JP2010069031A - Sheet-like fibrin glue adhesive - Google Patents
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本発明は、有効成分としてフィブリノゲンが固定化された生体吸収性支持体（以下、「フィブリノゲン固定化支持体」とする）、及び有効成分としてトロンビンが固定化された生体吸収性支持体（以下、「トロンビン固定化支持体」とする）より構成され、フィブリノゲン固定化支持体が非イオン界面活性剤を含有することを特徴とするシート状フィブリン糊接着剤に関する。 The present invention comprises a bioabsorbable support on which fibrinogen is immobilized as an active ingredient (hereinafter referred to as “fibrinogen-immobilized support”), and a bioabsorbable support on which thrombin is immobilized as an active ingredient (hereinafter, referred to as “fibrinogen-immobilized support”). The present invention relates to a sheet-like fibrin glue adhesive, characterized in that the fibrinogen-immobilized support contains a nonionic surfactant.
フィブリノゲンは、血液凝固カスケードの最終段階に存在する非常に重要な凝固因子である。血管が損傷を受けると凝固系の活性化が生じ、最終的に活性化されたトロンビンが可溶性フィブリノゲンを不溶性のフィブリンに変換する。このフィブリンは接着力を有し止血および損傷治癒に重要な機能を発揮する。 Fibrinogen is a very important clotting factor present in the final stage of the blood clotting cascade. When a blood vessel is damaged, activation of the coagulation system occurs, and finally activated thrombin converts soluble fibrinogen into insoluble fibrin. This fibrin has adhesive strength and plays an important role in hemostasis and wound healing.
医療現場、特に、外科手術においては、止血及び組織閉鎖等の組織接着操作は極めて重要な位置づけにあり、本原理を応用したフィブリン糊接着剤が幅広い外科手術の現場で利用されている。 Tissue bonding operations such as hemostasis and tissue closure are extremely important in the medical field, especially in surgical operations, and fibrin glue adhesives applying this principle are used in a wide range of surgical fields.
フィブリン糊接着剤の使用方法については、これまで様々な検討が加えられ改善が図られており、フィブリノゲン溶液及びトロンビン溶液を患部に塗布または噴霧する液状型製剤（２液混合製剤：特許文献１、特許文献２）やコラーゲン等の支持体にフィブリノゲンとトロンビンを混合固定化したシートを患部に貼付するシート製剤（特許文献３）がある。
Various studies have been made to improve the use of the fibrin glue adhesive so far, and a liquid type preparation (two-component mixed preparation:
しかしながら、現行の液状型製剤においては、凍結乾燥されたフィブリノゲンとトロンビンそれぞれを使用時に溶解して用いるため、凍結乾燥製剤の溶解に数分程度の時間を要し、緊急時の手術への対応の面や簡便性において満足できる剤型とは言えない。 However, in the current liquid type preparations, lyophilized fibrinogen and thrombin are dissolved and used at the time of use, so it takes about several minutes to dissolve the lyophilized preparation, and it is necessary to respond to emergency surgery. It cannot be said that the dosage form is satisfactory in terms of surface and simplicity.
また、上記フィブリン糊接着剤においては、フィブリノゲン濃度が高濃度であるほど強い接着力が得られることから、強力な接着力を実現させるためには、高濃度のフィブリノゲンに少量の高濃度トロンビンを作用させることが必要とされている。 In addition, in the above fibrin glue adhesive, the higher the fibrinogen concentration, the stronger the adhesive strength can be obtained. In order to realize strong adhesive strength, a small amount of high concentration thrombin acts on high concentration fibrinogen. It is necessary to make it.
しかしながら、現行の液状型製剤は、フィブリノゲン溶液とトロンビン溶液を等量混合するため、濃度が半分になり、フィブリノゲンの最大効力を発揮できない。さらに、フィブリノゲンの濃度は現実的に１０％程度溶液が濃度限界であることから、２液等量混合の系において、濃度の改良も困難である。 However, since the current liquid type preparation mixes equal amounts of fibrinogen solution and thrombin solution, the concentration is halved and the maximum efficacy of fibrinogen cannot be exhibited. Furthermore, since the concentration of fibrinogen is practically about 10%, it is difficult to improve the concentration in a two-liquid equivalent mixing system.
この点に関して、シート製剤は、フィブリノゲン溶液を高濃度で患部に適用可能であるため、理論的には２液混合製剤より強固な接着力が期待される。また、シート製剤であれば、噴出性・滲出性の出血部位に対する圧迫止血・圧迫閉鎖が可能となり、優れた利便性が期待される。 In this regard, since the sheet preparation can be applied to the affected area with a high concentration of fibrinogen solution, the sheet preparation is theoretically expected to have a stronger adhesive force than the two-part mixture preparation. Moreover, if it is a sheet | seat formulation, the compression hemostasis and compression closure with respect to a spillable and exudative bleeding site | part will be attained, and the outstanding convenience is anticipated.
シート状の組織接着剤を使用する際には、フィブリノゲン溶液を高濃度で患部に適用するため、創傷部位に適用した際の、シート製剤の組織への浸透性を増大させる必要がある。また、シート製剤を創傷部位に密着させるために丸めたり、折り曲げたりすることがあるので、このような力に対してシートの破損やフィブリノゲン成分及びトロンビン成分の脱落が起こらないようにシートの柔軟性や２成分の保持力を上げる必要がある。 When using a sheet-like tissue adhesive, since the fibrinogen solution is applied to the affected area at a high concentration, it is necessary to increase the permeability of the sheet preparation to the tissue when applied to the wound site. In addition, the sheet preparation may be rounded or bent to bring it into close contact with the wound site, so that the flexibility of the sheet does not cause damage to the sheet or the removal of fibrinogen and thrombin components. It is necessary to increase the holding power of the two components.
しかしながら、現行のシート製剤（製品名：タココンブ／ＣＳＬベーリング社）においては、支持体であるコラーゲンは厚みがあり、また乾燥状態で臓器閉鎖部位に適用するには支持体自身が硬く柔軟性を欠くため、閉鎖すべき創傷部位での密着性が低く、効果的な閉鎖は困難である。また、本シート製剤は、支持体が馬コラーゲンであり、かつトロンビンは牛由来であり、ヒト以外の動物成分が使用されているため、適用対象がヒトである場合、異種タンパクに対する抗体の出現やプリオン病等の人畜共通感染症の危険性が存在するため理想的なものとは言い難い。 However, in the current sheet formulation (product name: Tacocomb / CSL Behring), the support collagen is thick, and the support itself is hard and lacks flexibility to be applied to an organ closure site in a dry state. Therefore, the adhesiveness at the wound site to be closed is low, and effective closure is difficult. In addition, since the support is equine collagen and thrombin is derived from cattle and uses non-human animal components, the present sheet preparation has the appearance of antibodies against heterologous proteins when the application target is human. Because there is a risk of zoonotic diseases such as prion disease, it is difficult to say that it is ideal.
