JP2009280503A

JP2009280503A - Pharmacological use of cocoon of cricula trifenestrata

Info

Publication number: JP2009280503A
Application number: JP2008131011A
Authority: JP
Inventors: Koichi Suzuki; 幸一鈴木; Shizuka Ota; 静香太田; Mayumi Karimazawa; 真弓苅間澤; Kunio Sasaki; 邦夫佐々木
Original assignee: Iwate University
Current assignee: Iwate University
Priority date: 2008-05-19
Filing date: 2008-05-19
Publication date: 2009-12-03

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide the pharmacological use of the cocoon of Cricula trifenestrata. <P>SOLUTION: Provided are an antitumor agent containing the extract of the cocoon of Cricula trifenestrata as an active ingredient, an anti-oxidizing agent containing the extract as an active ingredient, and a prolyl endopeptidase inhibitor containing the extract as an active ingredient. <P>COPYRIGHT: (C)2010,JPO&INPIT

Description

本発明は、クリキュラトリフェネストラータの繭の薬理用途に関する。 The present invention relates to the pharmacological use of crucifer trifenestrate sputum.

クリキュラトリフェネストラータ（Ｃｒｉｃｕｌａｔｒｉｆｅｎｅｓｔｒａｔａ）は、東南アジアに生息するヤママユ蛾科に属する野蚕の１種で、幼虫はカシューナッツなどの木につく害虫であるが、繭は荒い網の目状の黄金色であり、その美しさから、アクセサリーや織物の原材料として利用されている。また、蚕の繭の薬理用途としては、例えば特許文献１に、繭由来の平均分子量が２０万以上のタンパク成分が創傷治癒剤や化粧料として利用できることが記載されている。しかしながら、クリキュラトリフェネストラータが産生する繭が有する薬理活性に関する報告はこれまでに存在しない。
特開２００４−３００１４２号公報 Cricula trifenestrata is a kind of wild boar that belongs to the cicada family inhabiting Southeast Asia, and the larva is a pest attached to trees such as cashew nuts, but the moth is a golden net with a rough net-like shape. It is used as a raw material for accessories and textiles because of its beauty. Moreover, as a pharmacological use of the cocoon moth, for example, Patent Document 1 describes that a protein component having an average molecular weight derived from cocoon of 200,000 or more can be used as a wound healing agent or a cosmetic. However, there has been no report on the pharmacological activity of sputum produced by cricula trifenestrate.
JP 2004-300142 A

そこで本発明は、クリキュラトリフェネストラータの繭の薬理用途を提供することを目的とする。 Therefore, an object of the present invention is to provide a pharmacological use of crucifer trifena rata sputum.

本発明者は、上記の点に鑑みて鋭意研究を進めた結果、クリキュラトリフェネストラータの繭の抽出物が、抗腫瘍作用、抗酸化作用、プロリルエンドペプチダーゼ阻害作用を有することを見出した。 As a result of diligent research in view of the above points, the present inventor has found that the extract of cricula trifenestrate moth has an antitumor action, an antioxidant action, and a prolyl endopeptidase inhibitory action. .

上記の知見に基づいてなされた本発明の抗腫瘍剤は、請求項１記載の通り、クリキュラトリフェネストラータの繭の抽出物を有効成分とすることを特徴とする。
また、本発明の抗酸化剤は、請求項２記載の通り、クリキュラトリフェネストラータの繭の抽出物を有効成分とすることを特徴とする。
また、本発明のプロリルエンドペプチダーゼ阻害剤は、請求項３記載の通り、クリキュラトリフェネストラータの繭の抽出物を有効成分とすることを特徴とする。 The antitumor agent of the present invention made on the basis of the above-mentioned findings is characterized in that, as described in claim 1, an extract of crucifera trifestrate cocoon is used as an active ingredient.
In addition, the antioxidant of the present invention is characterized in that, as described in claim 2, an extract of crucifera trifenestrate cocoon is used as an active ingredient.
In addition, the prolyl endopeptidase inhibitor of the present invention is characterized in that, as described in claim 3, an extract of crucifer trifenestrate moth is used as an active ingredient.

本発明によれば、クリキュラトリフェネストラータの繭の薬理用途を提供することができる。 ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, the pharmacological use of crucifer trifenestrate sputum can be provided.

