JP2011178675A

JP2011178675A - Laminaria retinoic acids a and b

Info

Publication number: JP2011178675A
Application number: JP2010041883A
Authority: JP
Inventors: Masami Ishibashi; 正己石橋; Takafumi Nakazawa; 孝文中澤; Kazufumi Tome; 一文當銘; Takashi Koyano; 喬小谷野
Original assignee: Chiba University NUC
Current assignee: Chiba University NUC
Priority date: 2010-02-26
Filing date: 2010-02-26
Publication date: 2011-09-15

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a novel chemical substance as a resource. <P>SOLUTION: There is disclosed a laminaria retinoic acid A represented by the formula shown herein. In particular, the chemical substance exhibits a cell proliferation inhibitory action on a cancer cell, and therefore is expected to be useful, for example, as a therapeutic agent for cancer. <P>COPYRIGHT: (C)2011,JPO&INPIT

Description

本発明は、新規化合物であるコンブレチン酸Ａ及びＢに関し、更には、これらを用いた薬剤に関する。 The present invention relates to novel compounds, combretinic acids A and B, and further to a drug using them.

現在の我々の生活において、天然の動植物、微生物等の体内に含まれる化学物質（以下「天然物」という。）として見出されたもののうち人体に有用な効果をもたらすものは生薬、医薬品の有効成分として使用されている。また、このようなものは更に有用な医薬品を開発するための研究材料としても様々な役割を有しており、非常に重要なものとなっている。 In our current life, chemicals contained in the body of natural animals and plants, microorganisms, etc. (hereinafter referred to as “natural products”) are effective in the use of crude drugs and pharmaceuticals that have a beneficial effect on the human body. Used as an ingredient. Moreover, such a thing has various roles also as a research material for developing a more useful pharmaceutical, and is very important.

このように、人体に有益な効果をもたらす天然物の探索に関する報告としては、例えば下記非特許文献１に、変形菌からビスインドール化合物、ナフトキノン化合物、グリセリド化合物等を抽出した報告がある。 As described above, as a report on the search for natural products that have a beneficial effect on the human body, for example, Non-Patent Document 1 listed below extracts a bisindole compound, a naphthoquinone compound, a glyceride compound, and the like from a deformed bacterium.

石橋正己、“未利用菌類の資源化：変形菌からの天然物探索”、有機合成化学協会誌、２００３年、第６１巻、第２号、１５２〜１６３頁Masami Ishibashi, “Recycling unused fungi: Search for natural products from deformed bacteria”, Journal of Synthetic Organic Chemistry, 2003, Vol. 61, No. 2, pp. 152-163

しかしながら一方で、天然物の探索が多数の者によって行なわれているにもかかわらず、探索の材料として検討、調査されたものは、地球上の全生物種の中で１０％にも満たないといわれている。 However, on the other hand, despite the fact that many people have been searching for natural products, less than 10% of all the species on Earth have been studied and investigated as search materials. It is said.

本発明は、新規な化学物質を資源として提供することを目的とする。 An object of this invention is to provide a novel chemical substance as a resource.

本発明の一手段に係るコンブレチン酸Ａは、下記式で示される。
Combretic acid A according to one means of the present invention is represented by the following formula.

また、本発明の他の一手段に係るコンブレチン酸Ｂは、下記式で示される。
Moreover, the combretinic acid B which concerns on another means of this invention is shown by a following formula.

また、本発明の他の一手段に係る薬剤は、下記式で示されるコンブレチン酸Ａ及びその塩の少なくともいずれかを有効成分として含有する。
Moreover, the chemical | medical agent which concerns on another means of this invention contains at least any one of the combretinic acid A shown by a following formula, and its salt as an active ingredient.

また、本発明の他の一手段に係る薬剤は、下記式で示されるコンブレチン酸Ｂ及びその塩の少なくともいずれかを有効成分として含有する。
Moreover, the chemical | medical agent which concerns on another means of this invention contains at least any one of the combretinic acid B shown by a following formula, and its salt as an active ingredient.

なお、上記の薬剤は、限定されるわけではないが、癌の治療薬として有用であることが期待される。 In addition, although said medicine is not necessarily limited, it is anticipated that it will be useful as a cancer therapeutic agent.

