JP2011055747A - Food or feed additive with effect of suppressing absorption of mycotoxin into body - Google Patents

Food or feed additive with effect of suppressing absorption of mycotoxin into body Download PDF

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良子 小西
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千佳子 田村
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Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a food or feed additive with effect of suppressing the internal absorption of mycotoxin; to provide food or feed containing the additive; and to provide a method for suppressing the internal absorption of mycotoxin which is possibly mixed in food or feed. <P>SOLUTION: A composition containing low-methoxyl pectin and calcium salt is used as the food or feed additive for suppressing the internal absorption of mycotoxin. <P>COPYRIGHT: (C)2011,JPO&INPIT

Description

本発明は、マイコトキシンの体内吸収を抑制する効果のある食品もしくは飼料用添加剤、並びに当該添加剤を含む食品または飼料に関する。また本発明は、食品もしくは飼料中に混在している可能性のあるマイコトキシンについて、その体内吸収を抑制する方法に関する。   The present invention relates to an additive for food or feed that has an effect of suppressing in vivo absorption of mycotoxins, and a food or feed containing the additive. The present invention also relates to a method for suppressing in vivo absorption of mycotoxins that may be present in food or feed.

マイコトキシンは、カビが産生する二次代謝産物で、人と動物に有害な化合物の総称であり、数多くの化合物やその類縁体が存在することが知られている。マイコトキシン中毒は、急性のものでは突発性の下痢と肝機能障害の主症状を呈する。慢性のものでは内臓に炎症をおこすことによって消化障害、呼吸器病の主症状を呈する。また、一部のマイコトキシンは変異原性の強いものや免疫能低下を引き起こすものもある。穀物などに特に頻繁に汚染しているマイコトキシンとして、デオキシニバレノールなどが挙げられる。   Mycotoxins are secondary metabolites produced by molds and are a general term for compounds harmful to humans and animals. It is known that many compounds and their analogs exist. Mycotoxin poisoning, in acute cases, presents with major symptoms of sudden diarrhea and liver dysfunction. In chronic cases, inflammation of the internal organs causes major symptoms of digestive disorders and respiratory diseases. Some mycotoxins may be highly mutagenic or cause decreased immune capacity. Deoxynivalenol and the like are listed as mycotoxins that are particularly frequently contaminated with grains.

デオキシニバレノール(以下DONと略す)は、主にフザリウム属のカビ(赤カビ)が産生するトリコテセン系のマイコトキシンであり、別名ボミトキシン(Vomitoxin)や吐血毒素とも言われている。主な産生菌は、Fusarium 属のF.graminearum、F.culmorum 等があり、麦類を中心とした赤カビ病の原因となる植物病原菌の一つで、圃場での汚染により、最も広く穀類に被害を与え、特にとうもろこしや麦類のDON汚染は、世界的に問題となっている。   Deoxynivalenol (hereinafter abbreviated as DON) is a trichothecene mycotoxin produced mainly by Fusarium fungi (red mold), and is also referred to as vomitoxin or vomiting toxin. The main producers are Fusarium genus F.graminearum, F.culmorum, etc., which is one of the plant pathogens that cause red mold disease mainly in wheat and is the most widely used in cereals due to contamination in the field. Damage, especially corn and wheat DON contamination, is a global problem.

フモニシンはフザリウム属のカビであるF. verticillioides 、F .moniliformeおよび F. proliferatum が産生するマイコトキシンであり、穀類を汚染するカビ毒として知られている。特に家畜飼料のフモニシン汚染例は多く、急性毒性はないが長期毒性としてほとんどの家畜に対して肝機能障害、心機能障害を引き起こし、さらには変異原性も疑われている。国内では飼料に対してのみ基準値が設定さており、食品に対する基準値はないが、最近では、とうもろこし加工品を主食とする国や地域での新生児の神経管に関する催奇形性から注目されており、今後注意が必要なカビ毒である。   Fumonisins are molds belonging to the genus Fusarium, F. verticillioides, F. It is a mycotoxin produced by moniliforme and F. proliferatum and is known as a mold toxin that contaminates cereals. In particular, there are many cases of fumonisin contamination of livestock feed, which is not acutely toxic, but as a long-term toxicity, it causes liver dysfunction and cardiac dysfunction to most domestic animals, and is also suspected to be mutagenic. In Japan, standard values are set only for feed, and there is no standard value for foods. Recently, attention has been focused on the teratogenicity related to the neural tube of newborns in countries and regions where processed corn is a staple food. This is a mold poison that needs attention in the future.

パツリンは、Penicillium expansum等のカビによって産生され、種々の動物に致死的な毒性を有するカビ毒である。特に果汁に対する汚染が深刻であり、リンゴジュースへのパツリンの混入は様々な国で報告されており、深刻な被害をもたらしている。   Patulin is a mold toxin produced by molds such as Penicillium expansum and having lethal toxicity to various animals. Contamination to fruit juice is particularly serious, and contamination of patulin with apple juice has been reported in various countries, causing serious damage.

食品や飼料中のマイコトキシンを除去もしくは減毒する方法としては、従来のように殺菌剤や抗菌剤を主成分とする農薬を用いてマイコトキシン産生菌自体を殺菌および低減する方法が一般的である。また、マイコトキシン生合成阻害剤を用いて汚染されているマイコトキシン量を減少させる方法もある(特許文献1)。しかしながら、これらの方法は、農薬による環境汚染等の問題がある。   As a conventional method for removing or detoxifying mycotoxins in foods and feeds, a method of sterilizing and reducing mycotoxin-producing bacteria per se using an agrochemical mainly composed of a bactericidal agent or an antibacterial agent is common. There is also a method of reducing the amount of mycotoxins contaminated with a mycotoxin biosynthesis inhibitor (Patent Document 1). However, these methods have problems such as environmental pollution caused by agricultural chemicals.

一方、すでにマイコトキシンに汚染されている食品や飼料中の毒素の除去や無毒化については、マイコトキシン無毒化酵素を用いる方法(特許文献2)やEubacterium属等のマイコトキシン無毒化細菌を繁殖させるなどといった方法がある(特許文献3)。しかしながら、これらの方法には、特殊で高価な酵素や細菌を繁殖させる環境が必要であり、多くの食品や飼料に適用することは難しい。また、化石サンゴを主成分として含有するマイコトキシン吸着剤を用いて飼料からマイコトキシンを取り除く方法も確立されているがその効果は限定的である(特許文献4)。   On the other hand, for removal and detoxification of toxins in food and feed already contaminated with mycotoxins, a method using mycotoxin detoxification enzyme (Patent Document 2), a method of breeding mycotoxin detoxification bacteria such as Eubacterium, etc. (Patent Document 3). However, these methods require an environment in which special and expensive enzymes and bacteria are propagated, and are difficult to apply to many foods and feeds. Moreover, although the method of removing mycotoxin from feed using the mycotoxin adsorption agent which contains a fossil coral as a main component is established, the effect is limited (patent document 4).

