JP2011527670A - オクトレオチドのジカルバ類似体 - Google Patents

Abstract

オクトレオチドの類似体、その調製及び使用を記載する。

Description

本発明は、オクトレオチドの類似誘導体に関するものである。

ソマトスタチン−１４（ＳＲＩＦ−１４）は、二つのシステイン残基間にジスルフィド架橋を含有するシクロテトラデカペプチドである（式１）；

ＳＲＩＦ−１４は、内分泌及び外分泌の重要な制御因子であり、グルカゴン、成長ホルモン（ＧＨ）、インスリン、ガストリン及びその他のもの等の他の各種ホルモンの放出を抑制する。

また、脳及び脊髄の各種領域におけるその分布を考慮すれば、ソマトスタチンは、ニューロン伝達に影響を与えると思われる。

その構造的、系統発生的及び薬理学的な特性に基づき、ＳＲＩＦ受容体は、二種の主要なクラスに分けることができる：受容体ｓｓｔ２、ｓｓｔ３及びｓｓｔ５を備えるＳＲＩＦ_１及び受容体ｓｓｔ１及びｓｓｔ４を備えるＳＲＩＦ_２。

しかしながら、ソマトスタチンの臨床用途は、その短い血中での半減期（＜３分）のような多くの不利益によって制限されてきた。

膨大な文献に発表されるように、それらの不利益を克服するため、過剰分泌腫瘍、アクロメガリー、糖尿病、リウマチ性関節炎、胃腸障害及び中枢神経系の障害等の疾患の治療における臨床的応用の可能性への期待と共に、多数のアゴニストを設計し、合成してきた。

今まで、多くの有力なソマトスタチン類似体を見出しており、通常、ジスルフィド架橋又は骨格結合により一緒につながっている６〜１１個のアミノ酸の環状ペプチドから形成されている。

しかしながら、多くの生成物が合成されたにもかかわれず、現在のところ２〜３種類だけが臨床診療に使用されており、特には、ｓａｎｄｏｓｔａｔｉｎ（登録商標）又はｏｃｔｒｅｏｔｉｄｅ（登録商標）（ＳＭＳ ２０１−９９５）が挙げられ、それらは、亜型ｓｓｔ２受容体への非常に高い親和性を示し、大部分はある種の腫瘍の診断及び治療における放射標識された薬物としての特別の重要性が想定されている。

オクトレオチドは、Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ残基を含むＩＩ'型β−ターンによる活性部分であると考えられているファルマコフォアモチーフＰｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒを含有する環状オクタペプチドである（式２）。

興味深いことには、オクトレオチドは、どうして、ｈｓｓｔ２及びｈｓｓｔ５受容体に対する活性が非常にあり、生体内での半減期が３０〜９０分であるかということである。

その分子は、特に、放射線治療用の(^９０Ｙ−ＤＯＴＡ−Ｄ−Ｐｈｅ^１，Ｔｙｒ^３)−オクトレオチド（ＳＭＴ４８７又はＯｃｔｒｅｏＴｈｅｒ）及び診断用の(^１１１Ｉｎ−ＤＴＰＡ−Ｄ−Ｐｈｅ^１，Ｔｙｒ^３)−オクトレオチド（Ｏｃｔｒｅｏｓｃａｎ）といった放射性同位体のキャリヤーとして使用される。一方、オクトレオチドに含まれる−Ｓ−Ｓ−基は、内在性及び外来性の還元試薬及び塩基性試薬に感受性があるが、還元環境において起こる^９９ｍＴｃ及び^１８８Ｒｅ等の放射性同位体による標識化の間に最初に開くことができる（非特許文献１）。

欧州特許ＥＰ １，５９８，３６６では、オクトレオチドの誘導体が記載されており、それにより、ジスルフィド架橋が、結合試験を受けた場合に受容体亜型ｓｓｔ５への予期しない親和性及び選択性を示したジカルバ架橋によって置換された（非特許文献２）。

欧州特許ＥＰ １，５９８，３６６

Fichna J, Janecka A. Synthesis of target-specific radiolabeled peptides for diagnostic imaging. Bioconjugate Chem. 2003; 14: 3-17 D. D'Addona, A. Carotenuto, E. Novellino, V. Piccand, J. C. Reubi, A. Di Cianni, F. Gori, A. M. Papini, M. Ginanneschi,"Novel sst5-Selective Somatostatin Dicarba-Analogues: Synthesis and Conformation-Affinity Relationships,"J. Med. Chem., 2008, 51(3), 512-520

前述の観点から、生体内での優れた性能及び安定性だけでなく、適したキレート剤への結合後、オクトレオチドのジスルフィド架橋の開口を誘発するような還元条件下で起こる同位体による標識化にも耐えることができる新規のオクトレオチド類似体を提供することは、明らかに重要である。ペプチドの配列及び環の大きさにおける小さな変異さえも受容体親和性及び選択性に関してかなりの重要性を有し得るので、我々は、異なるｓｓｔｒｓに結合する能力の幅を広げるため、一連の新規なサンドスタチンのジカルバ類似体を調製した。更に、驚くべきことに、一番目のアミノ酸の１個又は２個の立体化学を変えることにより、放射性医薬品としての該類似体の使用についての一定の利点と共に、アゴニスト活性をアンタゴニスト活性に転換することが可能であることが証明された。最終的な目的は、それらを細胞増殖抑制剤として又は放射性医薬品としてさえ直接用いることを要する場合にアゴニスト活性を持ち、幾つかの受容体亜型に対する親和性及び可能性のある選択性を有する頑強な類似体を得ることにある。しかしながら、ただ放射性医薬品としてだけの応用については、診断分野であろうと治療分野であろうと、拮抗する作用は、より適している。