本発明において、クリキュラトリフェネストラータの繭の抽出物は、例えば乾燥させた繭を粉砕して粉末にした後、これを抽出溶媒としての水や各種の有機溶媒、例えばメタノールやエタノールやイソプロピルアルコールなどのアルコール、アセトン（水を例えば１０〜５０％含んでいてもよい）、エーテル、ヘキサン、酢酸エチルなどに投入し、３℃〜１００℃で１時間〜１週間震盪させて成分抽出してからろ過することで、ろ液として得ることができる。使用する繭は、蛹が入っている繭でもよいが、蛹が羽化した後の繭や羽化する前の蛹を抜き取った繭が好適である。なお、蛹が入っている繭を使用しても、主にタンパク質から構成される蛹成分が本発明の薬理作用に及ぼす影響は少ない。抽出溶媒は、単一の溶媒を用いてもよいし複数の溶媒を混合して用いてもよい。得られたろ液は、そのまま液状抽出物として用いてもよいし、凍結乾燥や減圧濃縮を行って固形物や粉末にして用いてもよい。なお、ろ液をさらにゲルろ過やイオンクロマトグラフィーや硫安分画などによって精製し、得られた画分を液状抽出物として用いてもよい。また、例えば最初にヘキサンを用いて抽出操作を行った後、順次、酢酸エチル、アセトン、水といったように、用いる溶媒の極性をだんだんと高くして抽出操作を行い、いずれかの溶媒を用いることで得られたろ液を液状抽出物として用いてもよい。抗腫瘍作用に優れる抽出物を得るためには、抽出溶媒として酢酸エチルを少なくとも含む溶媒を用いることが望ましい。抗酸化作用に優れる抽出物およびプロリルエンドペプチダーゼ阻害作用に優れる抽出物を得るためには、抽出溶媒としてアセトンを少なくとも含む溶媒を用いることが望ましい。 In the present invention, the extract of crucifer trifenestrate cocoon is obtained by, for example, pulverizing dried cocoon into powder and then using water or various organic solvents such as methanol, ethanol or isopropyl alcohol as an extraction solvent. Alcohols such as acetone, water (may contain 10 to 50% water, for example), ether, hexane, ethyl acetate, etc., and shaken at 3 to 100 ° C. for 1 hour to 1 week to extract components By filtration, it can be obtained as a filtrate. The cocoon used may be a cocoon containing a cocoon, but a cocoon after the cocoon has emerged or a cocoon from which the cocoon has been removed is suitable. In addition, even if the cocoon containing the cocoon is used, the cocoon component mainly composed of protein has little influence on the pharmacological action of the present invention. As the extraction solvent, a single solvent may be used, or a plurality of solvents may be mixed and used. The obtained filtrate may be used as a liquid extract as it is, or may be used as a solid or powder by lyophilization or vacuum concentration. The filtrate may be further purified by gel filtration, ion chromatography, ammonium sulfate fractionation, etc., and the obtained fraction may be used as a liquid extract. In addition, for example, after first performing an extraction operation using hexane, the extraction operation is performed by gradually increasing the polarity of the solvent to be used, such as ethyl acetate, acetone, and water. The filtrate obtained in (1) may be used as a liquid extract. In order to obtain an extract excellent in antitumor activity, it is desirable to use a solvent containing at least ethyl acetate as an extraction solvent. In order to obtain an extract having an excellent antioxidant action and an extract having an excellent prolyl endopeptidase inhibitory action, it is desirable to use a solvent containing at least acetone as an extraction solvent.

上記のようにして得たクリキュラトリフェネストラータの繭の抽出物は、例えば医薬部外品、医薬品、飲食品などの形態で人体に対して経口的に投与することができる。これらの形態における製剤組成は特段限定されるものではなく、自体公知の一般的なものを採用することができる。人体へのその投与量は、適用対象者の年齢や性別、症状の程度などに基づいて適宜決定することができ、適切な投与量を投与することにより、その抗腫瘍作用によって抗腫瘍効果を、抗酸化作用によって心筋梗塞や動脈硬化をはじめとする生活習慣病などに対する予防効果や治療効果を、プロリルエンドペプチダーゼ阻害作用（認知改善作用）によって痴呆症などに対する予防効果や治療効果をもたらすことができる。 The extract of crucifer trifenestrate cocoon obtained as described above can be orally administered to the human body in the form of, for example, a quasi-drug, a drug, a food or drink. The formulation composition in these forms is not particularly limited, and a general one known per se can be adopted. The dose to the human body can be appropriately determined based on the age and sex of the subject to be applied, the degree of symptoms, etc., and by administering an appropriate dose, the anti-tumor effect is achieved by the anti-tumor action, Antioxidant action can bring about preventive and therapeutic effects on lifestyle-related diseases such as myocardial infarction and arteriosclerosis, and prolyl endopeptidase inhibitory action (cognitive improvement action) can bring about preventive and therapeutic effects on dementia etc. it can.

