JP2009545740A - 唾液の分析 - Google Patents
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Abstract
Description
(i)製品の作用の動力学、例えば、被験者の唾液組成に所定の変化をもたらすためには何回製品を適用する必要があるか、又は何日間の治療が必要かを決める方法、
(ii)製品使用後の主要な代謝物の濃度の平均の変化を測定することによって製品の有効性を測定する方法、
(iii)例えば、製品の使用によってどの特定な化学種が変化したかを比較することによって、異なる治療用製品間の作用モードの違いを比較する方法、が使用できる。
a)唾液サンプルを個人から採取する工程と、
b)個人の唾液サンプルから個人スペクトルを取得する工程と、
c)デジタル化された個人スペクトルをコンピュータメモリに格納された参照モデルと比較して前記代用の口腔健康度合を算定する工程であって、前記参照モデルが、特に多変量分析を通じて、参照集団の複数構成員の各々の前記口腔健康の1つ以上の直接度合を、前記参照集団構成員の唾液サンプルから得られた参照スペクトルと関連付けることから得られ、参照スペクトルが個人スペクトルのタイプに対応する工程と、を含む。
a)一連の個人の各々から少なくとも1つの開始唾液サンプルを収集する工程と、
b)個人を治療用製品で治療する工程と、
c)個人の各々から少なくとも1つの最終唾液サンプルを収集する工程と、
d)全ての唾液サンプルからスペクトルを得、デジタル化してデジタル化されたスペクトルをデータベースに収納し、各スペクトルが個人識別子及びサンプルタイプ識別子と関連付けられる工程と、
e)スペクトルのデータベース上で、一連の個人に対する治療用製品の効果と関連して1つ以上の治療ベクトルを生じさせるために、多変量分析を行う工程と、を含む治療用製品を特徴付ける方法に関する。
・代謝学研究に参加する前に、各可能性のある被験者は、資格を持った歯科医により、口腔軟組織試験を課される。患者の病歴が記録され、被験者はインフォームドコンセント用紙を読み、署名するように求められる。
・研究被験者は、一連のラベル付き、スクリューキャップバイアル瓶(15mL、目盛り付き)を支給される。バイアル瓶に、0.9重量%のフッ化ナトリウムを含有した1.0mLの脱イオン水が含まれる。NaFは、サンプル収集後の、更なる細菌活動を防ぐように作用する。その他の唾液安定剤も使うことができる。
・唾液解析の日、サンプルは冷凍庫から取り出され、1時間解凍される。
・水信号の事前飽和を伴う標準(1H)NMRスペクトルが必要とされる。典型的に、NOESYプレセットシーケンスが使用され、10秒の緩和遅延及び獲得時間〜2秒を伴う128スキャンである。スペクトルは試験からの独自のサンプル番号をラベルされる。
・典型的に、32K複合点のNMRスペクトルは、更に「ビン化」され、スペクトル点の合計の総数は、スペクトルを与えられた数のビンに分離され、ビン内の点数を合計することにより、減らされる。解析者はビンの幅を選択することが可能で、その選択の幅は典型的に2〜10Hzの間である。ビン化プロセスの間、全てのスペクトルは、内部標準から信号のサイズに標準化され、各々のビン化されたスペクトル内部標準からの信号全体の合計は同じになる。1H NMRスペクトルについては、この部分のスペクトルを0.5〜3.5ppmの範囲に収まる化学シフトとともに用いるのに十分であることができる。好ましくは、少なくともこのスペクトルの一部は、0.5〜4.5ppmの化学シフトを含み、より好ましくは0.5〜8.6ppmが使用される。更に、プロピオン酸、ブチレート及びトリメチルアミンのピークを含む少なくとも各スペクトルの部分を使用することが有用であることが見出されている。好ましくは、この使用される部分には、更にギ酸塩、N−アセチル糖類、乳酸、メチルアミン、及びジメチルアミンのピークを含み、より好ましくは更にメタノール、トリメチルアミンオキシド、フェニルアラニン、コリン、ヒスチジン、チロシン、メチルグアニジン、サルコシン、β−ヒドロキシブチレート、コハク酸塩、ピルビン酸、イソブチレート、n−ブチレート、ロイシン、アラニン、n−バレレート及びエタノールから選択される1つ以上のピークを含む。