特開2009−167138号公報JP 2009-167138 A 特表2001−521362号公報JP-T-2001-521362 特表2008−520194号公報Special table 2008-520194 gazette 特開2007−174926号公報JP 2007-174926 A

本発明は、すでにマイコトキシンに汚染されている可能性のある食品または飼料を摂取した場合において、マイコトキシンが体内に吸収されることを抑制することによって、マイコトキシンが生体に及ぼす影響を低減するための方法を提供することを目的とする。   The present invention relates to a method for reducing the effects of mycotoxins on a living body by suppressing the absorption of mycotoxins into the body when food or feed that may already be contaminated with mycotoxins is consumed. The purpose is to provide.

本発明者らは、上記課題を解決するために、鋭意検討を重ねていたところ、マイコトキシンで汚染された食品または飼料に低メトキシペクチンおよびカルシウム塩を含む組成物を共存させると、マイコトキシンが上記組成物から形成されるゲル内に取り込まれ、しかもその内部に安定に閉じこめられることで、マイコトキシンの体内への吸収および蓄積が抑制できることを見出した。   In order to solve the above-mentioned problems, the present inventors have made extensive studies. When a composition containing low methoxy pectin and a calcium salt is allowed to coexist in a food or feed contaminated with mycotoxin, the mycotoxin is mixed with the above composition. It has been found that absorption and accumulation of mycotoxins in the body can be suppressed by being taken into the gel formed from the product and being stably confined within the gel.

本発明は、かかる知見に基づいて開発されたものであり、下記の態様を含むものである:
(I)マイコトキシンの体内吸収を抑制するための食品もしくは飼料用添加剤
(I-1)低メトキシルペクチンおよびカルシウム塩を含有することを特徴とする、マイコトキシンの体内吸収を抑制するための食品用もしくは飼料用添加剤。
(I-2)低メトキシルペクチン100質量部に対してカルシウム塩を0.2質量部以上の割合で含有する(I-1)に記載する食品用もしくは飼料用添加剤。
(I-3)低メトキシルペクチンがアミド化ペクチンである(I-1)または(I-2)に記載する食品用もしくは飼料用添加剤。
(I-4)上記マイコトキシンがデオキシニバレノール、フモニシン、およびパツリンからなる群から選択される少なくとも1種である、(I-1)乃至(I-3)のいずれかに記載の食品用もしくは飼料用添加剤。
The present invention has been developed based on such findings, and includes the following aspects:
(I) Food or feed additive for suppressing mycotoxin absorption in the body (I-1) For food for suppressing mycotoxin absorption in the body, comprising low methoxyl pectin and calcium salt Additive for feed.
(I-2) The food or feed additive described in (I-1), which contains a calcium salt in a proportion of 0.2 parts by mass or more with respect to 100 parts by mass of low methoxyl pectin.
(I-3) The food or feed additive according to (I-1) or (I-2), wherein the low methoxyl pectin is an amidated pectin.
(I-4) The food or feed according to any one of (I-1) to (I-3), wherein the mycotoxin is at least one selected from the group consisting of deoxynivalenol, fumonisin, and patulin Additive.

(II)飼料
マイコトキシンの体内吸収を抑制することを目的として(I-1)乃至(I-4)のいずれかに記載する飼料用添加剤を含む飼料。
(II) Feed A feed containing the feed additive described in any one of (I-1) to (I-4) for the purpose of suppressing in vivo absorption of mycotoxins.

(III)体内でのマイコトキシンの吸収を抑制する方法
ヒト以外の動物に、(I-1)乃至(I-4)のいずれかに記載する飼料用添加剤または(II)に記載する飼料を経口投与することを特徴とする、体内でのマイコトキシンの吸収を抑制する方法。
(III) Method for inhibiting absorption of mycotoxins in the body <Desc / Clms Page number 11> For a non-human animal, the feed additive according to any of (I-1) to (I-4) or (II) A method for suppressing mycotoxin absorption in the body, comprising orally administering a feed to be treated.

本発明によれば、マイコトキシンで汚染されている食品や飼料を摂取した際のマイコトキシンの体内への吸収および蓄積を有意に抑制することができる食品用または飼料用の添加剤、並びにそれを添加した食品もしくは飼料を提供することができる。   According to the present invention, an additive for food or feed that can significantly suppress the absorption and accumulation of mycotoxins in the body when food or feed contaminated with mycotoxins is ingested, and the addition of the same Food or feed can be provided.

例えば、低メトキシペクチンおよびカルシウム塩を含む本発明の食品用添加剤は、乳児や咀嚼困難な高齢者などを対象とした、例えばゼリー状の食品(菓子を含む)に用いることができ、このため、マイコトキシンに対して抵抗性が低い高リスク者に対するマイコトキシン対策として有用であると考えられる。   For example, the food additive of the present invention containing low methoxy pectin and calcium salt can be used for, for example, jelly-like food (including confectionery) for infants and the elderly who are difficult to chew. Therefore, it is considered useful as a countermeasure against mycotoxins for high-risk individuals with low resistance to mycotoxins.

本発明の製剤(実施例2)を経口投与したマウス群の血清中のDON濃度の経時的推移を示す(実験例3)。The time-dependent transition of the DON density | concentration in the serum of the mouse group which orally administered the formulation (Example 2) of this invention is shown (Experimental example 3). 比較例1の製剤を経口投与したマウス群の血清中のDON濃度の経時的推移を示す(実験例3)。The time-dependent transition of the DON density | concentration in the serum of the mouse group which orally administered the formulation of the comparative example 1 is shown (Experimental example 3).

本発明は、低メトキシルペクチン(以下、「LMペクチン」という)とカルシウム塩を主成分として含有する食品用もしくは飼料用の添加剤である。かかる添加剤は、水の存在下でゲルを形成することでマイコトキシンを取り込み、しかもゲル内部に安定に閉じ込める作用を有し、かかる作用に基づいて体内でのマイコトキシンの吸収や蓄積を抑制する効果を発揮する。このため、当該本発明の添加剤は、食品または飼料に混在している可能性のあるマイコトキシンについて、専ら食品または飼料とともに用いられて、マイコトキシンの体内吸収および蓄積を抑制する目的で使用される。   The present invention is an additive for food or feed containing low methoxyl pectin (hereinafter referred to as “LM pectin”) and calcium salt as main components. Such an additive has the effect of capturing mycotoxins by forming a gel in the presence of water, and also stably trapping them inside the gel, and has the effect of suppressing absorption and accumulation of mycotoxins in the body based on such effects. Demonstrate. For this reason, the additive of the present invention is used for the purpose of suppressing the absorption and accumulation of mycotoxins in the body only for the mycotoxins that may be present in the food or feed, together with the food or feed.

なお、ここで「食品または飼料とともに」とは、添加剤を食品または飼料に混合した状態で用いる場合のみならず、食品または飼料と組み合わせて同時に摂取する場合;添加剤を摂取した後、速やかに食品または飼料を摂取する場合;食品または飼料を摂取した後、速やかに添加剤を摂取する場合のいずれの態様をも包含する意味で用いられる。   Here, “with food or feed” means not only when the additive is used in a state where it is mixed with food or feed, but also when it is taken in combination with food or feed; When ingesting food or feed; used to mean any aspect of ingesting additives immediately after ingesting food or feed.

