JP2011051939A - Agent for raising hdl cholesterol in blood, food and beverage additive containing the same, food and beverage and medicine - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、血中のＨＤＬコレステロールを上昇させる血中ＨＤＬコレステロール上昇剤に関する。また、本発明は、血中ＨＤＬコレステロール上昇剤を含む飲食品添加剤及び飲食品に関する。更に、本発明は、血中ＨＤＬコレステロールを上昇させる動脈硬化の予防及び／又は治療に用いるための医薬に関する。 The present invention relates to a blood HDL cholesterol elevating agent that elevates blood HDL cholesterol. Moreover, this invention relates to the food-drinks additive and food-drinks containing a blood HDL cholesterol raising agent. Furthermore, the present invention relates to a medicament for use in the prevention and / or treatment of arteriosclerosis that increases blood HDL cholesterol.
血中脂質であるコレステロール及びトリグリセリドは、血液中でリン脂質やアポタンパク質とリポタンパク質を形成し、輸送される。リポタンパク質は比重により、カイロミクロン、ＶＬＤＬ（超低比重リポタンパク）、ＩＤＬ（中間比重リポタンパク）、ＬＤＬ（低比重リポタンパク）、及びＨＤＬ（高比重リポタンパク）に分類される。そして、血中脂質の変化が種々の疾患の要因となり得ることが知られている。 Cholesterol and triglycerides, which are blood lipids, are transported in the blood by forming phospholipids, apoproteins and lipoproteins. Lipoproteins are classified according to specific gravity into chylomicron, VLDL (very low density lipoprotein), IDL (intermediate density lipoprotein), LDL (low density lipoprotein), and HDL (high density lipoprotein). It is known that changes in blood lipids can cause various diseases.
ＨＤＬは、組織からコレステロールを運ぶため、その量が少ないと動脈硬化等を引き起こし易くなることが知られている。これまでは総コレステロール及びＬＤＬコレステロール量が血液検査項目で主流であったが、近年、ＨＤＬコレステロール量が血中脂質の変化に起因する各種疾患の重要なファクターになることが知られている。 Since HDL carries cholesterol from tissues, it is known that a small amount of HDL tends to cause arteriosclerosis and the like. Until now, total cholesterol and LDL cholesterol levels have been the mainstream in blood test items, but in recent years, it has been known that the HDL cholesterol level is an important factor in various diseases caused by changes in blood lipids.
血中脂質の変化に起因する各種疾患としては、例えば、糖尿病、高血圧症、心血管障害、高脂血症、動脈硬化等の生活習慣病が挙げられる。かかる疾患を改善する医薬として、種々の医薬が知られている。例えば、特許文献１及び２には、２４−アルキルコレスタン−３−オン、２４−アルキルコレステン−３−オン、５−シトステン−３−オン、又は２４−メチルコレスト−５−エン−３−オンを有効成分として含み、脂質代謝の異常に伴う疾患の予防及び／又は治療に用いる医薬が開示されている。 Examples of various diseases caused by changes in blood lipids include lifestyle diseases such as diabetes, hypertension, cardiovascular disorders, hyperlipidemia, and arteriosclerosis. Various medicaments are known as medicaments for improving such diseases. For example, Patent Documents 1 and 2 include 24-alkylcholestan-3-one, 24-alkylcholesten-3-one, 5-sitosten-3-one, or 24-methylcholest-5-en-3-one. Has been disclosed as an active ingredient and used for the prevention and / or treatment of diseases associated with abnormal lipid metabolism.
上記のように、ＨＤＬの量が少ないと動脈硬化等を引き起こし易くなることから、ＨＤＬ及びＨＤＬコレステロール量を増加させることにより、血中脂質の変化に起因する各種疾患を予防又は改善することができると期待される。しかし、ＨＤＬコレステロールを上昇させる医薬は知られていない。また、特許文献１及び２は、脂質の吸収阻害に関して言及があるに留まり、血中のリポタンパク質に関して特に触れられていない。 As described above, when the amount of HDL is small, arteriosclerosis and the like are likely to be caused. Therefore, various diseases caused by changes in blood lipids can be prevented or improved by increasing the amount of HDL and HDL cholesterol. It is expected. However, there are no known drugs that increase HDL cholesterol. In addition, Patent Documents 1 and 2 only refer to lipid absorption inhibition, and do not particularly refer to lipoproteins in blood.