また、現行のシート製剤の場合、同一シート内にフィブリノゲンとトロンビンが共存されており、使用直前に溶液に浸すと同時にフィブリノゲンとトロンビンが溶解し反応が開始するが、その反応はシート内部で起こる。そのため、たとえフィブリンが溶出したとしても組織接着部位へ十分浸透する前に凝固反応が進み、組織表面のみの接着となるため、十分な組織接着効果を示さない。 In the case of the current sheet preparation, fibrinogen and thrombin coexist in the same sheet, and the fibrinogen and thrombin are dissolved and the reaction starts at the same time as being immersed in the solution immediately before use, but the reaction occurs inside the sheet. For this reason, even if fibrin is eluted, the coagulation reaction proceeds before it sufficiently penetrates into the tissue adhesion site, and only the tissue surface is adhered, so that a sufficient tissue adhesion effect is not exhibited.
したがって、これらの現行製剤により、全ての組織接着、止血が可能となるものではなく、現行製剤では要求される接着力、閉鎖力を示さない場合がある。そのため、医療現場では更に強力な接着力を持った組織接着剤が求められている（非特許文献１）。 Therefore, these current preparations do not enable all tissue adhesion and hemostasis, and the current preparations may not exhibit the required adhesive force and closing force. Therefore, a tissue adhesive having a stronger adhesive force is required in the medical field (Non-Patent Document 1).
このようにフィブリノゲンとトロンビンの組み合わせにより、強力な接着力を示す剤形を推定することは可能だが、実際に効果と利便性が期待できるシート状フィブリン糊接着剤は確立されていない。また、強力な組織接着効果を発揮するためには、高濃度のフィブリノゲン溶液が必要であるが、フィブリノゲンの溶解性は悪いために、従来の組成のままでフィブリノゲンを支持体に固定化した場合、フィブリノゲンはほとんど溶解しないために、十分な薬効を発揮する事は期待できない。 Thus, it is possible to estimate a dosage form exhibiting strong adhesive force by combining fibrinogen and thrombin, but a sheet-like fibrin glue adhesive that can actually be expected to be effective and convenient has not been established. In order to exert a strong tissue adhesion effect, a high concentration fibrinogen solution is required, but because fibrinogen solubility is poor, when fibrinogen is immobilized on a support with the conventional composition, Since fibrinogen hardly dissolves, it cannot be expected to exhibit a sufficient medicinal effect.
本発明の課題は、組織接着剤に関する上記の諸課題を克服し、従来の組織接着剤と比較して、強い組織接着・止血効果を発揮するシート状フィブリン糊接着剤を提供することにある。 The subject of this invention is providing the sheet-like fibrin glue adhesive which overcomes said various problems regarding a tissue adhesive, and exhibits a strong tissue adhesion and hemostasis effect compared with the conventional tissue adhesive.
そこで、本願発明者らは上述の諸問題に鑑み鋭意検討した結果、フィブリノゲン固定化支持体及びトロンビン固定化支持体より構成されるシート状フィブリン糊接着剤において、当該フィブリノゲン固定化支持体に非イオン性界面活性剤を含有させることにより、強い組織接着・止血効果が発揮されることを見出し、本発明を完成させるに至った。 Therefore, as a result of intensive studies in view of the above-mentioned problems, the present inventors have found that a fibrinogen-immobilized support and a thrombin-immobilized support in a sheet-like fibrin glue adhesive are nonionic on the fibrinogen-immobilized support. It has been found that a strong tissue adhesion / hemostatic effect can be exerted by containing a surfactant, and the present invention has been completed.
すなわち、本発明は、医学上または産業上有用な物質・方法として下記（１）〜（１０）の発明を含むものである。
（１）有効成分としてフィブリノゲンが固定化された生体吸収性支持体（以下、「フィブリノゲン固定化支持体」とする）、及び有効成分としてトロンビンが固定化された生体吸収性支持体（以下、「トロンビン固定化支持体」とする）より構成され、当該フィブリノゲン固定化支持体が、非イオン性界面活性剤を含有することを特徴とするシート状フィブリン糊接着剤。
（２）当該非イオン性界面活性剤が、ツイン80（Tween 80）、プルロニック F-68（Pluronic F-68）、トリトン X-100（Triton X-100）、ノニデットP-40（Nonidet P40）、n-オクチルグルコシド（n-Octylglucoside）、チロキサポールから選択される上記（１）に記載のシート状フィブリン糊接着剤。
（３）当該非イオン性界面活性剤が、ツイン80（Tween 80）である上記（１）または（２）のいずれかに記載のシート状フィブリン糊接着剤。
（４）当該フィブリノゲン固定化支持体が、更に、アルブミン、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウムを含有することを特徴とする上記（１）から（３）のいずれかに記載のシート状フィブリン糊接着剤。
（５）当該生体吸収性支持体が、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、グリコール酸と乳酸との共重合体からなる群より選択される材料より作製される支持体である上記（１）に記載のシート状フィブリン糊接着剤。
（６）当該生体吸収性支持体が、ポリグリコール酸を材料とする不織布である上記（１）または（５）に記載のシート状フィブリン糊接着剤。
（７）当該フィブリノゲン固定化支持体及び当該トロンビン固定化支持体からなる二層構造である上記（１）〜（６）のいずれかに記載のシート状フィブリン糊接着剤。
（８）当該トロンビン固定化支持体の両側に当該フィブリノゲン固定化支持体を配置した三層構造である上記（１）〜（６）のいずれかに記載のシート状フィブリン糊接着剤。
（９）上記（１）から（８）のいずれかに記載のシート状フィブリン糊接着剤からなる止血用または組織閉鎖用キット。
That is, the present invention includes the following inventions (1) to (10) as medically or industrially useful substances and methods.
(1) A bioabsorbable support on which fibrinogen is immobilized as an active ingredient (hereinafter referred to as “fibrinogen-immobilized support”), and a bioabsorbable support on which thrombin is immobilized as an active ingredient (hereinafter referred to as “ A sheet-like fibrin glue adhesive, characterized in that the fibrinogen-immobilized support comprises a nonionic surfactant.
(2) The nonionic surfactant is Twin 80 (Tween 80), Pluronic F-68 (Pluronic F-68), Triton X-100 (Triton X-100), Nonidet P-40 (Nonidet P40), The sheet-like fibrin glue adhesive according to (1) above, selected from n-octylglucoside and tyloxapol.
(3) The sheet-like fibrin glue adhesive according to (1) or (2) above, wherein the nonionic surfactant is Twin 80.
