JP2010241736A

JP2010241736A - Composition for diagnostic imaging

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Publication number: JP2010241736A
Application number: JP2009092989A
Authority: JP
Inventors: Masaki Kataoka; 正樹片岡; Giichi Naito; 義一内藤
Original assignee: Sumitomo Chemical Co Ltd
Current assignee: Sumitomo Chemical Co Ltd
Priority date: 2009-04-07
Filing date: 2009-04-07
Publication date: 2010-10-28

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a composition containing a PBR (peripheral benzodiazepine receptor)-directive ligand having high affinity to the PBR, high specificity and high brain migration tendency, and also enabling to obtain a sufficiently strong signal even in a non-invasive PBR measurement in a living body conventionally not obtainable of the sufficient signal. <P>SOLUTION: This composition for detecting or measuring the peripheral benzodiazepine receptor includes a radioactive benzodiazepine derivative expressed by formula (I) [wherein, X1 is F; X2 is I; and also any one of the atoms of X1 and X2 is a radioactive isotope]. <P>COPYRIGHT: (C)2011,JPO&INPIT

Description

本発明は、末梢性ベンゾジアゼピン受容体に選択的に作用する化合物からなる画像診断用組成物等に関する。 The present invention relates to a diagnostic imaging composition comprising a compound that selectively acts on a peripheral benzodiazepine receptor.

末梢性ベンゾジアゼピン受容体（以下、「ＰＢＲ」と略記することがある）は末梢型ベンゾジアゼピン受容体あるいはＴｒａｎｓｌｏｃａｔｏｒＰｒｏｔｅｉｎ（１８ｋＤａ）とも呼ばれ、γ−アミノ酪酸（以下、「ＧＡＢＡ」と称することがある）Ａ受容体およびクロライドイオンチャネルと複合体を形成している中枢性ベンゾジアゼピン受容体（以下、「ＣＢＲ」と略記することがある）とは機能的にも構造的にも異なることが知られている。ＣＢＲは中枢神経系組織のニューロンで特異的に発現しているのに対して、ＰＢＲは中枢神経系組織（例えば、嗅球、脈絡叢、上衣細胞など）、末梢組織（例えば、副腎、精巣、腎臓、心臓、肺、肝臓、平滑筋など）および血球（例えば、赤血球、白血球、血小板）に広く存在しており、特に腺組織および分泌組織での発現レベルが高い。中枢神経系においては、ＰＢＲは特にグリア細胞で多く発現している。ＰＢＲは１８ｋＤａのイソキノリン結合タンパクであり、ミトコンドリア外膜に局在し、電位依存性陰イオンチャネル、アデニンヌクレオチド輸送体と共に複合体を形成しており、この複合体はミトコンドリア膜透過性遷移孔と呼ばれている。ＰＢＲはステロイド合成、アポトーシス、細胞増殖・分化、免疫調節、ミトコンドリア機能調節などに関与していると報告されている。
一方、近年、目的物質の検出感度および精度が高く、非侵襲的で患者への負担も軽い診断手段として、放射性核種で標識した画像診断用組成物を用いる画像診断が用いられるようになってきた。画像診断用組成物およびそれが含有するプローブの検出手段に求められる一般的要件としては、インビボで診断できること、患者へのダメージが少ないこと（特に非侵襲的であること）、検出感度が高いこと、半減期が適当な長さであること（標識プローブ調製時間、診断時間が適当であること）等が挙げられる。そこで、最近では、高い検出感度と物質透過性を示すγ線を利用した陽電子断層撮影法（ＰＥＴ）またはγ線放出核種によるコンピューター断層撮影法（単一光子放射コンピュータ断層撮影法）（ＳＰＥＣＴ）が用いられるようになってきた。
上述のようにＰＢＲは脳内においてグリア細胞のミトコンドリア外膜上に多く存在するが、最近の研究により、脳内でミクログリアが活性化する精神神経疾患（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、虚血性脳梗塞、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症など）、癌（例えば、グリオーマ）、外傷性脳損傷および脳炎（例えば、ＨＩＶ感染による脳炎）でＰＢＲの発現が増加することが報告されている。一方、ある種の癌（例えば、皮膚癌、乳癌など）でＰＢＲの発現が減少することが報告されている。すなわち、放射性同位体で標識したＰＢＲのリガンドとＰＥＴもしくはＳＰＥＣＴを用いて、これら疾患の画像診断を行うことが可能である。
なお、特許第２５８６４１１号明細書（特許文献１）には、
一般式化１

〔式中、Ｒは水素原子または低級アルキル基を表し、Ｘ^＊は放射性のヨウ素原子または臭素原子を表し、Ｙは水素原子またはハロゲン原子を表し、Ｚはハロゲン原子またはニトロ基を表し、かつ、６、８又は９位に位置する。〕で示される放射性ベンゾジアゼピン誘導体またはその塩
が開示されている。 A peripheral benzodiazepine receptor (hereinafter sometimes abbreviated as “PBR”) is also called a peripheral benzodiazepine receptor or translocator protein (18 kDa), and γ-aminobutyric acid (hereinafter sometimes referred to as “GABA”). It is known that it is functionally and structurally different from the central benzodiazepine receptor (hereinafter sometimes abbreviated as “CBR”) that forms a complex with the A receptor and chloride ion channel. . CBR is specifically expressed in neurons of central nervous system tissue, whereas PBR is central nervous system tissue (eg, olfactory bulb, choroid plexus, ependymocytes), peripheral tissue (eg, adrenal gland, testis, kidney) , Heart, lung, liver, smooth muscle, etc.) and blood cells (eg, erythrocytes, leukocytes, platelets), and particularly high expression levels in glandular and secretory tissues. In the central nervous system, PBR is highly expressed especially in glial cells. PBR is an 18 kDa isoquinoline-binding protein that is localized in the outer mitochondrial membrane and forms a complex with a voltage-dependent anion channel and an adenine nucleotide transporter. This complex is called the mitochondrial permeability transition pore. It is. PBR has been reported to be involved in steroid synthesis, apoptosis, cell proliferation / differentiation, immune regulation, mitochondrial function regulation and the like.
On the other hand, in recent years, image diagnosis using a diagnostic composition labeled with a radionuclide has been used as a diagnostic means that has high detection sensitivity and accuracy of a target substance, is noninvasive, and has a light burden on a patient. . General requirements for detection means for diagnostic imaging compositions and probes contained therein are that they can be diagnosed in vivo, have little damage to the patient (particularly noninvasive), and have high detection sensitivity. And that the half-life is an appropriate length (label probe preparation time and diagnosis time are appropriate). Therefore, recently, positron emission tomography (PET) using γ-rays exhibiting high detection sensitivity and material permeability, or computed tomography (single photon emission computed tomography) (SPECT) using γ-ray emitting nuclides It has come to be used.
As described above, PBR is abundant on the mitochondrial outer membrane of glial cells in the brain. However, recent studies have shown that neuropsychiatric disorders in which microglia are activated in the brain (eg, Alzheimer's disease, Parkinson's disease, Huntington's disease, PBR expression may increase in ischemic cerebral infarction, amyotrophic lateral sclerosis, multiple sclerosis, etc., cancer (eg, glioma), traumatic brain injury and encephalitis (eg, encephalitis due to HIV infection) It has been reported. On the other hand, it has been reported that the expression of PBR is decreased in certain types of cancer (for example, skin cancer, breast cancer, etc.). That is, it is possible to perform image diagnosis of these diseases by using a PBR ligand labeled with a radioisotope and PET or SPECT.
In addition, in patent 2558611 specification (patent documents 1),
General formula

[In the formula, R represents a hydrogen atom or a lower alkyl group, X ^* represents a radioactive iodine atom or bromine atom, Y represents a hydrogen atom or a halogen atom, Z represents a halogen atom or a nitro group, and Located in 6, 8 or 9th place. ] The radioactive benzodiazepine derivative | guide_body or its salt shown by these is indicated.

特許第２５８６４１１号明細書Japanese Patent No. 2558611

本発明の目的は、ＰＢＲへの強い親和性と高い選択性および高い脳移行性を有するＰＢＲ指向性リガンドを含有する組成物を提供することにある。また、本発明の目的は、これまで十分な信号を得ることができなかった生体内でのＰＢＲの非侵襲的測定において、十分に強い信号を得ることを可能にすることにある。これによって、精神神経疾患（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、虚血性脳梗塞、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症など）、癌（例えば、グリオーマ、皮膚癌、乳癌など）、外傷性脳損傷および脳炎（例えば、ＨＩＶ感染による脳炎）等の、末梢性ベンゾジアゼピン受容体の発現が変動する疾患、特に中枢系で発現している末梢性ベンゾジアゼピン受容体の発現が変動する疾患の早期診断が可能となる。 An object of the present invention is to provide a composition containing a PBR-directing ligand having strong affinity for PBR, high selectivity, and high brain migration. Another object of the present invention is to make it possible to obtain a sufficiently strong signal in a non-invasive measurement of PBR in vivo, where a sufficient signal could not be obtained so far. As a result, neuropsychiatric diseases (for example, Alzheimer's disease, Parkinson's disease, Huntington's disease, ischemic cerebral infarction, amyotrophic lateral sclerosis, multiple sclerosis), cancer (for example, glioma, skin cancer, breast cancer, etc.) Diseases with variable expression of peripheral benzodiazepine receptors, such as traumatic brain injury and encephalitis (eg, encephalitis due to HIV infection), particularly diseases with variable expression of peripheral benzodiazepine receptors expressed in the central system Early diagnosis is possible.

