
血液中のコレステロール含量が心臓血管系疾患の発生率と密接に関係する。研究結果によれば、脂質異常は、心臓血管系疾患の罹患は、重要な関係がある。よって、血液中のコレステロール含量は、とっても良い予測指標である。血液中のコレステロール含量が200 mg/Dlを超えると、冠状動脈性心疾患に起因する死亡の機会は急増加することが指摘されている。コレステロール値が高いにつれて、冠状動脈性心疾患の罹病率と死亡率も高くなる。しかし、非薬物または薬物の治療でコレステロール値を引き下げれば、冠状動脈硬化による心臓血管系疾の罹病率を顕著的に引き下げることは確かなことである。 The cholesterol content in the blood is closely related to the incidence of cardiovascular disease. According to research results, lipid abnormalities have an important relationship with the incidence of cardiovascular diseases. Therefore, the cholesterol content in blood is a very good predictive index. It has been pointed out that when the cholesterol content in the blood exceeds 200 mg / Dl, the chances of death due to coronary heart disease increase rapidly. The higher the cholesterol level, the higher the morbidity and mortality of coronary heart disease. However, lowering cholesterol levels with non-drug or drug treatment is certainly a significant reduction in cardiovascular disease morbidity due to coronary atherosclerosis.
近年、健康食品の発展は盛んであり、複数効果を有する機能性の発酵製品紅麹は、段々重視されつつある。アジア地域では、Monascus種(Monascus species)が飲食、医薬方面での応用は、1千年の歴史を有する。 In recent years, the development of health foods has been thriving, and functional fermented soy sauce with multiple effects is becoming increasingly important. In the Asian region, Monascus species are eaten and eaten, and their application in the pharmaceutical field has a history of 1,000 years.
Monascus種の二次代謝物は、(1)一つグループの色素、赤色色素ルブロパンクタミン(rubropunctamine)、モナスコルブラミン(monascorubramine)、黄色色素アンカフラビン(ankaflavin)、モナシン(monascin)及びオレンジ色色素rubropunctanin、モナスコルブリン(monascorubrin)、(2)コレステロールを引き下げる物質、モナコリンK(monacolin K)またはロバスタチン(lovastatin)、メビノリン(mevinolin)及びメバコール(mevacor)、(3)抗高血圧物質、γ−アミノ酪酸, (γ−aminobutyric acid, GABA)、(4)抗酸化物質、ジメルミン酸(dimerumic acid)と3−ヒドロキシ−4−メトキシ安息香酸(3−hydoxy−4−methoxy− benzoic acid)の4種類を含める。 The secondary metabolites of the Monascus species are: (1) a group of pigments, red pigments rubropunctamine, monascorbramin, yellow pigments ankaflavin, monascin and orange Dye rubropunctanin, monascorbrin, (2) substance that lowers cholesterol, monacolin K or lovastatin, mevinolin and mevacor, (3) antihypertensive substance, γ-amino Butyric acid (γ-aminobutyric acid, GABA), (4) Antioxidant, dimermic acid (dim umic acid) and 3-hydroxy-4-methoxybenzoic acid (-3 hydoxy-4-methoxy- benzoic acid) include four.
Monascus種の二次代謝物のうち、モナコリンK(monacolin K)は、コレステロールの生合成経路の鍵酵素ヒドロキシメチルグルタリル‐コエンザイムA還元酵素(hydroxy methylglutaryl−CoA reductase(HMG−CoA reductase))活性の抑制機能を有する。よって、モナコリンK(monacolin K)は、非常に顕著なコレステロール引き下げ効果を有する。 Among the secondary metabolites of Monascus species, monacolin K is a key enzyme in the cholesterol biosynthesis pathway, hydroxymethylglutaryl-coenzyme A reductase (HMG-CoA reductase) activity. Has a suppression function. Therefore, monacolin K has a very significant cholesterol lowering effect.
このほか、血液中のコレステロールは、高比重リポ蛋白コレステロール(HDL−C)と低密度リポ蛋白コレステロール(LDL−C)に分けることができる。研究により、高比重リポ蛋白コレステロール(HDL−C)と低密度リポ蛋白コレステロール(LDL−C)は、心臓血管系疾患とアテローム硬化症の発生機会に寄与することが知られている。 In addition, blood cholesterol can be divided into high density lipoprotein cholesterol (HDL-C) and low density lipoprotein cholesterol (LDL-C). Studies have shown that high density lipoprotein cholesterol (HDL-C) and low density lipoprotein cholesterol (LDL-C) contribute to the occurrence of cardiovascular disease and atherosclerosis.
総コレステロール(total cholesterol, TC)は、HDL−C、LDL−C、トリグリセリド(triglyceride, TG)及びその他リポ蛋白コレステロールからなる。従って、HDL−CとLDL−Cは、TC値の顕著な増加によって大量に増加される。多くの研究により、コレステロール降下剤を使用しTC値を引き下げると同時に、HDL−C値の大幅な低下が見られる。そこで、HDL−C値を維持するまたは引き上げることは、心臓血管系疾患の予防につながることが知られている。 Total cholesterol (TC) consists of HDL-C, LDL-C, triglyceride (TG) and other lipoprotein cholesterol. Therefore, HDL-C and LDL-C are increased in large quantities by a significant increase in TC values. Many studies show a significant reduction in HDL-C values while using cholesterol-lowering agents to lower TC values. Therefore, it is known that maintaining or raising the HDL-C value leads to prevention of cardiovascular diseases.
しかし、前述モナコリンK(monacolin K)は、コレステロールを引き下げる効果はあるものの、HDL−C値を引き上げることはできない。よって、心臓血管系疾患とアテローム硬化症に対する予防効果は、限られている。
この点について、混合物が血液脂質を引き下げるとHDL−C値を引き上げる機能を同時に備えて、心臓血管系疾患とアテローム硬化症の発生機会を有効に低減できる、斬新な混合物とその製造方法を提供する必要がある。
However, although the aforementioned monacolin K has the effect of lowering cholesterol, it cannot raise the HDL-C value. Therefore, the preventive effect against cardiovascular disease and atherosclerosis is limited.
In this regard, the present invention provides a novel mixture that can simultaneously reduce the occurrence of cardiovascular diseases and atherosclerosis, and a method for producing the same, having the function of increasing the HDL-C value when the mixture lowers blood lipids. There is a need.
本発明人は、前述欠点について、研究と考案を努めた結果、本発明の血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げることができる混合物とその製造方法を考案した。 The present inventor has devised a mixture and a method for producing the same that can lower the blood lipid and raise the HDL cholesterol according to the present invention as a result of the research and the device for the above-mentioned drawbacks.
本発明の主な目的は、少なくともモナシン(monascin)を含み、有効に血液脂質を引き下げ、HDLコレステロール値を引き上げることができる、血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げることができる混合物を提供する。 The main object of the present invention is to provide a mixture that contains at least monascin and can effectively lower blood lipids and raise HDL cholesterol levels, lower blood lipids and raise HDL cholesterol.
前述目的を達成するため、本発明は、Monascus発酵製品より抽出される紅こうじ黄色素であって、少なくともモナシン(monascin)を含み、血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げることができる混合物を提供する。 To achieve the foregoing object, the present invention provides a mixture of red koji yellow extracted from a Monascus fermentation product, which contains at least monascin and can lower blood lipids and raise HDL cholesterol. .
本発明もう一つの目的は、シリーズ的な抽出ステップ及び浄化を経て、モナシン(monascin)を含める混合物を取得する。この混合物は、有効に血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げることができる、血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げることができる混合物の製造方法を提供する。 Another object of the present invention is to obtain a mixture containing monascin through a series of extraction steps and purification. This mixture provides a method for producing a mixture capable of effectively lowering blood lipid and raising HDL cholesterol, and lowering blood lipid and raising HDL cholesterol.
前述目的を達成するため、本発明より、少なくとも以下のステップを含めた、血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げる混合物の製造方法を提供する。 To achieve the above object, the present invention provides a method for producing a mixture that lowers blood lipids and raises HDL cholesterol, including at least the following steps.
(1) Monascus発酵製品を提供する。 (1) To provide a Monascus fermentation product.
(2) アセトンを用いて、Monascus発酵製品に対し3回繰返しの抽出を行う。 (2) Repeat extraction three times for the Monascus fermentation product using acetone.
(3) ステップ(2)より得られた生成物を所定の温度条件において、減圧濃縮方法により濃度を高める。 (3) The concentration of the product obtained in step (2) is increased by a vacuum concentration method under a predetermined temperature condition.
(4) ステップ(3)より得られた生成物は、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(silica gel column chromatography)を利用し、1回目の分離浄化を行い、色素分解液を分離する。 (4) The product obtained in step (3) is subjected to a first separation and purification using silica gel column chromatography to separate the pigment decomposition solution.