(4) The sheet-like fibrin glue adhesive according to any one of (1) to (3) above, wherein the fibrinogen-immobilized support further contains albumin, sodium chloride, and sodium citrate.
(5) The bioabsorbable support according to (1), wherein the bioabsorbable support is a support prepared from a material selected from the group consisting of polyglycolic acid, polylactic acid, and a copolymer of glycolic acid and lactic acid. Sheet fibrin glue adhesive.
(6) The sheet-like fibrin glue adhesive according to (1) or (5), wherein the bioabsorbable support is a nonwoven fabric made of polyglycolic acid.
(7) The sheet-like fibrin glue adhesive according to any one of (1) to (6), which has a two-layer structure comprising the fibrinogen-immobilized support and the thrombin-immobilized support.
(8) The sheet-like fibrin glue adhesive according to any one of (1) to (6), which has a three-layer structure in which the fibrinogen-immobilized support is disposed on both sides of the thrombin-immobilized support.
(9) A kit for hemostasis or tissue closure comprising the sheet-like fibrin glue adhesive according to any one of (1) to (8) above.
本発明によるシート状フィブリン糊接着剤は、
・組織接着及び止血効果に優れている；
・トロンビン固定化支持体の両側にフィブリノゲン固定化支持体を重ねることにより、両面での接着効果が発揮できる。；
・製剤自体の膠着性により貼付することが可能なため、縫合は簡略化あるいは必要としない；
・広範囲の患部でも形状を保持したまま面で補修できる；
・溶解の手間が要らず、適用方法も簡便である；
・安全性に優れている；
・経時的に吸収される；
・伸縮性・柔軟性に優れている；
のような性質を有しており、理想的な組織接着剤となることが明らかになった。本発明により、様々な領域の外科手術を始めとする各種医療分野において、安全、迅速かつ確実に組織接着を行うことのできる生体吸収性材料からなるシート状フィブリン糊接着剤を提供することが可能となった。
The sheet-like fibrin glue adhesive according to the present invention is:
・ Excellent tissue adhesion and hemostatic effect;
-Adhesive effect on both sides can be exhibited by stacking the fibrinogen-immobilized support on both sides of the thrombin-immobilized support. ;
-Since it can be applied due to the adhesiveness of the preparation itself, the stitching is simplified or not required;
・ Able to repair a wide range of affected areas while maintaining the shape;
・ No need for dissolution and simple application method;
・ Excellent safety;
Absorbed over time;
・ Excellent elasticity and flexibility;
It has become clear that it is an ideal tissue adhesive. INDUSTRIAL APPLICABILITY According to the present invention, it is possible to provide a sheet-like fibrin glue adhesive made of a bioabsorbable material capable of performing tissue adhesion safely, quickly and reliably in various medical fields including surgical operations in various fields. It became.
本発明は、フィブリノゲン固定化支持体及びトロンビン固定化支持体より構成され、フィブリノゲン固定化支持体が非イオン界面活性剤を含有するシート状フィブリン糊接着剤であることにより特徴付けられる。 The present invention is characterized in that it is composed of a fibrinogen-immobilized support and a thrombin-immobilized support, and the fibrinogen-immobilized support is a sheet-like fibrin glue adhesive containing a nonionic surfactant.
本発明に使用されるフィリノゲン固定化支持体は、フィブリノゲンを含有する溶液（以下、「フィブリノゲン含有溶液」という。）を支持体上に固定化することによって作製されるが、フィブリノゲン含有溶液には、止血剤の有効成分であるフィブリノゲンの他に、非イオン性界面活性等の添加剤が加えられる。フィブリノゲン固定化支持体に使用されるフィブリノゲンの固定化量としては、一般に、止血作用を発揮する濃度範囲0.5-5mg/cm2で使用され、好ましくは1-4mg/cm2である。 The fibrinogen-immobilized support used in the present invention is produced by immobilizing a fibrinogen-containing solution (hereinafter referred to as “fibrinogen-containing solution”) on the support. In addition to fibrinogen, which is an active ingredient of a hemostatic agent, additives such as nonionic surface activity are added. The amount of immobilized fibrinogen used in the fibrinogen immobilized support generally used in a concentration range 0.5-5 mg / cm 2 to exert hemostasis, preferably 1-4 mg / cm 2.
本発明の形態が、薬効を発揮するためには溶解した高濃度のフィブリノゲンが患部に浸透することが必要となる。しかしながら、従来品のフィブリノゲンの溶解性は悪く、従来品組成のフィブリノゲンを固定化しただけでは、強い薬効は発揮できない。
強い薬効を発揮するには固定化したフィブリノゲンが速やかに溶解する必要がある。そこで、フィブリノゲン固定化支持体のフィブリノゲンの溶解性を高める物質として、非イオン活性剤が使用される。
非イオン活性剤の例としては、ツイン80（Tween 80）、プルロニック F-68（Pluronic F-68）、トリトン X-100（Triton X-100）、ノニデットP-40（Nonidet P40）、n-オクチルグルコシド（n-Octylglucoside）、チロキサポールなどが挙げられる。ツイン80（Tween 80）はさらに好適な一例である。ツイン80の終濃度としては、0.01%-0.5%の範囲で使用できるが、好ましくは、0.02%-0.2%である。
In order for the form of the present invention to exert its medicinal effects, it is necessary that a dissolved high concentration of fibrinogen penetrates into the affected area. However, the solubility of the conventional fibrinogen is poor, and a strong medicinal effect cannot be exhibited only by immobilizing the fibrinogen having the conventional product composition.
In order to exert a strong medicinal effect, the immobilized fibrinogen needs to dissolve quickly. Therefore, a nonionic active agent is used as a substance that enhances the fibrinogen solubility of the fibrinogen-immobilized support.
Examples of nonionic activators include Tween 80, Pluronic F-68, Triton X-100, Nonidet P40, n-octyl Examples include glucoside (n-Octylglucoside) and tyloxapol. Twin 80 is a more suitable example. The final concentration of the twin 80 can be used in the range of 0.01% -0.5%, but is preferably 0.02% -0.2%.
さらに、当該フィブリノゲン固定化支持体には、アルブミン、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウムが添加される。さらに、血液凝固第ＸIII因子（以下、ＦＸＩＩＩという。）ならびにイソロイシン、グリシン、アルギニン、およびグルタミン酸等のアミノ酸、マンニトール等の糖アルコールなどの添加剤を少なくとも一つ以上を適宜組み合わせて、または全てを添加してもよい。 Furthermore, albumin, sodium chloride, and sodium citrate are added to the fibrinogen-immobilized support. Furthermore, blood coagulation factor XIII (hereinafter referred to as FXIII) and aminoleucines such as isoleucine, glycine, arginine, and glutamic acid, sugar alcohols such as mannitol, etc. are added in appropriate combination, or all are added. May be.