本発明者らは前記課題を解決する目的で鋭意探索研究した結果、式（Ｉ）で表されるベンゾジアゼピン誘導体またはその放射性同位体が、ＰＢＲへの強い親和性と高い選択性および高い脳移行性を有することを見出し、本発明を完成した。すなわち、本発明は、以下の［１］〜［７］の組成物、［８］の画像診断用キット、および［９］〜［１３］の使用等を提供するものである。
［１］
式（Ｉ）

（式中、Ｘ１はフッ素原子であり、Ｘ２はヨウ素原子である。また、Ｘ１およびＸ２のいずれか一方の原子は放射性同位体である。）
で表される放射性ベンゾジアゼピン誘導体を含有する、末梢性ベンゾジアゼピン受容体の検出または測定用の組成物。
［２］
末梢性ベンゾジアゼピン受容体が、中枢神経系組織に発現している末梢性ベンゾジアゼピン受容体である前記［１］に記載の組成物。
［３］
末梢性ベンゾジアゼピン受容体の発現が変動する疾患の画像診断用である前記［１］または前記［２］に記載の組成物。
［３’］
式（Ｉ）

（式中、Ｘ１はフッ素原子であり、Ｘ２はヨウ素原子である。また、Ｘ１およびＸ２のいずれか一方の原子は放射性同位体である。）
で表される放射性ベンゾジアゼピン誘導体を含有する、末梢性ベンゾジアゼピン受容体の発現が変動する疾患の画像診断用組成物。
［４］
末梢性ベンゾジアゼピン受容体の発現が変動する疾患が、末梢性ベンゾジアゼピン受容体の発現が増加する疾患である前記［３］に記載の組成物。
［５］
Ｘ１が、Ｆ−１８である前記［１］〜前記［４］のいずれか１項に記載の組成物。
［６］
Ｘ２が、Ｉ−１２１、Ｉ−１２３、Ｉ−１２４、Ｉ−１２５またはＩ−１３１である前記［１］〜前記［４］のいずれか１項に記載の組成物。
［７］
Ｘ２が、Ｉ−１２３である前記［１］〜前記［４］のいずれか１項に記載の組成物。
［８］
前記［１］〜前記［７］のいずれか１項に記載の組成物を含有する、末梢性ベンゾジアゼピン受容体の発現が変動する疾患を診断するための画像診断用キット。
［９］
請求項１の式（Ｉ）で表される放射性ベンゾジアゼピン誘導体の末梢性ベンゾジアゼピン受容体特異的リガンドとしての使用。
［１０］
請求項１の式（Ｉ）で表される放射性ベンゾジアゼピン誘導体の、末梢性ベンゾジアゼピン受容体の検出または測定のための使用。
［１１］
末梢性ベンゾジアゼピン受容体が、中枢神経系組織に発現している末梢性ベンゾジアゼピン受容体である前記［１０］に記載の使用。
［１２］
請求項１の式（Ｉ）で表される放射性ベンゾジアゼピン誘導体の、末梢性ベンゾジアゼピン受容体の発現が変動する疾患の画像診断用組成物としての使用。
［１３］
末梢性ベンゾジアゼピン受容体の発現が変動する疾患が、末梢性ベンゾジアゼピン受容体の発現が増加する疾患である前記［１２］に記載の使用。 As a result of diligent search studies aimed at solving the above problems, the present inventors have found that the benzodiazepine derivative represented by the formula (I) or a radioisotope thereof has a strong affinity for PBR, high selectivity, and high brain migration. The present invention was completed. That is, the present invention provides the following compositions [1] to [7], [8] diagnostic imaging kits, and [9] to [13].
[1]
Formula (I)

(In the formula, X1 is a fluorine atom and X2 is an iodine atom. One of X1 and X2 is a radioisotope.)
A composition for detecting or measuring a peripheral benzodiazepine receptor, comprising a radioactive benzodiazepine derivative represented by:
[2]
The composition according to [1], wherein the peripheral benzodiazepine receptor is a peripheral benzodiazepine receptor expressed in a central nervous system tissue.
[3]
The composition according to [1] or [2] above, which is for image diagnosis of a disease in which expression of a peripheral benzodiazepine receptor varies.
[3 ']
Formula (I)

(In the formula, X1 is a fluorine atom and X2 is an iodine atom. One of X1 and X2 is a radioisotope.)
The composition for diagnostic imaging of the disease in which the expression of a peripheral benzodiazepine receptor fluctuates containing the radioactive benzodiazepine derivative represented by these.
[4]
The composition according to [3], wherein the disease in which expression of the peripheral benzodiazepine receptor is varied is a disease in which expression of the peripheral benzodiazepine receptor is increased.
[5]
The composition according to any one of [1] to [4], wherein X1 is F-18.
[6]
The composition according to any one of [1] to [4], wherein X2 is I-121, I-123, I-124, I-125, or I-131.
[7]
The composition according to any one of [1] to [4], wherein X2 is I-123.
[8]
A diagnostic imaging kit for diagnosing a disease in which expression of a peripheral benzodiazepine receptor fluctuates, comprising the composition according to any one of [1] to [7].
[9]
Use of the radioactive benzodiazepine derivative represented by formula (I) of claim 1 as a peripheral benzodiazepine receptor-specific ligand.
[10]
Use of the radioactive benzodiazepine derivative represented by the formula (I) of claim 1 for detection or measurement of a peripheral benzodiazepine receptor.
[11]
The use according to [10] above, wherein the peripheral benzodiazepine receptor is a peripheral benzodiazepine receptor expressed in a central nervous system tissue.
[12]
Use of the radioactive benzodiazepine derivative represented by the formula (I) of claim 1 as a composition for diagnostic imaging of a disease in which expression of a peripheral benzodiazepine receptor varies.
[13]
The use according to [12] above, wherein the disease in which expression of peripheral benzodiazepine receptor is varied is a disease in which expression of peripheral benzodiazepine receptor is increased.

本発明によれば、生体内でのＰＢＲの非侵襲的測定の精度が向上し、末梢性ベンゾジアゼピン受容体の発現が変動する疾患、特に中枢系で発現している末梢性ベンゾジアゼピン受容体の発現が変動する疾患を早期診断することが可能となる。 According to the present invention, the accuracy of noninvasive measurement of PBR in vivo is improved, and the expression of peripheral benzodiazepine receptors expressed in the central system is particularly affected by diseases in which the expression of peripheral benzodiazepine receptors varies. It becomes possible to diagnose a fluctuating disease at an early stage.

本発明の末梢性ベンゾジアゼピン受容体の検出または測定用の組成物は、式（Ｉ）

（式中、Ｘ１はフッ素原子であり、Ｘ２はヨウ素原子である。また、Ｘ１およびＸ２のいずれか一方の原子は放射性同位体である。）
で表される放射性ベンゾジアゼピン誘導体（以下、放射性ベンゾジアゼピン誘導体（Ｉ）と称する場合がある）を含有する。
前記放射性ベンゾジアゼピン誘導体（Ｉ）は、７−クロロ−１−メチル−５−（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）−３Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オン（但し、２'位のフッ素原子および４'位のヨウ素原子のいずれかは放射性同位体である。）である。なお、本明細書中、７−クロロ−１−メチル−５−（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）−３Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オンを、２'−Ｆ・４'−ＩＤＺと略記する場合がある。
前記放射性ベンゾジアゼピン誘導体（Ｉ）は、塩または溶媒和物であってもよい。
前記放射性ベンゾジアゼピン誘導体（Ｉ）が塩である場合、このような塩としては、例えば金属塩、アンモニウム塩、有機塩基との塩、無機酸との塩、有機酸との塩、塩基性または酸性アミノ酸との塩などが挙げられる。金属塩の好適な例としては、例えばナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩、バリウム塩などのアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩などが挙げられる。有機塩基との塩の好適な例としては、例えばトリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、２，６−ルチジン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、シクロヘキシルアミン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ'−ジベンジルエチレンジアミンなどとの塩が挙げられる。無機酸との塩の好適な例としては、例えば塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸などとの塩が挙げられる。有機酸との塩の好適な例としては、例えばギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、フタル酸、フマル酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などとの塩が挙げられる。塩基性アミノ酸との塩の好適な例としては、例えばアルギニン、リジン、オルニチンなどとの塩が挙げられ、酸性アミノ酸との塩の好適な例としては、例えばアスパラギン酸、グルタミン酸などとの塩が挙げられる。このうち、薬学的に許容される塩が好ましい。例えば、化合物内に酸性官能基を有する場合にはアルカリ金属塩（例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩など）、アルカリ土類金属塩（例えば、マグネシウム塩、カルシウム塩、バリウム塩など）などの無機塩、アンモニウム塩など、また、化合物内に塩基性官能基を有する場合には、例えば塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸など無機酸との塩、または酢酸、フタル酸、フマル酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などの有機酸との塩が挙げられる。
前記放射性ベンゾジアゼピン誘導体（Ｉ）が溶媒和物である場合、このような溶媒和物としては、例えば、水和物が挙げられる。 The composition for detecting or measuring a peripheral benzodiazepine receptor of the present invention has the formula (I)

(In the formula, X1 is a fluorine atom and X2 is an iodine atom. One of X1 and X2 is a radioisotope.)
In the form of a radioactive benzodiazepine derivative (hereinafter sometimes referred to as a radioactive benzodiazepine derivative (I)).
The radioactive benzodiazepine derivative (I) is 7-chloro-1-methyl-5- (2-fluoro-4-iodophenyl) -3H-1,4-benzodiazepin-2-one (however, a fluorine atom at the 2 ′ position) And the iodine atom at the 4 ′ position is a radioisotope). In the present specification, 7-chloro-1-methyl-5- (2-fluoro-4-iodophenyl) -3H-1,4-benzodiazepin-2-one is represented by 2′-F · 4′-IDZ. May be abbreviated.
The radioactive benzodiazepine derivative (I) may be a salt or a solvate.
When the radioactive benzodiazepine derivative (I) is a salt, examples of such salts include metal salts, ammonium salts, salts with organic bases, salts with inorganic acids, salts with organic acids, basic or acidic amino acids. And a salt thereof. Preferable examples of the metal salt include alkali metal salts such as sodium salt and potassium salt; alkaline earth metal salts such as calcium salt, magnesium salt and barium salt; aluminum salt and the like. Preferable examples of the salt with an organic base include, for example, trimethylamine, triethylamine, pyridine, picoline, 2,6-lutidine, ethanolamine, diethanolamine, triethanolamine, cyclohexylamine, dicyclohexylamine, N, N′-dibenzylethylenediamine. And the like. Preferable examples of the salt with inorganic acid include salts with hydrochloric acid, hydrobromic acid, nitric acid, sulfuric acid, phosphoric acid and the like. Preferable examples of the salt with organic acid include formic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, phthalic acid, fumaric acid, oxalic acid, tartaric acid, maleic acid, citric acid, succinic acid, malic acid, methanesulfonic acid, and benzenesulfone. And salts with acid, p-toluenesulfonic acid and the like. Preferable examples of salts with basic amino acids include salts with arginine, lysine, ornithine and the like, and preferable examples of salts with acidic amino acids include salts with aspartic acid and glutamic acid, for example. It is done. Of these, pharmaceutically acceptable salts are preferred. For example, when the compound has an acidic functional group, an alkali metal salt (eg, lithium salt, sodium salt, potassium salt, etc.), an alkaline earth metal salt (eg, magnesium salt, calcium salt, barium salt, etc.), etc. Inorganic salts, ammonium salts, etc., and when the compound has a basic functional group, for example, salts with inorganic acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, nitric acid, sulfuric acid, phosphoric acid, or acetic acid, phthalic acid, fumaric acid And salts with organic acids such as acid, oxalic acid, tartaric acid, maleic acid, citric acid, succinic acid, methanesulfonic acid, and p-toluenesulfonic acid.
When the radioactive benzodiazepine derivative (I) is a solvate, examples of such a solvate include hydrates.

前記放射性ベンゾジアゼピン誘導体（Ｉ）に包含される７−クロロ−１−メチル−５−（２−フルオロ−〔^１２５Ｉ〕−４−ヨードフェニル）−３Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オンは、例えば前記特許文献１に記載されている公知の化合物であり、式（Ｉ）で表されるベンゾジアゼピン誘導体は、特許文献１に記載の製造法に準じて製造することができる。 7-chloro-1-methyl-5- (2-fluoro- [ ^125I ] -4-iodophenyl) -3H-1,4-benzodiazepin-2-one included in the radioactive benzodiazepine derivative (I) is: For example, a benzodiazepine derivative represented by the formula (I), which is a known compound described in Patent Document 1, can be produced according to the production method described in Patent Document 1.

