JP2010099036A - Container for treating biopolymer solution, and method for treating biopolymer solution - Google Patents

Container for treating biopolymer solution, and method for treating biopolymer solution Download PDF

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Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a container and a method wherein a pipette tip or the like as a partition means can be advanced into the inside of the container, the spatter of, e.g., a solution during suction-injection and the spray of an aerosol can be suppressed, and the evaporation of a solution after use or the leak of a liquid at a fall can be prevented. <P>SOLUTION: The container for treating the biopolymer solution is a container including a container for holding a liquid and a cover member which seals at least one opening situated at the upper end part of the container, wherein the cover member can perform resealing at least once even after being once opened. <P>COPYRIGHT: (C)2010,JPO&INPIT

Description

本発明は、生体高分子、特に核酸の処理を対象とする分析や診断に必要な増幅や精製等の操作を行う際に使用する生体高分子溶液処理用容器、及び該生体高分子溶液処理用容器を使用した生体高分子溶液処理方法に関する。   The present invention relates to a biopolymer solution processing container for use in operations such as amplification and purification necessary for analysis and diagnosis for biopolymers, particularly nucleic acid processing, and the biopolymer solution processing The present invention relates to a biopolymer solution processing method using a container.

感染性のある微生物の検出や特定塩基配列を決定するために、核酸増幅反応が広く利用されている。その中で最も利用されているのは、Polymerase Chain Reaction(以下、「PCR」と称する)である。PCRに代表される核酸増幅反応は1分子からの増幅も可能な高感度な方法である故に、僅かな核酸の汚染によって偽陽性を生ずる場合がある。   Nucleic acid amplification reactions are widely used to detect infectious microorganisms and determine specific base sequences. Among them, Polymerase Chain Reaction (hereinafter referred to as “PCR”) is most used. Since a nucleic acid amplification reaction typified by PCR is a highly sensitive method capable of amplification from a single molecule, there are cases where a false positive is caused by slight nucleic acid contamination.

このような汚染は、容器のキャップの開閉時や分注操作時に発生する溶液の飛沫やエアロゾルに含まれる核酸によるものだと考えられている。操作が行われる容器の外部に溶液の飛沫やエアロゾルが飛散することによって、他の試料、装置、実験室が汚染され、クロスコンタミネーションやキャリーオーバーが発生する。このような汚染を防ぐために、当該分野の研究者らは、反応溶液の調製、増幅反応、検出工程等をそれぞれ物理的に隔てられた空間において、専用の手袋、ピペット等を用いて実施している。   Such contamination is thought to be due to nucleic acid contained in the droplets or aerosol of the solution that is generated when the cap of the container is opened and closed or during the dispensing operation. When the droplets or aerosol of the solution is scattered outside the container in which the operation is performed, other samples, devices, and laboratories are contaminated, and cross contamination and carryover occur. In order to prevent such contamination, researchers in the field carry out reaction solution preparation, amplification reaction, detection process, etc. in a physically separated space using dedicated gloves, pipettes, etc. Yes.

しかしながら、この対策は、煩雑であるばかりか、費用、空間の確保という観点からも非常に厳しい制約となる。特に、多数の試料を同時に分析する場合は装置による自動操作が望まれるが、自動装置で物理的に隔てられた空間を確保することは大きな課題である。   However, this measure is not only complicated, but also very restrictive from the viewpoint of securing cost and space. In particular, when a large number of samples are analyzed at the same time, automatic operation by an apparatus is desired. However, securing a space physically separated by an automatic apparatus is a big problem.

また、核酸増幅反応は単独で実施されることは少なく、生体試料から鋳型となる核酸を抽出する操作や反応後の未反応物を除去する操作など、核酸を精製する操作と組み合わせて実施されることがほとんどである。核酸の精製には、シリカあるいはイオン交換体など、特定の溶媒組成下で、核酸を可逆的に吸着又は溶出することができる物質を固定した担体を用いる方法が使用されている(特許文献1ないし3参照)。   In addition, nucleic acid amplification reactions are rarely performed alone, and are performed in combination with operations for purifying nucleic acids, such as operations for extracting a nucleic acid as a template from a biological sample and operations for removing unreacted substances after the reaction. Most of that. For purification of nucleic acids, methods using a carrier on which a substance capable of reversibly adsorbing or eluting nucleic acids, such as silica or ion exchanger, is used (Patent Documents 1 to 5). 3).

特に、シリカあるいはイオン交換体をコートした磁性ビーズは、液体分注手段による溶媒の置換、磁石による磁性ビーズの捕集によって、一連の操作が成立するため、自動装置の構成を簡略化することが可能である。   In particular, a magnetic bead coated with silica or an ion exchanger can be simplified in the configuration of an automatic apparatus because a series of operations can be performed by replacing the solvent with a liquid dispensing means and collecting the magnetic bead with a magnet. Is possible.

しかしながら、自動装置で精製を行う場合、各試薬を分注する際の蓋の開閉や攪拌時の汚染が課題である。多くの場合、輸送時の試薬汚染や蒸発を防止するため、容器の上端部にある開口部はアルミシート等の蒸気を通さない物質で覆われている。上端部を覆うシートをカッター等で貫通し、ピペット等の液体分注手段が通過する穴を確保することによって、複雑な蓋の開閉機構を設けることなく、容器内部の液体を吸引又は吐出することができる。   However, when performing purification with an automatic apparatus, opening and closing the lid when dispensing each reagent and contamination during stirring are problems. In many cases, in order to prevent reagent contamination and evaporation during transportation, the opening at the upper end of the container is covered with a material that does not allow vapor to pass, such as an aluminum sheet. By sucking or discharging the liquid inside the container without providing a complicated lid opening and closing mechanism by penetrating the sheet covering the upper end with a cutter etc. and securing a hole through which liquid dispensing means such as a pipette passes Can do.

しかしながら、円滑に液体分注手段の通過ができる状態では、液体分注手段とシートに形成された穴との間には空間が生じるため、溶液の吸引または吐出による攪拌時に、溶液の飛沫やエアロゾルなどの外部への飛散を防ぐことができない。また、液体分注手段を取り外した後は、シートに形成された穴が開放されたままになるため、残った溶液の蒸発や転倒時の溶液の漏れ出しを防ぐことができない。   However, in a state in which the liquid dispensing means can pass smoothly, a space is created between the liquid dispensing means and the hole formed in the sheet. It is not possible to prevent scattering to the outside. Moreover, since the hole formed in the sheet remains open after removing the liquid dispensing means, it is not possible to prevent evaporation of the remaining solution or leakage of the solution when it falls.

特に、PCR等の核酸増幅反応を行った溶液及び該溶液と接触した溶液を試料として用いる場合、高濃度の核酸が含まれるため、溶液の飛沫やエアロゾルの飛散は大きな影響を与える。これらの課題を解決する先行技術としては、液体分注手段の吸引または吐出時に開口部を物理的に遮断することによって、溶液の飛沫やエアロゾルの外部への飛散を防止する方法がある。   In particular, when a solution subjected to a nucleic acid amplification reaction such as PCR or a solution in contact with the solution is used as a sample, since a high concentration of nucleic acid is contained, the splash of the solution and the scattering of the aerosol have a great influence. As a prior art that solves these problems, there is a method of preventing droplets of the solution and scattering of the aerosol to the outside by physically blocking the opening when the liquid dispensing means is sucked or discharged.