本発明は、安全性が高く、血中のＨＤＬコレステロールを上昇させる血中ＨＤＬコレステロール上昇剤、並びにこれを含む飲食品添加剤及び飲食品を提供することを目的とする。また、本発明は、本発明は、血中ＨＤＬコレステロールを上昇させる動脈硬化の予防及び／又は治療に用いるための医薬を提供することを目的とする。 An object of the present invention is to provide a blood HDL cholesterol raising agent that is highly safe and raises blood HDL cholesterol, and a food additive and food and beverage containing the same. Another object of the present invention is to provide a medicament for use in the prevention and / or treatment of arteriosclerosis that increases blood HDL cholesterol.
本発明は以下のとおりである。
（１）ステロールの３−オン体を有効成分として含む血中ＨＤＬコレステロール上昇剤。
（２）上記ステロールの３−オン体は、ステロール又はステロールを含有する植物体を含む培地で微生物を培養して発酵することにより得られるステロールの３−オン体含有組成物である（１）記載の血中ＨＤＬコレステロール上昇剤。
（３）（１）又は（２）記載の血中ＨＤＬコレステロール上昇剤を含む飲食品添加剤。
（４）（１）又は（２）記載の血中ＨＤＬコレステロール上昇剤を含む飲食品。
（５）（１）又は（２）記載の血中ＨＤＬコレステロール上昇剤を含む動脈硬化の予防及び／又は治療に用いるための医薬。
The present invention is as follows.
(1) A blood HDL cholesterol elevating agent containing a 3-one form of sterol as an active ingredient.
(2) The 3-one body of sterol is a sterol 3-one body-containing composition obtained by culturing microorganisms in a medium containing sterol or a plant body containing sterol and fermenting it. Blood HDL cholesterol raising agent.
(3) A food or beverage additive comprising the blood HDL cholesterol-elevating agent according to (1) or (2).
(4) A food or drink containing the blood HDL cholesterol-elevating agent according to (1) or (2).
(5) A medicament for use in the prevention and / or treatment of arteriosclerosis comprising the blood HDL cholesterol-elevating agent according to (1) or (2).
本発明の血中ＨＤＬコレステロール上昇剤は、安全性が高く、血中のＨＤＬコレステロールを上昇させることができる。その結果、血中脂質の変化に起因する各種疾患を予防又は改善することができる。本発明の飲食品添加剤及び飲食品によれば、血中のＨＤＬコレステロールを上昇させ、血中脂質の変化に起因する各種疾患を予防又は改善することができる。本発明の医薬によれば、血中のＨＤＬコレステロールを上昇させる動脈硬化の予防及び／又は治療に用いることができる。 The blood HDL cholesterol raising agent of the present invention is highly safe and can raise blood HDL cholesterol. As a result, various diseases caused by changes in blood lipids can be prevented or improved. According to the food / beverage product additive and food / beverage product of the present invention, HDL cholesterol in blood can be raised, and various diseases caused by changes in blood lipids can be prevented or improved. According to the medicament of the present invention, it can be used for the prevention and / or treatment of arteriosclerosis which raises HDL cholesterol in the blood.
以下、本発明を詳しく説明する。
本発明の血中ＨＤＬコレステロール上昇剤は、ステロールの３−オン体を有効成分として含む。上記ステロールの３−オン体は、１種単独で含まれていてもよく、２種以上の上記ステロールの３−オン体が含まれていてもよい。
The present invention will be described in detail below.
The blood HDL cholesterol raising agent of the present invention contains a 3-one form of sterol as an active ingredient. The sterol 3-one isomer may be included alone, or two or more sterol 3-one isomers may be included.
