JP2012232923A - Short peptide - Google Patents

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Jin Kasahara
仁 笠原
Akira Ikeda
明 池田
Masayuki Taniguchi
正之 谷口
Tetsuo Kato
哲男 加藤
Tomoko Isemura
知子 伊勢村
Hidekazu Saito
英一 斎藤
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Niigata University NUC
Sunrise Industry Co Ltd
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Niigata University NUC
Sunrise Industry Co Ltd
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Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a short peptide having a bacterium proliferation-suppressing activity.SOLUTION: This invention relates to: the short peptides that consist of specific portions, namely, 12-21 amino acid residues of a polypeptide or protein of a human origin, which comprises a predetermined amino acid sequence; or a short peptide that consists of an amino acid sequence in which one or a few amino acid residue are lost, replaced or added, in one short peptide selected from among the short peptides, and has a bacterium proliferation-suppressing activity.

Description

本発明は、口腔ケア用品、衛生保健用品、食料品、飲料品、化粧品類などに、抗菌成分として添加し得る短鎖ペプチドに関する。   The present invention relates to a short-chain peptide that can be added as an antibacterial component to oral care products, sanitary and health products, food products, beverages, cosmetics, and the like.

人は、加齢とともに発音、咀嚼、嚥下、唾液分泌などの口腔機能が低下する。なかでも唾液分泌が低下すると、歯周病や口内炎、齲蝕（虫歯）、口臭といった口腔疾患が増大する。これは、一個人のみならず高齢化社会を迎える日本全体にとっても大きな問題である。   As a person ages, oral functions such as pronunciation, mastication, swallowing, and salivation decrease. In particular, when salivary secretion decreases, oral diseases such as periodontal disease, stomatitis, caries (cavities) and bad breath increase. This is a big problem not only for one individual but also for Japan as a whole aging society.

これまで、口腔ケア用品などに添加される抗菌成分や殺菌成分としては抗生物質やエタノールなどの有機溶媒が使われてきた。しかしながら、抗生物質には、長期間の使用によって細菌が耐性を示すようになったり、エタノールなどの有機溶剤には、体質的に受け付けられない方や幼児などに使用することができなかったりする問題があった。   So far, organic solvents such as antibiotics and ethanol have been used as antibacterial and bactericidal components added to oral care products. However, there are problems that antibiotics become resistant to antibiotics after long-term use, and organic solvents such as ethanol cannot be used by those who are physically unacceptable or infants. was there.

このような状況下、非特許文献１には、本明細書に記載した配列表の配列番号１５（Gly-Pro-Pro-Pro-Gln-Gly-Gly-Arg-Pro-Gln）で表されるアミノ酸配列からなる短鎖ペプチドがPropionibacterium acnes（P. acnes）に対して増殖抑制活性を有する旨記載されている。   Under such circumstances, Non-Patent Document 1 is represented by SEQ ID NO: 15 (Gly-Pro-Pro-Pro-Gln-Gly-Gly-Arg-Pro-Gln) in the sequence listing described in the present specification. It is described that a short chain peptide consisting of an amino acid sequence has growth inhibitory activity against Propionibacterium acnes (P. acnes).

Chun-Ming Huang, Justin W. Torpey, Yu-Tseung Liu, Yun-Ru Chen, Katherine E. Williams, Elizabeth A. Komives, and Richard L. Gallo1, “A Peptide with a ProGln C Terminus in the Human Saliva Peptidome Exerts Bactericidal Activity against Propionibacterium acnes▽”, Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 2008, 52, 5, p.1834-1836Chun-Ming Huang, Justin W. Torpey, Yu-Tseung Liu, Yun-Ru Chen, Katherine E. Williams, Elizabeth A. Komives, and Richard L. Gallo1, “A Peptide with a ProGln C Terminus in the Human Saliva Peptidome Exerts Bactericidal Activity against Propionibacterium acnes ▽ ”, Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 2008, 52, 5, p.1834-1836

しかしながら、非特許文献１の短鎖ペプチド（配列表の配列番号１５（Gly-Pro-Pro-Pro-Gln-Gly-Gly-Arg-Pro-Gln）の短鎖ペプチド）がP. acnes以外の細菌に対して増殖抑制活性を有するか否か明らかでなく、また仮に増殖抑制活性を有していたとしてもその活性が十分でない場合もある。本発明者らが検討したところ、特に、歯周病菌として有名なPorphyromonas gingivalis（P. gingivalis）に対しては増殖抑制活性を有していないことが分かった。   However, a non-patent literature 1 short peptide (short peptide of SEQ ID NO: 15 (Gly-Pro-Pro-Pro-Gln-Gly-Gly-Arg-Pro-Gln)) is a bacterium other than P. acnes. It is not clear whether or not it has growth inhibitory activity, and even if it has growth inhibitory activity, its activity may not be sufficient. As a result of investigations by the present inventors, it has been found that, particularly, Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis), which is famous as a periodontal disease fungus, does not have a growth inhibitory activity.

抗生物質の場合もそうであるが、細菌の種や菌株ごとに効果の有無や多少が必ず生じる。１つの短鎖ペプチドが幅広い抗菌スペクトルを示すことはない。そのため、抗菌成分や殺菌成分として幅広い抗菌作用を得るためには、細菌に対して増殖抑制活性を有する短鎖ペプチドをなるべく多く得る必要がある。   As with antibiotics, there will always be some or no effect for each bacterial species and strain. A single short peptide does not exhibit a broad antimicrobial spectrum. Therefore, in order to obtain a wide range of antibacterial action as an antibacterial component or bactericidal component, it is necessary to obtain as many short-chain peptides as possible that have a growth inhibitory activity against bacteria.

本発明は前記状況に鑑みてなされたものであり、細菌に対して増殖抑制活性を有する短鎖ペプチドを提供することを課題とする。   This invention is made | formed in view of the said situation, and makes it a subject to provide the short chain peptide which has the growth inhibitory activity with respect to bacteria.

前記課題を解決した本発明は以下のようなものである。
〔１〕 以下の（ａ）または（ｂ）の短鎖ペプチド。
（ａ）列表の配列番号２で表されるアミノ酸配列のうちの２８番目から４１番目までのアミノ酸残基、４２番目から５４番目までのアミノ酸残基、５５番目から６７番目までのアミノ酸残基、６８番目から７９番目までのアミノ酸残基、２４番目から４１番目までのアミノ酸残基、４２番目から５８番目までのアミノ酸残基、５９番目から６７番目までのアミノ酸残基または５９番目から７９番目までのアミノ酸残基からなる短鎖ペプチド
（ｂ）前記（ａ）の中から選択されるいずれか一つの短鎖ペプチドにおいて、１若しくは数個のアミノ酸残基が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列からなり、かつ細菌に対して増殖抑制活性を有する短鎖ペプチド The present invention that has solved the above problems is as follows.
[1] The short peptide of the following (a) or (b).
(A) 28th to 41st amino acid residues, 42nd to 54th amino acid residues, 55th to 67th amino acid residues in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 in the column table, 68th to 79th amino acid residues, 24th to 41st amino acid residues, 42nd to 58th amino acid residues, 59th to 67th amino acid residues, or 59th to 79th amino acid residues (B) an amino acid sequence in which one or several amino acid residues are deleted, substituted or added in any one short peptide selected from the above (a) Short peptide having growth inhibitory activity against bacteria

〔２〕 以下の（ｃ）または（ｄ）の短鎖ペプチド。
（ｃ）配列表の配列番号４で表されるアミノ酸配列のうちの２０番目から４３番目までのアミノ酸残基、３１番目から４３番目までのアミノ酸残基、３１番目から４４番目までのアミノ酸残基または２４番目から３１番目までのアミノ酸残基からなる短鎖ペプチド
（ｄ）前記（ｃ）の中から選択されるいずれか一つの短鎖ペプチドにおいて、１若しくは数個のアミノ酸残基が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列からなり、かつ細菌に対して増殖抑制活性を有する短鎖ペプチド [2] The short peptide of the following (c) or (d).
(C) 20th to 43rd amino acid residues, 31st to 43rd amino acid residues, 31st to 44th amino acid residues in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 4 in the Sequence Listing Or a short peptide consisting of amino acid residues from the 24th to the 31st (d) one or several amino acid residues deleted in any one short peptide selected from the above (c), A short peptide consisting of a substituted or added amino acid sequence and having antiproliferative activity against bacteria

〔３〕 以下の（ｅ）または（ｆ）の短鎖ペプチド。
（ｅ）配列表の配列番号６で表されるアミノ酸配列のうちの１４８番目から１５７番目までのアミノ酸残基、９８番目から１０９番目までのアミノ酸残基または１１５番目から１２６番目までのアミノ酸残基からなる短鎖ペプチド
（ｆ）前記（ｅ）の中から選択されるいずれか一つの短鎖ペプチドにおいて、１若しくは数個のアミノ酸残基が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列からなり、かつ細菌に対して増殖抑制活性を有する短鎖ペプチド [3] The short peptide of the following (e) or (f).
(E) 148th to 157th amino acid residues, 98th to 109th amino acid residues, or 115th to 126th amino acid residues in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 6 in the Sequence Listing (F) consisting of an amino acid sequence in which one or several amino acid residues are deleted, substituted or added in any one short peptide selected from the above (e), and Short-chain peptide with growth inhibitory activity against bacteria

〔４〕 以下の（ｇ）または（ｈ）の短鎖ペプチド。
（ｇ）配列表の配列番号１２で表されるアミノ酸配列のうちの７０番目から７９番目までのアミノ酸残基または８０番目から９０番目までのアミノ酸残基からなる短鎖ペプチド
（ｈ）前記（ｇ）の中から選択されるいずれか一つの短鎖ペプチドにおいて、１若しくは数個のアミノ酸残基が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列からなり、かつ細菌に対して増殖抑制活性を有する短鎖ペプチド [4] A short peptide of the following (g) or (h).
(G) a short peptide consisting of amino acid residues 70 to 79 or amino acids 80 to 90 in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 in the sequence listing (h) A short chain consisting of an amino acid sequence in which one or several amino acid residues are deleted, substituted or added, and having a growth inhibitory activity against bacteria peptide

〔５〕 以下の（ｉ）または（ｊ）の短鎖ペプチド。
（ｉ）配列表の配列番号１４で表されるアミノ酸配列のうちの２３４番目から２４７番目までのアミノ酸残基からなる短鎖ペプチド
（ｊ）前記（ｉ）の中から選択されるいずれか一つの短鎖ペプチドにおいて、１若しくは数個のアミノ酸残基が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列からなり、かつ細菌に対して増殖抑制活性を有する短鎖ペプチド [5] A short peptide of the following (i) or (j):
(I) a short peptide consisting of amino acid residues from the 234th to the 247th of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14 in the sequence listing (j) any one selected from the above (i) A short peptide comprising an amino acid sequence in which one or several amino acid residues are deleted, substituted or added, and having a growth inhibitory activity against bacteria

本発明によれば、細菌に対して増殖抑制活性を有する短鎖ペプチドを提供することができる。   According to the present invention, it is possible to provide a short-chain peptide having growth inhibitory activity against bacteria.

Ｎｏ．１〜８、１３〜１８の各短鎖ペプチドのC. albicans NBRC1385に対する増殖抑制活性を示すグラフである。なお、縦軸はＲＬＵ［％］を示す。No. It is a graph which shows the growth inhibitory activity with respect to C. albicans NBRC1385 of each short chain peptide of 1-8, 13-18. The vertical axis indicates RLU [%]. Ｎｏ．１〜８、１３〜１８の各短鎖ペプチドのP. acnes JCM6425に対する増殖抑制活性を示すグラフである。なお、縦軸はＲＬＵ［％］を示す。No. It is a graph which shows the growth inhibitory activity with respect to P. acnes JCM6425 of each short peptide of 1-8, 13-18. The vertical axis indicates RLU [%]. Ｎｏ．１〜８、１３〜１８の各短鎖ペプチドのP. acnes JCM6473に対する増殖抑制活性を示すグラフである。なお、縦軸はＲＬＵ［％］を示す。No. It is a graph which shows the growth inhibitory activity with respect to P. acnes JCM6473 of each short peptide of 1-8, 13-18. The vertical axis indicates RLU [%]. Ｎｏ．１〜８、１３〜１８の各短鎖ペプチドのS. mutans JCM5705Tに対する増殖抑制活性を示すグラフである。なお、縦軸はＲＬＵ［％］を示す。No. It is a graph which shows the growth inhibitory activity with respect to S. mutans JCM5705 T of each short-chain peptide of 1-8, 13-18. The vertical axis indicates RLU [%]. Ｎｏ．１〜８、１３〜１８の各短鎖ペプチドのP. gingivalis JCM8525に対する増殖抑制活性を示すグラフである。なお、縦軸はＲＬＵ［％］を示す。No. It is a graph which shows the growth inhibitory activity with respect to P. gingivalis JCM8525 of each short chain peptide of 1-8, 13-18. The vertical axis indicates RLU [%]. Ｎｏ．１〜４の各短鎖ペプチドのF. nucleatum ATCC 25586を２晩培養した場合についての増殖抑制活性を示すグラフである。なお、横軸は短鎖ペプチドの希釈倍率を示し、縦軸は濁度（ＯＤ650）を示す。No. It is a graph which shows the growth inhibitory activity about the case where F. nucleatum ATCC 25586 of each short chain peptide of 1-4 is cultured for 2 nights. The horizontal axis represents the dilution factor of the short-chain peptides, the vertical axis shows the turbidity (OD 650). Ｎｏ．１〜４の各短鎖ペプチドのF. nucleatum ATCC 25586を２晩培養した場合についての増殖抑制活性を示すグラフである。なお、横軸は短鎖ペプチドの希釈倍率を示し、縦軸は濁度（ＯＤ650）を示す。No. It is a graph which shows the growth inhibitory activity about the case where F. nucleatum ATCC 25586 of each short chain peptide of 1-4 is cultured for 2 nights. The horizontal axis represents the dilution factor of the short-chain peptides, the vertical axis shows the turbidity (OD 650). Ｎｏ．１〜４の各短鎖ペプチドのP. gingivalis ATCC 33277を１晩培養した場合についての増殖抑制活性を示すグラフである。なお、横軸は短鎖ペプチドの希釈倍率を示し、縦軸は濁度（ＯＤ650）を示す。No. It is a graph which shows the growth inhibitory activity about the case where P. gingivalis ATCC 33277 of each short chain peptide of 1-4 is cultured overnight. The horizontal axis represents the dilution factor of the short-chain peptides, the vertical axis shows the turbidity (OD 650). Ｎｏ．１〜４の各短鎖ペプチドのA. actinomycetemcomitans 310aを１晩培養した場合についての増殖抑制活性を示すグラフである。なお、横軸は短鎖ペプチドの希釈倍率を示し、縦軸は濁度（ＯＤ650）を示す。No. It is a graph which shows the growth inhibitory activity about the case where A. actinomycetemcomitans 310a of each short peptide of 1-4 is cultured overnight. The horizontal axis represents the dilution factor of the short-chain peptides, the vertical axis shows the turbidity (OD 650). Ｎｏ．１〜８、１３、１４、１６、１８の各短鎖ペプチドのサイトカイン産生抑制活性の有無を示すグラフである。なお、縦軸はＩＬ−６濃度の相対値［％］を示す。No. It is a graph which shows the presence or absence of the cytokine production inhibitory activity of each short chain peptide of 1-8, 13, 14, 16, 18. The vertical axis indicates the relative value [%] of the IL-6 concentration. Ｎｏ．９〜１２の短鎖ペプチドのC. albicans NBRC1385に対する増殖抑制活性を示すグラフである。なお、縦軸はＲＬＵ［％］を示す。No. It is a graph which shows the growth inhibitory activity with respect to C. albicans NBRC1385 of 9-12 short chain peptides. The vertical axis indicates RLU [%]. Ｎｏ．９の短鎖ペプチドのP. gingivalis JCM8525に対する増殖抑制活性を示すグラフである。なお、横軸は濃度［μＭ］を示し、縦軸はＲＬＵ［％］を示す。No. It is a graph which shows the growth inhibitory activity with respect to P. gingivalis JCM8525 of 9 short-chain peptides. The horizontal axis indicates concentration [μM], and the vertical axis indicates RLU [%]. Ｎｏ．１０の短鎖ペプチドのP. gingivalis JCM8525に対する増殖抑制活性を示すグラフである。なお、横軸は濃度［μＭ］を示し、縦軸はＲＬＵ［％］を示す。No. It is a graph which shows the growth inhibitory activity with respect to P. gingivalis JCM8525 of 10 short chain peptides. The horizontal axis indicates concentration [μM], and the vertical axis indicates RLU [%]. Ｎｏ．１１の短鎖ペプチドのP. gingivalis JCM8525に対する増殖抑制活性を示すグラフである。なお、横軸は濃度［μＭ］を示し、縦軸はＲＬＵ［％］を示す。No. It is a graph which shows the growth inhibitory activity with respect to P. gingivalis JCM8525 of 11 short chain peptides. The horizontal axis indicates concentration [μM], and the vertical axis indicates RLU [%]. Ｎｏ．１２の短鎖ペプチドのP. gingivalis JCM8525に対する増殖抑制活性を示すグラフである。なお、横軸は濃度［μＭ］を示し、縦軸はＲＬＵ［％］を示す。No. It is a graph which shows the growth inhibitory activity with respect to P. gingivalis JCM8525 of 12 short chain peptides. The horizontal axis indicates concentration [μM], and the vertical axis indicates RLU [%]. ４ｍＭのリン酸緩衝液中でのＮｏ．９〜１２の短鎖ペプチドの細胞膜分極作用を示すグラフである。なお、縦軸は蛍光強度（a. u.）を示す。No. 4 in 4 mM phosphate buffer. It is a graph which shows the cell membrane polarization effect of 9-12 short chain peptides. The vertical axis represents fluorescence intensity (a.u.). グッド緩衝液中でのＮｏ．９〜１２の短鎖ペプチドの細胞膜分極作用を示すグラフである。なお、縦軸は蛍光強度（a. u.）を示す。No. in Good Buffer It is a graph which shows the cell membrane polarization effect of 9-12 short chain peptides. The vertical axis represents fluorescence intensity (a.u.).