本発明により、新規な化学物質を資源として提供することができる。特に、本発明に係る化学物質は、癌細胞に対し細胞増殖抑制作用を発揮するため、例えば癌の治療薬として利用が期待される。 According to the present invention, a novel chemical substance can be provided as a resource. In particular, the chemical substance according to the present invention is expected to be used, for example, as a therapeutic agent for cancer because it exhibits a cell growth inhibitory effect on cancer cells.

以下、本発明の実施形態について説明するが、本発明は多くの異なる形態による実施が可能であり、以下に示す実施形態についての記載にのみ狭く解釈されるものではない。 Hereinafter, embodiments of the present invention will be described. However, the present invention can be implemented in many different forms, and should not be construed narrowly only in the description of the following embodiments.

本発明の一形態に係るコンブレチン酸Ａ及びＢは、下記にそれぞれ示される。
Combretic acids A and B according to one embodiment of the present invention are shown below.

本実施形態に係るコンブレチン酸Ａ及びＢは、後述の実施例から明らかなように、シクンシ科植物Ｃｏｍｂｒｅｔｕｍｑｕａｄｒａｎｇｕｌａｒｅから抽出することができるが、これに限定されず、合成することが可能である。 As is apparent from the examples described later, the combretinic acids A and B according to the present embodiment can be extracted from the cichlidaceae plant Combretum quadrangulare, but are not limited thereto and can be synthesized.

本実施形態に係るコンブレチン酸Ａ及びＢは、癌細胞に対し細胞増殖抑制作用を発揮するため、薬剤、例えば癌の治療薬として利用が期待される。なおコンブレチン酸Ａ及びＢを癌の治療薬として利用する場合、コンブレチン酸Ａ及びＢ並びにこれらの塩のうち少なくともいずれかを有効成分として含有しておくことが好ましい。 The combretinic acids A and B according to the present embodiment are expected to be used as drugs, for example, cancer therapeutics, because they exhibit a cell growth inhibitory effect on cancer cells. In addition, when using combretinic acid A and B as a cancer therapeutic agent, it is preferable to contain at least one of combretinic acid A and B and these salts as an active ingredient.

また、本実施形態に係る癌の治療薬は、上記コンブレチン酸Ａ及びＢ並びにこれらの塩のうち少なくともいずれかの他、薬学的に許容しうる通常の担体、結合剤、安定化剤、賦形剤、希釈剤（例えば蒸留水）、ｐＨ緩衝剤（例えばリン酸緩衝生理食塩水）、崩壊剤、可溶化剤、溶解補助剤、等張剤等の各種調剤用配合成分を含有させることができる。 In addition, the therapeutic agent for cancer according to this embodiment includes at least one of the above-described combretinic acids A and B, and salts thereof, as well as normal pharmaceutically acceptable carriers, binders, stabilizers, and excipients. Various preparation ingredients such as an agent, a diluent (for example, distilled water), a pH buffer (for example, phosphate buffered saline), a disintegrant, a solubilizer, a solubilizing agent, and an isotonic agent can be contained. .

またこの癌の治療薬は、患者の性別、体重、症状に見合った適切な投与量を経口的又は非経口的に投与することができる。経口的な投与としては、通常用いられる投与形態、例えば粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、液剤、懸濁液、油剤、乳化剤等の投与形態を採用することができる。また、非経口的な投与としては、通常用いられる投与形態、例えば上記の液剤、懸濁液等にしたものを直接患部に投与する方法、注射等により投与する形態を採用することができる。 Moreover, the therapeutic agent for this cancer can be administered orally or parenterally in an appropriate dose suitable for the sex, weight and symptoms of the patient. For oral administration, commonly used administration forms such as powders, granules, tablets, capsules, solutions, suspensions, oils, emulsifiers and the like can be employed. In addition, as parenteral administration, a commonly used administration form, for example, a method of administering the above-mentioned solution, suspension or the like directly to the affected area, a form of administration by injection or the like can be adopted.

本実施例では、シクンシ科植物Ｃｏｍｂｒｅｔｕｍｑｕａｄｒａｎｇｕｌａｒｅからコンブレチン酸Ａ及びＢを抽出し、検討した結果を示す。図１に、コンブレチン酸Ａ及びＢの単離についてのスキームの概略を示しておく。 In the present Example, the results of examination of the extraction of combretinic acids A and B from the plant family Combretum quadrangulare are shown. FIG. 1 shows an outline of a scheme for isolating combretinic acids A and B.