Ｘ１で表される原子が放射性同位体である場合、Ｘ１は、好ましくは、Ｆ−１８である。
Ｘ２で表される原子が放射性同位体である場合、Ｘ２は、好ましくは、Ｉ−１２１、Ｉ−１２３、Ｉ−１２４、Ｉ−１２５またはＩ−１３１である。Ｘ２は、より好ましくは、Ｉ−１２３である。
単に解釈上の疑義を避けるために記載するものであるが、Ｘ１で表される原子が放射性同位体である場合、Ｘ２で表される原子は放射性同位体ではなく、一方、Ｘ２で表される原子が放射性同位体である場合、Ｘ１で表される原子は放射性同位体ではない。 When the atom represented by X1 is a radioisotope, X1 is preferably F-18.
When the atom represented by X2 is a radioisotope, X2 is preferably I-121, I-123, I-124, I-125 or I-131. X2 is more preferably I-123.
It is described only to avoid doubts on interpretation, but when the atom represented by X1 is a radioisotope, the atom represented by X2 is not a radioisotope, whereas it is represented by X2. When the atom is a radioisotope, the atom represented by X1 is not a radioisotope.

本発明の組成物は、末梢性ベンゾジアゼピン受容体の検出または測定のために用いられる。本発明の組成物を用いて検出または測定される末梢性ベンゾジアゼピン受容体は、例えば、生体の中枢神経系組織（例えば、嗅球、脈絡叢、上衣細胞など）、末梢組織（例えば、副腎、精巣、腎臓、心臓、肺、肝臓、平滑筋など）および血球（例えば、赤血球、白血球、血小板）に発現している。放射性ベンゾジアゼピン誘導体（Ｉ）は脳などの中枢神経系組織への高い移行性を有するので、本発明の組成物を用いて検出または測定される末梢性ベンゾジアゼピン受容体として好ましくは、なかでも、対象（subject）の生体の中枢神経系組織（例えば、嗅球、脈絡叢、上衣細胞など）に発現している末梢性ベンゾジアゼピン受容体である。
また、本発明の組成物を用いて検出または測定される末梢性ベンゾジアゼピン受容体は、対象の生体から採取した生体試料に存在するものであってもよい。
当該対象としては、例えば、哺乳動物（例えば、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジーなど）が挙げられる。
特に、放射性ベンゾジアゼピン誘導体（Ｉ）は、末梢性ベンゾジアゼピン受容体特異的リガンドとして使用できるので、本発明の組成物を用いて末梢性ベンゾジアゼピン受容体（好ましくは、中枢神経系組織に発現している末梢性ベンゾジアゼピン受容体）を特異的（または選択的）に検出または測定することができる。
本明細書中、「末梢性ベンゾジアゼピン受容体特異的」とは、中枢性ベンゾジアゼピン受容体への結合親和性に比較して、末梢性ベンゾジアゼピン受容体への結合親和性が顕著に高い（好ましくは１００倍以上高い（すなわち、Ｋｉ値が１／１００以下である））ことを意味する。 The composition of the present invention is used for detection or measurement of peripheral benzodiazepine receptors. Peripheral benzodiazepine receptors to be detected or measured using the composition of the present invention include, for example, central nervous system tissues (for example, olfactory bulb, choroid plexus, upper cell), peripheral tissues (for example, adrenal gland, testis, Expressed in kidney, heart, lung, liver, smooth muscle, etc.) and blood cells (eg, red blood cells, white blood cells, platelets). Since the radioactive benzodiazepine derivative (I) has a high transferability to central nervous system tissues such as the brain, the peripheral benzodiazepine receptor to be detected or measured using the composition of the present invention is preferably a subject ( It is a peripheral benzodiazepine receptor expressed in the central nervous system tissue (for example, olfactory bulb, choroid plexus, ependymocytes, etc.) of the subject.
Moreover, the peripheral benzodiazepine receptor detected or measured using the composition of this invention may exist in the biological sample extract | collected from the target biological body.
Examples of the subject include mammals (eg, humans, mice, rats, rabbits, sheep, pigs, cows, horses, cats, dogs, monkeys, chimpanzees, etc.).
In particular, since the radioactive benzodiazepine derivative (I) can be used as a peripheral benzodiazepine receptor-specific ligand, a peripheral benzodiazepine receptor (preferably, a peripheral expressed in a central nervous system tissue using the composition of the present invention). Sex benzodiazepine receptor) can be specifically or selectively detected or measured.
In the present specification, “peripheral benzodiazepine receptor-specific” means that the binding affinity to the peripheral benzodiazepine receptor is remarkably high compared with the binding affinity to the central benzodiazepine receptor (preferably 100 Means that the Ki value is 1/100 or less.

放射性ベンゾジアゼピン誘導体（Ｉ）は、末梢性ベンゾジアゼピン受容体特異的リガンドとして使用でき、および放射性ベンゾジアゼピン誘導体（Ｉ）の末梢性ベンゾジアゼピン受容体特異的リガンドとしての使用により、末梢性ベンゾジアゼピン受容体の検出または測定が可能になるので、本発明の組成物は、末梢性ベンゾジアゼピン受容体の発現が変動する疾患の画像診断に、好適に用いることができる。すなわち、本発明の組成物は、好ましくは、末梢性ベンゾジアゼピン受容体の発現が変動する疾患の画像診断用である。
換言すれば、このような本発明の好ましい組成物は、放射性ベンゾジアゼピン誘導体（Ｉ）を含有する、末梢性ベンゾジアゼピン受容体の発現が変動する疾患の画像診断用組成物である。
末梢性ベンゾジアゼピン受容体の発現が変動する疾患としては、例えば、精神神経疾患（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、虚血性脳梗塞、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症など）、癌（例えば、グリオーマ、皮膚癌、乳癌）、外傷性脳損傷および脳炎（例えば、ＨＩＶ感染による脳炎）等が挙げられる。
末梢性ベンゾジアゼピン受容体の発現が変動する疾患として好ましくは、精神神経疾患（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、虚血性脳梗塞、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症など）、癌（例えば、グリオーマ）、外傷性脳損傷および脳炎（例えば、ＨＩＶ感染による脳炎）等の、末梢性ベンゾジアゼピン受容体（特に中枢系で発現している末梢性ベンゾジアゼピン受容体）の発現が増加する疾患である。
本明細書中、「末梢性ベンゾジアゼピン受容体の発現が変動する疾患」とは、健常者における末梢性ベンゾジアゼピン受容体の発現量に比べて、当該疾患に罹患している患者における末梢性ベンゾジアゼピン受容体の発現量が高いまたは低い疾患を意味する。
前記画像診断として好ましくは、例えば、陽電子断層撮影法（ＰＥＴ）または単一光子放射コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）である。
一般に、ＰＥＴ用にはＣ−１１、Ｎ−１３、Ｏ−１５、Ｆ−１８、Ｃｕ−６２、Ｇａ−６８、またはＢｒ−７６等の陽電子放出核種で標識されたプローブ化合物が用いられる。また、一般に、ＳＰＥＣＴ用にはＴｃ−９９ｍ、Ｉｎ−１１１、Ｇａ−６７、Ｔｌ−２０１、Ｉ−１２３、またはＸｅ−１３３等のγ線放出核種が標識として用いられている。放射性ベンゾジアゼピン誘導体（Ｉ）において、ＰＥＴ用に好ましくは、Ｘ１で示される２'位のフッ素原子は、Ｆ−１８である。一方、放射性ベンゾジアゼピン誘導体（Ｉ）において、ＳＰＥＣＴ用に好ましくは、Ｘ２で示される４'位のヨウ素原子は、Ｉ−１２１、Ｉ−１２３、Ｉ−１２４、Ｉ−１２５またはＩ−１３１、より好ましくはＩ−１２３である。 The radioactive benzodiazepine derivative (I) can be used as a peripheral benzodiazepine receptor-specific ligand, and the use of the radioactive benzodiazepine derivative (I) as a peripheral benzodiazepine receptor-specific ligand can detect or measure peripheral benzodiazepine receptors. Therefore, the composition of the present invention can be suitably used for diagnostic imaging of diseases in which the expression of peripheral benzodiazepine receptors varies. That is, the composition of the present invention is preferably for diagnostic imaging of diseases in which the expression of peripheral benzodiazepine receptors varies.
In other words, such a preferred composition of the present invention is a composition for diagnostic imaging of a disease in which the expression of a peripheral benzodiazepine receptor varies, containing the radioactive benzodiazepine derivative (I).
Examples of diseases in which the expression of peripheral benzodiazepine receptors fluctuates include neuropsychiatric diseases (eg, Alzheimer's disease, Parkinson's disease, Huntington's disease, ischemic stroke, amyotrophic lateral sclerosis, multiple sclerosis) , Cancer (eg, glioma, skin cancer, breast cancer), traumatic brain injury and encephalitis (eg, encephalitis due to HIV infection) and the like.
As a disease in which the expression of peripheral benzodiazepine receptor varies, a neuropsychiatric disorder (for example, Alzheimer's disease, Parkinson's disease, Huntington's disease, ischemic stroke, amyotrophic lateral sclerosis, multiple sclerosis), Diseases with increased expression of peripheral benzodiazepine receptors (especially peripheral benzodiazepine receptors expressed in the central system) such as cancer (eg glioma), traumatic brain injury and encephalitis (eg encephalitis due to HIV infection) It is.
In the present specification, the term “disease in which the expression of peripheral benzodiazepine receptor varies” refers to the peripheral benzodiazepine receptor in patients suffering from the disease as compared to the expression level of peripheral benzodiazepine receptor in healthy subjects. It means a disease whose expression level is high or low.
The image diagnosis is preferably positron emission tomography (PET) or single photon emission computed tomography (SPECT).
In general, a probe compound labeled with a positron emitting nuclide such as C-11, N-13, O-15, F-18, Cu-62, Ga-68, or Br-76 is used for PET. In general, γ-ray emitting nuclides such as Tc-99m, In-111, Ga-67, Tl-201, I-123, and Xe-133 are used as labels for SPECT. In the radioactive benzodiazepine derivative (I), the fluorine atom at the 2 ′ position represented by X1 is preferably F-18 for PET. On the other hand, in the radioactive benzodiazepine derivative (I), preferably for the SPECT, the 4′-position iodine atom represented by X2 is more preferably I-121, I-123, I-124, I-125 or I-131. Is I-123.