特開2001−74751号公報では、ピペットチップが貫通できる板状の蓋体を使用することで、液体の吸引または吐出時に発生する溶液の飛沫やエアロゾルの外部への飛散を防止する方法が開示されている。しかしながら、該方法では、吸引または吐出時の飛散を抑制することができるものの、使用後の開口部は開放状態のままであり、残った溶液の蒸発や転倒時の液の漏れ出しを防止することができない。また、蓋体に付着した液滴がピペットチップの移動の際に飛散する可能性も否定できない。   Japanese Patent Application Laid-Open No. 2001-74751 discloses a method for preventing droplets of a solution generated when aspirating or discharging a liquid or scattering of an aerosol to the outside by using a plate-like lid through which a pipette tip can penetrate. ing. However, although this method can suppress scattering during suction or discharge, the opening after use remains open, preventing evaporation of the remaining solution and leakage of the liquid during a fall. I can't. In addition, the possibility that the liquid droplets adhering to the lid scatter when the pipette tip is moved cannot be denied.

特開2003−329688号公報では、穿刺された孔を自らの弾性によって閉止可能な材料でできたキャップを用いる方法が開示されている。該方法では、液体分注手段と孔との間に隙間がほとんど生じず、使用後は自己の弾性によって密封状態となるため、使用時の液体の飛沫やエアロゾルの飛散、使用後の蒸発、及び転倒時の漏れ出し等を防止することができる。   Japanese Patent Application Laid-Open No. 2003-329688 discloses a method using a cap made of a material capable of closing a punctured hole by its own elasticity. In this method, there is almost no gap between the liquid dispensing means and the hole, and after use, it becomes a sealed state by its own elasticity, so that liquid splash and aerosol splash during use, evaporation after use, and Leakage and the like during a fall can be prevented.

しかしながら、穿刺された孔を自己の弾性で閉止可能な材料を使用する場合、材料の弾性、厚みを高める必要があり、液体分注手段を挿入または除去する際に蓋体との摩擦が大きくなってしまう。そのため、液体分注手段が金属でできたニードル等に制限されてしまう。金属製のニードルはプラスチック製のピペットチップ等と比較して高価であり、交換が難しいなどの欠点があり、僅かな汚染で結果が左右される核酸増幅検査には適していない。   However, when using a material that can close the punctured hole with its own elasticity, it is necessary to increase the elasticity and thickness of the material, and the friction with the lid increases when the liquid dispensing means is inserted or removed. End up. Therefore, the liquid dispensing means is limited to a needle made of metal or the like. Metal needles are expensive compared to plastic pipette tips and the like and have drawbacks such as difficulty in replacement, and are not suitable for nucleic acid amplification tests where results are affected by slight contamination.

一方、特開2006−124035号公報では、放射状のスリットを有する弾性体シートで開口部を覆う方法が開示されている。該方法は、ピペットチップが下降すると弾性体が下方に押し開かれ、容器内部の液体を吸引または吐出することが可能となる。吸引または吐出時には、弾性体がピペットの外周に纏わり付いているため、溶液の飛沫やエアロゾルの外部への飛散を抑制することが可能である。   On the other hand, Japanese Unexamined Patent Application Publication No. 2006-1224035 discloses a method of covering an opening with an elastic sheet having a radial slit. In this method, when the pipette tip is lowered, the elastic body is pushed downward and the liquid inside the container can be sucked or discharged. At the time of suction or discharge, since the elastic body is attached to the outer periphery of the pipette, it is possible to suppress the splash of the solution and the scattering of the aerosol to the outside.

また、ピペットチップを抜き去った際は、下方に押し開かれたシートが弾性によって水平状態に復帰するため、再度、開口部を覆うことが可能となる。しかしながら、該方法では、スリットを有するが故に、わずかな隙間からの蒸発を遮断することができず、また、転倒時には、溶液が漏れ出す可能性がある。
米国特許第5234809号明細書 欧州特許第0389063号明細書 欧州特許第1036082号明細書 特開2001−74751号公報 特開2003−329688号公報 特開2006−124035号公報
Further, when the pipette tip is removed, the sheet pushed downward is returned to the horizontal state by elasticity, so that the opening can be covered again. However, in this method, since it has a slit, evaporation from a slight gap cannot be blocked, and there is a possibility that the solution leaks during a fall.
US Pat. No. 5,234,809 European patent No. 03899063 European Patent No. 1036082 JP 2001-74751 A JP 2003-329688 A JP 2006-124035 A

前記のように、容器の内部に分注手段であるピペットチップ等が進入し、溶液等の吸引または吐出時の溶液の飛沫やエアロゾルの飛散を抑制し、かつ、使用後の溶液の蒸発や転倒時の液の漏れ出しを防止することが可能な生体高分子溶液処理用容器、及びその容器を用いた核酸等の生体高分子溶液の処理方法が待たれる。   As described above, a pipette tip or the like as a dispensing means enters the inside of the container, suppresses the splashing of the solution or the scattering of the aerosol at the time of sucking or discharging the solution, etc., and evaporating or overturning the solution after use There is a need for a biopolymer solution processing container capable of preventing leakage of liquid at the time, and a method for processing a biopolymer solution such as nucleic acid using the container.

そこで、本発明は、容器の内部に分注手段であるピペットチップ等が進入し、溶液等の吸引または吐出時の溶液の飛沫やエアロゾルの飛散を抑制し、かつ、使用後の溶液の蒸発や転倒時の液の漏れ出しを防止することが可能な容器及び方法にかかる発明を提供する。   Therefore, the present invention, a pipette tip or the like as a dispensing means enters the inside of the container, suppresses the splashing of the solution or the scattering of the aerosol at the time of sucking or discharging the solution, etc., and evaporating the solution after use or Provided is an invention relating to a container and a method capable of preventing leakage of liquid at the time of falling.

本発明にかかる生体高分子溶液処理用容器は、液体を保持する容器と、前記容器の上端部にある少なくとも1つの開口部を密封する蓋部材とを含む生体高分子溶液処理用容器であって、前記蓋部材が、開封された後でも少なくとも一回再密封できることを特徴とする。   A biopolymer solution processing container according to the present invention is a biopolymer solution processing container including a container that holds a liquid and a lid member that seals at least one opening at an upper end of the container. The lid member can be resealed at least once even after being opened.

本発明にかかる前記容器を用いる生体高分子溶液処理方法は、液体を保持する容器と、前記容器の上端部にある少なくとも1つの開口部を密封し、かつ開封された後でも少なくとも一回再密封できることを特徴とする生体高分子溶液処理用容器を使用した生体高分子溶液処理方法であって、(1)液体分注手段によって、前記容器の内部に保持されている液体を吸引する又は前記容器の内部に液体を吐出するいずれかの工程と、(2)前記生体高分子溶液処理用容器を加熱する工程と、を含むことを特徴とする。   The biopolymer solution processing method using the container according to the present invention includes a container for holding a liquid and at least one opening at an upper end of the container, and is resealed at least once even after being opened. A biopolymer solution processing method using a biopolymer solution processing container, characterized in that: (1) The liquid held in the container is sucked by the liquid dispensing means, or the container Any one of the steps of discharging a liquid into the interior of the container, and (2) a step of heating the biopolymer solution processing container.

(定義)
本発明でいう「開封された後でも少なくとも一回再密封できること」とは、本来密封状態にある蓋部材が穿刺、貫通されることなどによって開封された後に再度密封の状態になることを意味する。その一例としては、後述するように、蓋部材に配置されているスリットが貫通された後に、前記スリットが配置された蓋部材の表面に設けられている再密封用物質が加熱によって融解され、前記スリットの隙間を閉塞することによって、当該蓋部材を再度密封した状態にすることが挙げられる。
(Definition)
In the present invention, “being able to be resealed at least once even after being opened” means that the lid member that is originally in a sealed state is opened again by being punctured, penetrated, etc. and then re-sealed. . As an example, as will be described later, after the slit arranged in the lid member is penetrated, the resealing substance provided on the surface of the lid member in which the slit is arranged is melted by heating, By closing the gap of the slit, the lid member can be sealed again.