本発明では、ペプチド合成により特定のアミノ酸配列を有する短鎖ペプチドを得るためにペプチド合成装置を用い、短鎖ペプチドの奏する効果を評価するために各種の微生物やヒトの培養細胞を用いるものであるが、短鎖ペプチドの合成、各種微生物およびヒトの培養細胞の取り扱いや種々の必要な操作について、発明を実施するための形態および実施例に特に説明がない場合には、J. Sambrook, E. F. Fritsch & T. Maniatis (Ed.), Molecular cloning, a laboratory manual (3rd edition), Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, New York (2001); F. M. Ausubel, R. Brent, R. E. Kingston, D. D. Moore, J.G. Seidman, J. A. Smith, K. Struhl (Ed.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons Ltd.などの標準的なプロトコール集に記載の方法、あるいはそれを修飾したり、改変した方法を用いることができる。また、市販の試薬キットや測定装置を用いる場合には、特に説明が無い場合、それらに添付のプロトコールを用いることができる。また、当業者であれば本明細書の記載および前記した標準的なプロトコール集などの記載から容易に本発明を再現することができる。
以下、本発明について、幾つかの実施形態を示して詳細に説明する。 In the present invention, a peptide synthesizer is used to obtain a short chain peptide having a specific amino acid sequence by peptide synthesis, and various microorganisms and human cultured cells are used to evaluate the effect of the short chain peptide. However, J. Sambrook, EF Fritsch, unless otherwise stated in the detailed description and examples of the synthesis of short peptides, handling of various microorganisms and human cultured cells, and various necessary operations. & T. Maniatis (Ed.), Molecular cloning, a laboratory manual (3rd edition), Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, New York (2001); FM Ausubel, R. Brent, RE Kingston, DD Moore, JG Seidman , JA Smith, K. Struhl (Ed.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons Ltd., or other methods described in standard protocol collections, or modified or modified methods thereof may be used. it can. In addition, when using commercially available reagent kits and measuring devices, unless otherwise explained, protocols attached to them can be used. Further, those skilled in the art can easily reproduce the present invention from the description of the present specification and the description of the standard protocol collection described above.
Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to some embodiments.

［第１実施形態］
第１実施形態に係る短鎖ペプチドは、配列表の配列番号２で表されるアミノ酸配列のうちの２８番目から４１番目までのアミノ酸残基（Gly-Pro-Tyr-Pro-Pro-Gly-Pro-Leu-Ala-Pro-Pro-Gln-Pro-Phe）、４２番目から５４番目までのアミノ酸残基（Gly-Pro-Gly-Phe-Val-Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Tyr）、５５番目から６７番目までのアミノ酸残基（Gly-Pro-Gly-Arg-Ile-Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Ala-Pro-Tyr）、６８番目から７９番目までのアミノ酸残基（Gly-Pro-Gly-Ile-Phe-Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Gln-Pro）、２４番目から４１番目までのアミノ酸残基（Arg-Gly-Pro-Arg-Gly-Pro-Tyr-Pro-Pro-Gly-Pro-Leu-Ala-Pro-Pro-Gln-Pro-Phe）、４２番目から５８番目までのアミノ酸残基（Gly-Pro-Gly-Phe-Val-Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Tyr-Gly-Pro-Gly-Arg）、５９番目から６７番目までのアミノ酸残基（Ile-Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Ala-Pro-Tyr）または５９番目から７９番目までのアミノ酸残基（Ile-Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Ala-Pro-Tyr-Gly-Pro-Gly-Ile-Phe-Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Gln-Pro）からなる。 [First Embodiment]
The short chain peptide according to the first embodiment comprises amino acid residues (Gly-Pro-Tyr-Pro-Pro-Gly-Pro) from the 28th position to the 41st position in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 in the Sequence Listing. -Leu-Ala-Pro-Pro-Gln-Pro-Phe), amino acid residues 42 to 54 (Gly-Pro-Gly-Phe-Val-Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Pro -Tyr), amino acid residues 55 to 67 (Gly-Pro-Gly-Arg-Ile-Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Ala-Pro-Tyr), amino acids 68 to 79 Residue (Gly-Pro-Gly-Ile-Phe-Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Gln-Pro), 24th to 41st amino acid residues (Arg-Gly-Pro-Arg-Gly-Pro) -Tyr-Pro-Pro-Gly-Pro-Leu-Ala-Pro-Pro-Gln-Pro-Phe), amino acid residues 42 to 58 (Gly-Pro-Gly-Phe-Val-Pro-Pro) -Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Tyr-Gly-Pro-Gly-Arg), amino acid residues 59 to 67 (Ile-Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Ala-Pro-Tyr) ) Or 59th to 79th Consisting of amino acid residues at (Ile-Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Ala-Pro-Tyr-Gly-Pro-Gly-Ile-Phe-Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Gln-Pro) .

配列表の配列番号２で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチドは、ヒト唾液高プロリンタンパク質Ｐ−Ｂとして知られている。具体的には、Isemura, S., Saitoh, E., and Sanada, K., “Isolation and amino acid sequence of proline-rich peptides of human whole saliva”, J. Biochem. 86, p. 79-86 (1979)や、Isemura, S. and Saitoh, E., “Molecular cloning and sequence analysis of cDNA coding for the precursor of the human salivary proline-rich peptide P-B1”, J. Biochem., 115, p.1101-1106 (1994)や、Isemura, S., “Nucleotide sequence of gene PBII encoding salivary proline-rich protein P-B”, J. Biochem., 127, p.393-398 (2000)にて報告され、ＮＣＢＩ（National Center for Biotechnology Information）のＧｅｎＢａｎｋにおいてアクセッション番号Ｄ２９８３３で登録されている。本明細書に記載した配列表の配列番号１は、そのｃＤＮＡ（complementary DNA）配列を表したものであり、配列番号２は、その翻訳産物を表したものである。   The polypeptide consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 in the sequence listing is known as human saliva high proline protein P-B. Specifically, Isemura, S., Saitoh, E., and Sanada, K., “Isolation and amino acid sequence of proline-rich peptides of human whole saliva”, J. Biochem. 86, p. 79-86 ( 1979), Isemura, S. and Saitoh, E., “Molecular cloning and sequence analysis of cDNA coding for the precursor of the human salivary proline-rich peptide P-B1”, J. Biochem., 115, p.1101- 1106 (1994) and Isemura, S., “Nucleotide sequence of gene PBII encoding salivary proline-rich protein PB”, J. Biochem., 127, p.393-398 (2000), NCBI (National Center for Biotechnology Information) and registered with GenBank as accession number D29833. SEQ ID NO: 1 in the sequence listing described in the present specification represents the cDNA (complementary DNA) sequence, and SEQ ID NO: 2 represents the translation product thereof.

第１実施形態において前記選択肢の中から選択される各短鎖ペプチドは、細菌に対して増殖抑制活性を有している。これは、K. A. Brogdeng, “Antimicrobial peptides: Pore formers or metabolic inhibitors in bacteria?”, Nature Rev. Microbiol., 3: p.238-249 (2005)や、松橋勝巳：抗菌性ペプチドによる先天性免疫機構：蛋白質・核酸・酵素４６巻１４号や、p.2060-2065、L. Otvos, Jr., “The short proline-rich antibacterial peptide family”, CMLS, Cell. Mol. Life Sci., 59, p.1138-1150 (2002)などで示唆されているように、比較的短いアミノ酸配列からなることと、プロリンなどの疎水性のアミノ酸が複数連続して結合していることから、短鎖ペプチドが細菌の細胞質内に入り込み易かったり、細胞膜に孔を開けたりし易いことによるものと考えられる。   Each short peptide selected from the options in the first embodiment has a growth inhibitory activity against bacteria. This is because KA Brogdeng, “Antimicrobial peptides: Pore formers or metabolic inhibitors in bacteria?”, Nature Rev. Microbiol., 3: p.238-249 (2005) and Katsumi Matsuhashi: Innate immune mechanisms by antibacterial peptides: Protein / Nucleic Acid / Enzyme 46/14, p.2060-2065, L. Otvos, Jr., “The short proline-rich antibacterial peptide family”, CMLS, Cell. Mol. Life Sci., 59, p.1138 As suggested by -1150 (2002), short peptides are composed of a relatively short amino acid sequence, and a plurality of hydrophobic amino acids such as proline are linked in series. This is thought to be due to the fact that it is easy to enter the inside or to make a hole in the cell membrane.

つまり、これらの短鎖ペプチド中の親水性部分が、細菌の細胞膜の脂質二重層における外側の親水部と接触した後、短鎖ペプチド中において複数連続して結合した疎水性のアミノ酸（例えば、連続して結合したプロリン）が脂質二重層の疎水部に入り込み、さらにこれが反転するようにして細胞膜の内側の親水部に短鎖ペプチド中の親水性部分が表れ、そのまま細菌の細胞質内に侵入すると考えられる。細菌の細胞内に侵入した短鎖ペプチドは、菌体内の分子シャペロンや酵素と結合して菌体内の代謝系を撹乱し、その結果、細菌に対する増殖抑制活性を有すると考えられる。また、細菌の細胞膜と接触した短鎖ペプチドは、親水性部分を向き合わせるようにして複数集まり、細胞膜に樽孔状またはドーナツ状の孔を開けたり、多くの短鎖ペプチドが細胞膜に取り込まれると、親水性のアミノ酸が外側に配位されて界面活性作用を発揮し、細胞膜を破壊したりして、細胞内容物が外部に流出することにより、細菌に対する増殖抑制活性を有すると考えられる。細菌に対する増殖抑制活性は、例えば、３３．４μＭから１．２ｍＭの範囲で増殖抑制活性を得ることができる。また、０．１９ｍｇ／ｍＬ、０．３８ｍｇ／ｍＬ、０．７５ｍｇ／ｍＬ、１．５ｍｇ／ｍＬなどでも得ることができる。   In other words, a hydrophobic amino acid (for example, a continuous amino acid) in which a plurality of hydrophilic moieties in these short-chain peptides are continuously bonded in the short-chain peptide after contacting the outer hydrophilic portion in the lipid bilayer of the bacterial cell membrane. The proline bound to the lipid bilayer enters the hydrophobic part of the lipid bilayer, and this is reversed so that the hydrophilic part of the short peptide appears in the hydrophilic part inside the cell membrane and enters the cytoplasm of the bacteria as it is. It is done. It is considered that the short peptide that has entered the bacterial cell binds to a molecular chaperone or enzyme in the bacterial cell to disturb the metabolic system in the bacterial cell, and as a result, has a growth-inhibiting activity against bacteria. In addition, short peptides that have contacted bacterial cell membranes are gathered together so that the hydrophilic portions are facing each other, and barrel-shaped or donut-shaped holes are formed in the cell membrane, or many short-chain peptides are taken into the cell membrane. It is considered that a hydrophilic amino acid is coordinated to the outside and exerts a surface-active action, destroys the cell membrane, and the cell contents flow out to the outside, thereby having growth-inhibiting activity against bacteria. The growth inhibitory activity against bacteria can be obtained, for example, in the range of 33.4 μM to 1.2 mM. Moreover, 0.19 mg / mL, 0.38 mg / mL, 0.75 mg / mL, 1.5 mg / mL, etc. can be obtained.