一般的には、これらの核種はサイクロトロンまたはジェネレーターと呼ばれる装置により産生される。当業者は、産生核種に応じた産生方法および装置が選択可能である。そのようにして産生された核種を用いて２'−Ｆ・４'−ＩＤＺまたはその塩もしくは溶媒和物を標識することができる。放射性核種にて標識された２'−Ｆ・４'−ＩＤＺまたはその塩もしくは溶媒和物（すなわち、放射性ベンゾジアゼピン誘導体（Ｉ））、とりわけＩ−１２３もしくはＦ−１８にて標識された２'−Ｆ・４'−ＩＤＺまたはその塩もしくは溶媒和物を対象に投与して、ＰＢＲへの結合および崩壊のための十分な時間経過後、ＰＥＴやＳＰＥＣＴにて検査部位を調べることができる。ＰＢＲへの結合および崩壊のための十分な時間は疾病の種類、対象の状態、検査部位等の要因により様々であるが、当業者はこれを容易に決定することができる。放射性ベンゾジアゼピン誘導体（Ｉ）の対象への投与は局所的であってもよく、あるいは全身的であってもよい。投与経路としては、皮内、腹腔内、静脈、動脈、または脊髄液への注射または輸液等があるが、疾病の種類、使用核種、使用化合物、対象の状態、検査部位等の要因により選択できる。そのための手段・方法は公知のものを用いることができ、疾病の種類、対象の状態、検査部位等の要因に応じて適宜選択できる。放射性ベンゾジアゼピン誘導体（Ｉ）の用量は、疾病の種類、対象の年齢、身体的状態、性別、疾病の程度、検査部位等により様々であるが、例えば、成人の精神神経疾患患者に静脈注射により投与する場合、１００〜３７０ＭＢｑを単回投与する。特に、対象の被曝量については十分に注意する必要がある。 Generally, these nuclides are produced by devices called cyclotrons or generators. A person skilled in the art can select a production method and apparatus according to the production nuclide. The nuclide thus produced can be used to label 2′-F · 4′-IDZ or a salt or solvate thereof. 2′-F · 4′-IDZ labeled with a radionuclide or a salt or solvate thereof (that is, a radioactive benzodiazepine derivative (I)), particularly 2′-labeled with I-123 or F-18 After administration of F · 4′-IDZ or a salt or solvate thereof to a subject and sufficient time for binding to PBR and disintegration, the test site can be examined by PET or SPECT. Sufficient time for binding and disintegration to PBR will vary depending on factors such as the type of disease, the condition of the subject, the test site, etc., and can be readily determined by those skilled in the art. Administration of the radioactive benzodiazepine derivative (I) to the subject may be local or systemic. The route of administration includes intradermal, intraperitoneal, intravenous, arterial, or spinal fluid injection or infusion, but can be selected depending on factors such as the type of disease, the nuclide used, the compound used, the condition of the subject, the examination site . Known means and methods can be used for this purpose, and can be appropriately selected according to factors such as the type of disease, the state of the target, and the site to be examined. The dose of the radioactive benzodiazepine derivative (I) varies depending on the type of disease, the age of the subject, physical condition, sex, degree of disease, examination site, etc., for example, administered by intravenous injection to adult patients with neuropsychiatric disorders If so, administer a single dose of 100-370 MBq. In particular, it is necessary to pay close attention to the exposure dose of the subject.

本発明の組成物は、放射性ベンゾジアゼピン誘導体（Ｉ）および医薬上許容される担体を含む。本発明の画像診断用組成物の形態は、その目的からすれば注射あるいは輸液可能な形態であることが好ましい。したがって、医薬上許容される担体は液体であるものが好ましく、リン酸カリウム緩衝液、生理食塩液、リンゲル液、および蒸留水などの水性溶媒、あるいはポリエチレングリコール、植物性油脂、エタノール、グリセリン、ジメチルスルホキサイド、およびプロピレングリコールなどの非水性溶媒があるが、これらに限らない。担体と放射性ベンゾジアゼピン誘導体（Ｉ）との混合比率は、適用部位、検出手段等に応じて適宜選択できる。また、本発明の組成物はさらに抗菌剤（例えば、抗生剤など）、局所麻酔剤（例えば、塩酸プロカイン、塩酸ジブカインなど）、バッファー（例えば、トリス−塩酸バッファー、ＨＥＰＥＳバッファーなど）、浸透圧調節剤（例えば、グルコース、ソルビトール、塩化ナトリウムなど）等を含有していてもよい。 The composition of the present invention comprises a radioactive benzodiazepine derivative (I) and a pharmaceutically acceptable carrier. The form of the diagnostic imaging composition of the present invention is preferably a form that can be injected or infused for that purpose. Accordingly, the pharmaceutically acceptable carrier is preferably a liquid, and is an aqueous solvent such as potassium phosphate buffer, physiological saline, Ringer's solution, and distilled water, or polyethylene glycol, vegetable oil, ethanol, glycerin, dimethyl sulfone. Non-aqueous solvents such as, but not limited to, xylene and propylene glycol. The mixing ratio of the carrier and the radioactive benzodiazepine derivative (I) can be appropriately selected according to the application site, detection means and the like. The composition of the present invention further comprises an antibacterial agent (for example, antibiotic agent), a local anesthetic (for example, procaine hydrochloride, dibucaine hydrochloride, etc.), a buffer (for example, Tris-HCl buffer, HEPES buffer, etc.), and osmotic pressure regulation. An agent (for example, glucose, sorbitol, sodium chloride, etc.) may be contained.

さらに本発明は、放射性ベンゾジアゼピン誘導体（Ｉ）、すなわち放射性核種（特に好ましくは、Ｉ−１２３もしくはＦ−１８）によって標識された２'−Ｆ・４'−ＩＤＺまたはその塩もしくは溶媒和物を必須の成分として含む、ＰＢＲの発現が変動（好ましくは、増加）する疾患の画像診断用キットを提供する。通常、かかるキットは、放射性ベンゾジアゼピン誘導体（Ｉ）、それを溶解する溶剤、バッファー、浸透圧調節剤、抗菌剤、局所麻酔剤等の各成分を別個に、あるいはいくつかを一緒にしてそれぞれの容器に入れたものをひとまとめにしたものである。
上記キットにおいて、放射性ベンゾジアゼピン誘導体（Ｉ）は凍結乾燥粉末等の固形物として提供してもよく、あるいは適当な溶媒中に溶解して提供してもよい。溶剤としては上述の本発明の組成物に用いられる担体と同様のものであってよい。また、バッファー、浸透圧調節剤、抗菌剤、局所麻酔剤等の各成分も上述の本発明の組成物に使用するものと同様のものであってよい。各成分を入れる容器は種々のものを適宜選択でき、例えば遮光性の材質のものとしてもよく、あるいは患者への投与に便利なようにバイアル、または注射器等の形状とすることもできる。また、キットは画像診断に必要な器具類、例えば注射器、輸液セット、あるいは使用する画像診断装置に使用する器具類等を適宜含んでいてもよい。キットには説明書を添付するのが一般的である。
さらに本発明は、放射性ベンゾジアゼピン誘導体（Ｉ）、すなわち放射性核種（特に好ましくは、Ｉ−１２３もしくはＦ−１８）によって標識された２'−Ｆ・４'−ＩＤＺまたはその塩もしくは溶媒和物を用いることを特徴とする、ＰＢＲの発現が変動（好ましくは、増加）する疾患の画像診断方法を提供する。
上述のごとく、放射性ベンゾジアゼピン誘導体（Ｉ）はＰＢＲに特異性が高い。したがって、２'−Ｆ・４'−ＩＤＺは、例えば、ＰＢＲの発現が変動（好ましくは、増加）する疾患の画像診断やかかる疾病の研究に有用である。
放射性ベンゾジアゼピン誘導体（Ｉ）を用いてＰＢＲの発現が増加する疾患を画像診断する場合の手順や方法は当該分野において公知である。対象を安静にさせ、好ましくは液体処方として注射または輸液により、放射性ベンゾジアゼピン誘導体（Ｉ）を投与し、ＰＢＲへの結合および崩壊のための時間が経過後に画像データを得る。画像データ解析には当該分野において知られた種々の手段・方法を用いることができる。 Furthermore, the present invention requires a radioactive benzodiazepine derivative (I), that is, 2′-F · 4′-IDZ or a salt or solvate thereof labeled with a radionuclide (particularly preferably, I-123 or F-18). A diagnostic imaging kit for a disease in which PBR expression varies (preferably increases), which is included as a component of PBR. Usually, such a kit is used for each component of a radioactive benzodiazepine derivative (I), a solvent for dissolving it, a buffer, an osmotic pressure adjusting agent, an antibacterial agent, a local anesthetic agent, etc. It is a collection of what you put in.
In the above kit, the radioactive benzodiazepine derivative (I) may be provided as a solid such as a lyophilized powder, or may be provided by dissolving in a suitable solvent. The solvent may be the same as the carrier used in the above-described composition of the present invention. In addition, each component such as a buffer, an osmotic pressure regulator, an antibacterial agent, and a local anesthetic may be the same as that used in the above-described composition of the present invention. Various containers for storing each component can be selected as appropriate. For example, the container may be made of a light-shielding material, or may be shaped like a vial or a syringe for convenient administration to a patient. Further, the kit may appropriately include instruments necessary for diagnostic imaging, for example, a syringe, an infusion set, or instruments used for the diagnostic imaging apparatus to be used. In general, instructions are attached to the kit.
Furthermore, the present invention employs a radioactive benzodiazepine derivative (I), that is, 2′-F · 4′-IDZ or a salt or solvate thereof labeled with a radionuclide (particularly preferably, I-123 or F-18). A diagnostic imaging method for diseases in which the expression of PBR varies (preferably increases) is provided.
As described above, the radioactive benzodiazepine derivative (I) has high specificity for PBR. Therefore, 2′-F · 4′-IDZ is useful for, for example, diagnostic imaging of diseases in which the expression of PBR varies (preferably increases) and research of such diseases.
Procedures and methods for image diagnosis of diseases in which the expression of PBR increases using the radioactive benzodiazepine derivative (I) are known in the art. The subject is rested, and the radioactive benzodiazepine derivative (I) is administered, preferably by injection or infusion as a liquid formulation, and image data is obtained after the time for binding and disintegration to PBR. Various means and methods known in the art can be used for image data analysis.

以下に製造例および試験例によって本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
以下において、
２'−Ｆ・４'−ＩＤＺは、７−クロロ−１−メチル−５−（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）−３Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オンを、
４'−ＣｌＤＺは、７−クロロ−１−メチル−５−（４−クロロフェニル）−３Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オンを、
２'−ＩＤＺは、７−クロロ−１−メチル−５−（２−ヨードフェニル）−３Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オンを、
４'−ＩＤＺは、７−クロロ−１−メチル−５−（４−ヨードフェニル）−３Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−２−オンを、
それぞれ示す。 Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to production examples and test examples, but the present invention is not limited thereto.
In the following,
2′-F · 4′-IDZ represents 7-chloro-1-methyl-5- (2-fluoro-4-iodophenyl) -3H-1,4-benzodiazepin-2-one,
4′-ClDZ represents 7-chloro-1-methyl-5- (4-chlorophenyl) -3H-1,4-benzodiazepin-2-one,
2′-IDZ represents 7-chloro-1-methyl-5- (2-iodophenyl) -3H-1,4-benzodiazepin-2-one,
4′-IDZ represents 7-chloro-1-methyl-5- (4-iodophenyl) -3H-1,4-benzodiazepin-2-one,
Each is shown.