本発明は、容器の内部に分注手段であるピペットチップ等が進入し、溶液等を吸引または吐出する際の溶液の飛沫やエアロゾルの飛散を抑制し、かつ、分注手段を取り外した後の溶液の蒸発や転倒時の溶液の漏れ出しを防止することができる。   In the present invention, a pipette tip or the like that is a dispensing means enters the inside of the container, suppresses the splashing of the solution or the scattering of the aerosol when the solution or the like is sucked or discharged, and the dispensing means is removed. It is possible to prevent the solution from leaking when the solution evaporates or falls.

以下、本発明にかかる生体高分子溶液処理用容器及び該生体高分子溶液処理用容器を使用した生体高分子溶液処理方法の好ましい実施の形態について説明する。ただし、本発明の技術的範囲は何らこれに限定されるものではない。   Hereinafter, preferred embodiments of a biopolymer solution processing container and a biopolymer solution processing method using the biopolymer solution processing container according to the present invention will be described. However, the technical scope of the present invention is not limited to this.

本発明にかかる生体高分子溶液処理用容器は、液体を保持する容器と、前記容器の上端部にある少なくとも1つの開口部を密封する蓋部材とを含む生体高分子溶液処理用容器であって、前記蓋部材が、開封された後でも少なくとも一回再密封できることを特徴とする。本発明の第1実施形態は、図1に示すとおりである。   A biopolymer solution processing container according to the present invention is a biopolymer solution processing container including a container that holds a liquid and a lid member that seals at least one opening at an upper end of the container. The lid member can be resealed at least once even after being opened. The first embodiment of the present invention is as shown in FIG.

(第1実施形態)
図1に、本発明の第1実施形態の断面図が示されている。本実施形態の容器は、生体高分子、特に核酸溶液処理用のもので、液体を保持することが可能な容器であればよく、特に好ましくはウェルである。本実施形態で用いるウェルは、当該技術領域において通常に用いられるウェルプレートを構成する個々の液体保持部(図2の12)であることを意味する。本発明のウェルの材質は、内部に保持する試薬に悪影響を与えなければ特に制限はないが、特にプラスチック製のウェルが好ましい。たとえば、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリエチレンからなる群から選んだ材料、あるいはそれらの混合物で形成されていることが好ましい。
(First embodiment)
FIG. 1 shows a cross-sectional view of a first embodiment of the present invention. The container of this embodiment is for treating biopolymers, particularly nucleic acid solutions, and may be any container that can hold a liquid, and is particularly preferably a well. The well used in the present embodiment means an individual liquid holding unit (12 in FIG. 2) that constitutes a well plate normally used in the technical area. The material of the well of the present invention is not particularly limited as long as it does not adversely affect the reagent held inside, but a plastic well is particularly preferable. For example, it is preferably formed of a material selected from the group consisting of polypropylene, polystyrene, and polyethylene, or a mixture thereof.

ウェルを単独で使用することもできるが、核酸増幅検査等で行われる操作では多種類の液体を使用することが多いため、複数のウェルが連結したウェルプレートのような容器を用いることが好ましい。図2(a)は2つのウェルを有するウェルプレート11の平面図を、図2(b)はその断面図を示す。ウェルプレート11は、液体を保持することが可能な液体保持部12とその上端部にある開口部13を有するプラスチック製の容器である。   Although wells can be used singly, it is preferable to use a container such as a well plate in which a plurality of wells are connected because operations in nucleic acid amplification tests and the like often use many kinds of liquids. 2A is a plan view of the well plate 11 having two wells, and FIG. 2B is a cross-sectional view thereof. The well plate 11 is a plastic container having a liquid holding part 12 capable of holding a liquid and an opening 13 at an upper end thereof.

ウェルの個数は特に制限されないが、核酸増幅検査等で行われる処理は多数の液体試薬を使用するため、少なくとも2つ以上のウェルが連結されていることが好ましい。また、現代の核酸処理では機械による自動化が進んでいるため、本発明の容器(ウェル)は全自動化もしくは半自動化に対応できるような2以上の容器(ウェル)の集合体を用いることができる。   Although the number of wells is not particularly limited, it is preferable that at least two or more wells are connected because a process performed in nucleic acid amplification inspection or the like uses a large number of liquid reagents. In modern nucleic acid processing, since automation by a machine is progressing, the container (well) of the present invention can use an assembly of two or more containers (wells) that can be fully automated or semi-automated.

本発明の容器に保持される液体は、生体高分子溶液及び当該生体高分子を処理するために必要とされる全ての試薬である。本発明で処理する生体高分子は、デオキシリボ核酸(DNA:Deoxyribonucleic acid)、リボ核酸(RNA:Ribonucleic
acid)等の核酸、蛋白質、アミノ酸等であり、特に核酸であることが好ましい。
The liquid retained in the container of the present invention is a biopolymer solution and all the reagents required to process the biopolymer. Biopolymers to be treated in the present invention include deoxyribonucleic acid (DNA) and ribonucleic acid (RNA).
acid) and the like, proteins, amino acids and the like, and particularly preferred are nucleic acids.

生体高分子溶液を処理するために必要とされる試薬とは、処理目的等によって異なるが、たとえば、PCR法で核酸の増幅処理を行うときには、そのために必要な核酸増幅試薬である。すなわち、DNAを増幅する場合、その塩基成分(アデニン、シトシン、グアニン及びチミンの4種)と糖(2-デオキシ-D-リボース)から成る4種のモノヌクレオチド(すなわち、デオキシアデノシン5'―三リン酸、デオキシシチジン5'―三リン酸、デオキシグアノシン5'―三リン酸及びデオキシチミジン5'―三リン酸)(一般に、これら4種のモノヌクレオチドを総称して、「dNTPs」という。)、又は、デオキシイノシン5'―三リン酸等も含んでよい。RNAを合成する場合に必要な試薬は、塩基成分(アデニン、シトシン、グアニン及びウラシルの4種)と糖(リボース)から成る4種のモノヌクレオチドであり得る。   The reagent required for processing the biopolymer solution differs depending on the purpose of processing, but is a nucleic acid amplification reagent required for the amplification of nucleic acid by, for example, the PCR method. That is, when amplifying DNA, four mononucleotides (ie, deoxyadenosine 5′-three) consisting of its base components (four types of adenine, cytosine, guanine and thymine) and sugar (2-deoxy-D-ribose) are used. Phosphoric acid, deoxycytidine 5′-triphosphate, deoxyguanosine 5′-triphosphate and deoxythymidine 5′-triphosphate) (generally, these four types of mononucleotides are collectively referred to as “dNTPs”) Alternatively, deoxyinosine 5′-triphosphate may be included. Reagents necessary for synthesizing RNA may be four kinds of mononucleotides consisting of a base component (four kinds of adenine, cytosine, guanine and uracil) and a sugar (ribose).