本発明で用いられるLMペクチンは、植物の果皮などを酸性溶液で抽出して得られるα−1,4グリコシド結合したD−ガラクツロン酸もしくはD−カラクツロン酸のカルボキシル基がメチルエステル化されたD−カラクツロン酸メチルエステルからなる主鎖と、主にアラビノースやグルコース等の中性糖からなる側鎖によって構成される多糖類である。ペクチンの由来としてはレモンやライムが最も適しているが、オレンジ、グレープフルーツやリンゴなどでも良い。   The LM pectin used in the present invention is D-galacturonic acid or D-galacturonic acid which is obtained by extracting the skin of a plant or the like with an acidic solution and methyl-esterified with a carboxyl group of D-galacturonic acid or D-caracturonic acid. It is a polysaccharide composed of a main chain composed of galacturonic acid methyl ester and a side chain composed mainly of neutral sugars such as arabinose and glucose. Lemon and lime are the most suitable sources of pectin, but orange, grapefruit and apple may be used.

ペクチンはD−ガラクツロン酸のフリーのカルボキシル基が2価のカチオン、特にカルシウムイオンと結合することによりゲルを形成ことが知られている。ペクチンは原料からの粗抽出段階ではエステル化度50%以上の高メトキシル状態である。この状態ではフリーのカルボキシル基が少なすぎるためゲル化反応がすすみ難いため、メトキシル化度を低減させたLMペクチンが広く流通している。本発明においてはペクチンをカルシウムイオンでゲル化させることが必要であるため、低メトキシル化され、メトキシル化度が50%以下になっていることが必要である。好ましくはメトキシル化度10%以上、40%以下のペクチンである。   Pectin is known to form a gel by binding a free carboxyl group of D-galacturonic acid to a divalent cation, particularly calcium ion. Pectin is in a high methoxyl state with a degree of esterification of 50% or more in the crude extraction stage from the raw material. In this state, since there are too few free carboxyl groups and the gelation reaction is difficult to proceed, LM pectin with a reduced degree of methoxylation is widely distributed. In the present invention, since it is necessary to gel pectin with calcium ions, it is necessary that the pectin is reduced in methoxylation and the degree of methoxylation is 50% or less. Preferred is a pectin having a methoxylation degree of 10% or more and 40% or less.

メトキシル化度を低減させるためには一般的に酸、酵素処理やアンモニア処理を行うが、アンモニア処理の際にペクチンはアミド化される。本発明では、アミド化されていない非アミド化ペクチンおよびアミド化されたアミド化ペクチンのいずれをも使用することができる。後述する実験例で示すように、マイコトキシンの取り込み率が大きいことからアミド化ペクチンが好適に使用される。   In order to reduce the degree of methoxylation, acid, enzyme treatment and ammonia treatment are generally carried out, and pectin is amidated during the ammonia treatment. In the present invention, both non-amidated amidated pectin and amidated amidated pectin can be used. As shown in the experimental examples to be described later, amidated pectin is preferably used because of its high mycotoxin uptake rate.

これらのLMペクチンは食品添加物として広く流通しており、誰でも商業的に容易に入手することができる。商業的に入手可能な製品としては、例えば非アミド化ペクチンとしてはビストップ[商標]D−2262、アミド化ペクチンとしてはビストップ[商標]D−2264(いずれも、三栄源エフ・エフ・アイ株式会社製)を挙げることができる。その形態は、顆粒状、粒状、または粉末状(スプレードライ粉末品を含む)の形態の別を問わず、いずれの形態も使用することができる。   These LM pectin is widely distributed as a food additive, and anyone can easily obtain it commercially. Commercially available products include, for example, Bistop [TM] D-2262 for non-amidated pectin and Bistop [TM] D-2264 for amidated pectin (both are San-Eigen F.F. Can be mentioned). Regardless of whether the form is granular, granular, or powder (including spray-dried powder), any form can be used.

本発明に用いられるカルシウム塩としては、カルシウムの塩化物、水酸化物、炭酸塩、炭酸水素塩、有機酸塩などを挙げることができる。ここで有機酸としては、乳酸、クエン酸、ピルビン酸、アスコルビン酸、リンゴ酸、マレイン酸等を挙げることができる。好ましくは炭酸塩や乳酸塩である。なお、ここで、中性条件下で水に溶解しやすいカルシウム塩としてはカルシウムの塩化物および水酸化物を、中性条件下で水に難溶であるものの酸性条件下で易溶性を示すカルシウム塩としてはカルシウムの炭酸塩、炭酸水素塩、または乳酸塩などの有機酸塩を挙げることができる。好ましくは炭酸塩である。   Examples of the calcium salt used in the present invention include calcium chloride, hydroxide, carbonate, bicarbonate, and organic acid salt. Examples of the organic acid include lactic acid, citric acid, pyruvic acid, ascorbic acid, malic acid, maleic acid and the like. Carbonate and lactate are preferable. Here, as calcium salts that are easily dissolved in water under neutral conditions, calcium chloride and hydroxide are calcium salts that are hardly soluble in water under neutral conditions but are readily soluble under acidic conditions. Examples of the salt include an organic acid salt such as calcium carbonate, hydrogen carbonate, or lactate. A carbonate is preferred.

これらのカルシウム塩は形態の別を問わず、いずれの形態も使用することができるが、水への溶解性を考慮すれば、粉末または顆粒状の形態を有することが好ましい。かかるカルシウム塩もまた商業的に容易に入手することができる。   These calcium salts can be used in any form regardless of the form, but considering the solubility in water, it is preferable to have a powder or granular form. Such calcium salts are also readily available commercially.

本発明の添加剤は、LMペクチンとカルシウム塩を混合することによって製造することができる。好ましくは、LMペクチンとカルシウム塩とが互いに固体状態で共存するように混合することによって製造する。水への溶解性を考慮すれば、LMペクチンとカルシウム塩とをそれぞれ顆粒または粉末の状態で混合することが好ましい。また、混合したLMペクチンとカルシウム塩を、流動層造粒機を用いて造粒することにより、顆粒形態の製剤を製造してもよい。さらには、低メトキシルペクチンとカルシウム塩をあらかじめpHが5以上の水性溶媒に溶かすことにより調製される液状の製剤としても使用することができる。   The additive of the present invention can be produced by mixing LM pectin and a calcium salt. Preferably, it is produced by mixing LM pectin and calcium salt so that they coexist in a solid state. In consideration of solubility in water, it is preferable to mix LM pectin and calcium salt in the form of granules or powder, respectively. Moreover, you may manufacture the formulation of a granule form by granulating the mixed LM pectin and calcium salt using a fluid bed granulator. Furthermore, it can also be used as a liquid preparation prepared by dissolving low methoxyl pectin and calcium salt in an aqueous solvent having a pH of 5 or more in advance.