上記ステロールの３−オン体は、ステロール骨格の３位にカルボニル基を有する限り、特にその構造に限定はない。上記ステロールの３−オン体は、他の置換基を有していてもよい。例えば、上記ステロールの３−オン体は、３位以外の位置にカルボニル基を１以上有していてもよい。３位以外の位置にカルボニル基を有する上記ステロールの３−オン体としては、例えば、ステロールの３，６−ジオン体（ステロール骨格の３位及び６位にカルボニル基を有する）が挙げられる。また、上記ステロールの３−オン体は、ステロール骨格又は側鎖にアルキル基（メチル基、エチル基等）及び水酸基等の適宜の官能基を有していてもよい。また、上記ステロールの３−オン体は、構造中に二重結合を有していてもよい。二重結合の数についても特に限定はなく、ステロール骨格又は側鎖中に１個以上、好ましくは１〜４個、更に好ましくは１〜２個の他の二重結合を有していてもよい。 The 3-one form of the sterol is not particularly limited as long as it has a carbonyl group at the 3-position of the sterol skeleton. The 3-one form of the sterol may have another substituent. For example, the 3-one form of the sterol may have one or more carbonyl groups at positions other than the 3-position. Examples of the 3-one form of the sterol having a carbonyl group at a position other than the 3-position include a 3,6-dione form of sterol (having a carbonyl group at the 3-position and 6-position of the sterol skeleton). Moreover, the 3-one body of the said sterol may have appropriate functional groups, such as an alkyl group (a methyl group, an ethyl group, etc.) and a hydroxyl group, in a sterol skeleton or a side chain. Moreover, the 3-one body of the said sterol may have a double bond in the structure. The number of double bonds is not particularly limited, and may have one or more, preferably 1 to 4, and more preferably 1 to 2 other double bonds in the sterol skeleton or the side chain. .
上記ステロールの３−オン体として具体的には、例えば、ステロールの５−エン−３−オン体、ステロールの４−エン−３−オン体、及びステロールの３，６−ジオン体の１種又は２種以上が挙げられる。 Specific examples of the sterol 3-one isomer include, for example, one of sterol 5-ene-3-one, sterol 4-ene-3-one, and sterol 3,6-dione. Two or more types can be mentioned.
上記ステロールの５−エン−３−オン体として具体的には、例えば、カンペスト−５−エン−３−オン、シトスト−５−エン−３−オン、スチグマスト−５−エン−３−オン、、ブラシカスト−５−エン−３−オン、２４−アルキルコレスト−５−エン−３−オン、２４−アルキルコレスト−５，７−ジエン−３−オン、２４−アルキルコレスト−５，８−ジエン−３−オン、２４−アルキルコレスト−５，９（１１）−ジエン−３−オン、２４−アルキルコレスト−５，２２−ジエン−３−オン、２４−アルキルコレスト−５，７，２２−トリエン−３−オン、２４−アルキルコレスト−５，８，２２−トリエン−３−オン、２４−アルキルコレスト−５，９（１１），２２−トリエン−３−オン、２４−アルキルコレスト−５，２５（２７）−ジエン−３−オン等が挙げられる。尚、上記各物質中の「アルキル」としては、メチル基やエチル基等が挙げられる。 Specific examples of the 5-ene-3-one sterol include campest-5-en-3-one, cytosto-5-en-3-one, stigmast-5-en-3-one, Brush cast-5-en-3-one, 24-alkylcholest-5-en-3-one, 24-alkylcholest-5,7-dien-3-one, 24-alkylcholest-5,8- Diene-3-one, 24-alkylcholest-5,9 (11) -dien-3-one, 24-alkylcholest-5,22-dien-3-one, 24-alkylcholest-5,7 , 22-trien-3-one, 24-alkylcholest-5,8,22-trien-3-one, 24-alkylcholest-5,9 (11), 22-trien-3-one, 24- Alkylcholest-5,25 (2 ) - dien-3-one, and the like. Examples of “alkyl” in each of the above substances include a methyl group and an ethyl group.
上記ステロールの３，６−ジオン体として具体的には、例えば、カンペスト−４−エン−３，６−ジオン、６−ヒドロキシ−シトスト−４−エン−３，６−ジオン、４−コレステン−３，６−ジオン、４−カンペスト−３，６−ジオン、２４−アルキルコレスト−４−エン−３，６−ジオンが挙げられる。 Specific examples of the 3,6-dione form of the sterol include, for example, campest-4-ene-3,6-dione, 6-hydroxy-sitost-4-ene-3,6-dione, and 4-cholestene-3. , 6-dione, 4-campest-3,6-dione, 24-alkylcholest-4-ene-3,6-dione.