製造例１（２'−Ｆ・４'−ＩＤＺの製造）
（１）工程[1]

4-クロロ-Ｎ-メチルアニリン(a)(86.65 g,612 mmol)、2-ブロモエチルアンモニウムブロミド(62.65 g, 306 mmol)及びトルエン(150 mL)を混合し、7時間加熱還流した。室温まで放冷後、炭酸水素ナトリウム(25.09g)の水(260 ml)の溶液を加え、更に塩化ナトリウムを不溶となるまで添加した。不溶物を濾取して水洗し、水に懸濁したのち、ここに1N水酸化ナトリウム水溶液を加え、トルエンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧留去して得られた褐色油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(トルエン/エタノール)で精製し、淡黄色油状の化合物(ｂ)(39.68g, 70.2%)を得た。
¹H-NMR (CDCl₃)δ(ppm):1.19 (2H, broad s), 2.91 (2H, t, J=6.5Hz), 2.94(3H, s), 3.57 (2H, t, J= 6.5Hz), 6.63〜6.69 (2H, m), 7.12〜7.26 (2H, m)
（２）工程[2]

4-フルオロ-2-ニトロ安息香酸(A)(38.47g, 208mmol)、塩化チオニル(180ml)及びトルエン(397ml)を混合し、3時間30分加熱還流した。トルエンを減圧留去した後、トルエン(350ml)を加えて減圧留去することを3回行い、残渣にトルエン(350ml)を加え、ここに化合物(b)(39.68g, 215mmol)のトルエン(300ml)の溶液を添加し、1時間30分加熱還流した。室温まで放冷後、反応液を10%水酸化ナトリウム水溶液に添加して不溶物を濾別し、不溶物はクロロホルムに溶解して分液し、また濾液を分液して、有機層を併せて硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/エタノール)で精製し、褐色固体の化合物(B)(68.34g, 93.5%)を得た。
¹H-NMR (CDCl₃)δ(ppm):2.98(3H, s), 3.59(2H, t, J=5.7Hz), 3.70(2H, q, J=5.6Hz), 6.68〜6.74(2H, m), 6.87(1H, broad s), 7.13〜7.26 (2H, m), 7.99(1H, dd, J=2.2, 11.3Hz), 8.12(1H, dd, J=2.2, 8.4Hz), 8.26(1H, t, J=8.6Hz)
（３）工程[3]

化合物(B)(34.17g, 97.1mmol)、酸化りん(V)205g及びオキシ塩化りん(855ml)を混合し、7時間加熱還流した。反応液を氷水5kg及び48%水酸化ナトリウム水溶液(2.8l)の混合物に添加してpH10とし、酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧留去して得られた褐色油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(酢酸エチル/クロロホルム)で精製し、褐色固体の化合物(C)(18.60g, 57.4%)を得た。
¹H-NMR (CDCl₃)δ(ppm):2.84(3H, s), 3.67〜3.71(2H, m), 3.83〜3.90(2H, m), 6.79(1H, d, J=2.7Hz), 6.90(1H,d, J=8.9Hz), 7.32(1H, dd, J=2.7, 8.6Hz), 7.73(1H, dd, J=7.0, 8.4Hz), 7.94(1H, dd, J=1,9, 7.0Hz), 8.06〜8.10(1H, m)
（４）工程[4]

N-ブロモスクシンイミド(58.51g, 329mmol)のテトラヒドロフラン(1.6l)の溶液に、化合物(C)(46.89g, 141mmol)のテトラヒドロフラン(1.8l)の溶液を2時間20分で滴下した。更に、炭酸水素ナトリウム(59.36g) の水(720ml)の溶液を加え、室温で2時間撹拌してN-ブロモスクシンイミド(2.90g, 16mmol)を添加し、更に室温で1時間撹拌して、N-ブロモスクシンイミド(2.90g, 16mmol)を添加し、更に室温で2時間撹拌した。その後、40〜45℃で2時間30分加熱した。反応液を減圧濃縮した後、酢酸エチルで抽出し、有機層を1%塩酸水、2N水酸化ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧留去して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル)を4回行うことで精製し、得られた固体をトルエンに溶解してヘキサンを加えて析出物を濾取し、淡褐色固体の化合物(D)(5.42g, 11.1%)を得た。
¹H-NMR (CDCl₃)δ(ppm):3.44(3H, s), 3.83(1H, d, J=10.5Hz), 4.96(1H, d, J=11.1Hz), 7.09(1H, d, J=2.4Hz), 7.33(1H, d, J=8.9 Hz), 7.54(1H, dd, J=2.4, 8.9Hz), 7.89(1H, dd, J=7.0, 8.6Hz), 7.97(1H, dd, J=2.2, 10.0Hz), 8.13〜8.18(1H)
（５）工程[5]

酢酸(135ml)、エタノール(135ml)及び鉄粉(5.40g, 96.7mmol)の混合物を40℃に保温し、ここに化合物(D)(5.41g, 15.56mmol)のエタノール(140ml)の溶液を、20分で滴下した。50℃で25分保温した後、更に鉄粉(5.40g, 96.7mmol)を添加して40℃で保温した。反応液を濃縮し、水を添加した後に不溶物をセライトを用いて濾別した。濾液を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和炭酸カリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧留去して得られた褐色固体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(アセトン/クロロホルム)を2回行うことで精製し、化合物(E)(3.66g, 74.0%)を得た。
¹H-NMR (CDCl₃)δ(ppm):3.39(3H, s), 3.72(1H, d, J=10.8Hz), 4.04(2H, broad s), 4.79(1H, d, J=10.8Hz), 6.30(1H, dd, J=2.2, 12.4Hz), 6.50(1H, dd, J=2.2, 8.6 Hz), 7.24〜7.27(2H), 7.43〜7.53(2H, m)
（６）工程[6]

2N塩酸(22.8ml)及び化合物(E)(1.38g, 4.34mmol)の混合物を5℃に保温し、ここに亜硝酸ナトリウム(0.345g, 5.00mmol)の水(4.5ml)の溶液を、5℃で滴下した。4〜5℃で保温した後、よう化カリウム(2.88g, 17.35mmol)の水(12ml)の溶液を滴下した。3時間30分攪拌した後、氷冷下に2N水酸化ナトリウム水溶液を添加して反応液をpH12とし、クロロホルムで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧留去して得られた褐色固体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(アセトン/クロロホルム)で精製し、得られた固体をエタノールで洗浄して、淡黄白色結晶の化合物(F)
（２'−Ｆ・４'−ＩＤＺ）(420mg, 22.6%)を得た。
¹H-NMR (CDCl₃)δ(ppm):3.41(3H, s), 3.76(1H, d, J=11.1Hz), 4.88(1H, d, J=10.8Hz), 7.14(1H, d, J=1.9Hz), 7.29(1H, d, J=8.9Hz), 7.39(1H, t, J=7.6Hz), 7.46(1H, dd, J=1.6, 9.5Hz), 7.50(1H, dd, J=2.7, 8.9Hz), 7.62(1H, dd, J=1.6, 8.9Hz)
マススペクトル(ＥＳＩ) ｍ／ｚ：４２９．１（Ｍ＋１） Production Example 1 (Production of 2′-F · 4′-IDZ)
(1) Process [1]

4-Chloro-N-methylaniline (a) (86.65 g, 612 mmol), 2-bromoethylammonium bromide (62.65 g, 306 mmol) and toluene (150 mL) were mixed and heated to reflux for 7 hours. After cooling to room temperature, a solution of sodium hydrogen carbonate (25.09 g) in water (260 ml) was added, and sodium chloride was further added until it became insoluble. Insoluble matter was collected by filtration, washed with water, suspended in water, 1N aqueous sodium hydroxide solution was added thereto, and the mixture was extracted with toluene. The organic layer was washed with saturated brine, dried over sodium sulfate, the solvent was evaporated under reduced pressure, and the resulting brown oil was purified by silica gel column chromatography (toluene / ethanol) to give a pale yellow oily compound (b ) (39.68 g, 70.2%).
¹ H-NMR (CDCl ₃ ) δ (ppm): 1.19 (2H, broad s), 2.91 (2H, t, J = 6.5Hz), 2.94 (3H, s), 3.57 (2H, t, J = 6.5Hz ), 6.63 to 6.69 (2H, m), 7.12 to 7.26 (2H, m)
(2) Process [2]

4-Fluoro-2-nitrobenzoic acid (A) (38.47 g, 208 mmol), thionyl chloride (180 ml) and toluene (397 ml) were mixed and heated to reflux for 3 hours 30 minutes. Toluene was distilled off under reduced pressure, toluene (350 ml) was added and distilled off under reduced pressure three times.Toluene (350 ml) was added to the residue, and compound (b) (39.68 g, 215 mmol) in toluene (300 ml) was added thereto. ) Was added and heated to reflux for 1 hour 30 minutes. After allowing to cool to room temperature, the reaction solution is added to a 10% aqueous sodium hydroxide solution to separate insoluble matters, the insoluble matters are dissolved in chloroform and separated, and the filtrate is separated, and the organic layers are combined. And dried over sodium sulfate. The residue obtained by evaporating the solvent under reduced pressure was purified by silica gel column chromatography (chloroform / ethanol) to obtain a brown solid compound (B) (68.34 g, 93.5%).
¹ H-NMR (CDCl ₃ ) δ (ppm): 2.98 (3H, s), 3.59 (2H, t, J = 5.7Hz), 3.70 (2H, q, J = 5.6Hz), 6.68 to 6.74 (2H, m), 6.87 (1H, broad s), 7.13-7.26 (2H, m), 7.99 (1H, dd, J = 2.2, 11.3Hz), 8.12 (1H, dd, J = 2.2, 8.4Hz), 8.26 ( (1H, t, J = 8.6Hz)
(3) Process [3]

Compound (B) (34.17 g, 97.1 mmol), phosphorus oxide (V) 205 g and phosphorus oxychloride (855 ml) were mixed and heated to reflux for 7 hours. The reaction solution was added to a mixture of 5 kg of ice water and 48% aqueous sodium hydroxide solution (2.8 l) to adjust the pH to 10, extracted with ethyl acetate, the organic layer was washed with saturated brine, dried over magnesium sulfate, and the solvent was reduced in pressure. The brown oil obtained by evaporation was purified by silica gel column chromatography (ethyl acetate / chloroform) to obtain a brown solid compound (C) (18.60 g, 57.4%).
¹ H-NMR (CDCl ₃ ) δ (ppm): 2.84 (3H, s), 3.67 to 3.71 (2H, m), 3.83 to 3.90 (2H, m), 6.79 (1H, d, J = 2.7Hz), 6.90 (1H, d, J = 8.9Hz), 7.32 (1H, dd, J = 2.7, 8.6Hz), 7.73 (1H, dd, J = 7.0, 8.4Hz), 7.94 (1H, dd, J = 1, 9, 7.0Hz), 8.06-8.10 (1H, m)
(4) Process [4]