本発明の添加剤中に配合するLMペクチンの割合としては、通常20〜99質量%を挙げることができる。好ましくは30〜95質量%、より好ましくは50〜97質量%である。また、本発明の添加剤中のカルシウム塩の割合は、通常0.1〜5質量%を挙げることができ、好ましくは0.2〜3質量%、より好ましくは0.5〜3質量%である。なお、本発明の添加剤中のLMペクチン100質量部に対するカルシウム塩の割合としては、ゲルを形成する範囲であれば特に制限されないが、通常0.2質量部以上、好ましくは0.5〜5質量部、より好ましくは1〜3質量部である。   As a ratio of LM pectin blended in the additive of the present invention, 20 to 99% by mass can be usually mentioned. Preferably it is 30-95 mass%, More preferably, it is 50-97 mass%. Moreover, the ratio of the calcium salt in the additive of this invention can mention 0.1-5 mass% normally, Preferably it is 0.2-3 mass%, More preferably, it is 0.5-3 mass%. is there. The ratio of the calcium salt to 100 parts by mass of LM pectin in the additive of the present invention is not particularly limited as long as it forms a gel, but is usually 0.2 parts by mass or more, preferably 0.5-5. Part by mass, more preferably 1 to 3 parts by mass.

なお、本発明の添加剤は、上記するようにLMペクチンとカルシウム塩からなるものであってもよいし、また本発明の効果を妨げない限り、他の成分を含有することもできる。かかる他の成分としては、グルコース、フルクトース、マルトース、シュークロース、ラクトースなどといった、単糖類や二糖類、オリゴ糖やデキストリンなどの比較的低分子の多糖類などを挙げることができる。   The additive of the present invention may be composed of LM pectin and a calcium salt as described above, and may contain other components as long as the effects of the present invention are not hindered. Examples of such other components include monosaccharides and disaccharides such as glucose, fructose, maltose, sucrose, and lactose, and relatively low molecular weight polysaccharides such as oligosaccharides and dextrins.

本発明の添加剤は、前述するように、マイコトキシンが混在しているおそれのある食品または飼料とともに用いられる。好ましくは本発明の添加剤が対象の食品または飼料と一緒に経口投与されるように、当該食品または飼料に配合した状態で使用される。   As described above, the additive of the present invention is used together with food or feed that may contain mycotoxins. Preferably, the additive of the present invention is used in a state of being blended with the food or feed so that it is orally administered together with the food or feed of interest.

斯くして本発明の添加剤は、食品または飼料とともに経口摂取されることによって、胃内でLMペクチンとカルシウムイオンとが反応してゲル化し、当該ゲル内に食品または飼料中に混在するマイコトキシンを閉じ込める。その結果、マイコトキシンの体内への吸収や蓄積を抑制することができる。   Thus, when the additive of the present invention is orally ingested together with food or feed, LM pectin and calcium ions react in the stomach to gel, and the gel contains mycotoxins mixed in the food or feed. Confine. As a result, absorption and accumulation of mycotoxins in the body can be suppressed.

この場合、食品または飼料に対して使用される本発明の添加剤の割合は、添加剤を添加した最終食品または飼料100質量%中に、LMペクチンが0.5質量%以上、好ましくは1質量%以上、更に好ましくは2質量%以上の割合で含まれるように設定することが好ましい。なお、上限は特に制限はされないが、通常10質量%程度である。   In this case, the ratio of the additive of the present invention to be used for food or feed is such that LM pectin is 0.5% by mass or more, preferably 1% in 100% by mass of the final food or feed to which the additive is added. % Or more, and more preferably 2% by mass or more. The upper limit is not particularly limited, but is usually about 10% by mass.

このようにLMペクチンは、pH4以下の低pHにおいて水存在下でカルシウムイオンと反応することによりゲル化する。このため、食品または飼料の形状に応じて、本発明の添加剤の調製に使用するカルシウム塩を選択することが好ましい。   Thus, LM pectin gels by reacting with calcium ions in the presence of water at a low pH of 4 or less. For this reason, it is preferable to select the calcium salt used for the preparation of the additive of the present invention according to the shape of the food or feed.

食品または飼料が固体形状を有するものである場合は、中性条件での水易溶性および水難溶性の別を問わず、いずれのカルシウム塩をも使用することができる。この場合、本発明の添加剤を配合した食品または飼料(固体形状)は、経口摂取後、胃内の水存在下でLMペクチンとカルシウムイオンとが反応することによりゲル化し、その結果、当該ゲル内に食品または飼料中に混在するマイコトキシンが閉じ込められることになる。   When the food or feed has a solid form, any calcium salt can be used regardless of whether it is easily water-soluble or slightly water-soluble under neutral conditions. In this case, the food or feed (solid form) containing the additive of the present invention is gelled by the reaction of LM pectin and calcium ions in the presence of water in the stomach after ingestion. As a result, the gel The mycotoxins mixed in food or feed will be trapped inside.

食品または飼料がゲル形状を有するものである場合も、中性条件での水易溶性および水難溶性の別を問わず、いずれのカルシウム塩をも使用することができる。好ましくは食品または飼料のpH条件下で水溶性を示すカルシウム塩である。この場合、本発明の添加剤を配合した食品または飼料(ゲル形状)は、すでにその状態でゲル内に食品または飼料中に混在するマイコトキシンが閉じ込められているため、経口摂取後、マイコトキシンの体内吸収や蓄積が抑制されることになる。   When the food or feed has a gel shape, any calcium salt can be used regardless of whether it is easily water-soluble or slightly water-soluble under neutral conditions. Preferably, it is a calcium salt that shows water solubility under the pH conditions of food or feed. In this case, the food or feed (gel form) containing the additive of the present invention is already in that state because the mycotoxins mixed in the food or feed are confined in the gel. And accumulation will be suppressed.

食品または飼料が中性またはアルカリ性で水溶液の形状を有するものである場合は、中性またはアルカリ性条件では水難溶性で、酸性条件で水易溶性を示すカルシウム塩を使用することが好ましい。この場合、本発明の添加剤を配合した食品または飼料(水溶液)は、経口摂取後、胃内の酸性の胃液存在下でLMペクチンとカルシウムイオンとが反応することによりゲル化し、その結果、当該ゲル内に食品または飼料中に混在するマイコトキシンが閉じ込められることになる。   When the food or feed is neutral or alkaline and has the form of an aqueous solution, it is preferable to use a calcium salt that is sparingly soluble in water under neutral or alkaline conditions and readily soluble in water under acidic conditions. In this case, the food or feed (aqueous solution) containing the additive of the present invention is gelled by the reaction of LM pectin and calcium ions in the presence of acidic gastric fluid in the stomach after oral ingestion. Mycotoxins mixed in food or feed will be trapped in the gel.