以下に報告される最も一般的なアミノ酸の省略形は、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ Ｊｏｉｎｔ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎにより推奨されているものである（Eur. J. Biochem, 1984, 138, 9-37）。他の省略形は、説明されるか又は当該技術の出版物中で見つけることができる。

以下に示す式（Ｉ）及び（ＩＩ）のアミノ酸の番号付けは、天然ＳＲＩＦ−１４の式における位置を指す。

本発明は、一般式（Ｉ）のオクトレオチド誘導体を用いて前述の問題を克服できるようにする。
式中：


の記号は、二重結合又は単結合であり；


の記号は、位置２及び３におけるキラル炭素原子の配置がＤでもＬでもよい（ＲでもＳでもよい）ことを示し；


の記号は、二重結合の配置がＥでもＺでもよいことを示し；
Λ＝Ｈ又は放射性同位体を結合可能なキレート基であり；
Ｒは、Ｈ、又はフェニル、又はベンジル、又はｐ−ＯＲ'置換ベンジル残基であるか（ここで、Ｒ'は、Ｈ、又は線状の若しくは枝分かれした（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル置換基、又はベンジルである）；
或いはＲは、ｐ−Ｆ−ベンジル又はｐ−Ｃｌ−ベンジル（アミノ酸Ｃｐａ^２）であり；
Ｒ＝Ｈの場合、ｍは１〜６であり；ＲがＨ以外の場合、ｍ＝１である。
Ｒ_１は、結合、又はＧｌｙ、Ａｓｐ若しくはβ−アラニンから選択されるアミノ酸の残基であり；
Ｒ_１がアミノ酸残基である場合、そのときのＲはＨ以外で、ｍ＝１で、Λはその末端ＮＨ_２基に結合しており；
Ｒ_２は、−ＯＨ、又は−ＮＨ_２若しくは−ＮＨ−Ｑ（ここで、Ｑはシクロアルキル残基である）、又はＴｈｒ(ｏｌ)、Ｔｈｒ、Ｔｈｒ−ＮＨ_２、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ−ＮＨ_２、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ及びＮａｌ−ＮＨ_２から選択されるアミノ酸残基であり；置換基Ｑの定義において、シクロアルキルの語は、例えばシクロペンチル又はシクロヘキシルを意味しており；
Ｘは、Ｄ−若しくはＬ−Ｐｈｇ、又はＤ−若しくはＬ−Ｔｙｒ、又は未置換の若しくはＯＲ''基でオルト若しくはパラ置換したＤ−若しくはＬ−Ｐｈｅから選択されるアミノ酸残基であるか（ここで、該基がオルト位にある場合、Ｒ''は、Ｈ、又は線状の若しくは枝分かれした（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル、又はベンジルであり；該置換基がパラ位にある場合、そのときのＲ''はＨとすることができず、先に定義した置換基の一つである）；或いはＸは、１−Ｎａｌ若しくは２−Ｎａｌ、又はＡ若しくはＢ環上にてＯＲ''基で置換された１−Ｎａｌ若しくは２−Ｎａｌである（ここで、Ｒ''は、Ｈ、線状の若しくは枝分かれした（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル、又はベンジルである）。
Ｙは、Ｄ−Ｔｒｐ又はＤ−Ｔｒｐ（ここで、インドール環のＮＨがＮＲ'''（ここで、Ｒ'''は−ＣＯＮＨ_２又は−ＣＯＣＨ_３である）になっている）であるか；或いはＹは、位置７におけるベンゼン環上にてＲ''''で置換されたＤ−Ｔｒｐであるか（ここで、Ｒ''''は、−ＯＣＯＮＨ_２又は−ＮＨＣＯＮＨ_２若しくは−ＮＨＣＯＣＨ_３である）；或いはＹは、Ｄ−Ａｐｈ−Ｃｂｍ（４−アミノフェニルアラニン−Ｎ−カルバモイル）又はＤ−Ａｇｌ［(Ｎ^βＭｅ，２−ナフトイル)アミノグリシン］又はＤ−２−Ｎａｌ若しくはＡ若しくはＢ環上にてＯＲ''基により置換されたＤ−２−Ｎａｌであり（ここで、Ｒ''は、Ｈ、線状の若しくは枝分かれした（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル又はベンジルである）；
Ｗは、Ｌｙｓ、又はＩＡｍｐ［４−(Ｎ−イソプロピル)−アミノメチルフェニルアラニン］、又は３−(Ｎ−イソプロピル)アミノ−Ｔｙｒであるか；或いはＷは、Ｈａｒ（ホモアルギニン）又はＨｃｉ（ホモシトルリン）であり；
Ｚは、ホモ−Ｔｈｒ、Ｔｈｒ(ｏｌ)、Ｔｈｒ(Ａｃ)、Ｓｅｒ、Ｓｅｒ(Ａｃ)、ホモ−Ｓｅｒ、４−ヒドロキシ−Ｖａｌ、及び−ＯＲ'''''基でオルト又はパラ置換したＤ−又はＬ−Ｐｈｅから選択されるアミノ酸残基であるか（ここで、ＸがＬ−Ｐｈｅ以外である場合、Ｒ'''''は、Ｈ、又は線状の若しくは枝分かれしたアルキル残基、又はベンジル残基、又は置換ベンジル、又は１−若しくは２−ナフチルメチルとすることができ；またＸ＝Ｌ−Ｐｈｅの場合、そのときのＲ'''''は、Ｈ、又は１−若しくは２−ナフチルメチルである）；或いはＺは、１−若しくは２−Ｎａｌ、又はＡ若しくはＢ環上にて−ＯＣＨ_３若しくは−ＯＢｚ基で置換された１−若しくは２−Ｎａｌである。

