JP2008249565A - Method for preparing cellular specimen - Google Patents

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克純 奥村
Tatsuro Saito
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Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a method for preparing a cellular specimen, capable of providing a cellular specimen as large as possible without providing a problem to cellular observation. <P>SOLUTION: For the method for preparing a cellular specimen by dropping a liquid including a cell on a slide glass of a plate and applying centrifugal force in the direction approximately perpendicular to the plane where the liquid is dropped, the purpose is achieved by the method characterized in that the cell is enlarged. It is preferable that at that time the number of cells is made at a value of 5 x 10<SP>3</SP>pieces per 1 mm<SP>2</SP>or less and the centrifugal force is 200 rpm in revolution or greater in the condition that the distance from the rotation center to the slide glass is converted to 95 mm. <P>COPYRIGHT: (C)2009,JPO&INPIT

Description

本発明は、細胞診などに用いる細胞標本の調製方法に関する。   The present invention relates to a method for preparing a cell specimen used for cytodiagnosis and the like.

細胞をスライドグラスの表面に固定する方法は様々なものが存在する。それらのうち、安価なことから、引きガラス法や摺りあわせ法が繁用されている。しかし、均等な塗抹を行うためには、技術的な習熟が求められる。
これに対し、細胞標本を調製する方法として、例えば特許文献１に開示されたものがある。この方法では、予めスライドグラスを希釈液で濡らしておき、この部分に細胞組織片の割面を押し付け、そのスライドグラスがなす平面に対して平行にスライドグラスを回転させて遠心力を加えるというものである。 There are various methods for fixing cells to the surface of a slide glass. Among them, the drag glass method and the sliding method are frequently used because they are inexpensive. However, technical skill is required to perform uniform smearing.
On the other hand, as a method for preparing a cell specimen, for example, there is one disclosed in Patent Document 1. In this method, the slide glass is previously wetted with a diluent, the split surface of the cell tissue piece is pressed against this part, and the slide glass is rotated parallel to the plane formed by the slide glass to apply centrifugal force. It is.

また、直接遠心塗抹法で用いられる装置として、サイトスピン、オートスメアなどがある。これらの装置を用いると、同時に他検体を処理できることに加え、均一な結果を得ることができる。図１には、サイトスピン１の構造を簡単に示した。図中の左側は、装置の駆動前の停止した状態を、右側は、駆動中の状態を示している。サイトスピン１の内部空間には、複数のチャンバー２が遠心軸３に対して対称的に配置されている。チャンバー２には、細胞を含む細胞懸濁液４を導入するテーパー状のサンプル導入筒５と、この筒の下端部に連結して細胞懸濁液４を移動させるパイプ部６と、パイプ部６の他端に配置されるスライドグラス７とが設けられている。   Examples of apparatuses used in direct centrifugal smearing include cytospin and auto smear. By using these devices, in addition to being able to process other specimens at the same time, uniform results can be obtained. FIG. 1 simply shows the structure of cytospin 1. In the drawing, the left side shows a stopped state before driving the apparatus, and the right side shows a driving state. A plurality of chambers 2 are arranged symmetrically with respect to the centrifugal axis 3 in the internal space of the cytospin 1. The chamber 2 has a tapered sample introduction cylinder 5 for introducing a cell suspension 4 containing cells, a pipe section 6 connected to the lower end of the cylinder to move the cell suspension 4, and a pipe section 6 There is provided a slide glass 7 disposed at the other end.