また、当該添加剤を用いて食品や飼料を製造すると、それらの食品や飼料を摂取した場合におけるマイコトキシンによる汚染を被るリスクを減じることができる。当該添加剤は、ゲル状食品または飼料の製造に適しており、食品を例にとると、具体的にはカスタードプリン、ミルクプリンなどのプリン類、ゼリー、ババロア、グミ食感キャンディー及びヨーグルトなどのデザート類などを例示できる。   In addition, when foods and feeds are produced using the additives, the risk of suffering contamination with mycotoxins when those foods and feeds are ingested can be reduced. The additive is suitable for the production of gel food or feed. For example, foods such as custard pudding, milk pudding and other puddings, jelly, bavaroa, gummy texture candy, yogurt, etc. Examples include desserts.

また飼料用添加剤としては、例えば顆粒状や粉末状などの固形形態を有していることが好ましく、これらの添加剤は、通常、固形形態の飼料に配合されて、飼料と一緒に、または飼料として、ヒト以外の動物に摂取される。ここでヒト以外の動物としては、草食動物を挙げることができ、例えばウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギおよびブタ等の家畜;ゾウ、サイ、シカ、キリン、カバ、ラクダ、シカ、ウサギ等の飼育動物;ニワトリ、アヒル、ウズラなどの家禽を例示することができる。   The feed additive preferably has a solid form such as a granular form or a powder form, and these additives are usually blended in the solid form feed together with the feed, or Ingested by animals other than humans as feed. Examples of animals other than humans include herbivores such as cattle, horses, sheep, goats and pigs; domestic animals such as elephants, rhinoceros, deer, giraffes, hippopotamus, camels, deer and rabbits. And poultry such as chicken, duck and quail can be exemplified.

当該飼料用添加剤は、飼料と一緒に、または飼料として、上記動物に経口摂取されると、動物の胃内でLMペクチンとカルシウムイオンとが反応してゲル化し、飼料中に混在するマイコトキシンを内部に取り込み、封じ込める。斯くして、マイコトキシンの動物体内への吸収及び蓄積が抑制され、マイコトキシン暴露による悪影響を低減することができる。   When the feed additive is orally ingested by the animal together with the feed or as a feed, the LM pectin and calcium ions react to gel in the stomach of the animal and mix mycotoxins mixed in the feed. Capture and contain inside. Thus, absorption and accumulation of mycotoxins in the animal body are suppressed, and adverse effects due to mycotoxin exposure can be reduced.

以下、本発明の内容を以下の実施例及び比較例、並びに実験例を用いて具体的に説明する。但し、本発明はこれらに何ら限定されるものではない。   Hereinafter, the contents of the present invention will be specifically described using the following examples, comparative examples, and experimental examples. However, the present invention is not limited to these.

実施例1〜3および比較例1
アミド化ペクチンであるビストップ[商標]D−2264(メトキシル化度:35%、三栄源エフ・エフ・アイ(株)製)と乳酸カルシウム(シグマ社製)を表1に示す配合量で粉体混合し、粉末状の製剤を調製した。また、ビストップ[商標]D−2264単体(乳化カルシウムなし)を比較例1の製剤とした。
Examples 1 to 3 and Comparative Example 1
Powdered amidated pectin Bistopt ™ D-2264 (degree of methoxylation: 35%, manufactured by San-Ei Gen FFI Co., Ltd.) and calcium lactate (manufactured by Sigma) The body was mixed to prepare a powdery preparation. Bistop [trademark] D-2264 alone (no emulsified calcium) was used as the preparation of Comparative Example 1.

Figure 2011055747
Figure 2011055747

実施例4〜6および比較例2
非アミド化ペクチンであるビストップ[商標]D−2262(メトキシル化度:35%、三栄源エフ・エフ・アイ(株)製)と炭酸カルシウム(シグマ社製)を表2に示す配合量で粉体混合し、粉末状の製剤を調製した。また、ビストップ[商標]D−2262単体(乳化カルシウムなし)を比較例2の製剤とした。
Examples 4 to 6 and Comparative Example 2
Bistop [trademark] D-2262 (degree of methoxylation: 35%, manufactured by San-Ei Gen FFI Co., Ltd.) and calcium carbonate (manufactured by Sigma Co.), which are non-amidated pectin, in the amounts shown in Table 2 Powder mixing was performed to prepare a powdery preparation. Further, Bistop [trademark] D-2262 alone (no emulsified calcium) was used as the preparation of Comparative Example 2.

Figure 2011055747
Figure 2011055747

実験例1 DONの外液への溶出抑制効果
マイコトキシンとしてデオキシニバレノール(DON)を用いて、本発明の添加剤のマイコトキシン取り込み効果(外液への溶出抑制効果)を評価した。
Experimental Example 1 Effect of suppressing dissolution of DON into external solution Using deoxynivalenol (DON) as mycotoxin, the mycotoxin uptake effect (effect of suppressing dissolution into external solution) of the additive of the present invention was evaluated.

(1)実験方法
実施例1〜6、並びに比較例1及び2で調製した各粉末製剤を、表3に示す濃度(重量%)になるように超純水に溶解し、その100mlを5μg/mlのDONを含む超純水15mlと混合した(実験試料1-1〜1-8)。このとき、全ての液状試料は若干の粘性をもった溶液状であった。
(1) Experimental method Each powder formulation prepared in Examples 1 to 6 and Comparative Examples 1 and 2 was dissolved in ultrapure water so as to have the concentration (% by weight) shown in Table 3, and 100 ml thereof was dissolved at 5 μg / The sample was mixed with 15 ml of ultrapure water containing ml of DON (experimental samples 1-1 to 1-8). At this time, all the liquid samples were in the form of a solution having a slight viscosity.

また、ブランク試料として、超純水100mlに5μg/mlのDONを含む超純水15mlを混合した試料を調製した。この溶液はほとんど粘りをもたない溶液となった。   As a blank sample, a sample was prepared by mixing 100 ml of ultrapure water with 15 ml of ultrapure water containing 5 μg / ml DON. This solution became a solution having almost no stickiness.

これらにそれぞれ100mMのクエン酸緩衝液(pH3)を35ml加えて攪拌し、次いでこれに1500mlの水を加えて、ゆるやかに攪拌しながら37℃で一昼夜放置した。実験試料1−1〜1−6は、クエン酸添加直後から徐々に固形化し、37℃で一昼夜放置にはゆるやかなゲル状になった。一方、実験試料1−7、1−8およびブランク試料はゲル化しなかった。   To each of these, 35 ml of 100 mM citrate buffer (pH 3) was added and stirred, and then 1500 ml of water was added thereto, and the mixture was allowed to stand at 37 ° C. overnight with gentle stirring. Experimental samples 1-1 to 1-6 gradually solidified immediately after the addition of citric acid, and became a gentle gel when left at 37 ° C. for a whole day and night. On the other hand, the experimental samples 1-7 and 1-8 and the blank sample did not gel.

次いで、水相に遊離しているDONを、下記に説明する免疫酵素測定法(ELISA法)を用いて定量し、得られたDON量から下式に基づいて遊離DON分率(%)を算出した。   Next, DON liberated in the aqueous phase is quantified using the immunoenzyme measurement method (ELISA method) described below, and the free DON fraction (%) is calculated from the obtained DON amount based on the following formula. did.