前記した作用によって奏される増殖抑制活性は、グラム陰性菌、グラム陽性菌、真菌などに対して認められる。
このようなグラム陰性菌としては、例えば、Fusobacterium属、Porphyromonas属、Aggregatibacter属、Escherichia属などが挙げられる。
Fusobacterium属としては、例えば、Fusobacterium nucleatum（以下、F. nucleatum）が挙げられ、その一例としてF. nucleatum ATCC 25586が挙げられる。
Porphyromonas属としては、例えば、Porphyromonas gingivalis（以下、P. gingivalis）が挙げられ、その一例として、P. gingivalis JCM8525、P. gingivalis ATCC 33277などが挙げられる。
Aggregatibacter属としては、例えば、Aggregatibacter actinomycetemcomitans（以下、A. actinomycetemcomitans）が挙げられ、その一例として、A. actinomycetemcomitans 310aが挙げられる。
Escherichia属としては、例えば、Escherichia coli（以下、E. coli）が挙げられ、その一例として、E. coli K-12が挙げられる。
また、このようなグラム陽性菌としては、例えば、Propionibacterium属、Streptococcus属などが挙げられる。
Propionibacterium属としては、例えば、Propionibacterium acnes（以下、P. acnes）が挙げられ、その一例として、P. acnes JCM6425、P. acnes JCM6473などが挙げられる。
Streptococcus属としては、例えば、Streptococcus mutans（以下、S. mutans）が挙げられ、その一例として、S. mutans JCM5705Tが挙げられる。
さらに、このような真菌としては、Candida属が挙げられる。具体的にはCandida albicans（C. albicans）が挙げられ、より具体的にはC. albicans NBRC1385が挙げられる。
なお、第１実施形態において前記選択肢の中から選択される短鎖ペプチドはこれら以外の細菌に対しても増殖抑制活性を有し得ることはいうまでもない。 The growth inhibitory activity exerted by the above-described action is observed against gram-negative bacteria, gram-positive bacteria, fungi and the like.
Examples of such gram-negative bacteria include Fusobacterium genus, Porphyromonas genus, Aggregatibacter genus, Escherichia genus and the like.
Examples of the genus Fusobacterium include Fusobacterium nucleatum (hereinafter referred to as F. nucleatum), and an example thereof is F. nucleatum ATCC 25586.
Examples of the genus Porphyromonas include Porphyromonas gingivalis (hereinafter, P. gingivalis), and examples thereof include P. gingivalis JCM8525 and P. gingivalis ATCC 33277.
Examples of the genus Aggregatibacter include Aggregatibacter actinomycetemcomitans (hereinafter, A. actinomycetemcomitans), and an example thereof is A. actinomycetemcomitans 310a.
Examples of the genus Escherichia include Escherichia coli (hereinafter referred to as E. coli), and an example thereof is E. coli K-12.
Examples of such Gram-positive bacteria include the Propionibacterium genus and Streptococcus genus.
Examples of the Propionibacterium genus include Propionibacterium acnes (hereinafter, P. acnes), and examples thereof include P. acnes JCM6425, P. acnes JCM6473, and the like.
Examples of the Streptococcus genus include Streptococcus mutans (hereinafter, S. mutans), and an example thereof is S. mutans JCM5705 T.
In addition, such fungi include the genus Candida. Specific examples include Candida albicans (C. albicans), and more specifically C. albicans NBRC1385.
In addition, it cannot be overemphasized that the short chain peptide selected from the said choice in 1st Embodiment may have growth inhibitory activity also to bacteria other than these.

また、配列表の配列番号２で表されるアミノ酸配列のうちの６８番目から７９番目までのアミノ酸残基、４２番目から５８番目までのアミノ酸残基または５９番目から７９番目までのアミノ酸残基からなる短鎖ペプチドについては、インターロイキン−６（ＩＬ−６）やインターロイキン−８（ＩＬ−８）などのサイトカインの産生を抑制する活性（サイトカイン産生抑制活性）を有する。サイトカインの産生を抑制すると、炎症の抑制を図ることができる。よって、配列表の配列番号２で表されるアミノ酸配列のうちの６８番目から７９番目までのアミノ酸残基、４２番目から５８番目までのアミノ酸残基または５９番目から７９番目までのアミノ酸残基からなる短鎖ペプチドは、かかる活性を得ることを目的として、サイトカインの産生を抑制するために使用することができる。
サイトカイン産生抑制活性は、前記したようにして細胞質内に入り込んだ短鎖ペプチドが、サイトカインの産生に至るまでのいずれかの段階で細胞内伝達系を阻害するために得られると考えられる。 In addition, from the amino acid residues 68 to 79, amino acids 42 to 58 or amino acids 59 to 79 in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 in the sequence listing The short chain peptide has an activity to suppress the production of cytokines such as interleukin-6 (IL-6) and interleukin-8 (IL-8) (cytokine production inhibitory activity). Inhibition of inflammation can be achieved by suppressing cytokine production. Therefore, from the 68th to 79th amino acid residues, the 42nd to 58th amino acid residues, or the 59th to 79th amino acid residues in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 in the Sequence Listing. The short peptide can be used to suppress cytokine production for the purpose of obtaining such activity.
Cytokine production-suppressing activity is considered to be obtained because the short peptide that has entered the cytoplasm as described above inhibits the intracellular transmission system at any stage until cytokine production.

他方、配列表の配列番号２で表されるアミノ酸配列のうちの２８番目から４１番目までのアミノ酸残基または４２番目から５４番目までのアミノ酸残基からなる短鎖ペプチドについては、前記したサイトカインの産生を促進させる活性（サイトカイン産生促進活性）を有する。サイトカインの産生を促進させると、創傷の治癒や免疫応答の促進を図ることができる。よって、配列表の配列番号２で表されるアミノ酸配列のうちの２８番目から４１番目までのアミノ酸残基または４２番目から５４番目までのアミノ酸残基からなる短鎖ペプチドは、かかる活性を得ることを目的として、サイトカインの産生を促進させるために使用することができる。
サイトカイン産生促進活性は、前記したようにして細胞質内に入り込んだ短鎖ペプチドが、サイトカインの産生に至るまでのいずれかの段階で細胞内伝達系を亢進するために得られると考えられる。 On the other hand, for the short chain peptide consisting of the 28th to 41st amino acid residues or the 42nd to 54th amino acid residues in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 in the sequence listing, It has an activity to promote production (cytokine production promoting activity). Promoting cytokine production can promote wound healing and immune response. Therefore, a short-chain peptide consisting of the 28th to 41st amino acid residues or the 42nd to 54th amino acid residues in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 in the sequence listing should have such activity. Can be used to promote the production of cytokines.
It is considered that the cytokine production promoting activity is obtained because the short-chain peptide that has entered the cytoplasm as described above enhances the intracellular transmission system at any stage until the cytokine production.

サイトカイン産生抑制活性またはサイトカイン産生促進活性は、例えば、０．０７５ｍＭ、０．０８４ｍＭ、０．０９４ｍＭ、０．１ｍＭ、０．１１ｍＭ、０．１２ｍＭ０．１３ｍＭ、０．１６ｍＭ、０．１７ｍＭなどの濃度で得ることができる。   Cytokine production suppressing activity or cytokine production promoting activity is, for example, at a concentration of 0.075 mM, 0.084 mM, 0.094 mM, 0.1 mM, 0.11 mM, 0.12 mM 0.13 mM, 0.16 mM, 0.17 mM, etc. Can be obtained.

配列表の配列番号２で表されるアミノ酸配列のうちの２８番目から４１番目までのアミノ酸残基、４２番目から５４番目までのアミノ酸残基、５５番目から６７番目までのアミノ酸残基、６８番目から７９番目までのアミノ酸残基、２４番目から４１番目までのアミノ酸残基、４２番目から５８番目までのアミノ酸残基、５９番目から６７番目までのアミノ酸残基または５９番目から７９番目までのアミノ酸残基からなる短鎖ペプチドの細菌に対する増殖抑制活性は、例えば、ルシフェリン・ルシフェラーゼ反応による発光強度を測定することによって確認することができる。ルシフェリン・ルシフェラーゼ反応は、下記のような反応（１）によって発せられる光の強度を測定して細菌の増殖度を測定するものである。つまり、生きている細菌のＡＴＰ量を光の強度に変換して測定するものである。   28th to 41st amino acid residues, 42nd to 54th amino acid residues, 55th to 67th amino acid residues, 68th amino acid residue in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 in the Sequence Listing To amino acid residue from amino acid residue to amino acid residue from amino acid residue from amino acid position to amino acid residue from amino acid position from amino acid position from amino acid position to amino acid position from amino acid position from amino acid position to amino acid position The growth inhibitory activity of a short peptide consisting of residues on bacteria can be confirmed, for example, by measuring the luminescence intensity by the luciferin-luciferase reaction. The luciferin-luciferase reaction measures the degree of bacterial growth by measuring the intensity of light emitted by the following reaction (1). That is, the amount of ATP of living bacteria is converted into light intensity and measured.

サイトカイン産生抑制活性およびサイトカイン産生促進活性は、ＬＰＳ（Lipopolysaccharide）にて任意の培養細胞、好ましくはヒト培養細胞、より好ましくはヒト大動脈内皮細胞（ＨＡＥＣ；Human Aortic Endothekiak Cells）を刺激するとともに、配列表の配列番号２で表されるアミノ酸配列のうちの２８番目から４１番目までのアミノ酸残基、４２番目から５４番目までのアミノ酸残基、５５番目から６７番目までのアミノ酸残基、６８番目から７９番目までのアミノ酸残基、２４番目から４１番目までのアミノ酸残基、４２番目から５８番目までのアミノ酸残基、５９番目から６７番目までのアミノ酸残基または５９番目から７９番目までのアミノ酸残基からなる短鎖ペプチドを添加し、産生された各種サイトカインを対象としたＥＬＩＳＡ（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay）を行うことで確認できる。なお、培養細胞の培養は、培養細胞に応じた適宜の手法により行うことができ、ＥＬＩＳＡで用いる一次抗体、酵素標識二次抗体、基質、測定装置は市販のものを用いることができる。   Cytokine production inhibitory activity and cytokine production promoting activity stimulate any cultured cells, preferably human cultured cells, more preferably human aortic endothelial cells (HAEC; Human Aortic Endothekiak Cells) with LPS (Lipopolysaccharide). In the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 from the 28th to the 41st amino acid residue, from the 42nd to the 54th amino acid residue, from the 55th to the 67th amino acid residue, from the 68th to the 79th amino acid residue. Amino acid residues from the 24th to 41st amino acids, amino acid residues from the 42nd to 58th amino acids, amino acid residues from the 59th to 67th amino acids, or amino acids from the 59th to 79th amino acids An ELISA (Enzyme-Lin) targeting various cytokines produced by adding a short peptide consisting of ked ImmunoSorbent Assay). The cultured cells can be cultured by an appropriate method according to the cultured cells, and commercially available primary antibodies, enzyme-labeled secondary antibodies, substrates, and measuring devices used in ELISA can be used.

［第２実施形態］
第２実施形態に係る短鎖ペプチドは、配列表の配列番号４で表されるアミノ酸配列のうちの２０番目から４３番目までのアミノ酸残基（Asp-Ser-His-Ala-Lys-Arg-His-His-Gly-Tyr-Lys-Arg-Lys-Phe-His-Glu-Lys-His-His-Ser-His-Arg-Gly-Tyr）、３１番目から４３番目までのアミノ酸残基（Arg-Lys-Phe-His-Glu-Lys-His-His-Ser-His-Arg-Gly-Tyr）、３１番目から４４番目までのアミノ酸残基（Arg-Lys-Phe-His-Glu-Lys-His-His-Ser-His-Arg-Gly-Tyr-Arg）または２４番目から３１番目までのアミノ酸残基（Lys-Arg-His-His-Gly-Tyr-Lys-Arg）からなる。 [Second Embodiment]
The short chain peptide according to the second embodiment includes amino acid residues (Asp-Ser-His-Ala-Lys-Arg-His) from the 20th position to the 43rd position in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 4 in the sequence listing. -His-Gly-Tyr-Lys-Arg-Lys-Phe-His-Glu-Lys-His-His-Ser-His-Arg-Gly-Tyr), 31st to 43rd amino acid residues (Arg-Lys) -Phe-His-Glu-Lys-His-His-Ser-His-Arg-Gly-Tyr), 31st to 44th amino acid residues (Arg-Lys-Phe-His-Glu-Lys-His-His -Ser-His-Arg-Gly-Tyr-Arg) or 24th to 31st amino acid residues (Lys-Arg-His-His-Gly-Tyr-Lys-Arg).

配列表の配列番号４で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチドは、ヒト唾液に含まれるヒスタチン３（ｈｉｓｔａｔｉｎ ３（ＨＴＮ３））として知られている。具体的には、Sabatini, L. M., and Azen, E. A., “Histatins, a family of salivary histidine-rich proteins, are encoded by at least two loci (HIS1 and HIS2)”, Biochem. Biophys. Res. Commun. 160 (2), p.495-502 (1989)や、vanderSpek, J. C., Offner, G. D., Troxler, R. F. and Oppenheim, F. G., “Molecular cloning of human submandibular histatins”, Arch. Oral Biol. 35 (2), p.137-143 (1990)や、vanderSpek, J. C., Wyandt, H. E., Skare, J. C., Milunsky, A., Oppenheim, F. G., and Troxler, R. F., “Localization of the genes for histatins to human chromosome 4q13 and tissue distribution of the mRNAs”, Am. J. Hum. Genet. 45 (3), p.381-387 (1989)や、Troxler, R. F., Offner, G. D., Xu, T., Vanderspek, J. C. and Oppenheim, F. G., “Structural relationship between human salivary histatins”, J. Dent. Res. 69 (1), p.2-6 (1990)などで報告され、ＮＣＢＩのＧｅｎＢａｎｋにおいてアクセッション番号ＮＭ＿０００２００で登録されている。本明細書に記載した配列表の配列番号３は、そのｃＤＮＡ配列を表したものであり、配列番号４は、その翻訳産物を表したものである。   A polypeptide consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 4 in the sequence listing is known as histatin 3 (Histin 3 (HTN3)) contained in human saliva. Specifically, Sabatini, LM, and Azen, EA, “Histatins, a family of salivary histidine-rich proteins, are encoded by at least two loci (HIS1 and HIS2)”, Biochem. Biophys. Res. Commun. 160 ( 2), p.495-502 (1989), vanderSpek, JC, Offner, GD, Troxler, RF and Oppenheim, FG, “Molecular cloning of human submandibular histatins”, Arch. Oral Biol. 35 (2), p. 137-143 (1990), vanderSpek, JC, Wyandt, HE, Skare, JC, Milunsky, A., Oppenheim, FG, and Troxler, RF, “Localization of the genes for histatins to human chromosome 4q13 and tissue distribution of the mRNAs ”, Am. J. Hum. Genet. 45 (3), p.381-387 (1989) and Troxler, RF, Offner, GD, Xu, T., Vanderspek, JC and Oppenheim, FG,“ Structural relationship between human salivary histatins ”, J. Dent. Res. 69 (1), p.2-6 (1990), etc. and registered under NCBI GenBank with accession number NM — 000200. In the sequence listing described in the present specification, SEQ ID NO: 3 represents the cDNA sequence, and SEQ ID NO: 4 represents the translation product.

第２実施形態において前記選択肢の中から選択される短鎖ペプチドも第１実施形態で説明した細菌のうちの少なくとも１つに対して増殖抑制活性を有する。これは、第１実施形態で説明したのと同様の理由によって得られると考えられる。細菌に対する増殖抑制活性は、例えば、３３．４μＭから１．２ｍＭの範囲で増殖抑制活性を得ることができる。また、０．１９ｍｇ／ｍＬ、０．３８ｍｇ／ｍＬ、０．７５ｍｇ／ｍＬ、１．５ｍｇ／ｍＬなどでも得ることができる。   The short peptide selected from the options in the second embodiment also has growth inhibitory activity against at least one of the bacteria described in the first embodiment. This is considered to be obtained for the same reason as described in the first embodiment. The growth inhibitory activity against bacteria can be obtained, for example, in the range of 33.4 μM to 1.2 mM. Moreover, 0.19 mg / mL, 0.38 mg / mL, 0.75 mg / mL, 1.5 mg / mL, etc. can be obtained.