好ましくは、「放射性同位体に結合可能なキレート基」の語は、例えば前述のＥＰ １，５９８，３６６において報告されるような、^１１１Ｉｎ及び^９０Ｙ等のイオンを配位させるのに特に適応される大環状性質の既知のキレート剤；又はトリカルボニル若しくはＮ−[Ｎ−(３−ジフェニルホスフィノプロプリオニル)−グリシル]−システイン（ＰＮ_２Ｓ）等の^９９ｍＴｃ若しくは^１８８Ｒｅを配位可能な分子（この後者はInorg. Chem. 2003, 42, 950-959に記載されている）を意味し；それら全てのキレート剤は、放射線診断学の分野で働く全ての者によく知られている。

本発明の式（Ｉ）の化合物は、既知の又は容易に準備される生成物から出発し、通常の合成技術を用いて調製される。

特に、本発明によれば、式（Ｉ）の生成物は、Ｒ_２＝−ＮＨ−Ｑで且つＱがアミノ酸である場合、以下に示す工程を含む方法によって調製できる：
ａ）線状のヘプタペプチド（即ち、Ｎ末端アミノ酸が欠けている）を、既知の方法に従うＳＰＰＳにより、一番目のアミノ酸（Ｃ−末端）が既に支持されている場合の多い誘導体化したクロロトリチル樹脂（例えば、これがＴｈｒ−２−オールである場合、その樹脂はＨ−Ｌ−Ｔｈｒ(ｔ−Ｂｕ)−オール−２−クロロトリチルであり、Ｉｒｉｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ、マルクトレトウィッツ、ドイツにより作られている）にその配列を固定することによって調製する。Ｒ_２＝−ＮＨ−Ｑで且つＱが末端ＣＯＮＨ_２基を持つアミノ酸である場合には、その担体は、Ｒｉｎｋアミド樹脂として知られる４−(２'，４'−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃ−アミノメチル)−フェノキシメチルポリスチレン樹脂であるか、又はＲｉｎｋアミドＡＭ樹脂として知られるＲｉｎｋアミド−アセトアミド−ノルロイシルアミノメチル樹脂であってもよい。Ｒ_２＝ＮＨ_２の場合も同じことが行われる；
ｂ）上記樹脂に結合したペプチドを、第二世代グラブス触媒又は第一世代ホベイダ−グラブス触媒を用いて環化させる；
ｃ）次いで、位置２のアミノ酸を追加する；
ｄ）シクロペプチドを脱保護し、樹脂から分離させる；
ｅ）シクロペプチドをＲＰ−ＨＰＬＣにより精製する；
或いは、工程（ｅ）の後に、
ｅ'）シクロペプチドを溶液中でＨ_２及びＰｄ触媒により還元し、上述のように精製する；
或いは、ＺがＨ_２／Ｐｄ触媒により除去可能な置換基を含有するアミノ酸である場合、工程ｃ）の後に：
ｄ'）上記樹脂上のシクロペプチドをウィルキンソン触媒で還元し、次いで該樹脂から分離し、上述のように精製するか；又は
上記樹脂に固定されている不飽和の若しくは水素化したシクロペプチドを、前記欧州特許に既に記載された方法に従って、ＮＨ_２−末端アミノ酸にて、先に定義したアミノ酸及び／若しくは大環状キレート剤に更に結合させるか；又は
以下に示す例において説明されるように、上記樹脂に結合した不飽和の若しくは水素化したシクロペプチド上にＰＮ_２Ｓ基を作り、その後、その分子全体を該樹脂から分離し、ＨＰＬＣにより精製する。

本発明の特定の実施態様に従い、アンタゴニスト活性だけのために設計された式（ＩＩ）の化合物について言及する：
式中：


の記号は、二重結合又は単結合であり；


の記号は、関係のあるキラル炭素原子の配置がＤでもＬでもよい（ＲでもＳでもよい）ことを示し；


の記号は、二重結合の配置がＥでもＺでもよいことを示し；
Ｑ'＝−Λ、−ＣＯＮＨ−Λ、−ＣＯＣＨ_２ＮＨ−Λ、−(ＣＨ_２)_ｎ−ＮＨ−Λ（ここで、ｎは１〜６である）、又はＧｌｙから若しくはＰｈｅ、Ｔｙｒ、Ｃｐａ、Ｄａｂ、Ｌｙｓ、Ｈｌｙ（ホモリシン）、Ｏｒｎ、Ａｒｇ、Ｈａｒ（ホモアルギニン）等のＬ−若しくはＤ−アミノ酸から選択されるアミノ酸残基であり（ここで、末端アミノ基は−ＮＨ−Λである）；
−Λは、Ｈ又は前述のキレート基であり；
Ｒ_３＝Ｈ又は−(ＣＨ_２)_ｍ−Ｋであり（ここで、ｍは０〜８であり、Ｋは−ＮＨ_２又はグアニジン若しくはイミダゾール残基である）；
Ｒ_４は、Ｈ、又は−ＯＨ、又は−ＯＣＨ_３、又は−ＯＢｚであり；
Ｙは、Ｄ−Ｔｒｐ又は置換Ｄ−Ｔｒｐ（ここで、インドール環のＮＨがＮＲ'''（ここで、Ｒ'''は−ＣＯＮＨ_２又は−ＣＯＣＨ_３である）になっている）であるか；或いはＹは、位置７におけるベンゼン環上にてＲ''''で置換されたＤ−Ｔｒｐであるか（ここで、Ｒ''''は、−ＯＣＯＮＨ_２又は−ＮＨＣＯＮＨ_２若しくは−ＮＨＣＯＣＨ_３である）；或いはＹは、Ｄ−Ａｐｈ−Ｃｂｍ（４−アミノフェニルアラニン−Ｎ−カルバモイル）又はＤ−Ａｇｌ［(Ｎ^βＭｅ，２−ナフトイル)アミノグリシン］又はＤ−２−Ｎａｌ若しくはＡ若しくはＢ環上にてＯＲ''基により置換されたＤ−２−Ｎａｌであり（ここで、Ｒ''は、Ｈ、線状の若しくは枝分かれした（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル又はベンジルである）；
Ｚは、Ｔｈｒ、Ｔｈｒ(Ａｃ)、Ｔｈｒ(ｏｌ)、ホモ−Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｓｅｒ(Ａｃ)、ホモ−Ｓｅｒ、Ｈｙｌ（δ−ヒドロキシ−リシン）、Ｔｙｒ、又はＴｙｒ(ＯＲ'''''')から選択されるアミノ酸残基であるか（ここで、Ｒ''''''は、線状の若しくは枝分かれしたＣ_１−６アルキル基、又はベンジル若しくは疎水性基を持つ置換ベンジルであるか；或いはＲ''''''は、１−又は２−ナフチルメチルである）；或いはＺは、１−若しくは２−Ｎａｌ、又はＡ若しくはＢ環上にて−ＯＣＨ_３若しくは−Ｏ−Ｂｚ基で置換された１−若しくは２−Ｎａｌである。
Ｒ_５＝−ＮＨ_２、−ＣＯＮＨ_２、−ＣＯＯＨ；又は−ＣＯＮＨＲ_６である（ここで、Ｒ_６＝Ｃ_２−Ｃ_６アルキル若しくはシクロアルキル、芳香環若しくは芳香族複素環、又はＡｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ及びＴｈｒ(ｏｌ)から選択されるアミノ酸残基である）。置換基Ｒ_６の定義においては、シクロアルキルの語は、例えばシクロペンチル又はシクロヘキシルを意味し、芳香環及び芳香族複素環の例は、それぞれフェニル及びヒドロキシフェニル、ピロール及びイミダゾールである。