また、核酸の精製に必要な物質を核酸精製試薬として含むことができる。たとえば、核酸を可逆的に吸着又は溶出することができる物質を固定した担体を用いる方法の場合に使用するシリカあるいはイオン交換体などが例として挙げられる。
すなわち本発明においては、容器に保持される液体が核酸溶液と、核酸増幅試薬及び核酸精製試薬からなるグループから選択される少なくとも一種類の試薬とであることが好ましい。
In addition, substances necessary for nucleic acid purification can be included as a nucleic acid purification reagent. For example, silica or an ion exchanger used in the case of a method using a carrier on which a substance capable of reversibly adsorbing or eluting nucleic acid is used is exemplified.
That is, in the present invention, the liquid held in the container is preferably a nucleic acid solution and at least one kind of reagent selected from the group consisting of a nucleic acid amplification reagent and a nucleic acid purification reagent.

本発明の前記容器は上端部に開口部を少なくとも1つ有する。当該開口部の形状は特に限定されたものではなく、円形、楕円形、三角形もしくは多角形等であって、ピペットチップ等の液体分注手段による液体の吸引又は吐出等に対して障害にならない形状であればよく、本発明においては特に円形であることが好ましい。   The container of the present invention has at least one opening at the upper end. The shape of the opening is not particularly limited, and is a circle, ellipse, triangle, polygon, or the like that does not hinder liquid suction or discharge by a liquid dispensing means such as a pipette tip. In the present invention, a circular shape is particularly preferable.

本発明においては、蓋を開閉するための煩雑な作業や機構を必要とせず、ピペットチップ等の液体分注手段が容易に容器内部に進入可能とするために、容器の上端部にある前記開口部には、蓋部材を設けることが好ましい。当該蓋部材は、当該容器(ウェル)に保持されている液体を容器(ウェル)の外に漏らさないために、機械的又は化学的な接着によって、本発明の開口部に離脱不可に固定される。   In the present invention, the opening at the upper end of the container does not require a complicated operation or mechanism for opening and closing the lid, and allows a liquid dispensing means such as a pipette tip to easily enter the container. The part is preferably provided with a lid member. The lid member is fixed to the opening of the present invention by mechanical or chemical adhesion so that the liquid held in the container (well) does not leak out of the container (well). .

本発明では、化学的接着とは、2つの結合部分間に、粘着剤もしくは接着剤、好ましくは液体接着剤を用いて接着することを意味する。一方、機械的接着とは、表面の性質、たとえば、多孔質又は繊維質表面の微視的なかみ合い(たとえば、ベルクロ式閉鎖)で、又は、溶着等の方法で接着させることを意味する。 In the present invention, chemical adhesion means adhesion between two bonding parts using an adhesive or an adhesive, preferably a liquid adhesive. On the other hand, mechanical adhesion means adhesion by surface properties, for example, microscopic engagement of a porous or fibrous surface (for example, Velcro closure) or by a method such as welding.

また、当該蓋部材は、輸送や一時的な保存時の蒸発や汚染を防止するため、蒸気を通さない材料であることが好ましい。本実施形態では、当該蓋部材が弾性シート状物質からなる部材であることが好ましい。ここで、当該弾性シートは、使用する試薬を通さない材料であれば良く、たとえば、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリスチレン、ポリアミド、ポリブチレンテレフタレート、ポリカーボネート、ポリイミド、天然ゴム、シリコーンゴム、ブロモブチルゴム、クロロブチルゴム等からなる群から選んだ材料が好ましい。また、これらの材料の混合物又はこれらの材料の少なくとも2つの異なる層から作製したシートであっても良い。   In addition, the lid member is preferably a material that does not allow vapor to pass through in order to prevent evaporation and contamination during transportation and temporary storage. In the present embodiment, the lid member is preferably a member made of an elastic sheet material. Here, the elastic sheet may be any material that does not pass the reagent used, for example, polyethylene, polypropylene, polyethylene terephthalate, polystyrene, polyamide, polybutylene terephthalate, polycarbonate, polyimide, natural rubber, silicone rubber, bromobutyl rubber, A material selected from the group consisting of chlorobutyl rubber and the like is preferred. It may also be a sheet made from a mixture of these materials or at least two different layers of these materials.

図3(a)は本実施形態で用いる弾性シート21の平面図を、図3(b)はその断面図を示している。本発明において最も好ましい弾性シート21はシリコーンシートである。   3A is a plan view of the elastic sheet 21 used in the present embodiment, and FIG. 3B is a cross-sectional view thereof. The most preferred elastic sheet 21 in the present invention is a silicone sheet.

本実施形態において、前記蓋部材にスリットが設けられていることが好ましい。特に弾性シートに放射状のスリットが設けられていることが好ましい。図3に示すように、弾性シート21は、ウェルプレート11の開口部13と位置が合うように形成されたスリット22を有する。スリット22は、弾性シート21に対する線状の切り込みであり、スリット22が弾性シート21の厚み全体を貫いてもよい。核酸増幅や核酸精製等の処理前に完全密封状態を保持するために、スリット22の深さがシート21の厚さ未満であることが好ましい。また、スリット22がミシン目のような構造となってシート21の上に設けられることもできる。   In this embodiment, it is preferable that the lid member is provided with a slit. In particular, it is preferable that radial slits are provided in the elastic sheet. As shown in FIG. 3, the elastic sheet 21 has a slit 22 formed so as to be aligned with the opening 13 of the well plate 11. The slit 22 is a linear cut with respect to the elastic sheet 21, and the slit 22 may penetrate the entire thickness of the elastic sheet 21. The depth of the slit 22 is preferably less than the thickness of the sheet 21 in order to maintain a completely sealed state before processing such as nucleic acid amplification and nucleic acid purification. Further, the slit 22 can be provided on the sheet 21 in a perforated structure.

スリット22が完全に貫かない場合では、完全な密封状態を保持するために、放射状のスリット22の線が交差する中心点23を貫通しないことが好ましい。また、後にピペットチップ等の液体分注手段が容易に貫通するためには、放射状のスリット22の線が交差する中心点23のみを貫通してもよい。この場合では、当該貫通された中心点23は、蓋部材である弾性シートの弾性によって、閉止することができるため本発明の容器内に保持されている液体の蒸発や漏れ出しを防ぐことができる。   In the case where the slit 22 does not penetrate completely, it is preferable not to penetrate the central point 23 where the lines of the radial slits 22 intersect in order to maintain a complete sealed state. Further, in order for a liquid dispensing means such as a pipette tip to easily penetrate later, only the central point 23 where the lines of the radial slits 22 intersect may be penetrated. In this case, the penetrating center point 23 can be closed by the elasticity of the elastic sheet, which is a lid member, so that evaporation and leakage of the liquid held in the container of the present invention can be prevented. .

特に、前記ピペットチップ等の液体分注手段が中心点23から当該容器(ウェル)に挿入される場合、弾性シート21が貫通していないスリット22に沿って必要最小限に引き裂かれる。そのため、貫通していないスリット22の切り込みの深さが弾性シート21の厚みの少なくとも50%から90%までであることが好ましい。なお、本実施形態において、スリット22を設けているシート21は液体分注手段によって容易に引き裂かれるため、前記液体分注手段が金属でできたニードルに限定することなく、通常のピペットチップを用いることができる。   In particular, when the liquid dispensing means such as the pipette tip is inserted into the container (well) from the center point 23, the elastic sheet 21 is torn to the minimum necessary along the slit 22 that does not penetrate therethrough. Therefore, it is preferable that the depth of the slit 22 not penetrating is at least 50% to 90% of the thickness of the elastic sheet 21. In the present embodiment, since the sheet 21 provided with the slits 22 is easily torn by the liquid dispensing means, the liquid dispensing means is not limited to a needle made of metal, and a normal pipette tip is used. be able to.