フィブリノゲンを固定化する生体吸収性支持体の材料としては、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、グリコール酸及び乳酸の共重合体をシート様に加工したものが使用可能である。中でも、ポリグリコール酸を材料とする不織布に加工した生体吸収性材料は、本目的に好ましい素材である。 As a material for the bioabsorbable support on which fibrinogen is immobilized, a sheet obtained by processing a copolymer of polyglycolic acid, polylactic acid, glycolic acid and lactic acid into a sheet can be used. Among these, a bioabsorbable material processed into a nonwoven fabric made of polyglycolic acid is a preferable material for this purpose.
フィブリノゲン固定化支持体は、フィブリノゲン溶液に予め成型された生体吸収性材料を浸漬させた後、凍結乾燥することにより作製することができる。また、フィブリノゲン溶液と溶液状の生体吸収性材料を混合後、凍結乾燥することにより作製することもできる。 The fibrinogen-immobilized support can be produced by immersing a pre-molded bioabsorbable material in a fibrinogen solution and then freeze-drying it. It can also be produced by mixing a fibrinogen solution and a solution-like bioabsorbable material and then freeze-drying.
トロンビン固定化支持体は、トロンビンを生体吸収性支持体上に固定化されたことを特徴とする凍結乾燥物である。トロンビン固定化支持体に使用されるトロンビンの固定化量としては、20-100U/cm2が好ましい。 The thrombin-immobilized support is a lyophilized product in which thrombin is immobilized on a bioabsorbable support. The amount of thrombin used for the thrombin-immobilized support is preferably 20-100 U / cm 2 .
トロンビンを固定化する生体吸収性支持体の材料としては、フィブリノゲン固定化支持体に用いられる支持体と同様、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、またはグリコール酸及び乳酸の共重合体などをシート様に加工したものが使用可能である。ポリグリコール酸、ポリ乳酸、またはグリコール酸及び乳酸の共重合体としては、ポリグリコール酸を材料とする不織布に加工した生体吸収性材料が適している。 The bioabsorbable support material for immobilizing thrombin is processed into a sheet of polyglycolic acid, polylactic acid, or a copolymer of glycolic acid and lactic acid, similar to the support used for the fibrinogen-immobilized support. Can be used. As the polyglycolic acid, polylactic acid, or a copolymer of glycolic acid and lactic acid, a bioabsorbable material processed into a nonwoven fabric made of polyglycolic acid is suitable.
トロンビン固定化支持体は、フィブリノゲン固定化支持体と同様、トロンビン溶液に予め成型された生体吸収性材料を浸漬させた後、凍結乾燥することにより作製することができる。また、トロンビン溶液と溶液状の生体吸収性材料を混合後、凍結乾燥することにより作製することもできる。 Similar to the fibrinogen-immobilized support, the thrombin-immobilized support can be prepared by immersing a pre-molded bioabsorbable material in a thrombin solution and then freeze-drying. Alternatively, the thrombin solution and the solution-like bioabsorbable material can be mixed and then freeze-dried.
当該トロンビン固定化支持体には、グリセロール、トレハロース、ヒスチジン、塩化カルシウム及びツイン80をトロンビン溶液に含有させてもよい。 The thrombin-immobilized support may contain glycerol, trehalose, histidine, calcium chloride and twin 80 in the thrombin solution.
フィブリノゲン、トロンビン、またはＦＸIIIとしては、ヒト血液由来または遺伝子組換え技術により得られるものが好ましい。 As fibrinogen, thrombin, or FXIII, those derived from human blood or obtained by gene recombination techniques are preferred.
本発明の組織接着剤は、最終的に、フィブリノゲン固定化支持体、トロンビン固定化支持体からなる構造を有するシート状フィブリン糊接着剤であればよい。本シート状フィブリン糊接着剤の構成では、各々の成分が互いに独立しているため、使用前にトロンビンとフィブリノゲンが反応して安定化フィブリンを形成することがない。 The tissue adhesive of the present invention may finally be a sheet-like fibrin glue adhesive having a structure comprising a fibrinogen-immobilized support and a thrombin-immobilized support. In the structure of the present sheet-like fibrin glue adhesive, since each component is independent of each other, thrombin and fibrinogen do not react to form stabilized fibrin before use.
本発明の利点は、現行のフィブリノゲンとトロンビンを混合固定化した一体型シート製剤とは異なり、別個に調製したトロンビン固定化支持体とフィブリノゲン固定化支持体を利用することにより、種々のバリエーションで組み合わせることが可能である。基本的にはフィブリノゲン固定化支持体とトロンビン固定化支持体を組み合わせて用い、その使用状況に応じて、最も効果の高い方法を選択することが可能になる点である。
（１）フィブリノゲン固定化支持体を先に患部に貼付した後、トロンビン固定化支持体をフィブリノゲン固定化支持体に重層する方法、
（２）事前に水分をフィブリノゲン固定化支持体に滴下した後に患部に適用し、トロンビン固定化支持体を重層する方法、
（３）フィブリノゲン固定化支持体とトロンビン固定化支持体を重ねてフィブリノゲン固定化支持体側を直接患部に適用する方法、
（４）フィブリノゲン固定化支持体とトロンビン固定化支持体を重ねて事前に水分をフィブリノゲン固定化支持体に滴下した後にフィブリノゲン固定化支持体側を患部に適用する方法、
（５）トロンビン固定化支持体の両側を１対のフィブリノゲン固定化支持体で挟んで両面で接着閉鎖効果を発揮する等、
状況に応じて採用可能な最適の方法を実施することができる。
The advantage of the present invention is that it is combined with various variations by using a separately prepared thrombin-immobilized support and a fibrinogen-immobilized support, which is different from the current integrated sheet preparation in which fibrinogen and thrombin are mixed and immobilized. It is possible. Basically, a fibrinogen-immobilized support and a thrombin-immobilized support are used in combination, and the most effective method can be selected according to the use situation.
(1) A method in which a fibrinogen-immobilized support is first attached to an affected area, and then a thrombin-immobilized support is overlaid on a fibrinogen-immobilized support.
(2) A method in which water is dropped on the fibrinogen-immobilized support in advance and then applied to the affected area, and the thrombin-immobilized support is overlaid,
(3) A method in which the fibrinogen-immobilized support and the thrombin-immobilized support are overlapped and the fibrinogen-immobilized support is directly applied to the affected area.
(4) A method of applying the fibrinogen-immobilized support side to the affected area after the fibrinogen-immobilized support and the thrombin-immobilized support are overlapped in advance and water is dropped on the fibrinogen-immobilized support in advance.