Figure 2011055747
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<免疫酵素測定法(ELISA法)>
DON/NIV(デオキシニバレノール/ニバレノール)抗体(National Center for Agricultural Utilization Research, USAのMaragos博士より譲り受けた)を0.2Mのリン酸緩衝生理食塩水(PBS)(和光純薬(株)製)を用いて2000倍希釈し抗体を調整した。
<Immunoenzyme measurement method (ELISA method)>
DON / NIV (deoxynivalenol / nivalenol) antibody (obtained from Dr. Maragos of National Center for Agricultural Utilization Research, USA) 0.2M phosphate buffered saline (PBS) (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) The antibody was prepared by diluting 2000 times.

この抗体を96ウェルのプラスティックプレートの各ウェルに 100μlずつ分注し、4℃で18時間静置した。静置後のプレートを洗浄液(0.2M PBS溶液100mlに対して超純水900mlとTween20 0.5ml(和光純薬(株)製)を加えて1Lとしたもの)で4回洗浄した。これに1%ポリビニルアルコール溶液(東京化成社製)を250μlずつ分注し、30分静置した。これを洗浄液でさらに4回洗浄してDON/NIV抗体をプレートにコーティングした。   100 μl of this antibody was dispensed into each well of a 96-well plastic plate and allowed to stand at 4 ° C. for 18 hours. The plate after standing was washed 4 times with a washing solution (100 ml of 0.2 M PBS solution to which 900 ml of ultrapure water and 0.5 ml of Tween 20 (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) were added to make 1 L). To this, 250 μl of 1% polyvinyl alcohol solution (manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) was dispensed and allowed to stand for 30 minutes. This was further washed 4 times with a washing solution, and the plate was coated with DON / NIV antibody.

1%の牛胎児血清(BSA)を含むPBSを用いて10000倍に希釈したDONホースラディッシュペルオキシダーゼ(以後DON−HRPとする)(和光純薬(株)製)75μlと各実験試料75μlを混合し、この混合溶液を100μlずつ上記で調製したDON/NIV抗体コーティングプレートに分注した。これにペルオキシダーゼ発色基質(TMB基質)(BDバイオサイエンス社)を100μlずつ分注し、暗所にて15分間静置した後、2Nの硫酸を100mlずつ分注し、この溶液の490nmの吸光度を測定した。   Mix 75 µl of DON horseradish peroxidase (hereinafter referred to as DON-HRP) (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) 75 µl diluted 10000 times with PBS containing 1% fetal bovine serum (BSA). Then, 100 μl of this mixed solution was dispensed onto the DON / NIV antibody-coated plate prepared above. To this, 100 μl of peroxidase chromogenic substrate (TMB substrate) (BD Biosciences) was dispensed and allowed to stand in the dark for 15 minutes, and then 100 ml of 2N sulfuric acid was dispensed, and the absorbance at 490 nm of this solution was measured. It was measured.

実験試料中のDONの量は、標準検量線から算出した。当該標準検量線は、実験試料の代わりに、1ppmのDON標準品(和光純薬(株)製)をPBSを用いて250ppb、62.5ppb、15.6ppb、および3.9ppbの4段階に希釈したものを、上記と同様の方法で発色させることによって作成した。   The amount of DON in the experimental sample was calculated from a standard calibration curve. The standard calibration curve was prepared by diluting 1 ppm DON standard (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) into 4 stages of 250 ppb, 62.5 ppb, 15.6 ppb, and 3.9 ppb using PBS instead of the experimental sample. This was prepared by coloring in the same manner as described above.

(2)実験結果
結果を表3に合わせて示す。
(2) Experimental results The results are shown in Table 3.

Figure 2011055747
Figure 2011055747

低メトキシルペクチン粉末を単独で用いた実験試料1−7および1−8は、いずれも遊離DON分率が100%であり、これから、添加したDONは当該試料(実験試料1−7および1−8)に取り込まれず、そのまま外部に遊離していることがわかる。これに対して、低メトキシルペクチンとカルシウムを含む実施例1〜6の製剤を用いて調製した実験試料1−1〜1−6では、添加したDONはこれらの試料から形成されたゲル内に取り込まれ、DONが外液に流出することが抑制されていることが確認された。特に低メトキシルペクチンとしてアミド化された製剤(実施例1〜3)を用いた実験試料1−1〜1−3において顕著な効果が得られた。低メトキシルペクチンとして非アミド化ペクチンの製剤(実施例4〜6)を用いて調製した実験試料1−4〜1−6は、製剤含有量が多い実験試料1−6では、上記アミド化ペクチンを含む製剤と同様の抑制効果が得られたが、実験試料1−5や1−4のように製剤含有量が少なくなると抑制効果の低下が認められた。これらのことから、低メトキシルペクチンとして非アミド化物よりもアミド化された低メトキシルペクチンを用いるほうが、優れたDONの取り込み効果が得られることが判明した。   Experimental samples 1-7 and 1-8 using low methoxyl pectin powder alone have a free DON fraction of 100%. From this, the added DON is the sample (experimental samples 1-7 and 1-8). It can be seen that it is not taken in and released to the outside as it is. On the other hand, in the experimental samples 1-1 to 1-6 prepared using the preparations of Examples 1 to 6 containing low methoxyl pectin and calcium, the added DON is taken into the gel formed from these samples. Thus, it was confirmed that DON was prevented from flowing out into the external liquid. In particular, remarkable effects were obtained in the experimental samples 1-1 to 1-3 using the preparations (Examples 1 to 3) amidated as low methoxyl pectin. Experimental samples 1-4 to 1-6 prepared using non-amidated pectin preparations (Examples 4 to 6) as low methoxyl pectin are the above-mentioned amidated pectin in experimental sample 1-6 having a high preparation content. Although the same inhibitory effect as the formulation which contains was acquired, when the formulation content decreased like experiment samples 1-5 and 1-4, the fall of the inhibitory effect was recognized. From these facts, it was found that a superior DON uptake effect can be obtained by using low methoxyl pectin as a low methoxyl pectin rather than a non-amidated product.

実験例2 フモニシンB1およびパツリンの外液への溶出抑制効果
マイコトキシンとしてフモニシンB1とパツリンを用いて、本発明の添加剤のマイコトキシン取り込み効果(外液への溶出抑制効果)を評価した。
Experimental Example 2 Effect of inhibiting elution of fumonisin B1 and patulin into the external solution Using fumonisin B1 and patulin as mycotoxins, the mycotoxin uptake effect of the additive of the present invention (elution inhibiting effect on the external solution) was evaluated.