(5) ステップ(4)の分離によって得られた色素分離液は、Sephadex LH−20カラムクロマトグラフィー(Sephadex LH−20 column chromatography)を利用し、2回目の分離浄化を行い、黄色素分解液を分離する。 (5) The dye separation liquid obtained by the separation in step (4) is subjected to the second separation and purification by using Sephadex LH-20 column chromatography, and the yellow color decomposition solution is obtained by using the Sephadex LH-20 column chromatography. To separate.
(6) ステップ(5)の分離によって得られた黄色素分離液は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを利用し、3回目の分離浄化を行い、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)を含める分離液を分離する。 (6) The yellow colorant separation liquid obtained by the separation in step (5) is subjected to the third separation and purification using silica gel column chromatography, and a separation liquid containing monascin and ankaflavin is prepared. To separate.
(7) ステップ(6)の分離によって得られたモナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)を含める分離液は、分取HPLC(preparative high performance liquid chromatography, pre−HPLC)によって、4回目の分離浄化を行い、モナシン(monascin)の成分を分離する。 (7) The separation liquid containing monascin and ankaflavin obtained by the separation in step (6) is separated and purified by preparative high performance liquid chromatography (pre-HPLC) by the preparative HPLC (preparative high performance liquid chromatography, pre-HPLC). To separate the components of monascin.
本発明もう一つの目的は、少なくともアンカフラビン(ankaflavin)を含み、有効に血液脂質を引き下げ、HDLコレステロール値を引き上げることができる、血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げることができる混合物を提供する。 Another object of the present invention is to provide a mixture that includes at least ankaflavin and can effectively lower blood lipids and raise HDL cholesterol levels, lower blood lipids and raise HDL cholesterol.
前述目的を達成するため、本発明は、Monascus発酵製品より抽出される紅こうじ黄色素であって、少なくともアンカフラビン(ankaflavin)を含み、血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げることができる混合物を提供する。 To achieve the foregoing object, the present invention provides a mixture of red koji yellow extracted from a Monascus fermented product, which contains at least an ankaflavin and can lower blood lipids and raise HDL cholesterol. To do.
本発明のまた一つの目的は、シリーズ的な抽出ステップと浄化により、アンカフラビン(ankaflavin)を含める混合物を抽出し、この混合物は、有効に血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げるができる、血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げることができる混合物の製造方法を提供する。 Another object of the present invention is to extract a mixture containing ankaflavin through a series of extraction steps and purification, which can effectively lower blood lipid and raise HDL cholesterol, Is provided, and a method for producing a mixture capable of raising HDL cholesterol is provided.
前述目的を達成するため、本発明より、少なくとも以下のステップを含める血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げる混合物の製造方法を提供する。 To achieve the above object, the present invention provides a method for producing a mixture that lowers blood lipids and raises HDL cholesterol, including at least the following steps.
(1) Monascus発酵製品を提供する。 (1) To provide a Monascus fermentation product.
(2) アセトンを用いて、Monascus発酵製品に対し3回繰返しの抽出を行う。 (2) Repeat extraction three times for the Monascus fermentation product using acetone.
(3) ステップ(2)より得られた生成物を所定の温度条件において、減圧濃縮方法により濃度を高める。 (3) The concentration of the product obtained in step (2) is increased by a vacuum concentration method under a predetermined temperature condition.
(4) ステップ(3)より得られた生成物は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを利用し、1回目の分離浄化を行い、色素分解液を分離する。 (4) The product obtained from step (3) is subjected to the first separation and purification using silica gel column chromatography to separate the pigment decomposition solution.
(5) ステップ(4)の分離によって得られた色素分離液は、Sephadex LH−20カラムクロマトグラフィーを利用し、2回目の分離浄化を行い、黄色素分解液を分離する。 (5) The dye separation liquid obtained by the separation in step (4) is separated and purified for the second time using Sephadex LH-20 column chromatography to separate the yellow decomposition solution.
(6) ステップ(5)の分離によって得られた黄色素分離液は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを利用し、3回目の分離浄化を行い、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)を含める分離液を分離する。 (6) The yellow colorant separation liquid obtained by the separation in step (5) is subjected to the third separation and purification using silica gel column chromatography, and a separation liquid containing monascin and ankaflavin is prepared. To separate.
(7) ステップ(6)の分離によって得られたモナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)を含める分離液は、分取HPLC(preparative high performance liquid chromatography, pre−HPLC)によって、4回目の分離浄化を行い、アンカフラビン(ankaflavin)の成分を分離する。 (7) The separation liquid containing monascin and ankaflavin obtained by the separation in step (6) is separated and purified by preparative high performance liquid chromatography (pre-HPLC) by the preparative HPLC (preparative high performance liquid chromatography, pre-HPLC). To separate the components of ankaflavin.
本発明のさらに一つの目的は、少なくともモナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)を含み、有効に血液脂質を引き下げ、HDLコレステロール値を引き上げることができる、血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げることができる混合物を提供する。 Yet another object of the present invention is to contain at least monascin and ankaflavin, which can effectively lower blood lipids and raise HDL cholesterol levels, lower blood lipids and raise HDL cholesterol. Provide a possible mixture.
前述目的を達成するため、本発明は、Monascus発酵製品より抽出される紅こうじ黄色素であって、少なくともモナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)を含み、血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げることができる混合物を提供する。 In order to achieve the above object, the present invention is a red coral yellow extract extracted from a Monascus fermented product, which contains at least monascin and ankaflavin, lowers blood lipids and raises HDL cholesterol. Provide a mixture that can.
本発明のさらに一つの目的は、シリーズ的な抽出ステップと浄化により、(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)を含める混合物を抽出し、この混合物は、有効に血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げるができる、血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げることができる混合物の製造方法を提供する。 Yet another object of the present invention is to extract a mixture containing (monascin) and ankaflavin through a series of extraction steps and purification, which effectively lowers blood lipids and raises HDL cholesterol. Provided is a method for producing a mixture capable of lowering blood lipids and raising HDL cholesterol.
前述目的を達成するため、本発明より、少なくとも以下のステップを含める血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げる混合物の製造方法を提供する。 To achieve the above object, the present invention provides a method for producing a mixture that lowers blood lipids and raises HDL cholesterol, including at least the following steps.
(1) Monascus発酵製品を提供する。 (1) To provide a Monascus fermentation product.
(2) アセトンを用いて、Monascus発酵製品に対し3回繰返しの抽出を行う。 (2) Repeat extraction three times for the Monascus fermentation product using acetone.
(3) ステップ(2)より得られた生成物を所定の温度条件において、減圧濃縮方法により濃度を高める。 (3) The concentration of the product obtained in step (2) is increased by a vacuum concentration method under a predetermined temperature condition.
(4) ステップ(3)より得られた生成物は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを利用し、1回目の分離浄化を行い、色素分解液を分離する。 (4) The product obtained from step (3) is subjected to the first separation and purification using silica gel column chromatography to separate the pigment decomposition solution.
(5) ステップ(4)の分離によって得られた色素分離液は、Sephadex LH−20カラムクロマトグラフィーを利用し、2回目の分離浄化を行い、黄色素分解液を分離する。 (5) The dye separation liquid obtained by the separation in step (4) is separated and purified for the second time using Sephadex LH-20 column chromatography to separate the yellow decomposition solution.
(6) ステップ(5)の分離によって得られた黄色素分離液は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを利用し、3回目の分離浄化を行い、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)を含める分離液を分離する。 (6) The yellow colorant separation liquid obtained by the separation in step (5) is subjected to the third separation and purification using silica gel column chromatography, and a separation liquid containing monascin and ankaflavin is prepared. To separate.
(7) ステップ(6)の分離によって得られたモナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)を含める分離液は、分取HPLC(preparative high performance liquid chromatography, pre−HPLC)によって、4回目の分離浄化を行い、アンカフラビン(ankaflavin)の成分をそれぞれ分離する。 (7) The separation liquid containing monascin and ankaflavin obtained by the separation in step (6) is separated and purified by preparative high performance liquid chromatography (pre-HPLC) by the preparative HPLC (preparative high performance liquid chromatography, pre-HPLC). To separate the components of the anchor flavins.
(8) モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)の成分を所定の比例によって混合する。 (8) The components of monascin and ankaflavin are mixed in a predetermined proportion.
本発明のシステム構造及び技術特徴は説明のとおり、以下の長所をまとめることができる。 As described above, the system structure and technical features of the present invention can be summarized as follows.
1. 本発明で提供されたすべての混合物は、血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げる効果があるため、心臓血管系疾患とアテローム硬化症の予防及び治療とも極めて大きい効果を有する。 1. All the mixtures provided in the present invention have the effect of lowering blood lipids and raising HDL cholesterol, and thus have a very great effect on the prevention and treatment of cardiovascular diseases and atherosclerosis.