スリット22は、弾性シートの厚さ方向に対して、図7のように斜めに入っていれば、切断面の接触面積を増大することができる。すなわち、ピペットチップ等の液体分注手段によって引き裂かれたスリット22と当該ピペットチップとの間の密封性と、又は引き裂かれたスリット22が水平状態に復元した際の密封性とを高めることができるため、斜めの切断面はより好ましい形態である。   If the slit 22 is obliquely inserted as shown in FIG. 7 with respect to the thickness direction of the elastic sheet, the contact area of the cut surface can be increased. That is, the sealing property between the slit 22 torn by the liquid dispensing means such as a pipette tip and the pipette tip or the sealing property when the torn slit 22 is restored to the horizontal state can be improved. Therefore, the oblique cut surface is a more preferable form.

スリット22は、ピペットチップ等の液体分注手段の進入の障壁とならずに容易に通過でき、かつ、水平状態に復元した際に密封性を保つことができれば、特に制限されないが、少なくとも2本が各スリットの中点で交差し、放射状に形成されていることが好ましい。また、押し下げられた弾性シート21と液体分注手段との間に生じる間隙を最小限にするため、3本以上のスリット22を有することがより好ましい。本実施形態は、図3に示すようにスリットが4本で構成されている。スリット22が2本以上ある場合は、それぞれのスリット22の線が同じ長さであってもよく、異なる長さであってもよい。   The slit 22 is not particularly limited as long as it can easily pass through without being a barrier to entry of liquid dispensing means such as a pipette tip, and can maintain hermeticity when restored to a horizontal state. Are preferably formed radially, intersecting at the midpoint of each slit. It is more preferable to have three or more slits 22 in order to minimize a gap generated between the pushed-down elastic sheet 21 and the liquid dispensing means. In the present embodiment, four slits are formed as shown in FIG. When there are two or more slits 22, the lines of the respective slits 22 may have the same length or different lengths.

スリット22の線の長さは液体分注手段が通過できれば特に制限はないが、密封性を保つためには、開口部13の内径よりも小さいことが好ましい。また、放射状のスリット22を有する弾性シート21は単独で使用してもよいが、スリット22の間の僅かな隙間を塞ぐため、複数枚を重ねて使用しても良い。この際、各弾性シート21のスリット22同士が中心点23以外は重ならないように配置することが好ましい。   The length of the line of the slit 22 is not particularly limited as long as the liquid dispensing means can pass through, but is preferably smaller than the inner diameter of the opening 13 in order to maintain the sealing performance. Further, the elastic sheet 21 having the radial slits 22 may be used alone, but a plurality of sheets may be used in an overlapping manner in order to close a slight gap between the slits 22. At this time, it is preferable that the slits 22 of the elastic sheets 21 are arranged so as not to overlap except for the center point 23.

本発明の好ましい蓋部材の厚さは、通常の分注手段であるピペットチップを容易に挿入することができるぐらいの厚さであればよい。たとえば、弾性シートを用いる場合に、スリット22との関係で、ピペットチップが容易に挿入するぐらいの厚さであればよい。本実施形態では、150μm以下であり、好ましくは40μmから100μmまでであることが好ましい。   The thickness of the preferable lid member of the present invention may be a thickness that allows a pipette tip, which is a normal dispensing means, to be easily inserted. For example, when an elastic sheet is used, the thickness may be such that the pipette tip can be easily inserted in relation to the slit 22. In the present embodiment, it is 150 μm or less, preferably 40 μm to 100 μm.

本実施形態では、弾性シート21の上にさらにクランプ31を設けることが好ましい。図4(a)はクランプ31の平面図を、図4(b)はその断面図を示している。クランプ31は分注手段であるピペットチップ進入または除去時の核酸処理容器の浮き上がりの防止、及びスリット22を閉塞する後述する再密封用物質の固定に使用される。   In the present embodiment, it is preferable to further provide a clamp 31 on the elastic sheet 21. 4A is a plan view of the clamp 31, and FIG. 4B is a cross-sectional view thereof. The clamp 31 is used to prevent the nucleic acid processing container from floating when entering or removing the pipette tip, which is a dispensing means, and to fix a re-sealing substance (described later) that closes the slit 22.

クランプ31はウェルプレート11の開口部13と位置が合うように形成された空孔32を有する。空孔32の内径はピペットチップで分注する際の妨げとならなければ特に制限されないが、開口部13の内径と同じであることが好ましい。また、クランプ31は製作コストを考えると、プラスチック製であることが好ましいが、鉄、アルミニウム等の金属製であっても良い。   The clamp 31 has a hole 32 formed so as to be aligned with the opening 13 of the well plate 11. The inner diameter of the air holes 32 is not particularly limited as long as it does not hinder dispensing with a pipette tip, but is preferably the same as the inner diameter of the opening 13. The clamp 31 is preferably made of plastic in view of manufacturing cost, but may be made of metal such as iron or aluminum.

前記液体分注手段は汚染されない工夫が施されていることが好ましく、液体が直接に接触する部分は交換可能であることが好ましい。具体的には、分注機に設けられたノズルからの着脱が可能なピペットをノズルに装着して用いることが好ましく、本実施形態は、プラスチック製のピペットチップを介して分注が行われることが好ましい。特に、分注機本体の汚染を防止するため、エアロゾル耐性ピペットチップを用いることが好ましい。   The liquid dispensing means is preferably devised so as not to be contaminated, and the part where the liquid is in direct contact is preferably exchangeable. Specifically, it is preferable to use a pipette that can be attached to and detached from the nozzle provided in the dispenser, and that this embodiment is used for dispensing through a plastic pipette tip. Is preferred. In particular, it is preferable to use an aerosol-resistant pipette tip to prevent contamination of the dispenser body.

蓋部材(弾性シート21)の少なくとも1つの表面に前記蓋部材を再密封する再密封用物質4が設けられているので、蓋部材(弾性シート)が開封された後でも少なくとも一回再密封することができる。液体分注手段による吸引または吐出操作によって、スリット22の一部もしくは全部が貫通されることによる溶液蒸発や転倒時の溶液の漏れ出しを防止するために、再密封用物質4はスリット22を物理的に閉塞し、弾性シート21を再密封する。   Since the resealing substance 4 for resealing the lid member is provided on at least one surface of the lid member (elastic sheet 21), it is resealed at least once even after the lid member (elastic sheet) is opened. be able to. In order to prevent solution evaporation due to part or all of the slit 22 being penetrated by suction or discharge operation by the liquid dispensing means, the re-sealing substance 4 physically disposes the slit 22. The elastic sheet 21 is resealed.

本実施形態では、貫通されたスリット22によって開封された弾性シート21を少なくとも一回再密封させる。よって、液体分注手段による吸引または吐出操作後に溶液蒸発や転倒時の溶液の漏れ出しを防止する。図5(a)は再密封用物質4の平面図を、図5(b)はその断面図を示している。   In this embodiment, the elastic sheet 21 opened by the penetrated slit 22 is resealed at least once. Therefore, it prevents the solution from leaking when the solution evaporates or falls after the suction or discharge operation by the liquid dispensing means. FIG. 5A shows a plan view of the resealable material 4, and FIG. 5B shows a cross-sectional view thereof.

本実施形態では、再密封物質4を予め所定の形状に加工する。再密封用物質4の形状加工は、再密封用物質4を融点以上に加熱した後、所望の形状に成型可能な型に流し込んだ後に、再密封用物質4の融点以下に冷却することで達成し、また、切削等の他の方法によって行っても良い。   In this embodiment, the reseal material 4 is processed into a predetermined shape in advance. The shape processing of the resealable material 4 is achieved by heating the resealable material 4 to a temperature higher than the melting point, pouring it into a mold that can be molded into a desired shape, and then cooling it to a temperature lower than the melting point of the resealable material 4. However, other methods such as cutting may be used.