(1)実験方法
実施例1〜3および比較例1の粉末製剤を表4に示す濃度(質量%)になるように超純水に溶解し、その100mlを5μg/mlのフモニシンB1及びパツリンを含む超純水15mlと混合した(実験試料2-1〜2-4)。このとき、全ての液状試料は若干の粘性をもった溶液状であった。また、ブランク試料として、超純水100mlに5μg/mlのフモニシンB1及びパツリンを含む超純水15mlと混合した試料を調製した。この溶液はほとんど粘りを持たない溶液となった。
(1) Experimental method The powder preparations of Examples 1 to 3 and Comparative Example 1 were dissolved in ultrapure water so as to have the concentrations (mass%) shown in Table 4, and 100 ml of them were mixed with 5 μg / ml of fumonisin B1 and patulin. The sample was mixed with 15 ml of ultrapure water containing (experimental samples 2-1 to 2-4). At this time, all the liquid samples were in the form of a solution having a slight viscosity. As a blank sample, a sample prepared by mixing 100 ml of ultrapure water with 15 ml of ultrapure water containing 5 μg / ml fumonisin B1 and patulin was prepared. This solution became a solution having almost no stickiness.

これらにそれぞれ100mMのクエン酸緩衝液(pH3)35mlを加えて緩やかに混合した。これに1500mlの水を加えて、ゆるやかに攪拌しながら37℃で24時間放置した。実験試料2−1〜2−4は、クエン酸緩衝液添加直後から徐々に固定化し、37℃で24時間放置した後にはゆるやかなゲル状になった。一方、ブランク試料はゲル化しなかった。   To each of them, 35 ml of 100 mM citrate buffer (pH 3) was added and gently mixed. To this, 1500 ml of water was added and allowed to stand at 37 ° C. for 24 hours with gentle stirring. Experimental samples 2-1 to 2-4 were gradually immobilized immediately after the addition of the citrate buffer, and after leaving at 37 ° C. for 24 hours, they became a gentle gel. On the other hand, the blank sample did not gel.

次いで、水相に遊離するフモニシンB1とパツリンの量(マイコトシキン量)を、下記条件のLC/MS/MSで定量した。斯くして得られたマイコトキシン量から下式に基づいて算出した値を、遊離マイコトシキン分率(%)とした。   Next, the amounts of fumonisin B1 and patulin liberated in the aqueous phase (the amount of mycotoxin) were quantified by LC / MS / MS under the following conditions. The value calculated based on the following formula from the amount of mycotoxins thus obtained was defined as the free mycotoxin fraction (%).

Figure 2011055747
Figure 2011055747

<LC/MS/MS法>
フモニシンB1およびパツリンの定量は、1100シリーズHPLCシステム(アジレント社製)およびQuattro Ultima LC/MS/MSシステム(Waters)を用い、下記の条件で行った。
<LC / MS / MS method>
Fumonisin B1 and patulin were quantified using the 1100 series HPLC system (manufactured by Agilent) and the Quattro Ultima LC / MS / MS system (Waters) under the following conditions.

(1)フモニシンB1
カラム : Agilent Zorbax Extend C18
(5mm, 150 × 2.1mm)(アジレント社製)
移動相:0.1%ギ酸 (in 1.0mM 酢酸アンモニウム)+アセトニトリル
ただし、アセトニトリルは5分間で20%→90%までグラジェント後5分間保持
カラム温度 : 40℃
注入量:10ml
流速:200ml/min
MS/MS条件 : ESI ポジティブモード
722 > 352 (定量イオン)
722 > 334 (定性イオン)。
(1) Fumonisin B1
Column: Agilent Zorbax Extended C18
(5mm, 150 x 2.1mm) (manufactured by Agilent)
Mobile phase: 0.1% formic acid (in 1.0 mM ammonium acetate) + acetonitrile However, acetonitrile is gradient from 20% to 90% in 5 minutes and then held for 5 minutes Column temperature: 40 ° C
Injection volume: 10ml
Flow rate: 200ml / min
MS / MS condition: ESI positive mode
722> 352 (quantitative ions)
722> 334 (qualitative ions).

(2)パツリン
カラム : Waters XTerra MS C18
(3.5mm, 100×2.1mm id)(Waters社製)
移動相:2mM酢酸アンモニウム溶液+アセトニトリル
ただし、アセトニトリルは14分間で3%→95%までグラジェント
カラム温度 : 40℃
注入量:10ml
流速:200ml/min
MS/MS条件 : ESI ネガティブモード
153 > 109 (定量イオン)
153 > 81 (定性イオン)。
(2) Patulin column: Waters XTerra MS C18
(3.5mm, 100x2.1mm id) (manufactured by Waters)
Mobile phase: 2 mM ammonium acetate solution + acetonitrile However, acetonitrile is from 3% to 95% in 14 minutes Gradient column temperature: 40 ° C
Injection volume: 10ml
Flow rate: 200ml / min
MS / MS condition: ESI negative mode
153> 109 (quantitative ions)
153> 81 (qualitative ions).

(2)実験結果
結果を表4に合わせて示す。
(2) The experimental results are shown in Table 4.

Figure 2011055747
Figure 2011055747

実施例1〜3の製剤を用いた実験試料2−1〜2−3においても、DONの場合と同様に37℃で24時間放置した後の遊離マイコトキシン分率が有意に抑えられており、フモニシンB1やパツリンのマイコトキシンが本発明の製剤から形成されたゲル内に取り込まれ、外部への流出が抑制されていることが確認された。   In the experimental samples 2-1 to 2-3 using the preparations of Examples 1 to 3, the free mycotoxin fraction after being allowed to stand at 37 ° C. for 24 hours was significantly suppressed as in the case of DON. It was confirmed that mycotoxins such as B1 and patulin were incorporated into the gel formed from the preparation of the present invention, and the outflow to the outside was suppressed.

以上の実験例1および2から、低メトキシペクチンとカルシウム塩を含む本発明の製剤から形成されるゲルには、マイコトキシンを取り込み、外部への流出を抑制する作用があることが確認された。   From the above Experimental Examples 1 and 2, it was confirmed that the gel formed from the preparation of the present invention containing low methoxy pectin and calcium salt has an action of taking in mycotoxins and suppressing outflow to the outside.

実験例3 DONの血中濃度の変化
実験例1と2の結果から、低メトキシペクチンとカルシウム塩を含む製剤から形成されるゲルは、マイコトキシンを取り込んで内部に閉じ込めることが判明した。そこで、ここでは当該ゲル内に封じ込められたマイコトキシンの体内挙動を調べた。
Experimental Example 3 Change in blood concentration of DON From the results of Experimental Examples 1 and 2, it was found that the gel formed from the preparation containing low methoxy pectin and calcium salt took up mycotoxins and confined them inside. Therefore, here, the in vivo behavior of mycotoxins contained in the gel was examined.