これらの短鎖ペプチドの細菌に対する増殖抑制活性は、第１実施形態で説明したのと同様、ルシフェリン・ルシフェラーゼ反応による発光強度を測定することによって確認することができる。   The growth inhibitory activity of these short-chain peptides on bacteria can be confirmed by measuring the luminescence intensity by the luciferin-luciferase reaction, as described in the first embodiment.

また、細胞膜に孔が開いたり、細胞膜が破壊されたりしたか否かは、ｄｉＳＣ3（５）（3, 3' - Dipropylthiadicarbocyanine iodide）を用いた蛍光強度の測定により確認することができる。ｄｉＳＣ3（５）は、蛍光染料である。従って、一旦、細菌にｄｉＳＣ3（５）を取り込ませ、測定対象となる物質を添加して蛍光強度が増加するか否かを測定することにより、細胞膜の破壊が起きたか否かを確認することができる。つまり、測定対象となる物質の添加によって細胞膜が破壊されると、菌体内に取り込まれたｄｉＳＣ3（５）がそこから菌体外に放出されるので、その蛍光強度を測定することで細胞膜に孔が開いたか否かの確認をすることができる。 Whether or not pores have been opened in the cell membrane or the cell membrane has been destroyed can be confirmed by measuring fluorescence intensity using diSC 3 (5) (3, 3′-dipropylthiadicarbocyanine iodide). diSC 3 (5) is a fluorescent dye. Therefore, once the diSC 3 (5) is taken into the bacteria and the substance to be measured is added to determine whether the fluorescence intensity increases, it is confirmed whether or not the cell membrane has been destroyed. Can do. In other words, when the cell membrane is destroyed by the addition of a substance to be measured, diSC 3 (5) taken into the microbial cell is released from the microbial cell from there, so that the fluorescence intensity is measured to the cell membrane. It can be confirmed whether or not the hole has been opened.

第２実施形態において前記選択肢の中から選択される各短鎖ペプチドは、Imatani, T., Kato, T., Minaguchi, K., and Okuda, K., “Histatin 5 inhibits inflammatory cytokine induction from human gingival fibroblasts by Porphyromonas gingivalis”, Oral Microbiol. Immunol., 15 p.378-382 (2000)によれば、さらに、サイトカイン産生抑制活性を有することが示唆される。   In the second embodiment, each short peptide selected from the options is Imatani, T., Kato, T., Minaguchi, K., and Okuda, K., “Histatin 5 inhibits inflammatory cytokine induction from human gingival. According to fibroblasts by Porphyromonas gingivalis ”, Oral Microbiol. Immunol., 15 p. 378-382 (2000), it is further suggested that it has a cytokine production inhibitory activity.

［第３実施形態］
第３実施形態に係る短鎖ペプチドは、配列表の配列番号６で表されるアミノ酸配列のうちの１４８番目から１５７番目までのアミノ酸残基（Gly-Pro-Pro-Pro-Gln-Gly-Gly-Arg-Pro-Gln）、９８番目から１０９番目までのアミノ酸残基（Gly-Gly-His-Pro-Pro-Pro-Pro-Gln-Gly-Arg-Pro-Gln）または１１５番目から１２６番目までのアミノ酸残基（Gly-Gly-His-Pro-Arg-Pro-Pro-Arg-Gly-Arg-Pro-Gln）からなる。 [Third Embodiment]
The short peptide according to the third embodiment includes amino acid residues 148 to 157 (Gly-Pro-Pro-Pro-Gln-Gly-Gly) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 6 in the sequence listing. -Arg-Pro-Gln), amino acid residues 98 to 109 (Gly-Gly-His-Pro-Pro-Pro-Pro-Gln-Gly-Arg-Pro-Gln) or 115 to 126 Amino acid residues (Gly-Gly-His-Pro-Arg-Pro-Pro-Arg-Gly-Arg-Pro-Gln).

配列表の配列番号６で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチドは、ヒト高プロリンタンパク質ＨａｅＩＩＩサブファミリー１（ＰＲＨ１）として知られている。具体的には、Maeda, N., Kim, H. S., Azen, E. A. and Smithies, O., “Differential RNA splicing and post-translational cleavages in the human salivary proline-rich protein gene system”, J. Biol. Chem., 260 (20), p.11123-11130 (1985)にて詳細に報告され、ＮＣＢＩのＧｅｎＢａｎｋにおいてアクセッション番号ＮＭ＿００６２５０で登録されている。本明細書に記載した配列表の配列番号５は、そのｃＤＮＡ配列を表したものであり、配列番号６は、その翻訳産物を表したものである。   The polypeptide consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 6 in the sequence listing is known as human high proline protein HaeIII subfamily 1 (PRH1). Specifically, Maeda, N., Kim, HS, Azen, EA and Smithies, O., “Differential RNA splicing and post-translational cleavages in the human salivary proline-rich protein gene system”, J. Biol. Chem. 260 (20), p. 11123-11130 (1985), and is registered under NCBI GenBank with accession number NM_006250. SEQ ID NO: 5 in the sequence listing described in the present specification represents the cDNA sequence, and SEQ ID NO: 6 represents the translation product.

なお、第３実施形態において前記選択肢の中から選択されるいずれの短鎖ペプチドも、ヒト高プロリンタンパク質ＨａｅＩＩＩサブファミリー２（ＰＲＨ２）のトランスクリプトバリアント（転写産物変異体）１およびトランスクリプトバリアント２の翻訳産物における該当部分とアミノ酸配列が共通する。   In the third embodiment, any short chain peptide selected from the options described above is a transcript variant (transcript variant) 1 or transcript variant 2 of human high proline protein HaeIII subfamily 2 (PRH2). The amino acid sequence is common to the corresponding part in the translation product.

ここで、ヒト高プロリンタンパク質ＨａｅＩＩＩサブファミリー２（ＰＲＨ２）のトランスクリプトバリアント１は、Wong, R. S., Hofmann, T. and Bennick, A., “The complete primary structure of a proline-rich phosphoprotein from human saliva”, J. Biol. Chem., 254 (11), p.4800-4808 (1979)や、Isemura, S., Saitoh, E. and Sanada,K., “The amino acid sequence of a salivary proline-rich peptide, P-C, and its relation to a salivary proline-rich phosphoprotein, protein C”, J. Biochem., 87 (4), p.1071-1077 (1980)や、Maeda, N., Kim, H. S., Azen, E. A. and Smithies, O., “Differential RNA splicing and post-translational cleavages in the human salivary proline-rich protein gene system”, J. Biol. Chem. 260 (20), p.11123-11130 (1985)などにて報告され、ＮＣＢＩのＧｅｎＢａｎｋにおいてアクセッション番号ＮＭ＿００５０４２で登録されている。本明細書に記載した配列表の配列番号７は、そのｃＤＮＡ配列を表したものであり、配列番号８は、その翻訳産物を表したものである。   Here, transcript variant 1 of human high proline protein HaeIII subfamily 2 (PRH2) is Wong, RS, Hofmann, T. and Bennick, A., “The complete primary structure of a proline-rich phosphoprotein from human saliva” , J. Biol. Chem., 254 (11), p.4800-4808 (1979) and Isemura, S., Saitoh, E. and Sanada, K., “The amino acid sequence of a salivary proline-rich peptide , PC, and its relation to a salivary proline-rich phosphoprotein, protein C ”, J. Biochem., 87 (4), p.1071-1077 (1980), Maeda, N., Kim, HS, Azen, EA and Smithies, O., “Differential RNA splicing and post-translational cleavages in the human salivary proline-rich protein gene system”, J. Biol. Chem. 260 (20), p.11123-11130 (1985) It is registered with accession number NM_005042 in GenBank of NCBI. In the sequence listing described in the present specification, SEQ ID NO: 7 represents the cDNA sequence, and SEQ ID NO: 8 represents the translation product thereof.

また、ヒト高プロリンタンパク質ＨａｅＩＩＩサブファミリー２（ＰＲＨ２）のトランスクリプトバリアント２も、Wong, R. S., Hofmann, T. and Bennick, A., “The complete primary structure of a proline-rich phosphoprotein from human saliva”, J. Biol. Chem., 254 (11), p.4800-4808 (1979)や、Isemura, S., Saitoh, E. and Sanada,K., “The amino acid sequence of a salivary proline-rich peptide, P-C, and its relation to a salivary proline-rich phosphoprotein, protein C”, J. Biochem., 87 (4), p.1071-1077 (1980)や、Maeda, N., Kim, H. S., Azen, E. A. and Smithies, O., “Differential RNA splicing and post-translational cleavages in the human salivary proline-rich protein gene system”, J. Biol. Chem. 260 (20), p.11123-11130 (1985)などにて報告され、ＮＣＢＩのＧｅｎＢａｎｋにおいてアクセッション番号ＮＭ＿００１１１０２１３で登録されている。本明細書に記載した配列表の配列番号９は、そのｃＤＮＡ配列を表したものであり、配列番号１０は、その翻訳産物を表したものである。   Transcript variant 2 of human high proline protein HaeIII subfamily 2 (PRH2) is also described in Wong, RS, Hofmann, T. and Bennick, A., “The complete primary structure of a proline-rich phosphoprotein from human saliva”, J. Biol. Chem., 254 (11), p.4800-4808 (1979) and Isemura, S., Saitoh, E. and Sanada, K., “The amino acid sequence of a salivary proline-rich peptide, PC, and its relation to a salivary proline-rich phosphoprotein, protein C ”, J. Biochem., 87 (4), p.1071-1077 (1980), Maeda, N., Kim, HS, Azen, EA and Smithies, O., “Differential RNA splicing and post-translational cleavages in the human salivary proline-rich protein gene system”, J. Biol. Chem. 260 (20), p.11123-11130 (1985) , NCBI GenBank registered with accession number NM_001110213. In the sequence listing described in the present specification, SEQ ID NO: 9 represents the cDNA sequence, and SEQ ID NO: 10 represents the translation product.

配列表の配列番号８および配列番号１０で表されるポリペプチドは、配列表の配列番号７および配列番号９で表されるそれぞれのｃＤＮＡ配列をみて分かるように、異なる転写産物から翻訳されたものであるが、同一のアミノ酸配列からなるポリペプチドである。
そして、配列表の配列番号６で表されるアミノ酸配列のうちの１４８番目から１５７番目までのアミノ酸残基、９８番目から１０９番目までのアミノ酸残基または１１５番目から１２６番目までのアミノ酸残基と、配列表の配列番号８および配列番号１０で表されるアミノ酸配列のうちの１４８番目から１５７番目までのアミノ酸残基、９８番目から１０９番目までのアミノ酸残基または１１５番目から１２６番目までのアミノ酸残基とは、前記したように同一のアミノ酸配列からなる。
そのため、配列表の配列番号６で表されるアミノ酸配列のうちの１４８番目から１５７番目までのアミノ酸残基、９８番目から１０９番目までのアミノ酸残基または１１５番目から１２６番目までのアミノ酸残基からなる短鎖ペプチドは、配列番号８または配列番号１０で表されるポリペプチドの一部であるともいえる。 The polypeptides represented by SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 10 in the sequence listing are translated from different transcripts as can be seen from the respective cDNA sequences represented by SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 9 in the sequence listing. However, they are polypeptides having the same amino acid sequence.
And 148th to 157th amino acid residues, 98th to 109th amino acid residues, or 115th to 126th amino acid residues in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 6 in the sequence listing; , Amino acid residues from 148 to 157, amino acids from 98 to 109, or amino acids from 115 to 126 in the amino acid sequences represented by SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 10 in the Sequence Listing A residue consists of the same amino acid sequence as described above.
Therefore, from the 148th to 157th amino acid residues, the 98th to 109th amino acid residues, or the 115th to 126th amino acid residues in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 6 in the sequence listing The short peptide can be said to be a part of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 8 or SEQ ID NO: 10.

配列表の配列番号６で表されるアミノ酸配列のうちの１４８番目から１５７番目までのアミノ酸残基、９８番目から１０９番目までのアミノ酸残基または１１５番目から１２６番目までのアミノ酸残基からなる短鎖ペプチドも第１実施形態で説明した細菌のうちの少なくとも１つに対して増殖抑制活性を有する。これは、第１実施形態で説明したのと同様の理由によって得られると考えられる。細菌に対する増殖抑制活性は、例えば、３３．４μＭから１．２ｍＭの範囲で増殖抑制活性を得ることができる。また、０．１９ｍｇ／ｍＬ、０．３８ｍｇ／ｍＬ、０．７５ｍｇ／ｍＬ、１．５ｍｇ／ｍＬなどでも得ることができる。   A short consisting of amino acid residues 148 to 157, amino acids 98 to 109 or amino acids 115 to 126 in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 6 in the Sequence Listing The chain peptide also has a growth inhibitory activity against at least one of the bacteria described in the first embodiment. This is considered to be obtained for the same reason as described in the first embodiment. The growth inhibitory activity against bacteria can be obtained, for example, in the range of 33.4 μM to 1.2 mM. Moreover, 0.19 mg / mL, 0.38 mg / mL, 0.75 mg / mL, 1.5 mg / mL, etc. can be obtained.

これらの短鎖ペプチドの細菌に対する増殖抑制活性は、第１実施形態で説明したのと同様、ルシフェリン・ルシフェラーゼ反応による発光強度を測定することによって確認することができる。   The growth inhibitory activity of these short-chain peptides on bacteria can be confirmed by measuring the luminescence intensity by the luciferin-luciferase reaction, as described in the first embodiment.

第３実施形態で示される、配列表の配列番号６で表されるアミノ酸配列のうちの１４８番目から１５７番目までのアミノ酸残基または９８番目から１０９番目までのアミノ酸残基からなる短鎖ペプチドについては、ＩＬ−６やＩＬ−８などのサイトカインの産生を抑制する活性（サイトカイン産生抑制活性）を有する。サイトカインの産生を抑制すると、炎症の抑制を図ることができる。よって、配列表の配列番号６で表されるアミノ酸配列のうちの１４８番目から１５７番目までのアミノ酸残基または９８番目から１０９番目までのアミノ酸残基からなる短鎖ペプチドは、かかる活性を得ることを目的として、サイトカインの産生を抑制するために使用することができる。サイトカイン産生抑制活性は、例えば、０．０７５ｍＭ、０．０８４ｍＭ、０．０９４ｍＭ、０．１ｍＭ、０．１１ｍＭ、０．１２ｍＭ０．１３ｍＭ、０．１６ｍＭ、０．１７ｍＭなどの濃度で得ることができる。   About the short peptide consisting of amino acid residues from the 148th to 157th amino acids or the 98th to 109th amino acid residues in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 6 in the sequence listing shown in the third embodiment Has an activity to suppress the production of cytokines such as IL-6 and IL-8 (cytokine production inhibitory activity). Inhibition of inflammation can be achieved by suppressing cytokine production. Therefore, a short-chain peptide consisting of amino acid residues from 148 to 157 or amino acids from 98 to 109 in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 6 in the sequence listing can obtain such activity. Can be used to suppress the production of cytokines. Cytokine production inhibitory activity can be obtained, for example, at concentrations of 0.075 mM, 0.084 mM, 0.094 mM, 0.1 mM, 0.11 mM, 0.12 mM 0.13 mM, 0.16 mM, 0.17 mM, and the like.