以下、本発明を実施例によって詳細に説明するが、本発明は以下の記載に限定して解釈されるものではない。 EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention in detail, this invention is limited to the following description and is not interpreted.

参考例１：クリキュラトリフェネストラータの繭の抽出物の調製
図１に示すフローチャートに従って４種類の抽出物を得た。
（工程１）
クリキュラトリフェネストラータの繭（株式会社ジョグジャカルタロイヤルシルクより入手した蛹が羽化した後の繭）の乾燥物３６．３ｇを粉砕機で粉砕し、篩にかけて粉末化した。得られた粉末にｎ−ヘキサン６００ｍＬを添加し、室温で２４時間震盪させて成分抽出してからろ紙を用いてろ過することでろ液を得た。得られたろ液を減圧濃縮することで、淡い黄土色で粘性があるｎ−ヘキサン抽出物を得た（収量：４５．０１ｍｇ、収率：０．１２４％）。
（工程２）
次に、ｎ−ヘキサンを用いた抽出操作の残渣に酢酸エチル６００ｍＬを添加し、室温で２４時間震盪させて成分抽出してからろ紙を用いてろ過することでろ液を得た。得られたろ液を減圧濃縮することで、黄色で粘性がある酢酸エチル抽出物を得た（収量：２１．２５ｍｇ、収率：０．０５８５％）。
（工程３）
さらに、酢酸エチルを用いた抽出操作の残渣に７０％アセトン（含水率：３０％）６００ｍＬを添加し、室温で２４時間震盪させて成分抽出してからろ紙を用いてろ過することでろ液を得た。得られたろ液を凍結乾燥することで、朱色で微粒子状粉末である７０％アセトン抽出物を得た（収量：２６２．８ｍｇ、収率：０．７２４％）。
（工程４）
最後に、７０％アセトンを用いた抽出操作の残渣に超純水（ＭＱ水）６００ｍＬを添加し、室温で２４時間震盪させて成分抽出してからろ紙を用いてろ過することでろ液を得た。得られたろ液を凍結乾燥することで、黄土色で粉状の水抽出物を得た（収量：２７０．５ｍｇ、収率：０．７４５％）。 Reference Example 1: Preparation of crucifer trifenestrate cocoon extract Four types of extracts were obtained according to the flowchart shown in FIG.
(Process 1)
36.3 g of a dried product of Krycula trifenestrate cocoon (the cocoon obtained from Yogyakarta Royal Silk Co., Ltd.) was pulverized with a pulverizer and sieved into a powder. To the obtained powder, 600 mL of n-hexane was added, shaken at room temperature for 24 hours to extract components, and then filtered using a filter paper to obtain a filtrate. The obtained filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain a light ocher and viscous n-hexane extract (yield: 45.01 mg, yield: 0.124%).
(Process 2)
Next, 600 mL of ethyl acetate was added to the residue of the extraction operation using n-hexane, and components were extracted by shaking at room temperature for 24 hours, followed by filtration using filter paper to obtain a filtrate. The filtrate obtained was concentrated under reduced pressure to obtain a yellow and viscous ethyl acetate extract (yield: 21.25 mg, yield: 0.0585%).
(Process 3)
Furthermore, 600 mL of 70% acetone (water content: 30%) was added to the residue of the extraction operation using ethyl acetate, the components were extracted by shaking at room temperature for 24 hours, and then filtered using filter paper to obtain a filtrate. It was. The obtained filtrate was freeze-dried to obtain a 70% acetone extract that is vermilion and fine powder (yield: 262.8 mg, yield: 0.724%).
(Process 4)
Finally, 600 mL of ultrapure water (MQ water) was added to the residue of the extraction operation using 70% acetone, and components were extracted by shaking at room temperature for 24 hours, followed by filtration using filter paper to obtain a filtrate. . The obtained filtrate was freeze-dried to obtain an ochery and powdery water extract (yield: 270.5 mg, yield: 0.745%).