以下に記載される式（ＩＩ）の化合物は、既知の方法及び既知の試薬又は既知の方法により容易に得ることのできる試薬を用いて調製される。

特に、Ｑ'＝−Ｈで、Ｒ_３＝Ｈで、Ｒ_４＝Ｈで、Ｒ_５＝−ＣＯＯＨ又は−ＣＯＮＨ_２である場合、以下の事項が行われる：
ａ）線状のオクタペプチドを、既知の方法を用いたＳＰＰＳにより、その配列を適した固体担体に固定することによって調製し［例えば、Ｒ_５＝−ＣＯＯＨの場合、その樹脂は、ｐ−ベンジルオキシベンジルアルコール官能基を含有する樹脂（Ｗａｎｇ樹脂）であり；Ｒ_５＝−ＣＯＮＨ_２の場合、一番目のアミノ酸をＲｉｎｋアミド又はＲｉｎｋアミドＡＭ樹脂に固定する］；
ｂ）樹脂上の線状ペプチドを、第二世代グラブス触媒又は第一世代ホベイダ−グラブス触媒を用いて環化させ；
ｃ）シクロペプチドを脱保護し、樹脂から切り離し；
ｄ）シクロペプチドをＲＰ−ＨＰＬＣにより精製するか；
或いは、Ｒ_５が−ＣＯＮＨＲ_６である場合、アミノ酸残基Ｒ_６は、工程（ａ）に記載されるように、適切な樹脂（Ｗａｎｇ樹脂等）又はＲｉｎｋアミド樹脂に予め結合されている。先に記載したように、その後の工程が続く。

それら生成物の製造方法を以下に示す例において十分に説明する。

例１
線状ヘプタペプチドＦｍｏｃ−Ｈａｇ ^３ (アリルグリシン)−１−Ｎａｌ ^７ −Ｄ−Ｔｒｐ ^８ −Ｌｙｓ ^９ −Ｔｈｒ ^１０ −Ｈａｇ ^１４ −Ｔｈｒ(ｏｌ) ^１５ の合成
多孔質ポリスチレンセプタムを備えたテフロン（登録商標）反応器内で、予め膨潤させたＨ−Ｌ−Ｔｈｒ(ｔＢｕ)−オール−２−クロロトリチル樹脂上でのＦｍｏｃ−ＳＰＰＳストラテジーを用い、上記ペプチドを調製した。

カップリング工程は、ＨＡＴＵにより活性化した保護アミノ酸２当量と、ＮＭＭ４当量とをＤＭＦ中に加え、次いでそれぞれのカップリングのため４５分間攪拌し、ニンヒドリンを用いた定性試験（Ｋａｉｓｅｒテスト）によりモニターすることによって行われた。

線状ペプチドの合成が完了して、５ｍｇの樹脂上にてマイクロ切断を行った。該樹脂をＴＦＡ／Ｈ_２Ｏ／１，２−エタンジチオール（ＥＤＴ）／フェノール（９４：２：２：２；３時間）で処理し、ろ過し、その溶液を減圧下で濃縮し、ペプチドをＥｔ_２Ｏで沈殿させ、遠心分離にかけ、水に溶解し、凍結乾燥した。Ｆｍｏｃで保護された未精製ペプチドのＲＰ−ＨＰＬＣによる分析［Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｊｕｐｉｔｅｒ Ｃ１８カラム（５μｍ、２５０×４．６ｍｍ）：流速１ｍＬ／ｍｉｎ；溶離液：Ａ（Ｈ_２Ｏ中０．１％ＴＦＡ）及びＢ（ＣＨ_３ＣＮ中０．１％ＴＦＡ）］は、アミノ酸のラセミ化による異性体の痕跡も無く、純度が約９５％の線状ペプチドの存在を示した。
ＥＳＩ−ＭＳ：[Ｍ＋Ｈ]^＋１１３４．９；計算値［Ｍ]^＋１１３３．５６．