(5) The both sides of the thrombin-immobilized support are sandwiched between a pair of fibrinogen-immobilized supports to exert an adhesive closing effect on both surfaces, etc.
The most suitable method that can be adopted according to the situation can be implemented.
本発明により得られる組織接着剤は、高い粘着性、適度な強度、柔軟性および伸縮性を有することから、様々な形状の生体内膜状組織の欠損部および各種臓器・組織の欠損部、切離面あるいは接合部においても密着被覆及び止血操作が可能である。更には、生体適合性が良好であり、それ自体の膠着性により縫合を簡略化あるいは実施することなく組織を接着しうる。また、本発明の組織接着材料の支持体として使用されるポリグリコール酸系生体吸収性不織布は既に医療用として使用されており、安全性も実証されているものである。 Since the tissue adhesive obtained by the present invention has high tackiness, moderate strength, flexibility and stretchability, it is possible to obtain defects in various in vivo membranous tissues and defects in various organs / tissues. Close contact coating and hemostasis can be performed at the separation surface or at the joint. Furthermore, it has good biocompatibility and can adhere tissue without simplification or implementation of suturing due to its own stickiness. In addition, the polyglycolic acid-based bioabsorbable nonwoven fabric used as the support for the tissue adhesive material of the present invention has already been used for medical purposes, and its safety has been demonstrated.
このように本発明の組織接着剤は、生体内膜状組織の欠損部および各種臓器・組織の欠損部、切離面あるいは接合部に簡便かつ早急に対処が可能であり、血液凝固反応により効果的な組織接着を可能とする。しかも、いずれの成分も生体に安全なものを用いているため医療現場で安心して利用できる。 As described above, the tissue adhesive of the present invention can easily and quickly cope with a defect part of an in vivo membranous tissue and a defect part, a cut surface or a joint part of various organs / tissues, and is effective by a blood coagulation reaction. Tissue adhesion is possible. Moreover, since all components are safe for the living body, they can be used with confidence in the medical field.
以下、本発明の実施例を示し、本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。 Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to examples of the present invention, but the present invention is not limited thereto.
＜調製例１：フィブリノゲン固定化支持体の調製＞
市販の生体組織接着剤（製品名：ボルヒール：財団法人化学及血清療法研究所製）のキットに含まれるフィブリノゲンに、種々の非イオン性界面活性剤（最終濃度0.1％）を添加した８％フィブリノゲン溶液を調製した。非イオン性界面活性剤として、ツイン80（Tween 80）、プルロニック F-68（Pluronic F-68）、トリトン X-100（Triton X-100）、ノニデット P-40（Nonidet P40）、n-オクチルグルコシド（n-Octylglucoside）、チロキサポールの６種類を用いた。各調製液の組成を表１に示す。それぞれのフィブリノゲン溶液2.5mLを、ポリグリコール酸系生体吸収性合成不織布（製品名：ネオベール／グンゼ（株），5 x 10cm）上に均一にしみ込ませた。この検体を凍結後、24時間凍結乾燥させたものをフィブリノゲン固定化支持体のサンプルとした（固定化されたフィブリノゲンの量：4mg／cm2）。
<Preparation Example 1: Preparation of fibrinogen-immobilized support>
8% fibrinogen with various nonionic surfactants (final concentration 0.1%) added to fibrinogen included in the kit of a commercially available biological tissue adhesive (product name: Bolhir: manufactured by Institute of Chemistry and Serum Therapy) A solution was prepared. Nonionic surfactants include Twin 80 (Tween 80), Pluronic F-68 (Pluronic F-68), Triton X-100 (Triton X-100), Nonidet P-40 (Nonidet P40), n-octyl glucoside Six types (n-Octylglucoside) and tyloxapol were used. The composition of each preparation solution is shown in Table 1. 2.5 mL of each fibrinogen solution was uniformly soaked on a polyglycolic acid bioabsorbable synthetic nonwoven fabric (product name: Neobale / Gunze, Inc., 5 × 10 cm). The specimen was frozen and then lyophilized for 24 hours to prepare a sample of a fibrinogen-immobilized support (amount of immobilized fibrinogen: 4 mg / cm 2 ).
＜調製例２：トロンビン固定化支持体の調製＞
市販の生体組織接着剤（製品名：ボルヒール：財団法人化学及血清療法研究所製）のキットに含まれるトロンビンを付属の溶解液により溶解し、1875単位/mLのトロンビン溶液を作製した。1875単位/mLトロンビン溶液を用いて、終濃度１％グリセロール、３％トレハロース、0.18Mヒスチジン、40mM塩化カルシウム及び0．1％ツイン80を含むトロンビン充填液（pH6.0）を調製した。このトロンビン溶液2.5mLを、ポリグリコール酸系生体吸収性合成不織布（製品名：ネオベール／グンゼ（株），5 x 10cm）上に均一にしみ込ませた。この検体を凍結後、24時間凍結乾燥させたものをトロンビン固定化支持体のサンプルとした（固定化されたトロンビンの量：93.8U／cm2）。
<Preparation Example 2: Preparation of thrombin-immobilized support>
Thrombin contained in a kit of a commercially available biological tissue adhesive (product name: Bolhir: manufactured by the Institute of Chemical and Serum Therapy) was dissolved with an attached dissolution solution to prepare a 1875 unit / mL thrombin solution. A 1875 unit / mL thrombin solution was used to prepare a thrombin filling solution (pH 6.0) containing a final concentration of 1% glycerol, 3% trehalose, 0.18 M histidine, 40 mM calcium chloride, and 0.1% twin 80. 2.5 mL of this thrombin solution was uniformly soaked on a polyglycolic acid bioabsorbable synthetic nonwoven fabric (product name: Neobale / Gunze, Inc., 5 × 10 cm). The specimen was frozen and then lyophilized for 24 hours to obtain a sample of a thrombin-immobilized support (amount of thrombin immobilized: 93.8 U / cm 2 ).
＜実施例１：フィブリノゲン固定化支持体の界面活性剤添加による組織接着力の向上＞
調製例１及び２に記載の方法に従い調製したフィブリノゲン固定化支持体及びトロンビン固定化支持体の組み合わせによる接着力評価試験を実施した。対照として、現行シート製剤（タココンブ（登録商標：CSLベーリング））を用いた。方法は以下に示す通りである。
（１）PTFEフェルト(3cmX3.8cm：バード社)を木製台座にクリップとピンで固定し、44〜48℃のインキュベータにて加温した。表面温度が36〜38℃に加温されたのを非接触温度計にて確認して試験に用いた。
（２）加温されたPTFEフェルトの上にフレームを置き、そのフレームにフィブリノゲン固定化支持体(2cmx2cm)を載せ、蒸留水200μL（50μL/cm2）を滴下した。蒸留水滴下後直ちに、フィブリノゲン固定化支持体にトロンビン固定化支持体（2cmx2cm）を載せて、タッピングし、PTFEフェルトと十分に接着させ、37℃インキュベータ内にて３分間反応させた。
（３）反応後、フレームをデジタルばねばかりにて引き上げた。引き剥がしに要した重量を接着力とした。
<Example 1: Improvement of tissue adhesion by adding surfactant to fibrinogen-immobilized support>
An adhesion strength evaluation test was performed using a combination of a fibrinogen-immobilized support and a thrombin-immobilized support prepared according to the methods described in Preparation Examples 1 and 2. As a control, the current sheet formulation (Takocomb (registered trademark: CSL Behring)) was used. The method is as follows.