To a solution of N-bromosuccinimide (58.51 g, 329 mmol) in tetrahydrofuran (1.6 l), a solution of compound (C) (46.89 g, 141 mmol) in tetrahydrofuran (1.8 l) was added dropwise over 2 hours and 20 minutes. Further, a solution of sodium hydrogen carbonate (59.36 g) in water (720 ml) was added, stirred at room temperature for 2 hours, N-bromosuccinimide (2.90 g, 16 mmol) was added, and further stirred at room temperature for 1 hour. -Bromosuccinimide (2.90 g, 16 mmol) was added, and the mixture was further stirred at room temperature for 2 hours. Then, it heated at 40-45 degreeC for 2 hours and 30 minutes. The reaction solution was concentrated under reduced pressure and extracted with ethyl acetate. The organic layer was washed with 1% aqueous hydrochloric acid, 2N aqueous sodium hydroxide solution and saturated brine, dried over magnesium sulfate, and the solvent was distilled off under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography (hexane / ethyl acetate) four times, the obtained solid was dissolved in toluene, hexane was added, and the precipitate was collected by filtration to obtain a light brown solid compound (D ) (5.42 g, 11.1%).
¹ H-NMR (CDCl ₃ ) δ (ppm): 3.44 (3H, s), 3.83 (1H, d, J = 10.5Hz), 4.96 (1H, d, J = 11.1Hz), 7.09 (1H, d, J = 2.4Hz), 7.33 (1H, d, J = 8.9 Hz), 7.54 (1H, dd, J = 2.4, 8.9Hz), 7.89 (1H, dd, J = 7.0, 8.6Hz), 7.97 (1H, dd, J = 2.2, 10.0Hz), 8.13-8.18 (1H)
(5) Process [5]

A mixture of acetic acid (135 ml), ethanol (135 ml) and iron powder (5.40 g, 96.7 mmol) was kept at 40 ° C., where a solution of compound (D) (5.41 g, 15.56 mmol) in ethanol (140 ml) was added. It was dripped in 20 minutes. After incubating at 50 ° C. for 25 minutes, iron powder (5.40 g, 96.7 mmol) was further added, and the mixture was kept at 40 ° C. The reaction mixture was concentrated, water was added, and the insoluble material was filtered off using celite. The filtrate was extracted with ethyl acetate, the organic layer was washed with saturated aqueous potassium carbonate solution, dried over magnesium sulfate, the solvent was evaporated under reduced pressure, and the resulting brown solid was subjected to silica gel column chromatography (acetone / chloroform) twice. Purification was performed to obtain compound (E) (3.66 g, 74.0%).
^{_{1 H-NMR (CDCl 3)}} δ (ppm): 3.39 (3H, s), 3.72 (1H, d, J = 10.8Hz), 4.04 (2H, broad s), 4.79 (1H, d, J = 10.8Hz ), 6.30 (1H, dd, J = 2.2, 12.4Hz), 6.50 (1H, dd, J = 2.2, 8.6 Hz), 7.24-7.27 (2H), 7.43-7.53 (2H, m)
(6) Process [6]

A mixture of 2N hydrochloric acid (22.8 ml) and compound (E) (1.38 g, 4.34 mmol) was kept at 5 ° C., where a solution of sodium nitrite (0.345 g, 5.00 mmol) in water (4.5 ml) was added. It was dripped at ° C. After incubating at 4-5 ° C., a solution of potassium iodide (2.88 g, 17.35 mmol) in water (12 ml) was added dropwise. After stirring for 3 hours and 30 minutes, 2N aqueous sodium hydroxide solution was added under ice-cooling to adjust the pH of the reaction solution to 12, extracted with chloroform, the organic layer was washed with saturated brine, dried over magnesium sulfate, and the solvent was removed. The brown solid obtained by distillation under reduced pressure was purified by silica gel column chromatography (acetone / chloroform), and the obtained solid was washed with ethanol to give pale yellowish white crystals of compound (F)
(2′-F · 4′-IDZ) (420 mg, 22.6%) was obtained.
¹ H-NMR (CDCl ₃ ) δ (ppm): 3.41 (3H, s), 3.76 (1H, d, J = 11.1Hz), 4.88 (1H, d, J = 10.8Hz), 7.14 (1H, d, J = 1.9Hz), 7.29 (1H, d, J = 8.9Hz), 7.39 (1H, t, J = 7.6Hz), 7.46 (1H, dd, J = 1.6, 9.5Hz), 7.50 (1H, dd, J = 2.7, 8.9Hz), 7.62 (1H, dd, J = 1.6, 8.9Hz)
Mass spectrum (ESI) m / z: 429.1 (M + 1)

製造例２（［^１２５Ｉ］２'−Ｆ・４'−ＩＤＺの製造）
製造例１で得られる２'−Ｆ・４'−ＩＤＺ（６μｇ）のＤＭＦ溶液（２０μＬ）１−ナフタレンスルホン酸、硫酸銅およびＮａ^１２５Ｉ（３７ＭＢｑ）を加え、１００℃にて２時間加熱後、放冷する。得られる粗生成物をＴＬＣ（クロロホルム／アセトン＝９／１）にて精製し、［^１２５Ｉ］２'−Ｆ・４'−ＩＤＺ（１１．１ＭＢｑ）を得る。なお、本品はＴＬＣでＲｆ値が製造例１で得られた標品と一致する。 Production Example 2 (Production of [ ¹²⁵ I] 2′-F · 4′-IDZ)
2′-F · 4′-IDZ (6 μg) obtained in Production Example 1 in DMF solution (20 μL) 1-naphthalenesulfonic acid, copper sulfate and Na ¹²⁵ I (37 MBq) were added and heated at 100 ° C. for 2 hours. Allow to cool. The resulting crude product is purified by TLC (chloroform / acetone = 9/1) to obtain [ ¹²⁵ I] 2′-F · 4′-IDZ (11.1 MBq). This product has a TLC Rf value that matches the standard obtained in Production Example 1.

製造例３（２'−ＩＤＺの製造）
Ｎ'−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（２−ヨードベンゾイル）−Ｎ'−メチルエチレンジアミン（１８１ｍｇ）、酸化りん（V）（９２５ｍｇ）およびオキシ塩化りん（４ｍＬ）の混合液を１１５〜１２０℃にて４時間攪拌後、放冷し、反応混合物を氷水中に注ぎ、過剰の試薬を分解した。水層をエーテルで洗浄後、炭酸ソーダでアルカリ性とし、酢酸エチルにて抽出した。有機層を水で洗浄後、溶媒を留去し、７−クロロ−２，３−ジヒドロ−５−（２−ヨードフェニル）−１−メチル−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン（１６４ｍｇ）を得た。
次に、７−クロロ−２，３−ジヒドロ−５−（２−ヨードフェニル）−１−メチル−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン（１５８ｍｇ）のＴＨＦ溶液および重曹水溶液を同時にＮ−ブロモスクシンイミドのＴＨＦ溶液に、室温で滴下し、さらに同温で３０分間攪拌後、水を注ぎ酢酸エチルにて抽出した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、２'−ＩＤＺ（１４０ｍｇ）を得た。
¹H-NMR (CDCl₃)δ(ppm):3.4(3H, s, CH₃), 3.8(1H, d, -CH), 4.7(1H, d, CH), 6.9-7.9(7H, m, ベンゼン環Ｈ)
マススペクトル(７０ｅＶ) ｍ／ｅ：４１０，４１２（Ｍ^＋） Production Example 3 (Production of 2′-IDZ)
A mixture of N ′-(4-chlorophenyl) -N- (2-iodobenzoyl) -N′-methylethylenediamine (181 mg), phosphorus oxide (V) (925 mg) and phosphorus oxychloride (4 mL) was heated to 115 to 120 ° C. The mixture was allowed to cool after stirring for 4 hours, and the reaction mixture was poured into ice water to decompose excess reagent. The aqueous layer was washed with ether, made alkaline with sodium carbonate, and extracted with ethyl acetate. After the organic layer was washed with water, the solvent was distilled off to obtain 7-chloro-2,3-dihydro-5- (2-iodophenyl) -1-methyl-1H-1,4-benzodiazepine (164 mg). .
Next, a THF solution of 7-chloro-2,3-dihydro-5- (2-iodophenyl) -1-methyl-1H-1,4-benzodiazepine (158 mg) and an aqueous sodium bicarbonate solution were simultaneously added to THF of N-bromosuccinimide. To the solution was added dropwise at room temperature, and the mixture was further stirred at the same temperature for 30 minutes. Then, water was poured and the mixture was extracted with ethyl acetate. The crude product was purified by silica gel column chromatography to obtain 2′-IDZ (140 mg).
^{_{1 H-NMR (CDCl 3)}} δ (ppm): 3.4 (3H, s, CH 3), 3.8 (1H, d, -CH), 4.7 (1H, d, CH), 6.9-7.9 (7H, m, Benzene ring H)
Mass spectrum (70 eV) m / e: 410, 412 (M ⁺ )

製造例４（４'−ＩＤＺの製造）
７−クロロ−２，３−ジヒドロ−５−（４−ヨードフェニル）−１−メチル−１Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン（１８０ｍｇ）を用い、製造例３と同様にして４'−ＩＤＺ（１６０ｍｇ）を得た。
マススペクトル(７０ｅＶ) ｍ／ｅ：４１０，４１２（Ｍ^＋） Production Example 4 (Production of 4′-IDZ)
Using 7-chloro-2,3-dihydro-5- (4-iodophenyl) -1-methyl-1H-1,4-benzodiazepine (180 mg), 4′-IDZ (160 mg) was prepared in the same manner as in Production Example 3. Got.
Mass spectrum (70 eV) m / e: 410, 412 (M ⁺ )