2. 本発明の製造方法によれば、本発明で提供された各種混合物の成分を高純度により抽出すれば、心臓血管系疾患とアテローム硬化症の罹患率を有効に軽減できる。 2. According to the production method of the present invention, if the components of the various mixtures provided in the present invention are extracted with high purity, the prevalence of cardiovascular disease and atherosclerosis can be effectively reduced.
3. 本発明で提供された各種混合物は、人工合成による化合物ではなく、Monascus発酵製品から抽出されたものであり、自然食品のサプリメントとして食用できる。心臓血管系疾患とアテローム硬化症の罹患率を有効に軽減できるほか、副作用を引き起こす恐れはない。 3. The various mixtures provided in the present invention are not compounds by artificial synthesis, but are extracted from the Monascus fermentation product, and can be used as supplements for natural foods. It can effectively reduce the prevalence of cardiovascular disease and atherosclerosis and does not cause side effects.
前述目的及び効果を達成するため、本発明人はMonascus発酵製品を抽出基質とし、試験及び調整を繰り返した結果、本発明の血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げることができる混合物とその製造方法を得ることができた。本発明の血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げることができる混合物とその製造方法は、3つの好ましい実施例がある。本発明の混合物とその製造方法は、以下のとおり詳細説明する。 In order to achieve the above-mentioned objects and effects, the present inventor has obtained a mixture capable of lowering blood lipid of the present invention and raising HDL cholesterol as a result of repeated tests and adjustments using Monascus fermentation product as an extraction substrate, and a method for producing the same. I was able to get it. There are three preferred embodiments of the mixture and method for producing the same that can lower blood lipids and raise HDL cholesterol of the present invention. The mixture of the present invention and the production method thereof will be described in detail as follows.
まず、Monascus発酵製品の製造方法を説明する。図1、本発明のMonascus発酵製品の製造法のフロー図を参照し、以下のステップを含める。 First, the manufacturing method of Monascus fermentation product is demonstrated. Referring to FIG. 1, a flow diagram of a method for producing a Monascus fermentation product of the present invention, the following steps are included.
(ステップ001) 培養基質を提供する。培養基質は、たとえば米または乾燥の山芋のいずれかである。水分含量は15%以下であり、最適な水分含量は7%である。 (Step 001) A culture substrate is provided. The culture substrate is, for example, either rice or dried yam. The moisture content is 15% or less, and the optimum moisture content is 7%.
(ステップ002) 水を培養基質に加え、培養基質と水の比率は1:0.5%〜1:1.5%であり、最適な比率は1:0.75%である。 (Step 002) Water is added to the culture substrate, the ratio of the culture substrate to water is 1: 0.5% to 1: 1.5%, and the optimal ratio is 1: 0.75%.
(ステップ003) 培養基質を水に浸し、浸け時間は0〜60分、最適な浸け時間は30分である。 (Step 003) The culture substrate is immersed in water, the immersion time is 0 to 60 minutes, and the optimal immersion time is 30 minutes.
(ステップ004) 培養基質の滅菌を行い、滅菌条件は121℃、10〜60分間である。 (Step 004) The culture substrate is sterilized, and the sterilization conditions are 121 ° C. and 10 to 60 minutes.
(ステップ005) 滅菌完了の培養基質を冷却する。 (Step 005) Cool the sterilized culture substrate.
(ステップ006) 所定のモナスカス属のアンカを培養基質に接菌し、所定のモナスカス属のアンカは、たとえばモナスカスパーパレウス(Monascus purpureus)である。 (Step 006) A predetermined Monascus anchor is in contact with a culture substrate, and the predetermined Monascus anchor is, for example, Monascus purpureus.
(ステップ007) 接菌完了の培養基質を培養する。培養条件は温度25〜37℃、湿度50〜80%の環境において、8〜20日間を培養する。最適な培養条件は、温度30℃、湿度60%の環境において、10日間を培養する。
(Step 007) The culture substrate after completion of the inoculation is cultured. The culture is performed for 8 to 20 days in an environment of a temperature of 25 to 37 ° C. and a humidity of 50 to 80%. The optimal culture conditions are 10 days in an environment of
(ステップ008) 培養を完了して得られたMonascus発酵製品の乾燥を行い、含水率を15%以下にし、最適な含水率6%である。これにより、Monascus発酵製品の製造プロセスを完了する。 (Step 008) The Monascus fermented product obtained by completing the culture is dried, the water content is reduced to 15% or less, and the optimal water content is 6%. This completes the manufacturing process of the Monascus fermentation product.
引き続き、本発明の実施例1について、詳細説明する。本発明の血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げることができる混合物の実施例1において、その成分は、紅こうじ黄色素であって、少なくともモナシン(monascin)を含み、前述Monascus発酵製品より抽出されたものである。モナシン(monascin)の投与量は大人において、1日2.4 mg以上を摂食しなければ、血液脂質を引き下げ、HDLコレステロール値を引き上げることはできない。 Next, Example 1 of the present invention will be described in detail. In Example 1 of a mixture capable of lowering blood lipids and raising HDL cholesterol according to the present invention, the ingredient is red koji yellow, which contains at least monascin and was extracted from the aforementioned Monascus fermentation product. Is. In adults, the dose of monascin cannot be increased by lowering blood lipids and increasing HDL cholesterol unless eating 2.4 mg or more per day.
引き続き、図2、血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げることができる混合物実施例1の製造方法フロー図を参照する。本実施例は、以下のステップを含める。Monascus発酵製品を提供する(ステップ101)。アセトンを用いて、Monascus発酵製品に対して3回の抽出を行う(ステップ102)。そのうち、Monascus発酵製品とアセトンとの比例は、1:10 〜 1:50である。ステップ102により得られた生成物を所定の温度範囲条件において、減圧濃縮方法を用いて、濃度を高める(ステップ103)。そのうち、所定の温度は40℃〜60℃である。ステップ103により得られた生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(silica gel column chromatography)によって、1回目の分離浄化を行い、色素分解液を分離する(ステップ104)。ステップ104により、分離された色素分解液は、Sephadex LH−20カラムクロマトグラフィー(Sephadex LH−20 column chromatography)を利用し、2回目の分離浄化を行い、黄色素分離液を分離する(ステップ105)。ステップ105により、分離し得られた黄色素分離液は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを利用し、3回目の分離浄化を行い、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)を含める分離液を分離する(ステップ106)。ステップ106により、分離し得られたモナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)を含める分離液を分取HPLC法(preparative high performance liquid chromatography, pre−HPLC)によって、4回目の分離浄化を行い、モナシン(monascin)成分を分離する(ステップ107)。
Continuing with reference to FIG. 2, the manufacturing method flow diagram for Example 1 of a mixture that can lower blood lipids and raise HDL cholesterol. This embodiment includes the following steps. A Monascus fermentation product is provided (step 101). Three extractions are performed on the Monascus fermentation product using acetone (step 102). Among them, the ratio between the Monascus fermentation product and acetone is 1:10 to 1:50. The concentration of the product obtained in
