JP2010207097A - 難聴モデル動物及びその用途 - Google Patents
難聴モデル動物及びその用途 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2010207097A JP2010207097A JP2009053481A JP2009053481A JP2010207097A JP 2010207097 A JP2010207097 A JP 2010207097A JP 2009053481 A JP2009053481 A JP 2009053481A JP 2009053481 A JP2009053481 A JP 2009053481A JP 2010207097 A JP2010207097 A JP 2010207097A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- ret
- rodent
- gene
- mice
- modified animal
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 208000016354 hearing loss disease Diseases 0.000 title claims abstract description 95
- 206010011878 Deafness Diseases 0.000 title claims abstract description 94
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title claims abstract description 86
- 230000010370 hearing loss Effects 0.000 title claims abstract description 64
- 231100000888 hearing loss Toxicity 0.000 title claims abstract description 64
- 101150077555 Ret gene Proteins 0.000 claims abstract description 147
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 68
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 claims abstract description 59
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 44
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims abstract description 39
- 231100000895 deafness Toxicity 0.000 claims abstract description 30
- 206010011882 Deafness congenital Diseases 0.000 claims abstract description 26
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 claims abstract description 16
- 210000001323 spiral ganglion Anatomy 0.000 claims description 55
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 55
- 101000579425 Homo sapiens Proto-oncogene tyrosine-protein kinase receptor Ret Proteins 0.000 claims description 40
- 102100028286 Proto-oncogene tyrosine-protein kinase receptor Ret Human genes 0.000 claims description 39
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 36
- 210000003027 ear inner Anatomy 0.000 claims description 32
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 31
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 28
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 27
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims description 20
- 210000000133 brain stem Anatomy 0.000 claims description 18
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims description 18
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 claims description 15
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 13
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 12
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N phenylalanine group Chemical group N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 11
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 10
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 9
- 101100248017 Mus musculus Ret gene Proteins 0.000 claims description 8
- 102000004874 Synaptophysin Human genes 0.000 claims description 7
- 108090001076 Synaptophysin Proteins 0.000 claims description 7
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 6
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 claims description 5
- 210000003757 neuroblast Anatomy 0.000 claims description 4
- 206010011903 Deafness traumatic Diseases 0.000 claims description 3
- 208000002946 Noise-Induced Hearing Loss Diseases 0.000 claims description 3
- 102000014823 calbindin Human genes 0.000 claims description 3
- 108060001061 calbindin Proteins 0.000 claims description 3
- 208000009205 Tinnitus Diseases 0.000 abstract description 4
- 230000032683 aging Effects 0.000 abstract description 4
- 231100000886 tinnitus Toxicity 0.000 abstract description 4
- 230000003902 lesion Effects 0.000 abstract 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 94
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 43
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 29
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 27
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 22
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 22