実施例１：受容体結合試験
１）受容体膜標品の調製
ラット大脳皮質由来受容体膜標品の調製は、Ｂｒａｅｓｔｒｕｐ，Ｃ．らの方法（Ｂｒ．Ｊ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，１３３，２４９−２６０（１９７８））に若干の変更を加え行った。マウスＣ６細胞由来受容体膜標品の調製は、Ｋｉｔａ，Ａ．らの方法（Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１４２，１０５９−７２（２００４））に若干の変更を加え行った。
ラット大脳皮質由来受容体膜標品は、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系雄性ラット（２００−２５０ｇ）の大脳皮質から以下の操作により調製した。ラット大脳皮質に組織湿重量の２０倍容量の氷冷した０．３２Ｍスクロース液を加えホモジナイズした後、１，０００×ｇで１０分間遠心した。上清は２０，０００×ｇで２０分間遠心し、得られた沈渣は結合試験用緩衝液（５０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）、１１８ｍＭＮａＣｌ、４．８ｍＭＫＣｌ、１．２ｍＭＣａＣｌ_２、１．２ｍＭＭｇＣｌ_２）を加えホモジナイズした後、２０，０００×ｇで１０分間遠心した。得られた沈渣を結合試験用緩衝液に懸濁し、タンパク質濃度を１ｍｇ／ｍＬに調整したものを受容体膜標品として結合試験に用いた。なお、受容体膜標品は使用時まで−８０℃で保存しておき、試験実施日に溶解・懸濁して用いた。
マウスＣ６細胞由来受容体膜標品は以下の操作により調製した。マウス神経膠腫由来細胞株Ｃ６をＡＴＣＣより購入した。４ｍＭＬ−グルタミン酸、１．５ｇ／Ｌ重炭酸ナトリウム、４．５ｇ／Ｌグルコース、１０％ＢＳＡを含むＤＭＥＭ培地（インビトロジェン社）で細胞を増殖させた。ＰＢＳ（−）で１回洗浄後、スクレーパーを用いて細胞を剥がし、１５０×ｇで５分間、４℃で遠心し細胞を回収した。細胞に２０倍容量の氷冷した０．３２Ｍスクロース液を加え、氷浴中でガラス−テフロンホモジェナイザーを用いてホモジェナイズした。ハンディソニケーターＵＲ−２０Ｐ（トミー精工社製）を用いて出力８で１０秒間細胞を破砕した後、１，０００×ｇで１０分間遠心した。上清は２０，０００×ｇで２０分間遠心し、得られた沈渣は結合試験用緩衝液（５０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）、１１８ｍＭＮａＣｌ、４．８ｍＭＫＣｌ、１．２ｍＭＣａＣｌ_２、１．２ｍＭＭｇＣｌ_２）を加えホモジナイズした後、２０，０００×ｇで１０分間遠心した。得られた沈渣を結合試験用緩衝液に懸濁し、タンパク質濃度を０．１ｍｇ／ｍＬに調整したものを受容体膜標品として結合試験に用いた。なお、受容体膜標品は使用時まで−８０℃で保存しておき、試験実施日に溶解・懸濁して用いた。 Example 1: Receptor Binding Test 1) Preparation of Receptor Membrane Sample A rat cerebral cortex-derived receptor membrane sample was prepared according to Braestrup, C .; The method (Br. J. Psychiatry, 133, 249-260 (1978)) was slightly modified. Preparation of a mouse C6 cell-derived receptor membrane preparation is described in Kita, A. et al. The method (Br. J. Pharmacol., 142, 1059-72 (2004)) was slightly modified.
A rat cerebral cortex-derived receptor membrane preparation was prepared from the cerebral cortex of Sprague-Dawley male rats (200-250 g) by the following procedure. The rat cerebral cortex was homogenized by adding an ice-cooled 0.32 M sucrose solution having a volume 20 times the tissue wet weight, and then centrifuged at 1,000 × g for 10 minutes. The supernatant was centrifuged at 20,000 × g for 20 minutes, and the resulting precipitate was a binding test buffer (50 mM Tris-HCl buffer (pH 7.4), 118 mM NaCl, 4.8 mM KCl, 1.2 mM CaCl _2. , 1.2 mM MgCl ₂ ) and homogenized, and then centrifuged at 20,000 × g for 10 minutes. The obtained sediment was suspended in a binding test buffer and the protein concentration adjusted to 1 mg / mL was used as a receptor membrane preparation for the binding test. The receptor membrane preparation was stored at −80 ° C. until use, and dissolved and suspended on the day of the test.
A mouse C6 cell-derived receptor membrane preparation was prepared by the following procedure. Mouse glioma-derived cell line C6 was purchased from ATCC. Cells were grown in DMEM medium (Invitrogen) containing 4 mM L-glutamic acid, 1.5 g / L sodium bicarbonate, 4.5 g / L glucose, 10% BSA. After washing once with PBS (−), the cells were detached using a scraper, and centrifuged at 150 × g for 5 minutes at 4 ° C. to collect the cells. A 20-fold volume of ice-cooled 0.32 M sucrose solution was added to the cells, and homogenized with a glass-Teflon homogenizer in an ice bath. The cells were crushed for 10 seconds at an output of 8 using a handy sonicator UR-20P (manufactured by Tommy Seiko Co., Ltd.), and then centrifuged at 1,000 × g for 10 minutes. The supernatant was centrifuged at 20,000 × g for 20 minutes, and the resulting precipitate was a binding test buffer (50 mM Tris-HCl buffer (pH 7.4), 118 mM NaCl, 4.8 mM KCl, 1.2 mM CaCl _2. after homogenization adding 1.2 mM MgCl _2), and centrifuged 10 min at 20,000 × g. The obtained sediment was suspended in a binding test buffer and the protein concentration adjusted to 0.1 mg / mL was used for the binding test as a receptor membrane preparation. The receptor membrane preparation was stored at −80 ° C. until use, and dissolved and suspended on the day of the test.

２）中枢性および末梢性ベンゾジアゼピン受容体結合試験
ラット大脳皮質由来受容体膜標品を用いた中枢性ベンゾジアゼピン受容体（ＣＢＲ）結合試験は、Ｂｒａｅｓｔｒｕｐ，Ｃ．らの方法（上掲、Ｂｒ．Ｊ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，１３３，２４９−２６０（１９７８））に若干の変更を加え行った。ラット大脳皮質由来もしくはマウスＣ６細胞由来受容体膜標品を用いた末梢性ベンゾジアゼピン受容体（ＰＢＲ）結合試験は、Ｓｃｈｏｅｍａｋｅｒ，Ｈの方法（Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，２２５，６１−６９（１９８３））に若干の変更を加え行った。 2) Central and peripheral benzodiazepine receptor binding test Central benzodiazepine receptor (CBR) binding test using a rat cerebral cortex-derived receptor membrane preparation was conducted according to Braestrup, C. et al. These methods (supra, Br. J. Psychiatry, 133, 249-260 (1978)) were slightly modified. Peripheral benzodiazepine receptor (PBR) binding test using a rat cerebral cortex-derived or mouse C6 cell-derived receptor membrane preparation was carried out by the method of Schomaker, H (J. Pharmacol. Exp. Ther., 225, 61-69 ( 1983)) with minor changes.

標識リガンドとしては、ＣＢＲ結合試験には［^３Ｈ］Ｒｏ１５−１７８８（ＣＢＲ特異的リガンド、化学名：エチル−８−フルオロ−５，６−ジヒドロ−５−メチル−６−オキソ−４Ｈ−イミダゾ−［１，５−ａ］［１，４］ベンゾジアゼピン−３−カルボキシラート、パーキンエルマー社から入手した。）（最終濃度１ｎＭ）を、ＰＢＲ結合試験には［^３Ｈ］ＰＫ１１１９５（ＰＢＲ特異的リガンド、化学名：（２−クロロフェニル）−Ｎ−メチル−（１−メチルプロピル）−３−イソキノリンカルボキサミド、パーキンエルマー社から入手した。）（最終濃度１ｎＭ）をそれぞれ用いた。試験化合物としては、非標識ＰＫ１１１９５（シグマ社から入手した。）、２'−Ｆ・４'−ＩＤＺ、４'−ＣｌＤＺ（Ｒｏ５−４８６４；シグマ社から入手した。）、２'−ＩＤＺ、４'−ＩＤＺ、Ｒｏ１５−１７８８（シグマ社から入手した。）をそれぞれ最終濃度１０ｐＭ〜３μＭで用いた。
ラット大脳皮質由来受容体膜標品を用いた受容体結合試験は以下の操作手順で行った。プラスチック製チューブに濃度既知の試験化合物、トリチウム標識リガンド、受容体膜標品（最終濃度０．５ｍｇ／ｍＬ）および結合試験用緩衝液を加えて総量１ｍＬの反応液とし、受容体膜標品の添加により反応を開始した。４℃で９０分間インキュベーションを行った後、氷冷した結合試験用緩衝液５ｍＬを添加して反応を停止した。受容体に結合した標識リガンドをマルチフィルター（アドバンテック東洋）を用い、ガラスフィルター
（ＧＦ／Ｂ、ワットマン社製、米国）上に吸引濾過した。直ちに、氷冷した結合試験用５ｍＬで２回洗浄した。放射活性はガラスフィルターに液体シンチレーションカクテル（シンチレータープラス、パーキンエルマー社製、米国）１０ｍＬを加えた後、液体シンチレーションカウンターで測定した。試験化合物を添加しないときの放射活性を１００％として、試験化合物の各濃度における放射活性を相対値に変換した。結合の濃度依存性をグラフパッドプリズム（グラフパッド社製、米国）を用いてグラフ化し、試験化合物が標識リガンドの特異的結合量を５０％抑制する濃度（ＩＣ_５０値）を求めた。阻害定数Ｋｉは、
Ｋｉ＝ＩＣ_５０／（１＋Ｓ／Ｋｄ）の関係式から計算した。但し、Ｓは標識化合物の濃度
（１ｎＭ）、Ｋｄは標識化合物のラット受容体に対する親和性（［^３Ｈ］ＰＫ１１１９５ではＫｄ＝１．０７ｎＭ（ＥｕｒＪ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１３３，２０５−２１４（１９８７））、［^３Ｈ］Ｒｏ１５−１７８８ではＫｄ＝２ｎＭ（Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２２，２６−３２（１９８２））を示す。
マウスＣ６細胞由来受容体膜標品を用いた受容体結合試験は以下の操作手順で行った。プラスチック製チューブに濃度既知の試験化合物、トリチウム標識リガンド、受容体膜標品（最終濃度０．０５ｍｇ／ｍＬ）および結合試験用緩衝液を加えて総量４００μＬの反応液とし、受容体膜標品の添加により反応を開始した。４℃で９０分間インキュベーションを行った後、氷冷した結合試験用緩衝液３ｍＬを添加して反応を停止した。受容体に結合した標識リガンドをマルチフィルター（アドバンテック東洋）を用い、ガラスフィルター（ＧＦ／Ｂ、ワットマン社製、米国）上に吸引濾過した。直ちに、氷冷した結合試験用３ｍＬで２回洗浄した。放射活性はガラスフィルターに液体シンチレーションカクテル（シンチレータープラス、パーキンエルマー社製、米国）１０ｍＬを加えた後、液体シンチレーションカウンターで測定した。試験化合物を添加しないときの放射活性を１００％として、試験化合物の各濃度における放射活性を相対値に変換した。結合の濃度依存性をグラフパッドプリズム（グラフパッド社製、米国）を用いてグラフ化し、試験化合物が標識リガンドの特異的結合量を５０％抑制する濃度（ＩＣ_５０値）を求めた。阻害定数Ｋｉは、Ｋｉ＝ＩＣ_５０／（１＋Ｓ／Ｋｄ）の関係式から計算した。但し、Ｓは標識化合物
（［^３Ｈ］ＰＫ１１１９５の濃度：１ｎＭ）、Ｋｄは標識化合物（［^３Ｈ］ＰＫ１１１９５）のマウス受容体に対する親和性（Ｋｄ＝４ｎＭ（ＰＮＡＳ，８９，５１１３−５１１７（１９９２））を示す。
以上の実験を複数回繰り返し、平均値を求めた。マウスＣ６細胞由来受容体膜標品を用いたＰＢＲ結合試験の結果を表１に、ラット大脳皮質由来受容体膜標品を用いたＰＢＲ結合試験の結果を表２に、ラット大脳皮質由来受容体膜標品を用いたＣＢＲ結合試験の結果を表３に示す。 As a labeled ligand, [ ³ H] Ro15-1788 (CBR specific ligand, chemical name: ethyl-8-fluoro-5,6-dihydro-5-methyl-6-oxo-4H-imidazo- [1,5-a] [1,4] benzodiazepine-3-carboxylate, obtained from PerkinElmer, Inc.) (final concentration 1 nM); [ ³ H] PK11195 (PBR specific ligand, Chemical name: (2-chlorophenyl) -N-methyl- (1-methylpropyl) -3-isoquinolinecarboxamide, obtained from Perkin Elmer, Inc.) (final concentration 1 nM) was used. As a test compound, unlabeled PK11195 (obtained from Sigma), 2′-F · 4′-IDZ, 4′-ClDZ (Ro5-4864; obtained from Sigma), 2′-IDZ, 4 '-IDZ, Ro15-1788 (obtained from Sigma) were used at final concentrations of 10 pM to 3 μM, respectively.
The receptor binding test using the rat cerebral cortex-derived receptor membrane preparation was performed according to the following procedure. Add a test compound of known concentration, tritium-labeled ligand, receptor membrane preparation (final concentration 0.5 mg / mL) and binding test buffer to a plastic tube to make a total reaction volume of 1 mL. The reaction was started by addition. After incubation at 4 ° C. for 90 minutes, the reaction was stopped by adding 5 mL of ice-cold binding test buffer. The labeled ligand bound to the receptor was suction filtered on a glass filter (GF / B, Whatman, USA) using a multifilter (Advantech Toyo). Immediately, the plate was washed twice with 5 mL of an ice-cooled binding test. Radioactivity was measured with a liquid scintillation counter after adding 10 mL of a liquid scintillation cocktail (Scintillator Plus, manufactured by PerkinElmer, USA) to a glass filter. The radioactivity when no test compound was added was defined as 100%, and the radioactivity at each concentration of the test compound was converted to a relative value. The concentration dependency of the binding was graphed using a graph pad prism (Graph Pad, USA), and the concentration (IC ₅₀ value) at which the test compound suppresses the specific binding amount of the labeled ligand by 50% was determined. The inhibition constant Ki is
Ki ₌ calculated from the relationship equation IC 50 / (1 + S / Kd). Where S is the concentration of the labeled compound (1 nM), Kd is the affinity of the labeled compound for the rat receptor ([ ³ H] PK11195, Kd = 1.07 nM (Eur J. Pharmacol., 133, 205-214 (1987) ), [ ³ H] Ro15-1788 indicates Kd = 2 nM (Mol. Pharmacol., 22, 26-32 (1982)).
The receptor binding test using the mouse C6 cell-derived receptor membrane preparation was performed according to the following procedure. Add a test compound with known concentration, tritium-labeled ligand, receptor membrane preparation (final concentration 0.05 mg / mL) and binding test buffer to a plastic tube to give a total reaction volume of 400 μL. The reaction was started by addition. After incubation at 4 ° C. for 90 minutes, the reaction was stopped by adding 3 mL of ice-cold binding test buffer. The labeled ligand bound to the receptor was suction filtered on a glass filter (GF / B, Whatman, USA) using a multifilter (Advantech Toyo). Immediately, it was washed twice with 3 mL of ice-cold binding test. Radioactivity was measured with a liquid scintillation counter after adding 10 mL of a liquid scintillation cocktail (Scintillator Plus, manufactured by PerkinElmer, USA) to a glass filter. The radioactivity when no test compound was added was defined as 100%, and the radioactivity at each concentration of the test compound was converted to a relative value. The concentration dependency of the binding was graphed using a graph pad prism (Graph Pad, USA), and the concentration (IC ₅₀ value) at which the test compound suppresses the specific binding amount of the labeled ligand by 50% was determined. The inhibition constant Ki was calculated from the relational expression of Ki = IC ₅₀ / (1 + S / Kd). However, S is a labeled compound (concentration of [ ³ H] PK11195: 1 nM), Kd is the affinity of the labeled compound ([ ³ H] PK11195) for the mouse receptor (Kd = 4 nM (PNAS, 89, 5113-5117 (1992) )).
The above experiment was repeated several times, and the average value was obtained. Table 1 shows the results of the PBR binding test using the mouse C6 cell-derived receptor membrane preparation, Table 2 shows the results of the PBR binding test using the rat cerebral cortex-derived receptor membrane preparation, and the rat cerebral cortex-derived receptor. Table 3 shows the results of the CBR binding test using the membrane preparation.