例２
式（Ｉ）の環状不飽和ペプチドの合成（ここで、−ΛはＨで、Ｒ＝ベンジルで、Ｒ _１ は結合で、ＣＨ ^２ はＤ配置にあり、ＣＨ ^３ はＬ配置にあり、Ｘ＝１−Ｎａｌで、Ｙ＝Ｄ−Ｔｒｐで、Ｗ＝Ｌｙｓで、Ｚ＝Ｔｈｒで、Ｒ _２ ＝−ＮＨＴｈｒ(ｏｌ)である）
上記樹脂上のヘプタペプチドを無水ＤＣＭ中で２時間再膨潤させた。上記反応器を４５℃に加熱し、第二世代グラブス触媒［(Ｌ)(Ｌ')Ｘ_２Ｒｕ＝ＣＨＲ（ここで、Ｌはホスフィン配位子で、Ｌ'は複素環カルベン（１，３−ジメシチル−イミダゾール−２−イリデン）で、ＸはＣｌ原子で、Ｒはフェニル基である）］のＤＣＭ溶液（０．５ｍｏｌ当量）を加え、その懸濁液を２４時間攪拌した。樹脂をＤＣＭ、ＤＭＦ及びＭｅＯＨで洗浄し、次いでＤＭＦで膨潤させた。Ｆｍｏｃ−Ｈａｇを２０％ピペリジンで脱保護し、その環状ペプチドを上述のようにＦｍｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅにカップリングさせた。上述のように、その環状ペプチドを脱保護し、樹脂から切り離した。その溶液をＥｔ_２Ｏで濃縮し、未精製ジカルバ類似体をもたらし、それを水中に懸濁させ、その沈殿物を遠心分離により取り除いた。その化合物を半分取ＲＰ−ＨＰＬＣ［Ｊｕｐｉｔｅｒ Ｃ１８カラム（１０μｍ、２５０×１０ｍｍ）、前述のものと同じ溶離液系を使用（２０分でＢが２０％−６０％）、４ｍＬ／ｍｉｎ］により精製した。ＨＰＬＣ純度＞９８％（収率：１１％）
ＥＳＩ−ＭＳ：実測値［Ｍ＋Ｈ]^＋１０３２．０，［Ｍ＋２Ｈ］^２＋５１７．２，［Ｍ＋Ｎａ］^＋１０５４．２５；計算値［Ｍ＋Ｈ]^＋１０３０．５３．

例３
式（Ｉ）の不飽和環状ペプチドの合成（ここで、−Λはキレート基ＤＯＴＡで、Ｒ＝ベンジルで、Ｒ _１ は結合で、ＣＨ ^２ はＤ配置にあり、ＣＨ ^３ はＬ配置にあり、Ｘ＝１−Ｎａｌで、Ｙ＝Ｄ−Ｔｒｐで、Ｗ＝Ｌｙｓで、Ｚ＝Ｔｈｒで、Ｒ _２ ＝−ＮＨＴｈｒ(ｏｌ)である）
例２の場合と同様に、樹脂に結合している式ＩのペプチドのＦｍｏｃ−Ｄ−Ｐｈｅ^２脱保護を２０％ピペリジンで行い；その後、該樹脂に、ＤＭＦ中２ｍｏｌ当量のＤＯＴＡ−トリ−(ｔ−Ｂｕ)エステルと、ＤＭＦ中２ｍｏｌ当量のＨＡＴＵと、次いで４ｍｏｌ当量のＮＭＭを加えた。０．５ｍｍｏｌ／ｇの樹脂置換レベルに基づき、当量を算出した。４５分後、前述のように、該樹脂を洗浄し、ＤＯＴＡが結合したペプチドを樹脂から切断した。トリ−(ｔ−Ｂｕ)ＤＯＴＡ保護基は、ペプチドと一緒に切断された。未精製のペプチドを水中に溶解し、凍結乾燥させ、次いでＲＰ−ＨＰＬＣにより精製した（２０分でＢが２０％−６０％；収率：２９％）。
ＥＳＩ−ＭＳ：実測値［Ｍ＋Ｈ]^＋１４１７．７２，［Ｍ＋２Ｈ］^２＋７０９．７９；計算値［Ｍ＋Ｈ]^＋１４１６．７１．

例４
式（Ｉ）の不飽和シクロペプチドの合成（ここで、−Λはキレート基ＰＮ _２ Ｓで、Ｒ＝フェニルで、Ｒ _１ は結合で、ＣＨ ^２ はＤ配置にあり、ＣＨ ^３ はＬ配置にあり、Ｘ＝１−Ｎａｌで、Ｙ＝Ｄ−Ｔｒｐで、Ｗ＝Ｌｙｓで、Ｚ＝Ｔｈｒで、Ｒ _２ ＝−ＮＨＴｈｒ(ｏｌ)である）
ＰＮ_２Ｓ基は、^９９ｍＴｃ及び^{１８６／１８８}Ｒｅをキレートすることができ、加えて、キャリヤーペプチドに結合するようにシステインのカルボキシル基を利用することができる。ＳＰＰＳでの我々の経験に基づき、我々は、予め形成させた疑似トリペプチドＰＮ_２Ｓを式（Ｉ）のジカルバ類似体に直接カップリングさせず、それを樹脂に固定されたシクロペプチド上へ段階的に構築させることに決定した。

式（Ｉ）の不飽和シクロペプチドを２０％ピペリジンで脱保護した後、ジカルバ類似体を、Ｃｙｓ(Ｔｒｔ)と、次いでＧｌｙと、最後に３−ジフェニルホスフィノプロパン酸のスクシンイミドエステルとカップリングさせた。チオール基及びホスフィノ基が容易に酸化できるため、樹脂からの脱離手順をアルゴン下で行い、切断混合物を脱気した。このようにして、我々は、キレート基ＰＮ_２Ｓに結合したジカルバ類似体を全収率４％で得た。未精製生成物の精製（ＰＲ−ＨＰＬＣ）を脱気溶媒中で首尾よく達成し、酸化が可能な基の分解を回避するため、集めた画分を迅速に凍らせ、凍結乾燥した。溶離液：２０分でＢが４０％−７０％。
ＥＳＩ−ＭＳ：実測値［Ｍ＋Ｈ]^＋１４３２．４１，［Ｍ＋２Ｈ］^２＋７１７．０；計算値［Ｍ＋Ｈ]^＋１４３０．６３．