装置が停止した状態で、チャンバー２にスライドグラス７を配置し、サンプル導入筒５に細胞懸濁液４を導入した後、サイトスピン１を駆動する。すると、スライドグラス７が回転方向に対して、鉛直方向の位置に起立し、この状態で遠心力がかけられる。細胞懸濁液４中の細胞は、サンプル導入筒５の下端からパイプ部６を通り、スライドグラス７の表面において所定の位置に塗布・固定される。細胞が塗布される面積は、約２０ｍｍ２であり、ここに約１０６個の細胞が張り付く。このため、細胞数は１ｍｍ２あたりに約５ｘ１０４個程度となる。
特開平７−７７４８５号公報 With the apparatus stopped, the slide glass 7 is placed in the chamber 2, the cell suspension 4 is introduced into the sample introduction cylinder 5, and then the cytospin 1 is driven. Then, the slide glass 7 stands at a position in the vertical direction with respect to the rotation direction, and centrifugal force is applied in this state. The cells in the cell suspension 4 pass through the pipe portion 6 from the lower end of the sample introduction tube 5 and are applied and fixed at a predetermined position on the surface of the slide glass 7. The area to which the cells are applied is about 20 mm 2 , and about 10 6 cells stick here. Therefore, the number of cells is about 5 × 10 4 per 1 mm 2 .
JP-A-7-77485

サイトスピンを用いた細胞調製方法では、細胞の大きさは、それほど変化せず、元の形に近い状態での観察が行える。しかし、細胞同士が密着した状態があり、異形細胞の同定が困難となる場合がある。また、細胞中の微小器官（例えば、核内の染色体、細胞質中の微小繊維など）を観察しようとする場合には、解像度を上げる等の工夫を必要とした。
本発明は上記した事情に鑑みたものであり、その目的は、細胞観察に支障をきたすことなく、できるだけ大きな細胞標本を提供できる細胞標本調製方法を提供することである。 In the cell preparation method using cytospin, the cell size does not change so much, and observation in a state close to the original shape can be performed. However, there are cases where the cells are in close contact with each other, and it may be difficult to identify atypical cells. Further, in order to observe micro-organs in cells (for example, chromosomes in nuclei, microfibers in cytoplasm, etc.), it has been necessary to devise measures such as increasing the resolution.
The present invention has been made in view of the above circumstances, and an object of the present invention is to provide a cell specimen preparation method capable of providing as large a cell specimen as possible without causing any trouble in cell observation.

本発明者らは、鋭意検討の結果、従来の調製方法よりも少ない細胞数とすることにより、各細胞を大きくでき、かつ従来通りの細胞観察方法を使用できることを見出し、基本的には本発明を完成するに至った。
こうして、上記目的を達成するための第１の発明に係る細胞標本調製方法は、板材上に細胞を含む液体を滴下し、該液体が滴下された平面に対して概垂直方向に遠心力を加えて細胞標本を調製する方法において、該細胞が拡大することを特徴とする。
第２の発明に係る細胞標本調製方法は、板材上に細胞を含む液体を滴下し、該液体が滴下された平面に対して概垂直方向に遠心力を加えて細胞標本を調製する方法において、隣り合う細胞内組織が実質的に重ならないことを特徴とする。
上記発明においては、遠心力を加えたのちの前記細胞数は、１ｍｍ２あたりに５ｘ１０３個よりも低い値とされていることが好ましい。
また、遠心力は、板材の当該平面から回転の中心軸までの距離を９５ｍｍに換算して回転数を２００ｒｐｍ以上として加えられることが好ましい。このとき、遠心力の加速度（ｍ／ｓ２）は、約４０となる。本発明においては、この加速度以上がかかるようにすれば、細胞は良好に拡大する。
また、前記細胞内組織が、細胞核であることが好ましい。
また、前記板材としては、スライドグラスが挙げられる。
本発明に適用可能な細胞としては、各種臓器の細胞（例えば、肝臓、肺、胃、腸、脾臓、腎臓、心臓、脳、神経、血管、リンパ管）に加えて、血液細胞（例えば、赤血球、白血球（リンパ球、マクロファージ、ＮＫ細胞などを含む））、培養細胞などが含まれる。各細胞によって、大きさが異なるので、隣り合う細胞内組織が実質的に重ならない細胞数は、適当に変化させる必要がある。当業者であれば、そのような検討は容易に行える。 As a result of intensive studies, the present inventors have found that each cell can be enlarged by using a smaller number of cells than the conventional preparation method, and the conventional cell observation method can be used. It came to complete.
Thus, the cell specimen preparation method according to the first invention for achieving the above object comprises dropping a liquid containing cells on a plate and applying a centrifugal force in a direction substantially perpendicular to the plane on which the liquid is dropped. In the method for preparing a cell specimen, the cells are enlarged.
In the method for preparing a cell sample according to the second invention, a liquid containing cells is dropped on a plate, and a centrifugal force is applied in a direction substantially perpendicular to a plane on which the liquid is dropped. Adjacent intracellular tissues do not substantially overlap.
In the said invention, it is preferable that the said cell number after applying a centrifugal force shall be a value lower than 5x10 < 3 > per mm < 2 >.
Moreover, it is preferable that the centrifugal force is applied at a rotation speed of 200 rpm or more by converting the distance from the plane of the plate material to the central axis of rotation into 95 mm. At this time, the acceleration (m / s 2 ) of the centrifugal force is about 40. In the present invention, if this acceleration or more is applied, the cells expand well.
The intracellular tissue is preferably a cell nucleus.
Moreover, a slide glass is mentioned as said board | plate material.
Examples of cells applicable to the present invention include cells of various organs (for example, liver, lung, stomach, intestine, spleen, kidney, heart, brain, nerve, blood vessel, lymphatic vessel) and blood cells (for example, red blood cells). , Leukocytes (including lymphocytes, macrophages, NK cells, etc.), cultured cells, and the like. Since each cell has a different size, it is necessary to appropriately change the number of cells in which adjacent intracellular tissues do not substantially overlap. Such a study can be easily performed by those skilled in the art.