Ｃｏｍｂｒｅｔｕｍｑｕａｄｒａｎｇｕｌａｒｅ葉部のメタノール抽出物（３００ｇ）を、ダイヤイオンＨＰ２０を担体とするカラム（φ１０×２００ｍｍ）に付し、メタノ−ル／水＝１／１で溶出した画分１Ｂをヘキサン、酢酸エチル、ブタノールを用いて溶媒分配を行い、各可溶部を得た。このうち、ブタノール可溶部について、ＳｉｌｉｃａｇｅｌＰＳＱ１００Ｂを担体とするカラム（φ５０×２３０ｍｍ）に付し、クロロホルム、メタノールを用いて溶出し、溶出順に２Ａ−２Ｉの各画分を得た。このうちクロロホルム／メタノ−ル＝９５／５にて溶出した２Ｄを、さらにＯＤＳを担体とするカラム（φ３０×２５０ｍｍ）に付し、溶出順に３Ａ−３Ｅの各画分を得た。得られた３Ａを下記ＨＰＬＣ条件（１）による分取ＨＰＬＣ（ＯＤＳ）に付し、４Ａ−４Ｄの各画分を得た。このうち単一化合物に分離できた４Ｃをコンブレチン酸Ａ（１４．０ｍｇ）と命名した。また、４Ｂをさらに下記ＨＰＬＣ条件（２）にて精製し、５Ａ−５Ｃを得た。このうち単一化合物に分離できた５Ｂをコンブレチン酸Ｂ（３．７ｍｇ）と命名した・
The methanol extract (300 g) of the leaf of Combratum quadrangulare was applied to a column (φ10 × 200 mm) using Diaion HP20 as a carrier, and fraction 1B eluted with methanol / water = 1/1 was treated with hexane and ethyl acetate. Then, the solvent was partitioned using butanol to obtain each soluble part. Among these, the butanol-soluble part was attached to a column (φ50 × 230 mm) using Silica gel PSQ 100B as a carrier, eluted with chloroform and methanol, and 2A-2I fractions were obtained in the order of elution. Among these, 2D eluted with chloroform / methanol = 95/5 was further applied to a column (φ30 × 250 mm) using ODS as a carrier, and 3A-3E fractions were obtained in the order of elution. The obtained 3A was subjected to preparative HPLC (ODS) under the following HPLC condition (1) to obtain 4A-4D fractions. Of these, 4C that could be separated into a single compound was named Combretic acid A (14.0 mg). 4B was further purified under the following HPLC condition (2) to obtain 5A-5C. Of these, 5B, which could be separated into a single compound, was named combretinic acid B (3.7 mg).

（コンブレチン酸Ａ）
コンブレチン酸Ａは、白色非結晶固体として得られた。またＨＲＥＳＩＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｉｅ）にてｍ／ｚ５５３．３５０４［Ｍ＋Ｎａ］^＋が観測された。および^１ＨＮＭＲ、^１３ＣＮＭＲ、ＤＥＰＴ、ＨＭＱＣの解析より、分子式がＣ_３２Ｈ_５０Ｏ_６であることが判明した。 (Combretic acid A)
Combretic acid A was obtained as a white amorphous solid. In addition, m / z 553.3504 [M + Na] ⁺ was observed by HRESIMS (positive). And ¹ H NMR, ¹³ C NMR, DEPT and HMQC analysis revealed that the molecular formula was C ₃₂ H ₅₀ O ₆ .

また、コンブレチン酸Ａに対して赤外吸収測定（以下「ＩＲ測定」という。）を行い、赤外吸収スペクトル（以下「ＩＲスペクトル」という。）を得た。この結果、３３４６ｃｍ^−１、２９７３ｃｍ^−１、１７１６ｃｍ^−１、１２４５ｃｍ^−１、の吸収をそれぞれ観測した。 Further, infrared absorption measurement (hereinafter referred to as “IR measurement”) was performed on the combretinic acid A to obtain an infrared absorption spectrum (hereinafter referred to as “IR spectrum”). As a result, absorptions of 3346 cm ⁻¹ , 2973 cm ⁻¹ , 1716 cm ⁻¹ and 1245 cm ⁻¹ were observed.