例５
式（Ｉ）の類似体のペプチド環上のアルキル鎖の還元（−ＣＨ＝ＣＨ−基の還元）
例２で言及した純粋な式（Ｉ）の不飽和シクロオクタペプチド（ここで、−ΛはＨである）を無水ＭｅＯＨ中に溶解し、１０％（ｗ／ｗ）の２０％Ｐｄ(ＯＨ)_２／Ｃを加えた。反応容器をＮ_２流れでパージし、次いで、Ｈ_２流れにさらした。その懸濁液を３０℃で２４時間攪拌し、セリット上にろ過し、溶媒を減圧下で蒸発させ、未精製の生成物を凍結乾燥させた。該生成物を半分取ＲＰ−ＨＰＬＣで精製し（２０分でＢが２０％〜６０％）、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−アルキル閉鎖の純シクロペプチドを得た（還元収率：４７％）。
ＥＳＩ−ＭＳ：実測値［Ｍ＋Ｈ]^＋１０３４．０，［Ｍ＋２Ｈ］^２＋５１７．９，［Ｍ＋Ｎａ］^＋１０５５．２３；計算値［Ｍ＋Ｈ]^＋１０３２．１５．

例６
線状オクタペプチドＦｍｏｃ−Ｈａｇ ^３ −Ｐｈｅ ^６ −Ｐｈｅ ^７ −Ｄ−Ｔｒｐ ^８ −Ｌｙｓ ^９ −Ｔｈｒ ^１０ −Ｐｈｅ ^１１ −Ｈａｇ ^１４ −ＮＨ _２ の合成
Ｃ末端アミド結合を得るため、前述のＲｉｎｋアミド樹脂及びＲｉｎｋアミドＡＭ樹脂の両方を用いた。そのプロセスは、線状ヘプタペプチドについて先に記載したものと同じである。鎖を長くしたときに、線状ペプチドを前述のように樹脂から切り離した。Ｆｍｏｃ保護ペプチドをＲＰ−ＨＰＬＣにより分析したところ、約９５％の純度を示した。
ＥＳＩ−ＭＳ：実測値［Ｍ＋Ｈ]^＋１２９１．３；計算値［Ｍ＋Ｈ]^＋１２８９．６３．

例７
式（ＩＩ）の不飽和環状ペプチドの合成（ここで、Ｑ＝Ｈで、Ｒ _３ ＝Ｈで、Ｒ _４ ＝Ｈで、Ｙ＝Ｄ−Ｔｒｐで、Ｒ _５ ＝−ＣＯＮＨ _２ である）
例２に報告された式（Ｉ）の環状類似体を形成させるのに用いた同一の第二世代グラブス触媒を用い、同一の条件により、ＲｉｎｋアミドＡＭ樹脂に結合させた線状オクタペプチドに対し、ＲＣＭ反応を直接適用した。上述のように、切断を行い、未精製の生成物をＲＰ−ＨＰＬＣにより精製し（２０分でＢが３０％−６０％）、純粋な化合物を得た（全収率：１０％）。
ＥＳＩ−ＭＳ：実測値［Ｍ＋Ｈ]^＋１０４１．１；計算値［Ｍ＋Ｈ]^＋１０３９．５３．

例８
式（ＩＩ）の類似体のペプチド環上のアルキル鎖の還元（−ＣＨ＝ＣＨ−基の還元）
例７の場合と同様に、純粋な式（ＩＩ）の不飽和シクロオクタペプチド（ここで、ＱはＨである）を無水ＭｅＯＨ中に溶解し、次いで１０％（ｗ／ｗ）の２０％Ｐｄ(ＯＨ)_２／Ｃを加えた。実験の詳細は、例５に記載される通りである。分析ＲＰ−ＨＰＬＣは、約７０％の純度を示した。精製をＲＰ−ＨＰＬＣにより行った（２０分でＢが２０％−６０％）。
ＥＳＩ−ＭＳ：実測値［Ｍ＋Ｈ]^＋１０４３．１；計算値［Ｍ＋Ｈ]^＋１０４１．５４．

このようにして得られた生成物は、−ΛがＨで且つそれらがアゴニストである場合、相当有効成分の使用について薬局方において知られる通常の方法に従い、医薬組成物の調製に使用できる。

前記医薬製剤は、例えば腫瘍、アクロメガリー、リウマチ性関節炎の直接的な治療に使用できる。或いは、式（Ｉ）及び（ＩＩ）の生成物は、−Λが大員環（ＤＯＴＡ等）又はＰＮ_２Ｓ等のキレート剤である場合、Ｆｅ−５２、Ｍｎ−５２ｍ、Ｃｏ−５５、Ｃｕ−６４、Ｇａ−６７、Ｇａ−６８、Ｔｃ−９９ｍ、Ｉｎ−１１１、Ｉ−１２３、Ｉ−１２５、Ｉ−１３１、Ｐ−３２、Ｓｃ−４７、Ｃｕ−６７、Ｙ−９０、Ｐｄ−１０９、Ａｇ−１１１、Ｐｍ−１４９、Ｒｅ−１８６、Ｒｅ−１８８、Ａｔ−２１１、Ｂｉ−２１２、Ｂｉ−２１３、Ｒｈ−１０５、Ｓｍ−１５３、Ｌｕ−１７７、Ａｕ−１９８等の金属で放射標識でき、放射線診断又は放射線治療に使用できる。