引き続き、図3、本発明の実施例1の好ましい実施例ステップ104の詳細ステップフロー図を参照する。前記ステップ104はさらに、以下のステップを細分化できる。ステップ103により得られた生成物をシリカゲルカラム(silica gel column)に加える(ステップ104a)。複数種の洗浄液は、順を追ってシリカゲルカラムに加える(ステップ104b)。そのうち、前記複数種の洗浄液の順は、ヘキサン(Hexane)、ヘキサン:エタノール(Ethanol)= 9:1、Hexane : Ethanol = 8:2、ヘキサン:エタノール= 7:3、ヘキサン:エタノール= 1:1及びエタノールである。所定の時間ごとに、シリカゲルカラムより留出される分離液を収集し、合計12〜15の分離液を収集する(ステップ104c)。そのうち、前記所定の時間は、5〜10分である。高速液体クロマトグラフィー(high performance liquid chromatography, HPLC)に、ホトダイオードアレー(photodiode−array, PDA)と組み合わせて、ステップ104cによって、収集された各分離液の分析を行い、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)成分の分離液をスクリーニングする(ステップ104d)。ステップ104dにより、スクリーニングし得られた分離液を一体に混合して、色素分解液が得られる(ステップ104e)。
Continuing to refer to FIG. 3, a detailed step flow diagram of the
引き続き、図4、本発明の実施例1の好ましい実施例ステップ105の詳細ステップフロー図を参照する。前述ステップ105はさらに、以下のステップを細分化できる。
Continuing with reference to FIG. 4, a detailed step flow diagram of the
(ステップ105a) ステップ104によって、得られた色素分解液をSephadex LH−20カラム(Sephadex LH−20 column)に加える。
(
(ステップ105b) 洗浄液をSephadex LH−20カラムに加え、前記洗浄液は、メタノール(Methanol) : アセトニトリル(Acetonitrile)= 9:1である。
(
(ステップ105c) 所定の時間ごとに、Sephadex LH−20カラムより流出される分離液を収集し、合計3〜5の分離液を収集する。そのうち、前述所定の時間は、5〜10分である。
(
(ステップ105d) 高速液体クロマトグラフィーに、ホトダイオードアレーを合わせて、ステップ105cによって、収集された各分離液の分析を行い、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)成分を含める分離液をスクリーニングする。
(
(ステップ105e) ステップ105dによって、スクリーニングし得られた分離液を一体に混合して、黄色素分離液を取得する。
(
引き続き、図5、本発明の実施例1の好ましい実施例ステップ106の詳細ステップフロー図を参照する。前述ステップ106はさらに、以下のステップを細分化できる。
Continuing with reference to FIG. 5, a detailed step flow diagram of the
(ステップ106a) ステップ105によって、得られた黄色素分離液をシリカゲルカラムに加える。
(
(ステップ106b) 複数種の洗浄液は、順を追ってシリカゲルカラムに加える。前記複数種の洗浄液の順は、ジクロロメタン(Dichloromethane):エタノール= 95:5、ジクロロメタン:エタノール= 9:1及びジクロロメタン:エタノール= 4:1である。
(
(ステップ106c) 所定の時間ごとに、シリカゲルカラムより流出される分離液を収集し、合計3〜5の分離液を収集する。そのうち、前述所定の時間は、5〜10分である。
(
(ステップ106d) 高速液体クロマトグラフィーに、ホトダイオードアレーを合わせて、ステップ106cによって、収集された各分離液の分析を行い、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)成分を含める分離液をスクリーニングする。
(
(ステップ106e) ステップ106dによって、スクリーニングし得られた分離液を一体に混合して、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)成分を含める分離液を取得する。
(
引き続き、図6、本発明の実施例1の好ましい実施例ステップ107の詳細ステップフロー図を参照する。前述ステップ107はさらに、以下のステップを細分化できる。
Continuing with reference to FIG. 6, a detailed step flow diagram of the
(ステップ107a) ステップ106によって得られた、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)成分を含める分離液は、C18カラムにHPLC及び洗浄液を合わせて、洗浄分離を行い、前述洗浄液は、メタノール:水= 85:15である。
(
(ステップ107b) 所定の時間ごとに、C18カラムより流出される分離液を収集し、合計2の分離液を収集する。そのうち、前述所定の時間は、5〜10分である。
(
(ステップ107c) 高速液体クロマトグラフィーに、ホトダイオードアレーを合わせて、ステップ107bによって、収集された各分離液の分析を行い、モナシン(monascin)成分を含める分離液をスクリーニングする。
(
前述ステップ104d、105d及び106dにおいて、HPLC分析法で使用するカラム(column)は、C18カラム(25 cm x 4.6 mm, i.d. = 5 μm)、移動相はアセトニトリル:水: トリフルオロ酢酸塩= 62:38:0.05、流速1 mL/minである。多波長検出器(multiwavelength detector)により、231 nmにおけるUV吸収波長(モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)は、231 nmのUV吸収波長において、波高点を発生する)を検出する。さらに、対照群としてモナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)の標準品を利用する。標準品の波高点の時間と被測定物の波高点とのマッチングを行い、被測定物がモナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)であるか否かを判定する。
In the
このほか、前述ステップ107cにおいて、HPLC分析法で使用される条件は、ステップ104d、105d及び106dとほぼ同じである。ステップ107cが特殊な点は、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)は極性違いの特性によって、互いに分離される。C18カラムにて、高極性成分は、先に分離される。モナシン(monascin)は、アンカフラビン(ankaflavin)に比べ、低極性成分であるため、モナシン(monascin)は、先に分離され、アンカフラビン(ankaflavin)はその後に分離される。この特性を利用して、先に分離された分離液を集めて、モナシン(monascin)標準品と時間及び吸収波長の対照を行い、分離液にモナシン(monascin)を含まれているかを確認する。
In addition, the conditions used in the HPLC analysis method in
引き続き、本発明の実施例2について、詳細説明する。本発明の血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げることができる混合物の実施例2において、その成分は、紅こうじ黄色素であって、少なくともアンカフラビン(ankaflavin)を含み、前述Monascus発酵製品より抽出されたものである。そのうち、アンカフラビン(ankaflavin)の投与量は大人において、1日0.6 mg以上を摂食しなければ、血液脂質を引き下げ、HDLコレステロール値を引き上げることはできない。 Next, Example 2 of the present invention will be described in detail. In Example 2 of the mixture capable of lowering blood lipids and raising HDL cholesterol of the present invention, the component is red koji yellow, which contains at least anankaflavin and is extracted from the aforementioned Monascus fermentation product. It is a thing. Among them, the dose of ankaflavin in adults cannot lower blood lipids and raise HDL cholesterol levels unless adults eat more than 0.6 mg per day.
図7、本発明の血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げることができる混合物実施例2の製造方法フロー図を参照する。そのうち、ステップ201〜206は、ほぼ前述実施例1と同じため、ここでの説明を省略する。異なる点は、本実施例2のステップ207は、アンカフラビン(ankaflavin)の分離は、分取HPLC法によるものである。
Reference is made to FIG. 7, a method flow diagram for the production of Example 2 of a mixture that can lower blood lipids and raise HDL cholesterol. Of these steps,
引き続き、図8、本発明の実施例2の好ましい実施例ステップ207の詳細ステップフロー図を参照する。前述ステップ207はさらに、以下のステップを細分化できる。
Continuing with reference to FIG. 8, a detailed step flow diagram of the
(ステップ207a) ステップ206によって得られた、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)成分を含める分離液は、C18カラムにHPLC及び洗浄液を合わせて、洗浄分離を行い、前述洗浄液は、メタノール:水= 85:15である。
(
(ステップ207b) 所定の時間ごとに、C18カラムより流出される分離液を収集し、合計2の分離液を収集する。そのうち、前述所定の時間は、5〜10分である。
(
(ステップ207c) 高速液体クロマトグラフィーに、ホトダイオードアレーを合わせて、ステップ207bによって、収集された各分離液の分析を行い、アンカフラビン(ankaflavin)成分を含める分離液をスクリーニングする。
(
前述ステップ207cにおいて、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)は、極性違いによって、互いに分離される。C18カラムにて、高極性成分が先に分離される。モナシン(monascin)はアンカフラビン(ankaflavin)に比べ、高極性成分であるため、モナシン(monascin)は先に分離される。この特性を利用して、後に分離される分離液を集めて、アンカフラビン(ankaflavin)標準品と時間及び吸収波長の対照を行い、分離液にアンカフラビン(ankaflavin)を含まれているかを確認する。
In
引き続き、本発明の実施例3について、詳細説明する。本発明の血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げることができる混合物の実施例3において、その成分は、紅こうじ黄色素であって、少なくともモナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)を含み、前述Monascus発酵製品より抽出されたものである。そのうち、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)含量比率の範囲は1:1〜10:1であり、最適な含量比率は3.56:1であれば、有効に血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げることができる。そのほか、モナシン(monascin)の投与量は大人において、1日2.4 mg以上、アンカフラビン(ankaflavin)の投与量は大人において、1日0.6 mg以上を摂食しなければ、有効に血液脂質を引き下げ、HDLコレステロール値を引き上げることはできない。 Subsequently, Example 3 of the present invention will be described in detail. In Example 3 of a mixture capable of lowering blood lipids and raising HDL cholesterol according to the present invention, the component is red koji yellow, which contains at least monascin and ankaflavin, and the aforementioned Monascus Extracted from fermented products. Among them, the range of monascin and ankaflavin content ratio is 1: 1 to 10: 1, and if the optimal content ratio is 3.56: 1, blood lipid is effectively reduced, HDL cholesterol Can be raised. In addition, the dose of monascin (monascin) in adults is 2.4 mg or more per day, and the dose of ankaflavin (ankaflavin) in adults is effective if it does not consume 0.6 mg or more per day. Cannot be lowered and HDL cholesterol levels cannot be raised.