上記ステロールの３−オン体の由来には特に限定はない。上記ステロールの３−オン体は、合成反応により得てもよく、酵素又は発酵等の生物学的方法によって得てもよい。上記ステロールの３−オン体は、例えば、ステロール又はステロールを含有する植物体を含む培地で微生物を培養して発酵することにより得ることができる。 There is no limitation in particular in the origin of the 3-one body of the said sterol. The 3-one form of the sterol may be obtained by a synthetic reaction, or may be obtained by a biological method such as an enzyme or fermentation. The 3-one form of sterol can be obtained, for example, by culturing a microorganism in a medium containing a sterol or a plant containing sterol and fermenting it.
上記微生物は、上記ステロールの３−オン体を得ることができる限り、その種類には特に限定はない。通常、上記微生物として、コレステロールオキシダーゼ活性を示す微生物が挙げられる。上記微生物としては、アガリカス属やカワラタケ等の担子菌類、アスペルギルス属及びモナスカス属等の糸状菌類、アルスロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）属、ストレプトマイセス属、ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍｕ）属、ロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）属、並びにバチスル属に属する細菌等が挙げられる。上記微生物として具体的には、例えば、アルスロバクター シンプレックス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ Ｓｉｍｐｌｅｘ、別名ノカルディオイデス シンプレックス〔Ｎｏｃａｒｄｉｏｉｄｏｓ Ｓｉｍｐｌｅｘ〕）等が挙げられる。 The type of the microorganism is not particularly limited as long as the 3-one form of the sterol can be obtained. Usually, examples of the microorganism include microorganisms exhibiting cholesterol oxidase activity. Examples of the microorganism include basidiomycetes such as Agaricus and Kawaratake, filamentous fungi such as Aspergillus and Monascus, Arthrobacter, Streptomyces, Brevibacterium, Rhodococcus And bacteria belonging to the genus Batisul. Specific examples of the microorganism include Arthrobacter Simplex (also known as Nocardioides Simplex).
上記微生物は、通常は、市販されている微生物が用いられるが、その他、自然的又はＥＭＳ（エチルメタンスルフォネート）、ジエチルサルフェート、ＮＴＧ（Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン）及びニトロソグアニジン等の化学物質、並びにＸ線、γ線及び紫外線等による人為的変異手段により得られ、菌学的性質が変異した微生物であっても、コレステロールオキシダーゼ活性を示す限り、利用することができる。また、コレステロールオキシダーゼをコードする遺伝子を適当なベクター等により大腸菌等の微生物内に導入し、形質転換を行ってコレステロールオキシダーゼの発現を可能にした形質転換微生物も使用することができる。 As the above microorganisms, commercially available microorganisms are usually used, but other natural or EMS (ethyl methanesulfonate), diethyl sulfate, NTG (N-methyl-N′-nitro-N-nitrosoguanidine) Can be used as long as they exhibit cholesterol oxidase activity, even if they are microorganisms obtained by artificial mutagenesis using chemical substances such as nitrosoguanidine and X-rays, γ-rays, and ultraviolet rays, and having mutated mycological properties. it can. In addition, a transformed microorganism in which a gene encoding cholesterol oxidase is introduced into a microorganism such as Escherichia coli by an appropriate vector or the like and transformed to enable expression of cholesterol oxidase can be used.
本発明の血中ＨＤＬコレステロール上昇剤は、血中ＨＤＬコレステロールを上昇させることができる。よって、本発明の血中ＨＤＬコレステロール上昇剤は、血中脂質の変化に起因する各種疾患を予防又は改善に用いることができる。例えば、本発明の血中ＨＤＬコレステロール上昇剤は、動脈硬化の予防及び／又は改善に用いることができる。また、脳内でのアミロイドカスケードにおいてコレステロールが中心的役割を果たす可能性も指摘されており、脳内にはリポタンパク質としてＨＤＬしか存在しないことから、本発明の血中ＨＤＬコレステロール上昇剤は、アルツハイマー症の予防及び／又は改善に用いることができると考えられる。 The blood HDL cholesterol raising agent of the present invention can raise blood HDL cholesterol. Therefore, the blood HDL cholesterol-elevating agent of the present invention can be used for preventing or improving various diseases caused by changes in blood lipids. For example, the blood HDL cholesterol-elevating agent of the present invention can be used for prevention and / or improvement of arteriosclerosis. It has also been pointed out that cholesterol may play a central role in the amyloid cascade in the brain, and since only HDL exists as a lipoprotein in the brain, the blood HDL cholesterol-elevating agent of the present invention is Alzheimer's. It can be used for prevention and / or improvement of symptoms.