(1) PTFE felt (3 cm X 3.8 cm: Bird) was fixed to a wooden pedestal with clips and pins and heated in an incubator at 44 to 48 ° C. It was used for the test after confirming that the surface temperature was heated to 36-38 ° C. using a non-contact thermometer.
(2) A frame was placed on the heated PTFE felt, a fibrinogen-immobilized support ( 2 cm × 2 cm) was placed on the frame, and 200 μL of distilled water (50 μL / cm 2 ) was dropped. Immediately after the dropwise addition of distilled water, the thrombin-immobilized support (2 cm × 2 cm) was placed on the fibrinogen-immobilized support, tapped, sufficiently adhered to the PTFE felt, and reacted in a 37 ° C. incubator for 3 minutes.
(3) After the reaction, the frame was pulled up only with digital springs. The weight required for peeling was defined as the adhesive strength.
接着力の測定結果を図１に示す。図１に示すように、従来のフィブリン糊接着剤のフィブリノゲンの組成に非イオン性界面活性剤を添加することで、フィブリノゲンの溶解性が増すとともに明らかな接着力の増強効果が認められ、特にTween80を添加すると８倍以上の増強効果が認められた。 The measurement result of adhesive force is shown in FIG. As shown in FIG. 1, the addition of a nonionic surfactant to the fibrinogen composition of the conventional fibrin glue adhesive increases the solubility of fibrinogen and clearly enhances the adhesive force. When added, an enhancement effect of 8 times or more was recognized.
＜実施例２：ウサギ肝臓滲出性出血に対する止血効果＞
本発明のフィブリノゲン固定化支持体とトロンビン固定化支持体を以下のＡ及びＢの組み合わせで使用した場合の止血効果を現行のシート製剤を使用した場合の止血効果と比較した。
Ａ：フィブリノゲン固定化支持体（調製例１に示す第７群：現行のフィブリン糊接着剤のフィブリノゲン組成にTween80を添加したフィブリノゲン）＋トロンビン固定化支持体（調製例２に示す）
Ｂ：フィブリノゲン固定化支持体（調製例１に示す第１群：現行のフィブリン糊接着剤のフィブリノゲン組成）＋トロンビン固定化支持体（調製例２に示す）
対照：現行シート製剤（タココンブ）
<Example 2: Hemostatic effect on rabbit liver exudative bleeding>
The hemostatic effect when the fibrinogen-immobilized support and the thrombin-immobilized support of the present invention were used in the following combinations A and B was compared with the hemostatic effect when the current sheet preparation was used.
A: Fibrinogen-immobilized support (seventh group shown in Preparation Example 1: Fibrinogen in which Tween 80 is added to the fibrinogen composition of the current fibrin glue adhesive) + thrombin-immobilized support (shown in Preparation Example 2)
B: Fibrinogen-immobilized support (
Control: Current sheet preparation (octopus kombu)
動物の止血モデルとしてはウサギを用いた。ウサギを開腹し、肝臓の一部を切除して、その出血部位に対して、フィブリノゲン固定化支持体とトロンビン固定化支持体を重ねて適応し、その止血効果（止血の有無、出血量）をみた。試験方法は以下に示す通りである。
（１）セラクタール10mg/kg（約1.0ｍL）ケタラール50mg/kg（約3.0mL）を筋肉内投与した。
（２）体重を測定し、腹部を剃毛後、仰臥位にて保定した。
（３）耳静脈より持続麻酔（2%ケタラール、20U/mLヘパリン添加生理食塩水）を行った。
（４）胸骨検状突起直下から下腹部までを正中切開により開腹した。
（５）ヘパリンナトリウム注射液を耳静脈より300U/kg投与した。
（６）腸用ピンセットやガーゼなどを用いて創傷作製に十分な厚みのある肝葉（外側左葉、内側左葉、右葉）を引き出した。
（７）肝葉に皮ポンチで直径10mm、深さ4mmの創傷を作り、その部分をメスで切除した。
（８）切除創からの出血を10秒間、ベンシーツに吸収してその重量を測定した。創傷部出血が0.5g以上の傷を試験に使用した。
（９）創傷部位に2.5cm角に切断したフィブリノゲン固定化支持体、トロンビン固定化支持体を重ねて、フィブリノゲン固定化支持体面を上にして蒸留水を312.5μL滴下した（50μL/cm2）。出血部位にフィブリノゲン固定化支持体面を適用し、１分間圧迫した。対照として用いる現行シート製剤の場合は、2.5cm角に切断した後に生理食塩水を312.5μL滴下し、出血部位に適用し、１分間または３分間圧迫した。
（１０）圧迫後、出血の有無及び創傷部位からの1分間の出血をベンシーツに吸収して、その重量を測定した。
Rabbits were used as animal hemostasis models. Open the rabbit, excise part of the liver and apply the fibrinogen-immobilized support and the thrombin-immobilized support to the bleeding site, and apply the hemostatic effect (presence / absence of hemostasis, amount of bleeding) saw. The test method is as follows.
(1) Seractal 10 mg / kg (about 1.0 mL) Ketaral 50 mg / kg (about 3.0 mL) was administered intramuscularly.
(2) The body weight was measured and the abdomen was shaved and then held in the supine position.
(3) Continuous anesthesia (2% ketal, 20 U / mL heparin-added physiological saline) was performed from the ear vein.
(4) A laparotomy was performed by a midline incision from directly under the sternum protuberance to the lower abdomen.
(5) Heparin sodium injection was administered at 300 U / kg from the ear vein.
(6) Liver lobes (outer left lobe, inner left lobe, right lobe) with sufficient thickness for wound preparation were drawn out using intestinal tweezers or gauze.
(7) A wound having a diameter of 10 mm and a depth of 4 mm was made in the liver lobe with a skin punch, and the part was excised with a scalpel.
(8) The bleeding from the excised wound was absorbed into Ben sheet for 10 seconds and the weight was measured. Wounds with wound bleeding of 0.5 g or more were used for the test.