引き続き、図9、本発明の血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げることができる混合物実施例3の製造方法フロー図を参照する。本実施例において、ステップ301〜306は、前述実施例1と実施例2とほぼ同じであるため、ここでの説明を省略する。異なる点は、実施例3におけるステップ307は、分取HPLC法を利用し、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)の成分それぞれ分離した後、最後にステップ308に説明のとおり、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)の成分を所定の比例によって混合する。前述所定比例の範囲値は1:1 〜 10:1であり、最適値は3.56:1である。
Subsequently, refer to FIG. 9, a production method flow diagram of Example 3 of a mixture that can lower blood lipids of the present invention and raise HDL cholesterol. In this embodiment, steps 301 to 306 are substantially the same as those in the first embodiment and the second embodiment, and the description thereof is omitted here. The difference is that
引き続き、図10、本発明の実施例3の好ましい実施例ステップ307の詳細ステップフロー図を参照する。前述ステップ307はさらに、以下のステップを細分化できる。
Continuing with reference to FIG. 10, a detailed step flow diagram of the
(ステップ307a) ステップ306によって得られた、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)成分を含める分離液は、C18カラムにHPLC及び洗浄液を合わせて、洗浄分離を行い、前述洗浄液は、メタノール:水= 85:15である。
(
(ステップ307b) 所定の時間ごとに、C18カラムより流出される分離液を収集し、合計2の分離液を収集する。そのうち、前述所定の時間は、5〜10分である。
(
(ステップ307c) 高速液体クロマトグラフィーに、ホトダイオードアレーを合わせて、ステップ307bによって、収集された各分離液の分析を行い、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)成分を含める分離液をスクリーニングする。
(
前述ステップ307cにおいて、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)は、極性違いによって、互いに分離される。C18カラムにて、高極性成分は先に分離される。モナシン(monascin)はアンカフラビン(ankaflavin)に比べ、高極性成分であるため、モナシン(monascin)は、先に分離される。この特性を利用して、先と後に分離される分離液を集めて、それぞれモナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)標準品と時間及び吸収波長の対照を行い、分離液にモナシン(monascin)またはアンカフラビン(ankaflavin)を含まれているかを確認する。
In
本発明実施例1ないし3の混合物による血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げる効果を確認するため、以下は複数種の実験を用いて、分析と比較を行う。以下の分析内容において、本考案実施例1の混合物は、モナシン(monascin, MS)であり、投与量は大人において、1日に9.82 mgを摂食する。実施例2の混合物は、アンカフラビン(ankaflavin, AF)であり、投与量は大人において、1日に1.43 mgを摂食する。実施例3の混合物は、モナシン(monascin)及びアンカフラビン(ankaflavin)(MS+AFという。)投与量は大人において、1日に9.82 mg及び1.43 mgである。そのほか、モナコリンK(monacolin K, MKという。)を含める混合物を対照群にした。 In order to confirm the effect of lowering blood lipids and raising HDL cholesterol by the mixture of Examples 1 to 3 of the present invention, the following is analyzed and compared using a plurality of types of experiments. In the following analysis contents, the mixture of Example 1 of the present invention is monascin (MS), and the dosage is 9.82 mg per day in an adult. The mixture of Example 2 is ankaflavin (AF) and the dosage is 1.43 mg per day in adults. The mixture of Example 3 is monascin and ankaflavin (referred to as MS + AF) dosages in adults are 9.82 mg and 1.43 mg per day. In addition, a mixture containing monacolin K (referred to as monacolin K, MK) was used as a control group.
まず、高コレステロール摂食のハムスターを実験動物に利用し、それぞれMS、AF、MS+AF及びMKを8週間投与し後、血中総コレステロール(total cholesterol, TC)含量、トリグリセリド(triglyceride, TG)含量、高比重リポ蛋白コレステロール(high density lipoprotein cholesterol, HDL−C)含量、低密度リポ蛋白コレステロール(low density lipoprotein cholesterol, LDL−C)含量、LDL−CとHDL−Cの比例及び血中脂質のマロンジアルデヒド(malondialdehyde, MDA)含量など、各種コレステロールパラメータの分析を行う。そのうち、MKの投与量は大人において、1日2.89 mgの摂食に相当する。このほか、正常飲食組は、NOR組といい、高コレステロール摂食組は、HCという。 First, hamsters fed with high cholesterol were used as experimental animals, and after administration of MS, AF, MS + AF and MK for 8 weeks, respectively, total cholesterol (TC) content, triglyceride (TG) content, High density lipoprotein cholesterol (HDL-C) content, low density lipoprotein cholesterol (LDL-C) content, proportionality of LDL-C and HDL-C, and blood lipid malondi Various cholesterol parameters such as aldehyde (MDA) content are analyzed. Among them, the dose of MK corresponds to an intake of 2.89 mg per day in adults. In addition, the normal eating and drinking group is called the NOR group, and the high cholesterol feeding group is called HC.
下表1は、前述動物試験の結果であり、表2は、MS、AF、MS+AF及びMK組がHC組と対照した各種パラメータの降下または増加率。まず、TC降下の結果において、MS組とAF組とも血中TC含量の降下が顕著的であり、かつその効果はMK組より高い。さらに、MS+AF組によるTC降下効果は、他の組より高いことを示されている。TGの降下効果において、MS組、AF組及びMS+AF組ともTG含量の降下が顕著的であり、かつその効果はMK組より高い。HDL−Cの上昇率結果において、MS組とAF組とも血中HDL−C含量の増加が顕著的であり、かつその効果はMK組より高い。さらに、MS+AF組によるTC増加効果は、他の組より高いことを示されている。HDL−C降下率の結果は、MS組の効果は、MK組とさほど差は認められないが、AF組とMS+AF組は、血中HDL−Cの降下効果は、MK組より高い。LDL/HDL比値の降下効果において、MS組の効果は、MK組より高く、AF組とMS+AF組の効果は他の組より高い。よって、モナシン(monascin)、アンカフラビン(ankaflavin)とモナシン+アンカフラビン(monascin+ankaflavin)は、モナコリン(monacolin K)に比べ、心臓血管系疾患とアテローム硬化症の発生の改善に寄与できることが分かる。MDA降下効果において、MS組、AF組及びMS+AF組ともMDA含量の降下が顕著的であり、かつその効果はMK組より高い。 Table 1 below shows the results of the animal test described above, and Table 2 shows the rate of decrease or increase in various parameters of the MS, AF, MS + AF and MK groups compared to the HC group. First, in the results of TC lowering, the decrease in blood TC content is remarkable in both the MS group and the AF group, and the effect is higher than that in the MK group. Furthermore, it is shown that the TC lowering effect by the MS + AF group is higher than the other group. In the TG lowering effect, the MS group, the AF group, and the MS + AF group have a significant decrease in the TG content, and the effect is higher than that of the MK group. In the results of the increase rate of HDL-C, the increase in the blood HDL-C content is remarkable in both the MS group and the AF group, and the effect is higher than that in the MK group. Furthermore, it is shown that the TC increase effect by the MS + AF group is higher than the other group. As a result of the HDL-C lowering rate, the effect of the MS group is not so different from that of the MK group, but the AF group and the MS + AF group have a higher blood HDL-C lowering effect than the MK group. In the effect of lowering the LDL / HDL ratio value, the effect of the MS group is higher than that of the MK group, and the effect of the AF group and the MS + AF group is higher than the other groups. Therefore, it can be seen that monascin, ankaflavin and monacin + ankaflavin can contribute to the improvement of the occurrence of cardiovascular disease and atherosclerosis compared to monacolin K. In the MDA lowering effect, the MS group, AF group, and MS + AF group have a significant decrease in MDA content, and the effect is higher than that of the MK group.
アテローム硬化症を評価するもう一つの重要な指標は、動脈脂肪斑の染色分析であり、染色結果により、脂肪斑が動脈血管の沈積状況を知ることができる。大量な過酸化脂質は、泡沫細胞の大量沈積を引き起し、血管壁が弾性を失われ、かつ大量な脂質斑を沈積して、アテローム硬化症を引き起こす。図11、脂質斑を染色した量化結果図を参照する。研究結果によると、8週間連続した高コレステロールの摂食は、実験動物の胸腔動脈血管斑が大量に沈積していて、正常飲食組に比べ、増加現象は顕著的であった。MK組(投与量2.89 mg/日)は脂質斑の量の降下は見られるものの、その効果は、MS組(投与量9.82 mg/日)、AF組(投与量1.43 mg/日)及びMS+AF組(MSとAFの比例は3.56:1)である。このほか、AF組の効果は、MS組より高く、かつMS+AF組の効果はAF組より高い。 Another important index for evaluating atherosclerosis is staining analysis of arterial fat spots, and the staining results can be used to know the state of deposition of arterial blood vessels. Large amounts of lipid peroxide cause mass deposition of foam cells, the vessel wall loses elasticity, and large amounts of lipid plaques deposit, causing atherosclerosis. Reference is made to FIG. 11, a quantification result diagram in which lipid spots are stained. According to the research results, high cholesterol intake for 8 weeks continued to have a large amount of thoracic arterial vascular plaques deposited in the experimental animals, and the increase phenomenon was remarkable compared to the normal eating group. In the MK group (dose 2.89 mg / day), a drop in the amount of lipid plaques was observed, but the effects were the MS group (dose 9.82 mg / day), AF group (dose 1.43 mg). / Day) and MS + AF pair (the ratio of MS and AF is 3.56: 1). In addition, the effect of the AF group is higher than that of the MS group, and the effect of the MS + AF group is higher than that of the AF group.