これらの短鎖ペプチドのサイトカイン産生抑制活性は、第１実施形態で説明したのと同様、ＬＰＳで培養細胞を刺激するとともにこれらの短鎖ペプチドを添加し、産生された各種サイトカインを対象としたＥＬＩＳＡを行うことで確認することができる。   As described in the first embodiment, the cytokine production inhibitory activity of these short-chain peptides is an ELISA for various cytokines produced by stimulating cultured cells with LPS and adding these short-chain peptides. You can confirm by doing.

［第４実施形態］
第４実施形態に係る短鎖ペプチドは、配列表の配列番号１２で表されるアミノ酸配列のうちの７０番目から７９番目までのアミノ酸残基（Gly-Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Gly-Lys-Pro-Gln）または８０番目から９０番目までのアミノ酸残基（Gly-Pro-Pro-Pro-Gln-Gly-Gly-Asn-Lys-Pro-Gln）からなる。 [Fourth Embodiment]
The short-chain peptide according to the fourth embodiment includes amino acid residues (Gly-Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Pro-Gly) from the 70th position to the 79th position in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 in the Sequence Listing. -Lys-Pro-Gln) or amino acid residues 80 to 90 (Gly-Pro-Pro-Pro-Gln-Gly-Gly-Asn-Lys-Pro-Gln).

配列表の配列番号１２で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチドは、ヒト高プロリンタンパク質ＢｓｔＮＩ サブファミリー２（ＰＲＢ２）として知られている。具体的には、Isemura, S., Saitoh, E. and Sanada, K., “Fractionation and characterization of basic proline-rich peptides of human parotid saliva and the amino acid sequence of proline-rich peptide P-E”, J. Biochem., 91 (6), p.2067-2075 (1982)や、Saitoh, E., Isemura, S., and Sanada, K., “Complete amino acid sequence of a basic praline-rich peptide of P-F, from human parotid saliva”, J. Biochem., 93, p.883-888 (1983)や、Maeda, N., Kim, H. S., Azen, E. A. and Smithies, O., “Differential RNA splicing and post-translational cleavages in the human salivary proline-rich protein gene system”, J. Biol. Chem., 260 (20), p.11123-11130 (1985)などで報告され、ＮＣＢＩのＧｅｎＢａｎｋにおいてアクセッション番号ＮＭ＿００６２４８で登録されている。本明細書に記載した配列表の配列番号１１は、そのｃＤＮＡ配列を表したものであり、配列番号１２は、その翻訳産物を表したものである。   The polypeptide consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 in the sequence listing is known as human high proline protein BstNI subfamily 2 (PRB2). Specifically, Isemura, S., Saitoh, E. and Sanada, K., “Fractionation and characterization of basic proline-rich peptides of human parotid saliva and the amino acid sequence of proline-rich peptide PE”, J. Biochem , 91 (6), p.2067-2075 (1982), Saitoh, E., Isemura, S., and Sanada, K., “Complete amino acid sequence of a basic praline-rich peptide of PF, from human parotid saliva ”, J. Biochem., 93, p.883-888 (1983) and Maeda, N., Kim, HS, Azen, EA and Smithies, O.,“ Differential RNA splicing and post-translational cleavages in the human salivary proline-rich protein gene system ", J. Biol. Chem., 260 (20), p.11123-11130 (1985), etc., and registered under the accession number NM_006248 in GenBank of NCBI. In the sequence listing described in the present specification, SEQ ID NO: 11 represents the cDNA sequence, and SEQ ID NO: 12 represents the translation product.

なお、同一のポリペプチド（翻訳産物）中において、７０番目から７９番目までのアミノ酸配列と全く同じアミノ酸配列が、１３１番目から１４０番目、１９３番目から２０２番目、２５５番目から２６４番目および３１７番目から３２６番目に存在する。
また、同一のポリペプチド（翻訳産物）中において、８０番目から９０番目までのアミノ酸配列と全く同じアミノ酸配列が、１４１番目から１５１番目、２０３番目から２１３番目、２６５番目から２７５番目および３２７番目から３３７番目に存在する。 In the same polypeptide (translation product), the same amino acid sequence as the amino acid sequence from the 70th to the 79th amino acid sequence is from the 131st to the 140th, the 193rd to the 202nd, the 255th to the 264th and the 317th. It is 326th.
Also, in the same polypeptide (translation product), the amino acid sequence identical to the amino acid sequence from the 80th to the 90th is from the 141st to 151st, from the 203rd to 213th, from the 265th to 275th and from the 327th It is 337th.

第４実施形態において前記選択肢の中から選択される短鎖ペプチドも第１実施形態で説明した細菌のうちの少なくとも１つに対して増殖抑制活性を有する。これは、第１実施形態で説明したのと同様の理由によって得られると考えられる。細菌に対する増殖抑制活性は、例えば、３３．４μＭから１．２ｍＭの範囲で増殖抑制活性を得ることができる。また、０．１９ｍｇ／ｍＬ、０．３８ｍｇ／ｍＬ、０．７５ｍｇ／ｍＬ、１．５ｍｇ／ｍＬなどでも得ることができる。   The short peptide selected from the options in the fourth embodiment also has growth inhibitory activity against at least one of the bacteria described in the first embodiment. This is considered to be obtained for the same reason as described in the first embodiment. The growth inhibitory activity against bacteria can be obtained, for example, in the range of 33.4 μM to 1.2 mM. Moreover, 0.19 mg / mL, 0.38 mg / mL, 0.75 mg / mL, 1.5 mg / mL, etc. can be obtained.

これらの短鎖ペプチドの細菌に対する増殖抑制活性は、第１実施形態で説明したのと同様、ルシフェリン・ルシフェラーゼ反応による発光強度を測定することによって確認することができる。   The growth inhibitory activity of these short-chain peptides on bacteria can be confirmed by measuring the luminescence intensity by the luciferin-luciferase reaction, as described in the first embodiment.

また、配列表の配列番号１２で表されるアミノ酸配列のうちの７０番目から７９番目までのアミノ酸残基からなる短鎖ペプチドについては、ＩＬ−６やＩＬ−８などのサイトカインの産生を抑制する活性（サイトカイン産生抑制活性）を有する。サイトカインの産生を抑制すると、炎症の抑制を図ることができる。よって、配列表の配列番号１２で表されるアミノ酸配列のうちの７０番目から７９番目までのアミノ酸残基からなる短鎖ペプチドは、かかる効果を得ることを目的として、サイトカインの産生を抑制するために使用することができる。サイトカイン産生抑制活性は、例えば、０．０７５ｍＭ、０．０８４ｍＭ、０．０９４ｍＭ、０．１ｍＭ、０．１１ｍＭ、０．１２ｍＭ０．１３ｍＭ、０．１６ｍＭ、０．１７ｍＭなどの濃度で得ることができる。   Moreover, about the short peptide consisting of the 70th to 79th amino acid residues in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 in the sequence listing, the production of cytokines such as IL-6 and IL-8 is suppressed. Has activity (cytokine production inhibitory activity). Inhibition of inflammation can be achieved by suppressing cytokine production. Therefore, a short-chain peptide consisting of amino acid residues from the 70th to the 79th amino acid sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 in the sequence listing is for suppressing the production of cytokines for the purpose of obtaining such an effect. Can be used for Cytokine production inhibitory activity can be obtained, for example, at concentrations of 0.075 mM, 0.084 mM, 0.094 mM, 0.1 mM, 0.11 mM, 0.12 mM 0.13 mM, 0.16 mM, 0.17 mM, and the like.

この短鎖ペプチドによるサイトカイン産生抑制活性は、第１実施形態で説明したのと同様、ＬＰＳで培養細胞を刺激するとともにこれらの短鎖ペプチドを添加し、産生された各種サイトカインを対象としたＥＬＩＳＡを行うことで確認することができる。   As described in the first embodiment, this short-chain peptide suppresses cytokine production by stimulating cultured cells with LPS, adding these short-chain peptides, and conducting ELISA for various cytokines produced. It can be confirmed by doing.

［第５実施形態］
第５実施形態に係る短鎖ペプチドは、配列表の配列番号１４で表されるアミノ酸配列のうちの２３４番目から２４７番目までのアミノ酸残基（Gly-Arg-Pro-Pro-Arg-Pro-Ala-Gln-Gly-Gln-Gln-Pro-Pro-Gln）からなる。 [Fifth Embodiment]
The short chain peptide according to the fifth embodiment includes amino acid residues 234 to 247 (Gly-Arg-Pro-Pro-Arg-Pro-Ala) in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14 in the Sequence Listing. -Gln-Gly-Gln-Gln-Pro-Pro-Gln).

配列表の配列番号１４で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチドは、ヒト唾液高プロリンタンパク質前駆体（ＰＲＢ４）として知られている。具体的には、Saitoh, E., Isemura, S., Sanada, K., “Complete amino acid sequence of a basic roline-rich peptide P-D, from human parotid saliva”, J. Biochem., 93, p.495-502 (1983)や、Maeda, N., Kim, H. S., Azen, E. A. and Smithies, O., “Differential RNA splicing and post-translational cleavages in the human salivary proline-rich protein gene system”, J. Biol. Chem., 260 (20), p.11123-11130 (1985)にて報告され、ＮＣＢＩのＧｅｎＢａｎｋにおいてアクセッション番号Ｋ０３２０７で登録されている。本明細書に記載した配列表の配列番号１３は、そのｃＤＮＡ配列を表したものであり、配列番号１４は、その翻訳産物を表したものである。   A polypeptide consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14 in the sequence listing is known as a human salivary proline protein precursor (PRB4). Specifically, Saitoh, E., Isemura, S., Sanada, K., “Complete amino acid sequence of a basic roline-rich peptide PD, from human parotid saliva”, J. Biochem., 93, p.495 -502 (1983), Maeda, N., Kim, HS, Azen, EA and Smithies, O., “Differential RNA splicing and post-translational cleavages in the human salivary proline-rich protein gene system”, J. Biol. Chem., 260 (20), p.11123-11130 (1985), and registered under the accession number K03207 in GenBank of NCBI. In the sequence listing described in the present specification, SEQ ID NO: 13 represents the cDNA sequence, and SEQ ID NO: 14 represents the translation product.

配列表の配列番号１４で表されるアミノ酸配列のうちの２３４番目から２４７番目までのアミノ酸残基からなる短鎖ペプチドも第１実施形態で説明した細菌のうちの少なくとも１つに対して増殖抑制活性を有する。これは、第１実施形態で説明したのと同様の理由によって得られると考えられる。細菌に対する増殖抑制活性は、例えば、３３．４μＭから１．２ｍＭの範囲で増殖抑制活性を得ることができる。また、０．１９ｍｇ／ｍＬ、０．３８ｍｇ／ｍＬ、０．７５ｍｇ／ｍＬ、１．５ｍｇ／ｍＬなどでも得ることができる。   A short-chain peptide consisting of amino acid residues from the 234th to the 247th of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14 in the sequence listing is also inhibited from growing against at least one of the bacteria described in the first embodiment. Has activity. This is considered to be obtained for the same reason as described in the first embodiment. The growth inhibitory activity against bacteria can be obtained, for example, in the range of 33.4 μM to 1.2 mM. Moreover, 0.19 mg / mL, 0.38 mg / mL, 0.75 mg / mL, 1.5 mg / mL, etc. can be obtained.

この短鎖ペプチドの細菌に対する増殖抑制活性は、第１実施形態で説明したのと同様、ルシフェリン・ルシフェラーゼ反応による発光強度を測定することによって確認することができる。   The growth inhibitory activity against bacteria of this short chain peptide can be confirmed by measuring the luminescence intensity by the luciferin-luciferase reaction as described in the first embodiment.

また、配列表の配列番号１４で表されるアミノ酸配列のうちの２３４番目から２４７番目までのアミノ酸残基からなる短鎖ペプチドは、ＩＬ−６やＩＬ−８などのサイトカインの産生を抑制する活性（サイトカイン産生抑制活性）を有する。サイトカインの産生を抑制すると、炎症の抑制を図ることができる。よって、配列表の配列番号１４で表されるアミノ酸配列のうちの２３４番目から２４７番目までのアミノ酸残基からなる短鎖ペプチドは、かかる効果を得ることを目的として、サイトカインの産生を抑制するために使用することができる。サイトカイン産生抑制活性またはサイトカイン産生促進活性は、例えば、０．０７５ｍＭ、０．０８４ｍＭ、０．０９４ｍＭ、０．１ｍＭ、０．１１ｍＭ、０．１２ｍＭ０．１３ｍＭ、０．１６ｍＭ、０．１７ｍＭなどの濃度で得ることができる。   In addition, a short chain peptide consisting of amino acid residues from the 234th to the 247th in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14 in the sequence listing is an activity that suppresses the production of cytokines such as IL-6 and IL-8. (Cytokine production inhibitory activity). Inhibition of inflammation can be achieved by suppressing cytokine production. Therefore, a short-chain peptide consisting of amino acid residues from the 234th to the 247th of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14 in the Sequence Listing is intended to suppress cytokine production for the purpose of obtaining such an effect. Can be used for Cytokine production suppressing activity or cytokine production promoting activity is, for example, at a concentration of 0.075 mM, 0.084 mM, 0.094 mM, 0.1 mM, 0.11 mM, 0.12 mM 0.13 mM, 0.16 mM, 0.17 mM, etc. Can be obtained.

この短鎖ペプチドによるサイトカイン産生抑制活性は、第１実施形態で説明したのと同様、ＬＰＳで培養細胞を刺激するとともにこれらの短鎖ペプチドを添加し、産生された各種サイトカインを対象としたＥＬＩＳＡを行うことで確認することができる。   As described in the first embodiment, this short-chain peptide suppresses cytokine production by stimulating cultured cells with LPS, adding these short-chain peptides, and conducting ELISA for various cytokines produced. It can be confirmed by doing.

以上の第１実施形態から第５実施形態で説明した各短鎖ペプチドには、それぞれの実施形態で説明した短鎖ペプチドのアミノ酸残基のうちの１若しくは数個のアミノ酸残基が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列からなり、かつ細菌に対して増殖抑制活性を有する短鎖ペプチドと実質的に同一の増殖抑制活性を有する短鎖ペプチド、さらにはこれに加えてサイトカイン産生抑制活性またはサイトカイン産生促進活性を有する短鎖ペプチドも含まれる。   In each of the short peptides described in the first to fifth embodiments, one or several amino acid residues among the amino acid residues of the short peptides described in the respective embodiments are deleted. A short-chain peptide consisting of a substituted or added amino acid sequence and having substantially the same growth-inhibitory activity as a short-chain peptide having growth-inhibitory activity against bacteria, and in addition to this, a cytokine production-inhibiting activity or cytokine Short-chain peptides having production promoting activity are also included.