加熱時に容器内部の液体から発生する蒸気のことを考えると、再密封用物質4は、融点が低い物質であることが好ましい。また、特別に冷却が必要な試薬を用いる場合は除くが、液体の分注は通常、室温管理された環境(20〜25℃)で行われることが多いことから、再密封用物質4は少なくとも26℃以上の融点を有する物質であることが好ましい。本発明においては、特に融点が27℃〜30℃の物質を用いることが好ましい。これらの性質を有する物質としては、例えば、ポリオレフィン系ワックス、パラフィン系ワックスなどの比較的低い融点を有するワックスが挙げられ、これらのうちの一種類の物質またはこれらの物質の混合物を使用することも可能である。   Considering the vapor generated from the liquid inside the container at the time of heating, the resealing substance 4 is preferably a substance having a low melting point. In addition, except for the case where a reagent that requires special cooling is used, liquid dispensing is usually performed in an environment controlled at room temperature (20 to 25 ° C.). A substance having a melting point of 26 ° C. or higher is preferable. In the present invention, it is particularly preferable to use a substance having a melting point of 27 ° C to 30 ° C. Examples of the substance having these properties include waxes having a relatively low melting point such as polyolefin wax and paraffin wax, and one kind of these substances or a mixture of these substances may be used. Is possible.

再密封用物質4は、固体の状態でウェルプレート11の弾性シートの外表面に具備され、加熱で融解されスリット22に沿ってスリットの交差中心点23に到達してスリットを閉塞させる状態となれば、加熱を続ける必要はない。融解後に加熱を止め、融点以下とすることで、再び凝固し固体状態となり、弾性シート21の表面に凝固した固体状の膜を形成することができる。また、本実施形態において、再密封用物質4を融解させるための加熱は、再密封用物質4が設けられている弾性シート21の表面、又はウェルの上端部に対して直接的もしくは間接的に加熱することが好ましい。   The resealing material 4 is provided on the outer surface of the elastic sheet of the well plate 11 in a solid state, melted by heating, reaches the crossing center point 23 of the slit along the slit 22, and closes the slit. There is no need to continue heating. When the heating is stopped after melting and the melting point is set to be equal to or lower than the melting point, it is solidified again and becomes a solid state, and a solid film solidified on the surface of the elastic sheet 21 can be formed. In this embodiment, the heating for melting the resealing substance 4 is performed directly or indirectly on the surface of the elastic sheet 21 provided with the resealing substance 4 or the upper end of the well. It is preferable to heat.

再密封用物質4は、液体分注手段による溶液の吸引または吐出操作の障害とならず、また、操作終了後にスリット22を閉塞させる部位に配置されることが好ましい。たとえば、弾性シート21の外表面(ウェルプレート11に向いていない表面)の、スリット22の外径と開口部13の内径との間に配置されることが好ましい。また、図5に示しているようなドーナツ状であることが好ましい。ドーナツ状に加工した再密封用物質4は、その外周が空孔32の内壁に接する位置に配置されることが好ましい。   It is preferable that the resealing substance 4 does not become an obstacle to the suction or discharge operation of the solution by the liquid dispensing means, and is disposed at a site where the slit 22 is closed after the operation is completed. For example, the outer surface of the elastic sheet 21 (the surface not facing the well plate 11) is preferably disposed between the outer diameter of the slit 22 and the inner diameter of the opening 13. Moreover, it is preferable that it is donut shape as shown in FIG. The resealing material 4 processed into a donut shape is preferably disposed at a position where the outer periphery is in contact with the inner wall of the hole 32.

また、弾性シート21を2枚以上使用する場合に、再密封用物質4を当該2枚重ねの弾性シート21の間に設けることができる。ただし、この場合において、本発明で処理する生体高分子溶液及びそのための試薬が再密封用物質4と接触しないように、再密封用物質4は弾性シート21間でも、図5に示しているように、ドーナツ状に配置されることが好ましい。   Further, when two or more elastic sheets 21 are used, the resealable material 4 can be provided between the two stacked elastic sheets 21. However, in this case, the resealable material 4 is also between the elastic sheets 21 as shown in FIG. 5 so that the biopolymer solution treated in the present invention and the reagent therefor do not come into contact with the resealable material 4. In addition, it is preferably arranged in a donut shape.

弾性シート21の外表面に配置された再密封用物質4と弾性シート21とを保護するため、さらにその外側(上層)に保護シートなどが配置されても良い。本実施形態において、その保護シートはアルミシートを用いることができるが、それに限定されたものではない。図6(a)はアルミシート5の平面図を、図6(b)はその断面図を示す。アルミシート5は、表面を保護することが可能であり、ピペットチップ等の分注手段で容易に貫通することが可能であれば、アルミシートに限定されない。   In order to protect the resealable material 4 and the elastic sheet 21 disposed on the outer surface of the elastic sheet 21, a protective sheet or the like may be further disposed on the outer side (upper layer). In the present embodiment, the protective sheet can be an aluminum sheet, but is not limited thereto. 6A is a plan view of the aluminum sheet 5, and FIG. 6B is a cross-sectional view thereof. The aluminum sheet 5 is not limited to an aluminum sheet, as long as it can protect the surface and can be easily penetrated by a dispensing means such as a pipette tip.

本発明にかかる当該容器を用いる生体高分子溶液処理方法は、液体を保持する容器と、前記容器の上端部にある少なくとも1つの開口部を密封し、かつ開封された後でも少なくとも一回再密封できることを特徴とする生体高分子溶液処理用容器を使用した生体高分子溶液処理方法であって、(1)液体分注手段によって、前記容器の内部に保持されている液体を吸引する又は前記容器の内部に液体を吐出するいずれかの工程と、(2)前記生体高分子溶液処理用容器を加熱する工程と、を含むことを特徴とする。
また、(1)の工程が前記密封用物質の融点未満で行われること、かつ、(2)の工程の加熱する温度が前記再密封用物質の融点以上であることが好ましい形態である。
The biopolymer solution processing method using the container according to the present invention includes a container for holding a liquid and at least one opening at an upper end of the container, and is resealed at least once even after being opened. A biopolymer solution processing method using a biopolymer solution processing container, characterized in that: (1) The liquid held in the container is sucked by the liquid dispensing means, or the container Any one of the steps of discharging a liquid into the interior of the container, and (2) a step of heating the biopolymer solution processing container.
In addition, it is preferable that the step (1) is performed below the melting point of the sealing material, and the heating temperature in the step (2) is equal to or higher than the melting point of the resealing material.

(第2実施形態)
本発明の第2実施形態は、第1実施形態で説明した生体高分子溶液処理用容器を用いる生体高分子溶液処理方法であり、(1)液体分注手段によって、前記容器の内部に保持される液体を吸引するもしくは吐出するいずれかの工程と、(2)前記生体高分子溶液処理用容器を加熱する工程とを含む生体高分子溶液処理方法である。
(Second Embodiment)
The second embodiment of the present invention is a biopolymer solution processing method using the biopolymer solution processing container described in the first embodiment. (1) It is held inside the container by liquid dispensing means. A biopolymer solution processing method comprising either a step of sucking or discharging a liquid to be discharged and (2) a step of heating the biopolymer solution processing container.