モナシン(monascin)、アンカフラビン(ankaflavin)とモナシン及びモナコリンK(monacolin K)によるコレステロール生成の抑制効果を比較するため、細胞実験法を用いて、同じ濃度(100 ppb)のモナシン(monascin)、アンカフラビン(ankaflavin)及びモナコリンK(monacolin K)条件により細胞を処理し、コレステロール生成への影響を検討した。図12、同じ濃度のモナシン(monascin)、アンカフラビン(ankaflavin)とモナシン及びモナコリンK(monacolin K)によるコレステロール生成の抑制効果比較図を参照する。コレステロール生成の抑制効果は、アンカフラビン(ankaflavin)、モナシン(monascin)、モナコリンK(monacolin K)の順である。この結果は、動物試験の結果に同じ、アンカフラビン(ankaflavin)とモナシンは、モナコリンK(monacolin K)に比べ、より良い血中脂質降下効果を有し、かつその結果は、細胞におけるコレステロール生成の抑制効果は、アンカフラビン(ankaflavin)、モナシン(monascin)、モナコリンK(monacolin K)の順である。 In order to compare the inhibitory effect of monascin, ankaflavin, and monacin and monacolin K on the production of cholesterol by using cell experiments, monascin, anchora at the same concentration (100 ppb) was used. Cells were treated with flavin and monacolin K conditions to study the effect on cholesterol production. Reference is made to FIG. 12, which compares the inhibitory effects of cholesterol production by monascin, ankaflavin and monacin and monacolin K at the same concentration. The inhibitory effect on cholesterol production is in the order of ankaflavin, monascin, and monacolin K. This result is the same as the results of animal studies. Ankaflavin and monacin have a better blood lipid lowering effect than monacolin K, and the result is that The inhibitory effect is in the order of ankaflavin, monascin, and monacolin K.
前述動物試験結果から、モナシン(monascin)、アンカフラビン(ankaflavin)とモナシン+アンカフラビン(monascin+ankaflavin)とも顕著な血清TC、TG、LDL−C、MDA、動脈脂肪斑の降下効果及びHDL−Cを引き上げる効果があり、しかもモナコリンK(monacolin K)より高い。このほか、モナシン+アンカフラビン(monascin+ankaflavin)の効果は、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)に比べ、より顕著である。よって、本発明実施例1ないし3の混合物は、血中総コレステロールを有効に引き下げるほか、血中HDL−C濃度を引き上げることができ、心臓血管系疾患とアテローム硬化症の発生に対する抑制効果は、極めて大きい。 From the results of the above-mentioned animal tests, monascin, ankaflavin and monacin + ankaflavin also increase serum TC, TG, LDL-C, MDA, arterial lipid spot lowering effect and HDL-C It has an effect and is higher than monacolin K. In addition, the effects of monascin + ankaflavin are more prominent than those of monascin and ankaflavin. Therefore, the mixture of Examples 1 to 3 of the present invention can effectively lower blood total cholesterol and also raise blood HDL-C concentration. The inhibitory effect on the occurrence of cardiovascular disease and atherosclerosis is Very large.
001〜008 ステップ番号
101〜107 ステップ番号
104a〜104e ステップ番号
105a〜105e ステップ番号
106a〜106e ステップ番号
107a〜107c ステップ番号
201〜207 ステップ番号
207a〜207c ステップ番号
301〜308 ステップ番号
307a〜307c ステップ番号
001-008 Step number 101-107
Claims (43)
(2)アセトンを用いて、Monascus発酵製品に対し3回繰返しの抽出を行う、
(3)ステップ(2)より得られた生成物を所定の温度条件において、減圧濃縮方法により濃度を高める、
(4)ステップ(3)より得られた生成物は、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(silica gel column chromatography)を利用し、1回目の分離浄化を行い、色素分解液を分離する、
(5)ステップ(4)の分離によって得られた色素分離液は、Sephadex LH−20カラムクロマトグラフィー(Sephadex LH−20 column chromatography)を利用し、2回目の分離浄化を行い、黄色素分解液を分離する、
(6)ステップ(5)の分離によって得られた黄色素分離液は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを利用し、3回目の分離浄化を行い、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)を含める分離液を分離する、
(7)ステップ(6)の分離によって得られたモナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)を含める分離液は、分取HPLC(preparative high performance liquid chromatography, pre−HPLC)により、4回目の分離浄化を行い、モナシン(monascin)の成分を分離するステップを少なくとも含める血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げることができる混合物の製造方法。 (1) provide a Monascus fermentation product;
(2) Using acetone, the Monascus fermentation product is extracted three times repeatedly.
(3) The concentration of the product obtained in step (2) is increased by a vacuum concentration method under a predetermined temperature condition.
(4) The product obtained in step (3) is subjected to a first separation and purification using silica gel column chromatography to separate the pigment decomposition solution.
(5) The pigment separation liquid obtained by the separation in step (4) is separated and purified for the second time using Sephadex LH-20 column chromatography (Sephadex LH-20 column chromatography). To separate,
(6) The yellow color separation liquid obtained by the separation in step (5) is subjected to the third separation and purification using silica gel column chromatography, and a separation liquid containing monascin and ankaflavin is prepared. To separate,
(7) The separation liquid containing monascin and ankaflavin obtained by the separation in step (6) is separated and purified by preparative high performance liquid chromatography (pre-HPLC) by the preparative HPLC (preparative high performance chromatography, pre-HPLC). And a method for producing a mixture capable of lowering blood lipids and raising HDL cholesterol, comprising at least a step of separating a monascin component.
(4.1)ステップ(3)によって、得られた生成物をシリカゲルカラム(silica gel column)に加える、
(4.2)複数種の洗浄液は、順を追って前記シリカゲルカラムに加える、
(4.3)所定の時間ごとに、シリカゲルカラムより流出される分離液を収集し、合計12〜15の分離液を収集する、
(4.4)高速液体クロマトグラフィー(high performance liquid chromatography, HPLC)に、ホトダイオードアレー(photodiode−array, PDA)を合わせて、ステップ(4.3)によって、収集された各分離液の分析を行い、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)成分を含める分離液をスクリーニングする、
(4.5)ステップ(4.4)によって、スクリーニングし得られた分離液を一体に混合して、色素分離液を取得する。 The method for producing a mixture capable of lowering blood lipid and raising HDL cholesterol according to claim 3, wherein step (4) further comprises the following steps.
(4.1) Add the product obtained according to step (3) to a silica gel column,
(4.2) A plurality of types of cleaning solutions are added to the silica gel column in order.
(4.3) Collect the separated liquid flowing out from the silica gel column every predetermined time, and collect a total of 12 to 15 separated liquids.
(4.4) A high-performance liquid chromatography (HPLC) is combined with a photodiode array (PDA), and each collected liquid is analyzed in step (4.3). Screening a separate solution containing monascin and ankaflavin components,
(4.5) In step (4.4), the separation liquid obtained by screening is mixed together to obtain a dye separation liquid.
(5.1)ステップ(4)によって、得られた色素分解液をSephadex LH−20カラム(Sephadex LH−20 column)に加える、
(5.2)洗浄液をSephadex LH−20カラムに加える、
(5.3)所定の時間ごとに、Sephadex LH−20カラムより流出される分離液を収集し、合計3〜5の分離液を収集する、
(5.4)高速液体クロマトグラフィー(high performance liquid chromatography, HPLC)に、ホトダイオードアレー(photodiode−array, PDA)と組み合わせて、ステップ(5.3)によって、収集された各分離液の分析を行い、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)成分を含める分離液をスクリーニングする、
(5.5)ステップ(5.4)によって、スクリーニングし得られた分離液を一体に混合して、色素分離液を取得する。 The method for producing a mixture capable of lowering blood lipid and raising HDL cholesterol according to claim 3, wherein step (5) further comprises the following steps.
(5.1) Add the resulting dye decomposition solution to the Sephadex LH-20 column (Sephadex LH-20 column) according to step (4).
(5.2) Add wash to Sephadex LH-20 column.
(5.3) Collect the separation liquid flowing out from the Sephadex LH-20 column every predetermined time, and collect a total of 3 to 5 separation liquids.
(5.4) Analyzing each separated solution collected in step (5.3) in combination with a photodiode array (PDA) in high performance liquid chromatography (HPLC). Screening a separate solution containing monascin and ankaflavin components,
(5.5) In step (5.4), the separation liquid obtained by screening is mixed together to obtain a dye separation liquid.
(6.1)ステップ(5)によって、得られた黄色素分離液をシリカゲルカラムに加える、
(6.2)複数種の洗浄液は、順を追って前記シリカゲルカラムに加える、
(6.3)所定の時間ごとに、シリカゲルカラムより流出される分離液を収集し、合計3〜5の分離液を収集する、
(6.4)高速液体クロマトグラフィー(high performance liquid chromatography, HPLC)に、ホトダイオードアレー(photodiode−array, PDA)と組み合わせて、ステップ(6.3)によって、収集された各分離液の分析を行い、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)成分を含める分離液をスクリーニングする、
(6.5)ステップ(6.4)によって、スクリーニングし得られた分離液を一体に混合して、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)成分を含める分離液を取得する。 The method for producing a mixture capable of lowering blood lipid and raising HDL cholesterol according to claim 3, wherein step (6) further comprises the following steps.
(6.1) Add the yellowish yellow liquor obtained in step (5) to a silica gel column.
(6.2) A plurality of types of cleaning solutions are added to the silica gel column in order.
(6.3) Collect the separated liquid flowing out from the silica gel column every predetermined time, and collect a total of 3 to 5 separated liquids.
(6.4) Analyzing each collected liquid in step (6.3) in combination with a photodiode-array (PDA) on high performance liquid chromatography (HPLC) and in combination with a photodiode array (PDA). Screening a separate solution containing monascin and ankaflavin components,
(6.5) In step (6.4), the separation liquid obtained by screening is mixed together to obtain a separation liquid containing monascin and ankaflavin components.
(7.1)ステップ(6)によって得られた、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)成分を含める分離液は、C18カラムにHPLC及び洗浄液を合わせて、洗浄分離を行う、
(7.2)所定の時間ごとに、C18カラムより流出される分離液を収集し、合計2の分離液を収集する、
(7.3)高速液体クロマトグラフィー(high performance liquid chromatography, HPLC)に、ホトダイオードアレー(photodiode−array, PDA)と組み合わせて、ステップ(7.2)によって、収集された各分離液の分析を行い、モナシン(monascin)成分を含める分離液をスクリーニングする、 The method for producing a mixture capable of lowering blood lipid and raising HDL cholesterol according to claim 3, wherein step (7) further comprises the following steps.
(7.1) The separation liquid containing monascin and ankaflavin components obtained by step (6) is subjected to washing separation by combining HPLC and washing liquid in a C18 column.
(7.2) Collect the separation liquid flowing out from the C18 column every predetermined time, and collect a total of two separation liquids.
(7.3) Each collected liquid is analyzed by high performance liquid chromatography (HPLC) in combination with photodiode array (PDA) in step (7.2). Screening a separation solution containing the monascin component,
(2)アセトンを用いて、Monascus発酵製品に対し3回繰返しの抽出を行う、
(3)ステップ(2)より得られた生成物を所定の温度条件において、減圧濃縮方法により濃度を高める、
(4)ステップ(3)より得られた生成物は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを利用し、1回目の分離浄化を行い、色素分解液を分離する。
(5)ステップ(4)の分離によって得られた色素分離液は、Sephadex LH−20カラムクロマトグラフィーを利用し、2回目の分離浄化を行い、黄色素分解液を分離する、
(6)ステップ(5)の分離によって得られた黄色素分離液は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを利用し、3回目の分離浄化を行い、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)を含める分離液を分離する、
(7)ステップ(6)の分離によって得られたモナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)を含める分離液を分取HPLCにより、4回目の分離浄化を行い、アンカフラビン(ankaflavin)の成分を分離するステップを少なくとも含める血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げることができる混合物の製造方法。 (1) provide a Monascus fermentation product;
(2) Using acetone, the Monascus fermentation product is extracted three times repeatedly.
(3) The concentration of the product obtained in step (2) is increased by a vacuum concentration method under a predetermined temperature condition.
(4) The product obtained from step (3) is subjected to the first separation and purification using silica gel column chromatography to separate the pigment decomposition solution.
(5) The dye separation liquid obtained by the separation in step (4) is separated and purified by the second separation using Sephadex LH-20 column chromatography to separate the yellow decomposition solution.
(6) The yellow color separation liquid obtained by the separation in step (5) is subjected to the third separation and purification using silica gel column chromatography, and a separation liquid containing monascin and ankaflavin is prepared. To separate,
(7) The separation solution containing monascin and ankaflavin obtained by the separation in step (6) is separated and purified by preparative HPLC for the fourth time, and the components of ankaflavin are separated. A method for producing a mixture capable of lowering blood lipids and raising HDL cholesterol.
(4.1)ステップ(3)によって、得られた生成物をシリカゲルカラム(silica gel column)に加える、
(4.2)複数種の洗浄液は、順を追って前記シリカゲルカラムに加える、
(4.3)所定の時間ごとに、シリカゲルカラムより流出される分離液を収集し、合計12〜15の分離液を収集する、
(4.4)高速液体クロマトグラフィー(high performance liquid chromatography, HPLC)に、ホトダイオードアレー(photodiode−array, PDA)と組み合わせて、ステップ(4.3)によって、収集された各分離液の分析を行い、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)成分を含める分離液をスクリーニングする、
(4.5)ステップ(4.4)によって、スクリーニングし得られた分離液を一体に混合して、色素分離液を取得する。 The method for producing a mixture capable of lowering blood lipid and raising HDL cholesterol according to claim 16, wherein step (4) further comprises the following steps.
(4.1) Add the product obtained according to step (3) to a silica gel column,
(4.2) A plurality of types of cleaning solutions are added to the silica gel column in order.
(4.3) Collect the separated liquid flowing out from the silica gel column every predetermined time, and collect a total of 12 to 15 separated liquids.
(4.4) The high-performance liquid chromatography (HPLC) was combined with the photodiode array (PDA), and each collected liquid was analyzed by step (4.3). Screening a separate solution containing monascin and ankaflavin components,
(4.5) In step (4.4), the separation liquid obtained by screening is mixed together to obtain a dye separation liquid.
(5.1)ステップ(4)によって、得られた色素分解液をSephadex LH−20カラム(Sephadex LH−20 column)に加える、
(5.2)洗浄液をSephadex LH−20カラムに加える、
(5.3)所定の時間ごとに、Sephadex LH−20カラムより流出される分離液を収集し、合計3〜5の分離液を収集する、
(5.4)高速液体クロマトグラフィー(high performance liquid chromatography, HPLC)に、ホトダイオードアレー(photodiode−array, PDA)と組み合わせて、ステップ(5.3)によって、収集された各分離液の分析を行い、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)成分を含める分離液をスクリーニングする、
(5.5)ステップ(5.4)によって、スクリーニングし得られた分離液を一体に混合して、色素分離液を取得する。 The method for producing a mixture capable of lowering blood lipid and raising HDL cholesterol according to claim 16, wherein step (5) further comprises the following steps.
(5.1) Add the resulting dye decomposition solution to the Sephadex LH-20 column (Sephadex LH-20 column) according to step (4).
(5.2) Add wash to Sephadex LH-20 column.
(5.3) Collect the separation liquid flowing out from the Sephadex LH-20 column every predetermined time, and collect a total of 3 to 5 separation liquids.
(5.4) Analyzing each separated solution collected in step (5.3) in combination with a photodiode array (PDA) in high performance liquid chromatography (HPLC). Screening a separate solution containing monascin and ankaflavin components,
(5.5) In step (5.4), the separation liquid obtained by screening is mixed together to obtain a dye separation liquid.
(6.1)ステップ(5)によって、得られた黄色素分離液をシリカゲルカラムに加える、
(6.2)複数種の洗浄液は、順を追って前記シリカゲルカラムに加える、
(6.3)所定の時間ごとに、シリカゲルカラムより流出される分離液を収集し、合計3〜5の分離液を収集する、
(6.4)高速液体クロマトグラフィー(high performance liquid chromatography, HPLC)に、ホトダイオードアレー(photodiode−array, PDA)と組み合わせて、ステップ(6.3)によって、収集された各分離液の分析を行い、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)成分を含める分離液をスクリーニングする、
(6.5)ステップ(6.4)によって、スクリーニングし得られた分離液を一体に混合して、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)成分を含める分離液を取得する。 The method for producing a mixture capable of lowering blood lipid and raising HDL cholesterol according to claim 16, wherein step (6) further comprises the following steps.
(6.1) Add the yellowish yellow liquor obtained in step (5) to a silica gel column.
(6.2) A plurality of types of cleaning solutions are added to the silica gel column in order.
(6.3) Collect the separated liquid flowing out from the silica gel column every predetermined time, and collect a total of 3 to 5 separated liquids.
(6.4) Analyzing each collected liquid in step (6.3) in combination with a photodiode-array (PDA) on high performance liquid chromatography (HPLC) and in combination with a photodiode array (PDA). Screening a separate solution containing monascin and ankaflavin components,
(6.5) In step (6.4), the separation liquid obtained by screening is mixed together to obtain a separation liquid containing monascin and ankaflavin components.