実施例１：抗腫瘍作用（細胞増殖抑制活性試験）
（実験方法）
MTT法（Oka, M., Maeda, S., Koga, N., Kato, K. and Saito, T. (1992) A Modified Colorimetric MTT Assay Adapted for Primary Cultured Hepatocytes: Application to Proliferation and Cytotoxicity Assays. Biosci. Biotech. Biochem., 56, 1472-1473.）に従って行った。MTT｛3-(4，5-dimethyl-2-thiazolyl)-2，5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide｝は細胞内脱水素酵素により還元され、ホルマザンを生成する。生細胞数と生成するホルマザンの量は直線的な比例関係にある。ホルマザンは550ｎｍから600ｎｍに極大吸収波長を持つので、その付近の吸光度を測定することにより容易に生細胞数を計測することができる。細胞はラット肝がん細胞（dRLh84）を用いた。培地は10％ウシ新生児血清（NCS）、4ｍＭのグルタミン、50Ｕ/ｍＬのペニシリン、50μｇ/ｍＬのストレプトマイシン、100μｇ/ｍＬのカナマイシンを含むダルベッコ変法イーグル培地（DMEM、日水製薬）を用いた。組織培養用ディッシュ（100×20ｍｍ、グライナー社製）を用い、5％ＣＯ_２存在下、37℃湿潤条件のＣＯ_２インキュベーター内で細胞の培養を行った。対数増殖期で培地を取り除き、細胞をPBS(-)［リン酸バッファー(-)］（137ｍＭのNaCl，2.7ｍＭのKCl，2ｍＭのNa₂HPO₄・12H₂O，1.5ｍＭのKH₂PO₄）で洗浄した。その後、2.5％トリプシン溶液で細胞を浮遊させ、細胞数が3×10⁴個/ｍＬになるように培地で希釈し、懸濁状態にある細胞を96ウェルマイクロプレート（IWAKI）の各ウェルに200μＬずつ分注し、5％ＣＯ_２インキュベーター（37℃）内で24時間培養した。その後、Dimethyl Sulufoxide（DMSO）を用いて各検定濃度に調整したサンプル溶液1μＬを各ウェルに加えた。ＣＯ_２インキュベーター内で48時間培養後、ウェル内の培地を除去し、0.55ｍｇ/ｍＬのMTTを含む培地を100μＬ加えて撹拌し、さらに4時間培養した。その後、ウェル内の培地を除去し、生成したホルマザン結晶を200μＬのDMSOで溶解した。各ウェルの590ｎｍおよび620ｎｍにおける吸光度をマイクロプレートリーダー（Immuno-Mini NJ-2300、日本インターメッド）で測定し、細胞増殖抑制活性を検定した。
（実験結果）
酢酸エチル抽出物をサンプルとした場合の試験結果を図２に示す。図２から明らかなように、クリキュラトリフェネストラータの繭の酢酸エチル抽出物は、濃度依存的にラット肝がん細胞の生存率を低下させたことから、その抗腫瘍作用を確認することができた。 Example 1: Antitumor action (cell growth inhibitory activity test)
(experimental method)
MTT method (Oka, M., Maeda, S., Koga, N., Kato, K. and Saito, T. (1992) A Modified Colorimetric MTT Assay Adapted for Primary Cultured Hepatocytes: Application to Proliferation and Cytotoxicity Assays. Biosci. Biotech. Biochem., 56, 1472-1473.). MTT {3- (4,5-dimethyl-2-thiazolyl) -2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide} is reduced by intracellular dehydrogenase to produce formazan. The number of viable cells and the amount of formazan produced are linearly proportional. Since formazan has a maximum absorption wavelength from 550 nm to 600 nm, the number of viable cells can be easily measured by measuring the absorbance in the vicinity thereof. Rat hepatoma cells (dRLh84) were used as cells. The medium was Dulbecco's modified Eagle medium (DMEM, Nissui Pharmaceutical) containing 10% newborn calf serum (NCS), 4 mM glutamine, 50 U / mL penicillin, 50 μg / mL streptomycin, 100 μg / mL kanamycin. Using a tissue culture dish (100 × 20 mm, manufactured by Greiner), cells were cultured in a CO ₂ incubator at 37 ° C. in the presence of 5% CO ₂ . In the logarithmic growth phase, the medium was removed, and the cells were washed with PBS (-) [phosphate buffer (-)] (137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 2 mM Na ₂ HPO ₄ · 12H ₂ O, 1.5 mM KH ₂ PO _4. ). Then, the cells are suspended in 2.5% trypsin solution, diluted with a medium so that the number of cells becomes 3 × 10 ⁴ cells / mL, and 200 μL of suspended cells is added to each well of a 96-well microplate (IWAKI). The aliquots were dispensed and cultured for 24 hours in a 5% CO ₂ incubator (37 ° C.). Thereafter, 1 μL of a sample solution adjusted to each assay concentration using Dimethyl Sulufoxide (DMSO) was added to each well. After culturing in a CO ₂ incubator for 48 hours, the medium in the well was removed, 100 μL of a medium containing 0.55 mg / mL MTT was added, and the mixture was further stirred for 4 hours. Thereafter, the medium in the well was removed, and the produced formazan crystals were dissolved in 200 μL of DMSO. The absorbance at 590 nm and 620 nm of each well was measured with a microplate reader (Immuno-Mini NJ-2300, Nihon Intermed), and the cell growth inhibitory activity was assayed.
(Experimental result)
FIG. 2 shows the test results when the ethyl acetate extract was used as a sample. As can be seen from FIG. 2, the extract of crucifer trifenestrate sputum ethyl acetate reduced the survival rate of rat hepatoma cells in a concentration-dependent manner, confirming its anti-tumor activity. did it.