以上に説明した第１実施形態から第５実施形態に係る短鎖ペプチドは、全て市販のペプチド合成装置にて製造することができる。そして、合成した短鎖ペプチドは、市販の高速液体クロマトグラフにて適宜の条件で精製することができる。本発明に係る短鎖ペプチドはいずれもアミノ酸残基の数が少ないので、容易かつ安価にこれを製造することができる。   All the short peptides according to the first to fifth embodiments described above can be produced with a commercially available peptide synthesizer. And the synthesized short chain peptide can be purified under appropriate conditions by a commercially available high performance liquid chromatograph. Since all the short peptides according to the present invention have a small number of amino acid residues, they can be produced easily and inexpensively.

合成して精製された第１〜５実施形態に係る短鎖ペプチドは、口腔ケア用品、衛生保健用品、食料品、飲料品、化粧品類などに、抗菌成分として添加することができる。   The short peptide according to the first to fifth embodiments synthesized and purified can be added as an antibacterial component to oral care products, hygiene and health products, food products, beverage products, cosmetics, and the like.

次に、本発明の効果を確認した実施例について説明する。   Next, examples in which the effects of the present invention have been confirmed will be described.

表１に示すＮｏ．１〜１８で表される各アミノ酸配列からなる短鎖ペプチドをペプチド合成装置（Ｔｈｕｒａｍｅｄ社製Ｔｅｔｒａｓ １０６）を用いて合成し、カラム（Ａｋｚｏｎｏｂｅｌ社製Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８）を装着したＨＰＬＣ（ＳＨＩＭＡＤＺＵ社製１０Ａ ｓｙｓｔｅｍ）にて下記精製条件で精製した。
なお、Ｎｏ．１〜８の短鎖ペプチドは、ＮＣＢＩのＧｅｎＢａｎｋにおいてアクセッション番号Ｄ２９８３３で登録されているｃＤＮＡ配列とその翻訳産物のアミノ酸配列に基づいて設計した。
Ｎｏ．９〜１２の短鎖ペプチドは、ＮＣＢＩのＧｅｎＢａｎｋにおいてアクセッション番号ＮＭ＿０００２００で登録されているｃＤＮＡ配列とその翻訳産物のアミノ酸配列に基づいて設計した。
Ｎｏ．１３〜１５の短鎖ペプチドは、ＮＣＢＩのＧｅｎＢａｎｋにおいてアクセッション番号ＮＭ＿００６２５０、ＮＭ＿００５０４２またはＮＭ＿００１１１０２１３で登録されているｃＤＮＡ配列とその翻訳産物のアミノ酸配列に基づいて設計した。
Ｎｏ．１６、１７の短鎖ペプチドは、ＮＣＢＩのＧｅｎＢａｎｋにおいてアクセッション番号ＮＭ＿００６２４８で登録されているｃＤＮＡ配列とその翻訳産物のアミノ酸配列に基づいて設計した。
Ｎｏ．１８の短鎖ペプチドは、ＮＣＢＩのＧｅｎＢａｎｋにおいてアクセッション番号Ｋ０３２０７で登録されているｃＤＮＡ配列とその翻訳産物のアミノ酸配列に基づいて設計した。
なお、表１中の短鎖ペプチドのアミノ酸配列については、アミノ酸を三文字記号で表している。 No. shown in Table 1. A short peptide consisting of each amino acid sequence represented by 1 to 18 was synthesized using a peptide synthesizer (Tetras 106 manufactured by Theuramed) and HPLC (10A system manufactured by SHIMADZU) equipped with a column (Kromasil C18 manufactured by Akzonobel). ) Under the following purification conditions.
In addition, No. Short peptides 1 to 8 were designed based on the cDNA sequence registered under the accession number D29833 in GenBank of NCBI and the amino acid sequence of the translation product.
No. 9-12 short peptides were designed based on the cDNA sequence registered under the accession number NM — 000200 in NCBI GenBank and the amino acid sequence of the translation product.
No. 13 to 15 short peptides were designed based on the cDNA sequence registered under the accession numbers NM_006250, NM_005042 or NM_001110213 in GenBank of NCBI and the amino acid sequence of the translation product.
No. The short peptides of 16 and 17 were designed based on the cDNA sequence registered under the accession number NM_006248 in NCBI GenBank and the amino acid sequence of the translation product.
No. Eighteen short peptides were designed based on the cDNA sequence registered under the accession number K03207 in GenBank of NCBI and the amino acid sequence of the translation product.
In addition, about the amino acid sequence of the short chain peptide in Table 1, an amino acid is represented by the three letter symbol.

《精製条件》
・溶媒Ａ：０．１質量％トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル
・溶媒Ｂ：０．１質量％トリフルオロ酢酸を含む水
・流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
・波長：２２０ｎｍ
・インジェクション容量：２０μＬ
・グラジエント条件：０．０１ｍｉｎ（溶媒Ａ１０％、溶媒Ｂ９０％）→２５．０ｍｉｎ（溶媒Ａ３５％、溶媒Ｂ６５％）→２５．１ｍｉｎ（溶媒Ａ１００％、溶媒Ｂ０％）→３０ｍｉｎ（ＳＴＯＰ） 《Purification conditions》
Solvent A: acetonitrile containing 0.1% by mass trifluoroacetic acid Solvent B: water containing 0.1% by mass trifluoroacetic acid Flow rate: 1.0 mL / min
・ Wavelength: 220nm
・ Injection volume: 20μL
Gradient conditions: 0.01 min (solvent A 10%, solvent B 90%) → 25.0 min (solvent A 35%, solvent B 65%) → 25.1 min (solvent A 100%, solvent B 0%) → 30 min (STOP)

〔１〕Ｎｏ．１〜８、１３〜１８の短鎖ペプチドの抗菌性
まず、表１に示すＮｏ．１〜１８の短鎖ペプチドのうち、Ｎｏ．１〜８、１３〜１８のアミノ酸配列からなる短鎖ペプチドについて、E. coli K-12、P. acnes JCM6425、P. acnes JCM6473、S. mutans JCM5705T、C. albicans NBRC1385、P. gingivalis JCM8525に対する抗菌スペクトルを作成した。抗菌スペクトルは次のようにして作成した。 [1] No. Antibacterial properties of short-chain peptides 1 to 8 and 13 to 18 Among the 1 to 18 short peptides, No. 1 For short peptides consisting of amino acid sequences of 1-8 and 13-18, against E. coli K-12, P. acnes JCM6425, P. acnes JCM6473, S. mutans JCM5705 T , C. albicans NBRC1385, P. gingivalis JCM8525 An antibacterial spectrum was created. The antibacterial spectrum was prepared as follows.

Ｎｏ．１〜８、１３〜１８の短鎖ペプチドは、濃度が１．２ｍＭとなるように各菌体の培養培地に加えて培養した。
ここで、E. coli K-12は、ＬＢ培地（１Ｌ中、ポリペプトン１０．０ｇ、酵母エキス５．０ｇ、塩化ナトリウム１０．０ｇ、ｐＨ７．５）を用いて好気条件下、３７℃で４〜６時間静置培養した。
P. acnes JCM6425およびP. acnes JCM6473は、ＧＡＭ培地（１Ｌ中、ペプトン１０．０ｇ、ダイズペプトン３．０ｇ、プロテオーゼペプトン１０．０ｇ、消化血清末１３．５ｇ、酵母エキス５．０ｇ、肉エキス２．２ｇ、肝臓エキス１．２ｇ、ブドウ糖３．０ｇ、リン酸二水素カリウム２．５ｇ、塩化ナトリウム３．０ｇ、溶性デンプン５．０ｇ、Ｌ−システイン塩酸塩０．３ｇ、チオグリコール酸ナトリウム０．３ｇ、ｐＨ７．１）を用いて好気条件下、３７℃で２４時間静置培養した。
S. mutans JCM5705Tは、ＢＨＩ培地（１Ｌ中、仔ウシ脳浸出物１２．５ｇ、ウシ心筋浸出物５．０ｇ、プロテオースペプトン１０．０ｇ、ブドウ糖２．０ｇ、塩化ナトリウム５．０ｇ、リン酸水素二ナトリウム２．５ｇ、ｐＨ７．４）を用いて好気条件下、３７℃で６〜１２時間静置培養した。
C. albicans NBRC1385は、ＹＭ培地（１Ｌ中、ポリペプトン１０．０ｇ、酵母エキス３．０ｇ、モルトエキス３．０ｇ、ｐＨ６．２）を用いて好気条件下、２５℃で２４〜４０時間静置培養した。
P. gingivalis JCM8525は、変法ＧＡＭ培地（１Ｌ中、ペプトン５．０ｇ、ダイズペプトン３．０ｇ、プロテオーゼペプトン５．０ｇ、消化血清末１０．０ｇ、酵母エキス２．５ｇ、肉エキス２．２ｇ、肝臓エキス１．２ｇ、ブドウ糖０．５ｇ、溶性デンプン５．０ｇ、Ｌ−トリプトファン０．２ｇ、Ｌ−システイン塩酸塩０．３ｇ、チオグリコール酸ナトリウム０．３ｇ、Ｌ−アルギニン１．０ｇ、ビタミンＫ１５ｍｇ、ヘミン１０ｍｇ、リン酸二水素カリウム２．５ｇ、塩化ナトリウム３．０ｇ、ｐＨ７．３）を用いて嫌気条件下、３７℃で４８〜５４時間静置培養した。
なお、各菌体について、培養培地に短鎖ペプチドを添加しないで同様の条件で静置培養し、これをコントロール（Control）とした。 No. The short-chain peptides 1 to 8 and 13 to 18 were cultured in addition to the culture medium of each cell so that the concentration was 1.2 mM.
Here, E. coli K-12 is LB medium (1 g of polypeptone 10.0 g, yeast extract 5.0 g, sodium chloride 10.0 g, pH 7.5) at 37 ° C. under aerobic conditions. Static culture was performed for ˜6 hours.
P. acnes JCM6425 and P. acnes JCM6473 are GAM medium (1 g of peptone 10.0 g, soybean peptone 3.0 g, proteose peptone 10.0 g, digested serum powder 13.5 g, yeast extract 5.0 g, meat extract 2.2 g, liver extract 1.2 g, glucose 3.0 g, potassium dihydrogen phosphate 2.5 g, sodium chloride 3.0 g, soluble starch 5.0 g, L-cysteine hydrochloride 0.3 g, sodium thioglycolate 0 .3 g, pH 7.1) was subjected to static culture at 37 ° C. for 24 hours under aerobic conditions.
S. mutans JCM5705 T consists of BHI medium (1 L, calf brain exudate 12.5 g, bovine myocardial exudate 5.0 g, proteose peptone 10.0 g, glucose 2.0 g, sodium chloride 5.0 g, phosphate Static culture was carried out at 37 ° C. for 6 to 12 hours under aerobic conditions using disodium hydrogen 2.5 g, pH 7.4).
C. albicans NBRC1385 was allowed to stand at 25 ° C. for 24 to 40 hours under aerobic condition using YM medium (1 L, 10.0 g polypeptone, 3.0 g yeast extract, 3.0 g malt extract, pH 6.2). Cultured.
P. gingivalis JCM8525 is a modified GAM medium (1 g of peptone 5.0 g, soybean peptone 3.0 g, proteose peptone 5.0 g, digested serum powder 10.0 g, yeast extract 2.5 g, meat extract 2.2 g. , Liver extract 1.2 g, glucose 0.5 g, soluble starch 5.0 g, L-tryptophan 0.2 g, L-cysteine hydrochloride 0.3 g, sodium thioglycolate 0.3 g, L-arginine 1.0 g, vitamin K15 mg, hemin 10 mg, potassium dihydrogen phosphate 2.5 g, sodium chloride 3.0 g, pH 7.3) were subjected to static culture at 37 ° C. for 48 to 54 hours under anaerobic conditions.
In addition, about each microbial cell, stationary culture was carried out on the same conditions, without adding a short chain peptide to a culture medium, and this was made into control (Control).

前記条件で培養した後、各培養培地から１００μＬ分取して９６ウェルマイクロプレートの各ウェルに加えた。次いで、添付の説明書に従い、ルシフェールＡＴＰ消去試薬セット（Ｋｉｋｋｏｍａｎ社製）を用いて試料中に含まれる細胞外ＡＴＰ（アデノシン三リン酸）を消去した。次いで、添付の説明書に従い、ＢａｃＴｉｔｅｒ‐ＧｌｏTM（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）を用いて生菌数を測定した。なお、ＢａｃＴｉｔｅｒ‐ＧｌｏTMは、生菌のＡＴＰ量に基づいてルシフェリン・ルシフェラーゼ反応により生菌数を測定することのできるキットである。発光強度は、マイクロプレートリーダーＡＲＶＯTM（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社製）を用いて測定した。
図１〜５に、Ｎｏ．１〜８、１３〜１８の各短鎖ペプチドを添加して培養した菌体について、コントロールのルシフェラーゼ活性を１００％とした場合の相対発光量（ＲＬＵ［％］）をグラフにして示した。なお、いずれの図においても縦軸はＲＬＵ［％］を示す。 After culturing under the above conditions, 100 μL was taken from each culture medium and added to each well of a 96-well microplate. Subsequently, extracellular ATP (adenosine triphosphate) contained in the sample was erased using a lucifer ATP elimination reagent set (manufactured by Kikkoman) according to the attached instruction. Subsequently, the viable cell count was measured using BacTiter-Glo ™ (Promega) according to the attached instruction. BacTiter-Glo ™ is a kit that can measure the number of viable bacteria by luciferin-luciferase reaction based on the amount of ATP in live bacteria. The luminescence intensity was measured using a microplate reader ARVO ™ (manufactured by PerkinElmer).
1-5, no. The relative luminescence amount (RLU [%]) when the luciferase activity of the control was taken as 100% for the cells cultured by adding each of the short peptides 1 to 8 and 13 to 18 was shown as a graph. In any figure, the vertical axis represents RLU [%].

図１に示すとおり、C. albicans NBRC1385については、Ｎｏ．１〜８、１３、１５、１８の短鎖ペプチドに増殖抑制活性が認められた。
また、図２に示すとおり、P. acnes JCM6425については、Ｎｏ．７の短鎖ペプチドに増殖抑制活性が認められた。
図３に示すとおり、P. acnes JCM6473については、Ｎｏ．１〜７、１３〜１８の短鎖ペプチドに増殖抑制活性が認められた。
図４に示すとおり、S. mutans JCM5705Tについては、Ｎｏ．１〜８、１３〜１８のすべての短鎖ペプチドに増殖抑制活性が認められた。
図５に示すとおり、P. gingivalis JCM8525については、Ｎｏ．５、１５の短鎖ペプチドに増殖抑制活性が認められた。 For C. albicans NBRC1385, as shown in FIG. Growth inhibitory activity was observed for the short peptides 1 to 8, 13, 15, and 18.
In addition, as shown in FIG. Growth inhibition activity was observed in the short peptide of No. 7.
As for P. acnes JCM6473, as shown in FIG. Growth inhibitory activity was observed in the short peptides 1-7 and 13-18.
As shown in FIG. 4, for S. mutans JCM5705 T , no. Growth inhibitory activity was observed in all short-chain peptides 1 to 8 and 13 to 18.
As shown in FIG. 5, for P. gingivalis JCM8525, no. Growth inhibitory activity was observed in the short peptides of 5 and 15.