(9) A fibrinogen-immobilized support and a thrombin-immobilized support cut into a 2.5 cm square were overlapped on the wound site, and 312.5 μL of distilled water was added dropwise with the fibrinogen-immobilized support surface facing up (50 μL / cm 2 ). A fibrinogen-immobilized support surface was applied to the bleeding site and compressed for 1 minute. In the case of the current sheet preparation used as a control, 312.5 μL of physiological saline was dropped after being cut into 2.5 cm square, applied to the bleeding site, and compressed for 1 minute or 3 minutes.
(10) After the compression, the presence or absence of bleeding and bleeding for 1 minute from the wound site were absorbed into Ben sheets and the weight was measured.
その結果、表２に示すように、Ａの検体を用いた場合、全例止血し、その出血量は極めて微量であった。一方、Ｂの検体を用いた場合、フィブリノゲンシートに滴下した蒸留水は浸透せず、フィブリノゲンの溶解が遅く、完全な止血効果は５例中１例しか認められなかった。対照として用いた現行シート製剤の場合、１分間の圧迫での止血効果は不十分であり、出血量も多く、更に圧迫時間を３分間に延長しても十分な止血効果は認められなかった。 As a result, as shown in Table 2, when the specimen A was used, all cases were hemostatic and the amount of bleeding was extremely small. On the other hand, when the specimen B was used, the distilled water dropped on the fibrinogen sheet did not penetrate, the dissolution of fibrinogen was slow, and only 1 of 5 cases had a complete hemostatic effect. In the case of the current sheet preparation used as a control, the hemostatic effect after 1 minute of compression was insufficient, the amount of bleeding was large, and even if the compression time was extended to 3 minutes, sufficient hemostatic effect was not recognized.
＜実施例３：ウサギ腹部大動脈噴出性出血に対する止血効果＞
次に、より止血が困難とされているウサギ腹部大動脈噴出性出血に対して、実施例２に使用した同じ組成の検体を用いて止血効果を測定した。試験方法は以下に示す通りである。
（１）セラクタールを10mg/kg、ケタラールを50mg/kg、筋肉内に投与した。
（２）体重を測定し、剃毛（腹部、頚部）を行った。
（３）１％ケタラール、20単位/mLヘパリン/生理食塩水の耳静脈点滴により麻酔を維持した。
（４）頚動脈を露出させ、カテーテルを挿入し、血圧トランスデューサーに接続した。
（５）腹部を正中切開し、腹大動脈を露出させる。適用箇所３ヶ所を確保した。
（６）ヘパリンナトリウム注射液を耳静脈より300単位/kg投与した。
（７）平均血圧80〜100mmHg であることを確認し、21Gの注射針で腹大動脈にピンホールを作製した。
（８）1.5cm角に切断したフィブリノゲン固定化支持体、トロンビン固定化支持体を重ねて、フィブリノゲン固定化支持体面を上にして蒸留水を112.5μL滴下した（50μL/cm2）。出血部位にフィブリノゲン固定化支持体面を適用し、３分間圧迫した。対照として用いた現行シート製剤の場合は1.5cm角に切断した現行シート製剤に生理食塩水を112.5μL滴下し、出血部位に適用し、３分間圧迫した。
（９）圧迫終了後９秒間出血の有無を確認し、止血が確認された場合は５分間観察し、再出血の有無を確認した。
<Example 3: Hemostatic effect on rabbit abdominal aortic ejection bleeding>
Next, the hemostatic effect was measured using the specimen of the same composition used in Example 2 for rabbit abdominal aortic ejection bleeding, which is considered more difficult to stop hemostasis. The test method is as follows.
(1) Seractal 10 mg / kg and ketal 50 mg / kg were administered intramuscularly.
(2) The body weight was measured and shaving (abdomen, neck) was performed.
(3) Anesthesia was maintained by instillation of 1% ketal, 20 units / mL heparin / saline.
(4) The carotid artery was exposed, a catheter was inserted, and connected to a blood pressure transducer.
(5) A midline incision is made in the abdomen to expose the abdominal aorta. Three locations were secured.
(6) Heparin sodium injection was administered at 300 units / kg from the ear vein.
(7) It was confirmed that the average blood pressure was 80 to 100 mmHg, and a pinhole was prepared in the abdominal aorta with a 21G injection needle.
(8) A fibrinogen-immobilized support and a thrombin-immobilized support cut to a 1.5 cm square were stacked, and 112.5 μL of distilled water was added dropwise with the fibrinogen-immobilized support surface facing upward (50 μL / cm 2 ). A fibrinogen-immobilized support surface was applied to the bleeding site and compressed for 3 minutes. In the case of the current sheet preparation used as a control, 112.5 μL of physiological saline was dropped on the current sheet preparation cut into a 1.5 cm square, applied to the bleeding site, and compressed for 3 minutes.
(9) The presence or absence of bleeding was confirmed for 9 seconds after the end of the compression, and when hemostasis was confirmed, it was observed for 5 minutes to confirm the presence or absence of re-bleeding.
その結果、表３に示すように、Ａの検体を用いた場合は、全例止血した。一方、Ｂの検体を用いた場合、肝臓滲出性出血に対する止血効果と同様に十分な止血効果は認められなかった。また、現行シート製剤を使用した場合も十分な止血効果は認められなかった。
実施例２及び実施例３の結果は、十分な薬効を発揮するためには、固定化したフィブリノゲンが速やかに溶解すること必要であることを示しており、これは本願発明により達成された。
As a result, as shown in Table 3, when the specimen A was used, all cases were hemostatic. On the other hand, when the specimen B was used, a sufficient hemostatic effect was not recognized as was the case with the hemostatic effect on liver exudative bleeding. In addition, a sufficient hemostatic effect was not observed when the current sheet preparation was used.
The results of Example 2 and Example 3 indicate that the immobilized fibrinogen needs to be dissolved quickly in order to exert a sufficient medicinal effect, and this was achieved by the present invention.