第2実施形態において、前記液体分注手段が分注機に設けられたノズルに装着されるピペットチップを介して行われることが好ましく、また当該ピペットチップは前記ノズルから着脱可能であることが好ましい。特に全自動化もしくは半自動化に対応できるピペットチップ、又は、全自動化もしくは半自動化に対応できるノズルから着脱可能なピペットチップであることが好ましい。   In the second embodiment, the liquid dispensing means is preferably performed via a pipette tip attached to a nozzle provided in a dispenser, and the pipette tip is preferably removable from the nozzle. . In particular, a pipette tip that can be fully automated or semi-automated, or a pipette tip that is detachable from a nozzle that can be fully automated or semi-automated is preferable.

第2実施形態において、生体高分子溶液処理用容器の蓋部材には、再密封用物質4が設けられているため、工程(1)は再密封用物質4の融点未満において行うことが好ましく、具体的には25℃以下で行うことが好ましい。また、工程(2)は容器を再密封するための工程であるので、前記再密封用物質4を融解するために融点以上に加熱する必要がある。よって、工程(2)は26℃以上において行うことが好ましく、特に27℃、28℃、29℃あるいは30℃のいずれかの温度で行うことが好ましい。なお、30℃以上の加熱は本発明から除外されているわけではなく、使用する再密封用物質4によって、適宜に調整することができる。   In the second embodiment, since the lid member of the biopolymer solution processing container is provided with the resealing substance 4, the step (1) is preferably performed below the melting point of the resealing substance 4, Specifically, it is preferable to carry out at 25 degrees C or less. Further, since the step (2) is a step for resealing the container, it is necessary to heat the melting point 4 or higher in order to melt the resealable material 4. Therefore, the step (2) is preferably performed at 26 ° C. or more, and particularly preferably performed at any temperature of 27 ° C., 28 ° C., 29 ° C. or 30 ° C. Note that heating at 30 ° C. or higher is not excluded from the present invention, and can be appropriately adjusted depending on the resealing substance 4 used.

また、本実施形態において、再密封用物質4を融解させるための加熱は、生体高分子溶液処理用容器(ウェル)を加熱する工程によって行われる。特に、再密封用物質4が設けられている弾性シート21の表面、又はウェルの上端部に対して直接的もしくは間接的に加熱することが好ましい。
また、スリットを有する弾性シート21の内側にアルミシート5を設けてもよい。この場合、スリットを有する弾性シート21は再密閉の際の型枠となるので、スリット22は予め貫通している構成であってもよい。
In the present embodiment, the heating for melting the resealable substance 4 is performed by a process of heating the biopolymer solution processing container (well). In particular, it is preferable to directly or indirectly heat the surface of the elastic sheet 21 provided with the resealing substance 4 or the upper end of the well.
Moreover, you may provide the aluminum sheet 5 inside the elastic sheet 21 which has a slit. In this case, since the elastic sheet 21 having a slit becomes a mold for resealing, the slit 22 may have a structure penetrating in advance.

第2実施形態における工程(2)の加熱は、核酸等の生体高分子の増幅等における加熱とは異なるものである。たとえば、PCRによる核酸を増幅する場合の加熱工程は、通常再密封用物質4の融点以上で行うため、再密封用物質4を融解させるための加熱工程を別途することなく、PCRの加熱工程と一緒に行うことができる。   The heating in step (2) in the second embodiment is different from the heating in amplification of a biopolymer such as a nucleic acid. For example, since the heating process in the case of amplifying nucleic acid by PCR is usually performed at a temperature equal to or higher than the melting point of the resealing substance 4, a heating process for melting the resealing substance 4 is not performed separately. Can be done together.

以下、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれら実施例に何ら限定されるものではない。   EXAMPLES Hereinafter, although an Example is given and this invention is demonstrated more concretely, the technical scope of this invention is not limited to these Examples at all.

(実施例1)核酸処理容器の作製
96ウェルPCRプレート(AxyGen社の製品)に超純水200μLを分注した。各ウェルプレートの開口部の位置に合うように、4本のスリットを放射状に形成したシリコーンシートでウェルプレート上端部の開口部を覆った。前記シリコーンシートはウェルプレート側の面に粘着剤を塗布しているため、ウェルプレート上に固定することができる。さらに、ウェルプレートの開口部と同じ位置に空孔を有するプラスチック製のクランプをシート上部から固定した。
Example 1 Production of Nucleic Acid Treatment Container 200 μL of ultrapure water was dispensed into a 96-well PCR plate (AxyGen product). The opening at the upper end of the well plate was covered with a silicone sheet in which four slits were radially formed so as to match the position of the opening of each well plate. Since the silicone sheet is coated with an adhesive on the surface on the well plate side, it can be fixed on the well plate. Furthermore, a plastic clamp having holes at the same position as the opening of the well plate was fixed from the top of the sheet.

次に、ドーナツ状に加工されたポリオレフィン系ワックスであるCPAO−1(融点28℃、出光興産(株)社の製品)をクランプの空孔に配置した。ドーナツ状のCPAO−1は、融点以上に加熱されて液体となった状態でドーナツ状を有する型に流し込み、融点以下に冷却することで作製した。ドーナツ状CPAO−1の中心部(図5の点41)とスリットの交差点(図3の点23)が重なるように配置することで、ピペットチップによる吸引または吐出作業時の障害とならないようにした。最後に、表面を保護するためのアルミシートを貼り付け、所望の核酸処理容器を得た。   Next, CPAO-1 (melting point: 28 ° C., product of Idemitsu Kosan Co., Ltd.), which is a polyolefin wax processed into a donut shape, was placed in the holes of the clamp. The donut-shaped CPAO-1 was produced by pouring into a mold having a donut shape in a state of being heated to a temperature higher than the melting point and becoming a liquid, and cooling to a temperature lower than the melting point. Arranged so that the center of the doughnut-shaped CPAO-1 (point 41 in FIG. 5) and the intersection of the slits (point 23 in FIG. 3) overlap each other, so as not to obstruct the suction or discharge operation by the pipette tip. . Finally, an aluminum sheet for protecting the surface was attached to obtain a desired nucleic acid processing container.

上記手順によって作製した核酸処理容器をピペットチップで貫通し、内部の超純水を攪拌したところ、溶液の飛沫等が容器外部へ飛散することはなかった。また、分注終了後に、核酸処理容器の上端部を30℃に加熱し、CPAO−1を融解することでスリットを閉塞した。スリット閉塞後、室温(25℃)で48時間放置したが、核酸処理容器の重量変化はほとんどなく、内部の溶液の蒸発はほとんど確認されなかった。   When the nucleic acid processing container produced by the above procedure was penetrated with a pipette tip and the ultrapure water inside was stirred, the droplets of the solution did not scatter to the outside of the container. Moreover, the slit was obstruct | occluded by heating the upper end part of the nucleic acid processing container to 30 degreeC after completion | finish of dispensing, and melt | dissolving CPAO-1. After closing the slit, it was allowed to stand at room temperature (25 ° C.) for 48 hours, but there was almost no change in the weight of the nucleic acid treatment container, and evaporation of the internal solution was hardly confirmed.

(実施例2)核酸処理容器を使用した核酸処理方法
実施例1の手順に従い、核酸精製試薬を保持した核酸処理容器を作製した。核酸精製試薬には、ChargeSwitch PCR Clean-Up System(インビトロジェン株式会社の製品)を使用し、PCR反応後の試料の精製操作を行った。使用済みの各ウェルは上部を加熱し、スリットを閉塞した。
Example 2 Nucleic Acid Processing Method Using Nucleic Acid Processing Container A nucleic acid processing container holding a nucleic acid purification reagent was prepared according to the procedure of Example 1. ChargeSwitch PCR Clean-Up System (product of Invitrogen Corporation) was used as the nucleic acid purification reagent, and the sample was purified after the PCR reaction. Each used well was heated at the top to close the slit.