また、コンブレチン酸Ａに対し、比旋光度［α］_Ｄの測定を行った。この結果、旋光角は＋８３．６度であり、光学活性を有することが確認できた。なお下記表３に、旋光角、ＨＲＥＳＩＭＳ、ＩＲ測定の結果を示しておく。
Moreover, the specific rotation [α] _D was measured for the combretinic acid A. As a result, the optical rotation angle was +83.6 degrees, and it was confirmed to have optical activity. Table 3 below shows the results of optical rotation angle, HRESIMS, and IR measurement.

また、^１ＨＮＭＲスペクトルにおいて、１個のアセチル基を含む７個のメチル基由来のシグナル、２Ｈ分のオレフィンプロトンのシグナルおよび通常より高磁場側のメチンシグナル２個が観測された。また、^１３ＣＮＭＲスペクトルにおいては、７個のメチル基に由来する炭素シグナル、１個のアセチル基に由来するカルボニル炭素シグナル、オレフィン炭素シグナル２個、２個のオキシメチン炭素シグナルおよび酸素に結合した４級炭素シグナル１個が観測された。更に、ＣＯＳＹスペクトル、ＨＭＱＣ、ＨＭＢＣスペクトルの解析より、各プロトンシグナルおよび各炭素シグナルを帰属した。また、ＨＭＢＣスペクトルの解析より、本化合物は下記式に示すシクロアルタン骨格を有する新規トリテルペンであると判明した。なお、２３位オレフィンの立体化学については、結合定数の文献値との比較によりトランスであると決定した。なお、下記に、^１ＨＮＭＲ、^１３ＣＮＭＲのデータについて示しておく。
Further, in the ¹ H NMR spectrum, signals derived from 7 methyl groups including one acetyl group, signals of olefin protons for 2H, and two methine signals on the higher magnetic field side than usual were observed. In the ¹³ C NMR spectrum, a carbon signal derived from seven methyl groups, a carbonyl carbon signal derived from one acetyl group, two olefin carbon signals, two oxymethine carbon signals and 4 bonded to oxygen. One grade carbon signal was observed. Furthermore, each proton signal and each carbon signal were assigned from the analysis of COSY spectrum, HMQC, and HMBC spectrum. From the analysis of the HMBC spectrum, this compound was found to be a novel triterpene having a cycloartane skeleton represented by the following formula. The stereochemistry of the 23-position olefin was determined to be trans by comparison with the literature value of the binding constant. Incidentally, in the ^following, previously shown for data 1 H ^NMR, 13 C ^NMR.

以上、コンブレチン酸Ａの構造を上記式で示すように決定した。 As described above, the structure of combretinic acid A was determined as shown in the above formula.

（コンブレチン酸Ｂ）
コンブレチン酸Ｂは、白色非結晶固体として得られた。ＨＲＥＳＩ−ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｉｅ）にてｍ／ｚ５５３．３５００［Ｍ＋Ｎａ］^＋が観測されたこと、更に^１３ＣＮＭＲ及びＤＥＰＴの解析よりコンブレチン酸Ｂの分子式は、コンブレチン酸Ａのものと同じくＣ_３２Ｈ_５０Ｏ_６であることが判明した。 (Combretic acid B)
Combretic acid B was obtained as a white amorphous solid. HRESI-MS (positivie) at m / z 553.3500 [M + Na ] ^{that +} is observed, further ¹³ C NMR and molecular formula of Konburechin acid B from analysis of DEPT, like _{C 32} H as the Konburechin acid A It was found to be ₅₀ O ₆ .

また、コンブレチン酸Ｂに対してＩＲ測定を行い、ＩＲスペクトルを得た。この結果は非常に上記コンブレチン酸Ａに類似しており、３４２１ｃｍ^−１、２９４９ｃｍ^−１、１７１５ｃｍ^−１、１２４７ｃｍ^−１にそれぞれ吸収をそれぞれ観測した。 Moreover, IR measurement was performed with respect to combretinic acid B, and IR spectrum was obtained. This result is similar to the very above Konburechin acid ^{^{^{A, 3421cm -1, 2949cm -1,}}} 1715cm -1, were observed respectively each absorption at 1247cm ^-1.