まず第一に、先の例で記載した化合物を細胞培養について試験したところ、特に亜型ｓｓｔ１、ｓｓｔ２、ｓｓｔ３及びｓｓｔ５に対して、かなりの、更には選択的な、親和性を示した。

Claims (9)

1. 一般式（Ｉ）
   ［式中：
   
   
   の記号は、二重結合又は単結合であり；
   
   
   の記号は、位置２及び３におけるキラル炭素原子の配置がＤでもＬでもよい（ＲでもＳでもよい）ことを示し；
   
   
   の記号は、二重結合の配置がＥでもＺでもよいことを示し；
   Λ＝Ｈ又は放射性同位体を結合可能なキレート基であり；
   Ｒは、Ｈ、フェニル、ベンジル、ｐ−Ｆ−ベンジル若しくはｐ−Ｃｌベンジル（アミノ酸Ｃｐａ^２）又はｐ−ＯＲ'置換ベンジル残基であり（ここで、Ｒ'は、Ｈ、線状の若しくは枝分かれした（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル置換基、又はベンジルである）；
   Ｒ_１は、結合、又はＧｌｙ、Ａｓｐ若しくはβ−アラニンから選択されるアミノ酸残基であり；
   Ｒ_２は、−ＯＨ、又は−ＮＨ_２若しくは−ＮＨ−Ｑ（ここで、Ｑはシクロペンチル又はシクロヘキシル残基である）、又はＴｈｒ(ｏｌ)、Ｔｈｒ、Ｔｈｒ−ＮＨ_２、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｙｒ−ＮＨ_２、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ及びＮａｌ−ＮＨ_２から選択されるアミノ酸残基であり；
   Ｘは、Ｄ−若しくはＬ−Ｐｈｇ又はＤ−若しくはＬ−Ｔｙｒ又は未置換の若しくはＯＲ''基でオルト若しくはパラ置換したＤ−若しくはＬ−Ｐｈｅから選択されるアミノ酸残基であるか；或いはＸは、場合によりＡ又はＢ環上にてＯＲ''基で置換される１−Ｎａｌ又は２−Ｎａｌであり（ここで、Ｒ''は、Ｈ、線状の若しくは枝分かれした（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル又はベンジル残基である）；
   Ｙは、Ｄ−Ｔｒｐ又はＤ−Ｔｒｐ（ここで、インドール環の窒素がＲ'''基（ここで、Ｒ'''は−ＣＯＮＨ_２又は−ＣＯＣＨ_３である）により置換されている）であるか；或いはＹは、位置７におけるベンゼン環上にてＲ''''で置換されたＤ−Ｔｒｐであるか（ここで、Ｒ''''は、−ＯＣＯＮＨ_２又は−ＮＨＣＯＮＨ_２若しくは−ＮＨＣＯＣＨ_３である）；或いはＹは、Ｄ−Ａｐｈ−Ｃｂｍ（４−アミノフェニルアラニン−Ｎ−カルバモイル）又はＤ−Ａｇｌ［(Ｎ^βＭｅ，２−ナフトイル)アミノグリシン］又はＤ−２−Ｎａｌ若しくはＡ若しくはＢ環上にてＯＲ''基により置換されたＤ−２−Ｎａｌであり（ここで、Ｒ''は、Ｈ、線状の若しくは枝分かれした（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル又はベンジルである）；
   Ｗは、Ｌｙｓ、又はＩＡｍｐ［４−(Ｎ−イソプロピル)−アミノメチルフェニルアラニン］、又は３−(Ｎ−イソプロピル)アミノ−Ｔｙｒであるか；或いはＷは、Ｈａｒ（ホモアルギニン）又はＨｃｉ（ホモシトルリン）であり；
   Ｚは、ホモ−Ｔｈｒ、Ｔｈｒ(ｏｌ)、Ｔｈｒ(Ａｃ)、Ｓｅｒ、Ｓｅｒ(Ａｃ)、ホモ−Ｓｅｒ、４−ヒドロキシ−Ｖａｌ、及び−ＯＲ'''''基でオルト又はパラ置換したＤ−又はＬ−Ｐｈｅから選択されるアミノ酸残基であるか（ここで、Ｒ'''''は、ＸがＬ−Ｐｈｅ以外である場合には、Ｈ、又は線状の若しくは枝分かれしたアルキル残基、又はベンジル残基、又は置換ベンジル、又は１−若しくは２−ナフチルメチルとしてもよく；またＸ＝Ｌ−Ｐｈｅの場合、そのときのＲ'''''は、Ｈ、又は１−若しくは２−ナフチルメチルである）；或いはＺは、１−若しくは２−Ｎａｌ、又はＡ若しくはＢ環上にて−ＯＣＨ_３若しくは−Ｏ−Ｂｚ基で置換された１−若しくは２−Ｎａｌであり、
   但し：
   Ｒ＝Ｈの場合、ｍは１〜６であり；ＲがＨ以外の場合、ｍ＝１であり；
   Ｒ_１がアミノ酸残基である場合、そのときのＲは、Ｈ以外であり；
   Ｒ_１がアミノ酸残基である場合、そのときのΛは、その末端ＮＨ_２基に結合しており；
   ＸのＯＲ''基がパラ位にある場合、そのときのＲ''はＨとすることができないが、該置換基がオルト位にある場合、そのときのＲ''は、Ｈ、又は線状の若しくは枝分かれした（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル、又はベンジルである］の化合物。
2. 放射性マーカーに結合可能な前記基が、^１１１Ｉｎ及び^９０Ｙ等のイオンを配位するのに特に適した大環状キレート剤であることを特徴とする請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
3. 前記キレート剤が、還元性媒質において^９９ｍＴｃ又は^１８８Ｒｅ等のイオンを配位するのに適した、Ｎ−[Ｎ−(３−ジフェニルホスフィノプロプリオニル)−グリシル]−システインであることを特徴とする請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
4. 式（ＩＩ）：
   