上述のように、口腔健康度合及び履歴は、唾液サンプルのスペクトルの測定から得られ、臨床試験の実施及び管理の改善のために使用できる。例えば、臨床試験の被験者は、その唾液組成の日々の安定性に基づき選択することができる。唾液組成の日々の変化が少ない被験者を選択すること、即ち、一連の全体としての被験者における唾液組成の日々の変化の平均よりも、唾液組成の日々の変化が少ない被験者の部分集合を特定することにより、異なる製品による治療の違いを識別する臨床試験の力を増すことができる。
a)候補者の口腔健康度合、例えば、口腔健康が良くない一連の被験者を選択すること、
b)各被験者のスペクトルから求められた選択された代謝産物の濃度、例えば、特定の目標代謝産物の濃度が高い被験者を選択すること、又は
c)個人スペクトルの複数のピークからデータを統合することによって得られる複合的な度合、が挙げられる。これは、医師の評価と関連付けるという意味では、口腔健康度合ではないかもしれないが、しかしながら、単一の代謝産物濃度から得られるものよりも特定の口腔化学のより広い指標であろう。このような度合は、例えば、特定の微生物相の代用の口腔度合であって良い。
a)複数の日にわたる試験又はプラシーボ口腔治療を含む、予め定められた手順に従う一連の個人を採用する工程と、
b)個人に自身の唾液サンプルを1日以上採取すること、及び前記唾液サンプルを中央収集点に戻すことを要求する工程と、
c)前記サンプルから、これを中央収集点に戻した後、NMRスペクトルを取得する工程と、
d)
(i)複数の日にわたり前記個人に適用された、治療の効果度のデータ、及び
(ii)前記一連内の個人の日々の反応のデータ、から選択されたスペクトルから1つ以上の度合を得る工程と、を含む臨床試験を管理する方法である。
臨床試験の管理を改善するための使用を超えて、個人の健康の管理を改善するために本願に記載された方法を使用することができる。例えば、個人は、本願に記載されているように唾液のサンプルを採取することができ、本願に記載されているように口腔健康度合又は口腔健康履歴を作成するために、これを特別な解析のために研究施設へ送付することができる。その後、口腔健康度合又は口腔健康履歴は、例えば、個人の医師に口腔健康又は口腔化学の変化に影響されるその他の病気の状態の診断の補助として提供することができる。情報は、例えば、本願に提供されたように、個人の口腔健康度合又は口腔健康履歴を検査して、個人への治療用製品の処方を補助するために使用される。この方法は、経過観察的な方法、例えば、個人を治療用製品で治療し、治療用製品による治療前後の個人の口腔健康履歴を評価することにもまた使用することができる。
2つの試験練り歯磨きA及びBの作用モード(MoA)を標準市販製品Cと比較して、検査するために、1H NMRを採用した唾液代謝学(SM)が使用された。製品Aは抗菌剤としてトリクロサンを含んでおり、製品Bは亜鉛とスズ塩の両方を含む抗菌システムを含んでいた。製品Cは、抗菌剤を含んでいなかった。30人のパネリストのグループが選択され、「洗い流し」期間のため、4週間にわたり、製品Cを1日に2回使用するように指示された。洗い流し期間(参照フェーズ)の最後の2週間にわたり、パネリストは各々、全て異なる日の起床時に採取した、最高10個の洗浄唾液サンプルを提出した。各サンプル採取日に、パネリストはピペットを使用して2mLの水道水を各自の口中に注ぎ、30秒間濯ぎ、新しい遠心チューブの中に吐き出した。このチューブは保存剤として1mLの0.9w/v%NaFを含んでおり、一旦満たされると、解析に供されるまで0℃未満で保存された。
実施例1からの検査結果に基づいて、製品の作用の速度(VoA)を求めるために、O−PLSからのスコアのプロットが使用された。データは、各フェーズ(参照、介入及び回復)について週毎にバッチ化され、各バッチについて同じ軸の順番でボックスプロットが描かれた。回復フェーズデータは、回復サンプルを、介入の最後から参照フェーズレベルへ戻ることを見るために構築されたモデルに投影することによって得られた。製品Cのプロット及び更なる試験製品のプロットを図5及び6に示す。これらのプロットでは、3つの製品の使用フェーズの週がx軸に沿って示される。ラベルB1及びB2は、2つの参照フェーズ週、W1〜W3は、介入週、並びにR1及びR2は「回復」週を示す。各製品のプロットは、全て異なるモデル上で構築されているので、即ち、それらのy軸は異なるので、単独でしか見ることができない。しかし、これらは、効果の保持、プラトーに達する速度及びエラーバーの大きさの特性により、定性的に比較される。製品が同様の作用モードを有する場合、これは通常のPLS成分軸を理論どおりに使用し、これらを互いに直接比較する。図6にプロットされた製品は、第2週に効果のピークに達する製品C(図5)よりも良い保持を示すが、図6の製品は最大の効果に達するのに3週間かかる。
唾液代謝学を臨床効果と結び付けるために、歯肉炎、歯周炎及びその他の症状について、試験に参加した多数のパネリストは等級が付けられる。結果は、スキーム3.1に従って算定された、一連の表示及び1つの全体的な健康スコアである。
GI=歯肉炎指数(0〜4)
PI=歯垢指数(0〜4)
BPE=基本歯周検査(0〜6)
Calc=歯石指数(0〜3)
Tong=舌苔(0〜3)
健康=GI+PI+(2×BPE)+Calc+Tong
スキーム3.1健康スケール
作用モード(MoA)を、実施例1で述べたように、作用範囲(EoA)に変換するためには、発生した変化の程度を表すようにMoAベクトルを測る必要があった。O−PLSモデルからのローディングチャートは、固有ベクトルとも呼ばれる特別なタイプの単位ベクトルとして、作成される。固有ベクトルに対応する固有値は、ベクトル又は変形の程度を示す。各固有ベクトルに、モデルからの対応する固有値をかけることによって、これらを比較的に測ることができる。
Claims (41)
- 個人のための代用の口腔健康度合を算定する方法であって、
a)唾液サンプルを個人から採取する工程と、
b)個人の唾液サンプルから個人スペクトルを取得し、デジタル化する工程と、
c)前記デジタル化された個人スペクトルをコンピュータメモリに保存された参照モデルと比較して前記代用の口腔健康度合を算定する工程であって、前記参照モデルが、多変量分析を通じて、参照集団の複数構成員の各々の前記口腔健康の1つ以上の直接度合を、前記参照集団構成員の唾液サンプルから得られた参照スペクトルと関連付けることから得られ、前記参照スペクトルが前記個人スペクトルのタイプに対応する、工程と、
を含む方法。 - 前記個人スペクトルがNMRスペクトル、好ましくは1H NMRスペクトルである、請求項1に記載の方法。
- 前記個人スペクトルが、1H NMRスペクトルであり、且つ前記参照モデルに対する前記個人スペクトルの比較は、0.5〜3.5ppm、好ましくは0.5〜4.5ppm、より好ましくは0.5〜8.6ppmの範囲に収まる前記スペクトルの一部の使用を含む、請求項2に記載の方法。
- 各スペクトルの使用された前記部分が、プロピオン酸、ブチレート、及びトリメチルアミンのピークを含む、請求項3に記載の方法。
- 各スペクトルの使用された前記部分が、ギ酸塩、N−アセチル糖類、乳酸、メチルアミン、及びジメチルアミンのピークを更に含む、請求項4に記載の方法。
- 各スペクトルの使用された前記部分が、メタノール、トリメチルアミンオキシド、フェニルアラニン、コリン、ヒスチジン、チロシン、メチルグアニジン、サルコシン、β−ヒドロキシブチレート、コハク酸塩、ピルベート、イソブチレート、n−ブチレート、ロイシン、アラニン、n−バレレート及びエタノールから選択される1つ以上のピークを更に含む、請求項4又は5に記載の方法。
- アセテートのピークが、前記分析から取り除かれている、請求項2〜6のいずれか一項に記載の方法。