実施例２：抗酸化作用（ＤＰＰＨラジカル消去活性試験）
（実験方法）
DPPH分光測定法（Yamaguchi, F., Ariga, T., Yoshimura, Y. and Nakazawa, H. (2000) Antioxidantativeand anti-glycation activity of Garcinolfrom Garcinia indica Furuit Rind. J. Agric. Food Chem. 48, 180-185.）に従って行った。DPPH（1，1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl）は自らが安定なフリーラジカルで黒紫色を呈しているため、黒紫色の退色を分光学的に分析することによりラジカル消去能を測定することができる。陽性対照区としては、高い抗酸化活性を持つことが確認されているアスコルビン酸を用いた（Arabshahi-Delouee, S. and Urooj, A. (2006) Antioxidant propaties of various solvent extract of mulberry(Morus indica L.)leaves. Food Chem., in press.）。96ウェルマイクロプレート（IWAKI）の各ウェルに抽出溶媒を用いて各検定濃度に調整したサンプル溶液20μＬ、0.1ＭのTris-HCl緩衝液（pH7.4）80μＬ、エタノールに溶解した500μＭのDPPH溶液（和光社製）100μＬを分注し、室温で20分間放置後、多目的マイクロプレートリーダー（Power scan HT、大日本住友製薬）によって517ｎｍにおける吸光度を測定し、残存DPPHラジカル量を定量することで検定した。
（実験結果）
７０％アセトン抽出物をサンプルとした場合の試験結果を図３に示す。図３から明らかなように、クリキュラトリフェネストラータの繭の７０％アセトン抽出物は、濃度依存的にＤＰＰＨラジカルを消去したことから、その抗酸化作用を確認することができた。 Example 2: Antioxidant action (DPPH radical scavenging activity test)
(experimental method)
DPPH spectroscopy (Yamaguchi, F., Ariga, T., Yoshimura, Y. and Nakazawa, H. (2000) Antioxidantative and anti-glycation activity of Garcinolfrom Garcinia indica Furuit Rind. J. Agric. Food Chem. 48, 180- 185.). Since DPPH (1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl) is a stable free radical and exhibits a black-purple color, radical scavenging ability can be measured by spectroscopic analysis of the black-purple fading. . As a positive control, ascorbic acid, which has been confirmed to have high antioxidant activity, was used (Arabshahi-Delouee, S. and Urooj, A. (2006) Antioxidant propaties of various solvent extract of mulberry (Morus indica L .) leaves. Food Chem., in press.). 20 μL of sample solution adjusted to each assay concentration using extraction solvent in each well of 96 well microplate (IWAKI), 80 μL of 0.1 M Tris-HCl buffer (pH 7.4), 500 μM DPPH solution dissolved in ethanol ( (Wako) 100 μL was dispensed, allowed to stand at room temperature for 20 minutes, and then assayed by measuring the absorbance at 517 nm with a multipurpose microplate reader (Power scan HT, Dainippon Sumitomo Pharma) and quantifying the amount of residual DPPH radicals .
(Experimental result)
FIG. 3 shows the test results when a 70% acetone extract is used as a sample. As can be seen from FIG. 3, the 70% acetone extract of cricula trifenestrate moth erased the DPPH radicals in a concentration-dependent manner, confirming its antioxidant action.