また、コンブレチン酸Ｂに対し、比旋光度［α］_Ｄの測定を行った。この結果、旋光角は＋２５．６度であり、光学活性を有することが確認できた。なお下記表５に、比旋光度、ＨＲＥＳＩＭＳ、ＩＲ測定の結果を示しておく。
Further, the specific rotation [α] _D was measured for the combretinic acid B. As a result, the optical rotation angle was +25.6 degrees, and it was confirmed to have optical activity. Table 5 below shows the results of specific rotation, HRESIMS, and IR measurement.

またコンブレチン酸Ｂの^１ＨＮＭＲスペクトルおよび^１３ＣＮＭＲスペクトルにおいて、コンブレチン酸Ｂのデータは、コンブレチン酸Ａとよく類似していたことから、本化合物はコンブレチン酸Ａと同様にシクロアルタン型トリテルペン構造をもつことが示唆された。一方、コンブレチン酸Ｂでは、コンブレチン酸Ａと比較し、^１ＨＮＭＲにおいてトランス二置換オレフィンシグナルに代わり末端オレフィン由来シグナルが、また、オキシメチンシグナルが１つ多く観測された。また^１３ＣＮＭＲにおいては、オキシメチン炭素由来シグナルが１つ多く観測された。ＣＯＳＹスペクトル、ＨＭＱＣ、ＨＭＢＣの詳細な解析の結果、本化合物は下記式に示すシクロアルタン骨格を有する新規トリテルペンであると判明した。なお、ＮＭＲスペクトルおよび^１３ＣＮＭＲスペクトルのデータについて下記表に示しておく。
Also, in the ¹ H NMR spectrum and ¹³ C NMR spectrum of combretinic acid B, the data of combretinic acid B was very similar to that of combretinic acid A. It was suggested to have. On the other hand, in the case of the combretinic acid B, as compared with the combretinic acid A, a terminal olefin-derived signal and one more oxymethine signal were observed in ¹ H NMR instead of the trans-disubstituted olefin signal. In ¹³ C NMR, one more signal derived from oxymethine carbon was observed. As a result of detailed analysis of the COSY spectrum, HMQC, and HMBC, this compound was found to be a novel triterpene having a cycloartane skeleton represented by the following formula. The data of NMR spectrum and ¹³ C NMR spectrum are shown in the following table.

本発明は新規化合物を有効成分とし、薬剤として産業上の利用可能性を有する。 The present invention comprises a novel compound as an active ingredient and has industrial applicability as a drug.

実施例におけるコンブレチン酸Ａ及びＢの単離スキ−ムの概略を示す図である。It is a figure which shows the outline of the isolation scheme of the combretinic acid A and B in an Example. コンブレチン酸Ａの^１ＨＮＭＲスペクトルを示す図である。It is a diagram showing the ¹ H NMR spectrum of Konburechin acid A. コンブレチン酸Ａの^１３ＣＮＭＲスペクトルを示す図である。It is a figure which shows the ¹³ C NMR spectrum of combretinic acid A. コンブレチン酸ＡのＣＯＳＹスペクトルを示す図である。It is a figure which shows the COSY spectrum of combretinic acid A. コンブレチン酸ＡのＨＭＱＣスペクトルを示す図である。It is a figure which shows the HMQC spectrum of a combretinic acid A. コンブレチン酸ＡのＨＭＢＣスペクトルを示す図である。It is a figure which shows the HMBC spectrum of combretinic acid A. コンブレチン酸Ｂの^１ＨＮＭＲスペクトルを示す図である。It is a diagram showing the ¹ H NMR spectrum of Konburechin acid B. コンブレチン酸Ｂの^１３ＣＮＭＲスペクトルを示す図である。It is a figure which shows the ¹³ C NMR spectrum of combretinic acid B. コンブレチン酸ＢのＣＯＳＹスペクトルを示す図である。It is a figure which shows the COSY spectrum of combretinic acid B. コンブレチン酸ＢのＨＭＱＣスペクトルを示す図である。It is a figure which shows the HMQC spectrum of combretinic acid B. コンブレチン酸ＢのＨＭＢＣスペクトルを示す図である。It is a figure which shows the HMBC spectrum of combretinic acid B.

Claims

Combretic acid A represented by the following formula.

Combretic acid B represented by the following formula.

A drug containing at least one of combretinic acid A represented by the following formula and a salt thereof as an active ingredient.

A drug containing at least one of combretinic acid B represented by the following formula and a salt thereof as an active ingredient.

The drug according to claim 3 or 4, which is a therapeutic drug for cancer.