(7.1)ステップ(6)によって得られた、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)成分を含める分離液は、C18カラムにHPLC及び洗浄液を合わせて、洗浄分離を行う、
(7.2)所定の時間ごとに、C18カラムより流出される分離液を収集し、合計2の分離液を収集する、
(7.3)高速液体クロマトグラフィー(high performance liquid chromatography, HPLC)に、ホトダイオードアレー(photodiode−array, PDA)と組み合わせて、ステップ(7.2)によって、収集された各分離液の分析を行い、アンカフラビン(ankaflavin)成分を含める分離液をスクリーニングする、 The method for producing a mixture capable of lowering blood lipid and raising HDL cholesterol according to claim 16, wherein step (7) further comprises the following steps.
(7.1) The separation liquid containing monascin and ankaflavin components obtained by step (6) is subjected to washing separation by combining HPLC and washing liquid in a C18 column.
(7.2) Collect the separation liquid flowing out from the C18 column every predetermined time, and collect a total of two separation liquids.
(7.3) Each collected liquid is analyzed by high performance liquid chromatography (HPLC) in combination with photodiode array (PDA) in step (7.2). Screening a separation containing an ankaflavin component,
(2)アセトンを用いて、Monascus発酵製品に対し3回繰返しの抽出を行う、
(3)ステップ(2)より得られた生成物を所定の温度条件において、減圧濃縮方法により濃度を高める、
(4)ステップ(3)より得られた生成物は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを利用し、1回目の分離浄化を行い、色素分解液を分離する。
(5)ステップ(4)の分離によって得られた色素分離液は、Sephadex LH−20カラムクロマトグラフィーを利用し、2回目の分離浄化を行い、黄色素分解液を分離する、
(6)ステップ(5)の分離によって得られた黄色素分離液は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを利用し、3回目の分離浄化を行い、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)を含める分離液を分離する。
(7)ステップ(6)の分離によって得られたモナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)を含める分離液は、分取HPLC(preparative high performance liquid chromatography, pre−HPLC)によって、4回目の分離浄化を行い、アンカフラビン(ankaflavin)の成分をそれぞれ分離する。
(8)モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)の成分を所定の比例によって混合するステップを少なくとも含める血液脂質を引き下げ、HDLコレステロールを引き上げることができる混合物の製造方法。 (1) provide a Monascus fermentation product;
(2) Using acetone, the Monascus fermentation product is extracted three times repeatedly.
(3) The concentration of the product obtained in step (2) is increased by a vacuum concentration method under a predetermined temperature condition.
(4) The product obtained from step (3) is subjected to the first separation and purification using silica gel column chromatography to separate the pigment decomposition solution.
(5) The dye separation liquid obtained by the separation in step (4) is separated and purified by the second separation using Sephadex LH-20 column chromatography to separate the yellow decomposition solution.
(6) The yellow color separation liquid obtained by the separation in step (5) is subjected to the third separation and purification using silica gel column chromatography, and a separation liquid containing monascin and ankaflavin is prepared. To separate.
(7) The separation liquid containing monascin and ankaflavin obtained by the separation in step (6) is separated and purified by preparative high performance liquid chromatography (pre-HPLC) by the preparative HPLC (preparative high performance liquid chromatography, pre-HPLC). To separate the components of the anchor flavins.
(8) A method for producing a mixture capable of lowering blood lipid and raising HDL cholesterol, comprising at least a step of mixing monascin and ankaflavin components in a predetermined proportion.
(4.1)ステップ(3)によって、得られた生成物をシリカゲルカラム(silica gel column)に加える、
(4.2)複数種の洗浄液は、順を追って前記シリカゲルカラムに加える、
(4.3)所定の時間ごとに、シリカゲルカラムより流出される分離液を収集し、合計12〜15の分離液を収集する、
(4.4)高速液体クロマトグラフィー(high performance liquid chromatography, HPLC)に、ホトダイオードアレー(photodiode−array, PDA)と組み合わせて、ステップ(4.3)によって、収集された各分離液の分析を行い、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)成分を含める分離液をスクリーニングする、
(4.5)ステップ(4.4)によって、スクリーニングし得られた分離液を一体に混合して、色素分離液を取得する。 The method for producing a mixture capable of lowering blood lipid and raising HDL cholesterol according to claim 31, wherein step (4) further comprises the following steps.
(4.1) Add the product obtained according to step (3) to a silica gel column,
(4.2) A plurality of types of cleaning solutions are added to the silica gel column in order.
(4.3) Collect the separated liquid flowing out from the silica gel column every predetermined time, and collect a total of 12 to 15 separated liquids.
(4.4) The high-performance liquid chromatography (HPLC) was combined with the photodiode array (PDA), and each collected liquid was analyzed by step (4.3). Screening a separate solution containing monascin and ankaflavin components,
(4.5) In step (4.4), the separation liquid obtained by screening is mixed together to obtain a dye separation liquid.
(5.1)ステップ(4)によって、得られた色素分解液をSephadex LH−20カラム(Sephadex LH−20 column)に加える、
(5.2)洗浄液をSephadex LH−20カラムに加える、
(5.3)所定の時間ごとに、Sephadex LH−20カラムより流出される分離液を収集し、合計3〜5の分離液を収集する、
(5.4)高速液体クロマトグラフィー(high performance liquid chromatography, HPLC)に、ホトダイオードアレー(photodiode−array, PDA)と組み合わせて、ステップ(5.3)によって、収集された各分離液の分析を行い、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)成分を含める分離液をスクリーニングする、
(5.5)ステップ(5.4)によって、スクリーニングし得られた分離液を一体に混合して、色素分離液を取得する。 The method for producing a mixture capable of lowering blood lipid and raising HDL cholesterol according to claim 31, wherein step (5) further comprises the following steps.
(5.1) Add the resulting dye decomposition solution to the Sephadex LH-20 column (Sephadex LH-20 column) according to step (4).
(5.2) Add wash to Sephadex LH-20 column.
(5.3) Collect the separation liquid flowing out from the Sephadex LH-20 column every predetermined time, and collect a total of 3 to 5 separation liquids.
(5.4) Analyzing each separated solution collected in step (5.3) in combination with a photodiode array (PDA) in high performance liquid chromatography (HPLC). Screening a separate solution containing monascin and ankaflavin components,
(5.5) In step (5.4), the separation liquid obtained by screening is mixed together to obtain a dye separation liquid.
(6.1)ステップ(5)によって、得られた黄色素分離液をシリカゲルカラムに加える、
(6.2)複数種の洗浄液は、順を追って前記シリカゲルカラムに加える、
(6.3)所定の時間ごとに、シリカゲルカラムより流出される分離液を収集し、合計3〜5の分離液を収集する、
(6.4)高速液体クロマトグラフィー(high performance liquid chromatography, HPLC)に、ホトダイオードアレー(photodiode−array, PDA)と組み合わせて、ステップ(6.3)によって、収集された各分離液の分析を行い、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)成分を含める分離液をスクリーニングする、
(6.5)ステップ(6.4)によって、スクリーニングし得られた分離液を一体に混合して、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)成分を含める分離液を取得する。 The method for producing a mixture capable of lowering blood lipid and raising HDL cholesterol according to claim 31, wherein step (6) further comprises the following steps.
(6.1) Add the yellowish yellow liquor obtained in step (5) to a silica gel column.
(6.2) A plurality of types of cleaning solutions are added to the silica gel column in order.
(6.3) Collect the separated liquid flowing out from the silica gel column every predetermined time, and collect a total of 3 to 5 separated liquids.
(6.4) Analyzing each collected liquid in step (6.3) in combination with a photodiode-array (PDA) on high performance liquid chromatography (HPLC) and in combination with a photodiode array (PDA). Screening a separate solution containing monascin and ankaflavin components,
(6.5) In step (6.4), the separation liquid obtained by screening is mixed together to obtain a separation liquid containing monascin and ankaflavin components.
(7.1)ステップ(6)によって得られた、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)成分を含める分離液は、C18カラムにHPLC及び洗浄液を合わせて、洗浄分離を行う、
(7.2)所定の時間ごとに、C18カラムより流出される分離液を収集し、合計2の分離液を収集する、
(7.3)高速液体クロマトグラフィー(high performance liquid chromatography, HPLC)に、ホトダイオードアレー(photodiode−array, PDA)と組み合わせて、ステップ(7.2)によって、収集された各分離液の分析を行い、モナシン(monascin)とアンカフラビン(ankaflavin)成分を含める分離液をスクリーニングする、 The method for producing a mixture capable of lowering blood lipid and raising HDL cholesterol according to claim 31, wherein step (7) further comprises the following steps.
(7.1) The separation liquid containing monascin and ankaflavin components obtained by step (6) is subjected to washing separation by combining HPLC and washing liquid in a C18 column.
(7.2) Collect the separation liquid flowing out from the C18 column every predetermined time, and collect a total of two separation liquids.
(7.3) Each collected liquid is analyzed by high performance liquid chromatography (HPLC) in combination with photodiode array (PDA) in step (7.2). Screening a separate solution containing monascin and ankaflavin components,
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