実施例３：プロリルエンドペプチダーゼ阻害作用（認知改善活性試験）
（実験方法）
バソプレシンやサブスタンスPなどの脳内情報伝達物質（神経ペプチド）を分解する酵素であるプロリルエンドペプチダーゼ（Prolylendopeptidase；以後PEP）に対する阻害活性を指標とし、Yoshimoto, T., Kado, K., Matsubara, F., Koriyama, N., Kaneto, H. and Tsuru, D.（1987）Specific inhibitors for prolyl endopeptidase and their antiamnesic effect. J Pharmacobiodyn., 10,730-735.に記載の方法を改変して阻害活性の測定を行った。プロリンのC末端側にp-ニトロアニリンが結合した形の合成基質がPEPによる分解を受けると、反応液中に遊離したp-ニトロアニリンを生じ黄色を呈する。PEP阻害活性を有するサンプルを添加した上で酵素を反応させれば、遊離のp-ニトロアニリンの量は減少する。その際の吸光度を測定し、比較することで酵素阻害活性を求めることができる。合成基質であるZ-Gly-Pro-pNa（Bachem Feinchemikaline）は40％ジオキサンで2ｍＭに調整して用いた。PEP（第一化学工業）は0.1ＭのTris-HCl緩衝液（pH7.0）で0.1unit/ｍＬに調整して用いた。陽性対照区としては、Z-Pro-Pro-CHO（BIOMOL）を用いた。1.5ｍＬのマイクロチューブ（Treff）に0.1ＭのTris-HCl緩衝液（pH7.0）890μＬを分注し、2ｍＭのZ-Gly-Pro-pNa溶液50μＬ、抽出溶媒を用いて各検定濃度に調整したサンプル溶液10μＬを添加してタッチミキサで撹拌した。なお、コントロールはサンプル溶液のかわりに抽出溶媒を10μＬ添加したものとした。その後、PEP溶液50μＬをマイクロチューブに滴下し、速やかにタッチミキサで撹拌し、30℃のウォーターバス中で30分間インキュベートした。反応終了後、速やかに分光光度計を用いて410ｎｍにおける吸光度を測定した。PEP阻害活性は、サンプル溶液が有色であるため、0.1ＭのTris-HCl緩衝液（pH7.0）990μＬにサンプル溶液を10μＬ添加して同様に攪拌・インキュベートしたものの吸光度を測定し、この吸光度の値をPEP反応後の吸光度の値から差引いた値でもって検定した。
（実験結果）
７０％アセトン抽出物をサンプルとした場合の試験結果を図４に示す。図４から明らかなように、クリキュラトリフェネストラータの繭の７０％アセトン抽出物は、濃度依存的にプロリルエンドペプチダーゼ活性を阻害したことから、そのプロリルエンドペプチダーゼ阻害作用（認知改善作用）を確認することができた。 Example 3: Prolyl endopeptidase inhibitory action (cognitive improvement activity test)
(experimental method)
Yoshimoto, T., Kado, K., Matsubara, Inhibitory activity against prolylendopeptidase (hereinafter PEP), an enzyme that degrades brain mediators (neuropeptides) such as vasopressin and substance P F., Koriyama, N., Kaneto, H. and Tsuru, D. (1987) Specific inhibitors for prolyl endopeptidase and their antiamnesic effect. Measurement of inhibitory activity by modifying the method described in J Pharmacobiodyn., 10,730-735. Went. When a synthetic substrate in which p-nitroaniline is bound to the C-terminal side of proline is subjected to decomposition by PEP, free p-nitroaniline is produced in the reaction solution, and yellow is exhibited. When a sample having PEP inhibitory activity is added and the enzyme is reacted, the amount of free p-nitroaniline is reduced. The enzyme inhibitory activity can be determined by measuring and comparing the absorbance at that time. The synthetic substrate Z-Gly-Pro-pNa (Bachem Feinchemikaline) was used after adjusting to 2 mM with 40% dioxane. PEP (Daiichi Kagaku Kogyo) was adjusted to 0.1 unit / mL with 0.1 M Tris-HCl buffer (pH 7.0). As a positive control, Z-Pro-Pro-CHO (BIOMOL) was used. Dispense 890 μL of 0.1 M Tris-HCl buffer (pH 7.0) into a 1.5 mL microtube (Treff), and adjust to each assay concentration using 50 μL of 2 mM Z-Gly-Pro-pNa solution and extraction solvent. 10 μL of the prepared sample solution was added and stirred with a touch mixer. As a control, 10 μL of extraction solvent was added instead of the sample solution. Thereafter, 50 μL of the PEP solution was dropped into the microtube, rapidly stirred with a touch mixer, and incubated in a 30 ° C. water bath for 30 minutes. Immediately after the reaction, the absorbance at 410 nm was measured using a spectrophotometer. Since the sample solution is colored, the PEP inhibitory activity was measured by measuring the absorbance of 10 μL of the sample solution added to 990 μL of 0.1 M Tris-HCl buffer (pH 7.0) and stirring and incubating in the same manner. The value was tested by subtracting the absorbance value after the PEP reaction.
(Experimental result)
The test results when a 70% acetone extract is used as a sample are shown in FIG. As is clear from FIG. 4, the 70% acetone extract of cricula trifenestrate sputum inhibited prolyl endopeptidase activity in a concentration-dependent manner, and therefore its prolyl endopeptidase inhibitory action (cognitive improvement action). I was able to confirm.