本発明によれば、各細胞を大きくした状態で板材の表面に固定することができる。このとき、元の細胞の構造は維持されているので、免疫蛍光染色法、蛍光インサイツハイブリダイゼーション法（ＦＩＳＨ）などを適用することが可能である。また、各細胞同士の接触度合が低いために、重なり合いも小さい。このため、分解能が良好な状態で、細胞診を行うことができる。   According to the present invention, each cell can be fixed to the surface of the plate material in a large state. At this time, since the original cell structure is maintained, an immunofluorescent staining method, a fluorescence in situ hybridization method (FISH), or the like can be applied. Moreover, since the degree of contact between cells is low, the overlap is small. For this reason, cytodiagnosis can be performed with good resolution.

次に、本発明の実施形態について、図表を参照しつつ説明するが、本発明の技術的範囲は、これらの実施形態によって限定されるものではなく、発明の要旨を変更することなく様々な形態で実施することができる。また、本発明の技術的範囲は、均等の範囲にまで及ぶものである。
本実施形態の細胞標本調製方法を実施するにあたり、細胞観察用のスライドグラスがなす平面に対して鉛直方向に遠心力を加える装置として、サイトスピン４（サーモ・シャンドン社製）を用いた。この装置は、同時に１２枚のスライドを調製することができる。チャンバー内の所定位置にスライドグラスと細胞懸濁液とを配置し、適度な速度と時間で遠心処理することにより、スライドグラスの表面に細胞が塗布・固定される。 Next, embodiments of the present invention will be described with reference to the drawings. However, the technical scope of the present invention is not limited by these embodiments, and various forms can be made without changing the gist of the invention. Can be implemented. Further, the technical scope of the present invention extends to an equivalent range.
In carrying out the cell specimen preparation method of the present embodiment, Cytospin 4 (manufactured by Thermo Chandon) was used as a device for applying a centrifugal force in the vertical direction with respect to the plane formed by the slide glass for cell observation. This device can prepare 12 slides at the same time. By placing the slide glass and the cell suspension at a predetermined position in the chamber and centrifuging at an appropriate speed and time, the cells are applied and fixed on the surface of the slide glass.