〔２〕Ｎｏ．１〜４の短鎖ペプチドの抗菌性
ここでは、F. nucleatum ATCC 25586と、P. gingivalis ATCC 33277と、A. actinomycetemcomitans 310aを用いてＮｏ．１〜４の短鎖ペプチドの抗菌性について調べた。
Ｎｏ．１〜４の短鎖ペプチドの濃度が１．５ｍｇ／ｍＬとなるように各菌体の培養培地を調製した。そして、これを用いて１／２倍希釈（０．７５ｍｇ／ｍＬ）、１／４倍希釈（０．３８ｍｇ／ｍＬ）および１／８倍希釈（０．１９ｍｇ／ｍＬ）した培養培地を調製するとともに、短鎖ペプチドを添加しない０ｍｇ／ｍＬ（便宜上、０倍希釈という。）の培養培地も調製した。さらに、溶媒の影響を確認するため、短鎖ペプチドの入っていない溶媒を前記希釈倍率に応じて添加したコントロール（Ｃｏｎｔｒｏｌ）に係る培養培地も調製した。調製した各培養培地を用いて各菌体を培養した。 [2] No. Antibacterial activity of 1 to 4 short peptides Here, F. nucleatum ATCC 25586, P. gingivalis ATCC 33277, and A. actinomycetemcomitans 310a The antibacterial properties of 1-4 short peptides were examined.
No. The culture medium of each microbial cell was prepared so that the density | concentration of 1-4 short chain peptides might be 1.5 mg / mL. Using this, a culture medium diluted 1 / 2-fold (0.75 mg / mL), 1 / 4-fold (0.38 mg / mL) and 1 / 8-fold (0.19 mg / mL) is prepared. At the same time, a culture medium of 0 mg / mL (referred to as 0-fold dilution for convenience) without addition of a short peptide was also prepared. Furthermore, in order to confirm the influence of the solvent, a culture medium according to a control (Control) to which a solvent containing no short-chain peptide was added according to the dilution ratio was also prepared. Each microbial cell was cultured using each prepared culture medium.

なお、F. nucleatum ATCC 25586は、Todd Hewitt培地（１Ｌ中、牛心臓抽出物５００ｇ、ペプトン２０ｇ、ブドウ糖２ｇ、塩化ナトリウム２ｇ）を用いて嫌気条件下、３７℃で２晩（４１時間）または３晩（６５時間）培養した。
P. gingivalis ATCC 33277は、ヘミンおよびビタミンＫ3を添加したTrypticase soy broth培地（１Ｌ中、カゼイン１７ｇ、酵素分解大豆エキス３ｇ、ブドウ糖２．５ｇ、塩化ナトリウム５ｇ、ビタミンＫ１５ｍｇ、ヘミン１０ｍｇ、ｐＨ７．４））を用いて嫌気条件下、３７℃で１晩（１７時間）培養した。
A. actinomycetemcomitans 310aは、酵母エキス添加Todd Hewitt培地（１Ｌ中、牛心臓抽出物５００ｇ、ペプトン２０ｇ、ブドウ糖２ｇ、塩化ナトリウム２ｇ、酵母エキス１０ｇ）を用いて嫌気条件下、３７℃で１晩（１７時間）培養した。 F. nucleatum ATCC 25586 is Todd Hewitt medium (500 g bovine heart extract, 20 g peptone, 2 g glucose, 2 g sodium chloride in 1 L) under anaerobic conditions at 37 ° C. for 2 nights (41 hours) or 3 Cultured in the evening (65 hours).
P. gingivalis ATCC 33277 is Trypticase soy broth medium supplemented with hemin and vitamin K 3 (1 g of casein 17 g, enzyme-degraded soy extract 3 g, glucose 2.5 g, sodium chloride 5 g, vitamin K 15 mg, hemin 10 mg, pH 7.4 )) Under anaerobic conditions at 37 ° C. overnight (17 hours).
A. actinomycetemcomitans 310a is a Todd Hewitt medium supplemented with yeast extract (500 g bovine heart extract, 20 g peptone, 2 g glucose, 2 g sodium chloride, 10 g yeast extract in 1 L) under anaerobic conditions at 37 ° C. overnight (17 Time).

前記条件で培養した後、マイクロプレートリーダー（モレキュラーデバイス社製ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５を用いて各培養培地の濁度（ＯＤ650）を測定した。
図６〜９に、Ｎｏ．１〜４の各短鎖ペプチドの希釈倍率と濁度（ＯＤ650）を示す。なお。いずれの図も横軸は短鎖ペプチドの希釈倍率を示し、縦軸は濁度を示す。 After culturing under the above conditions, the turbidity (OD 650 ) of each culture medium was measured using a microplate reader (SpectraMax M5 manufactured by Molecular Devices).
In FIGS. The dilution rate and turbidity (OD 650 ) of each short peptide of 1-4 are shown. Note that. In each figure, the horizontal axis represents the dilution ratio of the short peptide, and the vertical axis represents the turbidity.

図６は、F. nucleatum ATCC 25586を２晩培養した場合についての増殖抑制活性を示している。図６に示すとおり、Ｎｏ．１〜４のいずれの短鎖ペプチドについても、短鎖ペプチドの添加濃度が高くなるにつれて細菌の増殖が抑制され、濁度が低下した。つまり、増殖抑制活性が認められた。特に、Ｎｏ．４の短鎖ペプチドについては、低い添加濃度から高い増殖抑制活性が認められた。
図７は、F. nucleatum ATCC 25586を２晩培養した場合についての増殖抑制活性を示している。図７に示すとおり、Ｎｏ．４の短鎖ペプチドについては、０．３８〜０．７５ｍｇ／ｍＬの間で濁度が大きく低下した。つまり、高い増殖抑制活性が認められた。Ｎｏ．１〜３の短鎖ペプチドも１．５ｍｇ／ｍＬの濃度で添加することにより、Ｎｏ．４の短鎖ペプチドと同程度の増殖抑制活性を得ることができた。
図８は、P. gingivalis ATCC 33277を１晩培養した場合についての増殖抑制活性を示している。図８に示すとおり、Ｎｏ．１〜４のいずれの短鎖ペプチドも添加濃度が高くなるにつれて、濁度が同様に低下した。つまり、いずれの短鎖ペプチドにおいても増殖抑制活性が認められた。
図９は、A. actinomycetemcomitans 310aを１晩培養した場合についての増殖抑制活性を示している。図９に示すとおり、Ｎｏ．１〜４のいずれの短鎖ペプチドも添加濃度が高くなるにつれて、濁度が同様に低下した。つまり、いずれの短鎖ペプチドにおいても増殖抑制活性が認められた。 FIG. 6 shows the growth inhibitory activity when F. nucleatum ATCC 25586 was cultured for 2 nights. As shown in FIG. For any of the short peptides 1 to 4, the growth of bacteria was suppressed and the turbidity decreased as the concentration of the short peptide added increased. That is, growth inhibitory activity was observed. In particular, no. About 4 short chain peptides, the high growth inhibitory activity was recognized from the low addition density | concentration.
FIG. 7 shows the growth inhibitory activity when F. nucleatum ATCC 25586 was cultured for 2 nights. As shown in FIG. For the short peptide of 4, the turbidity was greatly reduced between 0.38 and 0.75 mg / mL. That is, high growth inhibitory activity was recognized. No. No. 1 to 3 short peptides were also added at a concentration of 1.5 mg / mL. It was possible to obtain the same growth inhibitory activity as that of the short chain peptide No. 4.
FIG. 8 shows the growth inhibitory activity when P. gingivalis ATCC 33277 was cultured overnight. As shown in FIG. The turbidity similarly decreased as the addition concentration of any of the short peptides 1 to 4 increased. That is, growth inhibitory activity was observed in any short chain peptide.
FIG. 9 shows the growth inhibitory activity when A. actinomycetemcomitans 310a was cultured overnight. As shown in FIG. The turbidity similarly decreased as the addition concentration of any of the short peptides 1 to 4 increased. That is, growth inhibitory activity was observed in any short chain peptide.

〔３〕サイトカイン産生抑制活性
次に、表１に示すＮｏ．１〜１８の短鎖ペプチドのうち、Ｎｏ．１〜８、１３、１４、１６、１８のアミノ酸配列からなる短鎖ペプチドについて、サイトカイン産生抑制活性の有無について確認した。サイトカイン産生抑制活性の有無は次のようにして確認した。 [3] Cytokine production inhibitory activity Among the 1 to 18 short peptides, No. 1 About the short chain peptide which consists of an amino acid sequence of 1-8,13,14,16,18, the presence or absence of cytokine production suppression activity was confirmed. The presence or absence of cytokine production inhibitory activity was confirmed as follows.

４８ウェルプレートTissue Culture Treated Polystyrene（ＩＷＡＫＩ社製）の各ウェルに分注したＨｕＭｅｄｉａ−ＥＧ２（ＫＵＲＡＢＯ社製）にて、ＫＵＲＡＢＯ社製ヒト大動脈内皮細胞（凍結ＨＡＥＣ（Human Aortic Endothelial Cells）；細胞ストレイン番号４９６２８６または５Ｃ１１４３）を培養した。培養は、当初５×１０3Ｃｅｌｌｓ／ｃｍ2となるように細胞をまき、３７℃、５％ＣＯ2の条件下、１週間程度培養した。そして、コンフルエントな状態であることを確認した後、A. actinomycetemcomitans Y4株から精製したＬＰＳ（Lipopolysaccharide）を１０ｎｇ／ｍＬから１０μｇ／ｍＬ用いて前記培養細胞を刺激するとともに、Ｎｏ．１〜８、１３、１４、１６、１８の短鎖ペプチドをそれぞれ表２に示す終濃度となるよう添加して、ＥＬＩＳＡによりサイトカインであるインターロイキン−６（ＩＬ−６）の濃度［ｐｇ／ｍＬ］を測定した。なお、ＥＬＩＳＡは、Ｅｎｄｏｇｅｎ（登録商標） Ｈｕｍａｎ ＩＬ−６ ＥＬＩＳＡ ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて行った。ＥＬＩＳＡによる一連の操作を終えた後、マルチモード・マイクロプレートリーダーＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５（モレキュラーデバイス社製）を用いて４５０ｎｍの吸光度（ＯＤ450）を測定した。 Human median aortic endothelial cells (Kurabo) (freezing HAEC (Human Aortic Endothelial Cells); cell strain number) in HuMedia-EG2 (KURABO) dispensed to each well of 48-well plate Tissue Culture Treated Polystyrene (IWAKI) 486286 or 5C1143) were cultured. The cells were initially seeded at 5 × 10 3 Cells / cm 2 and cultured at 37 ° C. and 5% CO 2 for about 1 week. After confirming that the cells were confluent, the cultured cells were stimulated with 10 ng / mL to 10 μg / mL of LPS (Lipopolysaccharide) purified from A. actinomycetemcomitans Y4 strain. Short peptides of 1-8, 13, 14, 16, 18 were added to the final concentrations shown in Table 2, respectively, and the concentration of interleukin-6 (IL-6), which is a cytokine, was measured by ELISA [pg / mL. ] Was measured. The ELISA was performed using Endogen (registered trademark) Human IL-6 ELISA kit (manufactured by Thermo Scientific). After a series of operations by ELISA, the absorbance (OD 450 ) at 450 nm was measured using a multimode microplate reader SpectraMax M5 (manufactured by Molecular Devices).

図１０に、Ｎｏ．１〜８、１３、１４、１６、１８の各短鎖ペプチドのサイトカイン産生抑制活性の有無を示す。なお、図１０は、短鎖ペプチドの効果について、ＬＰＳのみを添加したＨＡＥＣのＩＬ−６濃度を１００％とした場合における相対値［％］で示している。なお、図１０において縦軸はＩＬ−６濃度の相対値［％］を示す。
図１０に示すように、Ｎｏ．４、６〜８、１４、１６、１８の短鎖ペプチドにサイトカイン産生抑制活性が認められた。
他方、Ｎｏ．１〜３、５の短鎖ペプチドにサイトカイン産生促進活性が認められた。 In FIG. The presence or absence of the cytokine production inhibitory activity of each short peptide of 1-8, 13, 14, 16, 18 is shown. FIG. 10 shows the effect of the short peptide as a relative value [%] when the IL-6 concentration of HAEC to which only LPS is added is 100%. In FIG. 10, the vertical axis indicates the relative value [%] of the IL-6 concentration.
As shown in FIG. Cytokine production inhibitory activity was observed in the short peptides of 4, 6-8, 14, 16, and 18.
On the other hand, no. Cytokine production promoting activity was observed in 1 to 5 and 5 short peptides.

〔４〕Ｎｏ．９〜１２の短鎖ペプチドの抗菌性
表１に示すＮｏ．１〜１９のうち、Ｎｏ．９〜１２の短鎖ペプチドについて、C. albicans NBRC1385とP. gingivalis JCM8525に対する抗菌性を調べた。 [4] No. Antibacterial properties of short peptides of 9 to 12 1-19. 9 to 12 short peptides were examined for antibacterial activity against C. albicans NBRC1385 and P. gingivalis JCM8525.

まず、C. albicans NBRC1385に対する抗菌性について説明する。
ＹＭ培地にてC. albicans NBRC1385をプレ培養し、ＯＤ650が１．０になったら８０μＬ分取し、Ｎｏ．９〜１２の短鎖ペプチドを２００μＭとなるように添加したＹＭ培地１０ｍＬに植菌して好気条件下、２５℃で３６時間静置培養した。
そして、前記〔１〕と同様の条件でルシフェリン・ルシフェラーゼ活性を測定し、短鎖ペプチドを添加しないコントロール（Control）の発光量を１００％とした場合における相対発光量（ＲＬＵ［％］）を求めた。その結果を図１１に示す。なお、図１１において縦軸はＲＬＵ［％］を示す。
図１１に示すとおり、Ｎｏ．９〜１２の短鎖ペプチドは、いずれもC. albicans NBRC1385に対して増殖抑制活性を有していた。具体的には、ＲＬＵの比率で比較すると、コントロールと比較してＮｏ．９の短鎖ペプチドは８３．８％、Ｎｏ．１０の短鎖ペプチドは７６．４％、Ｎｏ．１１の短鎖ペプチドは８４．６％、Ｎｏ．１２の短鎖ペプチドは５１．４％減じることができた。 First, the antibacterial activity against C. albicans NBRC1385 will be described.
Pre-cultured C. albicans NBRC1385 in YM medium, OD 650 is was collected 80μL worth Once turned to 1.0, No. Inoculated into 10 mL of YM medium supplemented with 9-12 short-chain peptides at 200 μM, and statically cultured at 25 ° C. for 36 hours under aerobic conditions.
Then, the luciferin luciferase activity was measured under the same conditions as in [1] above, and the relative luminescence amount (RLU [%]) was determined when the luminescence amount of the control without addition of the short chain peptide was taken as 100%. It was. The result is shown in FIG. In FIG. 11, the vertical axis indicates RLU [%].
As shown in FIG. All 9-12 short peptides had growth inhibitory activity against C. albicans NBRC1385. Specifically, when compared with the ratio of RLU, No. 9 short chain peptide is 83.8%, No. 9 No. 10 short peptide is 76.4%, No. 10 11 short peptide is 84.6%, No. 11 The 12 short peptides could be reduced by 51.4%.