＜実施例４：フィブリノゲン固定化支持体とトロンビン固定化支持体の組み合わせによる接着力評価試験＞
これまでの実施例で示した効果は、本発明のフィブリノゲン固定化支持体とトロンビン固定化支持体を重ねて用い、フィブリノゲン側を創傷部位に適応し、効果を見てきたものである。本発明では、トロンビン固定化支持体とフィブリノゲン固定化支持体は独立しており、重ね方を任意に選択することができる。トロンビン固定化支持体をフィブリノゲン固定化支持体で挟むとその両面が接着面となり、外科手術において大血管などの修復への利用が考えられる。
本実施例では、両面での接着力の測定を行った。フィブリノゲン固定化支持体（Tween80添加）とトロンビン固定化支持体の組み合わせ、及び対照として現行シート製剤について両面接着力を測定した。接着力の測定にあたっては、外科手術において、血管吻合・縫合部の補強として用いられるPTFEフェルトを接着面として用いた。方法は以下に示す通りである。
（１）PTFEフェルト(3cmX3.8cm)を木製台座にクリップとピンで固定し、44〜48℃のインキュベータにて加温した。表面温度が36〜38℃に加温されたのを非接触温度計にて確認して試験に用いた。
（２）2cm x 2cmのクレーンフレームに2cm×2cmに切断したPTFEフェルトを置いたものを用意しておく。
（３）以下に示す群について接着力を測定した。
第１群：フィブリノゲン固定化支持体＋トロンビン固定化支持体＋フィブリノゲン固定化支持体
ディッシュにフィブリノゲン固定化支持体（Tween80添加）を置き、蒸留水200μL（50μL/cm2）滴下して30秒待機したものを２枚用意した。（１）の木製台座に固定したPTFEフェルトにフィブリノゲン固定化支持体、トロンビン固定化支持体、フィブリノゲン固定化支持体の順に重層した。その上に（２）のPTFEフェルトをセットしたフレームを載せて、キャップにてタッピングし、（１）のPTFEフェルトと十分に接着させる。37℃インキュベータ内にて３分間反応させた。
第２群：フィブリノゲン固定化支持体＋トロンビン固定化支持体
ディッシュにフィブリノゲン固定化支持体（Tween80添加）を置き、蒸留水200uL（50uL/cm2）滴下して30秒待機したものを1枚用意した。（１）の木製台座に固定したPTFEフェルトにフィブリノゲン固定化支持体、トロンビン固定化支持体の順に重層した。その上に（２）のPTFEフェルトをセットしたフレームを載せて、キャップにてタッピングし、（１）のPTFEフェルトと十分に接着させた。37℃インキュベータ内にて３分間反応させた。
第３群：現行シート製剤（タココンブ）
現行シート製剤の有効成分を含む面をフレーム面になるように、（１）の木製台座に固定したPTFEフェルトの上に載せた。蒸留水200uL（50uL/cm2）滴下し、その上に（２）のPTFEフェルトをセットしたフレームを載せて、キャップにてタッピングして、（１）のPTFEフェルトと十分に接着させた。37℃インキュベータ内にて３分間反応させた。
（４）反応後、フレームをデジタルばねばかりにて引き上げた。引き剥がしに要した重量を接着力とした。
その結果、図２に示すように、第３群の現行シート製剤は全く接着を示さなかったのに対して、本願発明の第２群でも接着効果を示し、さらに両面に接着面を持つ第１群では10N/4cm2以上の強い接着力を示した。データは示していないが、イヌ肺エアリークテストにおいては、10N/4cm2の接着力を示す検体を適応した時、臨床的に効果がある、耐圧40cm水中以上の耐圧を示したことから、10N/4cm2上の接着力は臨床上効果が期待できる接着力である。
<Example 4: Adhesive strength evaluation test using a combination of a fibrinogen-immobilized support and a thrombin-immobilized support>
The effects shown in the examples so far have been observed by using the fibrinogen-immobilized support of the present invention and the thrombin-immobilized support in an overlapping manner, and adapting the fibrinogen side to the wound site. In the present invention, the thrombin-immobilized support and the fibrinogen-immobilized support are independent, and the way of stacking can be arbitrarily selected. When the thrombin-immobilized support is sandwiched between fibrinogen-immobilized supports, both surfaces thereof become adhesive surfaces, and it can be considered to be used for repairing large blood vessels in surgery.
In this example, the adhesive strength on both sides was measured. Double-sided adhesion was measured for a combination of a fibrinogen-immobilized support (with Tween 80 added) and a thrombin-immobilized support, and the current sheet formulation as a control. In the measurement of the adhesive force, PTFE felt used as a reinforcement of the vascular anastomosis / suture in the surgical operation was used as the adhesive surface. The method is as follows.
(1) PTFE felt (3cmX3.8cm) was fixed to a wooden pedestal with clips and pins and heated in an incubator at 44 to 48 ° C. It was used for the test after confirming that the surface temperature was heated to 36-38 ° C. using a non-contact thermometer.
(2) Prepare a 2cm x 2cm crane frame with PTFE felt cut to 2cm x 2cm.
(3) Adhesive strength was measured for the following groups.
First group: Fibrinogen-immobilized support + thrombin-immobilized support + fibrinogen-immobilized support Place a fibrinogen-immobilized support (with Tween 80 added), drop 200 μL of distilled water (50 μL / cm 2 ) and wait for 30 seconds. Two pieces of the prepared ones were prepared. The fibrinogen-immobilized support, the thrombin-immobilized support, and the fibrinogen-immobilized support were layered in this order on the PTFE felt fixed on the wooden pedestal of (1). A frame on which the PTFE felt (2) is set is placed on it, and tapped with a cap, and sufficiently adhered to the PTFE felt (1). The reaction was allowed to proceed for 3 minutes in a 37 ° C. incubator.
Group 2: Fibrinogen-immobilized support + thrombin-immobilized support A fibrinogen-immobilized support (with Tween 80 added) was placed on a dish, and 200 uL (50 uL / cm2) of distilled water was added dropwise, and a sheet was prepared for 30 seconds. . The fibrinogen-immobilized support and the thrombin-immobilized support were layered in this order on the PTFE felt fixed on the wooden pedestal of (1). A frame on which the PTFE felt of (2) was set was placed thereon, tapped with a cap, and sufficiently adhered to the PTFE felt of (1). The reaction was allowed to proceed for 3 minutes in a 37 ° C. incubator.
Group 3: Current sheet preparation (octopus kombu)
The surface containing the active ingredient of the current sheet preparation was placed on the PTFE felt fixed to the wooden pedestal in (1) so that the surface was a frame surface. Distilled water 200 uL (50 uL / cm2) was dropped, and a frame on which the PTFE felt (2) was set was placed thereon, tapped with a cap, and sufficiently adhered to the PTFE felt (1). The reaction was allowed to proceed for 3 minutes in a 37 ° C. incubator.
(4) After the reaction, the frame was lifted only with digital springs. The weight required for peeling was defined as the adhesive strength.
As a result, as shown in FIG. 2, the current sheet preparation of the third group did not show any adhesion, whereas the second group of the present invention also showed an adhesion effect, and further had a first adhesive surface on both sides. in the group showed 10 N / 4 cm 2 or more strong adhesion. Although the data are not shown, in the dog lung air leak test, when a specimen showing an adhesion force of 10 N / 4 cm 2 was applied, it showed a clinically effective pressure resistance of 40 Nm or more under pressure. adhesion on 4 cm 2 is an adhesive force clinical effect can be expected.
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