＜実施例１＞
細胞として、ヒト白血病細胞（ＨＬ６０）を用いた。培養中の細胞を遠心分離（１２００ｒｐｍ、５ｍｉｎ．）して回収し、上清を除去した後、ＰＢＳで洗浄した。細胞数が２.５ｘ１０４個／ｍｌとなるように、ＰＢＳに懸濁し、液量を変化させて、サイトスピン（回転中のスライドグラスから回転の中心軸までの距離が９５ｍｍであるもの）にセットした。細胞数は、スライドグラスに固定される面積（約２０ｍｍ２）に対して、１ｘ１０５個〜５ｘ１０２個とした。１ｍｍ２あたりには、約５ｘ１０３個〜２５個の細胞が固定されることになる。なお、スライドグラスあたりに５ｘ１０５個の細胞数としたものをコントロールとした。また、遠心速度を８００ｒｐｍ、遠心時間を５分間とした。
遠心処理後のスライドグラスは、常法に従って、メタノールで固定した後、細胞を染色した。このスライドグラスを顕微鏡で観察した。
結果を表１、及び図２〜図４に示した。 <Example 1>
Human leukemia cells (HL60) were used as the cells. Cells in culture were collected by centrifugation (1200 rpm, 5 min.), And the supernatant was removed, followed by washing with PBS. Suspend in PBS so that the number of cells is 2.5 × 10 4 cells / ml, change the liquid volume, and apply cytospin (the distance from the rotating slide glass to the central axis of rotation is 95 mm). I set it. Cell number, relative to the area to be fixed to a glass slide (approximately 20 mm 2), and a five ～5X10 2 pieces 1x10. About 5 × 10 3 to 25 cells are fixed per 1 mm 2 . In addition, a control with 5 × 10 5 cells per slide glass was used as a control. The centrifugal speed was 800 rpm and the centrifugation time was 5 minutes.
The slide glass after centrifugation was fixed with methanol according to a conventional method, and the cells were stained. The slide glass was observed with a microscope.
The results are shown in Table 1 and FIGS.

表１及び図４に示すように、スライドグラスあたりの細胞数を１ｘ１０５個〜５００個まで減少させることにより、スライドグラス上に固定される細胞の大きさは、約２倍〜約１３倍まで大きくなった。このときの細胞の様子を図２（コントロール）と図３（５００個）とで比較すると、少ない細胞数で遠心した場合には、細胞同士が良好に分離され、かつ非常に大きくなっていることが判った（図２と図３とは、同じ倍率（１６０倍）で観察したものである）。なお、データは示さないが、１スライドあたりの細胞数を２５０個、或いは１２５個とした場合には、５００個とほぼ同等の結果が得られた。 As shown in Table 1 and FIG. 4, by reducing the number of cells per slide glass from 1 × 10 5 to 500, the size of the cells fixed on the slide glass is about 2 times to about 13 times. It became bigger. When the state of the cells at this time is compared between FIG. 2 (control) and FIG. 3 (500 cells), the cells are well separated and very large when centrifuged with a small number of cells. (FIGS. 2 and 3 were observed at the same magnification (160 times)). Although data is not shown, when the number of cells per slide was 250 or 125, a result almost equivalent to 500 was obtained.

＜実施例２＞
実施例１と同じ細胞について、スライドグラスあたりの細胞数を３ｘ１０４個とし、遠心速度を２００ｒｐｍ〜１２００ｒｐｍの間で、遠心時間を１分間〜６分間の間で、それぞれ変化させて、コントロールに対する細胞の大きさの変化を調べた。
遠心速度を４００、８００、及び１２００ｒｐｍとしたときの結果を図５〜図７に示した。いずれの条件においても、細胞はコントロールに比べると、良好に拡大しており、これらの条件にほとんど影響を受けないことが判った。なお、データは示さないが、遠心速度を２００ｒｐｍとした場合も、ほぼ同様の結果であった。 <Example 2>
For the same cells as in Example 1, the number of cells per slide glass was 3 × 10 4 , the centrifugation speed was changed between 200 rpm and 1200 rpm, and the centrifugation time was changed between 1 minute and 6 minutes. The change of the size of was investigated.
The results when the centrifugal speed is 400, 800, and 1200 rpm are shown in FIGS. Under either condition, it was found that the cells expanded well compared to the control and were hardly affected by these conditions. Although data is not shown, the results were almost the same when the centrifugal speed was 200 rpm.