各試薬を使用する際に、溶液の飛沫が外部へ飛散することは確認されなかった。また、スリット閉塞の後に核酸処理容器の重量はほとんど変化せず、内部の溶液の蒸発はほとんど確認されなかった。   When using each reagent, it was not confirmed that the droplets of the solution were scattered outside. Further, the weight of the nucleic acid treatment container hardly changed after the slit was closed, and the evaporation of the internal solution was hardly confirmed.

本発明は、生体高分子、特に核酸の増幅及び精製などの処理を行う際に好適な容器を提供する。また、当該容器を使用した処理方法を提供する。当該容器及び方法は、前記処理を自動装置で行う場合に好適である。   The present invention provides a container suitable for processing such as amplification and purification of biopolymers, particularly nucleic acids. Moreover, the processing method using the said container is provided. The said container and method are suitable when performing the said process with an automatic apparatus.

本発明の第1実施形態における核酸処理容器の構成を示す断面図である。It is sectional drawing which shows the structure of the nucleic acid processing container in 1st Embodiment of this invention. (a)は本発明の第1実施形態における核酸処理容器を構成するウェルの平面図、(b)はその断面図である。(A) is a top view of the well which comprises the nucleic acid processing container in 1st Embodiment of this invention, (b) is the sectional drawing. (a)は本発明の第1実施形態における核酸処理容器を構成する弾性シートの平面図、(b)はその断面図である。(A) is a top view of the elastic sheet which comprises the nucleic acid processing container in 1st Embodiment of this invention, (b) is the sectional drawing. (a)は本発明の第1実施形態における核酸処理容器を構成するクランプの平面図、(b)はその断面図である。(A) is a top view of the clamp which comprises the nucleic acid processing container in 1st Embodiment of this invention, (b) is the sectional drawing. (a)は本発明の第1実施形態における核酸処理容器を構成するスリットを閉塞する物質の平面図、(b)はその断面図である。(A) is a top view of the substance which obstruct | occludes the slit which comprises the nucleic acid processing container in 1st Embodiment of this invention, (b) is the sectional drawing. 本発明の第1実施形態における核酸処理容器を構成するアルミシートの平面図及び断面図である。It is the top view and sectional drawing of the aluminum sheet which comprise the nucleic acid processing container in 1st Embodiment of this invention. 本発明の第1実施形態における、弾性シートの厚さ方向に対して斜めの貫通していないスリットの切断面である。It is a cut surface of the slit which has not penetrated diagonally with respect to the thickness direction of an elastic sheet in a 1st embodiment of the present invention.

符号の説明Explanation of symbols

4:再密封用物質
5:アルミシート
11:ウェルプレート
12:液体保持部
13:開口部
21:弾性シート
22:スリット
23:中心点
31:クランプ
32:空孔
4: Resealable material 5: Aluminum sheet 11: Well plate 12: Liquid holding part 13: Opening part 21: Elastic sheet 22: Slit 23: Center point 31: Clamp 32: Hole

Claims (12)

液体を保持する容器と、前記容器の上端部にある少なくとも1つの開口部を密封する蓋部材とを含む生体高分子溶液処理用容器であって、前記蓋部材が、開封された後でも少なくとも一回再密封できることを特徴とする生体高分子溶液処理用容器。   A biopolymer solution processing container comprising a container that holds a liquid and a lid member that seals at least one opening at an upper end of the container, wherein at least one of the lid members is opened. A container for treating a biopolymer solution, which can be resealed once. 前記容器に保持される液体が核酸溶液と、核酸増幅試薬及び核酸精製試薬からなるグループから選択される少なくとも一種類の試薬とであることを特徴とする請求項1に記載の生体高分子溶液処理用容器。   2. The biopolymer solution treatment according to claim 1, wherein the liquid held in the container is a nucleic acid solution and at least one kind of reagent selected from the group consisting of a nucleic acid amplification reagent and a nucleic acid purification reagent. Container. 前記蓋部材が弾性シート状物質からなることを特徴とする請求項1又は請求項2に記載の生体高分子溶液処理用容器。   3. The biopolymer solution processing container according to claim 1, wherein the lid member is made of an elastic sheet material. 前記蓋部材に少なくとも1つスリットが設けられていることを特徴とする請求項1ないし請求項3のいずれかに記載の生体高分子溶液処理用容器。   The biopolymer solution processing container according to claim 1, wherein at least one slit is provided in the lid member. 前記蓋部材の少なくとも1つの表面に前記蓋部材を再密封する再密封用物質が設けられていることを特徴とする請求項1ないし請求項4のいずれかに記載の生体高分子溶液処理用容器。   The biopolymer solution processing container according to any one of claims 1 to 4, wherein a resealing substance for resealing the lid member is provided on at least one surface of the lid member. . 前記再密封用物質の融点は26℃であることを特徴とする請求項5に記載の生体高分子溶液処理用容器。   The biopolymer solution processing container according to claim 5, wherein the resealing material has a melting point of 26 ° C. 前記再密封用物質が、パラフィン系ワックス及びポリオレフィン系ワックスからなるグループから選択される少なくとも一種類の物質であることを特徴とする請求項5又は請求項6に記載の生体高分子処理用容器。   The biopolymer processing container according to claim 5 or 6, wherein the resealing substance is at least one substance selected from the group consisting of paraffin wax and polyolefin wax. 前記請求項1から請求項7に記載のいずれか1項に記載の生体高分子溶液処理用容器を使用した生体高分子溶液処理方法であって、
(1)液体分注手段によって、前記容器の内部に保持されている液体を吸引する又は前記容器の内部に液体を吐出するいずれかの工程と、
(2)前記生体高分子溶液処理用容器を加熱する工程と
を含むことを特徴とする生体高分子溶液処理方法。
A biopolymer solution treatment method using the biopolymer solution treatment container according to any one of claims 1 to 7,
(1) Either step of sucking the liquid held inside the container or discharging the liquid into the container by the liquid dispensing means;
(2) A method of treating a biopolymer solution, comprising the step of heating the biopolymer solution treatment container.
前記液体分注手段が分注機に設けられたノズルに装着されるピペットチップを介して分注を行うことを特徴とする請求項8に記載の生体高分子溶液処理方法。   9. The biopolymer solution processing method according to claim 8, wherein the liquid dispensing means performs dispensing via a pipette tip attached to a nozzle provided in a dispenser. 前記ピペットチップは前記ノズルから着脱可能であることを特徴とする請求項9に記載の生体高分子溶液処理方法。   The biopolymer solution processing method according to claim 9, wherein the pipette tip is detachable from the nozzle. 前記(1)の工程が前記密封用物質の融点未満で行われること、かつ、前記(2)の工程の加熱する温度が前記再密封用物質の融点以上であることを特徴とする請求項8ないし請求項10のいずれかに記載の生体高分子溶液処理方法。   9. The step (1) is performed below the melting point of the sealing material, and the heating temperature in the step (2) is equal to or higher than the melting point of the resealing material. The biopolymer solution treatment method according to any one of claims 10 to 10. 前記(1)の工程が25℃以下で行われることと、前記(2)の工程の加熱する温度が26℃以上であることとを特徴とする請求項8ないし請求項11のいずれかに記載の生体高分子溶液処理方法。   12. The process according to claim 8, wherein the step (1) is performed at 25 ° C. or less, and the heating temperature in the process (2) is 26 ° C. or more. The biopolymer solution processing method.
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