製剤例１：錠剤
以下の成分組成からなる抗腫瘍作用を有する錠剤を自体公知の方法で製造した。
クリキュラトリフェネストラータの繭の水抽出物（粉末）１
乳糖８０
ステアリン酸マグネシウム１９
（単位：重量％） Formulation Example 1: Tablets Tablets having an antitumor action comprising the following component compositions were produced by a method known per se.
Water extract of crucifera fenestrata moth (powder) 1
Lactose 80
Magnesium stearate 19
(Unit:% by weight)

製剤例２：カプセル剤
以下の成分組成からなる抗酸化作用を有するカプセル剤を自体公知の方法で製造した。
クリキュラトリフェネストラータの繭の７０％アセトン抽出物（粉末）５
乳糖４０
馬鈴薯澱粉５０
ヒドロキシプロピルメチルセルロース３
ステアリン酸マグネシウム２
（単位：重量％） Formulation Example 2: Capsules Capsules having an antioxidant action consisting of the following component compositions were produced by a method known per se.
70% acetone extract (powder) of currantula fenestrata cocoon 5
Lactose 40
Potato starch 50
Hydroxypropyl methylcellulose 3
Magnesium stearate 2
(Unit:% by weight)

製剤例３：ビスケット
以下の成分組成からなるプロリルエンドペプチダーゼ阻害作用を有するビスケットを自体公知の方法で製造した。
クリキュラトリフェネストラータの繭の７０％アセトン抽出物（粉末）１
薄力粉３２
全卵１６
バター１６
砂糖２４
水１０
ベーキングパウダー１
（単位：重量％） Formulation Example 3: Biscuit A biscuit having a prolyl endopeptidase inhibitory action comprising the following component composition was produced by a method known per se.
70% acetone extract (powder) 1
Weak flour 32
Whole egg 16
Butter 16
Sugar 24
Water 10
Baking powder 1
(Unit:% by weight)

本発明は、クリキュラトリフェネストラータの繭の薬理用途を提供することができる点において産業上の利用可能性を有する。 The present invention has industrial applicability in that it can provide the pharmacological use of crucifer trifena rata sputum.

クリキュラトリフェネストラータの繭の抽出物の調製方法の一例を示すフローチャートである。It is a flowchart which shows an example of the preparation method of the extract of the currant trifenestrate cocoon. 実施例１における本発明の抗腫瘍剤の効果を示すグラフである。2 is a graph showing the effect of the antitumor agent of the present invention in Example 1. 実施例２における本発明の抗酸化剤の効果を示すグラフである。3 is a graph showing the effect of the antioxidant of the present invention in Example 2. 実施例３における本発明のプロリルエンドペプチダーゼ阻害剤の効果を示すグラフである。2 is a graph showing the effect of the prolyl endopeptidase inhibitor of the present invention in Example 3.

Claims

An antitumor agent comprising, as an active ingredient, a koji extract of Cricula trifenestrata ( Cricula trifenestrate ).

Antioxidant characterized by comprising an extract of strawberry of Cricula trifenestrate as an active ingredient.

A prolyl endopeptidase inhibitor characterized by comprising an extract of strawberry of Cricula trifenestrata as an active ingredient.