JP2012516311A - Uva/uvb線に対する皮膚光保護剤 - Google Patents
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Abstract
Description
ii) 他方では、最も重要な皮膚のクロモフォレと、それとは異なる機構を用いるDAの両方のメラニンが過度の放射エネルギーを排除することができることが重要である。メラニンの場合、過度の放射エネルギーが小さな熱パルスの形態で排除され(「超段階内部変換」)、DAの場合、「光化学抑制」が用いられ、いずれにしろ、生物学的光阻害をブロックすることができることである。
<薄層クロマトグラフィー(TLC)>
TLC技術が、混合物の部分を形成する化合物を分離するために利用された(添付文書1)。得られたAEDAは、以下のような溶剤を使用してシリカゲル60 F254プレート(MERCK)に滴下(spot)された。
●エチルアセテート:メタノール(80対20)
●エチルアセテート:ギ酸:氷酢酸:蒸留水(67対6.4対6.4対18.2)
AEDAに存在するUV吸収特性を有する化合物の吸収性のピークを決定するために、AEDAが200〜400nmのUV/VISのスペクトル分析にかけられた。可視スペクトルが得られるまで、サンプルがエタノールで希釈された状態でSHIMADZU(島津製) UV−160分光光度計が上記目的のために使用された。
<AEDAの抗酸化作用の定量化>
Folinの比色分析試験を行って、AEDAのポリフェノールの量を測定した。この反応は、ヒドロキシル基がベンゼンリングに付着した上記化合物の特性である。Folin−Ciocalteau試薬は、フェノールが存在する場合に黄色から青色に変化した。青色の強度は、765nmの波長の分光光度計によって測定される(添付文書3)。AEDAの抗酸化特性はABTS比色分析法によって評価された。このABTS比色分析法は安定基ABTS+カチオンの連続発生に基づいており、その存在は、734nmの波長(このカチオンが、抗酸化物質との相互作用によって、カチオンの最大吸収ピークの1つとカチオンの変質またはキレート化とを生じさせる波長)においてシステムの吸収性が減少することによって検出される。
<水性AEDAのHPLC基準>
UV検出器によるHPLC分析を実行して、得られたAEDAに存在し得る化合物の基準を得た。HPLCのために、RP−18.5μm 25cmのカラムを有するShimadzu(島津製) SPD−M10AVPダイオードアレイ検出器が使用されており、ここで、メタノール:水の混合物が溶剤として使用されており、サンプルが、0.7〜0.8ml/minの流れ勾配を有するプログラムで動作した。
<Deschampsia Antarcticaの水性抽出物(AEDA)の細胞生存性の調査(細胞サイクル)>
Deschampsia Antarcticaの水性抽出物である(AEDA)の細胞生存性の調査(細胞サイクル)が、HaCaT細胞に紫外線が存在する状態において10mg/mlの投与量で行われた。人間のHaCaTケラチノサイトラインが、10%のウシ胎仔血清を有するDMEM媒体で培養された。
<UVB線下におけるネズミの皮膚に対するDeschampsia Antarcticaの水性抽出物(AEDA)の効果>
a)月曜日から金曜日にかけて、300mg/mlの濃度のDeschampsia Antarcticaを準備して、0.1mlを1日1回投与しつつ、3匹の雄ネズミに対するUVB線の影響を評価するような最初の試験が行われた。中央領域が周辺領域と比較され、その結果、各動物はそれ自体が制御を行っていた。290〜350nmの(広帯域とみなされる)領域において主に313nmで照射を行う、UVC紫外線がフィルタリングされた6*40Wの光源から8cmの部分に動物達を置いた状態で、Zinderと共編者、および他の著者によって示された方法に従って、UVB線(290〜350nm)に曝露した後、形成された紅斑が×印で主観的に評価され、周辺領域(未処理)と中央領域(処理)とを区別して、曝露後に24時間撮影された。結果は以下のようなものであった。
<材料および方法>
20グラムよりも多い重量の40匹の雄ネズミが使用された。40匹の雄ネズミは、収容した後に7日間試験が行われた位置に順応させられた。動物達は、制御温度が22℃であり、相対湿度が50%〜75%であり、新鮮な空気が約10時間毎に取り入れられ、そして12時間毎に明るくなり、暗くなる(7:00から19:00までが明るくなり、19:00から7:00までが暗くなる)サイクルの部屋に置かれた。この期間中およびその実験期間中に、動物達には、標準的な齧歯類用食餌および水道水が任意量与えられた。
<結果>
i)UVB線に曝露されなかった「ブランクの媒介物」(グループ1)のネズミの皮膚の様子は、完全に正常であり、ピンクがかっており、紅斑なしと示された。正常な皮膚組織は組織準備中に観察され、この皮膚組織は、(きめの細かい)正常な角質層、薄い顆粒層および有棘層からなり、細胞の結合が強く、機能的ケラチノサイトの基底細胞層(基底層)には、完全に規則正しい細胞が支持され、1つの細胞において、表皮と皮膚との間の分離部をはっきりとおよび明らかに区切る深い層がグループ化されている。「日焼けした」という用語の定義に適合する細胞の存在はこれらの準備のいずれにおいても観察されなかった。
a)300mg/mlのAEDAを局所的に塗布することにより、UVB線によって生じた紅斑が効果的に減少される。
b)300mg/mlのAEDAを局所的に塗布することにより、日焼けした細胞の出現が95.11%抑制される。
c)この試験で準備されたDeschampsiaの強度は、0.5%のフェルラ酸によって示された強度よりも僅かに優れている。
d)UV光をブロックするのに必要なDeschampsia Antarcticaの濃度は、フェルラ酸よりも10〜50倍高くしなければならない。
Claims (5)
- UVA線およびUVB線に対する皮膚光保護剤において、
研究所で成長させられるかまたは南極地方自体で収集された南極大陸原産のGramineae科の植物から得られた水性抽出物のある含有量を有することを特徴とするUVA線およびUVB線に対する皮膚光保護剤。 - 前記水性抽出物が、Deschampsia Antarcticaという植物由来であることを特徴とする請求項1に記載のUVA線およびUVB線に対する皮膚光保護剤。
- 水性抽出物の300mg/mlの含有量を有することを特徴とする請求項1または2に記載のUVA線およびUVB線に対する皮膚光保護剤。
- 皮膚塗布用のクリーム、ゲル、オイルまたはローションの形態の固体または液体の光保護組成物において、請求項1〜4のいずれか1項に記載の皮膚光保護剤を含むことを特徴とする固体または液体の光保護組成物。
- 請求項1に記載の皮膚光保護剤を得るためのDeschampsia Antarcticaという植物の使用法。
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