次いで、P. gingivalis JCM8525に対する抗菌性について説明する。
変法ＧＡＭ培地にてP. gingivalis JCM8525をプレ培養し、ＯＤ650が１．０になったら８０μＬ分取した。そして、Ｎｏ．９の短鎖ペプチドについては、濃度が０μＭ、１２．５μＭ、２５μＭ、５０μＭ、１００μＭ、２００μＭとなるように、Ｎｏ．１０の短鎖ペプチドについては、濃度が０μＭ、５０μＭ、１００μＭ、２００μＭ、４００μＭ、８００μＭとなるように、Ｎｏ．１１の短鎖ペプチドについては、濃度が０μＭ、２．５μＭ、５μＭ、１０μＭ、２０μＭ、４０μＭとなるように、Ｎｏ．１２の短鎖ペプチドについては、濃度が０μＭ、５０μＭ、１００μＭ、２００μＭ、４００μＭ、８００μＭとなるように添加した変法ＧＡＭ培地を調整し、それぞれの培地０．１ｍＬに前記分取した８０μＬのプレ培養液を添加して、嫌気条件下、３７℃で４８〜５４時間静置培養した。 Next, antibacterial activity against P. gingivalis JCM8525 will be described.
P. gingivalis JCM8525 was pre-cultured in a modified GAM medium, and 80 μL was collected when OD 650 reached 1.0. And No. For the short peptide of No. 9, No. 9 so that the concentration was 0 μM, 12.5 μM, 25 μM, 50 μM, 100 μM, 200 μM. For the 10 short chain peptides, No. 10 so that the concentration is 0 μM, 50 μM, 100 μM, 200 μM, 400 μM, 800 μM. For the short peptide of No. 11, No. 11 was used so that the concentration would be 0 μM, 2.5 μM, 5 μM, 10 μM, 20 μM, 40 μM. For the 12 short-chain peptides, the modified GAM medium added so as to have a concentration of 0 μM, 50 μM, 100 μM, 200 μM, 400 μM, and 800 μM was prepared, and 80 μL of the preculture cultured in 0.1 mL of each medium. The solution was added and static culture was carried out at 37 ° C. for 48 to 54 hours under anaerobic conditions.

そして、前記〔１〕と同様の条件でルシフェリン・ルシフェラーゼ活性を測定し、それぞれの場合について、短鎖ペプチドを添加しない０μＭの発光量を１００％とした場合における相対発光量（ＲＬＵ［％］）を求めた。その結果を図１２〜図１５に示す。図１２は、Ｎｏ．９の短鎖ペプチドのP. gingivalis JCM8525に対する増殖抑制活性を示すグラフであり、図１３は、Ｎｏ．１０の短鎖ペプチドのP. gingivalis JCM8525に対する増殖抑制活性を示すグラフであり、図１４は、Ｎｏ．１１の短鎖ペプチドのP. gingivalis JCM8525に対する増殖抑制活性を示すグラフであり、図１５は、Ｎｏ．１２の短鎖ペプチドのP. gingivalis JCM8525に対する増殖抑制活性を示すグラフである。なお、図１２〜図１５において、横軸は濃度［μＭ］を示し、縦軸はＲＬＵ［％］を示す。
図１２〜図１５に示すとおり、Ｎｏ．９、１１、１２の短鎖ペプチドは、添加濃度が高くなるに連れてＲＬＵが低下した。つまり、P. gingivalis JCM8525に対する増殖抑制活性があった。 Then, the luciferin luciferase activity was measured under the same conditions as in [1] above. In each case, the relative light emission amount (RLU [%]) when the light emission amount of 0 μM without addition of the short peptide was taken as 100%. Asked. The results are shown in FIGS. FIG. 9 is a graph showing the growth inhibitory activity of the short peptide of No. 9 against P. gingivalis JCM8525. 10 is a graph showing the growth inhibitory activity of 10 short peptides against P. gingivalis JCM8525. 11 is a graph showing the growth inhibitory activity of the short peptide of No. 11 against P. gingivalis JCM8525. It is a graph which shows the growth inhibitory activity with respect to P. gingivalis JCM8525 of 12 short chain peptides. 12 to 15, the horizontal axis indicates the concentration [μM], and the vertical axis indicates RLU [%].
As shown in FIGS. The short-chain peptides of 9, 11, and 12 decreased the RLU as the concentration of addition increased. That is, it had a growth inhibitory activity against P. gingivalis JCM8525.

（５）Ｎｏ．９〜１２の短鎖ペプチドの細胞膜分極作用
P. gingivalis JCM8525を変法ＧＡＭ培地で嫌気条件下、３７℃で４８〜５４時間静置培養した。培養後、遠心分離を行い、デカンテーションで上清を除去し、沈殿物を４ｍＭのリン酸緩衝液（４ｍＭ ＮａＨ2ＰＯ4／Ｎａ2ＨＰＯ4、３０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．０）１ｍＬで懸濁した。次いで、ｄｉＳＣ3（５）（3, 3' - Dipropylthiadicarbocyanine iodide）を添加し、４００秒経過したところでＮｏ．９〜１２の短鎖ペプチドをそれぞれ３３．４μＭとなるように添加し、６０秒経過したときの蛍光強度（任意単位（a. u.））を測定した。
また、比較のため、短鎖ペプチドに替えて、ペプチド系抗生物質であるＧｒａｍｉｃｉｄｉｎ Ｄ（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ社製１０１９０１）を過剰量となる５０μＭで添加した。そして、６０秒経過したときの蛍光強度を測定した。その結果を図１６に示す。なお、図１６において縦軸は蛍光強度を示す。単位は任意単位（a. u.）である。
図１６に示すように、Ｎｏ．９〜１２の短鎖ペプチドの添加により、細胞膜分極作用が認められた。つまり、細胞膜を破壊することが認められた。具体的には、Ｇｒａｍｉｃｉｄｉｎ Ｄを１００％した場合に、Ｎｏ．９の短鎖ペプチドでは約４９％の蛍光強度であり、Ｎｏ．１０の短鎖ペプチドでは約１０％の蛍光強度であり、Ｎｏ．１１の短鎖ペプチドでは約２６％の蛍光強度であり、Ｎｏ．１２の短鎖ペプチドでは約２２％の蛍光強度であった。 (5) No. Cell membrane polarization action of 9-12 short peptides
P. gingivalis JCM8525 was statically cultured in modified GAM medium at 37 ° C. for 48 to 54 hours under anaerobic conditions. After incubation, the mixture was centrifuged, the supernatant was removed by decantation, and the precipitate was suspended in 1 mL of 4 mM phosphate buffer (4 mM NaH 2 PO 4 / Na 2 HPO 4 , 30 mM NaCl, pH 7.0). . Then, diSC 3 (5) (3,3′-Dipropylthiadicarbocyanine iodide) was added, and when 400 seconds passed, No. 3 was added. 9-12 short peptides were added to 33.4 μM, respectively, and the fluorescence intensity (arbitrary unit (au)) after 60 seconds was measured.
For comparison, Gramicidin D (1011901 manufactured by MP Biomedicals), a peptide antibiotic, was added in an excess amount of 50 μM instead of the short peptide. And the fluorescence intensity when 60 second passed was measured. The result is shown in FIG. In FIG. 16, the vertical axis indicates the fluorescence intensity. The unit is an arbitrary unit (au).
As shown in FIG. By adding 9-12 short peptides, cell membrane polarization was observed. That is, it was recognized that the cell membrane was destroyed. Specifically, when Gramicidin D is 100%, no. The short peptide of No. 9 has a fluorescence intensity of about 49%. No. 10 short peptide has a fluorescence intensity of about 10%. No. 11 short peptide has a fluorescence intensity of about 26%. For the 12 short peptides, the fluorescence intensity was about 22%.

同様の実験を、４ｍＭのリン酸緩衝液に替えて、ヒト唾液のｐＨ（７．２）とイオン強度を模倣したグッド緩衝液（５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、２０ｍＭ Ｇｌｕｃｏｓｅ、ｐＨ７．２）にて行った。その結果を図１７に示す。なお、図１７において縦軸は蛍光強度を示す。単位は任意単位（a. u.）である。
図１７に示すように、図１６で示したものよりも若干効率は劣るものの、Ｎｏ．９〜１２の短鎖ペプチドは細胞膜分極作用が認められた。つまり、細胞膜を破壊することが認められた。具体的には、Ｇｒａｍｉｃｉｄｉｎ Ｄを１００％した場合に、Ｎｏ．９の短鎖ペプチドでは約２５％の蛍光強度であり、Ｎｏ．１０の短鎖ペプチドでは約４％の蛍光強度であり、Ｎｏ．１１の短鎖ペプチドでは約１２％の蛍光強度であり、Ｎｏ．１２の短鎖ペプチドでは約１１％の蛍光強度であった。 A similar experiment was conducted with Good buffer (5 mM HEPES, 20 mM Glucose, pH 7.2) imitating the pH (7.2) and ionic strength of human saliva instead of 4 mM phosphate buffer. The result is shown in FIG. In FIG. 17, the vertical axis represents the fluorescence intensity. The unit is an arbitrary unit (au).
As shown in FIG. 17, although the efficiency is slightly inferior to that shown in FIG. The 9-12 short-chain peptides were observed to have a cell membrane polarization effect. That is, it was recognized that the cell membrane was destroyed. Specifically, when Gramicidin D is 100%, no. The short peptide of No. 9 has a fluorescence intensity of about 25%. No. 10 short peptide has a fluorescence intensity of about 4%. No. 11 short peptide has a fluorescence intensity of about 12%. With 12 short peptides, the fluorescence intensity was about 11%.

Claims (5)

以下の（ａ）または（ｂ）の短鎖ペプチド。
（ａ）配列表の配列番号２で表されるアミノ酸配列のうちの２８番目から４１番目までのアミノ酸残基、４２番目から５４番目までのアミノ酸残基、５５番目から６７番目までのアミノ酸残基、６８番目から７９番目までのアミノ酸残基、２４番目から４１番目までのアミノ酸残基、４２番目から５８番目までのアミノ酸残基、５９番目から６７番目までのアミノ酸残基または５９番目から７９番目までのアミノ酸残基からなる短鎖ペプチド
（ｂ）前記（ａ）の中から選択されるいずれか一つの短鎖ペプチドにおいて、１若しくは数個のアミノ酸残基が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列からなり、かつ細菌に対して増殖抑制活性を有する短鎖ペプチド The short peptide of the following (a) or (b).
(A) 28th to 41st amino acid residues, 42nd to 54th amino acid residues, 55th to 67th amino acid residues in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 in the Sequence Listing 68th to 79th amino acid residues, 24th to 41st amino acid residues, 42nd to 58th amino acid residues, 59th to 67th amino acid residues, or 59th to 79th amino acid residues (B) an amino acid wherein one or several amino acid residues are deleted, substituted or added in any one short peptide selected from the above (a) A short peptide consisting of a sequence and having growth-inhibiting activity against bacteria 以下の（ｃ）または（ｄ）の短鎖ペプチド。
（ｃ）配列表の配列番号４で表されるアミノ酸配列のうちの２０番目から４３番目までのアミノ酸残基、３１番目から４３番目までのアミノ酸残基、３１番目から４４番目までのアミノ酸残基または２４番目から３１番目までのアミノ酸残基からなる短鎖ペプチド
（ｄ）前記（ｃ）の中から選択されるいずれか一つの短鎖ペプチドにおいて、１若しくは数個のアミノ酸残基が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列からなり、かつ細菌に対して増殖抑制活性を有する短鎖ペプチド The short peptide of the following (c) or (d).
(C) 20th to 43rd amino acid residues, 31st to 43rd amino acid residues, 31st to 44th amino acid residues in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 4 in the Sequence Listing Or a short peptide consisting of amino acid residues from the 24th to the 31st (d) one or several amino acid residues deleted in any one short peptide selected from the above (c), A short peptide consisting of a substituted or added amino acid sequence and having antiproliferative activity against bacteria 以下の（ｅ）または（ｆ）の短鎖ペプチド。
（ｅ）配列表の配列番号６で表されるアミノ酸配列のうちの１４８番目から１５７番目までのアミノ酸残基、９８番目から１０９番目までのアミノ酸残基または１１５番目から１２６番目までのアミノ酸残基からなる短鎖ペプチド
（ｆ）前記（ｅ）の中から選択されるいずれか一つの短鎖ペプチドにおいて、１若しくは数個のアミノ酸残基が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列からなり、かつ細菌に対して増殖抑制活性を有する短鎖ペプチド The short peptide of the following (e) or (f).
(E) 148th to 157th amino acid residues, 98th to 109th amino acid residues, or 115th to 126th amino acid residues in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 6 in the Sequence Listing (F) consisting of an amino acid sequence in which one or several amino acid residues are deleted, substituted or added in any one short peptide selected from the above (e), and Short-chain peptide with growth inhibitory activity against bacteria 以下の（ｇ）または（ｈ）の短鎖ペプチド。
（ｇ）配列表の配列番号１２で表されるアミノ酸配列のうちの７０番目から７９番目までのアミノ酸残基または８０番目から９０番目までのアミノ酸残基からなる短鎖ペプチド
（ｈ）前記（ｇ）の中から選択されるいずれか一つの短鎖ペプチドにおいて、１若しくは数個のアミノ酸残基が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列からなり、かつ細菌に対して増殖抑制活性を有する短鎖ペプチド The short peptide of the following (g) or (h).
(G) a short peptide consisting of amino acid residues 70 to 79 or amino acids 80 to 90 in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12 in the sequence listing (h) A short chain consisting of an amino acid sequence in which one or several amino acid residues are deleted, substituted or added, and having a growth inhibitory activity against bacteria peptide 以下の（ｉ）または（ｊ）の短鎖ペプチド。
（ｉ）配列表の配列番号１４で表されるアミノ酸配列のうちの２３４番目から２４７番目までのアミノ酸残基からなる短鎖ペプチド
（ｊ）前記（ｉ）の中から選択されるいずれか一つの短鎖ペプチドにおいて、１若しくは数個のアミノ酸残基が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列からなり、かつ細菌に対して増殖抑制活性を有する短鎖ペプチド The short peptide of the following (i) or (j).
(I) a short peptide consisting of amino acid residues from the 234th to the 247th of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14 in the sequence listing (j) any one selected from the above (i) A short peptide comprising an amino acid sequence in which one or several amino acid residues are deleted, substituted or added, and having a growth inhibitory activity against bacteria
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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US11078256B2 (en) * 2018-06-26 2021-08-03 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Methods and compositions for inhibiting cancer cell growth
WO2021160234A3 (en) * 2019-08-26 2021-11-04 Bioresources Technology & Engineering Gmbh (Bite) Antimicrobial peptides from medicinal leeches
WO2023182185A1 (en) * 2022-03-25 2023-09-28 メスキュージェナシス株式会社 Peptide having affinity for and/or inhibitory function against gingipains, and use thereof

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