(1)実験方法
1.5ml容のマイクロチューブに1000μg相当のデオキシニバレノール(DON)を分取し乾固した。実施例2および比較例1の粉末製剤0.01gを1mlの超純水に溶解し、これを上記のマイクロチューブに添加した。これをB6C3F1マウス(ミシガン州立大学のPestka博士から譲り受けた)(各試験区毎に4検体)に25μlずつ経口投与した。
(1) Experimental method 1000 μg of deoxynivalenol (DON) was fractionated into a 1.5 ml microtube and dried. 0.01 g of the powder formulation of Example 2 and Comparative Example 1 was dissolved in 1 ml of ultrapure water and added to the above microtube. This was orally administered to B6C3F1 mice (assigned from Dr. Pestka of Michigan State University) (4 specimens in each test section) by 25 μl.

投与後15分から24時間まで経時的に血液を採取し、血清中のDONの濃度を測定した。また、投与24時間後にマウスから肝臓を取り出し、肝臓中のDON濃度を測定した。   Blood was collected over time from 15 minutes to 24 hours after administration, and the concentration of DON in the serum was measured. In addition, 24 hours after administration, the liver was removed from the mouse, and the DON concentration in the liver was measured.

<血清中のDONの定量方法>
採取した血液をエッペンドルフチューブに分注し、14000rpmで10分間、4℃で遠心分離し、上清を別のエッペンドルフチューブに分注する。得られた血清60μlに0.2MのPBSを240μl加え、これを実験例1で説明した免疫酵素測定法(ELISA法)に供して、血清中のDON濃度を定量する。
<Method for quantifying DON in serum>
The collected blood is dispensed into an Eppendorf tube, centrifuged at 14000 rpm for 10 minutes at 4 ° C., and the supernatant is dispensed into another Eppendorf tube. 240 μl of 0.2 M PBS is added to 60 μl of the obtained serum, and this is subjected to the immunoenzyme measurement method (ELISA method) described in Experimental Example 1 to quantify the DON concentration in the serum.

<肝臓中のDONの定量方法>
取り出した肝臓をミキサーでホモジナイズした後、0.2MのPBSで10倍に希釈し、100℃で5分間煮沸した後、遠心分離によって固形分を沈殿させ、上清を分取する。これを実験例1で説明した免疫酵素測定法(ELISA法)に供して、肝臓中のDON濃度を定量する。
<Method for quantifying DON in liver>
The removed liver is homogenized with a mixer, diluted 10-fold with 0.2 M PBS, boiled at 100 ° C. for 5 minutes, solids are precipitated by centrifugation, and the supernatant is collected. This is subjected to the immunoenzyme measurement method (ELISA method) described in Experimental Example 1 to quantify the DON concentration in the liver.

(2)実験結果
実施例2の製剤を経口投与したときの血清中のDON濃度の経時変化を図1に、比較例1の製剤を経口投与したときの血清中のDON濃度の経時変化を図2に示す。また、投与24時間後の肝臓中のDON濃度を表5に示す。
(2) Experimental results FIG. 1 shows the time course of serum DON concentration when the preparation of Example 2 was orally administered, and FIG. 1 shows the time course of serum DON concentration when the preparation of Comparative Example 1 was orally administered. It is shown in 2. Table 5 shows the DON concentration in the liver 24 hours after administration.

Figure 2011055747
Figure 2011055747

DONは、経口投与直後、胃から比較的短い時間で吸収されることが知られている。比較例1の製剤を経口投与したマウスの血清中のDON濃度は、投与後15分間で最大(約2200ppb)となり、その後時間をかけて徐々に低下していくことが確認された(図2)。一方、実施例2の製剤を経口投与したマウスの血清中のDON濃度は、経口投与15分後に約500ppbまでしか上昇せず(比較例1の場合の1/4以下)、その後すぐに低下した(図1)。また経口投与24時間後の肝臓中のDON濃度は、実施例2の製剤を経口投与したマウスの肝臓内DON濃度は比較例1の製剤を経口投与したマウスのそれに比べて低く、低メトキシペクチンとカルシウム塩を含む本発明の製剤には、当該製剤から形成されたゲル内にマイコトキシンを取り込んで外部に放出することを抑制することで、マイコトキシンの体内への吸収及び蓄積を抑制する効果があることが確認された。この意味で、低メトキシペクチンとカルシウム塩を含む本発明の製剤には、マイコトキシンの毒性の発現を減少する作用があるといえる。   DON is known to be absorbed from the stomach in a relatively short time immediately after oral administration. It was confirmed that the DON concentration in the serum of mice administered orally with the preparation of Comparative Example 1 reached the maximum (about 2200 ppb) in 15 minutes after administration, and then gradually decreased over time (FIG. 2). . On the other hand, the DON concentration in the serum of the mice orally administered with the preparation of Example 2 increased only to about 500 ppb 15 minutes after oral administration (1/4 or less in the case of Comparative Example 1), and immediately decreased thereafter. (FIG. 1). In addition, the DON concentration in the liver 24 hours after oral administration was lower than that in the mouse orally administered with the preparation of Comparative Example 1, and the DON concentration in the liver of the mouse orally administered with the preparation of Example 2 was low. The preparation of the present invention containing a calcium salt has an effect of suppressing the absorption and accumulation of mycotoxins in the body by suppressing the release of the mycotoxins in the gel formed from the preparations and releasing them to the outside. Was confirmed. In this sense, it can be said that the preparation of the present invention containing low methoxy pectin and calcium salt has an effect of reducing the expression of toxicity of mycotoxins.

Claims (6)

低メトキシルペクチンおよびカルシウム塩を含有することを特徴とする、マイコトキシンの体内吸収を抑制するための食品用もしくは飼料用添加剤。 A food or feed additive for suppressing in vivo absorption of mycotoxins, comprising low methoxyl pectin and a calcium salt. 低メトキシルペクチン100質量部に対してカルシウム塩を0.2質量部以上の割合で含有する請求項1に記載する食品用もしくは飼料用添加剤。 The food additive or feed additive according to claim 1, comprising a calcium salt in a proportion of 0.2 parts by mass or more with respect to 100 parts by mass of low methoxyl pectin. 低メトキシルペクチンがアミド化ペクチンである請求項1または2に記載する食品用もしくは飼料用添加剤。 The food or feed additive according to claim 1 or 2, wherein the low methoxyl pectin is an amidated pectin. 上記マイコトキシンがデオキシニバレノール、フモニシン、およびパツリンからなる群から選択される少なくとも1種である、請求項1乃至3のいずれかに記載の食品用もしくは飼料用添加剤。 The food or feed additive according to any one of claims 1 to 3, wherein the mycotoxin is at least one selected from the group consisting of deoxynivalenol, fumonisin, and patulin. マイコトキシンの体内吸収を抑制することを目的として請求項1乃至4のいずれかに記載する飼料用添加剤を含む飼料。 A feed comprising the feed additive according to any one of claims 1 to 4 for the purpose of suppressing in vivo absorption of mycotoxins. ヒト以外の動物に、請求項1乃至4のいずれかに記載する飼料用添加剤または請求項5に記載する飼料を経口投与することを特徴とする、体内でのマイコトキシンの吸収を抑制する方法。 A method for suppressing mycotoxin absorption in the body, which comprises orally administering to a non-human animal the feed additive according to any one of claims 1 to 4 or the feed according to claim 5.
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