［表１］マウスＣ６細胞におけるＰＢＲに対する親和性の評価

（３回の実験の平均値） [Table 1] Evaluation of affinity for PBR in mouse C6 cells

(Average of 3 experiments)

［表２］ラット大脳皮質におけるＰＢＲに対する親和性の評価

（５回の実験の平均値） [Table 2] Evaluation of affinity for PBR in rat cerebral cortex

(Average of 5 experiments)

［表３］ラット大脳皮質におけるＣＢＲに対する親和性の評価

*）５回の実験の平均値
**）公知文献からの引用値（J.Med.Chem.31,2081-2086(1988)）
***）公知文献からの引用(算出)値（J.Nuc.Med.34,932-937(1993) および
Life Sci.36,113-119(1985)）
表１および表２に示したように、２'−Ｆ・４'−ＩＤＺはＰＢＲに強力に結合する。これに対し、類縁化合物４'−ＣｌＤＺ（Ｒｏ５−４８６４）、４'−ＩＤＺ、２'−ＩＤＺのＰＢＲに対する親和性は２'−Ｆ・４'−ＩＤＺよりも弱い。また、表３に示したように、２'−Ｆ・４'−ＩＤＺはＣＢＲにはほとんど結合しない。以上の結果から、本化合物がＰＢＲに特異的かつ強力に結合することは明らかである。 [Table 3] Evaluation of affinity for CBR in rat cerebral cortex

*) Average value of 5 experiments
**) Quoted value from known literature (J. Med. Chem. 31, 2081-2086 (1988))
***) Quoted (calculated) values from known literature (J.Nuc.Med.34,932-937 (1993) and
Life Sci. 36,113-119 (1985))
As shown in Tables 1 and 2, 2′-F · 4′-IDZ binds strongly to PBR. On the other hand, the affinity of the related compound 4′-ClDZ (Ro5-4864), 4′-IDZ, 2′-IDZ to PBR is weaker than 2′-F · 4′-IDZ. Further, as shown in Table 3, 2′-F · 4′-IDZ hardly binds to CBR. From the above results, it is clear that this compound binds specifically and strongly to PBR.

実施例２：体内分布試験
［^１２５Ｉ］２'−Ｆ・４'−ＩＤＺ（３７ＴＢｑ／ｍｍｏｌ）はエチルアルコールで溶解後、ＰＢＳにて希釈して、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系雄性ラット（２５０−３００ｇ、８週齢、ｎ＝５）の尾静脈より０．７４ＭＢｑ／ｋｇとなるように注入した。投与より５分、１５分、３０分、２時間、６時間、２４時間後に断頭し、採血および脳を採取した。血液は採血後４℃、３，０００ｒｐｍで１０分間遠心し、上清を血漿として回収した。脳（小脳を含む）および血漿の湿重量を測定後、放射能をガンマカウンター（パーキンエルマー社製、米国）を用いて測定した。血漿と脳それぞれについて、投与量に対する血清もしくは脳内の［^１２５Ｉ］２'−Ｆ・４'−ＩＤＺ含有量（％ＩＤ（ｉｎｊｅｃｔｅｄｄｏｓｅ）／ｇ）を求めた。
［^１２５Ｉ］２'−Ｆ・４'−ＩＤＺの投与５分後の脳内含有量は、０．３６７％ＩＤ／ｇであり、血漿含有量は、０．０８６％ＩＤ／ｇであった。脳内と血漿における分布の比は、４．３倍であり、［^１２５Ｉ］２'−Ｆ・４'−ＩＤＺは、高い脳移行性を有することが認められた。 Example 2: Biodistribution test [ ¹²⁵ I] 2′-F · 4′-IDZ (37 TBq / mmol) was dissolved in ethyl alcohol, diluted with PBS, and Sprague-Dawley male rats (250-300 g, The injection was carried out from the tail vein of 8 weeks old, n = 5) to 0.74 MBq / kg. At 5 minutes, 15 minutes, 30 minutes, 2 hours, 6 hours, and 24 hours after administration, the mice were decapitated and blood samples and brains were collected. The blood was centrifuged at 4 ° C. and 3,000 rpm for 10 minutes, and the supernatant was collected as plasma. After measuring the wet weight of the brain (including cerebellum) and plasma, the radioactivity was measured using a gamma counter (Perkin Elmer, USA). For each plasma and brain, the serum or brain [ ¹²⁵ I] 2′-F · 4′-IDZ content (% ID (injected dose) / g) relative to the dose was determined.
The content in the brain 5 minutes after administration of [ ¹²⁵ I] 2′-F · 4′-IDZ was 0.367% ID / g, and the plasma content was 0.086% ID / g. . The ratio of distribution in the brain and plasma was 4.3 times, and [ ¹²⁵ I] 2′-F · 4′-IDZ was found to have high brain migration.

以上で説明したように、本発明によれば、生体内でのＰＢＲの非侵襲的測定の精度が向上し、末梢性ベンゾジアゼピン受容体の発現が変動する疾患、特に中枢系で発現している末梢性ベンゾジアゼピン受容体の発現が変動する疾患を早期診断することが可能となる。 As described above, according to the present invention, the accuracy of noninvasive measurement of PBR in vivo is improved, and diseases in which the expression of peripheral benzodiazepine receptors fluctuates, in particular, the peripheral expressed in the central system. This makes it possible to diagnose a disease in which the expression of the sex benzodiazepine receptor varies.

Claims

Formula (I)

(In the formula, X1 is a fluorine atom and X2 is an iodine atom. One of X1 and X2 is a radioisotope.)
A composition for detecting or measuring a peripheral benzodiazepine receptor, comprising a radioactive benzodiazepine derivative represented by:

The composition according to claim 1, wherein the peripheral benzodiazepine receptor is a peripheral benzodiazepine receptor expressed in a central nervous system tissue.

The composition according to claim 1 or 2, which is used for diagnostic imaging of a disease in which expression of a peripheral benzodiazepine receptor varies.

The composition according to claim 3, wherein the disease in which expression of a peripheral benzodiazepine receptor is varied is a disease in which expression of a peripheral benzodiazepine receptor is increased.

X1 is F-18, The composition of any one of Claims 1-4.

The composition according to any one of claims 1 to 4, wherein X2 is I-121, I-123, I-124, I-125 or I-131.

X2 is I-123, The composition of any one of Claims 1-4.

A diagnostic imaging kit for diagnosing a disease in which expression of a peripheral benzodiazepine receptor varies, comprising the composition according to any one of claims 1 to 7.

Use of the radioactive benzodiazepine derivative represented by formula (I) of claim 1 as a peripheral benzodiazepine receptor-specific ligand.

Use of the radioactive benzodiazepine derivative represented by the formula (I) of claim 1 for detection or measurement of a peripheral benzodiazepine receptor.

The use according to claim 10, wherein the peripheral benzodiazepine receptor is a peripheral benzodiazepine receptor expressed in a central nervous system tissue.

Use of the radioactive benzodiazepine derivative represented by the formula (I) of claim 1 as a composition for diagnostic imaging of a disease in which expression of a peripheral benzodiazepine receptor varies.

The use according to claim 12, wherein the disease in which expression of a peripheral benzodiazepine receptor is varied is a disease in which expression of a peripheral benzodiazepine receptor is increased.