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 22
- 235000002374 tyrosine Nutrition 0.000 description 18
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 17
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 14
- 206010010539 Congenital megacolon Diseases 0.000 description 11
- 208000004592 Hirschsprung disease Diseases 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 11
- 238000011161 development Methods 0.000 description 10
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 10
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 10
- 102000005395 NF-kappa B p50 Subunit Human genes 0.000 description 9
- 108010006401 NF-kappa B p50 Subunit Proteins 0.000 description 9
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 9
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 8
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 8
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 8
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 7
- 230000006870 function Effects 0.000 description 7
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 6
- 108010001648 Proto-Oncogene Proteins c-ret Proteins 0.000 description 6
- 102000000813 Proto-Oncogene Proteins c-ret Human genes 0.000 description 6
- 238000010363 gene targeting Methods 0.000 description 6
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 6
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 238000012552 review Methods 0.000 description 6
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 210000000609 ganglia Anatomy 0.000 description 5
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 description 5
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 5
- 102000016838 Calbindin 1 Human genes 0.000 description 4
- 108010028310 Calbindin 1 Proteins 0.000 description 4
- 102100023050 Nuclear factor NF-kappa-B p105 subunit Human genes 0.000 description 4
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 4
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 206010051747 multiple endocrine neoplasia Diseases 0.000 description 4
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 4
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 3
- 210000000105 enteric nervous system Anatomy 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 230000008230 hearing development Effects 0.000 description 3
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 210000000633 nuclear envelope Anatomy 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 3
- 238000011746 C57BL/6J (JAX™ mouse strain) Methods 0.000 description 2
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 2
- 108010034791 Heterochromatin Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 2
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 2
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 2
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 2
- 206010071987 RET gene mutation Diseases 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 2
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 2
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 2
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 230000008045 co-localization Effects 0.000 description 2
- 210000000860 cochlear nerve Anatomy 0.000 description 2
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000003028 elevating effect Effects 0.000 description 2
- 230000020981 enteric nervous system development Effects 0.000 description 2
- 210000005216 enteric neuron Anatomy 0.000 description 2
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 2
- 210000004458 heterochromatin Anatomy 0.000 description 2
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 230000029795 kidney development Effects 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 2
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 description 2
- 230000005937 nuclear translocation Effects 0.000 description 2
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 201000005966 renal hypoplasia Diseases 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 210000004116 schwann cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 description 2