本発明の飲食品添加剤及び飲食品は、本発明の血中ＨＤＬコレステロール上昇剤を含有する。本発明の飲食品添加剤及び飲食品中、本発明の血中ＨＤＬコレステロール上昇剤の量には特に限定はなく、必要に応じて種々の含有量とすることができる。本発明の飲食品添加剤は、本発明の血中ＨＤＬコレステロール上昇剤以外の他の成分（例えば、界面活性剤及び甘味料等の公知の食品添加物、並びに公知の食品原料）を含んでいてもよい。 The food-drinks additive and food-drinks of this invention contain the blood HDL cholesterol raising agent of this invention. There is no limitation in particular in the quantity of the blood HDL cholesterol raising agent of this invention in the food-drinks additive and food-drinks of this invention, It can be set as various content as needed. The food and drink additive of the present invention contains other components (for example, known food additives such as surfactants and sweeteners, and known food ingredients) other than the blood HDL cholesterol raising agent of the present invention. Also good.
本発明の飲食品の種類には特に限定はない。本発明の飲食品としては、例えば、固形食品、クリーム状及びジャム状の半流動食品、ゲル状食品、並びに飲料が挙げられる。また、本発明の飲食品には、食品素材も含まれる。本発明の飲食品として具体的には、例えば、酒、炭酸飲料、果実飲料、コーヒー、紅茶、茶、乳酸菌飲料、ヨーグルト、アイスクリーム、飴、ガム、菓子、パン、及び麺類が挙げられる。 There is no limitation in particular in the kind of food-drinks of this invention. Examples of the food and drink of the present invention include solid foods, cream-like and jam-like semi-fluid foods, gel-like foods, and beverages. The food and drink of the present invention includes food materials. Specific examples of the food and drink of the present invention include liquor, carbonated drinks, fruit drinks, coffee, tea, tea, lactic acid bacteria drinks, yogurt, ice cream, rice cake, gum, confectionery, bread, and noodles.
本発明の医薬は、本発明の血中ＨＤＬコレステロール上昇剤を含有する。本発明の医薬は、血中のＨＤＬコレステロールを上昇させることにより、動脈硬化の予防及び／又は治療に用いることができる。本発明の医薬は、ヒトだけでなく、ペット、家畜、及び魚類等のヒト以外の動物に対しても用いることができる。 The medicament of the present invention contains the blood HDL cholesterol-elevating agent of the present invention. The medicament of the present invention can be used for prevention and / or treatment of arteriosclerosis by increasing HDL cholesterol in the blood. The medicament of the present invention can be used not only for humans but also for non-human animals such as pets, livestock, and fish.
本発明の医薬中、本発明の血中ＨＤＬコレステロール上昇剤の量には特に限定はなく、必要に応じて種々の含有量とすることができる。本発明の医薬は、本発明の血中ＨＤＬコレステロール上昇剤以外の他の成分（例えば、賦形剤、結合剤、分散剤、及び乳化剤等の公知の医薬用添加剤、並びに他の機能性成分）を含んでいてもよい。本発明の医薬の剤形にも特に限定はない。本発明の医薬は経口剤（錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤等）でもよく、非経口剤（注射剤、坐剤等）でもよい。 There is no limitation in particular in the quantity of the blood HDL cholesterol raising agent of this invention in the pharmaceutical of this invention, It can be set as various content as needed. The medicament of the present invention contains other components (for example, known pharmaceutical additives such as excipients, binders, dispersants, and emulsifiers) and other functional components other than the blood HDL cholesterol-elevating agent of the present invention. ) May be included. The pharmaceutical dosage form of the present invention is not particularly limited. The medicament of the present invention may be an oral preparation (tablet, powder, granule, capsule, solution, suspension, syrup, etc.) or a parenteral preparation (injection, suppository, etc.).