次に、本実施形態によって得られた巨大細胞の調製方法の原理について、図８を参照しつつ考察する。
通常条件において、サイトスピンを実施するときには、スライドグラスあたりの細胞数は５ｘ１０５〜１ｘ１０６程度である。この条件を図８（Ａ）に模式的に示した。スライドグラス７上の細胞１０に遠心力Ｆがかかった場合には、細胞の密度が高いために、近接する細胞同士の押圧力により、各細胞の広がりが抑えられるために、拡大率Ｌはそれほど大きくならない。
一方、図８（Ｂ）に示すように、細胞数を減少させていくと、近接する細胞間の距離が大きくなり、遠心力Ｆによる細胞１０の広がりが抑えられず、各細胞が大きな拡大率Ｍを伴って、巨大化するものと考えられる（図８（Ｂ））。これは、細胞の拡大率が細胞数の減少に伴うこと、及び遠心力には因らないことから理解される。よって、本実施形態の細胞調製方法を用いることにより、目的に応じて観察する細胞サイズを自由に調節でき、解析の解像度を増加することができる。 Next, the principle of the giant cell preparation method obtained by this embodiment will be discussed with reference to FIG.
Under normal conditions, when cytospin is performed, the number of cells per slide glass is about 5 × 10 5 to 1 × 10 6 . This condition is schematically shown in FIG. When the centrifugal force F is applied to the cells 10 on the slide glass 7, since the density of the cells is high, the spread of each cell is suppressed by the pressing force between adjacent cells. It doesn't grow.
On the other hand, as shown in FIG. 8B, when the number of cells is decreased, the distance between adjacent cells increases, the spread of the cells 10 due to the centrifugal force F cannot be suppressed, and each cell has a large expansion rate. With M, it is thought that it will become huge (FIG. 8 (B)). This is understood from the fact that the expansion rate of the cells is accompanied by a decrease in the number of cells and that it does not depend on the centrifugal force. Therefore, by using the cell preparation method of this embodiment, the cell size to be observed can be freely adjusted according to the purpose, and the resolution of analysis can be increased.