- 前記唾液サンプルが、各個人に標準化された手順に従って口腔を濯がせ、容器に吐き出させることにより得られ、各唾液サンプルを吐き出した後、前記サンプルが、前記サンプルの更なる細菌の代謝を防ぐために安定剤で処理される、請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
- 各唾液サンプルが、採取の後、冷凍される、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。
- 参照集団の各構成員の口腔健康の1つ以上の直接度合が、
a)医師の口腔健康の定量的評価、
b)歯肉の画像、
c)歯の画像、及び
d)息の悪臭の機械測定値又は専門家の評価
から選択されるものを含む、請求項1〜9のいずれか一項に記載の方法。 - 前記集団構成員の医師による定量的評価が、歯垢指数、歯石指数、歯肉炎指数、歯周疾患指数及び舌苔指数から選択された1つ以上の指数を含む、請求項10に記載の方法。
- 前記参照モデルが、前記唾液スペクトルのデジタル表示及び前記集団構成員の前記医師による定量的評価を含む、データセットのPLS又はO−PLS分析により組み立てられた、請求項1〜11のいずれか一項に記載の方法。
- 前記個人の口腔疾患に対する感受性又は口腔疾患の程度を見積るための、請求項1〜12のいずれか一項に記載の方法の使用。
- 請求項1〜12のいずれか一項に記載の方法により、個人から複数日の各々に収集された唾液サンプルから得られた、代用の口腔健康度合の提供を含む、個人の口腔健康履歴を生成する方法。
- 前記履歴が、試験物質により被験者を処理することと関連して作成される、請求項14に記載の方法。
- 請求項1〜12のいずれか一項に記載の方法により測定される被験者の唾液成分の日々の一貫性に基づいて、臨床試験のために被験者を選択する方法。
- a)請求項1〜12のいずれか一項に記載の方法により得られた、候補者の代用の口腔健康度合と、
b)前記各候補の唾液サンプルから得られたスペクトルと、
に基づき、臨床試験のために前記候補者から被験者を選択する工程を含む、前記臨床試験のために前記被験者を選択する方法。 - 前記臨床試験が2つ以上の行程を含み、各行程につき被験者が、前記各行程にわたって前記代用の口腔健康度合又は被験者の代謝産物濃度のバランスをとるように選択され、前記代謝産物濃度が前記個人スペクトルから決定される、請求項17に記載の方法。
- a)予め定められた方法に従い一連の個人に対して臨床試験を実行する工程と、
b)請求項14に記載の方法により、前記個人の少なくとも1つのサンプルの各々についての前記口腔健康履歴を生成する工程と、
c)こうして得られた前記口腔健康履歴について、前記臨床試験手順に従っていない兆候がないかどうかを調べる工程と、
を含む臨床試験を管理する方法。 - a)複数の日にわたる試験又はプラシーボ口腔治療を含む、予め定められた手順に従う一連の個人を採用する工程と、
b)前記個人に自身の唾液のサンプルを1日以上採取すること、及び前記唾液サンプルを中央収集点に戻すことを要求する工程と、
c)前記サンプルから、これを中央収集点に戻した後、スペクトルを取得する工程と、
d)(i)複数の日にわたり前記個人に適用された、治療の効果度のデータ、及び
(ii)前記一連内の個人の日々の反応のデータ、
から選択されたスペクトルから1つ以上の度合を得る工程と、
を含む、臨床検査を管理する方法。 - 請求項1〜12のいずれか一項に記載の方法により提供される、個人の代用の口腔健康度合を調べる工程を含む、個人に治療用製品を処方する方法。
- 治療用製品で個人を治療して、前記個人の請求項14に記載の方法によって作成された、前記製品による治療前及び治療後の、前記個人の口腔健康履歴を評価することを含む、前記個人に対する前記治療用製品の有効性を決定する方法。
- a)一連の被験者の各々が治療用製品で治療され、各々の被験者に対して請求項14に記載の方法により口腔健康履歴が作成される、臨床試験を行う工程と、