以下、本発明を実施例により具体的に説明する。
原料として、商品名「ユニフェス」（株式会社東洋発酵製）を用いた。「ユニフェス」は、植物由来のステロールを含む培地でアルスロバクター シンプレックス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ Ｓｉｍｐｌｅｘ）を培養して得られる発酵物である。「ユニフェス」は、５−ステノン（カンペスト−５−エン−３−オン、シトスト−５−エン−３−オン、スチグマスト−５−エン−３−オン、及びブラシカスト−５−エン−３−オン等）、４−ステノン（カンペスト−４−エン−３−オン、シトスト−４−エン−３−オン、スチグマスト−４−エン−３−オン、及びブラシカスト−４−エン−３−オン等）、並びにステロールの３，６−ジオン体（カンペスト−４−エン−３，６−ジオン及び６−ヒドロキシ−シトスト−４−エン−３，６−ジオン等）を含む。該発酵物及び賦形剤を混合してカプセルに充填することにより、試料は、被験品（上記発酵物を８００ｍｇ含有する。）を調製した。併せて、賦形剤のみをカプセルに充填することにより、プラセボを調製した。
Hereinafter, the present invention will be specifically described by way of examples.
The brand name “Unifes” (manufactured by Toyo Fermentation Co., Ltd.) was used as a raw material. “Unifes” is a fermented product obtained by culturing Arthrobacter Simplex in a medium containing a plant-derived sterol. “Unifest” refers to 5-stenone (campest-5-en-3-one, cytosto-5-en-3-one, stigmast-5-en-3-one, and brush cast-5-en-3-one, etc. ), 4-stenone (such as campest-4-en-3-one, sitost-4-en-3-one, stigmast-4-en-3-one, and brush cast-4-en-3-one), and 3,6-dione sterols such as campest-4-ene-3,6-dione and 6-hydroxy-sitost-4-ene-3,6-dione are included. The sample was prepared as a test product (containing 800 mg of the fermented product) by mixing the fermented product and the excipient and filling the capsule. In addition, placebos were prepared by filling capsules with only excipients.
臨床試験として、被験品及びプラセボによる二重盲検２群並行群間比較試験を採用した。被験者として、年齢が３５歳から６５歳であり、肥満度１（２５≦ＢＭＩ＜３０）の男女を選出した。上記被験者をそれぞれ無作為に１５名ずつの２群に割り付け、それぞれ被験品群及びプラセボ群とした。被験品群及びプラセボ群の被験者には、それぞれ上記の被験品及びプラセボを摂取させた（８粒／日）。具体的には、１回につき４粒ずつ、１日２回、食後に摂取させた。試験期間は１２週間である。摂取開始日、摂取４週後、摂取８週後、及び摂取１２週後にそれぞれ採血し、血中のＨＤＬコレステロールを測定した。その結果を図１に示す。尚、併せて被験者の尿を採取し、尿検査を行った。 As a clinical trial, a double-blind, two-group parallel group comparison test using the test product and placebo was adopted. As subjects, men and women aged 35 to 65 and having an obesity level of 1 (25 ≦ BMI <30) were selected. The test subjects were randomly assigned to two groups of 15 people each, and they were divided into a test product group and a placebo group, respectively. The test article group and the placebo group were given the above test article and placebo (8 tablets / day), respectively. Specifically, 4 tablets at a time were taken twice a day after meals. The test period is 12 weeks. Blood samples were collected on the start date of intake, 4 weeks after intake, 8 weeks after intake, and 12 weeks after intake, and HDL cholesterol in the blood was measured. The result is shown in FIG. In addition, the urine of the subject was collected and a urine test was performed.
図１より、プラセボ群では、第１２週間経過段階でＨＤＬコレステロールは若干減少傾向を示しているのに対し、被験品群では、第４週経過段階からＨＤＬコレステロールが上昇していた。また、血液検査及び尿検査において、被験者に異常は認められなかった。 As shown in FIG. 1, the HDL cholesterol increased slightly from the 4th week in the test product group, whereas the placebo group showed a slight tendency to decrease in the 12th week. Further, no abnormality was observed in the subjects in the blood test and urine test.
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