＜実施例３＞
次に、巨大細胞を従来の生化学的或いは分子生物学的手法で観察できるか否かについて、検討した。各種の細胞（例えば、白血病細胞株ＨＬ６０、子宮頸癌細胞株ｈｅｌａ、出芽酵母細胞株など）をそれぞれ細胞数１０４個（スライドグラスあたり）、遠心速度８００ｒｐｍ、遠心時間５分間でサイトスピンにより、遠心処理し巨大細胞を調製した。巨大細胞のそれぞれについて、特定の遺伝子やタンパク質をＦＩＳＨ法や免疫蛍光染色法により可視化し、蛍光顕微鏡で観察した結果を図９〜図１２に示した。
図９〜図１１に示すように、ＹＡＣ、ＢＡＣ、及びｃｏｓｍｉｄの長さの異なる遺伝子配列に対応するＤＮＡクローンを良好に観察することができた。また、図１２に示すように、核膜に存在するタンパク質（ラミンＢ）の蛍光を良好に観察することができた。
これらのことから、本実施形態によって調製された巨大細胞においては、元の細胞の構造を維持した状態のままであることが明らかとなった。
このように本実施形態によれば、各細胞を巨大化した状態でスライドグラスの表面に固定することができた。このとき、元の細胞の構造は維持されているので、免疫蛍光染色法、ＦＩＳＨ法などを適用することが可能であった。また、各細胞同士の接触度合が低いために、重なり合いも小さい。このため、分解能が良好な状態で、細胞診を行うことができた。 <Example 3>
Next, it was examined whether giant cells could be observed by conventional biochemical or molecular biological techniques. Various cells (e.g., leukemia cell lines HL60, cervical cancer cell line hela, budding yeast cell lines, etc.) each having 10 4 cells (per slide), a centrifugal speed 800 rpm, by cytospin centrifugal time 5 minutes, Centrifugation was performed to prepare giant cells. For each giant cell, specific genes and proteins were visualized by the FISH method and immunofluorescence staining method, and the results of observation with a fluorescence microscope are shown in FIGS.
As shown in FIGS. 9 to 11, DNA clones corresponding to gene sequences having different lengths of YAC, BAC, and cosmid could be observed well. Moreover, as shown in FIG. 12, the fluorescence of the protein (lamin B) present in the nuclear membrane could be observed well.
From these facts, it was clarified that the giant cells prepared according to the present embodiment maintained the original cell structure.
Thus, according to this embodiment, each cell was able to be fixed on the surface of the slide glass in a state where the cells were enlarged. At this time, since the original cell structure was maintained, it was possible to apply immunofluorescence staining, FISH, and the like. Moreover, since the degree of contact between cells is low, the overlap is small. For this reason, cytodiagnosis could be performed with good resolution.

サイトスピンの構造を示す概略図である。図示左側は、停止状態の位置、図示右側は、回転状態の位置をそれぞれ示す。この図は、「Ｓｈａｎｄｏｎ Ｃｙｔｏｓｐｉｎ４ Ｃｙｔｏｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ」のカタログに基づき作成したものである。It is the schematic which shows the structure of a cytospin. The left side in the figure shows the position in the stopped state, and the right side in the figure shows the position in the rotated state. This figure is created based on the catalog of “Shandon Cytospin4 Cytocentrifuge”. スライドグラスあたり５ｘ１０５個の細胞を２００ｒｐｍ、５分間の遠心処理を行った後の細胞の様子を示す顕微鏡写真図である（倍率は１６０倍）。It is a microscope picture figure which shows the mode of the cell after performing the centrifugation process for 5 minutes at 200 rpm for 5 * 10 < 5 > cells per slide glass (magnification is 160 times). スライドグラスあたり５ｘ１０２個の細胞を２００ｒｐｍ、５分間の遠心処理を行った後の細胞の様子を示す顕微鏡写真図である（倍率は１６０倍）。It is a microscope picture figure which shows the mode of the cell after performing the centrifugation process of 200 rpm and 5 minutes for 5 * 10 < 2 > cells per slide glass (magnification is 160 times). スライドグラスあたりの細胞数（横軸）と、細胞の拡大率（縦軸）との関係を示すグラフである。スライドグラスには、２０ｍｍ２の面積について細胞が固定される。このため１ｍｍ２あたりの細胞数に換算すると、横軸は２.５ｘ１０ ｃｅｌｌｓ／ｍｍ２〜２.５ｘ１０４ ｃｅｌｌｓ／ｍｍ２となる。It is a graph which shows the relationship between the cell number (horizontal axis) per slide glass, and the expansion rate (vertical axis) of a cell. Cells are fixed to the slide glass with an area of 20 mm 2 . This order is converted to number of cells per 1 mm 2, the horizontal axis becomes 2.5x10 cells / mm 2 ~2.5x10 4 cells / mm 2. 遠心速度が４００ｒｐｍのときの遠心時間（横軸）と、細胞核の半径（縦軸）との関係を示すグラフである。It is a graph which shows the relationship between the centrifugation time (horizontal axis) when a centrifugal speed is 400 rpm, and the radius (vertical axis) of a cell nucleus. 遠心速度が８００ｒｐｍのときの遠心時間（横軸）と、細胞核の半径（縦軸）との関係を示すグラフである。It is a graph which shows the relationship between the centrifugation time (horizontal axis) when a centrifugal speed is 800 rpm, and the radius (vertical axis) of a cell nucleus. 遠心速度が１２００ｒｐｍのときの遠心時間（横軸）と、細胞核の半径（縦軸）との関係を示すグラフである。It is a graph which shows the relationship between the centrifugation time (horizontal axis) when a centrifugal speed is 1200 rpm, and the radius (vertical axis) of a cell nucleus. 巨大細胞の調製方法の原理を示す図である。（Ａ）は従来の調製方法の様子を、（Ｂ）は本実施形態の調製方法の様子をそれぞれ示している。It is a figure which shows the principle of the preparation method of a giant cell. (A) shows the state of the conventional preparation method, and (B) shows the state of the preparation method of the present embodiment. ＦＩＳＨ法により、巨大細胞中の７１Ｂ１１ ＹＡＣを観察したときの顕微鏡写真図である（倍率は６３０倍）。It is a micrograph figure when observing 71B11 YAC in a giant cell by FISH method (magnification is 630 times). ＦＩＳＨ法により、巨大細胞中の１５８Ｎ１ ＢＡＣを観察したときの顕微鏡写真図である（倍率は６３０倍）。It is a micrograph figure when 158N1 BAC in a giant cell is observed by FISH method (magnification is 630 times). ＦＩＳＨ法により、巨大細胞中のＣ９３ ｃｏｓｍｉｄを観察したときの顕微鏡写真図である（倍率は６３０倍）。It is a microscope picture figure when C93 cosmid in a giant cell is observed by FISH method (magnification is 630 times). 免疫蛍光染色法により、巨大細胞中のラミンＢを観察したときの顕微鏡写真図である（倍率は６３０倍）。It is a microscope picture when lamin B in a giant cell is observed by immunofluorescent staining (magnification is 630 times).