   ［式中：
   
   
   の記号は、二重結合又は単結合であり；
   
   
   の記号は、関係のあるキラル炭素原子の配置がＤでもＬでもよい（ＲでもＳでもよい）ことを示し；
   
   
   の記号は、二重結合の配置がＥでもＺでもよいことを示し；
   Ｑ'＝−Λ、−ＣＯＮＨ−Λ、−ＣＯＣＨ_２ＮＨ−Λ、又は−(ＣＨ_２)_ｎ−ＮＨ−Λであるか（ここで、ｎは１〜６である）、或いはＱ'は、Ｇｌｙから又はＰｈｅ、Ｔｙｒ、Ｃｐａ、Ｄａｂ、Ｌｙｓ、Ｈｌｙ（ホモリシン）、Ｏｒｎ、Ａｒｇ、Ｈａｒ（ホモアルギニン）等のＬ−又はＤ−アミノ酸から選択されるアミノ酸残基であり（ここで、末端アミノ基は−ＮＨ−Λである）；
   −Λは、Ｈ又は前述のキレート基であり；
   Ｒ_３＝Ｈ又は−(ＣＨ_２)_ｍ−Ｋであり（ここで、ｍは０〜８であり、Ｋは−ＮＨ_２又はグアニジン若しくはイミダゾール残基である）；
   Ｒ_４は、Ｈ、又は−ＯＨ、又は−ＯＣＨ_３、又は−ＯＢｚであり；
   Ｙは、Ｄ−Ｔｒｐ又は置換Ｄ−Ｔｒｐ（ここで、インドール環のＮＨがＮＲ'''（ここで、Ｒ'''は−ＣＯＮＨ_２又は−ＣＯＣＨ_３である）になっている）であるか；或いはＹは、位置７におけるベンゼン環上にてＲ''''で置換されたＤ−Ｔｒｐであるか（ここで、Ｒ''''は、−ＯＣＯＮＨ_２又は−ＮＨＣＯＮＨ_２若しくは−ＮＨＣＯＣＨ_３である）；或いはＹは、Ｄ−Ａｐｈ−Ｃｂｍ（４−アミノフェニルアラニン−Ｎ−カルバモイル）又はＤ−Ａｇｌ［(Ｎ^βＭｅ，２−ナフトイル)アミノグリシン］又はＤ−２−Ｎａｌ若しくはＡ若しくはＢ環上にてＯＲ''基により置換されたＤ−２−Ｎａｌであり（ここで、Ｒ''は、Ｈ、線状の若しくは枝分かれした（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル又はベンジルである）；
   Ｚは、Ｔｈｒ、Ｔｈｒ(Ａｃ)、Ｔｈｒ(ｏｌ)、ホモ−Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｓｅｒ(Ａｃ)、ホモ−Ｓｅｒ、Ｈｙｌ（δ−ヒドロキシ−リシン）、Ｔｙｒ、又はＴｙｒ(ＯＲ'''''')から選択されるアミノ酸残基であるか（ここで、Ｒ''''''は、線状の若しくは枝分かれしたＣ_１−６アルキル基、又はベンジル若しくは疎水性基でオルト若しくはパラ置換したベンジルであるか；或いはＲ''''''は、１−又は２−ナフチルメチルである）；或いはＺは、１−若しくは２−Ｎａｌ、又はＡ若しくはＢ環上にて−ＯＣＨ_３若しくは−Ｏ−Ｂｚ基で置換された１−若しくは２−Ｎａｌであり；
   Ｒ_５＝−ＮＨ_２、−ＣＯＮＨ_２、−ＣＯＯＨ；又は−ＣＯＮＨＲ_６である（ここで、Ｒ_６＝Ｃ_２−Ｃ_６アルキル若しくはシクロアルキル、芳香環若しくは芳香族複素環、又はＡｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ及びＴｈｒ(ｏｌ)から選択されるアミノ酸残基である）。置換基Ｒ_６の定義においては、シクロアルキルの語は、例えばシクロペンチル又はシクロヘキシルを意味し、芳香環及び芳香族複素環の例は、それぞれフェニル及びヒドロキシフェニル、ピロール及びイミダゾールである］の化合物。
5. 請求項１〜３のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物の製造方法であって、
   ａ）線状のヘプタペプチドを、既知の方法に従うＳＰＰＳにより、その配列を適切に誘導体化したクロロトリチル樹脂に固定することによって調製し；
   ｂ）前記樹脂に結合したペプチドを、第二世代グラブス触媒を用いて環化させ；
   ｃ）アミノ酸を位置２に加え；
   ｄ）シクロペプチドを脱保護し、樹脂から分離させ；
   ｅ）シクロペプチドをＲＰ−ＨＰＬＣにより精製する
   ことを特徴とする方法。
6. 請求項５に記載の式（ＩＩ）の化合物の製造方法であって、
   ａ）線状のオクタペプチドを、既知の方法を用いたＳＰＰＳにより、その配列を適した固体担体に固定することによって調製し；
   ｂ）樹脂上の線状ペプチドを、第二世代グラブス触媒を用いて環化させ；
   ｃ）シクロペプチドを脱保護し、樹脂から切り離し；
   ｄ）シクロペプチドをＲＰ−ＨＰＬＣにより精製する
   ことを特徴とする方法。
7. 式（Ｉ）又は（ＩＩ）の生成物を有効成分として含有する医薬製剤。
8. 腫瘍、アクロメガリー又はリウマチ性関節炎の治療に有用な医薬製剤を調製するための式（Ｉ）又は（ＩＩ）の生成物の使用。
9. 腫瘍の診断及び治療に適した放射性医薬品を調製するための、請求項２又は３に記載の式（Ｉ）又は（ＩＩ)（ここで、Λはキレート剤である）の生成物の使用。