b)前記口腔健康履歴から、又は前記スペクトルによって決定される前記一連の被験者に対して製品がもたらした唾液の組成変化から、前記製品の製品有効性度合を算定する工程と、を含む前記治療用製品の有効性の測定方法。 - 前記製品の有効性度合が、参照製品の有効性度合と比較される、請求項23に記載の方法。
- 前記製品による治療が、標準化治療期間後に効果がもたらされる、請求項23又は24に記載の方法。
- 各被験者の唾液サンプルが、標準化治療期間中に収集される、請求項25に記載の方法。
- a)請求項23に記載の方法による、前記治療用製品の有効性を測定する工程と、
b)前記測定された製品有効性の度合を前記製品と関連付ける工程と、
を含む、治療用製品の広告用表示を作成する方法。 - 異なる製品がもたらす前記試験被験者唾液の組成変化を示すことによって、前記製品の作用機序を参照製品の作用機序と区別することを含む、治療用製品の広告用の表示を作成する方法。
- a)一連の個人の各々から少なくとも1つの最初の唾液サンプルを収集する工程と、
b)前記個人を前記治療用製品で治療する工程と、
c)前記各個人から少なくとも1つの最終唾液サンプルを収集する工程と、
d)前記唾液サンプルの全てからスペクトルを取得して前記スペクトルをデータベースに保管し、各スペクトルが個人識別子及びサンプルタイプ識別子と関連付けられる、工程と、
e)スペクトルのデータベース上で多変量分析を行って、前記一連の個人に対する治療用製品の効果と関連付けられて1つ以上の治療ベクトルを得る工程と、を含む治療用製品を特徴付ける方法。 - 前記ベクトルの少なくとも1つが、前記商品の使用の結果として一連の個人内の変化を示す、請求項29に記載の方法。
- 前記ベクトルの少なくとも1つが、前記製品に対する反応に関して、個人の第1の部分集合を、全体集合又は第2の部分集合と区別する、請求項29又は30に記載の方法。
- 最初の唾液サンプルが、治療用製品による個人の治療の前に得られたものである、請求項29〜31のいずれか一項に記載の方法。
- 最終唾液サンプルが、治療用製品による個人の治療の後に得られたものである、請求項29〜32のいずれか一項に記載の方法。
- 1つ以上の中間唾液サンプルが、前記個人から得られ、更に前記中間サンプルから得られたスペクトルが前記データベースに保存されて個人識別子及びサンプルタイプ識別子と関連付けられ、多変量解析に取り込まれる、請求項29〜33のいずれか一項に記載の方法。
- 前記中間唾液サンプルが、治療用製品による個人の治療の間に得られたものである、請求項34に記載の方法。
- 多変量分析を行なう前に、複数の個人の最初の唾液サンプルからのスペクトルのデータが、各個人に標準化度合を提供するために平均化され、標準化度合が各個人のスペクトルの対応するデータから差し引かれる、請求項29〜35のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項29〜36のいずれか一項に記載の方法により得られた各製品に関連付けられた治療ベクトルを比較することによって、2つ以上の治療用製品を比較する方法。
- 前記多変量分析が、主成分分析であり、前記比較は前記ベクトルの各々を1つ以上の主成分によって画定される空間にプロットすることを含む、請求項37に記載の方法。
- 第1の部分集合の個人が、第1の治療用製品で治療され、第2の部分集合の個人は、第1の治療用製品及び第2の治療用製品で治療され、少なくとも1つの前記ベクトルが該第1の部分集合を該第2の部分集合から区別することが、第2の治療用製品の補足効果を第1の治療用製品に対して特徴付ける、請求項31に記載の方法。
- 前記治療用製品が、練り歯磨き、マウスウォッシュ、義歯粘着剤、又は機械的な口腔治療装置の形態をとる口腔治療用製品である、請求項22、23又は29〜39のいずれか一項に記載の方法。
- 前記口腔治療用製品が、抗菌剤を含む、請求項40に記載の方法。
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