符号の説明Explanation of symbols

７…スライドグラス（板材） 7 ... Slide glass (plate material)

Claims (5)

板材上に細胞を含む液体を滴下し、該液体が滴下された平面に対して概垂直方向に遠心力を加えて細胞標本を調製する方法において、該細胞が拡大することを特徴とする細胞標本調製方法。 In a method of preparing a cell specimen by dropping a liquid containing cells on a plate material and applying a centrifugal force in a direction substantially perpendicular to a plane on which the liquid is dropped, the cell specimen is expanded. Preparation method. 板材上に細胞を含む液体を滴下し、該液体が滴下された平面に対して概垂直方向に遠心力を加えて細胞標本を調製する方法において、隣り合う細胞内組織が実質的に重ならないことを特徴とする細胞標本調製方法。 In a method of preparing a cell specimen by dropping a liquid containing cells on a plate and applying a centrifugal force in a direction substantially perpendicular to the plane on which the liquid is dropped, adjacent intracellular tissues do not substantially overlap. A method for preparing a cell specimen. 遠心力を加えたのちの前記細胞数は、１ｍｍ２あたりに５ｘ１０３個よりも低い値とされていることを特徴とする請求項１または２に記載の細胞標本調製方法。 The cell sample preparation method according to claim 1 or 2, wherein the number of cells after applying a centrifugal force is set to a value lower than 5x10 3 per 1 mm 2 . 遠心力は、板材の当該平面から回転の中心軸までの距離を９５ｍｍに換算して回転数を２００ｒｐｍ以上として加えられることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の細胞標本調製方法。 The method for preparing a cell specimen according to any one of claims 1 to 3, wherein the centrifugal force is applied at a rotation speed of 200 rpm or more by converting the distance from the plane of the plate material to the central axis of rotation to 95 mm. . 前記細胞内組織が、細胞核であることを特徴とする請求項２〜４のいずれかに記載の細胞標本調製方法。 The cell specimen preparation method according to any one of claims 2 to 4, wherein the intracellular tissue is a cell nucleus.
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