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 208000036170 B-Cell Marginal Zone Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 238000000116 DAPI staining Methods 0.000 description 1
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 1
- 208000003098 Ganglion Cysts Diseases 0.000 description 1
- 102000034615 Glial cell line-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 1
- 108091010837 Glial cell line-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000000435 Heart Rupture Diseases 0.000 description 1
- 101100022251 Homo sapiens MALT1 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 101150113681 MALT1 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000000585 Mann–Whitney U test Methods 0.000 description 1
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- 206010073148 Multiple endocrine neoplasia type 2A Diseases 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010056677 Nerve degeneration Diseases 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 101150054854 POU1F1 gene Proteins 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 108091008551 RET receptors Proteins 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005400 Synovial Cyst Diseases 0.000 description 1
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012076 audiometry Methods 0.000 description 1
- 230000035578 autophosphorylation Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000001765 catechin Chemical class 0.000 description 1
- 235000005487 catechin Nutrition 0.000 description 1
- ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N catechin Natural products OC1Cc2cc(O)cc(O)c2OC1c3ccc(O)c(O)c3 ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006727 cell loss Effects 0.000 description 1
- 230000030570 cellular localization Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 229930183167 cerebroside Natural products 0.000 description 1
- 150000001784 cerebrosides Chemical class 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000003292 diminished effect Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 210000004382 enteric neural crest cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000008717 functional decline Effects 0.000 description 1
- 150000002327 glycerophospholipids Chemical class 0.000 description 1
- -1 glycosylglycerides Chemical class 0.000 description 1
- 210000002768 hair cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 238000012074 hearing test Methods 0.000 description 1
- 230000003284 homeostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 102000050427 human RET Human genes 0.000 description 1
- 230000002989 hypothyroidism Effects 0.000 description 1
- 208000003532 hypothyroidism Diseases 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 108091005485 macrophage scavenger receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 208000004840 megacolon Diseases 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000002161 motor neuron Anatomy 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000006576 neuronal survival Effects 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 1
- 230000034190 positive regulation of NF-kappaB transcription factor activity Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 1
- 230000009822 protein phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 108091008598 receptor tyrosine kinases Proteins 0.000 description 1
- 102000027426 receptor tyrosine kinases Human genes 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 206010038433 renal dysplasia Diseases 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 102000014452 scavenger receptors Human genes 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 210000001875 somatotroph Anatomy 0.000 description 1
- 230000005236 sound signal Effects 0.000 description 1
- 150000003408 sphingolipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000002205 spiral ligament of cochlea Anatomy 0.000 description 1
- 102000009076 src-Family Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108010087686 src-Family Kinases Proteins 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000033772 system development Effects 0.000 description 1
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 235000007586 terpenes Nutrition 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000024664 tolerance induction Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 230000005748 tumor development Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 150000003668 tyrosines Chemical class 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
【解決手段】片方のアレルのRet遺伝子が障害されていることによって加齢性難聴の表現型を示す齧歯類遺伝子改変動物が提供される。また、当該齧歯類遺伝子改変動物を用いて加齢性難聴又は騒音性難聴の予防又は治療に有効な物質をスクリーニングする方法が提供される。一方、両方のアレルのRet遺伝子が障害されていることによって先天性難聴の表現型を示す齧歯類遺伝子改変動物が提供される。また、当該齧歯類遺伝子改変動物を用いて先天性難聴の治療に有効な物質をスクリーニングする方法が提供される。
【選択図】なし
Description
本発明は主として以上の知見に基づく。以下、本発明を列挙する。
[1]Retタンパク質の活性化に必須のアミノ酸の置換を伴う点遺伝子変異によって片方のアレルのRet遺伝子が機能障害されており、加齢性難聴の表現型を示す、齧歯類遺伝子改変動物。
[2]前記齧歯類がマウスであり、
前記アミノ酸が、Retタンパク質の1063番チロシン残基である、[1]に記載の齧歯類遺伝子改変動物。
[3]前記点遺伝子変異が、前記1063番チロシン残基がフェニルアラニンに置換される点遺伝子変異である、[2]に記載の齧歯類遺伝子改変動物。
[4]前記齧歯類がマウス以外の齧歯類であり、
前記アミノ酸が、該齧歯類のRetタンパク質においてマウスRetタンパク質の1063番チロシン残基に相当するチロシン残基である、[1]に記載の齧歯類遺伝子改変動物。
[5]以下のステップ(1)及び(2)を含む、加齢性難聴又は騒音性難聴の予防又は治療に有効な物質のスクリーニング法:
(1)[1]〜[4]のいずれか一項に記載の齧歯類遺伝子改変動物に被験物質を取り込ませるステップ;
(2)聴力の低下が抑制されたか否か評価し、評価結果に基づき被験物質の有効性を判定するステップ。
[6]ステップ(1)後の前記齧歯類遺伝子改変動物を用い、以下の指標、即ち、(a)内耳らせん神経節の細胞数、(b)内耳らせん神経節でのRet遺伝子の発現レベル及び(c)内耳らせん神経節でのRetタンパク質の活性化レベル、からなる群より選択される一以上の指標について検出し、検出結果に基づいてステップ(2)の評価を行う、[5]に記載のスクリーニング法。
[7]聴性脳幹反応によってステップ(2)の評価を行う、[5]に記載のスクリーニング法。
[8]Retタンパク質の活性化に必須のアミノ酸の置換を伴う点遺伝子変異によって片方のアレルのRet遺伝子が機能障害されており、先天性難聴の表現型を示す、齧歯類遺伝子改変動物。
[9]前記齧歯類がマウスであり、
前記アミノ酸が、Retタンパク質の1063番チロシン残基である、[8]に記載の齧歯類遺伝子改変動物。
[10]前記点遺伝子変異が、前記1063番チロシン残基がフェニルアラニンに置換される点遺伝子変異である、[9]に記載の齧歯類遺伝子改変動物。
[11]前記齧歯類がマウス以外の齧歯類であり、
前記アミノ酸が、該齧歯類のRetタンパク質においてマウスRetタンパク質の1063番チロシン残基に相当するチロシン残基である、[8]に記載の齧歯類遺伝子改変動物。
[12]以下のステップ(1)及び(2)を含んでなる、先天性難聴の治療に有効な物質のスクリーニング法:
(1)[8]〜[11]のいずれか一項に記載の齧歯類遺伝子改変動物に被験物質を取り込ませるステップ;
(2)聴力が回復したか否か評価し、評価結果に基づき被験物質の有効性を判定するステップ。
[13]ステップ(1)後の前記齧歯類遺伝子改変動物を用い、(a)内耳らせん神経節の細胞数、(b)カルビンディン及び(c)シナプトフィジンからなる群より選択される一以上の指標について検出し、検出結果に基づいてステップ(2)の評価を行う、[12]に記載のスクリーニング法。
[14]聴性脳幹反応によってステップ(2)の評価を行う、[12]に記載のスクリーニング法。
[15]以下の(1)及び(2)を含むことを特徴とする、難聴の予防又は治療に有効な物質のスクリーニング法:
(1)RET遺伝子が発現している細胞であって、神経細胞及び神経芽細胞からなる群より選択される細胞を被験物質の存在下で培養するステップ;
(2)前記細胞における、RET遺伝子の発現レベル又はRETタンパク質の活性化レベルを検出し、検出結果に基づき被験物質の有効性を判定するステップ。
本発明の第1の局面は、加齢性難聴の表現型を示す齧歯類遺伝子改変動物及びその用途に関する。本発明の齧歯類遺伝子改変動物は加齢性難聴のモデルとして有用である。本明細書では、説明の便宜上、加齢性難聴の表現型を示す本発明の齧歯類遺伝子改変動物のことを「本発明の加齢性難聴モデル動物」と呼ぶ。
本発明の加齢性難聴モデル動物は、遺伝子変異によって片方のアレルのRet遺伝子が機能障害されている。即ち、本発明の加齢性難聴モデル動物はRet遺伝子に関してヘテロ変異体であり、この特徴によって加齢性難聴の表現型を示す。ここでの「遺伝子変異」は、Ret遺伝子がコードするタンパク質(即ちRetタンパク質)の活性化に必須のアミノ酸の置換を伴うものであり、障害されたRet遺伝子(以下、「変異型Ret遺伝子」と呼ぶ)は、活性化が抑制されたRetタンパク質をコードすることになる。
本発明の加齢性難聴モデル動物の用途の一つとして、加齢性難聴又は騒音性難聴の予防又は治療に有効な物質のスクリーニング法が提供される。本発明のスクリーニング法は以下のステップ(1)及び(2)を含む。
(1)本発明の加齢性難聴モデル動物に被験物質を取り込ませるステップ
(2)聴力の低下が抑制されたか否か評価し、評価結果に基づき被験物質の有効性を判定するステップ
本発明の第2の局面は、先天性難聴の表現型を示す齧歯類遺伝子改変動物及びその用途に関する。この局面の齧歯類遺伝子改変動物は先天性難聴のモデルとして有用である。本明細書では、説明の便宜上、先天性難聴の表現型を示す本発明の齧歯類遺伝子改変動物のことを「本発明の先天性難聴モデル動物」と呼ぶ。
本発明の先天性難聴モデル動物は、遺伝子変異によって両方のアレルのRet遺伝子が機能障害されている。即ち、本発明の先天性難聴モデル動物はRet遺伝子に関してホモ変異体であり(対立遺伝子の両方とも、活性化が抑制されたRetタンパク質をコードする変異型Ret遺伝子である)、この特徴によって先天性難聴の表現型を示す。
本発明の先天性難聴モデル動物の用途の一つとして、先天性難聴の治療に有効な物質のスクリーニング法が提供される。本発明のスクリーニング法は以下のステップ(1)及び(2)を含む。
(1)本発明の先天性難聴モデル動物に被験物質を取り込ませるステップ
(2)聴力が回復したか否か評価し、評価結果に基づき被験物質の有効性を判定するステップ
本発明の第3の局面は、難聴治療の新たな標的分子としてRETが有用であるとの知見に基づき、RETを標的分子としたスクリーニング法を提供する。この局面のスクリーニング法は以下のステップ(1)及び(2)を含む。このスクリーニング法によれば、難聴の予防又は治療に有効な物質をスクリーニングすることができる。
(1)RET遺伝子が発現している細胞であって、神経細胞及び神経芽細胞からなる群より選択される細胞を被験物質の存在下で培養するステップ
(2)前記細胞における、RET遺伝子の発現レベル又はRETタンパク質の活性化レベルを検出し、検出結果に基づき被験物質の有効性を判定するステップ
1.方法
(1)難聴モデル動物の作製
点変異によってRetの1063番目のチロシンをフェニルアラニンに置換したc-Ret Y1062Fホモ及びヘテロノックインマウス作製の方法を以下に記す。ネオマイシン耐性遺伝子を含むターゲティングベクターを129svjマウス由来のES細胞に挿入し、薬物でターゲティングベクターを含むES細胞を選択した。その後、ES細胞クローンをC57BL/6Jマウスに胚盤胞移植を行い、キメラマウスを作製した(参考文献6)。
得られたノックインマウスを聴性脳幹反応検査法(ABRハンドブック(加我君孝 編(金原出版))で聴力レベルを解析した。
マウス内耳はブアン固定液を用いて灌流固定した。得られた凍結切片、あるいはパラフィン切片について、抗体を用いた免疫染色とクリュー・バレラ染色を行った。電子顕微鏡解析の際は、マウス内耳はグルタールアルデヒドとパラホルムアルデヒドの混合固定液を用いて灌流固定した。
(1)Retの1063番目のチロシンのリン酸化レベルと聴力の発達
神経成長因子の受容体型チロシンキナーゼであるRET/Retは、ヒトのヒルシュスプラング病(巨大結腸症)、多発性内分泌腺腫症(MEN)、甲状腺癌の原因遺伝子であることが現在までに知られている(参考文献2、3)。また、その1062番目(マウスRetでは1063番目)のチロシンは、RET/Retのキナーゼ活性及びシグナル伝達系に重要ないくつかの分子が結合する重要な部位であることが知られている(参考文献2〜4)。事実、点変異によってRetの1063番目のチロシンをフェニルアラニンに置換したc-Ret Y1062Fホモノックインマウス(c-Ret KIY1062F/ Y1062F-mice)は、腸神経の顕著な減少、及び腎臓の形成不全を示すことが報告されている(参考文献6)。
上記可能性を個体レベルで検証する為に、Ret分子内の1063番目のチロシンに点変異を導入し、Ret分子内の1063番目のチロシンのリン酸化が殆ど検出されない(図1c〜g)ホモ型Ret-Y1062F-ノックインマウス(Ret機能高度障害マウス)を作製した(参考文献6を参照)。このマウスを用いて聴性脳幹反応(ABR)閾値(聴力レベル)を調べた。その結果、低音から高音域(4-40 kHz)まで、生後18日のRet機能高度障害マウスの聴力は78-85dBで重度の障害(聾)を受けていることが分かった(図1b)。同じ日齢の野生型マウスの聴力は20-55dBで正常レベルであった(結果を図示せず)。このように、ホモ型Ret-Y1062F-ノックインマウスは先天性難聴の表現型を持つことが判明した。
次に、生後2.5、8、14日における、らせん神経節の細胞数を測定したところ、生後2.5日では有意な差はみられないものの(図1h、i、l)、生後8、14日のホモ型Ret-Y1062F-ノックインマウス(Ret機能高度障害マウス)では、基底回転のらせん神経節が約20%あるいは35%と有意に減少していることが分かった(図1j、k、l)。この結果と対応して、らせん神経節におけるc-Ret Y1062のリン酸化は生後1-5日まではほとんど検出されないが(図1a)、生後6日以降に顕著に上昇することから、生後6日以降のらせん神経節におけるc-Ret Y1062のリン酸化がらせん神経節の発達に重要であることが示唆された。
次に、同様の実験をヘテロ型Ret-Y1062F-ノックインマウス(Ret機能軽度障害マウス)を用いて行った。このマウスの寿命、体重、腸神経系、腎臓の発達については異常がないことが報告されている(参考文献6)。聴力測定(ABR)を行った結果、らせん神経節におけるRet-Y1062のリン酸化レベルが野生型よりも有意に減少しているヘテロ型Ret-Y1062F-ノックインマウスは、生後1ヶ月では野生型の聴力レベルと同等であるのに対して、生後4ヶ月以降、野生型と比較して高音域から聴力低下が加速し、10ヶ月に至っては、高音域の聴力レベルは測定域外(聾)であることが分かった(図3a〜c)。更に、ヘテロ型Ret-ノックアウトマウスも同様に野生型マウスよりも加齢性難聴が進行(悪化)していることが分かった(結果を図示せず)。これらの結果と対応して、野生型マウスのらせん神経節の細胞数は加齢依存的に緩やかな減少を示したが、ヘテロ型Ret-Y1062F-ノックインマウスのらせん神経節の細胞数は、野生型と比較して急激な減少することが分かった(図3d〜m)。
最後に、ヘテロ型Ret-Y1062F-ノックインマウスの加齢性難聴の回復実験を試みた。恒常活性型RETを持つRET遺伝子機能亢進マウス(RET-Tg-mice 242系:文献15 Kato M et a al. Oncogene 1999)とヘテロ型Ret-Y1062F-ノックインマウスを交配させ、恒常活性型RET遺伝子を導入したc-Ret-KIY1062F/+;RET-Tg-miceを作製した。14ヶ月齢において、c-Ret-KIY1062F/+の聴力レベルは野生型と比較して顕著に低下したのに対して、c-Ret-KIY1062F/+;RET-Tg-miceは野生型マウスと同等の聴力レベルを示した(図4a)。c-Ret-KIY1062F/+;RET-Tg-miceのらせん神経節におけるRet-Y1062のリン酸化レベルはc-Ret-KIY1062F/+よりも有意に増加していた(図4b〜j)。この結果と対応して、ヘテロ型Ret-Y1062F-ノックインマウスと比較して、c-Ret-KIY1062F/+;RET-Tg-miceのらせん神経節の細胞数は有意に多いことがわかった(図4k〜o)。以上の結果より、ヘテロ型Ret-Y1062F-ノックインマウスの加齢性難聴の進行を恒常活性型RET遺伝子が部分的に阻止できる事が示唆された。
Ret遺伝子機能低下マウス(Ret-Y1062F-ノックインマウス)を用いた以上の解析結果により、Retのリン酸化レベルが生後の内耳らせん神経節の発達と生存に重要な役割を担っており、そのリン酸化レベルが低下すると、その程度によって先天性難聴と加齢性難聴の原因になることが示唆された。また、恒常活性型RETによる加齢性難聴の回復実験により、難聴治療の新たな標的分子としてRETが有用であることが示唆された。
従来、先天性難聴と加齢性難聴は発症時期あるいは病態の明確な違いから、全く異なる疾患であるとみなされていた。本研究結果から、これら難聴も単一遺伝子により発症する可能性が示唆された。
(1)RET/Retタンパク質のリン酸化レベル、即ち活性化レベルが聴覚の形成、発達に重要な役割を担う。
(2)先天性難聴の表現型を示すモデル動物を作製するためには、Retタンパク質の活性化を妨げるように両方のアレルのRet遺伝子に変異を導入することが有効である。
(3)加齢性難聴の表現型を示すモデル動物を作製するためには、Retタンパク質の活性化を妨げるように片方のアレルのRet遺伝子に変異を導入することが有効である。
(4)RET/Retが難聴の予防・治療の標的分子になる。
RETはヒルシュスプラング病(巨大結腸症)の原因遺伝子として知られているが、その一方でヒルシュスプラング病の患者は難聴のリスクが高まることが指摘されている。このことから、ヒルシュスプラング病の患者において、RETの点変異と難聴発症について関連する可能性がある。そこで、ヒルシュスプラング病とRET遺伝子の変異との関係を調べることにした。まず、ヒルシュスプルング病患児の内、全結腸型無神経節症(total colon aganglionosis)といわれる重症例(21例)についてRET遺伝子の全塩基配列を検索した。一方、聴覚検査を実施した結果、これら21例中、3例は「RET遺伝子変異に由来するヒルシュスプルング病における」聴覚障害であると確認された。これら3例には共通する特徴が認められた。即ち、全てが男児例であり、しかも重症例のなかでも特に重症とされる極型症例(全腸管型無神経節症)に集中していた。
1. Brown SD, Hardisty-Hughes RE, Mburu P. Quiet as a mouse: dissecting the molecular and genetic basis of hearing. Nat Rev Genet. 2008 Apr;9(4):277-90. Epub 2008 Feb 19. Review.
2. Airaksinen MS, Saarma M. The GDNF family: signalling, biological functions and therapeutic value. Nat Rev Neurosci. 2002 May;3(5):383-94. Review.
3. Heanue TA, Pachnis V. Enteric nervous system development and Hirschsprung's disease: advances in genetic and stem cell studies.Nat Rev Neurosci. 2007 Jun;8(6):466-79. Review. Erratum in: Nat Rev Neurosci. 2007 Jul;8(7):568.
4. Kato M, Takeda K, Kawamoto Y, Iwashita T, Akhand AA, Senga T, Yamamoto M, Sobue G, Hamaguchi M, Takahashi M, Nakashima I.Repair by Src kinase of function-impaired RET with multiple endocrine neoplasia type 2A mutation with substitutions of tyrosines in the COOH-terminal kinase domain for phenylalanine. Cancer Res. 2002 Apr 15;62(8):2414-22.
5. Rubel EW, Fritzsch B. Auditory system development: primary auditory neurons and their targets. Annu Rev Neurosci. 2002;25:51-101. Epub 2002 Feb 5. Review.
6. Jijiwa M, Fukuda T, Kawai K, Nakamura A, Kurokawa K, Murakumo Y, Ichihara M, Takahashi M.A targeting mutation of tyrosine 1062 in Ret causes a marked decrease of enteric neurons and renal hypoplasia. Mol Cell Biol. 2004 Sep;24(18):8026-36.
7. Asai N, Fukuda T, Wu Z, Enomoto A, Pachnis V, Takahashi M, Costantini F. Targeted mutation of serine 697 in the Ret tyrosine kinase causes migration defect of enteric neural crest cells. Development. 2006 Nov;133(22):4507-16. Epub 2006 Oct 18.
8. Uesaka T, Nagashimada M, Yonemura S, Enomoto H. Diminished Ret expression compromises neuronal survival in the colon and causes intestinal aganglionosis in mice. J Clin Invest. 2008 May;118(5):1890-8.
9. Bordeaux MC, Forcet C, Granger L, Corset V, Bidaud C, Billaud M, Bredesen DE, Edery P, Mehlen P. The RET proto-oncogene induces apoptosis: a novel mechanism for Hirschsprung disease. EMBO J. 2000 Aug 1;19(15):4056-63.
10. Cañibano C, Rodriguez NL, Saez C, Tovar S, Garcia-Lavandeira M, Borrello MG, Vidal A, Costantini F, Japon M, Dieguez C, Alvarez CV. The dependence receptor Ret induces apoptosis in somatotrophs through a Pit-1/p53 pathway, preventing tumor growth. EMBO J. 2007 Apr 18;26(8):2015-28. Epub 2007 Mar 22.
11. Spongr VP, Flood DG, Frisina RD, Salvi RJ. Quantitative measures of hair cell loss in CBA and C57BL/6 mice throughout their life spans. J Acoust Soc Am. 1997 Jun;101(6):3546-53.
12. White JA, Burgess BJ, Hall RD, Nadol JB. Pattern of degeneration of the spiral ganglion cell and its processes in the C57BL/6J mouse. Hear Res. 2000 Mar;141(1-2):12-8.
13. Hequembourg S, Liberman MC.Spiral ligament pathology: a major aspect of age-related cochlear degeneration in C57BL/6 mice. J Assoc Res Otolaryngol. 2001 Jun;2(2):118-29.
14. Ohlemiller KK. Reduction in sharpness of frequency tuning but not endocochlear potential in aging and noise-exposed BALB/cJ mice. J Assoc Res Otolaryngol. 2002 Dec;3(4):444-56. Epub 2002 Apr 9.
15. Kato M, Liu W, Akhand AA, Dai Y, Ohbayashi M, Tuzuki T, Suzuki H, Isobe K, Takahashi M, Nakashima I. Linkage between melanocytic tumor development and early burst of Ret protein expression for tolerance induction in metallothionein-I/ret transgenic mouse lines. Oncogene. 1999 Jan 21;18(3):837-42.
16. Lang H, Schulte BA, Zhou D, Smythe N, Spicer SS, Schmiedt RA. Nuclear factor kappaB deficiency is associated with auditory nerve degeneration and increased noise-induced hearing loss. J Neurosci. 2006 Mar 29;26(13):3541-50.
17. Hayashi H, Ichihara M, Iwashita T, Murakami H, Shimono Y, Kawai K, Kurokawa K, Murakumo Y, Imai T, Funahashi H, Nakao A, Takahashi M. Characterization of intracellular signals via tyrosine 1062 in RET activated by glial cell line-derived neurotrophic factor. Oncogene. 2000 Sep 14;19(39):4469-75.
18. Hayden MS, Ghosh S. Shared principles in NF-kappaB signaling. Cell. 2008 Feb 8;132(3):344-62. Review.
19. Talwalkar SS, Valbuena JR, Abruzzo LV, Admirand JH, Konoplev SN, Bueso-Ramos CE, Medeiros LJ. MALT1 gene rearrangements and NF-kappaB activation involving p65 and p50 are absent or rare in primary MALT lymphomas of the breast. Mod Pathol. 2006 Nov;19(11):1402-8. Epub 2006 Aug 18.
20. Song L, McGee JA, Walsh EJ. Consequences of combined maternal, fetal and persistent postnatal hypothyroidism on the development of auditory function in Tshrhyt mutant mice. Brain Res. 2006 Jul 26;1101(1):59-72. Epub 2006 Jun 15.
21. Yamamoto M, Li M, Mitsuma N, Ito S, Kato M, Takahashi M, Sobue G. Preserved phosphorylation of RET receptor protein in spinal motor neurons of patients with amyotrophic lateral sclerosis: an immunohistochemical study by a phosphorylation-specific antibody at tyrosine 1062. Brain Res. 2001 Aug 31;912(1):89-94.
22. Zheng QY, Johnson KR, Erway LC. Assessment of hearing in 80 inbred strains of mice by ABR threshold analyses. Hear Res. 1999 Apr;130(1-2):94-107.
23. Tsujita K, Kaikita K, Hayasaki T, Honda T, Kobayashi H, Sakashita N, Suzuki H, Kodama T, Ogawa H, Takeya M. Targeted deletion of class A macrophage scavenger receptor increases the risk of cardiac rupture after experimental myocardial infarction. Circulation. 2007 Apr 10;115(14):1904-11. Epub 2007 Mar 26.
24. Ito M, Kizawa K, Toyoda M, Morohashi M. Label-retaining cells in the bulge region are directed to cell death after plucking, followed by healing from the surviving hair germ. J Invest Dermatol. 2002 Dec;119(6):1310-6.
本明細書の中で明示した論文、公開特許公報、及び特許公報などの内容は、その全ての内容を援用によって引用することとする。
Claims (15)
- Retタンパク質の活性化に必須のアミノ酸の置換を伴う点遺伝子変異によって片方のアレルのRet遺伝子が機能障害されており、加齢性難聴の表現型を示す、齧歯類遺伝子改変動物。
- 前記齧歯類がマウスであり、
前記アミノ酸が、Retタンパク質の1063番チロシン残基である、請求項1に記載の齧歯類遺伝子改変動物。 - 前記点遺伝子変異が、前記1063番チロシン残基がフェニルアラニンに置換される点遺伝子変異である、請求項2に記載の齧歯類遺伝子改変動物。
- 前記齧歯類がマウス以外の齧歯類であり、
前記アミノ酸が、該齧歯類のRetタンパク質においてマウスRetタンパク質の1063番チロシン残基に相当するチロシン残基である、請求項1に記載の齧歯類遺伝子改変動物。 - 以下のステップ(1)及び(2)を含む、加齢性難聴又は騒音性難聴の予防又は治療に有効な物質のスクリーニング法:
(1)請求項1〜4のいずれか一項に記載の齧歯類遺伝子改変動物に被験物質を取り込ませるステップ;
(2)聴力の低下が抑制されたか否か評価し、評価結果に基づき被験物質の有効性を判定するステップ。 - ステップ(1)後の前記齧歯類遺伝子改変動物を用い、以下の指標、即ち、(a)内耳らせん神経節の細胞数、(b)内耳らせん神経節でのRet遺伝子の発現レベル及び(c)内耳らせん神経節でのRetタンパク質の活性化レベル、からなる群より選択される一以上の指標について検出し、検出結果に基づいてステップ(2)の評価を行う、請求項5に記載のスクリーニング法。
- 聴性脳幹反応によってステップ(2)の評価を行う、請求項5に記載のスクリーニング法。
- Retタンパク質の活性化に必須のアミノ酸の置換を伴う点遺伝子変異によって片方のアレルのRet遺伝子が機能障害されており、先天性難聴の表現型を示す、齧歯類遺伝子改変動物。
- 前記齧歯類がマウスであり、
前記アミノ酸が、Retタンパク質の1063番チロシン残基である、請求項8に記載の齧歯類遺伝子改変動物。 - 前記点遺伝子変異が、前記1063番チロシン残基がフェニルアラニンに置換される点遺伝子変異である、請求項9に記載の齧歯類遺伝子改変動物。
- 前記齧歯類がマウス以外の齧歯類であり、
前記アミノ酸が、該齧歯類のRetタンパク質においてマウスRetタンパク質の1063番チロシン残基に相当するチロシン残基である、請求項8に記載の齧歯類遺伝子改変動物。 - 以下のステップ(1)及び(2)を含んでなる、先天性難聴の治療に有効な物質のスクリーニング法:
(1)請求項8〜11のいずれか一項に記載の齧歯類遺伝子改変動物に被験物質を取り込ませるステップ;
(2)聴力が回復したか否か評価し、評価結果に基づき被験物質の有効性を判定するステップ。 - ステップ(1)後の前記齧歯類遺伝子改変動物を用い、(a)内耳らせん神経節の細胞数、(b)カルビンディン及び(c)シナプトフィジンからなる群より選択される一以上の指標について検出し、検出結果に基づいてステップ(2)の評価を行う、請求項12に記載のスクリーニング法。
- 聴性脳幹反応によってステップ(2)の評価を行う、請求項12に記載のスクリーニング法。
- 以下の(1)及び(2)を含むことを特徴とする、難聴の予防又は治療に有効な物質のスクリーニング法:
(1)RET遺伝子が発現している細胞であって、神経細胞及び神経芽細胞からなる群より選択される細胞を被験物質の存在下で培養するステップ;
(2)前記細胞における、RET遺伝子の発現レベル又はRETタンパク質の活性化レベルを検出し、検出結果に基づき被験物質の有効性を判定するステップ。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2009053481A JP5531198B2 (ja) | 2009-03-06 | 2009-03-06 | 難聴モデル動物及びその用途 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2009053481A JP5531198B2 (ja) | 2009-03-06 | 2009-03-06 | 難聴モデル動物及びその用途 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2010207097A true JP2010207097A (ja) | 2010-09-24 |
JP5531198B2 JP5531198B2 (ja) | 2014-06-25 |
Family
ID=42967995
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009053481A Expired - Fee Related JP5531198B2 (ja) | 2009-03-06 | 2009-03-06 | 難聴モデル動物及びその用途 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP5531198B2 (ja) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2014042262A1 (ja) * | 2012-09-13 | 2014-03-20 | 国立大学法人 東北大学 | 難聴が生じにくいモデル動物 |
KR102178751B1 (ko) * | 2019-06-14 | 2020-11-13 | 연세대학교 산학협력단 | 신규한 부분적 청각 손상 동물 모델 및 이의 제조 방법 |
CN112351995A (zh) * | 2018-06-07 | 2021-02-09 | 再生元制药公司 | 斯蒂尔综合征的啮齿动物模型 |
JP2023519654A (ja) * | 2020-03-18 | 2023-05-12 | エフ. ホフマン-ラ ロシュ アーゲー | 脳卒中の評価のためのret(トランスフェクション再編成) |
-
2009
- 2009-03-06 JP JP2009053481A patent/JP5531198B2/ja not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
JPN6013048671; Mol.Cell.Biol. Vol.24, No.18, 2004, p.8026-8036 * |
JPN6013048672; ホルモンと臨床 Vol.57, No.3, 20090301, p.241-247 * |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2014042262A1 (ja) * | 2012-09-13 | 2014-03-20 | 国立大学法人 東北大学 | 難聴が生じにくいモデル動物 |
CN112351995A (zh) * | 2018-06-07 | 2021-02-09 | 再生元制药公司 | 斯蒂尔综合征的啮齿动物模型 |
KR102178751B1 (ko) * | 2019-06-14 | 2020-11-13 | 연세대학교 산학협력단 | 신규한 부분적 청각 손상 동물 모델 및 이의 제조 방법 |
JP2023519654A (ja) * | 2020-03-18 | 2023-05-12 | エフ. ホフマン-ラ ロシュ アーゲー | 脳卒中の評価のためのret(トランスフェクション再編成) |
JP7505013B2 (ja) | 2020-03-18 | 2024-06-24 | エフ. ホフマン-ラ ロシュ アーゲー | 脳卒中の評価のためのret(トランスフェクション再編成) |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP5531198B2 (ja) | 2014-06-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Campbell et al. | The transcription factor Nfix is essential for normal brain development | |
White et al. | Sarm1 deletion suppresses TDP-43-linked motor neuron degeneration and cortical spine loss | |
Ahmed et al. | Accelerated lipofuscinosis and ubiquitination in granulin knockout mice suggest a role for progranulin in successful aging | |
Schmidt-Supprian et al. | NEMO/IKKγ-deficient mice model incontinentia pigmenti | |
Hung et al. | Smaller dendritic spines, weaker synaptic transmission, but enhanced spatial learning in mice lacking Shank1 | |
Dutton et al. | Preferential inactivation of Scn1a in parvalbumin interneurons increases seizure susceptibility | |
Kasher et al. | Direct evidence for axonal transport defects in a novel mouse model of mutant spastin‐induced hereditary spastic paraplegia (HSP) and human HSP patients | |
Ko et al. | p35 and p39 are essential for cyclin-dependent kinase 5 function during neurodevelopment | |
Zheng et al. | Lack of enhanced spinal regeneration in Nogo-deficient mice | |
Herrmann et al. | STAT3 is a critical regulator of astrogliosis and scar formation after spinal cord injury | |
Saito et al. | The physiological roles of vesicular GABA transporter during embryonic development: a study using knockout mice | |
Li et al. | Gsh‐4 encodes a LIM‐type homeodomain, is expressed in the developing central nervous system and is required for early postnatal survival. | |
Hendershot et al. | Conditional deletion of Hand2 reveals critical functions in neurogenesis and cell type-specific gene expression for development of neural crest-derived noradrenergic sympathetic ganglion neurons | |
Ohno et al. | Nardilysin regulates axonal maturation and myelination in the central and peripheral nervous system | |
Lin et al. | Proper expression of the Gcn5 histone acetyltransferase is required for neural tube closure in mouse embryos | |
JP2010525303A (ja) | 神経の過度な興奮を緩和する薬剤 | |
Pispa et al. | Tooth patterning and enamel formation can be manipulated by misexpression of TNF receptor Edar | |
Lu et al. | Cerebellar defects in Pdss2 conditional knockout mice during embryonic development and in adulthood | |
Raft et al. | Ephrin-B2 governs morphogenesis of endolymphatic sac and duct epithelia in the mouse inner ear | |
Judson et al. | Dual-isoform hUBE3A gene transfer improves behavioral and seizure outcomes in Angelman syndrome model mice | |
JP5531198B2 (ja) | 難聴モデル動物及びその用途 | |
Liu et al. | Retrograde regulation of mossy fiber axon targeting and terminal maturation via postsynaptic Lnx1 | |
Suzzi et al. | Deletion of lrrk2 causes early developmental abnormalities and age-dependent increase of monoamine catabolism in the zebrafish brain | |
Strong et al. | Age-dependent resistance to excitotoxicity in Htt CAG140 mice and the effect of strain background | |
Dimaras et al. | The p75NTR neurotrophin receptor is a tumor suppressor in human and murine retinoblastoma development |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20120226 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20131001 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20131101 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20140304 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20140309 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5531198 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |