JP2010120890A - Manufacturing method of amino acid ester or peptide ester or salt of these - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、陽イオン交換体、特に陽イオン交換樹脂を使ったアミノ酸エステルまたはペプチドエステルまたはこれらの塩の製造方法に関するものである。 The present invention relates to a method for producing an amino acid ester or peptide ester or a salt thereof using a cation exchanger, particularly a cation exchange resin.
アミノ酸またはペプチドの、陽イオン交換樹脂を用いたエステル化方法としては、（Ａ）アミノ酸をイオン交換樹脂存在下でアルコールをリフラックスさせながら反応する方法（非特許文献１、非特許文献２、特許文献１）、（Ｂ）ジオキサン等を溶媒とし、イオン交換樹脂存在下でアミノ酸のエステルを合成する方法（特許文献２）、（Ｃ）アミノ酸をイオン交換樹脂、および脱水剤存在下でアルコールと反応させる方法（非特許文献３、非特許文献４）、（Ｄ）塩化水素およびイオン交換樹脂存在下でアミノ酸とアルコールを反応させる方法（特許文献３）、（Ｅ）イオン交換樹脂存在下で水酸基を有するアクリル系物質とアミノ酸を反応させる方法（特許文献４）が知られている。
しかしながら、（Ａ）の方法ではアルコールのリフラックスの為に余分なエネルギーが必要であることが問題である。また、（Ｂ）の方法では脱水剤の使用により追加の費用や操作が必要となり産業上の利用に不利である。さらに、（Ｃ）の方法では使用する溶媒の分離・廃棄または回収工程が必要なため産業上の利用に不利である。（Ｄ）の方法では塩化水素存在下でプロセスを実施するため塩化メタン、ジメチルエーテル等の有害物質が生成する点で問題がある。（Ｅ）の方法は水酸基を有するアクリル系物質にしか適用できず汎用性に問題がある。 However, the method (A) has a problem that extra energy is required for the reflux of alcohol. The method (B) is disadvantageous for industrial use because it requires additional costs and operations due to the use of a dehydrating agent. Furthermore, the method (C) is disadvantageous for industrial use because it requires a separation, disposal or recovery step of the solvent used. The method (D) has a problem in that harmful substances such as methane chloride and dimethyl ether are generated because the process is carried out in the presence of hydrogen chloride. The method (E) can be applied only to an acrylic material having a hydroxyl group and has a problem in versatility.
また、エステル化収率を向上させるためには、反応平衡をエステル化側に移動させることが有効である。そのための手段として、アルコールを大量に使用することや反応生成物である水を反応の場より除去することが行われてきた。しかしながら、使用するアルコール量が多くなる点でコスト上の問題がある。一方、反応の際に生成する水を反応の場より除去することは、従来、蒸留による水の留去、特許文献５や、パーベパレーションによる脱水、非特許文献５や、上記（Ｃ）のごとく脱水剤を作用させることが試みられてきた。しかしながら、蒸留による水の除去には大量のエネルギーが必要となる為、コスト的に不利である。特に沸点が水より低いアルコールの場合、水の蒸発と同時に多量のアルコールの蒸発を伴う点で問題がある。殊に、メタノール中の水の蒸留除去は、エタノールや２−プロパノールの場合と異なり共沸を起こさない為、大過剰のメタノールの蒸発を要する。一方、パーベパレーションによる脱水では、多くのアミノ酸はアルコールへの溶解性に劣るため反応自体の進行が困難であること、また酸触媒を使う場合パーベパレーション膜の耐酸性が課題となること等の問題がある。また、脱水剤を使用する場合、脱水剤にかかる費用や脱水により生成した物質と目的のエステルを分離する困難があった。 In order to improve the esterification yield, it is effective to move the reaction equilibrium to the esterification side. As means for that purpose, use of a large amount of alcohol and removal of water as a reaction product from the reaction field have been performed. However, there is a problem in cost in that the amount of alcohol used increases. On the other hand, the removal of water produced during the reaction from the reaction site is conventionally performed by distilling water by distillation, Patent Document 5, dehydration by pervaporation, Non-Patent Document 5, or (C) above. Attempts have been made to use a dehydrating agent. However, removal of water by distillation requires a large amount of energy, which is disadvantageous in terms of cost. In particular, in the case of an alcohol having a boiling point lower than that of water, there is a problem in that a large amount of alcohol is evaporated simultaneously with the evaporation of water. In particular, distillation removal of water in methanol does not cause azeotropy unlike ethanol and 2-propanol, and thus requires evaporation of a large excess of methanol. On the other hand, in dehydration by pervaporation, the reaction itself is difficult to proceed because many amino acids are poorly soluble in alcohol, and the acid resistance of the pervaporation membrane becomes a problem when using an acid catalyst. There are problems. In addition, when a dehydrating agent is used, there are costs associated with the dehydrating agent and difficulty in separating the substance produced by the dehydration from the target ester.
本発明の課題は、アミノ酸またはペプチドのエステルまたはこれらの塩を陽イオン交換体を使用して製造する方法において、効率的なエステル化製造方法を見出し解決することにある。具体的には、これらのエステルまたはその塩を高収率で製造すると同時に、操作的に有利なアルコールを使用し、脱水剤の不使用、リフラックスを伴わず、加熱操作を行わなくてもよい方法を提供することを目的とする。 An object of the present invention is to find and solve an efficient esterification production method in a method for producing an amino acid or peptide ester or a salt thereof using a cation exchanger. Specifically, these esters or their salts are produced in high yield, and at the same time, an alcohol that is advantageous in terms of operation is used, no dehydrating agent is used, no refluxing is required, and no heating operation is required. It aims to provide a method.
本発明者は、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、陽イオン交換体、特に陽イオン交換樹脂を充填したカラムに、Ｌ−アラニン水溶液を吸着し、その後メタノールを通液することによりエステル化させ、塩溶離剤を通液することでＬ−アラニンメチルエステルを溶離できることを見出し、本発明を完成するに至った。 As a result of diligent studies to solve the above problems, the present inventor adsorbed an aqueous L-alanine solution to a column filled with a cation exchanger, particularly a cation exchange resin, and then passed methanol to pass through the ester. And found that L-alanine methyl ester can be eluted by passing a salt eluent, and the present invention has been completed.
さらに、エステル化反応の際に行うアルコールの樹脂への通液操作により、エステル化反応の際に生じた水が反応系外に除去される。このことにより、蒸発やパーベパレーションや脱水剤を使用せず反応平衡がエステル化側に移動し、さらに高い収率でエステル化を行う事が出来るという利点を有する。 Furthermore, water generated during the esterification reaction is removed from the reaction system by the operation of passing alcohol through the resin during the esterification reaction. This has the advantage that the reaction equilibrium moves to the esterification side without using evaporation, pervaporation or a dehydrating agent, and esterification can be carried out at a higher yield.
すなわち、本発明は、
１．アミノ酸またはペプチドを吸着させた陽イオン交換体カラムに、アルコールを通液して水を除去しつつアミノ酸またはペプチドのエステル化を行うことを特徴とするアミノ酸エステルもしくはペプチドエステルまたはこれらの塩の製造方法、
２．アミノ酸またはペプチド水溶液を陽イオン交換体が充填されたカラムに通液してアミノ酸またはペプチドを吸着させる工程、このアミノ酸を吸着させた陽イオン交換体カラムに、アルコールを通液して水を除去しつつアミノ酸またはペプチドのエステル化を行う工程、その後、この陽イオン交換体カラムに溶離剤を通液してアミノ酸エステルまたはペプチドエステルを溶離する工程からなる、アミノ酸エステルもしくはペプチドエステルまたはこれらの塩の製造方法、
３．陽イオン交換体が陽イオン交換樹脂である上記１または２記載の製造方法、
４．アルコールを通液して水を除去しつつアミノ酸のエステル化をする工程において、貫流液の水分含量が１０％以下となるまで行う上記２または３記載の製造方法、
５．アルコールを通液して水を除去しつつアミノ酸のエステル化をする工程において、貫流液の水分含量が４０％以下となるまで、当該陽イオン交換体カラム体積に対する1時間当たりのアルコール通液量の比を０．５〜４．０で行い、その後、当該陽イオン交換体カラム体積に対する1時間当たりのアルコール通液量の比を０〜１．０で行う、上記２乃至４のいずれかに記載の製造方法、
６．上記１乃至５のいずれかの項において、アミノ酸水溶液がＬ−アラニン水溶液であり、アルコールがメタノールであるＬ−アラニンメチルエステルまたはＬ−アラニンメチルエステル塩の製造方法、
７．上記１乃至５のいずれかの項において、アミノ酸水溶液が酸性アミノ酸水溶液であり、アルコールがメタノールである酸性アミノ酸ジメチルエステルまたは酸性アミノ酸ジメチルエステル塩の製造方法。
に関するものである。
That is, the present invention
1. A process for producing an amino acid ester or peptide ester or a salt thereof, wherein the amino acid or peptide is esterified while passing water through an cation exchanger column adsorbed with an amino acid or peptide and removing water. ,
2. Passing an amino acid or peptide aqueous solution through a column filled with a cation exchanger to adsorb the amino acid or peptide, passing water through the cation exchanger column adsorbing this amino acid to remove water. Production of an amino acid ester or peptide ester or a salt thereof, comprising the step of esterifying an amino acid or peptide, and then eluting the amino acid ester or peptide ester by passing an eluent through the cation exchanger column Method,
3. 3. The production method according to 1 or 2 above, wherein the cation exchanger is a cation exchange resin,
4). In the step of esterifying an amino acid while passing water through alcohol and removing water, the production method according to 2 or 3 above, wherein the water content of the flow-through is 10% or less,
5). In the step of esterifying amino acid while removing water by passing alcohol, the amount of alcohol passed per hour with respect to the cation exchanger column volume until the water content of the flow-through becomes 40% or less. The ratio is 0.5 to 4.0, and then the ratio of the alcohol flow rate per hour with respect to the cation exchanger column volume is 0 to 1.0. Manufacturing method,
6). The method for producing L-alanine methyl ester or L-alanine methyl ester salt, wherein the amino acid aqueous solution is an L-alanine aqueous solution and the alcohol is methanol,
7). 6. The method for producing an acidic amino acid dimethyl ester or acidic amino acid dimethyl ester salt, wherein the amino acid aqueous solution is an acidic amino acid aqueous solution and the alcohol is methanol.
It is about.
本発明により、アミノ酸エステルおよびペプチドエステルまたはこれらの塩を製造するにあたり、アルコール溶媒を使用し、脱水剤が不要で、リフラックスを伴わず、また加熱操作を必須としない有利な製造法であって、アミノ酸エステルおよびペプチドエステルまたはこれらの塩を高収率で取得できる。さらに、本発明の実施により、反応で生じる水が反応の場より除去されることでさらに高い収率でアミノ酸エステルおよびペプチドエステルまたはこれらの塩を得ることが出来る。 According to the present invention, an amino acid ester and peptide ester or a salt thereof is an advantageous production method that uses an alcohol solvent, does not require a dehydrating agent, does not involve reflux, and does not require a heating operation. Amino acid esters and peptide esters or their salts can be obtained in high yield. Furthermore, by carrying out the present invention, the amino acid ester and the peptide ester or their salts can be obtained in a higher yield by removing water generated in the reaction from the reaction site.
本発明で使用するアミノ酸は、同一分子内にアミノ基とカルボキシル基を有する化合物の総称であり、カルボキシル基の結合している炭素原子を基準にアミノ基が結合している炭素原子の位置によりα−、β−、γ−アミノ酸に区分される（ダイヤイオンII応用編、１２０ページ、三菱化学株式会社、Ｈ５．４．１）が、いずれのアミノ酸も使用することが出来る。また、α−アミノ酸は不斉炭素を有し立体配置によりL体及びＤ体と分類されるが、そのいずれも、または両者の混合物であるラセミ体も利用することが出来る。典型的なものは天然系由来のものであり、それらは中性アミノ酸（モノアミノモノカルボン酸）、酸性アミノ酸（モノアミノジカルボン酸）、塩基性アミノ酸（ジアミノモノカルボン酸等）に分けられる。中性アミノ酸の例として、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン、システイン、シスチン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、グルタミン、プロリン等、酸性アミノ酸の例として、グルタミン酸、アスパラギン酸等、塩基性アミノ酸の例としては、リジン、アルギニン、オルニチン、ヒスチジン等を挙げることができる。特に好ましいアミノ酸は、アラニンとアスパラギン酸である。
The amino acid used in the present invention is a general term for compounds having an amino group and a carboxyl group in the same molecule, and α is determined depending on the position of the carbon atom to which the amino group is bonded, based on the carbon atom to which the carboxyl group is bonded. Although classified into-, β-, and γ-amino acids (Diaion II Application,
本発明で使用するペプチドとは、複数のアミノ酸がペプチド結合で重合した高分子である。ペプチドもアミノ酸と同様に荷電を有している。溶液中でのペプチドの荷電はその溶液のｐＨとペプチドが持つ解離基のｐＫに依存する(ハーパー 生化学 原書２５版、４０−５１、上代 淑人監訳、丸善株式会社 Ｈ１３．１．３０)。したがって、アミノ酸と同様に陽イオン交換樹脂への吸着・溶離が可能である。また、遊離のカルボキシル基を有しているので本法によりエステル化を行う事が可能である。アミノ酸の統合数としては２〜４個、好ましくは、２〜３個である。好ましいペプチドとして、Ｌ−アスパラチル−Ｌ−フェニルアラニンなどがある。 The peptide used in the present invention is a polymer in which a plurality of amino acids are polymerized by peptide bonds. Peptides are charged like amino acids. The charge of the peptide in the solution depends on the pH of the solution and the pK of the dissociation group possessed by the peptide (Harper Biochemistry, 25th edition, 40-51, translated by Masato Ueshiro, Maruzen Co., Ltd. H13.1.30). Therefore, it can be adsorbed and eluted onto the cation exchange resin as with amino acids. In addition, since it has a free carboxyl group, it can be esterified by this method. The integrated number of amino acids is 2 to 4, preferably 2 to 3. Preferred peptides include L-aspartyl-L-phenylalanine.
本発明で使用する陽イオン交換体は有機質のイオン交換体と無機質のイオン交換体に大別される。有機質のイオン交換体は陽イオン交換樹脂、陽イオン交換膜などがあるがこれらに限らない。一方、無機質のイオン交換体にはアルミノケイ酸塩（ゼオライト等）などが挙げられる(化学工学便覧 改定６版、６９６、化学工学会編、丸善、Ｈ１１．２．２５)。本発明の実施には陽イオン交換樹脂、特に強酸性陽イオン交換樹脂が望ましい。強酸性陽イオン交換樹脂は、例えば、スチレン・ジビニルベンゼン共重合体にスルホン基をイオン交換基として導入したもので、例としてＡｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲ−１２０Ｂ、ＤＩＡＩＯＮ ＳＫ１Ｂ、Ｄｏｗｅｘ ＨＣＲ−Ｓ等の市販の陽イオン交換樹脂が使用できる。陽イオン交換樹脂には、その他、中酸性、弱酸性のものもあるが、これらは塩基性アミノ酸に使用できる。また、本発明で用いるイオン交換体は、カラムのような固定した容器に充填された状態で使用されるものであり、本発明でいう「陽イオン交換体カラム」とは、陽イオン交換体が固定されたカラムに充填されたものをさし、そのようなものであれば何でも良い。 The cation exchanger used in the present invention is roughly classified into an organic ion exchanger and an inorganic ion exchanger. Organic ion exchangers include, but are not limited to, cation exchange resins and cation exchange membranes. On the other hand, examples of the inorganic ion exchanger include aluminosilicate (zeolite, etc.) (Chemical Engineering Handbook, Revised 6th Edition, 696, edited by Chemical Society of Japan, Maruzen, H11.2.25). For the practice of the present invention, cation exchange resins, particularly strongly acidic cation exchange resins, are desirable. The strong acid cation exchange resin is, for example, a styrene / divinylbenzene copolymer into which a sulfone group is introduced as an ion exchange group. Exchange resin can be used. Other cation exchange resins include moderately acidic and weakly acidic resins, which can be used for basic amino acids. The ion exchanger used in the present invention is used in a state where it is packed in a fixed container such as a column, and the “cation exchanger column” in the present invention is a cation exchanger. It refers to what is packed in a fixed column, and anything is acceptable as long as it is such.
アルコールは鎖式または脂環式の炭化水素の水素原子を水酸基で置換した化合物である（理化学辞典
第４版、４４ページ、株式会社岩波書店、１９８７／１０／１２）。アルコールの内、本発明の〔００１２〕に示した操作温度において液体であるアルコールが使用できる。このアルコールは、陽イオン交換体から水を除去する、通液前半の作用と、エステル化行う後半の作用があり、前半では、アセトンの様な水溶性の溶媒を用いて、水分除去作用を果たすことも出来るが、特段の事情がなければ同じアルコールを用いる。使用するアルコールは、取得しようとするエステルに応じて定まるが、脂肪族、脂環式、芳香族、などから選ばれる。脂肪族アルコールは、飽和、不飽和、直鎖、分岐鎖のいずれでもよく、炭素数は１〜６程度、好ましくは、１〜３程度である。好ましいアルコールの例としては、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノールが挙げられる。
Alcohol is a compound in which a hydrogen atom of a chain or alicyclic hydrocarbon is substituted with a hydroxyl group (Rikagaku Dictionary 4th edition, page 44, Iwanami Shoten Co., Ltd., 1987/10/12). Among the alcohols, alcohols that are liquid at the operating temperature shown in [0012] of the present invention can be used. This alcohol has the first half of the action of removing water from the cation exchanger and the second half of the esterification. In the first half, the water is removed using a water-soluble solvent such as acetone. It is possible to use the same alcohol unless there are special circumstances. The alcohol to be used is determined according to the ester to be obtained, but is selected from aliphatic, alicyclic, aromatic and the like. The aliphatic alcohol may be saturated, unsaturated, linear or branched, and has about 1 to 6 carbon atoms, preferably about 1 to 3 carbon atoms. Examples of preferred alcohols include methanol, ethanol, n-propanol, and isopropanol.
アルコール通液に用いるアルコールは水分含量が１０％より低いもの、より好ましくは水分含量が５％より低いもの、さらに好ましくは水分含量が２％より低いものが適当である。 The alcohol used for the alcohol passage is appropriate to have a water content lower than 10%, more preferably a water content lower than 5%, and still more preferably a water content lower than 2%.
本発明の方法は、アミノ酸またはペプチドを陽イオン交換体に吸着させる工程、アミノ酸またはペプチドを吸着している陽イオン交換体が充填されているカラムにアルコールを通液してカラム内の水（陽イオン交換体に内蔵されているものも含む。）を除去しつつアミノ酸をエステル化する工程よりなる。エステル化後は、通常は、エステルを吸着している陽イオン交換体のカラムに溶離剤を通液してアミノ酸エステルまたはペプチドエステルを溶離回収する。 The method of the present invention comprises a step of adsorbing an amino acid or peptide on a cation exchanger, an alcohol is passed through a column packed with a cation exchanger adsorbing an amino acid or peptide, and water in the column (cation Including the one built in the ion exchanger.) And removing the amino acid. After the esterification, the amino acid ester or peptide ester is usually recovered by passing the eluent through a column of a cation exchanger adsorbing the ester.
アミノ酸またはペプチドを陽イオン交換体に吸着させる工程は以下の様に行う。
先ず、アミノ酸またはペプチドを水に溶解する。このとき、水への溶解が十分でない場合は塩酸や硫酸等の酸を添加することでアミノ酸、またはペプチドを水に溶解させても良い。アミノ酸やペプチドの水溶液の濃度は、各アミノ酸やペプチドについて公知であり、あるいは使用する陽イオン交換体の操作手引書等によって設定することができる。通常は1〜５００ｇ／ｌ程度、特に、１０〜２００ｇ／ｌ程度でよい。溶解に酸を用いる場合には、ｐＨが陽イオン交換体に吸着しうる範囲を逸脱しないよう注意する。陽イオン交換体をＨ型で使用する場合にはｐＨ０以上、１４以下、塩型で使用する場合には、当該アミノ酸が陽イオンとして存在するｐＨ範囲、例えば中性アミノ酸の場合０以上、ｐＨ１以下、塩基性アミノ酸または酸性アミノ酸の場合は０以上、等電点以下とする。
The step of adsorbing an amino acid or peptide on the cation exchanger is performed as follows.
First, an amino acid or peptide is dissolved in water. At this time, if the dissolution in water is not sufficient, an amino acid or peptide may be dissolved in water by adding an acid such as hydrochloric acid or sulfuric acid. The concentration of the aqueous solution of amino acid or peptide is known for each amino acid or peptide, or can be set by an operation manual for the cation exchanger to be used. Usually, it may be about 1 to 500 g / l, particularly about 10 to 200 g / l. When an acid is used for dissolution, care is taken so that the pH does not deviate from the range that can be adsorbed on the cation exchanger. When the cation exchanger is used in the H form, the pH ranges from 0 to 14, and when the cation exchanger is used in the salt form, the pH range in which the amino acid is present as a cation, for example, from 0 to 1 in the case of a neutral amino acid, pH 1 or less. In the case of a basic amino acid or acidic amino acid, it is 0 or more and the isoelectric point or less.
アミノ酸またはペプチドを吸着させる陽イオン交換体はＨ型、塩型のいずれでもよい。塩型の種類は問わないが、典型的なものはナトリウム型、アンモニウム型などである。 The cation exchanger for adsorbing amino acids or peptides may be either H-type or salt-type. The type of salt type is not limited, but typical ones are sodium type and ammonium type.
アミノ酸またはペプチドを陽イオン交換体に吸着させる方法は、格別なものではなく、通常の方法に従えばよい。カラムは陽イオン交換体に使用されている通常のものでよく、通液方法もダウンフロー、アップフローのいずれでもよい。カラムは単塔方式で用いても、多塔方式で用いてもよく、多塔方式では、通液を順次切替えていく連塔方式を採用することができる。アミノ酸またはペプチドの吸着量は陽イオン交換体の交換容量の５０〜９８％程度、好ましくは８０〜９８％程度が適当である。 The method for adsorbing an amino acid or peptide on a cation exchanger is not particularly limited, and a normal method may be followed. The column may be a conventional one used for a cation exchanger, and the liquid passing method may be either downflow or upflow. The column may be used in a single tower system or in a multi-column system. In the multi-column system, a continuous tower system in which liquid flow is sequentially switched can be adopted. The adsorbed amount of amino acid or peptide is about 50 to 98%, preferably about 80 to 98% of the exchange capacity of the cation exchanger.
アミノ酸またはペプチドを吸着させた後はそのまま次のアルコール通液工程を行うことが出来るが、水洗浄を行った後にアルコールを通液しても良い。また、アルコール通液の前にカラム内の水を除去し排水することには、次のアルコールを通液する工程の水分除去効率を上げる点で有利である。カラム内の水を除去する方法としては、空気の通気、脱水アルコールの通液等が挙げられる。なお脱水アルコールとは水分を除去したアルコールを意味している。 After the amino acid or peptide is adsorbed, the next alcohol passing step can be performed as it is, but the alcohol may be passed after washing with water. Moreover, removing the water in the column before draining the alcohol and draining it is advantageous from the viewpoint of increasing the moisture removal efficiency in the next step of passing the alcohol. Examples of the method for removing water in the column include aeration of air and a passage of dehydrated alcohol. The dehydrated alcohol means alcohol from which moisture has been removed.
次に、アルコールを通液する工程は以下の様に行う。アミノ酸またはペプチドを吸着させた陽イオン交換体カラムにアルコールを通液する。アルコールを通液する方向は、一般には水より比重の軽いアルコールの場合はダウンフローに、水より比重の重いアルコールの場合はアップフローとすることが有利であるが、これに限らない。アルコールを通液する速度は、当該陽イオン交換体カラムからの貫流液の水分が約４０％より多い初期段階では、アルコール通液による当該陽イオン交換体カラム内に残存する水の除去が主な目的であるから、圧力損失が工程操作上問題の無い範囲で速くすることが有利である。一般的には、アルコール通液の初期段階では当該陽イオン交換体カラム体積に対する１時間当たりのアルコール通液体積の比（以下ＳＶという）が０．５以上、４．０以下、好ましくは１．０以上、４．０以下であるがこの範囲に限らない。一方、当該陽イオン交換体カラムからの貫流液の水分が約４０％より低い段階では、エステル化反応による水の生成速度に見合った低速度で通液する事が有利である。エステル化反応による水の生成速度は、アミノ酸およびアルコールの種類、またはアルコール通液温度に依存して一概には示すことが出来ないが、一般的には、ＳＶが０．０５以上、１．０以下、好ましくは０．１以上０．７以下であるが、この範囲にアルコールの通液速度は限らない。アルコールの通液は、連続的に行う外、途中で一旦通液を停止、すなわち断続的に行うこともできる。アルコールの全体の通液時間は、エステル化が８０％以上、好ましくは９０％以上達成されるように設定するのがよく、これは種々の要因によって変わるので、実験によって求めるのがよい。エステル化率の測定は、溶離液中のアミノ酸またはペプチドのモル濃度、および溶離液中のアミノ酸エステルまたはペプチドエステルのモル濃度を求め、次式により算出する。これらのモル濃度については、例えば、高速液体クロマトグラフィーにて測定できる。
Ｙ＝ＣＥ÷（ＣＡ＋ＣＥ）×１００
ただし、Ｙはエステル化率（％）を、ＣＡは溶離液中のアミノ酸またはペプチドのモル濃度（ｍｏｌ／Ｌ）を、ＣＥは溶離液中のアミノ酸エステルまたはペプチドエステルのモル濃度（ｍｏｌ／Ｌ）を示す。
また、アルコールの通液は５℃〜３０℃で行っても良いが、加温することにより反応速度が速くなるのでより有利である。加温する温度は、陽イオン交換体カラム内の操作圧力に於けるアルコールの沸点または陽イオン交換体の耐熱温度の何れか低い温度以下、アルコールまたは水の凝固点のうち高い温度以上であれば任意に選択することが出来る。好ましい温度は、陽イオン交換体の耐熱温度以下であって、アルコールの沸点−４℃〜水の凝固点＋５℃の範囲である。アルコールの通液後は、次の溶離工程を行うことが出来るが、アルコール通液後さらに加熱しながら保持すること、あるいは単に保持することでエステル化収率を高めることが出来る。
アルコールの通液量は、アルコール貫流液の水分含量が１０％以下、より好ましくはアルコール貫流液の水分含量が５％以下、さらに好ましくはアルコール貫流液の水分含量が２％以下となる量とし、これは、実験で容易に求めることができる。この水分含量は、例えば、カールフィッシャー水分計で測定できる。
Next, the step of passing the alcohol is performed as follows. Alcohol is passed through a cation exchanger column on which amino acids or peptides are adsorbed. The direction in which the alcohol is passed is generally downflow for alcohol having a specific gravity lighter than water, and upflow for alcohol having a specific gravity higher than water, but is not limited thereto. In the initial stage where the water content of the flow-through from the cation exchanger column is higher than about 40%, removal of water remaining in the cation exchanger column by the alcohol flow is mainly performed. For this purpose, it is advantageous to increase the pressure loss within a range where there is no problem in the process operation. In general, in the initial stage of alcohol flow, the ratio of the volume of alcohol flow per hour to the cation exchanger column volume (hereinafter referred to as SV) is 0.5 or more and 4.0 or less, preferably 1. Although it is 0 or more and 4.0 or less, it is not restricted to this range. On the other hand, in the stage where the water content of the flow-through from the cation exchanger column is lower than about 40%, it is advantageous to pass the liquid at a low speed corresponding to the water generation speed by the esterification reaction. The rate of water formation by the esterification reaction cannot be generally shown depending on the types of amino acids and alcohols or the alcohol flow temperature, but generally the SV is 0.05 or more, 1.0 Hereinafter, it is preferably 0.1 or more and 0.7 or less, but the alcohol flow rate is not limited to this range. In addition to continuously passing the alcohol, the passing of the alcohol may be temporarily stopped, that is, intermittently performed. The total passage time of the alcohol should be set so that esterification is achieved at 80% or more, preferably 90% or more, which varies depending on various factors, and should be determined experimentally. For the measurement of the esterification rate, the molar concentration of the amino acid or peptide in the eluent and the molar concentration of the amino acid ester or peptide ester in the eluent are obtained and calculated by the following equation. These molar concentrations can be measured, for example, by high performance liquid chromatography.
Y = C E ÷ (C A + C E ) × 100
However, Y esterification rate (%), C A is the molar concentration of the amino acid or peptide in the eluate (mol / L), C E is the molar concentration of the amino acid ester or peptide ester in the eluent (mol / L).
Further, the alcohol may be passed at 5 to 30 ° C., but it is more advantageous because the reaction rate is increased by heating. The heating temperature is arbitrary if it is not higher than the boiling point of alcohol at the operating pressure in the cation exchanger column or the heat-resistant temperature of the cation exchanger, whichever is lower, or higher than the freezing point of alcohol or water. Can be selected. A preferable temperature is not higher than the heat resistance temperature of the cation exchanger and is in the range of boiling point of alcohol −4 ° C. to freezing point of water + 5 ° C. After the alcohol has passed, the next elution step can be performed, but the esterification yield can be increased by holding the solution while heating it further or simply holding it.
The alcohol flow rate is such that the water content of the alcohol flow-through is 10% or less, more preferably the water content of the alcohol flow-through is 5% or less, more preferably the water content of the alcohol flow-through is 2% or less, This can be easily determined by experiment. This moisture content can be measured, for example, with a Karl Fischer moisture meter.
次に、溶離工程は以下の様に行う。溶離工程ではアルコール通液後の陽イオン交換体カラムに溶離剤溶液を通液する。用いる溶離剤は塩酸や硫酸、または有機酸等の酸、または食塩や硫酸アンモニウム、酢酸アンモニウム等の塩を用いる事ができる。有機酸の例としては酢酸などを挙げることができる。溶離剤に酸、または塩を使用する場合、本発明によりアミノ酸エステルまたはペプチドエステル類は塩の形で得られる。また、アルカリを溶離剤に用いることはエステル加水分解を誘引するので好ましくないが、エステルのアルカリ加水分解速度はエステルの電子的、立体的因子の両者に影響される(モリソン ボイド有機化学(中)第５版、１１０３ページ、東京化学同人、１９８９／４／１)為、加水分解速度の低いエステルの場合にはアルカリを溶離剤に使用することも可能である。アルカリを溶離剤として使用する場合、本発明によりアミノ酸エステルまたはペプチドエステルが得られる。 Next, the elution step is performed as follows. In the elution step, the eluent solution is passed through the cation exchanger column after passing through the alcohol. As an eluent to be used, an acid such as hydrochloric acid, sulfuric acid, or an organic acid, or a salt such as sodium chloride, ammonium sulfate, or ammonium acetate can be used. Examples of the organic acid include acetic acid. When acids or salts are used as eluents, amino acid esters or peptide esters are obtained in the form of salts according to the present invention. The use of alkali as an eluent is not preferable because it induces ester hydrolysis, but the alkali hydrolysis rate of the ester is influenced by both the electronic and steric factors of the ester (Morrison Void Organic Chemistry (Medium)). 5th edition, page 1103, Tokyo Kagaku Dojin, 1989/4/1) Therefore, it is possible to use an alkali as an eluent in the case of an ester having a low hydrolysis rate. When alkali is used as the eluent, the present invention provides amino acid esters or peptide esters.
一般に溶離剤は水溶液の形で用いるが、酢酸アンモニウムなどアルコールに可溶な塩についてはアルコール溶液の形で用いても良い。濃度は、特に限定されないが、一般に０．１〜２Ｍ程度である。溶離剤の通液量は、一般にはイオン交換樹脂の交換容量に相当する量以上の再生剤を通液する事が必要である。 In general, the eluent is used in the form of an aqueous solution, but an alcohol-soluble salt such as ammonium acetate may be used in the form of an alcohol solution. The concentration is not particularly limited, but is generally about 0.1 to 2M. In general, it is necessary to pass the regenerant in an amount equal to or greater than the exchange capacity of the ion exchange resin.
また、溶離剤の使用量や通液速度については、例えば、ダイヤイオンII応用編(三菱化学株式会社、Ｈ５．４．１)に記載されている条件が利用可能であるが、必ずしもこの条件に合致しなくてもよい。 As for the amount of eluent used and the flow rate, for example, conditions described in Diaion II Application (Mitsubishi Chemical Corporation, H5.4.1) can be used. It does not have to match.
陽イオン交換樹脂の準備は以下の様に行った。
三菱化学株式会社製の陽イオン交換樹脂SK-1B（交換容量２．０ｍｅｑ／ｍｌ）を１５０ｍｌ測り取り、ＧＥ−ヘルスケアバイオサイエンスＸＫ−２６／４０カラムに充填した。これに、４５０ｍｌの１Ｍ塩酸を１０℃〜２０℃で３時間かけて通液し、さらに３００ｍｌの純水を１０℃〜２０℃で２時間かけて通液し、以下の実験に用いた。
The cation exchange resin was prepared as follows.
150 ml of cation exchange resin SK-1B (exchange capacity 2.0 meq / ml) manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation was measured and packed into a GE-Healthcare Bioscience XK-26 / 40 column. To this, 450 ml of 1 M hydrochloric acid was passed over 3 hours at 10 ° C. to 20 ° C., and 300 ml of pure water was passed over 2 hours at 10 ° C. to 20 ° C. and used for the following experiments.
樹脂へのＬ−アラニン吸着は以下の様に行った。
１３．４ｇのＬ−アラニンを純水に溶解して１５０ｍｌにメスアップし、これを１０℃〜２０℃で１時間かけて前述のカラムに通液した。引き続き１３５ｍｌの純水を１０℃〜２０℃で１時間かけてカラムに通液した。
L-alanine adsorption to the resin was performed as follows.
13.4 g of L-alanine was dissolved in pure water, made up to 150 ml, and passed through the above column at 10 ° C. to 20 ° C. over 1 hour. Subsequently, 135 ml of pure water was passed through the column at 10 ° C. to 20 ° C. over 1 hour.
メチルエステル化は以下の様に行った。
Ｌ−アラニンを吸着させたカラムに、４５０ｍｌのメタノールを１０℃〜２０℃で３時間かけて通液した。メタノール通液終了後１３６時間放置し、その後に、１３５ｍｌの水を１０℃〜２０℃で１時間かけて通液した。
Methyl esterification was performed as follows.
450 ml of methanol was passed through the column adsorbed with L-alanine at 10 ° C. to 20 ° C. over 3 hours. After completion of the methanol flow, the solution was allowed to stand for 136 hours, and then 135 ml of water was passed over 1 hour at 10 ° C to 20 ° C.
上記反応より得られたＬ−アラニンメチルエステルの溶離は以下の様に行った。
引き続き４５０ｍｌの１Ｍ塩酸を１０℃〜２０℃で３時間かけて通液した。その後、１８０ｍｌの純水を１０℃〜２０℃で１．２時間かけて通液し、溶離液を得た。溶離液の分析の結果、Ｌ−アラニンメチルエステルの収率は溶離液中のＬ−アラニンとＬ−アラニンメチルエステルの合計に対し（以下同様）８８％であった。
The elution of L-alanine methyl ester obtained from the above reaction was performed as follows.
Subsequently, 450 ml of 1M hydrochloric acid was passed at 10 ° C. to 20 ° C. over 3 hours. Thereafter, 180 ml of pure water was passed at 10 ° C. to 20 ° C. over 1.2 hours to obtain an eluent. As a result of analysis of the eluent, the yield of L-alanine methyl ester was 88% with respect to the total of L-alanine and L-alanine methyl ester in the eluent (the same applies hereinafter).
実施例１と同様の操作で陽イオン交換樹脂の準備、Ｌ−アラニン吸着、メタノール通液を行った。メタノール通液終了後１７時間後にＸＫ−２６／４０カラムのジャケットに６０℃の水を４時間循環することでカラムを加熱した。その後、同様に１０℃〜２０℃にて、水押し、Ｌ−アラニンメチルエステルの溶離を行った。溶離液および溶離後の水押し液の分析の結果、Ｌ−アラニンメチルエステルの収率は８６％であった。 Preparation of a cation exchange resin, L-alanine adsorption, and methanol flow were performed in the same manner as in Example 1. 17 hours after completion of the methanol flow, the column was heated by circulating water at 60 ° C. for 4 hours through the jacket of the XK-26 / 40 column. Thereafter, water was pushed in the same manner at 10 to 20 ° C. to elute L-alanine methyl ester. As a result of the analysis of the eluent and the water push solution after elution, the yield of L-alanine methyl ester was 86%.
実施例１と同様の操作で陽イオン交換樹脂の準備、Ｌ−アラニン吸着を行った。その後、ＸＫ−２６／４０カラムのジャケットに６０℃の水を循環しながら４５０ｍｌのメタノールを７時間かけて通液した。このとき、初めのメタノール１８０ｍｌはＳＶ１で、続く１３５ｍｌはＳＶ０．６で、その後２．８時間は６０℃に保持しつつメタノール通液を止めた。最後の１３５ｍｌのメタノールはＳＶ０．６で通液した。メタノール通液のときの、貫流液の水分含量をカールフィッシャー水分計で測定した結果を図１に示す。上記のＳＶ１からＳＶ０．６への切替えは、概ね貫流液の水分含量が４０％を下回った時点であった。 Preparation of a cation exchange resin and L-alanine adsorption were carried out in the same manner as in Example 1. Thereafter, 450 ml of methanol was passed through the jacket of the XK-26 / 40 column for 7 hours while circulating water at 60 ° C. At this time, 180 ml of the first methanol was SV1, and 135 ml of the subsequent methanol was SV0.6. Thereafter, the methanol flow was stopped while maintaining the temperature at 60 ° C. for 2.8 hours. The final 135 ml of methanol was passed at SV 0.6. FIG. 1 shows the result of measuring the water content of the flow-through with a Karl Fischer moisture meter when methanol was passed. The above switching from SV1 to SV0.6 was approximately when the water content of the flow-through fell below 40%.
メタノール通液終了後、１８時間放置し、その後に、１８０ｍｌの純水を１０℃〜２０℃で通液した。その後、実施例１と同様に１０℃〜２０℃にて、Ｌ−アラニンメチルエステルの溶離を行った。溶離液および溶離後の水押し液の分析の結果、Ｌ−アラニンメチルエステルの収率は９２％であった。 After completion of the methanol flow, the solution was allowed to stand for 18 hours, and then 180 ml of pure water was passed at 10 ° C to 20 ° C. Thereafter, L-alanine methyl ester was eluted at 10 ° C. to 20 ° C. in the same manner as in Example 1. As a result of analysis of the eluent and the water-pressed liquid after elution, the yield of L-alanine methyl ester was 92%.
実施例１と同様の操作で陽イオン交換樹脂の準備を行った。その後、６４．２ｇ（０．７２ｍｏｌ）のＬ−アラニンを純水に溶解し７４４ｍｌにメスアップし、これを１０℃〜２０℃で５時間かけてカラムに通液した。引き続き１３５ｍｌの純水を１０℃〜２０℃で１時間かけてカラムに通液した。その後、ＸＫ−２６／４０カラムのジャケットに６０℃の水を循環しながら４５０ｍｌのメタノールを６．５時間かけて通液した。このとき、初めのメタノール１３５ｍｌはＳＶ１で、次の４５ｍｌはＳＶ０．５で通液し、その後１．５時間６０℃に保持しつつメタノール通液を止めた。最後の２７０ｍｌはＳＶ０．５で通液した。メタノール通液のときの、貫流液の水分含量をカールフィッシャー水分計で測定した結果を図２に示す。上記のＳＶ１からＳＶ０．５への切替えは、概ね貫流液の水分含量が４０％を下回った時点であった。また、貫流液の水分含量の挙動は図１、図２とで非常に近似しており、以下の実施例でも、貫流液の水分含量の推移はほぼ同一挙動を示した。 A cation exchange resin was prepared in the same manner as in Example 1. Thereafter, 64.2 g (0.72 mol) of L-alanine was dissolved in pure water and made up to 744 ml, and this was passed through the column at 10 ° C. to 20 ° C. for 5 hours. Subsequently, 135 ml of pure water was passed through the column at 10 ° C. to 20 ° C. over 1 hour. Thereafter, 450 ml of methanol was passed over 6.5 hours while circulating water at 60 ° C. through the jacket of the XK-26 / 40 column. At this time, 135 ml of the first methanol was passed with SV1, and the next 45 ml was passed with SV0.5, and then the methanol passage was stopped while maintaining at 60 ° C. for 1.5 hours. The last 270 ml was passed through with SV0.5. FIG. 2 shows the results of measuring the moisture content of the flow-through with a Karl Fischer moisture meter when methanol was passed. The above switching from SV1 to SV0.5 was approximately when the water content of the flow-through fell below 40%. Moreover, the behavior of the moisture content of the flow-through liquid is very similar to that shown in FIGS. 1 and 2, and the transition of the moisture content of the flow-through liquid showed almost the same behavior in the following examples.
メタノール通液終了後６５時間放置し、その後に１８０ｍｌの純水を１０℃〜２０℃で通液した。その後、同様に１０℃〜２０℃にて、Ｌ−アラニンメチルエステルの溶離を行った。溶離液および溶離後の水押し液の分析の結果、Ｌ−アラニンメチルエステルの収率は９５％であった。 After completion of the methanol flow, the solution was allowed to stand for 65 hours, and then 180 ml of pure water was passed at 10 ° C to 20 ° C. Thereafter, L-alanine methyl ester was eluted at 10 ° C. to 20 ° C. in the same manner. As a result of the analysis of the eluent and the water push solution after elution, the yield of L-alanine methyl ester was 95%.
陽イオン交換樹脂の準備は以下の様に行った。
三菱化学株式会社製の陽イオン交換樹脂ＵＢＫ−５５０（交換容量１．９ｍｅｑ／ｍｌ）を２５ｍｌ測り取り、ＧＥ−ヘルスケアバイオサイエンス製ＸＫ−１６／２０カラムに充填した。これに、１００ｍｌの１Ｍ塩酸を１０℃〜２０℃で４時間かけて通液した。その後、５０ｍｌの純水を１０℃〜２０℃で２時間かけて通液し、実験に用いた。
The cation exchange resin was prepared as follows.
25 ml of cation exchange resin UBK-550 (exchange capacity 1.9 meq / ml) manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation was measured and packed into an XK-16 / 20 column manufactured by GE-Healthcare Bioscience. 100 ml of 1M hydrochloric acid was passed through this at 10 ° C. to 20 ° C. over 4 hours. Thereafter, 50 ml of pure water was passed over 2 hours at 10 ° C. to 20 ° C. and used for the experiment.
樹脂へのＬ−アラニン吸着は以下の様に行った。
４．５ｇのＬ−アラニンを純水に溶解し５０ｍｌにメスアップし、これを１０℃〜２０℃で２時間かけて前述のカラムに通液した。引き続き２３ｍｌの純水を１時間かけて通液した。
L-alanine adsorption to the resin was performed as follows.
4.5 g of L-alanine was dissolved in pure water, made up to 50 ml, and passed through the column at 10 ° C. to 20 ° C. over 2 hours. Subsequently, 23 ml of pure water was passed over 1 hour.
メチルエステル化は以下の様に行った。
ＸＫ−１６／２０カラムのジャケットに６０℃の水を循環しながら、７５ｍｌのメタノールを６時間かけて通液した。このとき、初めのメタノール２２．５ｍｌはＳＶ１で、次の７．５ｍｌはＳＶ０．５で通液し、その後１．５時間６０℃に保持しつつメタノール通液を止めた。最後のメタノール４５ｍｌはＳＶ０．５で通液した。メタノール通液終了６５時間放置し、その後に、２３ｍｌの純水を１０℃〜２０℃で１時間かけて通液した。
Methyl esterification was performed as follows.
75 ml of methanol was passed over 6 hours while circulating water at 60 ° C. through the jacket of the XK-16 / 20 column. At this time, 22.5 ml of the first methanol was passed with SV1, and the next 7.5 ml was passed with SV0.5, and then the methanol flow was stopped while maintaining at 60 ° C. for 1.5 hours. The last 45 ml of methanol was passed through with SV0.5. The solution was allowed to stand for 65 hours after completion of the methanol flow, and then 23 ml of pure water was passed over 1 hour at 10 to 20 ° C.
Ｌ−アラニンメチルエステルの溶離は以下の様に行った。
引き続き７５ｍｌの１Ｍ塩化ナトリウム水溶液を１０℃〜２０℃で３時間かけて通液した。その後、３０ｍｌの純水を１０℃〜２０℃で１．２時間かけて通液した。塩化ナトリウム水溶液と純水通液で得られた貫流液を溶離液とした。溶離液の分析の結果、Ｌ−アラニンメチルエステルの収率は９７％であった。
The elution of L-alanine methyl ester was performed as follows.
Subsequently, 75 ml of 1M sodium chloride aqueous solution was passed over 3 hours at 10 ° C to 20 ° C. Thereafter, 30 ml of pure water was passed through at 10 ° C. to 20 ° C. over 1.2 hours. A flow-through obtained by passing an aqueous solution of sodium chloride and pure water was used as an eluent. As a result of analysis of the eluent, the yield of L-alanine methyl ester was 97%.
実施例５と同様に陽イオン交換樹脂の準備、Ｌ−アラニン吸着を行った。その後、ＸＫ−１６／２０カラムのジャケットに６０℃の水を循環しながら、７５ｍｌのメタノールを６時間かけて通液した。このとき、初めのメタノール２２．５ｍｌはＳＶ１で、次の７．５ｍｌはＳＶ０．５で通液し、その後１．５時間６０℃に保持しつつメタノール通液を止めた。最後のメタノール４５ｍｌはＳＶ０．５で通液した。メタノール通液終了６６時間放置し、その後に、７５ｍｌの１Ｍ酢酸アンモニウムのメタノール溶液を１０℃〜２０℃で３時間かけて通液した。その後、３０ｍｌのメタノールを１０℃〜２０℃で１．２時間かけて通液した。酢酸アンモニウムのメタノール溶液および３０ｍｌのメタノール通液で得られた貫流液を溶離液とした。溶離液の分析の結果、Ｌ−アラニンメチルエステルの収率は９７％であった。 In the same manner as in Example 5, preparation of a cation exchange resin and L-alanine adsorption were performed. Thereafter, 75 ml of methanol was passed over 6 hours while circulating water at 60 ° C. through the jacket of the XK-16 / 20 column. At this time, 22.5 ml of the first methanol was passed with SV1, and the next 7.5 ml was passed with SV0.5, and then the methanol flow was stopped while maintaining at 60 ° C. for 1.5 hours. The last 45 ml of methanol was passed through with SV0.5. The solution was allowed to stand for 66 hours after completion of the methanol flow, and then 75 ml of a 1M ammonium acetate methanol solution was passed over 3 hours at 10 to 20 ° C. Thereafter, 30 ml of methanol was passed at 10 ° C. to 20 ° C. over 1.2 hours. The eluent was a flow-through obtained by passing a methanol solution of ammonium acetate and 30 ml of methanol through. As a result of analysis of the eluent, the yield of L-alanine methyl ester was 97%.
ペプチドのメチルエステル化は以下の様に行った。
実施例５と同様の方法で陽イオン交換樹脂の準備を行った。
引き続き１２．８ｇのＬ−アスパラチルＬ−フェニルアラニンを１５０ｍｌの水に懸濁し、３５％塩酸でｐＨを１．０に調整したところ、結晶は溶解した。これに水を加え２００ｍｌにメスアップした。この液１８０ｍｌをカラムに１０℃〜２０℃で６時間かけて通液した。引き続き１６ｍｌの純水を１０℃〜２０℃で０．６時間かけて通液した。
Peptide methyl esterification was performed as follows.
A cation exchange resin was prepared in the same manner as in Example 5.
Subsequently, 12.8 g of L-aspartyl L-phenylalanine was suspended in 150 ml of water, and the pH was adjusted to 1.0 with 35% hydrochloric acid. Water was added to make up to 200 ml. 180 ml of this liquid was passed through the column at 10 ° C. to 20 ° C. over 6 hours. Subsequently, 16 ml of pure water was passed at 10 ° C. to 20 ° C. over 0.6 hours.
メチルエステル化は以下の様に行った。
ＸＫ−１６／２０カラムのジャケットに６０℃の水を循環しながら、７５ｍｌのメタノールを６時間かけて通液した。このとき、初めのメタノール２２．５ｍｌはＳＶ１で、次の７．５ｍｌはＳＶ０．５で通液し、その後１．５時間６０℃に保持しつつメタノール通液を止めた。最後のメタノール４５ｍｌはＳＶ０．５で通液した。メタノール通液終了65時間放置し、その後に、２３ｍｌの純水を１０℃〜２０℃で１時間かけて通液した。
Methyl esterification was performed as follows.
75 ml of methanol was passed over 6 hours while circulating water at 60 ° C. through the jacket of the XK-16 / 20 column. At this time, 22.5 ml of the first methanol was passed with SV1, and the next 7.5 ml was passed with SV0.5, and then the methanol flow was stopped while maintaining at 60 ° C. for 1.5 hours. The last 45 ml of methanol was passed through with SV0.5. The methanol was passed for 65 hours, and then 23 ml of pure water was passed for 1 hour at 10 to 20 ° C.
上記反応で得られたＬ−アスパラチル−Ｌ−フェニルアラニンジメチルエステルの溶離は以下の様に行った。
３６０ｍｌの０．２Ｍ塩酸を１０℃〜２０℃で７時間かけて通液した。その後、３０ｍｌの純水を１０℃〜２０℃で０．６時間かけて通液した。塩酸および純水３０ｍｌの通液で得られた貫流液を合わせて溶離液とした。溶離液の分析の結果、溶離液中のＬ−アスパラチル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−アスパラチル−Ｌ−フェニルアラニンモノメチルエステルとＬ−アスパラチル−Ｌ−フェニルアラニンジメチルエステルの合計に対しＬ−アスパラチル−Ｌ−フェニルアラニンジメチルエステルの収率は７２％であった。
The elution of L-aspartyl-L-phenylalanine dimethyl ester obtained by the above reaction was performed as follows.
360 ml of 0.2 M hydrochloric acid was passed at 10 ° C. to 20 ° C. over 7 hours. Thereafter, 30 ml of pure water was passed at 10 ° C. to 20 ° C. over 0.6 hours. The flow-through obtained by passing hydrochloric acid and 30 ml of pure water was combined to obtain an eluent. As a result of the analysis of the eluent, L-aspartyl-L-phenylalanine dimethyl was compared to the total of L-aspartyl-L-phenylalanine, L-aspartyl-L-phenylalanine monomethyl ester and L-aspartyl-L-phenylalanine dimethyl ester in the eluent. The yield of ester was 72%.
Ｌ−アスパラギン酸のメチルエステル化は以下の様に行った。
実施例５と同様の方法で陽イオン交換樹脂の準備を行った。
次に、６・６ｇ（０．０５ｍｏｌ）のＬ−アスパラギン酸を６０ｍｌの純水に懸濁し、６．２ｇの３５％塩酸を添加し結晶を溶解した。これに純水を添加して７５ｍｌにメスアップした。
この液、７３ｍｌをカラムに１０℃〜２０℃で３時間かけて通液した。引き続き２５ｍｌの純水を１０℃〜２０℃で1時間かけて通液した。
The methyl esterification of L-aspartic acid was performed as follows.
A cation exchange resin was prepared in the same manner as in Example 5.
Next, 6.6 g (0.05 mol) of L-aspartic acid was suspended in 60 ml of pure water, and 6.2 g of 35% hydrochloric acid was added to dissolve the crystals. Pure water was added thereto to make up to 75 ml.
73 ml of this solution was passed through the column at 10 ° C. to 20 ° C. over 3 hours. Subsequently, 25 ml of pure water was passed at 10 ° C. to 20 ° C. over 1 hour.
メチルエステル化は以下の様に行った。ＸＫ−１６／２０カラムのジャケットに６０℃の水を循環しながら、７５ｍｌのメタノールを６．１５時間かけて通液した。このとき、初めのメタノール２２．５ｍｌはＳＶ１で、次の５２．５ｍｌはＳＶ０．４で通液した。
エステルの溶離は実施例５と同様に行った。その結果、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−アスパラギン酸モノメチルエステル、およびＬ−アスパラギン酸ジメチルエステルの合計に対し、Ｌ−アスパラギン酸ジメチルエステルの収率は９１％であった。
Methyl esterification was performed as follows. While circulating water at 60 ° C. through the jacket of the XK-16 / 20 column, 75 ml of methanol was passed over 6.15 hours. At this time, 22.5 ml of the first methanol was passed with SV1, and the next 52.5 ml was passed with SV0.4.
Elution of the ester was carried out in the same manner as in Example 5. As a result, the yield of L-aspartic acid dimethyl ester was 91% with respect to the total of L-aspartic acid, L-aspartic acid monomethyl ester, and L-aspartic acid dimethyl ester.
本発明により得られるアミノ酸エステル、ペプチドエステルまたはこれらの塩は、様々な化学製品やその中間体として利用できる。 The amino acid ester, peptide ester or salts thereof obtained by the present invention can be used as various chemical products and intermediates thereof.
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