JP2011244702A - 多糖類の製造方法 - Google Patents
多糖類の製造方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2011244702A JP2011244702A JP2010118276A JP2010118276A JP2011244702A JP 2011244702 A JP2011244702 A JP 2011244702A JP 2010118276 A JP2010118276 A JP 2010118276A JP 2010118276 A JP2010118276 A JP 2010118276A JP 2011244702 A JP2011244702 A JP 2011244702A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- culture
- stirring blade
- electrode
- streptococcus
- genus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
【解決手段】撹拌翼を備えた培養槽中で乳酸菌を培養することにより多糖類を製造する方法において、撹拌翼の先端とpH電極が最接近したときの、撹拌翼の先端からpH電極までの距離が0.1cm〜20cmとなるようにpH電極を設置して培養液のpHを測定し、測定したpHの値に応じて培養中の培養液のpHを調整することを特徴とする方法。
【選択図】図3
Description
本発明で使用する培養槽の大きさは、多糖類が大規模で製造できれば限定されないが、例えば0.1m3(100L)〜100m3の大きさの培養槽を使用する場合に適している。培養槽の大きさは、好ましくは0.2〜80m3、より好ましくは0.5〜50m3である。
当該培養槽は撹拌翼が備えられており、乳酸菌を培養する際に撹拌翼で培地を撹拌する。
本発明では、培養中の培養液のpHをpHメーターを用いて制御する。すなわち、pHメーターが培養液のpHの上昇を感知した場合は酸を添加してpHを下げ、逆に、pHの下降を感知した場合にはアルカリを添加してpHを上げるようにすればよい。当該pHの制御は手動で行っても良いが、自動制御が好ましい。制御装置の種類についは限定されず、市販のものを使用することも可能である。
本発明における乳酸菌とは、通常の培養により菌体外に多糖類を生産することができる乳酸菌のことである。当該乳酸菌は多糖生産能を有していれば種類は限定されない。例えば、Lactobacillus属に属する微生物、Lactococcus属に属する微生物、Leuconostoc属に属する微生物、Pediococcus属に属する微生物及びStreptococcus属に属する微生物等を挙げることができる。
本発明では、ヒアルロン酸生産能を有する微生物としては、Streptococcus属に属する微生物が好ましい。ヒアルロン酸生産能を有するStreptococcus属に属する微生物は、一般に牛鼻腔粘膜、牛眼球に存在していることが知られている。本発明ではそこから単離された微生物を利用することも出来る。また、Streptococcus属に属しない微生物でも、通常の遺伝子工学的手法を用いてヒアルロン酸生産能を得た微生物も使用することが出来る。
培地は、上記微生物がヒアルロン酸を生産できる培地であれば限定されず、微生物の種類に応じた公知の培地を用いることが出来る。例えば、炭素源としてグルコース、フルクトース等の単糖類、乳糖、スクロース、マルトース等の二糖類、オリゴ糖類等;窒素源としてポリペプトン、酵母エキス等の有機窒素源;アルギニン、グルタミン酸、グルタミン等の遊離アミノ酸;ビタミン;無機塩類等;タンニン等のフェノール性水酸基を有するヒアルロニダーゼ阻害剤を含む(水に溶解した)培地を使用することが出来る。
このようにして得られたヒアルロン酸は、公知の方法により精製等を行うことができる。例えば、培地を必要に応じて(好ましくは、ヒアルロン酸濃度が0.1〜5g/Lになるように)希釈した後、例えば遠心分離、濾過、カーボン、セライト、パーライト等を用いて菌体を除去し、さらに、菌体を除去した培地を活性炭と接触させればよい。
工程1.ストレプトコッカス・ズーエピデミカス(FERM P−21487)の培養
グルコース6(w/v)%、ポリペプトン−N(大日本製薬株式会社製)1.5(w/v)%、酵母エキス(オリエンタル酵母工業製)0.5%、硫酸マグネシウム7水塩0.01(w/v)%、リン酸水素2ナトリウム0.05(w/v)%、グルタミン酸ナトリウム0.05(w/v)%、アデカプルロニックL−61(旭電化工業製)0.01(w/v)%の組成の培地を1000Lのジャーファーメンター(培養槽)(株式会社丸菱製)に500L入れ、ジャケットにスチームを供給して121℃、20分間滅菌した。尚、グルコースは121℃、20分間別滅菌して、培養開始時に一度に添加した。
前記工程1で培養した培養液(ヒアルロン酸含有液)を、イオン交換水を用いて10倍に希釈し、その2.5L水溶液のpHを4に調整後、活性炭(武田薬品社製の白鷺RW50−T)を5g、パーライト(三井金属鉱業株式会社のロカヘルプ♯409)を30g添加して、1時間処理し、ヌッチェを用いて濾過した。
前記工程2で調整したヒアルロン酸含有液1Lに、食塩3gを溶解、pH7に調整後、2−プロパノール6Lで析出を行い、40℃で真空乾燥し、ヒアルロン酸ナトリウム結晶を得た。
ヒアルロン酸ナトリウム結晶約4mgを純水5mLに溶解し、分析用サンプルとしてGPCカラムを用いた液体クロマトグラフィ−(島津製作所社製)により相対平均分子量を算出した。
(i)使用機器
島津高速液体クロマトグラフProminenceGPCシステム
システムコントローラ:CBM−20A
液送ユニット:LC−20AD
オンラインデガッサ:DGU−20A3
オートサンプラ:SIL−20AC
カラムオーブン:CTO−20A
示差屈折率検出器:RID−10A
LCワークステーション:LCsolution Ver.1.24SP1+
(ii)分析条件
カラム:Shodex Ohpak SB−806M HQ
ガードカラム:Shodex Ohpak SP−G
溶離液:50mmol/L硫酸ナトリウム水溶液
流量:1.00ml/min
カラム温度:40.0℃
(iii)検量線作成用多糖類
平均分子量5900、9600、21100、47100、107000、200000、 375000、708000、のプルラン(Shodex STANDARD P−82 Lot No81001)を用いて検量線を作成した。
結果を表−1に示した。
直径450mmのマックスブレンド攪拌翼(株式会社高杉製作所製)(醗酵槽内径との比L/D=0.5)を使用した以外は、実施例1と同様の操作を実施した。攪拌翼先端とpH電極(メトラートレド社製 405−DPAS−SC−K8S−225:電極の長さ225mm)の間隔は120mmであった。結果を表−1に示した。
直径450mmのスーパーミックスMR203翼(佐竹化学機械工業株式会社製)(醗酵槽内径との比L/D=0.5)を使用した以外は、実施例1と同様の操作を実施した。攪拌翼先端とpH電極(メトラートレド社製 405−DPAS−SC−K8S−225:電極の長さ225mm)の間隔は120mmであった。結果を表−1に示した。
15000Lジャーファーメンター(培養槽)(小松川加工機株式会社製)に、直径1400mmの門型攪拌翼(株式会社高杉製作所製)(醗酵槽内径との比L/D=0.58)を取り付け、pH電極を、図−1に示したような鞘付きフランジ(深さ200mm)に取り付けた以外は、実施例1と同様の操作を実施した。攪拌翼先端とpH電極(メトラートレド社製 405−DPAS−SC−K8S−325:電極の長さ425mm)の間隔は150mmであった。結果を表−1に示した。
pH電極を、メトラートレド社製の405−DPAS−SC−K8S−120(電極の長さ120mm)を使用した以外は、実施例1と同様の操作を実施した。攪拌翼先端とpH電極の間隔は220mmであった。培養中のpH経時変化を図−1に示した。結果を表−1に示した。
pH電極を、メトラートレド社製の405−DPAS−SC−K8S−120(電極の長さ120mm)を使用した以外は、実施例2と同様の操作を実施した。攪拌翼先端とpH電極の間隔は220mmであった。結果を表−1に示した。
pH電極を、メトラートレド社製の405−DPAS−SC−K8S−120(電極の長さ120mm)を使用した以外は、実施例3と同様の操作を実施した。攪拌翼先端とpH電極の間隔は220mmであった。結果を表−1に示した。
鞘付きフランジを使用しなかった以外は、実施例4と同様の操作を実施した。攪拌翼先端とpH電極の間隔は400mmであった。pHは最大11まで上昇し、ヒアルロン酸の生産は培養14時間目に停止した。結果を表−1に示した。
Claims (8)
- 撹拌翼を備えた培養槽中で乳酸菌を培養することにより多糖類を製造する方法において、
撹拌翼の先端とpH電極が最接近したときの、撹拌翼の先端からpH電極までの距離が0.1cm〜20cmとなるようにpH電極を設置して培養液のpHを測定し、測定したpHの値に応じて培養中の培養液のpHを調整することを特徴とする方法。 - 撹拌翼径(L)の培養槽の内径(D)に対する比(L/D)が0.3〜0.8である、請求項1記載の方法。
- 培養中の培養液のpHが6.5〜8.5である、請求項1記載の方法。
- 攪拌翼が門型翼、マックスブレンド翼又はスーパーミックス翼である請求項1又は2記載の方法。
- 多糖類を産生する微生物が、Lactobacillus属に属する微生物、Lactococcus属に属する微生物、Leuconostoc属に属する微生物、Pediococcus属に属する微生物及びStreptococcus属に属する微生物からなる群から選ばれる少なくとも一種の乳酸菌である請求項1〜4のいずれかに記載の方法。
- 乳酸菌が、ヒアルロン酸生産能を有する微生物である請求項5記載の方法。
- ヒアルロン酸生産能を有する微生物が、Streptococcus zooepidemicusである請求項6記載の方法。
- Streptococcus zooepidemicusが、Streptococcus zooepidemicus MK5(FERM P−21487)である請求項7記載の方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2010118276A JP5760330B2 (ja) | 2010-05-24 | 2010-05-24 | 多糖類の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2010118276A JP5760330B2 (ja) | 2010-05-24 | 2010-05-24 | 多糖類の製造方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2011244702A true JP2011244702A (ja) | 2011-12-08 |
JP5760330B2 JP5760330B2 (ja) | 2015-08-05 |
Family
ID=45410746
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2010118276A Expired - Fee Related JP5760330B2 (ja) | 2010-05-24 | 2010-05-24 | 多糖類の製造方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP5760330B2 (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2018057378A (ja) * | 2016-10-03 | 2018-04-12 | 株式会社バイオジェノミクス | 善玉菌生産物質の製造方法及び食品 |
DE102017115428A1 (de) * | 2017-07-10 | 2019-01-10 | Sartorius Stedim Biotech Gmbh | Kühlfingervorrichtung für einen Einweg-Behälter |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2009011315A (ja) * | 2007-06-05 | 2009-01-22 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | ヒアルロン酸の製造方法 |
JP2009028032A (ja) * | 2007-07-03 | 2009-02-12 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | ヒアルロン酸の製造方法 |
JP2009284826A (ja) * | 2008-05-29 | 2009-12-10 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | ヒアルロン酸の製造方法 |
-
2010
- 2010-05-24 JP JP2010118276A patent/JP5760330B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2009011315A (ja) * | 2007-06-05 | 2009-01-22 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | ヒアルロン酸の製造方法 |
JP2009028032A (ja) * | 2007-07-03 | 2009-02-12 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | ヒアルロン酸の製造方法 |
JP2009284826A (ja) * | 2008-05-29 | 2009-12-10 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | ヒアルロン酸の製造方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
JPN6014041120; J. Ferment. Bioeng. vol.83, no.1, 1997, p.79-86 * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2018057378A (ja) * | 2016-10-03 | 2018-04-12 | 株式会社バイオジェノミクス | 善玉菌生産物質の製造方法及び食品 |
DE102017115428A1 (de) * | 2017-07-10 | 2019-01-10 | Sartorius Stedim Biotech Gmbh | Kühlfingervorrichtung für einen Einweg-Behälter |
DE102017115428B4 (de) | 2017-07-10 | 2021-08-26 | Sartorius Stedim Biotech Gmbh | Kühlfingervorrichtung für einen Einweg-Behälter |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP5760330B2 (ja) | 2015-08-05 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Boeriu et al. | Production methods for hyaluronan | |
AU2007298454B2 (en) | Efficient process for purification of high molecular weight hyaluronic acid | |
Pachekrepapol et al. | Characterization of the chemical structures and physical properties of exopolysaccharides produced by various Streptococcus thermophilus strains | |
Chahuki et al. | Hyaluronic acid production enhancement via genetically modification and culture medium optimization in Lactobacillus acidophilus | |
Yao et al. | Versatile strategies for bioproduction of hyaluronic acid driven by synthetic biology | |
Flores et al. | Role of oxygen in the polymerization and de‐polymerization of alginate produced by Azotobacter vinelandii | |
Antunes et al. | Conversion of cheese whey into a fucose-and glucuronic acid-rich extracellular polysaccharide by Enterobacter A47 | |
Nehru et al. | Production and characterization of low molecular weight heparosan in Bacillus megaterium using Escherichia coli K5 glycosyltransferases | |
CN115161364B (zh) | 提高副干酪乳杆菌jy062胞外多糖产量的制法 | |
JP2011024453A (ja) | 多糖類の製造方法 | |
JP2010252641A (ja) | 乳酸菌由来多糖類の製造方法 | |
JP5760330B2 (ja) | 多糖類の製造方法 | |
Samadi et al. | Enhanced hyaluronic acid production in Streptococcus zooepidemicus by an optimized culture medium containing hyaluronidase inhibitor | |
Vaningelgem et al. | Streptococcus thermophilus ST 111 produces a stable high-molecular-mass exopolysaccharide in milk-based medium | |
Ogrodowski et al. | Production of hyaluronic acid by Streptococcus: the effects of the addition of lysozyme and aeration on the formation and the rheological properties of the product | |
JP5659483B2 (ja) | 多糖類の製造方法 | |
Saraphanchotiwitthaya et al. | Production of hyaluronic acid from molasses by Streptococcus thermophilus TISTR 458 | |
Mohan et al. | Real-time metabolic heat-based specific growth rate soft sensor for monitoring and control of high molecular weight hyaluronic acid production by Streptococcus zooepidemicus | |
West | Effect of temperature on bacterial gellan production | |
JP2012191901A (ja) | 撹拌型培養槽 | |
Nuwan et al. | Production of dextran by Leuconostoc mesenteroides TISTR 053 in fed batch fermentation | |
Wu et al. | Characterization of a polysaccharide hydrogel with high elasticity produced by a mutant strain Sphingomonas sanxanigenens NX03 | |
JP6621549B2 (ja) | 種々の炭素源からl−乳酸またはその塩を製造するためのバチルス エアロラクティカス | |
JP2012135248A (ja) | 乳酸菌由来多糖類の製造方法 | |
Srivastav et al. | Chemical Mutants Enable The Photo Responsive Synthesis Of Hyaluronic Acid From Streptococcus Equi. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20130409 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20130514 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130527 |
|
A625 | Written request for application examination (by other person) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A625 Effective date: 20130514 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A712 Effective date: 20140512 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140610 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140930 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20141128 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20150512 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20150525 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5760330 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
R360 | Written notification for declining of transfer of rights |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R360 |
|
R360 | Written notification for declining of transfer of rights |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R360 |
|
R371 | Transfer withdrawn |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R371 |
|
S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |